專利名稱：唑基激酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白酪氨酸激酶抑制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
蛋白激酶是催化蛋白中特定殘基磷酸化的酶家族。通常蛋白激酶分成幾組；優(yōu)先磷酸化絲氨酸和/或蘇氨酸殘基的組，優(yōu)先磷酸化酪氨酸殘基的組以及磷酸化酪氨酸和Ser/Thr殘基的組。因此蛋白激酶是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵因素，其負(fù)責(zé)將包括細(xì)胞因子對其受體的作用在內(nèi)的細(xì)胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞核，觸發(fā)各種生物學(xué)事件。蛋白激酶在正常細(xì)胞生理中的許多作用包括細(xì)胞周期控制以及細(xì)胞生長、分化、凋亡、細(xì)胞遷移和分裂。
蛋白激酶例如包括但不限于蛋白酪氨酸激酶家族(PTK)，其又可分為細(xì)胞質(zhì)PTK和受體PTK(RTK)。細(xì)胞質(zhì)PTK包括SRC家族(包括BLK；FGR；FYN；HCK；LCK；LYN；SRC；YES和YRK)；BRK家族(包括BRK；FRK、SAD和SRM)；CSK家族(包括CSK和CTK)；BTK家族(包括BTK；ITK；TEC；MKK2和TXK)；Janus激酶家族(包括JAK1、JAK2、JAK3和Tyk2)；FAK家族(包括FAK和PYK2)；Fes家族(包括FES和FER)；ZAP70家族(包括ZAP70和SYK)；ACK家族(包括ACK1和ACK2)；和Ab1家族(包括ABL和ARG)。RTK家族包括EGF-受體家族(包括EGFR、HER2、HER3和HER4)；胰島素受體家族(包括INS-R和IGF1-R)；PDGF受體家族(包括PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、KIT、FLK2)；VEGF受體家族(包括FLT1、FLK1和FLT4)；FGF受體家族(包括FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4)；CCK4家族(包括CCK4)；MET家族(包括MET和RON)；TRK家族(包括TRKA、TRKB和TRKC)；AXL家族(包括AXL、MER和SKY)；TIE/TEK家族(包括TIE和TIE2/TEK)；EPH家族(包括EPHA1、EPHA2、EPHA3、EPHA4、EPHA5、EPHA6、EPHA7、EPHA8、EPHB1、EPHB2、EPHB3、EPHB4、EPHB5、EPHB6)；RYK家族(包括RYK)；MCK家族(包括MCK和TYRO10)；ROS家族(包括ROS)；RET家族(包括RET)；LTK家族(包括LTK和ALK)；ROR家族(包括ROR1和ROR2)；Musk家族(包括Musk)；LMR家族(包括LMR1、LMR2和LMR3)；和SuRTK106家族(包括SuRTK106)。
類似地，絲氨酸/蘇氨酸特異性激酶包括許多不同的亞家族，包括細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p42/ERK2和p44/ERKI)；c-Jun NH2-末端激酶(JNK)；cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白激酶(CREBK)；cAMP依賴性激酶(CAPK)；促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶(MAPK及其近親物(relative))；應(yīng)激活化蛋白激酶p38/SAPK；促分裂原和應(yīng)激活化激酶(MSK)；蛋白激酶PKA、PKB和PKC等。
另外，許多病原生物的基因組具有編碼蛋白激酶的基因。例如瘧原蟲惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)和病毒如HPV和肝炎病毒顯示具有激酶相關(guān)基因。
不適當(dāng)高的蛋白激酶活性參與了由異常細(xì)胞功能導(dǎo)致的許多疾病。這可能由下述原因而直接或間接地引起例如因?qū)っ刚？刂茩C制的失敗，其例如與酶的突變、過度表達(dá)或不適當(dāng)?shù)募せ钣嘘P(guān)；或者因也參與激酶的上游或下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞因子或生長因子的過度產(chǎn)生或產(chǎn)生不足。在所有的這些情況中，選擇性抑制激酶的作用可能期望具有有益的效果。其中異常激酶活性參與的疾病包括糖尿?。辉侏M窄；動脈粥樣硬化；肝和腎纖維化；眼??；骨髓增殖和淋巴增殖疾??；癌癥如前列腺癌、大腸癌、乳癌、頭和頸部癌癥、白血病和淋巴瘤；和自身免疫性疾病如特應(yīng)性皮炎、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克隆氏病、銀屑病、克魯宗綜合征、軟骨發(fā)育不全和致死性發(fā)育異常。
蛋白酪氨酸激酶(PTK)的JAK家族在免疫系統(tǒng)的一些重要細(xì)胞類型的增殖和終末功能的細(xì)胞因子依賴性調(diào)節(jié)中起著主要的作用。
目前已知的哺乳動物的四個JAK家族成員的直接比較揭示存在七個高度保守的結(jié)構(gòu)域(Harpur等，1992)。在尋求PTK這一家族的高度保守結(jié)構(gòu)域特征的命名時，使用的分類參照Pawson及其同事(Sadowski等，1986)在他們處理SRC同源(SH)結(jié)構(gòu)域中的方法。因此這些結(jié)構(gòu)域用多數(shù)稱為JAK同源結(jié)構(gòu)域1(JH1)的C-末端同源結(jié)構(gòu)域計數(shù)。與JH1的N-末端緊接的結(jié)構(gòu)域是激酶相關(guān)結(jié)構(gòu)域，這里稱為JH2結(jié)構(gòu)域。然后計數(shù)每個結(jié)構(gòu)域直至位于N-末端的JH7。這些JAK同源(JH)結(jié)構(gòu)域的高度保守程度表明它們在這些蛋白操縱的細(xì)胞過程中每個都可能起重要的作用。然而JAK同源結(jié)構(gòu)域的界線是不定的，不一定能定義功能結(jié)構(gòu)域。盡管如此，它們的描繪仍是有助于考慮這類蛋白整體結(jié)構(gòu)相似性的有用工具。
PTK的JAK家族最典型的特征是具有兩個激酶相關(guān)結(jié)構(gòu)域(JH1和JH2)(Wilks等，1991)。JAK的推定PTK結(jié)構(gòu)域(JH1)含有PTK結(jié)構(gòu)域典型的高度保守的基序，包括存在位于C-末端11位殘基的1022位的酪氨酸殘基至亞結(jié)構(gòu)域VII，其被認(rèn)為是酪氨酸特異性蛋白激酶類成員的特征。人JAK1 PTK結(jié)構(gòu)域(225個氨基酸)與其它蛋白的PTK類蛋白成員的排比揭示與其它功能性PTK具有同源性(例如與c-fes具有28％的相同性(Wilks and Kuran，1988))，與TRK具有37％的同源性(Kozma，等，1988)。每個JAK家族成員的JH1結(jié)構(gòu)域在高度保守的亞結(jié)構(gòu)域VIII基序(在JAK2中的殘基1015-1027)中具有令人感興趣的特性，認(rèn)為該高度保守的亞結(jié)構(gòu)域VIII基序與活性位點鄰近且決定底物特異性。在該基序中的保守色氨酸兩側(cè)的苯丙氨酸和酪氨酸殘基對于PTK的JAK家族是獨特的。除了該元件外，JAK家族的每個成員的JH1結(jié)構(gòu)域均是典型的PTK結(jié)構(gòu)域。
蛋白酪氨酸激酶的JAK家族在一些重要細(xì)胞類型的增殖和終末功能的細(xì)胞因子依賴性調(diào)節(jié)中所起的主要作用表明抑制JAK的活性劑在依賴于這些酶的疾病狀態(tài)的預(yù)防和化學(xué)治療中是有用的。目前已知的四類JAK家族成員每類的潛在和特異性抑制劑將提供抑制那些驅(qū)動免疫病理如哮喘(如IL-13；JAK1、JAK2)和白血病/淋巴瘤(如IL-2；JAK1和JAK3)的細(xì)胞因子的作用的方法。
另外，某些類型的癌癥如前列腺癌自分泌地產(chǎn)生某些細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子作為生長和潛在轉(zhuǎn)移的可選擇的機制。其實例是前列腺癌，其中前列腺癌細(xì)胞系如TSU和TC3產(chǎn)生IL-6，并且其刺激前列腺癌細(xì)胞系如TSU和TC3的生長(Spiotto MT，and Chung TD，2000)。令人感興趣的是，在轉(zhuǎn)移的前列腺癌病人的血清中IL-6的水平升高。
大量的文獻(xiàn)涉及細(xì)胞因子信號領(lǐng)域。本發(fā)明的發(fā)明人關(guān)注細(xì)胞因子受體與靶基因(例如細(xì)胞周期調(diào)節(jié)子(如p21))和抗細(xì)胞凋亡基因(如Bcl-XL)的直接連接中所涉及的JAK/STAT途徑。
JAK/STAT途徑近來已經(jīng)對非蛋白酪氨酸激酶細(xì)胞因子受體下游的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑進(jìn)行了極好的描述。在此途徑中，關(guān)鍵的組分是(i)細(xì)胞因子受體鏈如白介素-4受體或干擾素γ受體；(ii)PTK的JAK家族成員；(iii)轉(zhuǎn)錄因子的STAT家族成員；和(iv)活化的STAT將會與之結(jié)合的序列特異性DNA元件。
對JAK/STAT文獻(xiàn)的綜述為該途徑對針對環(huán)境損害如病毒和細(xì)菌感染的宿主免疫應(yīng)答中的募集和集結(jié)是重要的這一提議提供了有力的支持。這在表1和表2中給出了很好的例證。從基因敲除實驗收集的信息強調(diào)JAK家族成員對由許多重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子觸發(fā)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是重要的。因此，因抑制(或增強)JAK/STAT途徑的治療可能性主要在于免疫調(diào)節(jié)方面，并因此有可能成為治療該領(lǐng)域中多種病理的有前景的藥物。除了表1和表2中列出的疾病外，JAK抑制劑可以用作器官移植以及自身免疫性疾病如狼瘡、多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、I型糖尿病、自身免疫性甲狀腺疾病、阿爾茨海默氏病和其它自身免疫性疾病的免疫抑制劑。此外，表明JAK抑制劑用于治療癌癥，如前列腺癌。
表1
表2通過JAK-基藥物治療可能能夠治療的疾病
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)一組基于二取代吡嗪骨架I的化合物是酪氨酸激酶抑制劑。
因此，本發(fā)明第一方面提供一種下述通式的化合物或其藥學(xué)可接受的前藥、鹽、水合物、溶劑合物、晶形或非對映異構(gòu)體，
其中D為選自如下的雜環(huán)
其中X1、X2、X3、X4為任選取代的C，或者X1、X2、X3、X4之一為N，而其余為任選取代的C；
