專利名稱：嘧啶－4－基－3,4－硫酮化合物及其治療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新穎的2-取代的-4-雜芳基-嘧啶衍生物及其治療用途。更具體地，但是非限定地，本發(fā)明涉及能夠抑制一種或多種蛋白激酶的化合物。
背景技術(shù)：
在真核細(xì)胞中，所有的生物功能，包括DNA復(fù)制、細(xì)胞周期進(jìn)程、能量代謝以及細(xì)胞生長以及分化，都是通過蛋白的可逆性磷酸化調(diào)節(jié)的。蛋白的磷酸化狀態(tài)不僅決定其功能、亞細(xì)胞分布以及穩(wěn)定性，而且決定其結(jié)合的其它蛋白或細(xì)胞成分的種類。因此，生化通路中的作為整體的蛋白質(zhì)組，以及單個成員的特定磷酸化的平衡被生物體用作響應(yīng)于不斷變化的環(huán)境而保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的策略。執(zhí)行這些磷酸化以及去磷酸化步驟的酶分別為蛋白激酶以及磷酸酶。
真核蛋白激酶家族為人基因組最大的成員之一，包括約500種基因[1，2]。多數(shù)激酶包含帶有保守的核心結(jié)構(gòu)的250-300氨基酸殘基催化結(jié)構(gòu)域。這種結(jié)構(gòu)域包括ATP(較少情形下GTP)的結(jié)合袋(binding pocket)，其末端磷酸被激酶共價轉(zhuǎn)移至其大分子底物上。磷酸供體總是與二價離子(通常為Mg2+或Mn2+)結(jié)合成復(fù)合物。催化結(jié)構(gòu)域的另一種重要功能是大分子底物的磷酸轉(zhuǎn)移的結(jié)合以及定位。在絕大多數(shù)激酶中存在的催化結(jié)構(gòu)域具有或多或少的同源性。
本領(lǐng)域已知有許多通過拮抗ATP結(jié)合能抑制蛋白激酶功能的分子[3-7]。例如，申請人以前公開了具有激酶抑制特性(特別地具有對周期蛋白-依賴性激酶(CDKs)具有抑制特性)的2-苯胺基-4-雜芳基-嘧啶化合物[8-12]。CDKs是與多種周期蛋白亞基結(jié)合的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。這些復(fù)合物對調(diào)節(jié)真核細(xì)胞周期進(jìn)程以及對轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)非常重要[13，14]。
本發(fā)明進(jìn)一步尋求提供2-取代的-4-雜芳基-嘧啶。更具體地，本發(fā)明涉及在治療多種不同疾病中具有廣泛治療應(yīng)用和/或能夠抑制一種或多種蛋白激酶的化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一方面涉及式I的化合物，或其可藥用鹽， 其中R1和R5各自獨(dú)立地為H、C(ORj’)或任選被一個或多個R6基團(tuán)取代的烴基(hydrocarbyl)；R2、R3和R4各自獨(dú)立地為H；烷基或烯基，各基團(tuán)可任選被一個或多個R7基團(tuán)取代；R6和R7各自獨(dú)立地為鹵素、NO2、CN、(CH2)mORa、O(CH2)nORb、(CH2)pNRcRd、CF3、COORe、CONRfRg、CORh、SO3H、SO2Ri、SO2NRjRk、(CH2)qNRa’CORg’、Rf’、(CH2)rNRb’SO2Rh’、SO2NRd’Ri’、SO2NRe’(CH2)sORc’、雜環(huán)烷基(heterocycloalkyl)或雜芳基，其中所述雜環(huán)烷基和雜芳基可任選被一個或多個選自芳烷基、磺?；?、Rm和CORn中的取代基取代；Rg’、Rh’、Ri’和Rj’各自獨(dú)立地選自烷基、芳基、芳烷基和雜芳基，各基團(tuán)可任選被一個或多個選自鹵素、OH、NO2、NH2、CF3和COOH中的取代基取代；m、p、q和r各自獨(dú)立地為0、1、2或3；n和s各自獨(dú)立地為1、2或3；以及Ra-n和Ra’-f’各自獨(dú)立地為H或烷基。
本發(fā)明的第二方面涉及藥物組合物，其包括上述式I的化合物并混合有可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
本發(fā)明的第三方面涉及上述式I的化合物在制備用于治療下述中的一種或多種疾病的藥物中的用途增生性疾病、病毒性疾病、CNS疾病、中風(fēng)、脫發(fā)癥和糖尿病。
本發(fā)明的第四方面涉及上述式I的化合物在用于鑒別能抑制周期蛋白依賴性激酶、GSK、aurora激酶和PLK酶中的一或多種的其它候選化合物的測定中的用途。
申請人先前的研究披露了新型2-苯胺基-4-(噻唑-5-基)-嘧啶化合物，其作為各種蛋白激酶的ATP競爭性抑制劑(S.Y.Wu et al.，2003，Structure，11，399；WO 2001072745，WO 2002079193和WO 2003029248)。近來的研究披露含有3H-噻唑-2-酮-5-基的相應(yīng)化合物作為激酶抑制劑也是具有生物活性的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的方面之一涉及式Ia的化合物，或其可藥用鹽， 其中R1和R5各自獨(dú)立地為H或任選被一個或多個R6基團(tuán)取代的烴基；R2、R3和R4各自獨(dú)立地為H、烷基或烯基，各基團(tuán)任選被一個或多個R7基團(tuán)取代；R6和R7各自獨(dú)立地為鹵素；NO2；CN；(CH2)mORa，其中m為0、1、2或3；O(CH2)nORb，其中n為1、2或3；NRcRd；CF3；COORe；CONRfRg；CORh；SO3H；SO2Ri；SO2NRjRk；雜環(huán)烷基或雜芳基，其中所述雜環(huán)烷基和雜芳基可任選被一個或多個選自Rm和CORn中的取代基取代，以及Ra-n各自獨(dú)立地為H或烷基。
本發(fā)明的方面之一涉及上述式I或Ia的化合物，或其可藥用鹽，條件是所述化合物不是化合物I-XVII。
本發(fā)明的方面之一涉及上述式I或Ia的化合物，或其可藥用鹽，條件是所述化合物不是化合物I-XIII。
本發(fā)明的方面之一涉及上述式I或Ia的化合物，或其可藥用鹽，條件是所述化合物不是化合物XIV或XV。
本發(fā)明的方面之一涉及上述式I或Ia的化合物，或其可藥用鹽，條件是所述化合物不是化合物XVI或XVII。
如本發(fā)明中所使用的，化合物I是WO 03/029248的實施例9中制備的化合物。
如本發(fā)明中所使用的，化合物II-XIII是WO 03/029248(PCT/GB2002/004383)的實施例10中制備的化合物。
如本發(fā)明中所使用的，化合物XIV和XV分別是WO 2004/043953(PCT/GB2003/004973)的實施例92和93中制備的化合物。
如本發(fā)明中所使用的，化合物XVI和XVII分別是根據(jù)PCT/GB2004/003282中制備化合物4和11的方法所制備的化合物。
本發(fā)明的另一方面涉及上述式I或Ia的化合物，或其可藥用鹽，條件是所述化合物不是下述化合物3，4-二甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氟-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-{2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；
5-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮。
如本發(fā)明中所使用的，術(shù)語“烴基”是指至少包含C和H的基團(tuán)。如果烴基包含不止一個C，那么這些碳并不是必需地需要彼此連接。例如，至少兩個碳可以由合適的元素或基團(tuán)連接。因此，烴基可以含有雜原子。合適的雜原子對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，并包括例如硫、氮、氧、磷和硅。優(yōu)選地，烴基為芳基、雜芳基、烷基、環(huán)烷基、芳烷基或鏈烯基。
如本發(fā)明中所使用的，術(shù)語“烷基”包括飽和的直鏈和支鏈烷基，其可以是取代的(單取代的或多取代的)或者是未取代的。優(yōu)選地，烷基為C1-20烷基，更優(yōu)選為C1-15，更優(yōu)選為C1-12烷基，更優(yōu)選為C1-6烷基，更優(yōu)選為C1-3烷基。特別優(yōu)選的烷基包括，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基和己基。合適的取代基包括，例如一個或多個R6基團(tuán)。
如本發(fā)明中所使用的，術(shù)語“環(huán)烷基”是指環(huán)狀烷基，其可以是取代的(單取代的或多取代的)或者是未取代的。優(yōu)選地，環(huán)烷基為C3-12環(huán)烷基。合適的取代基包括，例如一個或多個R6基團(tuán)。
術(shù)語“雜環(huán)烷基”是指含有一個或多個選自O(shè)、N和S的雜原子的環(huán)烷基。雜環(huán)烷基的實例包括1-(1，2，5，6-四氫吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-基、四氫呋喃-3-基、四氫噻吩-2-基、四氫噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、吡咯烷基、二氫呋喃基、四氫吡喃基、吡喃基、噻喃基、氮丙啶基、氧雜環(huán)丙基、亞甲基二氧基、色烯基(chromenyl)、異噁唑烷基、1，3-噁唑烷-3-基、異噻唑烷基、1，3-噻唑烷-3-基、1，2-吡唑烷-2-基、1，3-吡唑烷-1-基、硫嗎啉基、1，2-四氫噻嗪-2-基、1，3-四氫噻嗪-3-基、四氫噻二嗪基、1，2-四氫二嗪-2-基、1，3-四氫二嗪-1-基、四氫氮雜環(huán)庚三烯基(tetrahydroazepinyl)、哌嗪基、苯并二氫呋喃基等。此外，對雜環(huán)烷基而言，雜原子可占據(jù)雜環(huán)與分子剩余部分連接的位置。因此，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將會理解所述雜環(huán)烷基環(huán)是通過碳或sp3雜化的氮雜原子連接的。優(yōu)選的雜環(huán)烷基包括哌嗪基、嗎啉基、哌啶基和吡咯烷基。
如本發(fā)明中所使用的，術(shù)語“烯基”是指含有一個或多個碳-碳雙鍵的基團(tuán)，其可以是支化的或者未支化的，取代的(單取代的或多取代的)或者未取代的。優(yōu)選地，烯基是C2-20烯基，更優(yōu)選地C2-15烯基，更優(yōu)選地C2-12烯基，或者優(yōu)選地C2-6烯基，更優(yōu)選地C2-3烯基。合適的取代基包括，例如一個或多個上述R6基團(tuán)。
如本發(fā)明中所使用的，術(shù)語“芳基”是指C6-12芳族基團(tuán)(單取代的或多取代的)或者是未取代的。典型的實例包括苯基和萘基等。合適的取代基包括，例如一個或多個R6基團(tuán)。
如本發(fā)明中所使用的，術(shù)語“雜芳基”是指C4-12芳香的，取代的(單取代的或多取代的)或者未取代的包括一個或多個雜原子的基團(tuán)。優(yōu)選的雜芳基包括吡咯、吡唑、嘧啶、吡嗪、吡啶、喹啉、三唑、四唑、噻吩和呋喃。再次，合適的取代基包括，例如一個或多個R6基團(tuán)。
優(yōu)選地，Rg’、Rh’、Ri’和Rj’各自獨(dú)立地選自烷基、苯基、苯甲基和吡啶基，各基團(tuán)可任選被一個或多個選自鹵素、OH、NO2、NH2、CF3和COOH中的取代基取代；優(yōu)選地，Ra-n和Ra’-f’各自獨(dú)立地為H、甲基(Me)、乙基(Et)或異丙基。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R1和R5各自獨(dú)立地為H或C1-20烴基，所述烴基任選地包括至多六個選自N、O和S中的雜原子，且其任選被一個、兩個或三個R6基團(tuán)取代；在另一個優(yōu)選實施方案中，R5為芳基或雜芳基，各基團(tuán)可任選被一個或多個R6基團(tuán)取代。
在另一優(yōu)選實施方案中，R5為H、CO(Rj’)、芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基可任選被一個或多個R6基團(tuán)取代。
更優(yōu)選地，R5為H、COMe、苯基或吡啶基，其中所述苯基或吡啶基可任選被一個或多個R6基團(tuán)取代。
甚至更優(yōu)選地，R5為苯基或吡啶基，各基團(tuán)可任選被一個或多個R6基團(tuán)取代。
在優(yōu)選的實施方案中，R1為H或烷基。更優(yōu)選地，R1為H、甲基、乙基或3-甲基丁基。
優(yōu)選地，R2、R3和R4各自獨(dú)立地為H、C1-C6烷基或C2-C6烯基，各基團(tuán)可任選被一個、兩個或三個R7基團(tuán)取代。
更優(yōu)選地，R2為C1-6烷基。甚至更優(yōu)選地，R2為甲基。
優(yōu)選地，R3和R4均為H。
優(yōu)選地，R6和R7各自獨(dú)立地為F、Cl、Br、I、NO2、CN、OH、OMe、OEt、CH2OH、O(CH2)2OMe、NH2、NHMe、NMe2、CF3、COOH、CONH2、CONHMe、CONMe2、COMe、SO3H、SO2Me、SO2NH2、SO2NHMe、SO2NMe2、嗎啉、哌啶、哌嗪、N-乙?；哙?、N-甲基哌嗪、三唑或四唑。
在一個優(yōu)選地實施方案中，R3和R4均為H，且R2為Me。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物是式II的化合物，或其可藥用鹽， 其中R1定義如上；X為C；或者X為N，且R8不存在；R8、R9、R10和R11各自獨(dú)立地為H或者如R6和R7的定義。
更優(yōu)選地，對所述的式II化合物而言，R1為H或烷基；R8為H、NO2、ORp、鹵素、CF3、CN、CORq、烷基、NRrRs、O(CH2)tORt；R9為H、ORu、鹵素、烷基、NRvRw或者任選被一個或多個選自Rm和CORn中的取代基取代的雜環(huán)烷基；t為0、1、2或3；R10為H、烷基或NRxRy；及Rp-y各自獨(dú)立地為H或烷基。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，R1為H、Me、Et或3-甲基丁基。
甚至更優(yōu)選地，對所述的式II化合物而言，R8為H、NO2、OH、Me、I、CF3、CN、CH2OH、CO2H、CO2Me或NH2；R9為H、F、OH、I、Cl、Br、OMe、NMe2、嗎啉、Me、N-甲基哌嗪、N-乙?；哙夯蜻哙?；R10為H、Me或NMe2。
在一個優(yōu)選地實施方案中，對所述的式II化合物而言，R8選自H、NO2、鹵素、CN、CF3、SO3H、(CH2)mORa、COORe、(CH2)pNRcRd、(CH2)rNRb’SO2Rh’、(CH2)qNRa’CORg’、SO2NRjRk、CONRfRg、SO2NRe’(CH2)sORc’、SO2NRd’Ri’和任選被一個或多個CORn或磺?；〈碾s環(huán)烷基。
