專利名稱：甲硫氨酸氨肽酶－2的抑制劑及其用途的制作方法
相關(guān)申請本申請要求2003年12月29日提交的美國臨時申請系列號60/533,431的優(yōu)先權(quán)，該臨時申請的全部內(nèi)容在此引用作為參考。
背景技術(shù)：
血管生成是形成新血管的基本過程，并且對于多種正常機體活動(例如生殖、發(fā)育和創(chuàng)傷修復(fù))是必不可少的。雖然對于該過程并未完全了解，但認為它涉及刺激以及抑制內(nèi)皮細胞-毛細血管的原代細胞-生長的多種分子的復(fù)雜的相互作用。在正常條件下，這些分子似乎在較長時期內(nèi)維持靜息狀態(tài)(即無毛細管生長的狀態(tài))的微血管系統(tǒng)，所述時期可以持續(xù)長達數(shù)周，或者在某些情況下長達數(shù)十年。然而，必要時(例如在創(chuàng)傷修復(fù)期間)，這些細胞可以在5天的時期內(nèi)經(jīng)歷快速增殖和更新(Folkman，J.和Shing，Y.，Journal of BiologicalChemistry，267(16)10931-10934，以及Folkman，J.和Klagsbrun，M.(1987)Science，235442-447)。
雖然血管生成在正常條件下是一種受高度調(diào)控的過程，但許多疾病(鑒定為“血管生成性疾病”)由持續(xù)不受調(diào)控的血管生成而引起，或者以此為特征。換句話說，不受調(diào)控的血管生成可能或者直接引起特定疾病，或者使已有的病理病癥惡化。例如，已有提示眼新血管形成為失明的最常見的病因，引起大約20種眼病。在某些已有的病癥例如關(guān)節(jié)炎中，新形成的毛細血管侵入關(guān)節(jié)并破壞軟骨。在糖尿病中，在視網(wǎng)膜中新形成的毛細管侵入玻璃體、出血并且致盲。實體瘤的生長和轉(zhuǎn)移也依賴于血管生成(Folkman，J.(1986)Cancer Research 46467-473，以及Folkman，J.(1989)Journal of the National Cancer Institute824-6)。例如已經(jīng)表明，生長至超過2毫米大小的腫瘤必須獲得其自身的血液供應(yīng)，它是通過誘導(dǎo)新毛細血管生長而達到這一點的。一旦這些新血管包埋入腫瘤中，則它們?yōu)槟[瘤細胞提供營養(yǎng)，并且可以作為腫瘤細胞進入循環(huán)以及轉(zhuǎn)移至較遠部位例如肝、肺或骨的工具(Weidner，N.等(1991)The New England Journal of Medicine 324(1)1-8)。
煙曲霉素是一種已經(jīng)用作抗微生物劑和抗原生動物劑的已知化合物。其理化特性和生產(chǎn)方法是眾所周知的(美國專利2,803,586號和Proc.Nat.Acda.Sci.USA(1962)48733-735)。已有報道煙曲霉素和某些類型的煙曲霉素類似物表現(xiàn)出抗血管生成活性。然而，這類抑制劑(例如，TNP-470)的應(yīng)用可能由于其快速代謝降解、不穩(wěn)定的血液濃度和劑量限制性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)副作用而受到限制。
因此，仍需要更有效、神經(jīng)毒性更低、更穩(wěn)定和/或血清半壽期更長的血管生成抑制劑。
發(fā)明概述本發(fā)明提供用于治療患有多種疾病之一的患者的組合物和方法，該疾病包括血管生成性疾病，如癌癥、自身免疫病或寄生蟲感染。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供通式A-B的化合物，其中A是具有如下式I-VII之一所示的結(jié)構(gòu)的基團
在式I至VI的每一個中，處于環(huán)己烷環(huán)底部(即I、II、III、IV和VII中相對于螺環(huán)環(huán)氧基團的4位，或V和VI中相對于-CH2X基團的4位)的氧原子是對于B的連接點，R2是氫或C1-C6-烷基，優(yōu)選甲基。在式VI中，X是鹵素原子、二烷基硫鎓基、硫代烷氧基、硫代芳氧基或其他合適的離去基團。優(yōu)選地，X是溴、氯或碘。更優(yōu)選地，X是氯。
B是烷?；⒎减；?、烷氧羰基、氨基甲酰基或N-取代的氨基甲?；?。
本發(fā)明也提供含有一種或多種式A-B的化合物和藥物可接受的載體的藥物組合物，應(yīng)用這些化合物和藥物組合物治療多種疾病和病癥的方法，這些疾病包括血管生成性疾病，如各種癌癥、淋巴瘤和特征為不適當(dāng)?shù)难苄纬傻募膊?，和自身免疫病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和牛皮癬。
根據(jù)以下詳細描述和權(quán)利要求書來看，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將是顯而易見的。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供作為甲硫氨酸氨肽酶-2(MetAP-2)的抑制劑的化合物，含有一種或多種這樣的化合物的藥物組合物，和治療患有多種疾病之一的患者的方法，該疾病包括血管生成性疾病和其他對MetAP-2的抑制有反應(yīng)的疾病，如癌癥，包括實體瘤和淋巴惡性腫瘤，寄生蟲感染和自身免疫病。
在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物包括式A-B的化合物，其中A選自上文中式I-VI所示的結(jié)構(gòu)，B是式 其中R3是氫或烷基，優(yōu)選C1-C4-烷基。R4和R5各自獨立地是氫、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的芳烷基、取代的或未取代的雜芳基、或取代的或未取代的雜芳烷基。優(yōu)選地，R4是氫，而R5不是氫。Z是-C(O)-或-亞烷基-C(O)-；且Y是-OR6或-N(R7)R8，其中R6、R7和R8各自獨立地是氫、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳基、或取代的或未取代的氮雜環(huán)烷基。R7和R8也可以與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)結(jié)構(gòu)。