R2為0-3個獨立地選自H、鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、OCHF2、CN、芳基、雜芳基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR3R4、C1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基、OC1-4烷基NR3R4、OC1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基OH、CO2R3、CONR3R4、NR3R4、硝基、NR3COR4、NR5CONR3R4、NR3SO2R4、C1-4烷基NR3COR4、C1-4烷基NR5CONR3R4、C1-4烷基NR3SO2R4的取代基；R3、R4各自獨立地為H、C1-4烷基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR19R20、C1-4烷基環(huán)烷基、C1-4環(huán)雜烷基、芳基、C1-4烷基芳基、雜芳基、C1-4烷基雜芳基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR6的原子的3-8元(飽和或不飽和)環(huán)；且R5選自H、C1-4烷基、芳基或雜芳基；R6選自H、C1-4烷基、C1-4烷基NR19R20、芳基、雜芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基雜芳基；R19、R20各自獨立地選自H、C1-4烷基；R1為H、C1-4烷基、C1-6環(huán)烷基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；Q為鍵、CH2、C1-4烷基；A為任選被0-3個取代基取代的芳基、雜芳基，所述取代基獨立地選自鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、CN、NR8R9、芳基、雜芳基、C1-4芳基、C1-4雜芳基、C1-4烷基NR8R9、OC1-4烷基NR8R9、硝基、NR10C1-4NR8R9、NR8COR9、NR10CONR8R9、NR8SO2R9、CONR8R9、CO2R8；R8和R9各自獨立地為H、C1-4烷基、芳基，或者一起形成任選取代的可含有選自O(shè)、S、NR11的雜原子的4-8元環(huán)；R10選自H、C1-4烷基；R11選自H、C1-4烷基；W選自H、C1-4烷基、C2-6烯基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；其中C1-4烷基或C2-6烯基可任選被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR12R13取代；R12和R13各自獨立地為H、C1-4烷基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR14的原子的3-8元環(huán)；R14選自H、C1-4烷基；Y為0-2個選自H、C1-4烷基、NR15R16的取代基；R15和R16獨立地選自H、C1-4烷基。
本發(fā)明第二方面提供一種包含載體和至少一種本發(fā)明第一方面的化合物的組合物。
本發(fā)明第三方面提供一種治療個體中酪氨酸激酶相關(guān)疾病狀態(tài)的方法，所述方法包括給予治療有效量的至少一種本發(fā)明第一方面的化合物或者治療有效量的本發(fā)明第二方面的組合物。
具體實施例方式
本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)一組基于二取代吡嗪骨架I的化合物是酪氨酸激酶抑制劑。
因此，第一方面，本發(fā)明提供以下通式的化合物或其藥學(xué)可接受的前藥、鹽、水合物、溶劑合物、晶形或非對映異構(gòu)體， 其中D為選自如下的雜環(huán)
其中X1、X2、X3、X4為任選取代的C，或者X1、X2、X3、X4之一為N，而其余為任選取代的C；R2為0-3個獨立地選自H、鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、OCHF2、CN、芳基、雜芳基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR3R4、C1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基、OC1-4烷基NR3R4、OC1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基OH、CO2R3、CONR3R4、NR3R4、硝基、NR3COR4、NR5CONR3R4、NR3SO2R4、C1-4烷基NR3COR4、C1-4烷基NR5CONR3R4、C1-4烷基NR3SO2R4的取代基；R3、R4各自獨立地為H、C1-4烷基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR19R20、C1-4烷基環(huán)烷基、C1-4環(huán)雜烷基、芳基、C1-4烷基芳基、雜芳基、C1-4烷基雜芳基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR6的原子的3-8元(飽和或不飽和)環(huán)；且R5選自H、C1-4烷基、芳基或雜芳基；R6選自H、C1-4烷基、C1-4烷基NR19R20、芳基、雜芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基雜芳基；R19、R20各自獨立地選自H、C1-4烷基；R1為H、C1-4烷基、C1-6環(huán)烷基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；Q為鍵、CH2、C1-4烷基；A為任選被0-3個取代基取代的芳基、雜芳基，所述取代基獨立地選自鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、CN、NR8R9、芳基、雜芳基、C1-4芳基、C1-4雜芳基、C1-4烷基NR8R9、OC1-4烷基NR8R9、硝基、NR10C1-4NR8R9、NR8COR9、NR10CONR8R9、NR8SO2R9、CONR8R9、CO2R8；R8和R9各自獨立地為H、C1-4烷基、芳基，或者一起形成任選取代的可含有選自O(shè)、S、NR11的雜原子的4-8元環(huán)；R10選自H、C1-4烷基；R11選自H、C1-4烷基；W選自H、C1-4烷基、C2-6烯基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；其中C1-4烷基或C2-6烯基可任選被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR12R13取代；R12和R13各自獨立地為H、C1-4烷基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR14的原子的3-8元環(huán)；R14選自H、C1-4烷基；Y為0-2個選自H、C1-4烷基、NR15R16的取代基；R15和R16獨立地選自H、C1-4烷基。
可以理解在上面的描述中C1-4烷基是指未取代的或任選取代的直鏈或支鏈烷基鏈；芳基是指未取代的或任選取代的苯基或萘基；雜芳基是指未取代的或任選取代的含有一個或多個選自O(shè)、N、S的雜原子的5-或6-元雜芳環(huán)；環(huán)烷基是指3-8元飽和環(huán)；環(huán)雜烷基是指含有1-3個選自O(shè)、S、NR17的雜原子的3-8元飽和環(huán)，其中R17為H、C1-4烷基、芳基、雜芳基。
在另一個優(yōu)選實施方案中，所述化合物是選自通式II的化合物或其藥學(xué)可接受的前藥、鹽、水合物、溶劑合物、晶形或非對映異構(gòu)體，
其中D是選自如下的雜環(huán) 其中X1、X2、X3、X4為任選取代的C，或者X1、X2、X3、X4之一為N，而其余為任選取代的C；R2為0-3個獨立地選自H、鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、OCHF2、CN、芳基、雜芳基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR3R4、C1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基、OC1-4烷基NR3R4、OC1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基OH、CO2R3、CONR3R4、NR3R4、硝基、NR3COR4、NR5CONR3R4、NR3SO2R4、C1-4烷基NR3COR4、C1-4烷基NR5CONR3R4、C1-4烷基NR3SO2R4的取代基；R3、R4各自獨立地為H、C1-4烷基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR19R20、C1-4烷基環(huán)烷基、C1-4環(huán)雜烷基、芳基、C1-4烷基芳基、雜芳基、C1-4烷基雜芳基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR6的原子的3-8元(飽和或不飽和)環(huán)；且R5選自H、C1-4烷基、芳基或雜芳基；R6選自H、C1-4烷基、C1-4烷基NR19R20、芳基、雜芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基雜芳基；R19、R20各自獨立地選自H、C1-4烷基；
R1為H、C1-4烷基、C1-6環(huán)烷基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；A為任選被0-3個取代基取代的芳基、雜芳基，所述取代基獨立地選自鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、CN、NR8R9、芳基、雜芳基、C1-4芳基、C1-4雜芳基、C1-4烷基NR8R9、OC1-4烷基NR8R9、硝基、NR10C1-4NR8R9、NR8COR9、NR10CONR8R9、NR8SO2R9、CONR8R9、CO2R8；R8和R9各自獨立地為H、C1-4烷基、芳基，或者一起形成任選取代的可含有選自O(shè)、S、NR11的雜原子的4-8元環(huán)；R10選自H、C1-4烷基；R11選自H、C1-4烷基；W選自H、C1-4烷基、C2-6烯基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；其中C1-4烷基或C2-6烯基可任選被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR12R13取代；R12和R13各自獨立地為H、C1-4烷基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR14的原子的3-8元環(huán)；R14選自H、C1-4烷基；Y為0-2個選自H、C1-4烷基、NR15R16的取代基；R1 5和R16獨立地選自H、C1-4烷基。
可以理解在上面的描述中C1-4烷基是指未取代的或任選取代的直鏈或支鏈烷基鏈；芳基是指未取代的或任選取代的苯基或萘基；雜芳基是指未取代的或任選取代的含有一個或多個選自O(shè)、N、S的雜原子的5-或6-元雜芳環(huán)；環(huán)烷基是指3-8元飽和環(huán)；環(huán)雜烷基是指含有1-3個選自O(shè)、S、NR17的雜原子的3-8元飽和環(huán)，
其中R17為H、C1-4烷基、芳基、雜芳基。
本發(fā)明的化合物包括所有的構(gòu)象異構(gòu)體(如順式和反式異構(gòu)體)。本發(fā)明的化合物具有不對稱中心，因此存在不同的對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體。本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物的所有旋光異構(gòu)體和立體異構(gòu)體及其混合物的應(yīng)用，還涉及可以含有它們的所有藥物組合物或可以應(yīng)用它們的治療方法。因此，本發(fā)明包括E和Z構(gòu)型。式I的化合物還可以以互變異構(gòu)體存在。本發(fā)明涉及所有這些互變異構(gòu)體及其混合物的應(yīng)用。
本發(fā)明還包括含有式I的化合物的前藥的藥物組合物。本發(fā)明還包括治療或預(yù)防個體中能夠通過抑制蛋白激酶如JAK而治療或預(yù)防的疾病的方法，所述方法包括給予式I的化合物的前藥。具有游離氨基、酰氨基、羥基或羧基的式I的化合物可以轉(zhuǎn)化成前藥。前藥包括其中氨基酸殘基或兩個或多個(例如2、3或4個)氨基酸殘基的多肽鏈通過肽鍵共價地與式I的化合物的游離氨基、羥基或羧酸基團(tuán)連接的化合物。氨基酸殘基包括20種通常用三個字母符號表示的天然存在的氨基酸，并且還包括4-羥脯氨酸、羥賴氨酸、鎖鏈素(demosine)、異鎖鏈素(isodemosine)、3-甲基組氨酸、正纈氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高絲氨酸、鳥氨酸和甲硫氨酸砜。前藥還包括其中碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯通過羰基碳前藥側(cè)鏈共價地與式I的上述取代基鍵合的化合物。前藥還包括通過磷氧鍵與式I的化合物的游離羥基鍵合而連接的式I的化合物的磷酸衍生物(如酸、酸式鹽或酯)。
在另一個優(yōu)選實施方案中，該化合物在帶有W的手性碳處具有S手性，其中W為C1-4烷基。該化合物可以作為純異構(gòu)體或任意比例的異構(gòu)體的混合物使用。然而優(yōu)選混合物包含至少70％、80％、90％、95％或99％的優(yōu)選異構(gòu)體。
本發(fā)明第二方面提供包含載體和至少一種本發(fā)明第一方面的化合物的組合物。