更優(yōu)選地，R8選自H、NO2、OH、Me、I、CN、CH2OH、CF3、CO2H、CO2Me、NH2、Cl、4-乙?；哙?1-基、OMe、SO3H、CH2NHSO2Me、CH2NHCOPh、CH2NHSO2CF3、SO2NH2、CONHiPr、SO2NHEt、SO2NH(CH2)2OMe、SO2NHiPr、SO2NH(CH2)2OH、NHMe、SO2NH-苯甲基和嗎啉-4-磺酰基。
在一個優(yōu)選地實施方案中，對所述的式II化合物而言，R9選自H、NO2、SO3H、鹵素、(CH2)mORa、(CH2)pNRcRd、(CH2)qNRa’CORg’、SO2NRe’(CH2)sORc’、SO2NRd’Ri’和任選被一個或多個CORn、Rm或芳烷基取代的雜環(huán)烷基。
更優(yōu)選地，R9選自H、F、OH、Cl、Br、OMe、NMe2、嗎啉-4-基、4-甲基哌嗪-1-基、Me、4-乙?；?哌嗪-1-基、I、CH2NHCOMe、NO2、SO3H、SO2NH(CH2)2OMe、4-苯甲基哌嗪-1-基、SO2NH(CH2)2OH、SO2NH-苯甲基、CH2NH2、CH2NHCO-(吡啶-2-基)和哌嗪-1-基。
在一個優(yōu)選地實施方案中，對所述的式II化合物而言，R10選自H、Rf’和(CH2)pNRcRd。
更優(yōu)選地，R10選自H、Me和NMe2。
在一個優(yōu)選地實施方案中，對所述的式II化合物而言，R11選自H、Rf’、CF3、鹵素和(CH2)qNRa’CORg’。
更優(yōu)選地，R11選自H、NHCOMe、CF3、Br和Me。
在一個優(yōu)選地實施方案中，X為N，且R8不存在。
在另一優(yōu)選實施方案中，X為C。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述化合物選自下述3，4-二甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-溴-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；
3，4-二甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氟-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-{2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈；5-{2-[4-(4-乙?；?哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-3-羥甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(2-甲基-5-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；2-氯-5-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸；2-氯-5-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯；5-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-4-甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-4-甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；
5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(2-二甲氨基-5-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-氨基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；4-甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-乙酰胺；3-乙基-5-[2-(3-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-氯-4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-5-[2-(3-羥基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-{2-[3-(4-乙?；?哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-5-[2-(3-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；
3-乙基-4-甲基-5-[2-(4-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；4-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酸；3-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酸；N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-甲磺酰胺；5-[2-(5-甲氧基-2-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-苯甲酰胺；N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-C，C，C-三氟-甲磺酰胺；N-{4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-乙酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-異丙基-4-甲基-苯甲酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-乙基-苯磺酰胺；5-[2-(5-羥甲基-2-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-三氟甲基-苯基}-乙酰胺；4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-甲氧基-乙基)-苯磺酰胺；5-[2-(4-氯-3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-甲氧基-乙基)-苯磺酰胺；5-[2-(3-溴-5-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-{2-[4-(4-苯甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-三氟甲基-芐腈；5-[2-(3-氨基-5-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-羥基-乙基)-苯磺酰胺；N-苯甲基-4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-異丙基-苯磺酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-羥基-乙基)-苯磺酰胺；3，4-二甲基-5-[2-(3-甲基氨基-5-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；N-苯甲基-3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酰胺；3，4-二甲基-5-{2-[4-甲基-3-(嗎啉-4-磺酰基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-{2-[3-(嗎啉-4-磺?；?-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氨基甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(6-氯-5-甲基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；吡啶-2-羧酸4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基酰胺；3，4-二甲基-5-{2-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮；5-(2-氨基-嘧啶-4-基)-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；N-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-乙酰胺；
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物選自下述3，4-二甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[1]；5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[2]；5-[2-(4-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[3]；5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[4]；5-[2-(4-溴-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[5]；5-[2-(4-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[6]；5-[2-(3-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[7]；5-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[8]；3，4-二甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[9]；5-[2-(4-氟-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[10]；3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[11]；5-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[12]；3，4-二甲基-5-{2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮[13]；5-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[14]；5-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[15]；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈[16]；5-{2-[4-(4-乙?；?哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[17]；5-[2-(4-氯-3-羥甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[18]；
3，4-二甲基-5-[2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[19]；3，4-二甲基-5-[2-(2-甲基-5-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[20]；3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[21]；5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[22]；3-乙基-4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[23]；2-氯-5-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸[24]；2-氯-5-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯[25]；5-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮[26]；3-乙基-4-甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[27]；3-乙基-4-甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[28]；5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮[29]；4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[30]；5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-3H-噻唑-2-酮[31]；5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[32]；3-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮[33]；5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-3H-噻唑-2-酮[34]；5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-3H-噻唑-2-酮[35]；5-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[36]；5-[2-(2-二甲氨基-5-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[37]；3，4-二甲基-5-[2-(4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[38]；5-[2-(3-氨基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[39]；4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[40]；和4-甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[41]。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物能夠抑制一種或多種蛋白激酶，如用適當(dāng)測定所測量的。優(yōu)選地，所述蛋白激酶選自CDK1/周期蛋白B、CDK2/周期蛋白E、CDK2/周期蛋白A、CDK4/周期蛋白D1、CDK7/周期蛋白H、CDK9/周期蛋白T1、GSK-3β、GSK-3α、DYRK1A和aurora激酶。