在一個優(yōu)選實施方案中，B是結(jié)構(gòu) 其中R3、R5、R7和R8具有以上給出的含義。在該實施方案中，R5優(yōu)選地是取代的或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6-烷基、芳基、芳烷基或雜芳基。合適的取代基包括羥基和氨基。在另一實施方案中，R5是20種天然存在的氨基酸之一的側(cè)鏈，例如天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、色氨酸、蘇氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸、異亮氨酸或絲氨酸的側(cè)鏈。R5的優(yōu)選身份包括疏水性的氨基酸側(cè)鏈，如纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸和色氨酸的側(cè)鏈，和極性但是不帶電荷的氨基酸側(cè)鏈，如天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的側(cè)鏈。在另一個實施方案，R3和R5一起形成C3-C6-亞烷基。與R5連接的碳原子是手性的，可以以兩種可能的立體化學(xué)形式中的任一種存在。例如，-N(R3)-CH(R5)-C(O)-單位可能具有相當(dāng)于α-氨基酸的D-或L-構(gòu)型的構(gòu)型。在一個優(yōu)選實施方案中，該基團具有相當(dāng)于α-氨基酸的D-構(gòu)型的構(gòu)型。
在本發(fā)明的化合物中，當(dāng)R1-R8中的任一個是烷基時，優(yōu)選的烷基是取代的或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6烷基。特別優(yōu)選的烷基是直鏈或支鏈C1-C4烷基。取代的烷基包括至少一個非氫取代基，如氨基、烷基氨基或二烷基氨基；鹵素，如氟、氯、溴或碘取代基；或羥基。
當(dāng)R4和R5中的至少一個是取代的或未取代的芳基或雜芳基時，優(yōu)選的基團包括取代的和未取代的苯基、萘基、吲哚基、咪唑基和吡啶基。當(dāng)R4和R5中的至少一個是取代的或未取代的芳烷基或雜芳烷基時，優(yōu)選的基團包括取代的和未取代的芐基、萘甲基、吲哚甲基、咪唑甲基和吡啶甲基。芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基上的優(yōu)選取代基獨立地選自氨基、烷基取代的氨基、鹵素如氟、氯、溴和碘；羥基和烷基，優(yōu)選直鏈或支鏈C1-C6-烷基，最優(yōu)選甲基。
R7和R8除了烷基、取代的烷基或鹵素以外，還可能各自獨立地是取代的或未取代的氮雜環(huán)烷基或取代的或未取代的氮雜環(huán)烷基烷基。合適的取代的氮雜環(huán)烷基包括具有N-烷基取代基、優(yōu)選C1-C4-烷基取代基、更優(yōu)選N-甲基取代基的氮雜環(huán)烷基。R7和R8也可以與它們所連接的氮原子一起構(gòu)成雜環(huán)系統(tǒng)，如取代的或未取代的五元或六元氮雜或二氮雜環(huán)烷基。優(yōu)選地，二氮雜環(huán)烷基包括N-烷基取代基，如C1-C4-烷基取代基或者更優(yōu)選甲基取代基。
本發(fā)明的具體化合物包括其結(jié)構(gòu)如下所示的化合物 化合物2 化合物3 化合物4
化合物5 化合物6 化合物7 化合物8 化合物9 化合物10 化合物11化合物12
化合物13化合物14本發(fā)明也包括本發(fā)明的化合物的鹽。優(yōu)選的鹽是藥物可接受的鹽?！八幬锟山邮艿柠}”包括保留母體化合物的所需生物活性、但并未帶來任何不想要的毒性作用的鹽。這類鹽的實例是諸如以下酸的鹽無機酸，如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等；有機酸，如，乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、苯甲酸、撲酸、藻酸、甲磺酸、萘磺酸等。也包括諸如以下陽離子的鹽堿金屬和堿土金屬，包括鈉、鉀、鋰、鋅、銅、鋇、鉍、鈣等；銨，和有機陽離子，如烷基銨、二烷基銨、三烷基銨和四烷基銨。兩種或多種上述鹽的組合也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的化合物可以用本領(lǐng)域公知的方法制備。如實施例所述，下面的化合物1可以用作合成本發(fā)明某些化合物的起始材料。化合物1的合成公開在美國專利號6,548,477中，該專利在此全文引用作為參考。
化合物1本發(fā)明的化合物是甲硫氨酸氨肽酶-2(MetAP-2)的抑制劑，因此能夠用來治療其中以該酶為治療靶標(biāo)的多種疾病和病癥，包括美國專利6,548,477和公開的PCT申請WO03/092608中所述的那些，這些專利在此全文引用作為參考。