本發(fā)明第三方面提供一種治療個體中酪氨酸激酶相關(guān)疾病狀態(tài)的方法，所述方法包括給予治療有效量的至少一種本發(fā)明第一方面的化合物或者治療有效量的本發(fā)明第二方面的組合物。
在另一個優(yōu)選實施方案中，所述疾病狀態(tài)涉及JAK1、JAK2、JAK3或TYK2。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述疾病狀態(tài)選自特應(yīng)性反應(yīng)，如變應(yīng)性哮喘、特應(yīng)性皮炎(濕疹)和變應(yīng)性鼻炎；細(xì)胞介導(dǎo)的過敏反應(yīng)，如變應(yīng)性接觸性皮炎和過敏性肺炎；風(fēng)濕性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征、硬皮病、多發(fā)性肌炎、強直性脊柱炎和銀屑病關(guān)節(jié)炎；其它自身免疫性疾病，如I型糖尿病；自身免疫性甲狀腺疾病，和阿爾茨海默氏?。徊《拘约膊?，如E-B病毒(EBV)、乙型肝炎、丙型肝炎、HIV、HTLV-1、水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)、人乳頭瘤病毒(HPV)；癌癥，如白血病、淋巴瘤和前列腺癌；神經(jīng)變性性疾病，如運動神經(jīng)元?。恍难芗膊?，如心臟肥大、缺血、肺動脈高壓、動脈粥樣硬化和動脈硬化。
如本文所用，術(shù)語“酪氨酸激酶相關(guān)疾病狀態(tài)”是指那些由異常的酪氨酸激酶活性，特別是JAK活性導(dǎo)致，和/或通過抑制這些酶中的一種或多種而減輕的疾病。
在另一方面，本發(fā)明提供所述化合物在制備用于治療JAK相關(guān)疾病狀態(tài)的藥物中的應(yīng)用。
如本文所用，術(shù)語“JAK”、“JAK激酶”或“JAK家族”是指具有本文描述的JAK1、JAK2、JAK3和TYK特征的蛋白酪氨酸激酶。
本發(fā)明提供藥物組合物，所述組合物包含至少一種以其有效量能夠治療JAK相關(guān)疾病的本發(fā)明的化合物和藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明的組合物可以包含下述的其它治療活性劑，并且可以例如通過使用常規(guī)的固體或液體載體或稀釋劑以及適于所希望的給藥方式的藥學(xué)添加劑(例如賦形劑、粘合劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、調(diào)味劑等)根據(jù)如那些藥學(xué)制劑領(lǐng)域公知的技術(shù)來配制。
本發(fā)明的化合物可經(jīng)任何合適的方式給藥，例如經(jīng)口服，如片劑、膠囊劑、顆粒劑或粉劑形式；舌下；口含；腸胃外，如皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或腦池內(nèi)注射或輸注技術(shù)(如作為無菌可注射用含水或非水溶液劑或混懸劑)；經(jīng)鼻，如吸入噴霧劑；局部，如乳膏或軟膏形式；或者經(jīng)直腸，如栓劑形式；含有無毒、藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑的劑量單元制劑。例如所述化合物可以以適于速釋或延時釋放的形式給予。速釋或延時釋放可以通過使用含有本發(fā)明的化合物的合適的藥物組合物來獲得，或者特別是在延時釋放的情況下，通過使用例如皮下植入物或滲透泵的裝置獲得。該化合物還可以以脂質(zhì)體形式給予。
除了靈長類如人以外，各種其它的哺乳動物也可以根據(jù)本發(fā)明的方法進(jìn)行治療。例如，可以治療的哺乳動物包括但不限于牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、豚鼠、達(dá)鼠或其它的牛類、羊類、馬類、狗類、貓類、嚙齒類或鼠類物種。然而，所述方法還可以對其它物種例如鳥類(如雞)實施。
與炎癥和感染相關(guān)的疾病和病況能夠使用本發(fā)明的方法進(jìn)行治療。在優(yōu)選的實施方案中，所述疾病或病況是其中為調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)嗜酸性粒細(xì)胞和/或淋巴細(xì)胞的作用將被抑制或促進(jìn)的疾病或病況。
上述方法中希望JAK被抑制的治療對象是哺乳動物，包括但不限于牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、豚鼠、大鼠或其它的牛類、羊類、馬類、狗類、貓類、嚙齒類或鼠類物種，且優(yōu)選人，男性或女性。
術(shù)語“治療有效量”是指將引起研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其他臨床醫(yī)生所探究的組織、系統(tǒng)、動物或人的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的所述主題組合物的量。
如本文所用，術(shù)語“組合物”意指包括含有特定量的特定成分的產(chǎn)品，以及直接或間接由特定量的特定成分組合導(dǎo)致的任意產(chǎn)品?！八帉W(xué)可接受的”是指載體、稀釋劑或賦形劑必須與制劑的其它成分相容且不對其接受者具有毒性。
術(shù)語“給藥”或“給予”化合物應(yīng)理解為指將本發(fā)明的化合物提供給需要治療的個體。
用于給予本發(fā)明的化合物的藥物組合物可方便地以單位劑量形式存在，并可通過藥學(xué)領(lǐng)域任何公知的方法制備。所有的方法包括將活性成分和包含一種或多種輔助成分的載體混合的步驟。通常，該藥物組合物如下制備將活性成分和液體載體或微細(xì)固體載體或兩者均勻、充分地混合，然后，如果必要的話，將產(chǎn)品制成所需的制劑。在藥物組合物中，包含足以對疾病的過程或狀況產(chǎn)生所期望的效果的量的活性目標(biāo)化合物。如本文所用，術(shù)語“組合物”意指包括含有特定量的特定成分的產(chǎn)品，以及直接或間接由特定量的特定成分組合導(dǎo)致的任意產(chǎn)品。
本發(fā)明的含有活性成分的藥物組合物可以是適于口服使用的形式，例如以片劑、錠劑、糖錠、水或油混懸劑、可分散性散劑或顆粒劑、乳劑、硬或軟膠囊劑、糖漿劑或酏劑使用。用于口服使用的組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的生產(chǎn)藥物組合物的任何方法制備，并且為提供精美可口的制劑，這些組合物可以含有一種或多種選自甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑的試劑。片劑含有活性成分和無毒的適于生產(chǎn)片劑的藥學(xué)可接受的賦形劑。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；成粒劑或崩解劑，如玉米淀粉或藻酸；粘合劑，如淀粉、明膠或阿拉伯樹膠；和潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。片劑可以是未包衣的，或者它們可以通過已知的技術(shù)包衣以延緩在胃腸道內(nèi)的崩解和吸收并從而提供長時間內(nèi)的持續(xù)作用。例如可以使用延時材料如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它們也可以被包衣形成滲透性控釋治療片劑。
用于口服使用的制劑還可以以其中活性成分與惰性固體稀釋劑如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合的硬凝膠膠囊劑，或者以其中活性成分與水或油介質(zhì)如花生油、液體石蠟或橄欖油混合的軟凝膠膠囊劑提供。
水混懸劑含有活性物質(zhì)和適于生產(chǎn)水混懸劑的賦形劑。這些賦形劑為助懸劑，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍樹膠和阿拉伯樹膠；分散劑或潤濕劑可以是天然存在的磷脂，如卵磷脂，或者環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合物，如聚氧乙烯硬脂酸酯；或者環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合物，如十七烷乙烯氧基十六醇，或者環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合物，如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯，或者環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合物，如聚氧乙烯脫水山梨糖醇酐單油酸酯。水混懸劑還可含有一種或多種防腐劑如對羥基苯甲酸乙酯或正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種調(diào)味劑和一種或多種甜味劑如蔗糖或糖精。
油混懸劑可通過將活性成分懸浮在植物油，如花生油、橄欖油、芝麻油、椰子油或礦物油如液體石蠟中制成。該油混懸劑可含有增稠劑，如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇?？梢约尤胩鹞秳?，如上所述的那些以及調(diào)味劑以提供可口的口服制劑。這些組合物可通過加入抗氧化劑，如抗壞血酸保存。
適于通過添加水而制備水混懸劑的可分散性散劑和顆粒劑提供活性成分和分散劑或潤濕劑、助懸劑和一種或多種防腐劑。合適的分散劑或潤濕劑和助懸劑由上述已提到的那些例示。還可以有其它賦形劑，如甜味劑、調(diào)味劑和著色劑。
本發(fā)明的藥物組合物還可為水包油型乳劑的形式。油相可以為植物油，如橄欖油或花生油，或礦物油，如液體石蠟，或它們的混合物。合適的乳化劑可以為天然存在的樹膠例如阿拉伯樹膠和黃蓍樹膠、天然存在的磷脂如大豆、卵磷脂、衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯如脫水山梨糖醇單油酸酯和所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合物如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。乳劑還可含有甜味劑和調(diào)味劑。
糖漿劑和酏劑可用甜味劑，如甘油、丙二醇或蔗糖配制。這些制劑還可含有緩和劑(demulcent)、防腐劑、調(diào)味劑和著色劑。
藥物組合物可以是無菌的可注射用水或油混懸劑的形式。該混懸劑可根據(jù)已知技術(shù)使用上述已提到的那些合適的分散劑或潤濕劑和助懸劑配制。無菌的可注射用制劑還可為在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射用溶液或懸浮液，如作為在1，3-丁二醇中的溶液。在可接受的載體和溶劑中，可使用水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌的固定油通常作為溶劑或懸浮介質(zhì)使用。為此目的，可使用包括合成的單酸甘油酯和甘油二酯在內(nèi)的任何溫和的固定油。另外，脂肪酸如油酸用于制備注射劑。
本發(fā)明的化合物也可以以直腸給藥的栓劑形式給予。這些組合物可通過將藥物與合適的無刺激性賦形劑混合來制備，所述賦形劑常溫下為固體但在直腸溫度下為液體，因此將在直腸內(nèi)熔化釋放出藥物。這樣的材料是可可油和聚乙二醇。
對于局部應(yīng)用，可以使用含有本發(fā)明的化合物的乳膏、軟膏、凝膠、溶液劑或混懸劑等。(為本申請的目的，局部施用將包括漱口劑和含漱劑)。
本發(fā)明的化合物還可以以脂質(zhì)體的形式給予。如本領(lǐng)域已知的，脂質(zhì)體通常衍生自磷脂或其它脂類物質(zhì)。脂質(zhì)體通過分散在水介質(zhì)中的單層或多層水合液晶形成。可使用任何無毒生理學(xué)可接受的且可代謝的能夠形成脂質(zhì)體的脂類。脂質(zhì)體形式的本發(fā)明的組合物，除了本發(fā)明的化合物以外，還可包含穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑等。優(yōu)選的脂類是磷脂和磷脂酰膽堿，天然和合成的。形成脂質(zhì)體的方法是本領(lǐng)域中已知的。
本發(fā)明的藥物組合物和方法可進(jìn)一步含有本文提到的通常用于治療上述提到的病理狀況的其它藥學(xué)活性化合物。對用于聯(lián)合治療的合適的活性劑的選擇可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)常規(guī)的藥學(xué)原理進(jìn)行。治療活性劑的聯(lián)合可協(xié)同作用以影響治療或預(yù)防上述的各種疾病。使用這一方法，用每種活性劑的較低劑量可能能夠達(dá)到治療效果，因而降低了潛在的不利的副作用。