更優(yōu)選地，化合物顯示出的IC50值(對一種或多種上述激酶的激酶抑制)小于1μM，優(yōu)選小于0.1μM，更優(yōu)選小于0.01μM，甚至更優(yōu)選小于0.002μM，以及甚至更優(yōu)選小于0.001μM。
本發(fā)明所選的化合物的激酶活性(CDK1/周期蛋白B、CDK2/周期蛋白E、CDK2/周期蛋白A、CDK4/周期蛋白D1、CDK7/周期蛋白H、CDK9/周期蛋白T1和aurora A)示于表8中。
本發(fā)明所選的化合物的體外GSK3α、GSK3β和DYRK1A抑制活性示于表9中。就GSK3和DYRK抑制活性而言，本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括表9中列出的那些。
在HEK293細(xì)胞小鼠脂肪細(xì)胞和大鼠肌管中的糖原合酶活化示于表10中。在這方面優(yōu)選的化合物包括化合物[62]、[64]、[67]、[68]、[75]和[76]。
在一個優(yōu)選地實施方案中，所述化合物選自下述[1]、[2]、[3]、[10]、[11]、[16]、[18]、[22]、[23]、[28]、[38]和[41]。
甚至更優(yōu)選地，所述化合物選自下述[11]、[16]、[23]和[28]。
在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的化合物選自[76]、[64]、[67]、[62]、[66]、[68]和[75]。
在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的化合物選自[76]、[64]、[67]、[62]、[68]和[75]。
在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的化合物選自[64]、[67]、[68]和[75]。
治療用途已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式I的化合物具有抗增殖活性，并因此相信其可用于治療增殖性疾病例如癌癥、白血病和其它與失控細(xì)胞增殖有關(guān)的疾病，例如牛皮癬和再狹窄。如本發(fā)明所定義的，本發(fā)明范圍內(nèi)的抗增殖作用可以由在體外全細(xì)胞測定法中抑制細(xì)胞增殖的能力得到證明，例如使用A549、HT29、Saos-2中的任何一種細(xì)胞系。利用這些測定法，可以確定一種化合物在本發(fā)明的意義上是否具有抗增殖性。
因此，一種優(yōu)選的本發(fā)明實施方案涉及一或多種式I化合物在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途。
如本發(fā)明所使用的，術(shù)語“藥物的制備”包括式I的化合物直接用作藥物的用途，還包括其在篩選其它治療劑的方案中的用途或者其在制備這種藥物的任何階段中的用途。
優(yōu)選地，增殖性疾病是癌癥或白血病。本發(fā)明所用的術(shù)語“增殖性疾病”在廣義上包括任何需要控制細(xì)胞周期的疾病，例如，心血管疾病，例如再狹窄和心臟病和心肌梗塞；自體免疫性疾病，例如腎小球腎炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；皮膚病，例如牛皮癬；抗炎、抗真菌、抗寄生蟲性疾病，例如瘧疾、肺氣腫和脫發(fā)癥和慢性阻塞性肺病。在這些疾病中，本發(fā)明的化合物可以根據(jù)需要在所需細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或者維持停滯。
本發(fā)明的化合物可以抑制細(xì)胞周期中的任意步驟或階段，例如核被膜的形成、從細(xì)胞周期的靜止期(G0)退出、G1進(jìn)展、染色體解聚、核被膜破裂、START、DNA復(fù)制的引發(fā)、DNA復(fù)制的進(jìn)展、DNA復(fù)制的終止、中心體復(fù)制、G2進(jìn)展、有絲分裂或減數(shù)分裂功能的激活、染色體聚集、中心體分離、微管成核、紡錘體生成與功能、與微管動力蛋白的相互作用、染色單體分離(separation)與隔開(segregation)、有絲分裂功能的失活、收縮環(huán)的生成和胞質(zhì)分裂活動。確切而言，本發(fā)明的化合物可以影響某些基因功能，例如染色質(zhì)結(jié)合、復(fù)制復(fù)合體的生成、復(fù)制許可、磷酸化或其它次級修飾活性、蛋白水解性降解、微管結(jié)合、肌動蛋白結(jié)合、septin結(jié)合、微管組織中心成核活性和與細(xì)胞周期發(fā)信號通路成分的結(jié)合。
在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明化合物以抑制至少一種CDK酶的有效量給藥。
優(yōu)選地，本發(fā)明化合物以足以抑制CDK2和/或CDK4中至少一種的量給藥。
本發(fā)明的另一方面涉及式I的化合物在制備用于治療病毒性疾病如人巨細(xì)胞病毒(HCMV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)和水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)的藥物中的用途。
在本發(fā)明更優(yōu)選的實施方案中，式I的化合物以足以抑制一或多種與病毒復(fù)制相關(guān)的宿主細(xì)胞CDKs即CDK2、CDK7、CDK8和CDK9[23]的量給藥。
如本發(fā)明所定義的，本發(fā)明范圍內(nèi)的抗病毒活性可通過抑制CDK2、CDK7、CDK8或CDK9的能力而得到證實。
在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種或多種式Ia的化合物在治療CDK依賴性或敏感性的病毒性疾病中的用途。CDK依賴性疾病與一種或多種CDK酶的超過正?；钚运接嘘P(guān)。這類疾病優(yōu)選與CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9的異?；钚运接嘘P(guān)。CDK敏感性疾病是這樣的一種疾病，其中CDK水平的失常不是主要原因，而是下游初級異謝失常導(dǎo)致的。在這種情況下，CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9被認(rèn)為是敏感性代謝途徑的一部分，并且因此CDK抑制劑可在治療這類疾病中有活性。
本發(fā)明所選的化合物被發(fā)現(xiàn)具有抗HIV活性，如通過所附實施例描述的測定測量的。
就抗HIV活性而言，高度優(yōu)選的化合物包括下述5-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(14)，3，4-二甲基-5-[2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(19)，5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(22)，
5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮(29)，5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(32)，N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-甲磺酰胺(55)，N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-C，C，C-三氟-甲磺酰胺(58)，5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(2)，3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(11)，5-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(15)，3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈(16)，3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(21)，3-乙基-4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(23)，3-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮(33)，3，4-二甲基-5-[2-(4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(38)，N-{4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-乙酰胺(59)，3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酰胺(60)，N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-三氟甲基-苯基}-乙酰胺(64)，和4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-甲氧基-乙基)-苯磺酰胺(65)。
就抗HIV活性而言，高度優(yōu)選的化合物包括下述5-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(14)，3，4-二甲基-5-[2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(19)，5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(22)，
5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮(29)，5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(32)，N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-甲磺酰胺(55)，N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-C，C，C-三氟-甲磺酰胺(58)，和N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-三氟甲基-苯基}-乙酰胺(64)。
本發(fā)明另一方面涉及式I的化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。
在特別優(yōu)選的實施方案中，所述的糖尿病為II型糖尿病。
GSK3為磷酸化糖原合酶(GS)的數(shù)種蛋白激酶之一。骨骼肌中胰島素對糖原合成的刺激源自GS的去磷酸化以及活化。因此，GSK3對GS的作用導(dǎo)致后者的失活并因此抑制肌肉中葡萄糖向糖原的轉(zhuǎn)化。
II型糖尿病(非-胰島素依賴性糖尿病)是一種多因素疾病。高血糖癥是由于肝臟、肌肉以及其它組織中的胰島素耐受性以及受損的胰島素分泌導(dǎo)致的。骨骼肌是胰島素-刺激的葡萄糖攝取的主要部位，在那里其要么離開循環(huán)要么轉(zhuǎn)化成糖原。肌肉糖原沉積是葡萄糖調(diào)節(jié)平衡作用中的主要決定環(huán)節(jié)，并且II型糖尿病具有缺損的肌肉糖原貯存。有證據(jù)表明GSK3活性的增加在II型糖尿病中很重要[24]。此外，已經(jīng)證實GSK3在II型糖尿病的肌肉細(xì)胞中被過表達(dá)，并且在骨骼肌GSK3活性和胰島素作用之間存在逆相關(guān)[25]。
因此，GSK3的抑制在治療糖尿病尤其是II型糖尿病以及糖尿病神經(jīng)病變中有治療意義。
值得注意的是，已知GSK3磷酸化除GS以外的許多底物，并因此參與多種生化通路的調(diào)節(jié)。例如，GSK在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中高表達(dá)。
因此，本發(fā)明另一方面涉及式I的化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療CNS疾病例如神經(jīng)退行性疾病的藥物中的用途。
優(yōu)選地，所述的CNS疾病為阿耳茨海默氏病。
Tau為參與阿耳茨海默氏病的病因?qū)W的GSK-3底物。在健康的神經(jīng)細(xì)胞中，Tau與微管蛋白共聚成微管。但是，在阿耳茨海默氏病中，tau形成了大的絲狀纏結(jié)，破壞了神經(jīng)細(xì)胞中的微管結(jié)構(gòu)，從而損壞營養(yǎng)的傳輸以及神經(jīng)信息的傳遞。
盡管不希望被理論所束縛，GSK3抑制劑被認(rèn)為能預(yù)防和/或逆轉(zhuǎn)微管-相關(guān)蛋白tau的異常高度磷酸化，后者是阿耳茨海默氏病以及許多其它的神經(jīng)退行性疾病如進(jìn)行性核上性麻痹、皮質(zhì)基質(zhì)變性以及皮克氏病的不變特征。tau基因中的突變引起額顳癡呆(fronto-temporal dementia)的遺傳形式，進(jìn)一步支持tau蛋白功能障礙與神經(jīng)退行性變化之間的關(guān)系[26]。
本發(fā)明另一方面涉及式I的化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療雙相性精神障礙(bipolar disorder)的藥物中的用途。
另一方面，本發(fā)明涉及式I的化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療中風(fēng)的藥物中的用途。
降低神經(jīng)元細(xì)胞凋亡是頭外傷、中風(fēng)、癲癇癥以及運(yùn)動神經(jīng)元疾病中的一個重要的治療目標(biāo)[27]。因此，作為神經(jīng)元細(xì)胞中的促細(xì)胞凋亡因子，GSK3使該蛋白激酶成為設(shè)計用于治療這些疾病的抑制性藥物中有吸引力的治療靶標(biāo)。
本發(fā)明另一方面涉及式Ia的化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療脫發(fā)癥(alopecia)的藥物中的用途。
毛發(fā)生長受Wnt信號通路尤其是Wnt-3信號通路的控制。在皮膚的組織培養(yǎng)模型體系中，β-聯(lián)蛋白(catenin)的不可降解的突變體的表達(dá)導(dǎo)致推定的干細(xì)胞的數(shù)量顯著增加，所述干細(xì)胞具有更大的增殖活性(proliferativepotential)[28]。這種干細(xì)胞群體表達(dá)高水平的非-鈣粘蛋白-相關(guān)的β-聯(lián)蛋白[29]，其可促進(jìn)高的增殖活性。此外，皮膚中過量表達(dá)截短的β-聯(lián)蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生全新的發(fā)-囊形態(tài)發(fā)生，正常情況下只在胚胎形成中才發(fā)生。因此，GSK3抑制劑的異位使用可用于治療光禿并可用于化療誘導(dǎo)的脫發(fā)癥的頭發(fā)生長的恢復(fù)。