作為一個實例，MetAP-2的抑制劑抑制內(nèi)皮細胞增殖，并且因此表現(xiàn)出抗血管生成活性。因此，本發(fā)明的化合物可以在治療患者的血管生成性疾病的方法中使用。所述方法包括向所述患者施用治療有效量的本發(fā)明的化合物，從而治療該患者的血管生成性疾病。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“血管生成性疾病”包括特征為異?；虿幌胍难苄纬?血管生成)例如血管形成受刺激或受抑制或者由此引起的疾病、失調(diào)或病癥。異?；虿幌胍难苌煽赡芑蛘咧苯右鹛囟膊?，或者加重已有的病理病癥。血管生成性疾病的實例包括眼病，例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、早熟性視網(wǎng)膜病、角膜移植排斥、晶狀體后纖維組織形成、新生血管性青光眼、紅變、由于黃斑變性引起的視網(wǎng)膜新血管形成、低氧癥、與感染或外科手術(shù)相關(guān)的眼部血管生成、眼部腫瘤和沙眼、以及新血管形成可能致盲的其他眼部異常新血管形成病癥影響皮膚的疾病，例如銀屑病和化膿性肉芽腫；其中進行性生長依賴于這些腫瘤細胞對血管生成的連續(xù)誘導(dǎo)的癌癥，例如癌和肉瘤，肺癌、腦癌、腎癌、結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、宮頸癌、黑素瘤和任何上述癌的轉(zhuǎn)移形式；兒科疾病，例如血管纖維瘤和血友病性關(guān)節(jié)；血管疾病，例如血管瘤和動脈粥樣硬化斑內(nèi)的毛細血管增生；與手術(shù)相關(guān)的疾病，例如肥厚性疤痕、傷口肉芽發(fā)生和血管粘連；以及自身免疫病，例如其中關(guān)節(jié)中的新血管可能破壞關(guān)節(jié)軟骨的類風(fēng)濕性、免疫性和變性關(guān)節(jié)炎以及硬皮病。
術(shù)語血管生成性疾病還包括特征為內(nèi)皮細胞過度或異常刺激的疾病，包括但不限于腸粘連、克羅恩病、動脈粥樣硬化、硬皮病和肥厚性疤痕即疤痕疙瘩；作為病理結(jié)果而有血管生成的疾病，例如貓抓病(Rochele ninalia quintosa)和潰瘍(幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)。另外，本發(fā)明的化合物可用作避孕藥(基于其抑制血管生成依賴性排卵和胎盤建立的能力)，并且也可以用來通過在手術(shù)前施用于患者而減少出血。
本發(fā)明的化合物也能夠用來治療胸腺瘤患者。因此本發(fā)明提供一種治療患者中胸腺瘤的方法，包括向該患者施用治療有效量的本發(fā)明的化合物的步驟。
本發(fā)明的化合物也可以在需要抑制免疫系統(tǒng)的臨床方案中用作免疫抑制劑。因此，本發(fā)明提供一種在患者中誘導(dǎo)免疫抑制條件的方法，包括向該患者施用免疫抑制量的本發(fā)明化合物的步驟。例如，本發(fā)明的化合物能夠用來抑制正在接受或者已經(jīng)接受來自供者的器官、組織或細胞移植的患者的免疫功能。在一個實施方案中，移植的組織、器官或細胞是骨髓、干細胞、胰細胞如胰島細胞、或角膜。在另一實施方案中，移植的器官是實質(zhì)器官，如肝臟、腎臟、心臟或肺。
本發(fā)明的化合物也可以用來治療淋巴類惡性腫瘤患者(例如哺乳動物，如人類)。該方法包括向該患者施用有效量的MetAP-2抑制劑，從而治療淋巴類惡性腫瘤患者。
本發(fā)明的化合物還可以用來治療風(fēng)濕性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、強直性脊椎炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、硬皮病、川崎綜合征和如Primer on the Rheumatic Diseases，第11版(John H.Klippel，MD編；Arthritis FoundationAtlanta GA(1997))所述的其他風(fēng)濕性疾病。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“淋巴類惡性腫瘤”包括淋巴樣細胞的任何惡性腫瘤。淋巴類惡性腫瘤的例子包括淋巴樣白血病，如慢性淋巴樣白血病和急性淋巴樣白血病，和淋巴瘤，如何杰金氏病和非何杰金淋巴瘤。術(shù)語“非何杰金淋巴瘤”包括T細胞淋巴瘤，如前(外周)T淋巴母細胞性、成熟T細胞、結(jié)外自然殺傷細胞/T細胞、鼻型、腸病型T細胞、肝脾T細胞、皮下脂膜炎樣T田胞、皮膚(表皮)淋巴瘤、間變性大細胞外周T田胞和血管免疫母細胞性T-細胞淋巴瘤；和B細胞淋巴瘤，如前B淋巴母細胞性、小淋巴細胞性、B-細胞前淋巴細胞性、淋巴漿細胞性、脾邊緣區(qū)、結(jié)外邊緣區(qū)MALT、結(jié)節(jié)邊緣區(qū)、濾泡性、外套細胞、彌漫性大B細胞、原發(fā)性縱隔大B細胞、原發(fā)性滲出性和伯基特淋巴瘤。非何杰金淋巴瘤還包括AIDS-相關(guān)性淋巴瘤和中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤。
另一方面，本發(fā)明提供一種治療寄生蟲感染患者的方法，如瘧原蟲屬(Plasmodium)的種如惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)或利什曼原蟲屬(Leishmania)的種如杜氏利什曼原蟲(Leishmaniadonavani)所致的感染。該方法包括向該患者施用治療有效量的本發(fā)明的化合物的步驟。