其它治療活性劑的實例包括如下環(huán)孢菌素(如環(huán)孢菌素A)，CTLA4-Ig，抗體如ICAM-3、抗IL-2受體(Anti-Tac)、抗CD45RB、抗CD2、抗CD3(OKT-3)、抗CD4、抗CD80、抗CD86，阻斷CD40和gp30間相互作用的活性劑如CD40和/或gp39(即CD154)特異性抗體、由CD40和gp39(CD401g和CD8gp39)構(gòu)建的融合蛋白，抑制劑如核轉(zhuǎn)位抑制劑，NF-κB功能抑制劑，如脫氧精胍菌素(DSG)、膽固醇生物合成抑制劑如HMG CoA還原酶抑制劑(洛伐他汀和斯伐他汀)，非甾族抗炎藥(NSAID)如布洛芬、阿斯匹林、撲熱息痛和環(huán)氧酶抑制劑如羅非考昔，甾族化合物如氫化可的松或地塞米松，金化合物，抗增殖劑如氨甲蝶呤、FK506(他克莫司、Prograf)、麥考酚酸嗎乙酯，細(xì)胞毒藥如硫唑嘌呤、VP-16、足葉乙甙、氟達(dá)拉濱、順鉑和環(huán)磷酰胺，TNF-11抑制劑如替尼達(dá)普，抗TNF抗體或可溶性TNF受體，以及雷帕霉素(西羅莫司或Rapamune)或其衍生物。
當(dāng)其它治療活性劑與本發(fā)明的化合物聯(lián)合使用時，它們可以例如以在Physician Desk Reference(PDR)中所述的量或者以本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定的量使用。
對于治療或預(yù)防需要抑制蛋白酪氨酸激酶的病況，合適的劑量水平通常為約0.01～500mg/kg患者體重/日，其可以單劑量或多劑量給藥。優(yōu)選，劑量水平為約0.1～約250mg/kg/日；更優(yōu)選約0.5～約100mg/kg/日。合適的劑量水平可為約0.01～250mg/kg/日，約0.05～100mg/kg/日，或約0.1～50mg/kg/日。在此范圍內(nèi)，劑量可為0.05～0.5、0.5～5或5～50mg/kg/日。對于口服給藥，該組合物優(yōu)選以含有1.0～1000毫克活性成分的片劑形式提供，特別是根據(jù)要治療的患者的癥狀調(diào)整劑量為1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分。該化合物可以以每日1～4次，優(yōu)選每日一或兩次的方案給藥。
然而，應(yīng)理解，對于任何特定的患者，特定的劑量水平和給藥頻率可以不同，這取決于包括使用的特定化合物的活性、代謝穩(wěn)定性和該化合物的作用時間、年齡、體重、一般健康狀態(tài)、性別、飲食、給藥方式和給藥時間、排泄速率、聯(lián)合藥物、特定疾病的嚴(yán)重性和接受治療的對象在內(nèi)的各種因素。
本申請的全文中，詞語“含有”或變體如“包含”或“包括”應(yīng)理解為意味著包括述及的元素、實體或步驟或者元素、實體或步驟組，但是不排除任何其它的元素、實體或步驟或者元素、實體或步驟組。
該說明書中提到的所有出版物引入本文作為參考。
對本申請中包括的文獻(xiàn)、文件、材料、裝置、器件等的任何討論僅是為本發(fā)明提供背景的目的。不應(yīng)因為在本申請的每項權(quán)利要求的優(yōu)先權(quán)日之前其在澳大利亞存在而承認(rèn)這些材料中的任何一個或所有這些材料成為現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)中的一部分或是本發(fā)明相關(guān)領(lǐng)域中的公知常識。
為更清楚地理解本發(fā)明的本質(zhì)，現(xiàn)參考下述非限制性實施例描述本發(fā)明的優(yōu)選形式。
實施例材料和方法化合物的合成化合物通常以2步法從2，6-二氯吡嗪起始制備。
第一步是親核芳香取代產(chǎn)生單氨基-單鹵代中間體。(路線1) 路線1親核芳香取代通常通過在溶劑如乙醇、異丙醇、叔丁醇、二噁烷、THF、DMF、甲苯或二甲苯中伯胺加成到二鹵代雜環(huán)上進(jìn)行。反應(yīng)通常在升高的溫度下在過量胺或非親核堿如三乙胺或二異丙基乙胺或無機堿如碳酸鉀或碳酸鈉存在下進(jìn)行。
或者，氨基取代基可通過過渡金屬催化氨化反應(yīng)引入。用于這些轉(zhuǎn)化的典型催化劑體系包括Pd(OAc)2/P(t-Bu)3、Pd2(dba)3/BINAP和Pd(OAc)2/BINAP。
合成這些化合物的第一步中使用的胺商業(yè)上獲得或使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。特別感興趣的是商業(yè)上獲得或使用肟還原(路線2)制備的α-甲基芐胺。典型的還原劑包括氫化鋰鋁、在催化量的炭載鈀存在下的氫氣、鹽酸存在下的Zn、路易斯酸如TiCl3、ZrCl4、NiCl2和MoO3存在下的硼氫化鈉，或與Amberlyst H15離子交換樹脂和LiCl組合的硼氫化鈉。肟經(jīng)一步從相應(yīng)的酮通過與羥胺縮合得到。這一反應(yīng)通常在0℃～回流的溫度下在質(zhì)子溶劑如水或乙醇中進(jìn)行。羥胺通常以其鹽酸鹽的形式使用，因此該反應(yīng)在堿如氫氧化鈉存在下進(jìn)行。作為原料使用的酮通常商業(yè)上獲得或者經(jīng)由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法獲得。
路線2高旋光純度的α-甲基芐胺可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法從手性α-甲基芐醇制備。這些方法包括將羥基衍生作甲磺酸酯和甲苯磺酸酯并用氮親核試劑如鄰苯二甲酰亞胺和疊氮化物替代，然后可使用常規(guī)的合成方法將其轉(zhuǎn)化為伯胺；或者，在Mitsunobu條件下用合適的氮親核試劑替代羥基。這些手性α-甲基芐醇可通過相應(yīng)的酮的手性還原獲得。手性還原方法在有機化學(xué)中是熟知的，包括酶促過程、不對稱氫化步驟和手性噁唑硼烷。
合成的第二步包括單氯單氨基吡嗪與苯并咪唑或吲唑的親核芳香取代反應(yīng)。該反應(yīng)通常使用苯并咪唑或吲唑的鹽在溶劑如四氫呋喃、二甲基甲酰胺、甲苯或二甲苯中在室溫至回流溫度下進(jìn)行。苯并咪唑或吲唑鹽通過與金屬氫化物如氫化鈉或氫化鉀反應(yīng)或通過與碳酸銫反應(yīng)制備?；蛘撸梢允褂媒饘俅呋呐悸?lián)反應(yīng)引入苯并咪唑或吲唑環(huán)。該反應(yīng)通常使用堿如碳酸銫、碳酸銣、碳酸鉀、叔丁醇鈉或磷酸鉀在溶劑如甲苯、苯或DMF中在室溫至回流溫度下進(jìn)行。助劑如相轉(zhuǎn)移劑(如十六烷三甲基溴化銨)或銅絡(luò)合劑(如菲咯啉)也可在該反應(yīng)中應(yīng)用。
在該反應(yīng)中使用的苯并咪唑或吲唑組分通常商業(yè)上獲得或經(jīng)由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)從商業(yè)上獲得的苯并咪唑或吲唑制備。
或者，苯并咪唑或吲唑衍生物可與單氨基單氯吡嗪反應(yīng)，隨后的產(chǎn)物進(jìn)一步使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法衍生化。
下面給出代表性的合成。
實施例1
6-氯-N-[(1S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡嗪-2-胺 將S-(-)-1-(4-氟苯基)-乙胺(5.0g，35.9mmol)、2，6-二氯吡嗪(5.90g，39.6mmol)、二異丙基乙胺(12.5ml，71.8mmol)在乙氧基乙醇(25ml)中的溶液在135℃和氮氣下加熱過夜。真空下除去溶劑、用H2O(2×30mL)洗滌殘余物并干燥(Na2SO4)。減壓下除去溶劑，將殘余物用己烷(2×10mL)研磨，得到淺棕色固體。合并洗液、濃縮、所得的殘余物用乙酸乙酯-己烷(1∶4-1∶2)進(jìn)行色譜分離得到固體產(chǎn)物，將其與最初的固體合并，得到總產(chǎn)物(7.07g，78％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.56(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，4.81-4.94(m，1H，CH)，5.05(m，1H，NH)，6.98-7.07(m，2H，ArH)，7.29-7.36(m，2H，ArH)，7.60(s，1H，吡嗪-H)，7.80(s，1H，吡嗪-H)。
實施例26-(1H-苯并咪唑-1-基)-N-芐基吡嗪-2-胺 在0℃和氮氣下，向攪拌的苯并咪唑(130mg，1.1mmol)在無水DMF中的溶液中在兩分鐘內(nèi)分批加入氫化鈉(56mg，60％，分散在油中，1.45mmol)。將混合物在0℃下攪拌15分鐘，在室溫下攪拌60分鐘。向其中加入(6-氯吡嗪-2-基)-(1-芐基)-胺(220mg)在DMF(5mL)中的溶液，然后將所得的混合物在回流下加熱18小時。減壓下除去DMF，將殘余物用氯仿稀釋。有機層用水洗滌、干燥(Na2SO4)、減壓下除去溶劑得到粗產(chǎn)物。用二氯甲烷-甲醇(20∶1→10∶1)作為洗脫液進(jìn)行柱色譜分離產(chǎn)物(100mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ4.66(d，2H，J＝5.7Hz，CH2)，5.56(m，1H，NH)，7.29-7.39(m，7H，ArH)，7.78-7.89(m，2H，ArH)，7.92(s，1H，吡嗪-H)，8.16(s，1H，吡嗪-H)，8.48(s，1H，ArH2)。
實施例31-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺和1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺 將2，6-二氯吡嗪(2.0g，13.4mmol)、1H-苯并咪唑-5-甲酰胺(2.0g，12.3mmol)和碳酸銫(5.6g，17.2mmol)在DMF(10mL)中的混合物在90℃下加熱3小時。將溶液冷卻至室溫，用乙酸乙酯(20mL)稀釋并過濾。將固體物質(zhì)用氯仿-甲醇(20mL，4∶1)洗滌，將合并的濾液真空濃縮。如此獲得的殘余物(3.02g)被使用而沒有進(jìn)一步純化。
m/z(EI)273/275(M+1)實施例41-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-腈和1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-腈
將在苯(3mL)中的約1∶1的1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺和1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺的混合物(0.3g，1.09mmol)和亞硫酰氯(0.3mL，3.3mmol)在回流下加熱過夜。冷卻至室溫時，將溶液傾倒入冰上，所得的混合物用固體Na2CO3堿化至pH～11。然后將混合物用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，將合并的有機層用鹽水洗滌，并干燥(Na2SO4)。真空下除去溶劑，用二氯甲烷-甲醇(100∶0-96∶4)作為洗脫液進(jìn)行柱色譜純化殘余物，得到的所需產(chǎn)物，為異構(gòu)體混合物(135mg)。
m/z(EI)255/257(M+1)實施例56-(1H-苯并咪唑-1-基)-N-[(1R)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺 類似于實施例2的方法，6-氯-N-[(1R)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺(240mg，1.03mmol)和苯并咪唑(130mg，1.10mmol)反應(yīng)，得到產(chǎn)物(187mg，59％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.63(d，3H，J＝6.6Hz，CH3)，4.98-5.20(m，1H，CH)，5.58(d，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.25-7.42(m，6H，Ph-H，ArH)，7.70(dd，1H，J＝7.2，1.0Hz，ArH)，7.82(dd，1H，J＝8.0，1.2Hz，ArH)，7.87(s，1H，吡嗪-H)，8.11(s，1H，吡嗪-H)，8.38(s，1H，ArH)。