本發(fā)明另一方面涉及一種治療GSK3-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要該治療的患者以足以抑制GSK3的量給藥如上定義的式Ia的化合物或其可藥用鹽。
優(yōu)選地，式I的化合物或其可藥用鹽，以足以抑制GSK3β的量給藥。
在本發(fā)明的一個實施方案中，式I的化合物以足以抑制至少一種PLK酶的量給藥。
polo樣激酶(PLKs)由絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族組成。在polo位點的有絲分裂果蠅melanogaster突變顯示出紡錘體異常[30]，并且發(fā)現(xiàn)polo編碼有絲分裂激酶[31]。在人體中，存在三種高度相關(guān)的PLKs[32]。它們包含高度同源的氨基-端催化性激酶結(jié)構(gòu)域并且其羧基端包含兩個或三個保守區(qū)域，polo盒。目前不完全了解polo盒的功能，但是其參與將PLKs靶向亞細(xì)胞區(qū)[33，34]、調(diào)節(jié)與其它蛋白的相互作用[35]或可構(gòu)成自調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域部分[36]。此外，polo盒-依賴性PLK1活性對正確的中期/后期轉(zhuǎn)換以及胞質(zhì)分裂是必須的[37，38]。
研究表明人PLKs調(diào)節(jié)有絲分裂的一些基本方面[39，40]。具體地，認(rèn)為PLK1活性對G2后期/前期早期中的中心體的功能性成熟以及隨后的雙極紡錘體的形成是必需的。通過小的干擾RNA(siRNA)技術(shù)消耗細(xì)胞內(nèi)PLK1已經(jīng)證實，該蛋白對多重有絲分裂過程以及胞質(zhì)分裂的完成是必需的[41]。
在本發(fā)明更優(yōu)選的實施方案中，式I的化合物以足以抑制PLK1的量給藥。
在三種人PLK中，PLK1得到最好的表征；其調(diào)節(jié)多種細(xì)胞裂分周期活性(cell division cycle effect)，包括有絲分裂的起始[42，43]、DNA-損害關(guān)卡激活[44，45]、后期促進(jìn)復(fù)合物的調(diào)節(jié)[46-48]、蛋白酶體的磷酸化[49]以及中心體的復(fù)制以及成熟[50]。
具體地，有絲分裂的啟動要求活化M-期促進(jìn)因子(MPF)，細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CDK1和B-型細(xì)胞周期蛋白之間的復(fù)合物[51]。后者在細(xì)胞周期的S和G2期聚集，并由WEE1、MIK1和MYT1激酶促進(jìn)對MPF復(fù)合物的磷酸化抑制作用。在G2期末期，由雙重-特異性磷酸酶CDC25C導(dǎo)致的相應(yīng)脫磷酸作用引發(fā)MPF的活化[52]。在分裂間期，細(xì)胞周期蛋白B定位至細(xì)胞質(zhì)[53]，然后在前期磷酸化并且該事件引起核易位[54，55]。在前期的活性MPF的核聚集被認(rèn)為對啟動M-期事件是重要的[56]。但是，由于WEE1，核MPF保持無活性，除非被CDC25C抵消。磷酸酶CDC25C自身在分裂間期定位至細(xì)胞質(zhì)，并在前期在核中聚集[57-59]。周期蛋白B[60]和CDC25C[61]二者的核進(jìn)入可被PLK1的磷酸化促進(jìn)[43]。這種激酶是M-期啟動的重要調(diào)節(jié)因子。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，式I的化合物為PLK1的ATP-拮抗抑制劑。
在本發(fā)明中，ATP拮抗性指通過削弱或破壞ATP結(jié)合的方式可逆地或不可逆地在酶活性位點結(jié)合，抑制劑化合物減少或防止PLK催化活性，即從ATP磷酸轉(zhuǎn)移至大分子PLK底物的能力。
在另一優(yōu)選的實施方案中，式I的化合物以足以抑制PLK2和/或PLK3的量給藥。
哺乳動物PLK2(也稱為SNK)和PLK3(也稱為PRK和FNK)最初顯示為直接的早期基因產(chǎn)物。PLK3激酶活性似乎在S后期和G2期達(dá)到高峰。其也在DNA損害關(guān)卡活化以及嚴(yán)重的氧化應(yīng)激期間活化。PLK3也在細(xì)胞中微管動力學(xué)和中心體功能的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，并且PLK3表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡[62]。PLK2是三種PLKs中了解最少的。PLK2和PLK3二者可能還具有其它重要的有絲分裂后功能[35]。
藥物組合物本發(fā)明的其它方面涉及一種藥物組合物，包括如上定義的式I化合物與一種或多種可藥用稀釋劑、賦形劑或載體混合。盡管本發(fā)明的化合物(包括其可藥用鹽、酯以及可藥用溶劑合物)可單獨(dú)給藥，通常它們與可藥用載體、賦形劑或稀釋劑一起給藥，尤其是用于對人治療的時候。藥物組合物可用于人和獸醫(yī)中人或動物使用。
本發(fā)明所述的各種不同形式的藥物組合物的合適賦形劑的實例可見于“Handbook of Pharmaceutical Excipients，2ndEdition，(1994)，由A Wade和PJWeller編著。
治療用途的可接受的載體或稀釋劑是制藥領(lǐng)域中公知的，例如描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)中。
合適的載體的實例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨醇等。合適的稀釋劑的實例包括乙醇、甘油和水。
藥用載體、賦形劑或稀釋劑可根據(jù)將要使用的給藥途徑以及標(biāo)準(zhǔn)的制藥規(guī)范進(jìn)行選擇。藥物組合物可包含作為或除了載體、賦形劑或稀釋劑以外的任何合適的粘合劑、潤滑劑、助懸劑、包衣劑、助溶劑。
合適的粘合劑的實例包括淀粉、明膠、天然糖類如葡萄糖、無水乳糖、自由流動的乳糖、β-乳糖、玉米甜料、天然和合成的樹膠，如阿拉伯樹膠、黃蓍樹膠或藻酸鈉、羧基甲基纖維素和聚乙二醇。
合適的潤滑劑的實例包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。
防腐劑、穩(wěn)定劑、染料以及甚至調(diào)味劑可提供在本發(fā)明的藥物組合物中。防腐劑的實例包括苯甲酸鈉、山梨酸以及對羥基苯甲酸的酯類。也可使用抗氧化劑以及助懸劑。
鹽/酯式I的化合物可以鹽或酯，尤其是可藥用的鹽或酯的形式提供。
本發(fā)明化合物的可藥用鹽包括它們合適的酸加成鹽或堿加成鹽。合適的可藥用鹽的評論可參見Berge等人的J.Pharm Sci，66，1-19(1977)。例如，鹽為與以下酸形成的鹽無機(jī)強(qiáng)酸，如礦物酸，例如硫酸、磷酸或氫鹵酸；強(qiáng)有機(jī)羧酸，如未取代或取代(如被鹵代)的1至4個碳原子的鏈烷羧酸，例如乙酸；飽和或不飽和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或?qū)Ρ蕉姿?；羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或有機(jī)磺酸，如未取代或取代(如被鹵代)的(C1-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如甲磺酸或?qū)妆交撬帷?br> 取決于被酯化的官能團(tuán)，使用有機(jī)酸或醇/氫氧化物形成酯。有機(jī)酸包括羧酸，如未取代或取代(如被鹵代)的1至12個碳原子的鏈烷羧酸，例如乙酸；飽和或不飽和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或?qū)Ρ蕉姿?；羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或有機(jī)磺酸，如未取代或取代(如被鹵代)的(C1-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如甲磺酸或?qū)妆交撬?。合適的氫氧化物包括無機(jī)氫氧化物，如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁。醇包括未取代或取代(如被鹵代)的1至12個碳原子的鏈烷醇。
對映異構(gòu)體/互變異構(gòu)體在前述的本發(fā)明的所有方面中，本發(fā)明還適當(dāng)?shù)匕ㄊ絀的化合物的全部對映異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能認(rèn)識到具有光學(xué)性質(zhì)(一個或多個手性碳原子)或互變異構(gòu)特征的化合物。可通過本領(lǐng)域中已知的方法分離/制備相應(yīng)的對映異構(gòu)體和/或互變異構(gòu)體。
立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體一些本發(fā)明的化合物可以立體異構(gòu)體和/或幾何異構(gòu)體的形式存在，例如其可具有一個或多個不對稱和/或幾何中心，并因此可以二種或多種立體異構(gòu)和/或幾何形式存在。本發(fā)明包括這些活性成分的所有單獨(dú)立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體及其混合物的使用。權(quán)利要求中使用的術(shù)語包括這些形式，只要所述形式保留適當(dāng)?shù)墓δ芑钚?但不必到相同程度)。
本發(fā)明還包括活性成分或其可藥用鹽的所有合適同位素變體。本發(fā)明藥物或其可藥用鹽的同位素變體定義為其中至少一個原子被具有相同原子序數(shù)但原子質(zhì)量與自然界中通常發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量不同的原子取代的物質(zhì)。可被摻入到藥物和其可藥用鹽的同位素的例子包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分別如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。本發(fā)明的藥物和其可藥用鹽的一些同位素變體，例如結(jié)合放射性同位素如3H或14C的那些化合物，在藥物和/或底物組織分布研究中是有用的。含氚的即3H和碳-14即14C同位素因其容易制備和可檢測性而特別優(yōu)選。此外，用同位素如氘即2H的取代可因較大的代謝穩(wěn)定性而提供特定的治療益處，例如體內(nèi)半衰期增加或劑量要求降低，并因此可在一些情況下是優(yōu)選的。通?？墒褂煤线m試劑的適當(dāng)同位素變體，通過常規(guī)過程制備本發(fā)明藥物和其可藥用鹽的同位素變體。
溶劑合物本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的溶劑合物形式。權(quán)利要求中使用的術(shù)語包括這些形式。
多晶型物本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物的各種結(jié)晶形式、多晶型形式和無水(水合)形式。眾所周知，在藥物工業(yè)中可通過稍微改變這種化合物合成制備中所用溶劑的純化方法和或分離形式來分離得到化合物的任意這類形式。
前體藥物本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的前體藥物形式。這種前體藥物通常為一個或多個適當(dāng)基團(tuán)已被修飾以使在對人或哺乳動物對象給藥后所述的修飾可被逆轉(zhuǎn)的式I的化合物。雖然為了實現(xiàn)體內(nèi)逆轉(zhuǎn)可與這種前體藥物一起給藥第二種藥物，但通常通過在這類對象中天然存在的酶實現(xiàn)這種逆轉(zhuǎn)。這類修飾的例子包括酯(例如上述那些中的任一種)，其中可通過酯酶等進(jìn)行逆轉(zhuǎn)。其它這類系統(tǒng)為本領(lǐng)域中那些技術(shù)人員所熟知。
給藥可使本發(fā)明的藥物組合物適于口服、直腸、陰道、腸胃外、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、支氣管內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻、口腔或舌下給藥途徑。
對于口服給藥，特別利用壓縮片劑、藥丸、片劑、凝膠劑(gellules)、滴劑和膠囊劑。優(yōu)選地，這些組合物每劑包含1-250mg的有效成分，更優(yōu)選包含10-100mg的有效成分。
其它給藥形式包括溶液劑或乳劑，它們可經(jīng)靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)給藥，并由無菌或可滅菌溶液制備。本發(fā)明的藥物組合物還可為栓劑、陰道栓劑、混懸劑、乳劑、洗劑、軟膏、乳膏劑、凝膠、噴霧劑、溶液劑或撲粉(dusting powder)的形式。
經(jīng)皮給藥的替代方式是利用透皮貼片(skin patch)。例如，可將有效成分摻入到由聚乙二醇含水乳液或液體石蠟組成的乳膏劑內(nèi)。還可以1-10wt％的濃度將有效成分摻入到由白蠟或白色軟石蠟基質(zhì)與所需要的穩(wěn)定劑和防腐劑共同組成的軟膏內(nèi)。
可注射形式每劑可包含10-1000mg的有效成分，優(yōu)選10-250mg的有效成分。
組合物可被配制成單位劑型，即包含單位劑量或單位劑量的多重單位或亞單位的形式的離散部分。
劑量本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員無需過度試驗就可容易地確定對患者給藥的本發(fā)明組合物的適宜劑量。通常，醫(yī)師會確定對個體患者最適合的實際劑量，并且根據(jù)多種因素包括使用的具體化合物的活性、化合物的代謝穩(wěn)定性以及作用時間的長短、病人的年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥的方式以及時間、排泄速率、藥物組合以及具體疾病的嚴(yán)重程度以及接受治療的個體進(jìn)行調(diào)整。本文公開的劑量為一般情況的示例。當(dāng)然也可有有益的較高或較低劑量范圍個別情況，這都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
根據(jù)需要，可以以0.01-30mg/kg體重，如0.1-10mg/kg體重，更優(yōu)選0.1-1mg/kg體重的劑量給藥所述藥物。
在示例性的實施方案中，對病人施用一或多劑10～150mg/天。
聯(lián)合給藥在特別優(yōu)選的實施方案中，一或多種本發(fā)明的化合物與一或多種其它的治療活性劑(例如，市場上提供的現(xiàn)有藥物)聯(lián)合給藥。在這種情況下，本發(fā)明的化合物可連續(xù)地、同時地或先后地與一或多種活性劑組合給藥。