在另一方面，本發(fā)明提供治療自身免疫病患者的方法。該方法包括向該患者施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“自身免疫病”包括與個人免疫系統(tǒng)攻擊其自身機體有關(guān)或由其引起的失調(diào)、疾病或病癥。免疫系統(tǒng)產(chǎn)生針對其自身組織的抗體。實際上身體的每一部分都可患自身免疫病。自身免疫病的實例包括但不限于自身免疫性溶血性貧血，其中免疫系統(tǒng)破壞個體的紅細胞；自身免疫性肝炎，其引起肝臟炎癥；貝格爾氏病，也稱作IgA腎病，其引起腎臟損傷；慢性疲乏綜合征，其引起不適的感覺或模糊的疾病感覺；克羅恩病，其引起腸的炎癥；皮肌炎，其影響皮膚和肌肉；纖維肌痛，其引起肌肉的慢性疼痛和強直；格雷夫斯病，其影響甲狀腺；橋本甲狀腺炎，它是甲狀腺的慢性炎癥；特發(fā)性血小板減少性紫癜，其引起低血小板計數(shù)并干擾正常凝血；扁平苔癬，其影響皮膚、眼睛和口腔及生殖器的內(nèi)層；多發(fā)性硬化，其中機體攻擊神經(jīng)系統(tǒng)部分；重癥肌無力，它引起嚴(yán)重的肌無力；牛皮癬，它引起皮膚損傷和搔癢；風(fēng)濕熱，它在鏈球菌感染后引起包括心臟在內(nèi)的身體器官的損傷；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，其中機體攻擊關(guān)節(jié)；硬皮病，它累及皮膚、腸和其他結(jié)構(gòu)；舍格倫綜合征，它引起干眼和口干；系統(tǒng)性紅斑狼瘡，其中機體攻擊關(guān)節(jié)以及腎臟中的結(jié)締組織；I型糖尿病，它是個體不能產(chǎn)生足夠胰島素的疾?。粷冃越Y(jié)腸炎，它也引起腸的炎癥；和白癜風(fēng)，它引起皮膚色素減少。在一個優(yōu)選實施方案中，該自身免疫病不是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“寄生蟲感染”包括任何寄生蟲引起的感染。寄生蟲感染的實例包括由例如瘧原蟲屬的種如惡性瘧原蟲，或利什曼原蟲屬的種如杜氏利什曼原蟲引起的感染。寄生蟲感染的其他實例包括由例如以下寄生蟲引起的感染巴貝蟲屬(Babesia)、弓形體屬(Toxoplasma)、瘧原蟲屬、艾美球蟲屬(Eimeria)、等孢子球蟲屬(Isospora)、Atoxoplasma、囊等孢蟲屬(Cystoisospora)、哈蒙德蟲屬(Hammondia)、貝諾孢子蟲屬(Besniotia)、肉孢子蟲屬(Sarcocystis)、弗倫克蟲屬(Frenkelia)、變形血原蟲屬(Haemoproteus)、住白蟲屬(Leucocytozoon)、泰勒蟲屬(Theileria)、伯金斯蟲屬(Perkinsus)和簇蟲屬(Gregarina)的種；卡氏肺囊蟲(Pneumocystis carinii)；微孢子門(Microspora)的成員，如微粒子蟲屬(Nosema)、腸胞蟲屬(Enterocytozoon)、腦類微孢子蟲屬(Encephalitozoon)、Septata、Mrazelia、鈍孢子屬(Amblyospora)、Ameson、格留蟲屬(Glugea)、具褶孢蟲屬(Pleistophora)和Microporidium的種；和囊孢子(Ascetospora)門的成員，如單孢子蟲屬(Haplosporidium)。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“患者”包括溫血動物，優(yōu)選哺乳動物，包括人類。在一個優(yōu)選實施方案中，所述患者為靈長類動物。在一個甚至更優(yōu)選的實施方案中，所述靈長類動物為人類。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語向患者“施用”包括通過將所述化合物給予患者的所需部位的任何給藥途徑，包括通過胃腸外途徑或口服途徑、肌內(nèi)注射、皮下/皮內(nèi)注射、靜脈注射、口腔含化給藥、透皮遞藥以及通過直腸、結(jié)腸、陰道、鼻內(nèi)或呼吸道途徑給藥，給患者分配、遞送或應(yīng)用血管生成抑制劑化合物，例如藥物制劑中的血管生成抑制劑化合物(如本文所述的)。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“有效量”包括在必需的劑量和時期內(nèi)有效達到所需結(jié)果、例如足以治療患者的血管生成性疾病的量。本文限定的血管生成抑制劑化合物的有效量可以根據(jù)如下的因素而有所變化，如患者的疾病狀況、年齡和體重，以及所述血管生成抑制劑化合物在患者體內(nèi)誘發(fā)所需反應(yīng)的能力?？梢哉{(diào)節(jié)給藥方案，以提供最佳治療反應(yīng)。有效量也是所述血管生成抑制劑化合物的治療有益效應(yīng)超過任何毒性效應(yīng)或有害效應(yīng)(例如副作用)的量。
本發(fā)明的化合物的治療有效量(即有效劑量)的范圍可以為大約0.001-30mg/kg體重，優(yōu)選大約0.01-25mg/kg體重，更優(yōu)選大約0.1-20mg/kg體重，甚至更優(yōu)選大約1-10mg/kg、2-9mg/kg、3-8mg/kg、4-7mg/kg或5-6mg/kg體重。本領(lǐng)域技術(shù)人員會認識到某些因素可能影響有效治療患者所需的劑量，包括但不限于患者的疾病或失調(diào)的嚴(yán)重程度、先前的治療、一般健康狀況和/或年齡、以及存在的其他疾病(如果有的話)。此外，用治療有效量的血管生成抑制劑化合物治療患者，可以包括單次治療，或優(yōu)選可以包括一系列的治療。在一個實施例中，用大約0.1-20mg/kg體重的血管生成抑制劑化合物治療患者，每周1次，共約1-10周，優(yōu)選2-8周，更優(yōu)選大約3-7周，甚至更優(yōu)選大約4、5或6周。人們也將認識到，在特定的療程中，用于治療的化合物的有效劑量可以增加或減少。
本發(fā)明的方法還包括與已知治療血管生成性疾病的另一種藥物活性化合物聯(lián)合，向患者施用治療有效量的血管生成抑制劑化合物，所述另一種藥物活性化合物例如為化療藥如紫杉醇(Taxol)、紫杉醇(Paclitaxel)或放線菌素D，或者抗糖尿病藥如甲苯磺丁脲；或者可以增強本發(fā)明化合物的活性的化合物，如肝素或硫酸化環(huán)糊精?？梢允褂玫钠渌幬锘钚曰衔锟梢栽谝韵挛墨I中找到Harrison′sPrinciples of Internal Medicine，第十三版，T.R.Harrison等編著.McGraw-HillN.Y.，NY；和thePhysicians Desk Reference第50版1997，Oradell，New Jersey，Medical Economics Co.，所述文獻的全部內(nèi)容在此引用作為參考。本發(fā)明的化合物和所述另一種藥物活性化合物可以在同一種藥物組合物中或者在不同的藥物組合物中(同時或者不同時)向患者施用。