實施例66-(1H-苯并咪唑-1-基)-N-[(1S)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺 類似于實施例2的方法，6-氯-N-[(1S)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺(140mg，0.60mmol)和苯并咪唑(78mg，0.66mmol)反應(yīng)，得到產(chǎn)物(71mg，38％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.57(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，4.95(m，1H，CH)，5.29(m，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.19-7.35(m，7H，Ph-H，ArH)，7.63-7.66(m，1H，ArH)，7.74-7.77(m，1H，ArH)，7.78(s，1H，吡嗪-H)，8.06(s，1H，吡嗪-H)，8.31(s，1H，ArH)。
m/z(ES)316(M++H)，212，105實施例76-氯-N-甲基-N-[(1S)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺 類似于實施例1的方法，將N-甲基-N-[(1S)-1-苯基乙基]胺(0.27g，2.0mmol)與2，6-二氯吡嗪(0.36g，2.4mmol)縮合，得到所需的產(chǎn)物，為淺棕色固體(192mg，39％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.56(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，4.81-4.94(m，1H，CH)，5.05(m，1H，NH)，6.98-7.07(m，2H，ArH)，7.29-7.36(m，2H，ArH)，7.60(s，1H，吡嗪-H)，7.80(s，1H，吡嗪-H)。
實施例81-(6-{[1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺和1-(6-{[1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺 類似于實施例3的方法，6-氯-N-[1-(3-氟苯基)乙基]吡嗪-2-胺(0.25g，1mmol)與1H-苯并咪唑-5-甲酰胺(0.2g，1.2mmol)反應(yīng)，得到產(chǎn)物，為異構(gòu)體混合物。用二氯甲烷-甲醇(98∶2-92∶8)作為洗脫液進(jìn)行色譜分離，從較低極性部分中得到1-(6-{[1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺(80mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.64(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，4.97-5.10(m，1H，CH)，5.47(d，1H，J＝6.2Hz，NH)，6.90-6.99(m，1H，ArH)，7.09-7.38(m，3H，ArH)，7.72(dd，1H，J＝8.4，1.6Hz，ArH)，7.86(s，1H，吡嗪-H)，7.87(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，8.22(s，1H，吡嗪-H)，8.47(s，1H，ArH)，8.60(s，1H，J＝1.6Hz，ArH)。
從較高極性部分中分離得到1-(6-{[1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺(63 mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.63(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，4.94-5.07(m，1H，CH)，5.44(d，1H，J＝6.6Hz，NH)，6.90-7.38(m，4H，ArH)，7.65(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，7.82(dd，1H，J＝8.8，1.6Hz，ArH)，7.93(s，1H，吡嗪-H)，8.13(s，1H，吡嗪-H)，8.25(d，1H，J＝1.4Hz，ArH)，8.41(s，1H，ArH)。
實施例91-(6-{[1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-腈 類似于實施例4給出的方法，1-(6-{[1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺(80mg，0.21mmol)與磷酰氯反應(yīng)得到淺黃色固體產(chǎn)物(60mg，80％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.65(d，3H，J＝6.6Hz，CH3)，4.94-5.09(m，1H，CH)，5.57(d，1H，J＝6.2Hz，NH)，6.97-7.12(m，2H，ArH)，7.20-7.25(m，1H，ArH)，7.35-7.46(m，1H，ArH)，7.59(dd，1H，J＝8.4，1.4Hz，ArH)，7.88(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.94(s，1H，吡嗪-H)，8.12(s，1H，吡嗪-H)，8.25(d，1H，J＝1.4 Hz，ArH)，8.51(s，1H，ArH)。
實施例101-[6-(3，4-二氫異喹啉-2(1H)-基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-5-腈和1-[6-(3，4-二氫異喹啉-2(1H)-基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-腈
類似于實施例1的方法，將約1∶1的1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-腈和1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-腈的混合物(102mg，0.4mmol)與1，2，3，4-四氫異喹啉(64mg，0.48mmol)縮合。粗產(chǎn)物用冷乙酸乙酯研磨，分離得到1-[6-(3，4-二氫異喹啉-2(1H)-基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-5-腈，為灰白色固體(65mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ3.05-3.11(m，2H，CH2)，3.95-4.02(m，2H，CH2)，4.85(m，2H，CH2)，7.25-7.29(m，3H，ArH)，7.61-7.68(m，1H，ArH)，7.95(d，1H，J＝8.2Hz，ArH)，8.11-8.21(m，1H，ArH)，8.16(s，1H，吡嗪-H)，8.23(s，1H，吡嗪-H)，8.38(s，1H，ArH)，8.65(s，1H，ArH)。
合并乙酸乙酯洗液，并真空濃縮，得到1-[6-(3，4-二氫異喹啉-2(1H)-基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-腈(41mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ3.07(t，2H，J＝5.9Hz，CH2)，3.97(t，2H，J＝6.1Hz，CH2)，4.84(3，2H，CH2)，7.24-7.32(m，4H，ArH)，7.67(dd，1H，J＝8.8，1.4Hz，ArH)，8.11-8.21(m，1H，ArH)，8.16(s，1H，吡嗪-H)，8.22(s，1H，吡嗪-H)，8.65(s，1H，ArH)。
實施例111-{6-[(1S)-1，2，3，4-四氫萘-1-基氨基]吡嗪-2-基}-1H-苯并咪唑-5-腈和1-{6-[(1S)-1，2，3，4-四氫萘-1-基氨基]吡嗪-2-基}-1H-苯并咪唑-6-腈
類似于實施例1的方法，將約1∶1的1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-腈和1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-腈的混合物(100mg，0.39mmol)與(1S)-1，2，3，4-四氫萘-1-胺(69mg，0.47mmol)縮合。產(chǎn)物以區(qū)域異構(gòu)體混合物形式獲得，將其通過用二氯甲烷-甲醇(95∶5)作為洗脫液進(jìn)行柱色譜分離。從較低極性部分中獲得1-{6-[(1S)-1，2，3，4-四氫萘-1-基氨基]吡嗪-2-基}-1H-苯并咪唑-6-腈，為黃色半固體(26mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.87-1.98(m，2H，CH2)，2.04-2.18(m，2H，CH2)，2.82-2.90(m，2H，CH2)，5.18-5.30(m，2H，NH+CH)，7.14-7.23(m，3H，ArH)，7.32-7.38(m，1H，ArH)，7.61(dd，1H，J＝8.2，1.4Hz，ArH)，7.94(s，1H，吡嗪-H)，8.11(ds，1H，J＝8.2Hz，ArH)，8.14(s，1H，吡嗪-H)，8.18(d，1H，J＝1.4Hz，ArH)，8.61(s，1H，ArH)。
從較高極性部分中分離出1-{6-[(1S)-1，2，3，4-四氫萘-1-基氨基]吡嗪-2-基}-1H-苯并咪唑-5-腈(19mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.89-2.02(m，2H，CH2)，2.10-2.20(m，2H，CH2)，2.83-2.91(m，2H，CH2)，5.25(m，2H，NH+CH)，7.15-7.35(m，4H，ArH)，7.62(dd，1H，J＝8.4，1.4Hz，ArH)，7.91-7.95(m，2H，ArH+吡嗪-H)，8.15(s，1H，吡嗪-H)，8.52(br s，1H，ArH)，8.66(s，1H，ArH)。
實施例121H-苯并咪唑-5-甲酰胺
在室溫下，向攪拌的苯并咪唑-5-羧酸(5.0g，30.8mmol)在苯(25mL)中的懸浮液中滴加亞硫酰氯(25mL)。向該混合物中加入DMF(0.1mL)，然后回流下加熱6小時。減壓下蒸發(fā)除去苯和亞硫酰氯，向殘余物中加入甲苯(20mL)。將它在減壓下除去，將由此得到的酰氯懸浮在四氫呋喃(20mL)中。在0℃下向其中滴加28％的氨水(20mL)，然后將所得的混合物在室溫下攪拌過夜。將沉淀過濾并用冷H2O洗滌，得到伯酰胺，為棕色固體(3.55g)。
1H-n.m.r.(d6-DMSO)δ7.25(br s，1H，NH)，7.60(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.78(dd，1H，J＝8.4和1.6Hz，ArH)，7.97(br s，1H，CONH)，8.18(br s，1H，ArH)，8.32(br s，1H，ArH)。
實施例131-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基]吡嗪-2-基}-1H-苯并咪唑-5-胺和1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺 在氮氣下，向攪拌的5-氨基-苯并咪唑(290mg，2.2mmol)在無水DMF(10mL)中的溶液中加入碳酸銫(980mg)。所得的混合物在70℃下攪拌60分鐘。向其中加入6-氯-N-[(1S)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺(470mg)在DMF(5mL)中的溶液，然后將所得的混合物回流下加熱48小時。減壓下除去DMF，將殘余物用氯仿稀釋。有機層用Na2CO3水溶液洗滌，干燥(Na2SO4)，并減壓下除去溶劑，得到粗產(chǎn)物。使用二氯甲烷-甲醇(95∶5-92∶8)作為洗脫液進(jìn)行柱色譜從未反應(yīng)的原料中分離出兩部分。較高Rf分?jǐn)?shù)為該6-異構(gòu)體(276mg，42％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.64(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，2.90(br s，2H，NH2)，5.05(m，1H，CH)，5.21(d，1H，NH)，6.70(dd，1H，J＝8.7，2.1Hz，ArH)，6.97(d，1H，J＝1.8Hz，ArH)，7.28-7.43(m，5H，Ph-H)，7.58(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.84(s，1H，吡嗪-H)，8.08(s，1H，吡嗪-H)，8.21(s，1H，ArH)。m/z(ES)331(M++H)。