例如，已知抗癌癥藥通常在聯(lián)合使用的時候更有效。尤其地，為避免主要毒性作用、作用機(jī)制以及耐藥機(jī)制的重疊，聯(lián)合療法是理想的。此外，也可以以最大耐受劑量并在這些劑量之間以最小的時間間隔給藥大多數(shù)藥物也是理想地。化學(xué)治療藥物聯(lián)合的主要優(yōu)勢在于可能通過生化相互作用促進(jìn)加和的或可能的協(xié)同作用，并且也可能降低在早期腫瘤細(xì)胞中的耐藥性的出現(xiàn)，后者響應(yīng)于用單藥進(jìn)行的初始化療。生化相互作用在選擇藥物組合時的用途的實例通過下述事實得到證實施用亞葉酸增加5-氟尿嘧啶的活性細(xì)胞內(nèi)代謝物對其靶標(biāo)胸苷酸合酶的結(jié)合，從而增加其細(xì)胞毒性活性。
許多聯(lián)合藥物目前已經(jīng)用于癌癥和白血病的治療中。醫(yī)學(xué)實踐的更廣泛的綜述可見“Oncologic Therapies”，由E.E.Vokes和H.M.Golomb編著，由Springer出版。
通過研究受試化合物與已知的或認(rèn)為在最初治療具體的癌癥中或衍生自癌癥的細(xì)胞系中有價值的化合物的抑制活性，從而可建議有利的組合。這種方法也可用于測定施用藥物的順序，即，之前、同時或之后。所述的給藥方案可為這里鑒別的所有細(xì)胞周期作用藥物的特征。
測定本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明的化合物在用于鑒別其它的候選化合物的測定中的用途，所述候選化合物能抑制一或多種蛋白激酶的活性。
優(yōu)選地，所述的測定為競爭性結(jié)合測定。
更優(yōu)選地，競爭性結(jié)合測定包括將本發(fā)明的化合物與蛋白激酶以及候選化合物接觸并檢測本發(fā)明的化合物和蛋白激酶之間的相互作用中的任何變化。
本發(fā)明一方面涉及一種方法，包括下述步驟(a)進(jìn)行上述的測定方法；(b)鑒別一或多種能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；以及(c)制備一定量的所述一或多種配體。
本發(fā)明另一方面提供了一種方法，包括下述步驟(a)進(jìn)行上述的測定方法；(b)鑒別一或多種能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；以及(c)制備包括所述的一或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面涉及一種方法，包括下述步驟(a)進(jìn)行上述的測定方法；(b)鑒別一或多種能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；以及(c)修飾一或多種所述的能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；(d)進(jìn)行上述的測定方法；(e)任選地制備包括所述的一或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及利用上述方法鑒定的配體。
本發(fā)明另一方面還涉及包括利用上述方法鑒定的配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面涉及利用上述方法鑒定的配體在制備用于治療增生性疾病、病毒性疾病、CNS疾病、中風(fēng)、脫發(fā)癥和糖尿病的藥物組合物中的用途。
優(yōu)選地，所述的候選化合物是通過對本發(fā)明化合物進(jìn)行常規(guī)SAR修飾而產(chǎn)生。
這里所用的術(shù)語“常規(guī)SAR修飾”指通過化學(xué)衍生化改變給定的化合物的本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法。
上述方法可用于篩選用作一或多種蛋白激酶抑制劑的配體。
合成噻唑胺、醇類和硫醇(方案1，IIa，X分別為NH、O和S)能夠以不同互變異構(gòu)體形式存在(D.Kikelj et al.，2002，Science of Synthesis，11，630)。在所有這三種情況下，介離子形式IIc通常不重要。噻唑-2-胺(X＝NH)在溶液中僅能以氨基形式IIa存在，而不是以亞氨基形式IIb存在。另一方面，噻唑-2-醇(X＝O)(S.P.Cornwell et al.，1981，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2340)和噻唑-2-硫醇(X＝S)有利于2-氧代和2-硫酮形式IIb。
方案1本發(fā)明的5-(2-氨基-嘧啶-4-基)-3H-噻唑-2-酮I能夠由本領(lǐng)域公知的方法制備。一些合適的方法示于方案2中。
方案2
間接地利用硫氰酸酯IV(R.G.Guy，1977，In Chem.Cyanates Their ThioDeriv.，Vol.2，S.Patai，ed.，pp.819-886，Wiley，Chichester，Engl.)或直接利用硫代氨基甲酸酯V(J.J.D’Amico et al.，1986，J.Heterocycl.Chem.23，641)，可將鹵代-二酮III轉(zhuǎn)化為N-未取代的5-?；?噻唑酮VI。取決于反應(yīng)條件，3H-噻唑-2-酮VI的烷基化可產(chǎn)生N-烷基化的產(chǎn)物VIII或O-烷基化的噻唑IX。因此，例如用重氮甲烷對3H-噻唑-2-酮進(jìn)行甲基化得到N-甲基化產(chǎn)物(即，3-甲基-3H-噻唑-2-酮)和O-甲基化產(chǎn)物(即，2-甲氧基-噻唑)的混合物(G.Kleinet al.，1954，Helv.Chim.Acta，37，2057)。另-方面，用三甲氧鎓四氟硼酸鹽對3H-噻唑-2-酮進(jìn)行甲基化唯-地得到O-甲基化的噻唑產(chǎn)物(E.F.Atkins etal.，1994，Tetrahedron，50，7253)。N-未取代的3H-噻唑-2-酮的O-烷基化是規(guī)則的例外(T.Nishiwaki et al.，1981，Heterocycles，16，595)，然而在堿性條件下用烷基鹵化物處理3H-噻唑-2-酮通常僅得到N-烷基化的產(chǎn)物(R.Dahlbom，1960，.Acta Chem.Scand.，14，211)。N-烷基化的產(chǎn)物VIII也可以通過與N-取代的硫代氨基甲酸酯VII反應(yīng)，由鹵代-二酮III明確而直接地制備(S.P.Cornwell et al.，1981，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2340)。N-取代的硫代氨基甲酸酯可通過，例如用碳酰硫(carbonyl sulfide)對胺進(jìn)行硫代氨甲?；苽?Y.Gelernt et al.，1974，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2610)。
將酮VIII轉(zhuǎn)化為烯胺酮(enaminone)，例如用N，N’-二甲基甲酰胺二甲基縮醛轉(zhuǎn)化為X，得到適用于下述與胍XI進(jìn)行嘧啶環(huán)縮合反應(yīng)的中間物(J.Zimmermann et al.，1996，Arch.Pharm.Pharm.Med.Chem.，329，371)。烯胺酮X(R1＝Me)也可以通過用N，N’-二甲基甲酰胺二甲基縮醛直接處理VI而獲得，N，N’-二甲基甲酰胺二甲基縮醛也產(chǎn)生N-甲基化?；蛘?，當(dāng)用叔丁氧基-雙(二甲氨基)甲烷處理VI時，也獲得N-未取代的烯胺酮X(R1＝H)(H.Bredereck et al.，1964，Chem.Ber.，97，3397)。胍XI也可通過氨腈或它的一些衍生物的反應(yīng)來制備(A.R.Katritzky et al.，1995，Synth.Commun.，25，1173)。
使用以上所述的和實施例中詳細(xì)描述的方法制備表1中示出的化合物。
本發(fā)明的另一方面涉及制備權(quán)利要求1中限定的式I的化合物的方法，所述方法包括使式X的化合物和式XI的化合物反應(yīng)，生成式I的化合物。
優(yōu)選地，所述式X的化合物由以下步驟制備(A)(i)使式III的化合物和式VIII的化合物反應(yīng)，生成式VIII的化合物；(ii)將所述式VIII的化合物轉(zhuǎn)化為式X的化合物； 或者(B)(i)使式III的化合物與式IV的化合物反應(yīng)，生成式VI的化合物；(ii)將所述式VI的化合物轉(zhuǎn)化為式VIII的化合物；以及(iii)將所述式VIII的化合物轉(zhuǎn)化為式X的化合物； 或者(C)(i)使式III的化合物與式IV的化合物反應(yīng)，生成式VI的化合物；(ii)將所述式VI的化合物轉(zhuǎn)化為式X的化合物。
將借助于實施例，以及參考附圖，進(jìn)一步描述本發(fā)明，其中


圖1顯示了晶體形式的化合物2的分子結(jié)構(gòu)。橢圓圍繞50％的概率表面，氫原子畫成任意半徑的圓。該圖是用SHELXTL描繪的。
圖2顯示了化合物2的晶體結(jié)構(gòu)中的氫鍵形成。
實施例概述使用Varian INOVA-500儀器獲得NMR光譜?；瘜W(xué)位移相對于四甲基硅烷內(nèi)標(biāo)物以百萬分率(ppm)給出。利用電噴霧離子化(ESI)，使用WatersZQ2000單四極質(zhì)譜儀獲得質(zhì)譜。分別使用Vydac 218TP54(250×4.6mm)和218TP1022(250×22mm)柱，進(jìn)行分析和制備性RP-HPLC。使用H2O/MeCN系統(tǒng)(含有0.1％CF3COOH)，以1mL/分鐘(分析柱)和9mL/分鐘(制備柱)的流動速率進(jìn)行線性梯度洗脫。通過對色譜圖進(jìn)行積分(λ＝254nm)，以評價純度。硅膠(EM Kieselgel 60，0.040-0.063mm，Merck)或ISOLUTE預(yù)填充柱(Jones Chromatography Ltd.UK)用于快速色譜。
實施例15-乙?；?3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮將N-甲基硫代-氨基甲酸甲基銨(13.1g，0.105mol；由甲胺和上述碳酰硫制備，Y.Gelernt et al.1974，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2610)部分溶解于MeOH(150mL)中。在室溫下滴加3-氯-戊烷-2，4-二酮(14.9mL，0.125mol)，逐漸放熱至40℃。于室溫下攪拌1小時后，真空除去溶劑。殘余物用H2O(50mL)處理，并用CH2Cl2(3×50mL)萃取。洗滌(鹽水)合并的有機(jī)部分，干燥(Na2SO4)，過濾，真空蒸發(fā)，得到琥珀色的油狀物。進(jìn)行色譜純化(300g SiO2，用1∶1庚烷/Et2O洗脫)得到非環(huán)狀的加成物，然后用Et2O洗脫得到標(biāo)題產(chǎn)物，從EtOH中重結(jié)晶，得到無色的針狀物(14.2g)。1H-NMR(CDCl3)δ2.34(s，3H)，2.59(s，3H)，3.33(s，3H)。IR(ATR)1655和1621cm-1(CO str)。
5-(3-二甲氨基-丙烯酰基)-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮在干燥的氬氣吹過的燒瓶中，混合5-乙?；?3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(4.64g，27.10mmol)和二甲基甲酰胺二甲基縮醛(8.4mL，59.62mmol)，然后在100℃加熱3小時。冷卻混合物，產(chǎn)生一些沉淀，添加等體積的Et2O增加沉淀的析出。過濾生成的橙色固體，并用Et2O洗滌，得到2.73g標(biāo)題產(chǎn)物。1H-NMR(d6-DMSO)δ2.52(s，3H)，2.82(bs，3H)，3.11(bs，3H)，3.22(s，3H)，5.10(d，1H，J＝12.2Hz)，7.61(d，1H，J＝11.7Hz)。IR(ATR)1669和1630cm-1(CO str)。
實施例25-乙酰基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮在冰浴中冷卻硫氰酸鉀(5.67g，58mmol)的Me2CO(45mL)溶液，并滴加3-氯-戊烷-2，4-二酮(6.95mL，58mmol)。將混合物升溫至室溫，并攪拌6小時。在蒸發(fā)干燥后，將殘余物溶解于EtOH(30mL)中，并加入濃HCl水溶液(15mL)。加熱回流該混合物14小時。在冷卻后，對其濃縮，并過濾生成的沉淀物，依次用冷MeOH和Et2O洗滌，得到標(biāo)題化合物，為棕褐色固體(9.1g，100％)mp 208-211℃。分析型RP-HPLCtR6.5分鐘(20分鐘期限內(nèi)10-70％MeCN，純度100％)。1H-NMR(CDCl3)δ2.33(s，3H，CH3)，2.38(s，3H，CH3)，11.9(s，1H，NH)。13C-NMR(DMSO-d6)δ15.06，29.94，115.53，142.99，170.92，189.91.FTIR3094，2850，1669，1622，1579cm-1。MS(ESI+)m/z155.77(M+H)+。Anal.(C6H7NO2S)C，H，N。
5-乙?；?3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮將KOH(1.476g，26.31mmol)加至5-乙?；?4-甲基-3H-噻唑-2-酮(4.134g，26.31mmol)的DMSO(10mL)溶液中，并在室溫攪拌30分鐘。加入碘乙烷(2.525mL，31.57mmol)，攪拌生成的混合物72小時。將反應(yīng)混合物從H2O(30mL)萃取至CH2Cl2(5×30mL)中，用MgSO4干燥合并的有機(jī)層，然后使其經(jīng)過短的硅膠柱。集中所需部分，得到標(biāo)題化合物(3.104g，64％)。
5-(3-二甲氨基-丙烯?；?-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮合并5-乙酰基-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮(3.10g，16.75mmol)和二甲基甲酰胺二甲基縮醛(2.226mL)，并于85℃加熱8小時。真空除去過量的縮醛，得到深色殘余物。用含有1％MeOH的Et2O處理該殘余物，得到標(biāo)題化合物，為黃色晶體(1.131g，30％)。
實施例35-(3-二甲氨基-丙烯?；?-4-甲基-3H-噻唑-2-酮合并5-乙?；?4-甲基-3H-噻唑-2-酮(0.5g，3.18mmol)和叔丁氧基雙(二甲氨基)甲烷(Bredereck試劑；2.226mL，0.477mmol)，并于80℃加熱4小時。減壓下除去過量溶劑，得到深色殘余物。用EtOAc處理該殘余物，過濾收集，得到標(biāo)題化合物，為固體產(chǎn)物(0.074g，11％)。分析型RP-HPLCtR10.5分鐘(20分鐘期限內(nèi)0-60％MeCN)。1H-NMR(DMSO-d6)δ2.33(3H，s，CH3)，2.70(3H，s，NCH3)，3.09(3H，s，NCH3)，5.07(1H，d，CH，J＝12.0)，7.55(1H，d，J＝12.0，CH)，11.23(1H，s，NH)。MS(ESI+)m/z 213.44(M+H)+。