藥物組合物本發(fā)明也提供包含一種或多種本發(fā)明化合物的藥物可接受的制劑。這類藥物可接受的制劑通常包含一種或多種本發(fā)明的化合物以及藥物可接受的載體和/或賦形劑。當(dāng)用于本文時，“藥物可接受的載體”包括生理學(xué)上相容的任何或所有的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。這類介質(zhì)和藥劑在藥物活性物質(zhì)方面的應(yīng)用是本領(lǐng)域眾所周知的。除了在任何常規(guī)介質(zhì)或藥劑與本發(fā)明的化合物不配伍時之外，考慮了它們在所述藥物組合物中的應(yīng)用。
也可以向本發(fā)明的組合物中加入已知治療血管生成性疾病的補充的藥物活性化合物，例如化療藥如紫杉醇(Taxol)、紫杉醇(Pachtaxel)或放線菌素D，或者抗糖尿病藥如甲苯磺丁脲；或者可以增強所述血管生成抑制劑化合物的血管生成抑制活性的化合物，如肝素或硫酸化環(huán)糊精?？梢允褂玫暮线m的藥物活性化合物可以在Harrison′sPrinciples of Internal Medicine(參見上文)中找到。
將本發(fā)明的藥物組合物配制為適合于預(yù)期的給藥途徑。給藥途徑的實例包括胃腸外給藥，例如靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、經(jīng)口(例如吸入)、透皮(局部)、經(jīng)粘膜和直腸給藥。供胃腸外、皮內(nèi)或皮下應(yīng)用的溶液或懸浮液可以包括以下成分無菌稀釋劑，例如注射用水、鹽水溶液、固定油類、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗細菌劑，例如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，以及用于調(diào)節(jié)張力的藥劑，例如氯化鈉或葡萄糖?？梢杂盟峄驂A例如鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。胃腸外制劑可以包封在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多劑量瓶中。
適合于注射用的藥物組合物包括無菌水溶液(為水溶性時)或分散體以及用于即時制備無菌注射液或分散體的無菌粉末。對于靜脈內(nèi)給藥，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。在所有情況下，所述藥物組合物都必須是無菌的，并且應(yīng)該是流體，使得具有易注射性。它必須在生產(chǎn)和貯存的條件下是穩(wěn)定的，必須防止微生物如細菌和真菌的污染作用。所述載體可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等)及其合適的混合物的溶劑或分散介質(zhì)。例如通過應(yīng)用包衣例如卵磷脂，在分散體的情況下通過保持所需的粒徑，以及通過使用表面活性劑，可以維持適當(dāng)?shù)牧鲃有??？梢杂酶鞣N抗細菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等，來達到防止微生物的作用。在許多情況下，優(yōu)選在所述組合物中包含等滲劑，例如糖類、多元醇如甘露醇或山梨醇、或氯化鈉。注射用組合物的延長吸收可以通過在所述組合物中包括延遲吸收的藥劑例如一硬脂酸鋁和明膠來達到。
通過將所需量的本發(fā)明的化合物加入到根據(jù)需要含有一種上述成分或者上述成分的組合的合適溶劑中，然后過濾除菌，可以制備無菌注射液。一般而言，通過將所述血管生成抑制劑化合物加入到含有一種基本分散介質(zhì)和選自以上所述的所需其他成分的無菌溶媒中，制備分散體。至于制備無菌注射液的無菌粉末，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥，由其先前除菌過濾的溶液得到所述血管生成抑制劑化合物加上任何額外的所需成分的粉劑。
口服組合物一般包含惰性稀釋劑或食用載體?？梢詫⑺鼈儼庠诿髂z膠囊中，或者壓制成片劑。對于口服治療給藥的目的，可以在所述血管生成抑制劑化合物中加入賦形劑，并且以片劑、錠劑或膠囊的形式使用?？诜M合物也可以包括腸溶包衣?？诜M合物也可以用流體載體來制備，以供作為漱口水使用，其中所述流體載體中的血管生成抑制劑化合物應(yīng)用于口腔，漱口，然后將其吐出或吞下。
藥學(xué)上相容的粘合劑和/或輔料可以作為所述組合物的部分包括在內(nèi)。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可以含有任何以下成分或者相似性質(zhì)的化合物粘合劑，例如微晶纖維素、西黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如淀粉或乳糖；崩解劑，例如藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤滑劑，例如硬脂酸鎂或Sterotes；助流劑，例如膠態(tài)二氧化硅；甜味劑，例如蔗糖或糖精；或者調(diào)味劑，例如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑。對于吸入給藥，所述血管生成抑制劑化合物以氣霧劑形式從含有適當(dāng)噴射劑例如氣體如二氧化碳的加壓容器或分配器或者噴霧器給藥。