較低Rf分?jǐn)?shù)為該5-異構(gòu)體(170mg，26％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.64(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，2.85(br s，2H，NH2)，5.01(m，1H，CH)，5.19(d，1H，NH)，6.70(dd，1H，J＝8.7，2.1Hz，ArH)，7.11(d，1H，J＝1.8Hz，ArH)，7.29-7.40(m，5H，Ph-H)7.51(d，1H，J＝8.7Hz，ArH)，7.81(s，1H，吡嗪-H)，8.10(s，1H，吡嗪-H)，8.32(s，1H，ArH)。
m/z(ES)331(M++H)。
實施例14N-[1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基]吡嗪-2-基}-1H-苯并咪唑-6-基)-2，2-二甲基丙酰胺 在氮氣下，向攪拌的2-(芐基氨基)-6-(5-氨基-苯并咪唑-1-基)-吡嗪(33mg，0.1mmol)在無水THF(2mL)中的溶液中加入三乙胺(38mg，0.3mmol)。將溶液在0℃下冷卻，向其中加入新戊酸(12mg，0.11mmol)和EDC(23mg，0.12mmol)，然后將得到的混合物在室溫下攪拌。64小時后，將溶液用H2O稀釋，將混合物用CHCl3(2×15mL)萃取。將合并的有機層用10％Na2CO3水溶液洗滌，干燥(Na2SO4)，并真空除去溶劑。用二氯甲烷-甲醇(100∶6)作為洗脫液進(jìn)行柱色譜純化殘余物，分離得到純產(chǎn)物(15mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.35(s，9H，3CH3)，1.65(d，3H，J＝6.6Hz，CH3)，5.14(m，1H，CH)，5.24(d，1H，J＝5.7Hz，NH)，7.13(d，1H，J＝8.7Hz，ArH)，7.29-7.47(m，5H，ArH)，7.75(d，1H，J＝8.7Hz，ArH)，7.81(s，1H，吡嗪-H)，8.17(s，1H，吡嗪-H)，8.35(s，1H，ArH)，8.69(s，1H，CONH)。
實施例15N-[1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-基]-乙酰胺 在氮氣下，向攪拌的2-(S-α-甲基芐基氨基)-6-(5-氨基-苯并咪唑-1-基)-吡嗪(66mg，0.2mmol)在無水THF(2mL)中的溶液中加入三乙胺(41mg，0.4mmol)。將溶液在0℃下冷卻，向其中加入乙酰氯(17mg，0.22mmol)，然后將得到的混合物在室溫下攪拌。18小時后，將溶液傾倒入水(30mL)中，將產(chǎn)物用氯仿(2×20mL)萃取。將合并的有機層干燥(Na2SO4)，減壓下除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，為淺黃色固體。用二氯甲烷-甲醇(200∶15)作為洗脫液進(jìn)行柱色譜分離得到產(chǎn)物，為淺黃色固體(38mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.63(d，3H，J＝6.6Hz，CH3)，2.21(s，3H，CH3)，5.00(m，1H，CH)，5.43(d，1H，J＝5.7Hz，NH)，7.27-7.38(m，5H，ArH)，7.49(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，7.61(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，7.74(br s，1H，CONH)，7.84(s，1H，吡嗪-H)，7.90(s，1H，ArH)，8.11(s，1H，吡嗪-H)，8.36(s，1H，ArH)。
實施例16N-[1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-基]-甲磺酰胺 在氮氣下，向攪拌的2-(S-α-甲基芐基氨基)-6-(5-氨基-苯并咪唑-1-基)-吡嗪(33mg，0.1mmol)在無水THF(2mL)中的溶液中加入三乙胺(40mg，0.4mmol)。將溶液在0℃下冷卻，向其中加入甲磺酰氯(25mg，0.2mmol)，然后將得到的混合物在室溫下攪拌。16小時后，將溶液傾倒入水(30mL)中，將產(chǎn)物萃取入氯仿(2×15mL)中。將合并的有機層用10％Na2CO3水溶液洗滌，干燥(Na2SO4)，減壓下除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，為淺黃色固體。用二氯甲烷-甲醇(100∶6)作為洗脫液進(jìn)行柱色譜從極性最大的部分中分離得到產(chǎn)物，為淺黃色固體(16mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.65(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，3.00(s，3H，CH3)，5.02(m，1H，CH)，5.27(d，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.21-7.40(m，6H，ArH)，7.64(d，1H，J＝8.7Hz，ArH)，7.69(d，1H，J＝1.9Hz，ArH)，7.88(s，1H，吡嗪-H)，8.10(s，1H，吡嗪-H)，8.41(s，1H，ArH)。
實施例172-(S-α-甲基芐基氨基)-6-(5-(N-甲基哌嗪-4-基-甲基)-苯并咪唑-1-基)-吡嗪 將3-[6-(S-α-甲基芐基氨基)-吡嗪-2-基]-3H-苯并咪唑-5-羧酸N-甲基哌嗪基酰胺(22mg，0.05mmol)在無水THF(1mL)中的溶液加入LiAlH4(4mg，0.1mmol)在THF(1mL)中的懸浮液中，將混合物在回流下加熱4小時。當(dāng)冷卻至室溫時，將溶液用H2O(1mL)、NaOH水溶液(1mL，2M)和H2O(5mL)順序處理。將所得的混合物用CHCl3(2×10mL)萃取，并將合并的有機層干燥(Na2SO4)。減壓下除去溶劑，產(chǎn)物用CH2Cl2-MeOH(10∶1→1∶1)作為洗脫液通過閃蒸色譜純化，得到產(chǎn)物，為黃色固體(11mg，52％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.65(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，2.58(s，3H，NCH3)，2.81(br s，4H，CH2)，2.90(br s，4H，CH2)，3.74(s，2H，NCH2)，5.03(m，1H，CH)，5.33(d，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.25-7.42(m，6H，ArH)，7.67(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.77(s，1H，ArH)，7.87(s，1H，吡嗪-H)，8.12(s，1H，吡嗪-H)，8.39(s，1H，ArH)。
實施例18[1-(6-{[1-(4-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-基]甲醇，和[1-(6-{[1-(4-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-基]甲醇
類似于實施例3的方法，6-氯-N-[1-(4-氟苯基)乙基]吡嗪-2-胺(1.80g，7.15mmol)和5-羥基甲基苯并咪唑(1.26mg，8.5mmol)反應(yīng)得到兩種產(chǎn)物，將該兩種產(chǎn)物使用二氯甲烷-甲醇(98∶2-92∶8)作為洗脫液通過柱色譜分離。從較低極性部分中得到[1-(6-{[1-(4-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-基]甲醇，為淺黃色固體(210mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.60(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，4.93-5.05(m，1H，CH)，5.48(d，1H，J＝6.2Hz，NH)，6.97-7.07(m，2H，ArH)，7.29-7.39(m，3H，ArH)，7.76(d，1H，J＝9.4Hz，ArH)，7.79(s，1H，吡嗪-H)，7.89(s，1H，ArH)，8.09(s，1H，吡嗪-H)，8.34(s，1H，ArH)。
從較高極性部分中得到[1-(6-{[1-(4-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-基]甲醇，為黃色固體(265mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.62(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，4.82(s，2H，CH2OH)，4.94-5.06(m，1H，CH)，5.29(d，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.02-7.10(m，2H，ArH)，7.29-7.40(m，3H，ArH)，7.68(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.80(d，1H，J＝1.2Hz，ArH)，7.84(s，1H，吡嗪-H)，8.12(s，1H，吡嗪-H)，8.39(s，1H，ArH)。
實施例19N-[1-(4-氟苯基)乙基]-6-{6-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-1H-苯并咪唑-1-基}吡嗪-2-胺
將乙醇(0.18mg，0.5mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液冷卻至0℃，向其中加入二異丙基乙胺(0.13mL，0.75mmol)和甲磺酰氯(46μL，0.59mmol)。在室溫下攪拌2小時后，加入另一等分部分的二異丙基乙胺(30μL)和甲磺酰氯(20μL)。1小時后，加入H2O(10mL)，收集有機層。水相用二氯甲烷(3×5mL)萃取，合并有機層，干燥(Na2SO4)并真空濃縮。將由此獲得的等分部分的粗甲磺酸酯(100mg)溶解在DMF(2mL)中，向其中加入二異丙基乙胺(52μL，0.3mmol)和1-甲基哌嗪(25μL，0.45mmol)。將溶液在60℃下加熱過夜。然后將溶液真空濃縮，將殘余物溶解在二氯甲烷(20mL)中并用H2O洗滌。將有機層干燥(Na2SO4)，濃縮，將產(chǎn)物用二氯甲烷-甲醇-氨水(95∶5∶0-95∶5∶1)通過色譜純化，得到產(chǎn)物，為淺黃色半固體(34mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.63(d，3H，J＝7.2Hz，CH3)，2.26(s，3H，NCH3)，2.45(br s，8H，4×CH2)，3.62(s，2H，CH2)，4.99-5.11(m，1H，CH)，5.41(d，1H，J＝6.4Hz，NH)，6.99-7.07(m，2H，ArH)，7.30-7.41(m，3H，ArH)，7.76(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.82(s，1H，吡嗪-H)，7.89(s，1H，ArH)，8.17(s，1H，吡嗪-H)，8.39(s，1H，ArH)。
實施例201-噻吩-2-基乙胺
氮氣下，向1-噻吩-2-基乙酮(505mg，4mmol)和甲酸銨(1.26g，20mmol)在甲醇(4mL)中的溶液中加入二氯(五甲基環(huán)戊二烯基)銠(III)二聚物(14mg，0.023mmol)。將溶液在回流下加熱7小時。之后，將溶液冷卻至室溫，用2M的HCl酸化至pH～2。將混合物用二氯甲烷(3×15mL)洗滌，然后加入5M的NaOH將水相堿化至pH～12。將水相用二氯甲烷(3×15mL)萃取，將合并的有機層干燥(Na2SO4)并濃縮，得到純產(chǎn)物(280mg，55％)。