實施例43-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮(33)。在2-甲氧基乙醇(4mL)中合并5-(3-二甲氨基-丙烯酰基)-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮(80mg，0.333mmol)、N-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胍硝酸鹽(76mg，0.333mmol)和K2CO3(185mg，1.332mmol)，并于120℃加熱該混合物22小時。冷卻后，過濾出無機(jī)物，濃縮濾出物至干。初產(chǎn)物用硅膠色譜純化。集中所需部分，得到標(biāo)題化合物(45mg，39％)。
13C-NMR(d6-DMSO)δ14.5，14.7，37.3，53.7，109.0，110.3，128.4，131.82，132.4，137.8，138.4，152.7，159.5，160.3，164.7，170.1。其余的分析數(shù)據(jù)見表1。
類似地，通過縮合烯胺酮(如實施例1-4中所述而制備的)和合適的芳族胍鹽(通過以常規(guī)方式胍基化(guanylation)相應(yīng)芳族胺而制備的)，制備表1中其余的化合物。所制備的實施例化合物的分析數(shù)據(jù)列于表1中。
實施例5形成表1中化合物的酸加成鹽的典型方法如下于120℃，加熱嘧啶堿(3mmol)在正丁醇(100mL)中的懸浮液，并加入酸。形成透明的溶液，接著在～10分鐘內(nèi)形成沉淀。然后，使反應(yīng)混合物冷卻至室溫。加入乙醚(100mL)，過濾出沉淀物。從熱甲醇中重結(jié)晶，得到所需的鹽。
3，4-二甲基-5-[2-(4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮的雙(甲磺酸)鹽(38)黃色固體。分析型RP-HPLCtR＝11.4分鐘(0-60％MeCN，純度100％)。1H-NMR(D2O)δ2.09(s，3H，CH3)，2.69(s，6H，CH3)，2.87(s，3H，CH3)，3.28-3.32(m，8H，CH2)，6.58(m，1H，嘧啶基-H)，6.85(d，2H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.14(d，2H，J＝8.5Hz，Ph-H)，7.74(d，1H，J＝6.5Hz，嘧啶基-H)。13C-NMR(D2O)δ15.28，30.46，43.44，46.83，108.06，110.17，117.39，122.51，132.30，141.99，146.53，154.51，157.02，160.79和170.40。元素分析實驗值C43.55，H 5.26，N 14.50(C19H22N6OS.2CH4O3S的理論值C43.89，H 5.26，N14.62)。
3，4-二甲基-5-[2-(4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮的雙(草酸)鹽(38)黃色固體。分析型RP-HPLCtR＝11.6分鐘(0-60％MeCN，純度100％)。1H-NMR(DMSO-D6)δ2.54(s，3H，CH3)，3.16(s，3H，CH3)，3.27-3.29(m，8H，CH2)，6.88(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，6.95(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，7.64(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，8.38(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，9.42(s，1H，NH)。
13C-NMR(D2O)δ14.91，30.25，43.68，47.37，108.40，110.71，117.18，121.02，133.99，138.31，145.96，158.38，159.20，160.28，165.37，170.48。
C19H22N6OS.2C2H4O8的理論值C 19.11，H 4.66，N 14.94；實驗值C 49.91，H 5.14，N 15.49。
實施例6結(jié)晶將化合物2(表1)溶解于最少容量的沸騰的2-甲氧基乙醇中。過濾該熱溶液，冷卻濾出物，并在室溫靜置3天。形成針狀晶體，并進(jìn)行X射線結(jié)構(gòu)測定。
X-射線結(jié)構(gòu)測定在惰性全氟聚醚油中，從結(jié)晶母液中的一個塊上切割晶體，并放置在Bruker Smart Apex衍射儀上，所述衍射儀配備有在150K操作的OxfordCryosystems低溫設(shè)備。從其X射線衍射圖中，清楚可知該試樣不是單晶，但是使用兩向矩陣，圖中所有點在三斜晶系單位晶格上編入索引(表3)(R.A.Sparks，2000.GEMINI，Bruker AXS，Madison，Wisc.，USA)。這意味著，該試樣實際上是雙域-非缺面對稱雙晶；該雙晶律相對[100]旋轉(zhuǎn)180°，如下述矩陣表示的1000.402-100.5590-1.]]>以步長0.3°和30秒/圖像收集數(shù)據(jù)范圍。然后，對全部數(shù)據(jù)取平均值，用于結(jié)構(gòu)分析。使用多步掃描程序SADABS(G.M.Sheldrick，2002.SADABSVersion 2.04，University of Gttingen，Germany)進(jìn)行吸收校正。
在Patterson合成(G.M.Sheldrick，2001，SHELXTL Version 6，Universityof Gttingen，Germany)中定位硫原子，以及在最小二乘修正和差值傅立葉圖(least squares refinement and difference Fourier maps)的迭代循環(huán)中定位其它原子(D.J.Watkin et al.2003，CRYSTALS Issue 12，Chemical CrystallographyLaboratory，University of Oxford，England)。在此階段對擬合差的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，證實了從衍射圖中導(dǎo)出了雙晶律(ROTAX，R.I.Cooper et al.2002，J.Appl.Cryst.35，168-174)。隨后，使用Prat，Coyle和Ibers的方法模擬雙晶的形成(C.S.Pratt et al.1971，J.Chem.Soc.2146-2151)。在差值圖中定位氫原子，所述差值圖限定基于C31的甲基的取向，并表明基于C41的甲基在由相對C41-44的180°旋轉(zhuǎn)相關(guān)的兩個取向上是無序的。隨后，將氫原子置于理想的位置，與C41相連的氫原子的重量固定在0.5。對所有非氫原子，模擬它們的各向異性位移參數(shù)。最終的常規(guī)R-因子是0.048；其它晶體、數(shù)據(jù)收集和修正參數(shù)列于表3中。分?jǐn)?shù)原子坐標(biāo)、鍵距、鍵角、各向異性位移參數(shù)和氫原子位置分別列于表4、表5、表6和表7中。
能夠明確地確定化合物2的結(jié)構(gòu)如圖1所示。主要的鍵距和鍵角采用標(biāo)準(zhǔn)值。C3NS環(huán)上C2-N3-C4-C5部分中的鍵距都小于1.40，這意味著在這些原子上π鍵離域。在Cambridge Database(F.H.Allen，2002，Acta Cryst.B58，380-388)中，C(sp2)-S-C(sp2)部分的平均幾何參數(shù)為D(C-S)＝1.75(2)和＜(CSC)＝95(5)°；CYC4281中觀察的值類似。在N12處，還觀察到關(guān)于胺官能的一些π離域，盡管鍵長C10-N12[1.370(3)]和N12-C13[1.414(3)]之間存在明顯的不對稱，并且C10的π鍵大概更重要。形成方法對晶體結(jié)構(gòu)中的堆積方式起著決定性作用，盡管化合物2的二聚物的NH-OH-鍵與晶體學(xué)反轉(zhuǎn)中心相關(guān)(圖1)。氫鍵參數(shù)為H12-O22.00，N12-O22.947(3)，和N12-H12-O2154.3(15)°。
實施例7激酶測定考察上述實施例的化合物抑制多種蛋白激酶的酶活性的能力。這是通過測量來自ATP的放射活性磷酸對適當(dāng)?shù)亩嚯牡孜锏膿饺攵鴮崿F(xiàn)的。制備或通過商業(yè)途徑得到重組蛋白激酶和激酶復(fù)合物。利用96-孔板以及適當(dāng)?shù)姆治鼍彌_液(通常為25mMβ-甘油磷酸，20mM MOPS，5mM EGTA，1mMDTT，1mM Na3VO3，pH7.4)進(jìn)行測定，向其中加入2-4μg活性酶以及適當(dāng)?shù)牡孜?。通過加入Mg/ATP混合物(15mM MgCl2+100μM ATP以及30-50kBq/孔的[γ-32p]-ATP)啟動反應(yīng)，根據(jù)需要在30℃培養(yǎng)混合物。將反應(yīng)在冰上終止，然后濾過p81濾板或GF/C濾板(Whatman Polyfiltronics，Kent，UK)。用75mM正磷酸水溶液洗滌3次后，將板干燥，加入閃爍體并在閃爍計數(shù)器(TopCount，Packard Instruments，Pangbourne，Berks，UK)上測量摻入的放射活性。將激酶測定用的化合物配制成10mM的DMSO儲存液，并用測定緩沖液稀釋成10％DMSO的溶液。利用曲線擬合軟件(GraphPad Prism version3.00for Windows，GraphPad Software，San Diego California USA)分析數(shù)據(jù)以確定IC50值(50％地抑制激酶活性的測試化合物的濃度)。結(jié)果總結(jié)于表8中。
實施例8在新鮮的人PBMCs中進(jìn)行抗HIV活性評價利用臨床兒科HIV株RoJo或WeJo，測試代表性的本發(fā)明化合物在人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)中對HIV-1的抗病毒活性。在促進(jìn)細(xì)胞生存以及HIV復(fù)制的條件下培養(yǎng)PBMCs。測量6-9個log10系列稀釋的100μM化合物的DMSO儲存溶液的抗病毒活性。得到下述參數(shù)IC50和IC90(分別50和90％地抑制病毒復(fù)制的濃度，TC50(50％地減少細(xì)胞存活的濃度)以及TI(治療指數(shù)TC50/IC50)。
從篩選的捐贈血(Interstate Blood Bank，Inc.Memphis，TN)分離出對HIV和HBV呈血清反應(yīng)陰性的新鮮PBMCs。通過低速離心并再懸浮在PBS中，將細(xì)胞沉淀/洗滌2-3次以除去污染的血小板。然后用Dulbecco’s磷酸鹽緩沖液(DPBS)稀釋去除白細(xì)胞的血，并在50mL離心管中的LymphocyteSeparation Medium(LSM；Cellgro，Mediatech，Inc.；密度1.078±0.002g/mL；Cat.#85-072-CL)上形成層，然后離心。輕輕地從形成的界面上吸出帶狀PBMCs，隨后在低速離心下用PBS洗滌。最后一次洗滌后，將細(xì)胞通過臺盼藍(lán)排斥計數(shù)，并再懸浮在補(bǔ)充有胎牛血清(FBS)以及L-谷氨酸、植物凝集素(PHA-P，Sigma)的RPMI 1640中。在37℃培養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng)后，離心PBMCs，并再懸浮在補(bǔ)充有FBS、L-谷氨酸、青霉素、鏈霉素、慶大霉素以及重組人IL-2(R&D Systems，Inc)的RPMI 1640中。IL-2包括在培養(yǎng)基中，從而維持由PHA促有絲分裂的刺激啟動的細(xì)胞分裂。將PBMCs保持在其中，兩周換一次培養(yǎng)基，直至用于測定步驟中。將細(xì)胞培養(yǎng)最多兩周，一旦認(rèn)為太老不適于用于測定就丟棄。由于附著至組織培養(yǎng)瓶，單核細(xì)胞從培養(yǎng)中耗盡。
對于標(biāo)準(zhǔn)的PBMC測定，匯合至少兩名正常供體的PHA-P刺激的細(xì)胞，稀釋并播種至96-孔圓底微量滴定板的內(nèi)部孔中。從多于一個供體匯合得到的單核細(xì)胞用來最小化不同捐贈個體之間的差異，后者源自HIV感染以及初級淋巴細(xì)胞種群對PHA和IL-2的總體響應(yīng)的定量和定性差異。各板包括病毒/細(xì)胞對照孔(細(xì)胞加病毒)、實驗孔(藥物加細(xì)胞加病毒)以及化合物對照孔(藥物加無細(xì)胞的培養(yǎng)基，對于MTS監(jiān)測細(xì)胞病變是必須的)。由于HIV-1對PBMCs而言不會引起細(xì)胞病變，這就允許使用同樣的分析板進(jìn)行抗病毒活性和細(xì)胞毒性測量。在微量滴定管中進(jìn)行測試藥物的稀釋，并且使用標(biāo)準(zhǔn)的形式將各濃度放置在適當(dāng)?shù)目字?。將病毒儲存液的預(yù)定稀釋放置在各測試孔(最終MOI≅0.1]]>)中。感染后，將PBMC培養(yǎng)物在37℃，5％CO2下保持7天。之后，收集無細(xì)胞的上清液樣品用于分析逆轉(zhuǎn)錄酶活性和/或HIVp24含量。取出上清液樣品后，將MTS加入至板中以測定細(xì)胞成活力來測量化合物細(xì)胞毒性。通過顯微鏡檢查各孔并記錄任何異常。
逆轉(zhuǎn)錄酶活性分析利用基于微量滴定板的逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)反應(yīng)(Buckheit等，AIDS Researchand human Retroviruses 7295-302，1991)。氚代的三磷酸胸苷(3H-TTP，80Ci/mmol，NEN)以1∶1dH2O∶乙醇的溶液且活性為1mCi/mL接受。將聚rA∶寡dT模板引物(Pharmacia)制備成儲存溶液，然后分裝并在-20℃凍存。RT反應(yīng)緩沖液在每天使用的基礎(chǔ)上新鮮制備。制備最終的反應(yīng)混合物通過混合3H-TTP、dH2O、聚rA∶寡dT儲存液以及反應(yīng)緩沖液。將該反應(yīng)混合物放置在圓底微量滴定板中并加入含病毒的上清液并混合。在37℃培養(yǎng)該板60分鐘。培養(yǎng)后，將反應(yīng)體積點樣至在磷酸鈉緩沖液或2X SSC(LifeTechnologies)中的DE81過濾墊(filter-mats)(Wallac)中。接著，在蒸餾水、在70％乙醇中洗滌，然后干燥。利用標(biāo)準(zhǔn)的液閃技術(shù)定量摻入的放射活性(每分鐘計數(shù)，CPM)。
結(jié)果根據(jù)上述定義的TI值，發(fā)現(xiàn)下述的本發(fā)明化合物具有抗HIV活性。
高活性(TI≥50)的化合物5-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(14)，3，4-二甲基-5-[2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(19)，5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(22)，5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮(29)，5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(32)，N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-甲磺酰胺(55)，N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-C，C，C-三氟-甲磺酰胺(58)，以及N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-三氟甲基-苯基}-乙酰胺(64)。