也可以通過經(jīng)粘膜或透皮方式進行系統(tǒng)給藥。對于經(jīng)粘膜或透皮給藥，在制劑中使用適合于所要透過的屏障的滲透劑。這類滲透劑是本領(lǐng)域眾所周知的，對于經(jīng)粘膜給藥，包括例如去污劑、膽汁鹽和夫西地酸衍生物。經(jīng)粘膜給藥可以通過應(yīng)用噴鼻劑或栓劑來達到。對于透皮給藥，將所述血管生成抑制劑化合物配制為本領(lǐng)域眾所周知的軟膏、油膏、凝膠或乳膏。
對于直腸給藥，本發(fā)明的藥物組合物也可以配制為栓劑(例如周常規(guī)栓劑基質(zhì)如可可脂和其他甘油酯配制)或滯留型灌腸劑的形式。
在一個實施方案中，所述血管生成抑制劑化合物用保護所述化合物不被機體快速清除的載體來制備，諸如控釋制劑，包括植入體和微型包囊的遞藥系統(tǒng)?？梢允褂蒙锟山到庑?、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。制備這類制劑的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。這些材料在市場上也可以從Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals，Inc.獲得。脂質(zhì)體懸浮液也可以用作藥物可接受的載體。這些可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備，例如在美國專利4,522,811、5,455,044、5,576,018和4,883,666號中所述，所有這些專利的內(nèi)容都在此引用作為參考。
本發(fā)明的化合物也可以配制到這樣的藥物組合物中使所述血管生成抑制劑化合物在至少數(shù)周至一個月或更長的時間內(nèi)持續(xù)遞送給患者。這類制劑描述于美國專利5,968,895號中，其內(nèi)容在此引用作為參考。
為了易于給藥和劑量的均一性，尤其有利的是配制單位劑量形式的口服組合物或胃腸外組合物。當(dāng)用于本文時，單位劑量形式是指適合作為用于待治療患者的單位劑量的物理上分離的單位；每個單位含有與所需藥物載體結(jié)合的預(yù)定量的一種或多種本發(fā)明的化合物，其量計算為產(chǎn)生所需的療效。本發(fā)明的單位劑量形式的規(guī)格由下述因素決定并且直接取決于下述因素治療化合物的獨特性質(zhì)和待達到的特定療效、以及在配制用于治療個體的這類化合物的技術(shù)中固有的限制。
這類化合物的毒性和療效可以通過標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法，在細胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游镏衼頊y定，例如用于測定LD50(使群體的50％致死的劑量)和ED50(在群體的50％中治療有效的劑量)。毒性效應(yīng)和治療效果的相應(yīng)劑量之比是治療指數(shù)，它可以用LD50/ED50之比來表示。優(yōu)選表現(xiàn)出高治療指數(shù)的本發(fā)明的化合物。雖然可以使用表現(xiàn)出毒副作用的化合物，但應(yīng)該設(shè)計將這類化合物靶向累及組織的部位的遞送系統(tǒng)，以便將對未累及的細胞的潛在損害減至最小，從而減小副作用。
從細胞培養(yǎng)物測定和動物研究獲得的數(shù)據(jù)，可以用來制訂用于人類的劑量范圍。本發(fā)明的化合物的劑量優(yōu)選在具有很小毒性或無毒性ED50的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。所述劑量可以在該范圍內(nèi)變動，取決于所用的劑型和所用的給藥途徑。對于本發(fā)明方法中使用的任何化合物而言，最初可以根據(jù)細胞培養(yǎng)物測定來估計治療有效量。可以用動物模型制訂劑量，以便獲得包括用細胞培養(yǎng)物測定的IC50(即所述化合物達到癥狀的半數(shù)最大抑制的濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。
這類信息可以用來更準(zhǔn)確地確定人類的有用劑量。
血漿中的水平可以例如通過高效液相色譜來測定。
檢測本發(fā)明化合物活性的方法可以在各種各樣熟知的測定方法中，例如在大鼠主動脈環(huán)血管生成抑制測定法或者在絨毛尿囊膜(CAM)測定法中，測試本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)(例如抑制或刺激)血管生成的能力。CAM測定可以基本上按照Liekens S.等(1997)Oncology Research 9173-181中所述進行，其內(nèi)容在此引用作為參考。簡而言之，將新鮮消毒的蛋于37℃孵育3天。第三天，剝?nèi)サ皻ぃ瑢⒌爸糜诮M織培養(yǎng)板中，于38℃孵育。對于該測定，將待測試的血管生成抑制劑化合物附著于尼龍網(wǎng)上的膠原基質(zhì)上。然后用該網(wǎng)覆蓋絨毛尿囊膜，將蛋于37℃孵育。如果發(fā)生血管生成，則新的毛細血管在24小時內(nèi)形成并生長通過該網(wǎng)。然后可以測定所述血管生成抑制劑化合物(在各種濃度下)調(diào)節(jié)(例如抑制)血管生成(例如FGF誘導(dǎo)的血管生成)的能力。
也可以測試本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)(例如抑制或刺激)人內(nèi)皮細胞生長的能力。通過用含胰蛋白酶的培養(yǎng)基灌注臍靜脈，可以分離出人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)。然后將HUVEC在補充2.5％胎牛血清和2.0ng/ml重組人堿性成纖維細胞生長因子(rbFGF，Biotechnology ResearchLaboratories，Takeda，Osaka，Japan)的GIT培養(yǎng)基(Diago Eiyou Kagaku，Co.，Japan)中于37℃、5％CO2和7％O2下培養(yǎng)。然后將HUVEC以2×103/100μl培養(yǎng)基的細胞密度接種到96孔微量滴定板(Nunc，1-67008)上。第二天，可以向各孔中加入100μl含rbFGF(終濃度2ng/ml)和不同濃度的各種血管生成抑制劑化合物的培養(yǎng)基。將所述血管生成抑制劑化合物溶于二甲基亞砜(DMSO)中，然后用培養(yǎng)基稀釋，使得DMSO的終濃度不超過0.25％。