m/z(ES)127(M+)，112(M-15)+。
實施例21(1R)-1-(3，4-二氟苯基)乙醇 在配有滴液漏斗和氮氣進(jìn)口的干燥的兩頸圓底燒瓶中，將(S，R)-順式-1-氨基-2-茚滿醇(284.3mg，1.91mmol，0.1eq)溶解在四氫呋喃(25mL)中。溶液冷至約0℃，滴加N，N-二乙基苯胺-硼烷復(fù)合物(3.50mL，19.2mmol，1eq)。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，此時，經(jīng)滴液漏斗在大約90分鐘內(nèi)將3，4-二氟苯乙酮(2.40mL)在四氫呋喃(40mL)中的溶液加入。將溶液緩慢暖至室溫并繼續(xù)攪拌過夜。將丙酮(16mL)加入到反應(yīng)混合物中，將溶液繼續(xù)攪拌另一個小時，然后真空濃縮。殘余物用甲苯(100mL)處理，用1M硫酸(4×50mL)、水(2×50mL)和鹽水(50mL)洗滌。然后干燥(Na2SO4)有機相并真空濃縮，得到粗醇。梯度閃蒸毛細(xì)管色譜法(Gradient flashmaster chromatography)(20g硅膠柱；100％石油溶劑油-100％乙酸乙酯)得到所需的醇，為澄清油狀物(2.242g，74％)。
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ1.47(3H，d，J＝6.4Hz)，1.80(1H，d，J＝3.6Hz)，4.87(1H，dq，J＝3.6，6.4Hz)，7.04-7.14(2H，m)，7.16-7.24(1H，m)。
實施例226-氯-N-[(1S)-1-(3，4-二氟苯基)乙基]吡嗪-2-胺 將(1S)-1-(3，4-二氟苯基)乙胺(977mg，6.2mmol)和2，6-二氯吡嗪(1.236g，8.3mmol，1.3eq)溶解在二噁烷(5mL)中，并將碳酸鉀(1.73g，2.0eq)加入到溶液中。然后將混合物在氮氣氛和回流(110℃)下加熱65小時。然后將粗反應(yīng)混合物傾倒入冷水(30mL)中，用二乙醚(3×30mL)萃取。濃縮合并的有機萃取液，進(jìn)行閃蒸毛細(xì)管色譜法(20g硅膠柱(8∶2石油溶劑油∶乙酸乙酯，然后用乙酸乙酯淋洗)，得到所需的吡嗪加合物，為灰白色固體(587mg，35％)。
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ1.56(3H，d，J＝6.9Hz)，4.88(1H，dq，J＝6.5，6.9Hz)，4.97(1H，brd，J＝6.5Hz)，7.06-7.20(3H，m)，7.63(1H，s)，7.82(1H，s)。
MS(e.i.)m/z 269[M+(35Cl)，29％]，m/z 271[M+(37Cl)，10％]。
實施例231-(6-{[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺 向攪拌的6-氯-N-[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]吡嗪-2-胺(242mg，0.96mmol)和5-苯并咪唑甲酰胺(318mg，1.97mmol，2.1eq)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中加入碳酸銫(460mg，1.41mmol，1.5eq)。然后將該溶液在氮氣氛和120℃下加熱48小時，此時加入另一份碳酸銫(180mg，0.6eq)。將混合物在120℃下再加熱62小時，之后冷卻至室溫，用氯仿(15mL)稀釋并過濾。將濾液真空濃縮，利用硅膠柱色譜法(逐步梯度從二氯甲烷至9∶1二氯甲烷∶甲醇)，得到5-甲酰胺產(chǎn)物(100.7mg，28％)以及所需的6-甲酰胺產(chǎn)物(63.7mg，18％)。
1H NMR(d6-丙酮，300MHz)δ1.64(3H，d，J＝6.9Hz)，2.76-2.88(2H，brm)，5.35(1H，m)，6.93(1H，m)，7.29-7.36(3H，m)，7.42(1H，dm J＝7.7Hz)，7.77(1H，dd J＝8.5，0.5Hz)，7.93(1H，dd，J＝1.7，8.5Hz)，8.05(1H，s)，8.31(1H，s)，8.73(1H，s)，8.40(1H，dd J＝0.5，1.6Hz)。
MS(e.i.)m/z 376[M+，89％]。
通過與上述給出的類似方法制備的其它化合物包括

篩選JAK酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的生產(chǎn)以下述方式制備JAK激酶結(jié)構(gòu)域JAK1人JAK1激酶結(jié)構(gòu)域用下述引物經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)從U937 mRNA擴(kuò)增XHOI-J1 5′-CCG CTC GAG ACT GAA GTG GAC CCC ACACAT-3′J1-KPNI 5′-CGG GGT ACC TTA TTT TAA AAG TGC TTCAAA-3′JAK1 PCR產(chǎn)物經(jīng)由Xho I和Kpn I位點克隆入pFastBac HTb表達(dá)載體(Gibco)中。然后用JAK1質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞(Gibco)，產(chǎn)生的重組桿狀病毒制備用于轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞。
JAK2人JAK2激酶結(jié)構(gòu)域用下述引物經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)從U937 mRNA擴(kuò)增SALI-jk2 5′-ACG CGT CGA CGG TGC CTT TGA AGA CCGGGA T-3′Jk2-NOTI 5′-ATA GTT TAG CGG CCG CTC AGA ATG AAGGTC ATT T-3′JAK2 PCR產(chǎn)物經(jīng)由Sal I和Not I位點克隆入pFastBac HTc表達(dá)載體(Gibco)中。然后用JAK2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞(Gibco)，產(chǎn)生的重組桿狀病毒制備用于轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞。
JAK3人JAK3激酶結(jié)構(gòu)域用下述引物經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)從U937 mRNA擴(kuò)增XHOI-J3 5′-CCG CTC GAG TAT GCC TGC CAA GAC CCCACG-3′J3-KPNI 5′-CGG GGT ACC CTA TGA AAA GGA CAG GGAGTG-3′JAK3 PCR產(chǎn)物經(jīng)由Xho I和Kpn I位點克隆入pFastBac HTb表達(dá)載體(Gibco)中。然后用JAK3質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞(Gibco)，產(chǎn)生的重組桿狀病毒制備用于轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞。
TYK2人TYK2激酶結(jié)構(gòu)域用下述引物經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)從A549 mRNA擴(kuò)增HT2EK 5′-GGA GCA CTC GAG ATG GTA GCA CAC AAC CAGGTG-3′HY2.2R 5′-GGA GCA GGA ATT CCG GCG CTG CCG GTC AAATCT GG-3′TYK2 PCR產(chǎn)物經(jīng)由EcoRI位點克隆入pBlueBacHis2A(Invitrogen)中。產(chǎn)生的重組TYK2桿狀病毒制備用于轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞。
大規(guī)模生產(chǎn)激酶結(jié)構(gòu)域用從這些JAK家族成員中的每個得到的桿狀病毒制備物感染5升于High Five血清游離培養(yǎng)基(Invitrogen)中生長的High Five細(xì)胞(Invitrogen)，得到細(xì)胞密度大約為1-2×106細(xì)胞/ml。用病毒以MOI為0.8-3.0感染細(xì)胞。收獲細(xì)胞并裂解。通過在Probond(Invitrogen)鎳絡(luò)合物親合柱進(jìn)行親合層析來純化JAK激酶結(jié)構(gòu)域。
測定方案使用Alphascreen Protein Tyrosine Kinase試劑盒在96孔捕獲基ELISA測定板中或者在384孔Optiplate(Packard)板中進(jìn)行激酶測定。在任一種情況下，使用在pH 7.5的50mM HEPES、10mM MgCl2、150mM MaCl和10μM-1mM ATP存在下大約1.5μg親合純化的PTK結(jié)構(gòu)域。使用生物素化底物生物素-EGPWLEEEEEAYGWMDF-NH2(終濃度5μM)作為底物。在ELISA測定中，在使用過氧化物酶連接的抗磷酸化-酪氨酸抗體PY20轉(zhuǎn)移到抗生物素蛋白包被的ELISA板上后定量測定酪氨酸磷酸化。在Alphascreen測定中，在柔和的光下加入Alphascreen磷酸化酪氨酸受體珠，然后加入鏈霉抗生物素蛋白供體珠。在BMG Fluorostar上讀取ELISA板，在Packard Fusion Alpha上讀取Alphascreen板。在加入ATP之前15分鐘將抑制劑加入到測定樣中。抑制劑以在DMSO水溶液中的形式加入，DMSO的濃度不超過1％。
結(jié)果一系列化合物的活性在表3中示出。在20μM的濃度下表現(xiàn)抑制50％或更高酶活性的能力(在標(biāo)準(zhǔn)條件下測定，參見方法)的化合物表示為“+”；沒有測試的化合物表示為“NT”；而在20μM下抑制酶活性不到50％的化合物表示為“-”。
表3











本領(lǐng)域技術(shù)人員會理解，在沒有背離廣義上描述的本發(fā)明的精神或范圍的前提下可以對具體實施方案中示出的本發(fā)明作出各種改變和/或修改。因此，應(yīng)將本發(fā)明的實施方案看作是對本發(fā)明各方面的例示而非限制。
參考文獻(xiàn)1、Kozma SC，Redmond SM，F(xiàn)u XC，Saurer SM，Groner B，andHynes NE.(1998)Activation of the receptor kinase domain of the trkoncogene by recombination with two different cellular sequences.EMBOJ.7，147-542、Spiotto MT，and Chung TD.(2000) STAT3 mediatesIL-6-induced growth ingibition in the human prostate cancer cell lineLNCaP.Prostate 42，88-983、Wilks AF，Harpur AG，Kurban RP，Ralph SJ，Zurcher G，Ziermiecki A.(1991)Two novel protein-tyrosine kinase，each with asecond phosphotransferase-related catalytic domain，define a new class ofprotein kinase.Mol Cell Biol.11，2057-654、Wilks AF，and Kurban RR(1988)Isolation and structuralanalysis of murine c-fes cDNA clones.Oncogene 3，289-945、Sadowski I，Stone JC，Pawson T.(1986)A noncatalyticdomain conserved among cytoplasmic protein-tyrosine kinases modifiesthe kinase function and transforming activity of Fujinami sarcoma virusF130gag-fps.Mol Cell.Biol.6，4396-408