活性(5≤TI≤50)化合物5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(2)，3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(11)，5-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(15)，
3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈(16)，3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(21)，3-乙基-4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(23)，3-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮(33)，3，4-二甲基-5-[2-(4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮(38)，N-{4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-乙酰胺(59)，3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酰胺(60)，N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-三氟甲基-苯基}-乙酰胺(64)，和4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-甲氧基-乙基)-苯磺酰胺(65)。
實施例9GSK3β和GSK3α測定兩種同工型的GSK3(α和β)均與糖原合酶活性的調(diào)節(jié)有關(guān)--糖原代謝中的關(guān)鍵酶。通過利用重組人GSK3-α和-β進(jìn)行體外激酶測定，測量實施例化合物的抑制效能；測量的IC50值示于表9中。
設(shè)立10點滴定以確定所選實施例化合物對GSK3β的IC50值。使用96孔微量滴定板進(jìn)行測定，每孔最終體積為25μL。每次測定含有1.5單位的GSK3β(New England Biolabs)、200μM CREB磷酸肽(KRREILSRRPpSYR，Alta Biosciences)、20mM TrisHCl pH7.5、5mM DTT、15mM MgCl2，補(bǔ)充有100μM ATP和0.5μCi的[γ-32P]ATP的±抑制劑的2％DMSO溶液。在30℃進(jìn)行測定30分鐘，然后通過加入等體積的75mM磷酸水溶液停止反應(yīng)。然后，將試樣點樣在p81濾板(Whatman)上，并施加真空。用200μL稀磷酸水溶液洗滌各孔3次，然后加入50μL Microscint 40/孔。在Topcount微板閃爍計數(shù)器(Packard)上測量摻入的放射活性。
嚴(yán)格地如上所述測定GSK3α(Upstate)，不同的是每測定點加入1ng酶。
實施例10DYRK1A測定已經(jīng)提出雙特異性酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)激酶1A(DYRK1A)在其功能中以類似于GSK3的方式起到調(diào)節(jié)糖原代謝的作用。篩選了一些本發(fā)明的實施例化合物的體外抗重組人DYRK1A活性，測量的IC50值示于表9中。根據(jù)目前的認(rèn)識，DYRK1A的抑制對糖原合酶的刺激會具有額外的積極效果。
設(shè)立10點滴定以確定所選實施例化合物對DYRK1A的IC50值。使用96孔微量滴定板進(jìn)行測定，每孔最終體積為25μL。每次測定含有2.3毫單位DYRK1A(Upstate)、50μM Woodtide肽(KKISGRLSPIMTEQ，Upstate)、20mM TrisHCl pH8.0、10mM DTT，5mM EGTA，1mM NaVO3，31mMβ-磷酸甘油酯、15mM MgCl2，補(bǔ)充有100μM ATP和0.5μCi[γ-32P]ATP±抑制劑的2％DMSO溶液。在30℃進(jìn)行測定60分鐘，然后通過加入等體積的75mM磷酸水溶液停止反應(yīng)。然后，將試樣點樣在p81濾板(Whatman)上，并施加真空。用200μL稀磷酸水溶液洗滌各孔3次，然后加入50μL Microscint 40/孔。在Topcount微板閃爍計數(shù)器(Packard)上測量摻入的放射活性。
實施例11脂肪細(xì)胞和肌管的分化在補(bǔ)充有10％胎牛血清(FCS)和青霉素/鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中生長3T3-L1小鼠前-脂肪細(xì)胞，直到完全匯合。通過將0.5mM IBMX(2-異丁基-1-甲基黃嘌呤)、0.25μM地塞米松和1μg/mL胰島素加入生長培養(yǎng)基中，開始細(xì)胞分化。在4天和7天后，更換分化培養(yǎng)基。分化開始后，在DMEM、10％FCS和抗生素中再生長細(xì)胞3天。
從L6.G8.C5成肌細(xì)胞中分化大鼠肌管，在DMEM、10％FCS和抗生素中生長至匯合。然后移去培養(yǎng)基，用PBS和含有最少量eagles基本培養(yǎng)基(α修飾)和補(bǔ)充有2％FCS和抗生素的分化培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞。將細(xì)胞培養(yǎng)3-4天，直到大于90％的細(xì)胞形成多核肌管。然后，使用分化的細(xì)胞測量用GSK3抑制劑實施例化合物處理后的糖原合酶活化。
實施例12
培養(yǎng)細(xì)胞中的糖原合酶活化在10厘米陪替(Petri)培養(yǎng)皿中，用不同濃度的GSK3抑制劑實施例化合物處理HEK293細(xì)胞、小鼠脂肪細(xì)胞和大鼠肌管90分鐘。處理結(jié)束時，在補(bǔ)充有20mM NaF的冰冷卻的PBS緩沖液中洗滌和刮擦細(xì)胞。離心分離沉淀細(xì)胞，并在300μL緩沖液(50mM HEPES pH7.5、10mM EDTA、100mMNaF、5mM DTT、蛋白酶抑制劑混合液(Sigma))中裂解。在冰上培育30分鐘后，離心分離清除試樣。在兩種不同濃度的葡萄糖-6-磷酸酶(低濃度(0.1mM)和高濃度(10mM))的可溶性組分中，測量糖原合酶的活性。進(jìn)行反應(yīng)30分鐘(緩沖液50mM Tris pH7.8、20mM EDTA、25mM NaF，5mM DTT)。反應(yīng)混合物(總體積90μL)含有1％糖原、0.3mM UDP-葡萄糖和0.06μCi14C-UDP-葡萄糖。將70μL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至含有140μL 100％乙醇的GFC96孔濾板中以停止反應(yīng)，使糖原在4℃沉淀1小時。用200μL 66％乙醇洗滌各孔2次，然后進(jìn)行干燥。接著，加入100μL閃煉液體，對板進(jìn)行密封，并在Packard Topcounter中計數(shù)。糖原合酶活化計算為低和高濃度的UDP-葡萄糖中標(biāo)記的14C-UDP-葡萄糖糖原的摻入之比(速度分?jǐn)?shù))。
在HEK293細(xì)胞、小鼠直細(xì)胞和大鼠肌管中測量GSK3抑制劑活化糖原合酶的能力。測量的EC50值和歸一化為40mM LiCl(in％)影響的最大誘導(dǎo)倍數(shù)示于表10中。受試的化合物以EC50值在亞微摩爾(sub-micromolar)至低微摩爾濃度范圍內(nèi)活化所有三個細(xì)胞系統(tǒng)中的糖原合酶。大多數(shù)化合物超過了由40mM LiCl誘發(fā)的刺激(測定中使用的最高化合物濃度為20μM)。
實施例13PEPCK基因表達(dá)測定-qPCR在HEPG2(肝癌)細(xì)胞中研究PEPCK基因表達(dá)，所述細(xì)胞接種在6孔板上，每孔1×107個細(xì)胞。將細(xì)胞血清饑餓20小時，然后在有或沒有胰島素或GSK3抑制劑實施例化合物的情況下用地塞米松/cAMP(PEPCK基因表達(dá)的刺激物)處理。在3小時處理后，收集細(xì)胞，裂解并使用微型RNeasy旋轉(zhuǎn)柱(Quiagen)進(jìn)行RNA提取。對PEPCK基因，使用引物對COD2063/COD2064(350bp)。使用Lightcycler-RNA Master SYBR Green 1Kit進(jìn)行一步法RT-PCR。qPCR分析計算出PCR產(chǎn)物放大至到達(dá)對數(shù)期所需的PCR循環(huán)次數(shù)。利用看家基因-28S-的QPCR進(jìn)行歸一化。
PEPCK是肝臟內(nèi)葡萄糖異生的關(guān)鍵酶，并且已經(jīng)知道通過GSK3的抑制由胰島素負(fù)性調(diào)節(jié)。在有或沒有胰島素或GSK3抑制劑的情況下，在用地塞米松/cAMP(PEPCK基因表達(dá)陽性調(diào)節(jié)劑)處理過的HEPG2細(xì)胞中，研究實施例化合物對PEPCK基因表達(dá)的影響。PEPCK基因轉(zhuǎn)錄的水平表示為地塞米松-誘導(dǎo)刺激的百分比，結(jié)果示于表11中。GSK3的實施例化合物抑制劑有效消除了在HEPG2細(xì)胞中地塞米松/cAMP誘導(dǎo)的PEPCK基因表達(dá)的刺激。一些受試的化合物比胰島素顯著有效。這些結(jié)果表明了GSK3抑制劑在調(diào)節(jié)肝葡萄糖異生中的潛在用途，肝葡萄糖異生是有缺陷的并且促成糖尿病患者的高血糖。
實施例14GSK3抑制劑實施例化合物在雄性ZDF大鼠中對口服葡萄糖耐量的影響對12-13周齡的雄性ZDF fa/fa大鼠，研究本發(fā)明實施例化合物增加葡萄糖代謝的能力。以30mg/kg的量給受試動物(10-15mmol/L空腹葡萄糖水平)給藥，葡萄糖刺激的時間記為0。在-270至180分鐘和0至180分鐘測量AUC，在葡萄糖負(fù)荷30分鐘和60分鐘后，測量受試化合物的血中濃度。結(jié)果示于表12中。觀察到血糖水平降低的趨勢(僅對化合物66和68統(tǒng)計重要)。四種化合物具有一些口服生物利用度(64、66、67和68)，這與葡萄糖AUC適度降低有關(guān)。大多數(shù)血中濃度低于細(xì)胞測定中測量的EC50值。
利用12-13周齡的雄性ZDF fa/fa大鼠，研究實施例化合物對口服葡萄糖耐量的影響。將動物在半隔離條件下單獨(dú)飼養(yǎng)，受控溫度為22±2℃，12/12小時晝/夜循環(huán)；任意取食能量富集的粒狀食物(m Z Ereich；Act.No.V1185-000；ssniffTMSpezialitaeten GmbH，D-59494Soest，Germany)，所述食物含有23％蛋白質(zhì)、6％脂肪、61.7％碳水化合物、3.3％纖維和6％灰末和HCl酸化的自來水。每周記錄三次體重。將受試化合物溶解在10％DMSO、5％Tween、5％Span 20、30％PEG 400和50％水(v/v)的制劑中，得到的最終溶液，濃度為5mg/mL。每組試驗包括7只動物。在16小時過夜禁食后，以30mg/kg的劑量口服給藥受試化合物兩次(在-270分鐘和-30分鐘時)，然后進(jìn)行口服葡萄糖耐量測試(通過喂養(yǎng)管引入40％溶液形式的口服2g葡萄糖/kg)。以類似的方式，僅用媒介物對對照組給藥。在-270、0、15、30、60、90、120和180分鐘取血樣(20μL血液)以測量血糖。將來自尾部靜脈的混合靜脈血收集到20-μL玻璃毛細(xì)管中，將該管放置在裝有溶血用的1mL溶液的標(biāo)準(zhǔn)管中。使用葡萄糖氧化酶方法(Super G Glukosemessgeraet；DrMueller Geraetebau，F(xiàn)reital，Germany)測量葡萄糖水平。此外，在給藥葡萄糖后，在30分鐘和60分鐘時取出50μL血液試樣，置于肝素化的管中，然后立即在液氮中冷凍。使用的生物分析方法利用電噴霧陽離子多步反應(yīng)監(jiān)控模式的等梯度洗脫液相色譜-串連質(zhì)譜分析。
在不偏離本發(fā)明的范圍和精神情形下，描述的本發(fā)明方面的各種改變和變化對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是顯而易見的。盡管本發(fā)明結(jié)合具體的優(yōu)選的實施方案進(jìn)行了描述，應(yīng)該理解為要求保護(hù)的本發(fā)明不應(yīng)該過度地限制到所述的具體的實施方案。實際上，對化學(xué)領(lǐng)域或相關(guān)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言明顯的實施本發(fā)明的多種修飾都包括在下述權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。
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表1示例的化合物。







表2實施例化合物的分析數(shù)據(jù)(參考表1)










a20分鐘期限內(nèi)梯度0-60％MeCN，b20分鐘期限內(nèi)梯度10-70％MeCN，c沒有測量，但是FT-IR(RX-I，Perkin Elmer)3271，3171，3087，2945，2824，1651，1564cm-1。
表3.化合物2的晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)細(xì)化

表4化合物2的原子坐標(biāo)(×104)和當(dāng)量各向同性位移參數(shù)(2×103)。U(eq)定義為正交Uij張量痕跡的1/3。

表5化合物2的鍵長和鍵角


表6化合物2的各向異性位移參數(shù)(2×103)。
各向異性位移系數(shù)指數(shù)采取以下形式-2π2[h2a*2U11+...+2hka*b*U12]。

表7化合物2的氫坐標(biāo)(×104)和各向同性位移參數(shù)(2×103)。

表8實施例化合物(參考表1)對蛋白激酶的抑制作用。
根據(jù)Cheng，Y.-C.；Prusoff，W.H.，Biochem.Pharmacol.1973，22，3099-3108，基于不同激酶的實驗測量的IC50值和Km，ATP計算抑制常數(shù)(Ki)。


表9.實施例化合物的體外GSK3和DYRKIA抑制活性。

表10.HEK293細(xì)胞、小鼠脂肪細(xì)胞和大鼠肌管中的糖原合酶活化

表11.HEPG2細(xì)胞中的PEPCK基因表達(dá)-qPCR測定。

表12.ZDF fa/fa大鼠中實施例化合物對口服葡萄糖耐量的影響。*p＜0.05.