培養(yǎng)5天后，除去培養(yǎng)基，向各孔中加入100μl 1mg/ml MTT(溴化3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-四唑)溶液，將微量滴定板于37℃保持4小時。然后向各孔中加入100μl 10％十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液，將微量滴定板于37℃保持5-6小時。為了測定所述血管生成抑制劑化合物對細胞數(shù)的影響，用光密度計在590nm下測量各孔的光密度。
本發(fā)明的血管生成抑制劑化合物在體外調(diào)節(jié)毛細管內(nèi)皮細胞遷移的能力也可以用博伊登室測定法(Boyden chamber assay)(如Falk等(1980)J Immunol.Meth.33239-247中所述，其內(nèi)容在此引用作為參考)來測試。簡而言之，將牛毛細管內(nèi)皮細胞以1.5×104細胞/孔接種到預(yù)先包被纖連蛋白(7.3μg纖連蛋白/ml PBS)的核孔濾膜一側(cè)的無血清DMEM(Dulbecco氏改良Eagle培養(yǎng)基)中。將血管生成抑制劑化合物溶于乙醇中，并且在DMEM中稀釋，使乙醇的終濃度不超過0.01％。使細胞在無血清DMEM中于37℃暴露于200μg/ml內(nèi)皮促細胞分裂劑(Biomedical Technologies，Mass.)和不同濃度的所述血管生成抑制劑化合物達4小時。孵育結(jié)束時，通過用100倍的目鏡格柵(ocular grid)以四份重復(fù)計數(shù)細胞，測定通過濾膜中8微米孔遷移的細胞數(shù)。
可以在體內(nèi)測試本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)腫瘤生長的能力?？梢允褂脛游锬Ｐ?，例如帶有腹膜內(nèi)移植的小鼠網(wǎng)狀細胞肉瘤(M 5076)的C57BL/6N小鼠?？梢酝ㄟ^離心收集腹水中的腫瘤細胞，將其懸浮于鹽水中。將細胞懸浮液(2×106細胞/100μl/小鼠)接種到小鼠的右脅腹。然后，荷瘤小鼠從腫瘤接種后的第1天開始，用測試化合物(以各種濃度，懸浮于含1％乙醇的5％阿拉伯膠溶液中)皮下處理12天。
通過以數(shù)天的間隔，用卡尺測量兩個方向的腫瘤大小，可以測定腫瘤生長。
最后，可以如下測試本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)MetAP2活性的能力。如Li和Chang，(1996)Biochem.Biophys.Res.Commun.227152中所述，可以在昆蟲細胞中表達并從中純化重組人MetAP2。然后，向含有1nM純化重組人MetAP2的緩沖液H(10mM Hepes，pH 7.35、100mM KCl、10％甘油和0.1M Co2+)中加入各種量的測試化合物，于37℃孵育30分鐘。為了開始酶促反應(yīng)，向反應(yīng)混合物中加入含甲硫氨酸殘基的肽，例如Met-Gly-Met(至濃度為1mM)。隨后，用Zou等(1995)Mol.Gen.Genetics 246247-253)的方法，在不同的時間點(例如在0、2、3和5分鐘時)定量測定所釋放的甲硫氨酸。
通過以下實施例進一步說明本發(fā)明，但所述實施例不應(yīng)解釋為是限制性的。在本申請中引用的所有參考文獻、專利和公開的專利申請的內(nèi)容以及附圖都在此引用作為參考。
本發(fā)明的各個方面在下面的部分中進一步詳細描述。
實施例實施例1化合物2的合成化合物1如美國專利6,548,477的實施例5所述合成，該專利的教導(dǎo)在此全文引用作為參考。將化合物1(1.0g，2.36mmol)溶解于20mL 1，4-二烷中。向該攪拌溶液中加入4.0M二烷中的HCl(0.65mL，2.59mmol，1.1當(dāng)量)，再攪拌反應(yīng)液15分鐘，之后真空濃縮。然后由20％乙腈水溶液凍干，使用乙腈-水梯度通過反相制備型HPLC純化。
實施例2化合物3的合成將化合物1(502mg，1.2mmol)在氮氣沖洗的50mL圓底瓶中溶解于10mL 1，4-二烷中。向該攪拌溶液中加入4.0M二烷中的HCl(0.73mL，2.92mmol，2.5當(dāng)量)，再攪拌反應(yīng)液2小時，此時LC-MS顯示起始物質(zhì)完全消失。將反應(yīng)混合物真空濃縮為粘稠、白色的油狀物，其純度足以轉(zhuǎn)化為化合物3。或者，可以使用乙腈-水梯度通過反相制備型HPLC純化。
實施例3化合物4的合成將化合物3(500mg，1.2mmol)在氮氣沖洗的50mL圓底瓶中溶解于8.0mL無水THF中。加入叔丁醇鉀(251mg，2.3mmol)，將反應(yīng)混合物攪拌1小時，此時LC-MS顯示起始物質(zhì)完全消失。將反應(yīng)混合物在低壓下濃縮，并重懸浮在二氯甲烷中。有機層用2×飽和碳酸氫鈉、2×水和2×鹽水洗滌，然后在硫酸鈉上干燥，并且濃縮為澄清、粘稠的油狀物。使用乙腈-水梯度通過反相制備型HPLC純化。
實施例4化合物5的合成將乙酸汞(II)(319mg，1.0mmol)溶解于1mL水中。加入THF(1mL)，形成橙黃色懸浮液。在室溫下攪拌5分鐘后，一次性加入化合物1(424mg，1.0mmol)。該溶液立即變?yōu)槌吻濉Ｔ谑覝叵聰嚢?小時后，將反應(yīng)液在冰浴中冷卻，向其中加入3N NaOH(1mL)，接著加入溶解于1mL 3N NaOH中的硼氫化鈉(19mg，0.5mmol，2當(dāng)量)。再攪拌一小時后，使反應(yīng)混合物在分液漏斗中靜置過夜，以利于除去沉淀的汞。向水層中加入鹽水，用醚抽提該水層兩次。合并的有機提取物然后用鹽水洗滌，在MgSO4上干燥，并濃縮為白色泡沫。使用乙腈-水梯度通過反相制備型HPLC純化該產(chǎn)物。