權(quán)利要求
1.一種通式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的前藥、鹽、水合物、溶劑合物、晶形或非對映異構(gòu)體， 其中D為選自如下的雜環(huán) 其中X1、X2、X3、X4為任選取代的C，或者X1、X2、X3、X4之一為N，而其余為任選取代的C；R2為0-3個獨立地選自H、鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、OCHF2、CN、芳基、雜芳基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR3R4、C1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基、OC1-4烷基NR3R4、OC1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基OH、CO2R3、CONR3R4、NR3R4、硝基、NR3COR4、NR5CONR3R4、NR3SO2R4、C1-4烷基NR3COR4、C1-4烷基NR5CONR3R4、C1-4烷基NR3SO2R4的取代基；R3、R4各自獨立地為H、C1-4烷基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR19R20、C1-4烷基環(huán)烷基、C1-4環(huán)雜烷基、芳基、C1-4烷基芳基、雜芳基、C1-4烷基雜芳基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR6的原子的3-8元(飽和或不飽和)環(huán)；且R5選自H、C1-4烷基、芳基或雜芳基；R6選自H、C1-4烷基、C1-4烷基NR19R20、芳基、雜芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基雜芳基；R19、R20各自獨立地選自H、C1-4烷基；R1為H、C1-4烷基、C1-6環(huán)烷基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；Q為鍵、CH2、C1-4烷基；A為任選被0-3個取代基取代的芳基、雜芳基，所述取代基獨立地選自鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、CN、NR8R9、芳基、雜芳基、C1-4芳基、C1-4雜芳基、C1-4烷基NR8R9、OC1-4烷基NR8R9、硝基、NR10C1-4NR8R9、NR8COR9、NR10CONR8R9、NR8SO2R9、CONR8R9、CO2R8；R8和R9各自獨立地為H、C1-4烷基、芳基，或者一起形成任選取代的可含有選自O(shè)、S、NR11的雜原子的4-8元環(huán)；R10選自H、C1-4烷基；R11選自H、C1-4烷基；W選自H、C1-4烷基、C2-6烯基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；其中C1-4烷基或C2-6烯基可任選被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR12R13取代；R12和R13各自獨立地為H、C1-4烷基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR14的原子的3-8元環(huán)；R14選自H、C1-4烷基；Y為0-2個選自H、C1-4烷基、NR15R16的取代基；R15和R16獨立地選自H、C1-4烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)的化合物，其中所述化合物選自通式(II)的化合物或其藥學(xué)可接受的前藥、鹽、水合物、溶劑合物、晶形或非對映異構(gòu)體， 其中D是選自如下的雜環(huán) 其中X1、X2、X3、X4為任選取代的C，或者X1、X2、X3、X4之一為N，而其余為任選取代的C；R2為0-3個獨立地選自H、鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、OCHF2、CN、芳基、雜芳基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR3R4、C1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基、OC1-4烷基NR3R4、OC1-4烷基雜芳基、OC1-4烷基OH、CO2R3、CONR3R4、NR3R4、硝基、NR3COR4、NR5CONR3R4、NR3SO2R4、C1-4烷基NR3COR4、C1-4烷基NR5CONR3R4、C1-4烷基NR3SO2R4的取代基；R3、R4各自獨立地為H、C1-4烷基、C1-4烷基OH、C1-4烷基NR19R20、C1-4烷基環(huán)烷基、C1-4環(huán)雜烷基、芳基、C1-4烷基芳基、雜芳基、C1-4烷基雜芳基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR6的原子的3-8元(飽和或不飽和)環(huán)；且R5選自H、C1-4烷基、芳基或雜芳基；R6選自H、C1-4烷基、C1-4烷基NR19R20、芳基、雜芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基雜芳基；R19、R20各自獨立地選自H、C1-4烷基；R1為H、C1-4烷基、C1-6環(huán)烷基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；A為任選被0-3個取代基取代的芳基、雜芳基，所述取代基獨立地選自鹵素、C1-4烷基、CF3、OCF3、CN、NR8R9、芳基、雜芳基、C1-4芳基、C1-4雜芳基、C1-4烷基NR8R9、OC1-4烷基NR8R9、硝基、NR10C1-4NR8R9、NR8COR9、NR10CONR8R9、NR8SO2R9、CONR8R9、CO2R8；R8和R9各自獨立地為H、C1-4烷基、芳基，或者一起形成任選取代的可含有選自O(shè)、S、NR11的雜原子的4-8元環(huán)；R10選自H、C1-4烷基；R11選自H、C1-4烷基；W選自H、C1-4烷基、C2-6烯基，或者可形成5-8元環(huán)連在環(huán)A的鄰位上；其中C1-4烷基或C2-6烯基可任選被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR12R13取代；R12和R13各自獨立地為H、C1-4烷基，或者可以連接形成任選取代的任選含有選自O(shè)、S、NR14的原子的3-8元環(huán)；R14選自H、C1-4烷基；Y為0-2個選自H、C1-4烷基、NR15R16的取代基；R15和R16獨立地選自H、C1-4烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)的化合物，所述化合物選自
4.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)的化合物，所述化合物選自6-(1H-苯并咪唑-1-基)-N-芐基吡嗪-2-胺，6-(1H-苯并咪唑-1-基)-N-[(1R)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺，6-(1H-苯并咪唑-1-基)-N-[(1S)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺，1-(6-{[1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺，1-(6-{[1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺，1-(6-{[1-(3-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-腈，1-[6-(3，4-二氫異喹啉-2(1H)-基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-5-腈，1-[6-(3，4-二氫異喹啉-2(1H)-基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-腈，1-{6-[(1S)-1，2，3，4-四氫萘-1-基氨基]吡嗪-2-基}-1H-苯并咪唑-5-腈，1-{6-[(1S)-1，2，3，4-四氫萘-1-基氨基]吡嗪-2-基}-1H-苯并咪唑-6-腈，1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-胺，1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺，N-[1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-基]-2，2-二甲基丙酰胺，N-[1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-基]-乙酰胺，N-[1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-基]-甲磺酰胺，2-(S-α-甲基芐基氨基)-6-(5-(N-甲基哌嗪-4-基-甲基)-苯并咪唑-1-基)-吡嗪，[1-(6-{[1-(4-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-基]甲醇，[1-(6-{[1-(4-氟苯基)乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-基]甲醇，和N-[1-(4-氟苯基)乙基]-6-{6-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-1H-苯并咪唑-1-基}吡嗪-2-胺。
5.如下的化合物或其藥學(xué)可接受的前藥、鹽、水合物、溶劑合物、晶形或非對映異構(gòu)體
6.如下的化合物或其藥學(xué)可接受的前藥、鹽、水合物、溶劑合物、晶形或非對映異構(gòu)體
7.一種組合物，所述組合物包含載體和至少一種根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項的化合物。
8.一種治療個體中酪氨酸激酶相關(guān)疾病狀態(tài)的方法，所述方法包括給予治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項的化合物或根據(jù)權(quán)利要求7的組合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的治療酪氨酸激酶相關(guān)疾病狀態(tài)的方法，其中所述疾病狀態(tài)涉及JAK1、JAK2、JAK3或TYK2。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其中所述疾病狀態(tài)選自特應(yīng)性反應(yīng)、細(xì)胞介導(dǎo)的過敏反應(yīng)、風(fēng)濕性疾病、其它自身免疫性疾病、病毒性疾病、癌癥、神經(jīng)變性性疾病和心血管疾病。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項的化合物或根據(jù)權(quán)利要求7的組合物用于制備藥物的應(yīng)用，所述藥物用于治療JAK相關(guān)疾病狀態(tài)。
12.一種治療個體中與炎癥和感染相關(guān)的疾病和病況的方法，所述方法包括給予治療有效量的至少一種根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項的化合物或根據(jù)權(quán)利要求7的組合物。
全文摘要
本發(fā)明描述了通式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的前藥、鹽、水合物、溶劑合物、晶形或非對映異構(gòu)體。本發(fā)明還描述了使用式(I)的化合物治療激酶相關(guān)疾病狀態(tài)的方法。
文檔編號C07D413/00GK1878767SQ200480033482
公開日2006年12月13日 申請日期2004年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月3日
發(fā)明者克里斯托弗·約翰·伯恩斯, 安德魯·弗雷德里克·威爾克斯, 部先永 申請人:西托匹亞研究有限公司