權(quán)利要求
1.式I的化合物，或其可藥用鹽， 其中R1和R5各自獨(dú)立地為H、C(ORj’)或任選被一個或多個R6基團(tuán)取代的烴基；R2、R3和R4各自獨(dú)立地為H、烷基或烯基，各基團(tuán)任選被一個或多個R7基團(tuán)取代；R6和R7各自獨(dú)立地為鹵素、NO2、CN、(CH2)mORa、O(CH2)nORb、(CH2)pNRcRd、CF3、COORe、CONRfRg、CORh、SO3H、SO2Ri、SO2NRjRk、(CH2)qNRa’CORg’、Rf’、(CH2)rNRb’SO2Rh’、SO2NRd’Ri’、SO2NRe’(CH2)sORc’、雜環(huán)烷基或雜芳基，其中所述雜環(huán)烷基和雜芳基可任選被一個或多個選自芳烷基、磺?；m和CORn中的取代基取代；Rg’、Rh’、Ri’和Rj’各自獨(dú)立地選自烷基、芳基、芳烷基和雜芳基，各基團(tuán)可任選被一個或多個選自鹵素、OH、NO2、NH2、CF3和COOH中的取代基取代；m、p、q和r各自獨(dú)立地為0、1、2或3；n和s各自獨(dú)立地為1、2或3；以及Ra-n和Ra’-f’各自獨(dú)立地為H或烷基，前提條件是所述化合物不是式I-XVII的化合物。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R5各自獨(dú)立地為H或C1-20烴基，所述烴基任選地包括至多六個選自N、O和S中的雜原子，且其任選被一個、兩個或三個R6基團(tuán)取代。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中R5為芳基或雜芳基，各基團(tuán)可任選被一個或多個R6基團(tuán)取代。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R5為苯基或吡啶基，各基團(tuán)可任選被一個或多個R6基團(tuán)取代。
5.上述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R1為H或烷基。
6.上述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R2、R3和R4各自獨(dú)立地為H、C1-C6烷基或C2-C6烯基，各基團(tuán)可任選被一個、兩個或三個R7基團(tuán)取代。
7.上述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R6和R7各自獨(dú)立地為F、Cl、Br、I、NO2、CN、OH、OMe、OEt、CH2OH、O(CH2)2OMe、NH2、NHMe、NMe2、CF3、COOH、CONH2、CONHMe、CONMe2、COMe、SO3H、SO2Me、SO2NH2、SO2NHMe、SO2NMe2、嗎啉、哌啶、哌嗪、N-乙?；哙?、N-甲基哌嗪、三唑或四唑。
8.上述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R3和R4均為H，并且R2為Me。
9.上述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中所述化合物為式II的化合物，或其可藥用鹽， 其中R1如上述權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中定義；X為C；或X為N，以及R8不存在；R8、R9、R10和R11各自獨(dú)立地為H或者如R6和R7的定義。
10.權(quán)利要求9的化合物，其中R1為H或烷基；R8為H、NO2、ORp、鹵素、CF3、CN、CORq、烷基、NRrRs、O(CH2)nORt；R9為H、ORu、鹵素、烷基、NRvRw、任選被一個或多個選自Rm和CORn中的取代基取代的雜環(huán)烷基；t為0、1、2或3；R10為H、烷基或NRxRy；以及Rp-y各自獨(dú)立地為H或烷基。
11.上述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R1為H、甲基、乙基或3-甲基丁基。
12.權(quán)利要求10或權(quán)利要求11的化合物，其中R8為H、NO2、OH、Me、I、CF3、CN、CH2OH、CO2H、CO2Me或NH2；R9為H、F、OH、I、Cl、Br、OMe、NMe2、嗎啉、Me、N-甲基哌嗪、N-乙?；哙夯蜻哙海灰约癛10為H、Me或NMe2。
13.權(quán)利要求9的化合物，其中X為N，以及R8不存在。
14.權(quán)利要求9的化合物，其中X為C。
15.上述權(quán)利要求中任一項的化合物，選自下述化合物3，4-二甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-溴-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氟-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-{2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈；5-{2-[4-(4-乙酰基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-3-羥甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(2-甲基-5-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(4-甲基-3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；2-氯-5-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸；2-氯-5-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯；5-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-4-甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-4-甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-二甲氨基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3-(3-甲基-丁基)-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(2-二甲氨基-5-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-[2-(4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-氨基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；4-甲基-5-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-乙酰胺；3-乙基-5-[2-(3-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(3-氯-4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-5-[2-(3-羥基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-{2-[3-(4-乙?；?哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-5-[2-(3-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3-乙基-4-甲基-3H-噻唑-2-酮；3-乙基-4-甲基-5-[2-(4-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；4-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酸；3-[4-(3-乙基-4-甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酸；N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-甲磺酰胺；5-[2-(5-甲氧基-2-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-苯甲酰胺；N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-C，C，C-三氟-甲磺酰胺；N-{4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基}-乙酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-異丙基-4-甲基-苯甲酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-乙基-苯磺酰胺；5-[2-(5-羥甲基-2-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；N-{3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-三氟甲基-苯基}-乙酰胺；4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-甲氧基-乙基)-苯磺酰胺；5-[2-(4-氯-3-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-甲氧基-乙基)-苯磺酰胺；5-[2-(3-溴-5-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-{2-[4-(4-苯甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-三氟甲基-芐腈；5-[2-(3-氨基-5-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-羥基-乙基)-苯磺酰胺；N-苯甲基-4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-異丙基-苯磺酰胺；3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-N-(2-羥基-乙基)-苯磺酰胺；3，4-二甲基-5-[2-(3-甲基氨基-5-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮；N-苯甲基-3-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯磺酰胺；3，4-二甲基-5-{2-[4-甲基-3-(嗎啉-4-磺?；?-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮；3，4-二甲基-5-{2-[3-(嗎啉-4-磺?；?-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(4-氨基甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；5-[2-(6-氯-5-甲基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；吡啶-2-羧酸4-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲基酰胺；3，4-二甲基-5-{2-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮；5-(2-氨基-嘧啶-4-基)-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮；和N-[4-(3，4-二甲基-2-氧代-2，3-二氫-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-乙酰胺。
16.一種藥物組合物，其包括上述權(quán)利要求中任一項的化合物并混合有可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
17.權(quán)利要求1-15中任一項的化合物在制備治療增生性疾病的藥物中的用途。
18.權(quán)利要求17的用途，其中增生性疾病是癌癥或白血病。
19.權(quán)利要求17的用途，其中增生性疾病是腎小球腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或慢性阻塞性肺病。
20.權(quán)利要求1-15中任一項的化合物在制備治療病毒性疾病的藥物中的用途。
21.權(quán)利要求20的用途，其中病毒性疾病選自人巨細(xì)胞病毒(HCMV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)和水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)。
22.權(quán)利要求1-15中任一項的化合物在制備治療CNS疾病的藥物中的用途。
23.權(quán)利要求20的用途，其中CNS疾病為阿耳茨海默氏病或雙相性精神障礙。
24.權(quán)利要求1-15中任一項的化合物在制備治療脫發(fā)癥的藥物中的用途。
25.權(quán)利要求1-15中任一項的化合物在制備治療中風(fēng)的藥物中的用途。
26.權(quán)利要求17-25中任一項的用途，其中所述化合物以足以抑制至少一種PLK酶的量給藥。
27.權(quán)利要求26的用途，其中PLK酶是PLK1。
28.權(quán)利要求17-25中任一項的用途，其中所述化合物以足以抑制至少一種CDK酶的量給藥。
29.權(quán)利要求28的用途，其中CDK酶為CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
30.權(quán)利要求17-25中任一項的用途，其中所述化合物以足以抑制aurora激酶的量給藥。
31.權(quán)利要求1-15中任一項的化合物在制備治療糖尿病的藥物中的用途。
32.權(quán)利要求31的用途，其中糖尿病為II型糖尿病。
33.權(quán)利要求31或32的用途，其中所述化合物以足以抑制GSK的量給藥。
34.權(quán)利要求33的用途，其中所述化合物以足以抑制GSK3β的量給藥。
35.權(quán)利要求1-15中任一項的化合物在用于鑒別其它候選化合物的測定中的用途，所述候選化合物能夠抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶、GSK和PLK酶中的一種或多種。
36.權(quán)利要求35的用途，其中所述測定是競爭性結(jié)合測定。
37.一種制備權(quán)利要求1中限定的式I的化合物的方法，所述方法包括使式X的化合物和式XI的化合物反應(yīng)，生成式I的化合物
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述式X的化合物由以下步驟制備(A)(i)使式III的化合物和式VII的化合物反應(yīng)，生成式VIII的化合物；(ii)將所述式VIII的化合物轉(zhuǎn)化為式X的化合物； 或者(B)(i)使式III的化合物與式IV的化合物反應(yīng)，生成式VI的化合物；(ii)將所述式VI的化合物轉(zhuǎn)化為式VIII的化合物；以及(iii)將所述式VIII的化合物轉(zhuǎn)化為式X的化合物； 或者(C)(i)使式III的化合物與式IV的化合物反應(yīng)，生成式VI的化合物；(ii)將所述式VI的化合物轉(zhuǎn)化為式X的化合物，
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的化合物，或其可藥用鹽，其中R
文檔編號C07D417/04GK1898237SQ200480038336
公開日2007年1月17日 申請日期2004年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月21日
發(fā)明者王淑東, 加文·伍德, 肯尼思·W·鄧肯, 克里斯托弗·米德斯, 達(dá)倫·吉布森, 賈尼絲·C·麥克拉克倫, 亞歷克斯·佩里, 戴維·布萊克, 丹尼拉·I·齊勒瓦, 彼得·M·費(fèi)希爾 申請人:西克拉塞爾有限公司