實施例5內(nèi)皮細胞的增殖的抑制檢測一組本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)人內(nèi)皮細胞生長的能力。對于該測定，將人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)于37℃濕潤培養(yǎng)箱中保持于Clonetics內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基(EGM)中。用胰蛋白酶使細胞分離，然后于室溫下通過以300×g離心5分鐘沉淀細胞。將HUVEC以5,000細胞/孔加到96孔板中。孵育6小時后，將所述培養(yǎng)基更換為補充0.5nM bFGF和所需濃度的測試化合物的0.2ml新鮮EGM。最初將測試化合物溶于乙醇中，儲液濃度或者為10mM或者為0.1mM，隨后在EGM中稀釋，獲得1pM至10μM的濃度。于37℃下48小時后，將所述培養(yǎng)基更換為補充bFGF和測試化合物的新鮮EGM。于37℃再孵育48小時后，加入MTT(溴化3-[4，5-二甲基噻唑基]-2，5-二苯基-四唑)至1mg/ml。于37℃下2-4小時后，將所述培養(yǎng)基更換為0.1ml/孔的異丙醇。將板置于搖床上室溫下達15分鐘，然后用Labsystems Multiskan平板分光光度計分析，確定570nm的光密度。


圖1中顯示的測定結(jié)果證明本發(fā)明的化合物在納摩爾濃度下能夠抑制內(nèi)皮細胞的生長。
等同方案本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認識到，或者僅應(yīng)用常規(guī)實驗就能夠確定此處所述的本發(fā)明的特定實施方案的許多等同方案。這些等同方案包括在下面的權(quán)利要求書之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種式A-B的化合物或其藥物可接受的鹽，其中A是選自下組的基團 其中R2是氫或C1-C6-烷基，X是鹵素、二烷基硫鎓、硫代烷氧基或硫代芳氧基，且B是烷酰基、芳酰基、氨基甲?；蛉〈陌被柞；?。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中B是下式的基團 其中R3是氫或烷基；R4和R5各自獨立地是氫、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的芳烷基、取代的或未取代的雜芳基、或取代的或未取代的雜烷基；或R3和R5一起形成亞烷基；Z是-C(O)-或-亞烷基-C(O)-；且P是-OR6或-N(R7)R8，其中R6、R7和R8各自獨立地是氫、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳基、或取代的或未取代的氮雜環(huán)烷基，或者R7和R8與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)結(jié)構(gòu)。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中B是以下結(jié)構(gòu)的基團 其中R5是取代的或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6-烷基、芳基、芳烷基或雜芳基；或者R3和R5一起形成C3-C6-亞烷基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R5是直鏈或支鏈的C1-C6-烷基、羥基取代的直鏈或支鏈C1-C6-烷基；且R3、R7和R8各自為氫。
5.一種選自下組的化合物
6.含有權(quán)利要求1或2的化合物和藥物可接受的載體的藥物組合物。
7.一種治療患者的血管生成性疾病的方法，包括向該患者施用治療有效量的權(quán)利要求1或2的化合物的步驟。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述血管生成性疾病是癌癥。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述血管生成性疾病是淋巴瘤。
10.一種治療患者的自身免疫病的方法，包括向該患者施用治療有效量的權(quán)利要求1或2的化合物的步驟。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述自身免疫病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或多發(fā)性硬化癥。
12.一種治療患者的寄生蟲感染的方法，包括向該患者施用治療有效量的權(quán)利要求1或2的化合物的步驟。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述感染是由選自瘧原蟲屬的種和利什曼原蟲屬的種的寄生蟲引起的。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療患有多種疾病之一的患者的組合物和方法，該疾病包括血管生成性疾病，如癌癥、自身免疫病或寄生蟲感染。
文檔編號C07C271/34GK1902215SQ200480039391
公開日2007年1月24日 申請日期2004年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月29日
發(fā)明者查爾斯·湯普森, 克里斯托弗·C·阿里科·馬恩德爾 申請人:普雷西斯藥品公司