專利名稱：新的苯并呋喃類和吲哚類化合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的苯并呋喃-2-基-羰基-反-2，5-二甲基-哌嗪衍生物和吲哚-2-基-羰基-反-2，5-二甲基-哌嗪衍生物、它們的藥學上可接受的鹽、包含它們的藥物組合物以及它們的治療用途。
本發(fā)明另一方面是治療炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病和過度增殖性疾病的方法。一種優(yōu)選的方法是治療以下疾病的方法類風濕性關節(jié)炎、動脈粥樣硬化、全身性硬皮病、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease)、腦脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、急性感染性多神經(jīng)炎(Guillian-Barre syndrome)、同種異體移植物排斥、蕁麻疹、血管性水腫(angioderma)、變應性結(jié)膜炎、特應性皮炎、變應性接觸性皮炎、藥物變態(tài)反應、昆蟲叮咬變態(tài)反應、全身性過敏反應、直腸炎、炎性腸病或哮喘。
背景技術：
趨化因子是由8-14kDa蛋白質(zhì)組成的小的分泌型細胞因子，根據(jù)它們的保守半胱氨酸殘基，分為四個組別CXC、CC、C和CX3C。它們促進細胞粘附分子的上調(diào)，而細胞粘附分子增強粘附，導致細胞遷移。因此，趨化細胞因子在白細胞亞群的募集和運輸中具有至關重要的作用。
在CC趨化因子中，已知為CCR1、CCR3、CCR4和CCR5受體的配體的MIP-1α和RANTES涉及自身免疫性疾病，例如類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病和多發(fā)性硬化。強有力的證據(jù)是，與野生型小鼠相比，CCR1敲出小鼠在小鼠EAE模型中疾病發(fā)生率顯著降低。Karpus等(J.Immunol.1995，155，5003)的研究進一步證明，MIP-1α在多發(fā)性硬化的相同模型中起關鍵作用。這表明抗MIP-1α抗體可阻止急性麻痹性疾病和復發(fā)性麻痹性疾病的進展，并可防止單核細胞浸潤到CNS。
另外，存在強有力的證據(jù)表明RANTES涉及類風濕性關節(jié)炎的病理生理學。例如，從類風濕性關節(jié)炎患者的滑膜組織樣品中檢測到RANTES mRNA(Snowden，N.等，Lancet，1994，343，547)。此外，抗RANTES抗體大大減輕大鼠佐劑誘發(fā)性關節(jié)炎模型中疾病的進展。
許多研究都為CCR1在同種異體移植物排斥中的作用提供了證據(jù)。已經(jīng)證實，將低于腎毒性量的環(huán)孢菌素A與CCR1拮抗劑對趨化因子受體的阻斷作用相結(jié)合，對實體同種異體移植物存活具有積極作用(Horuk，R.等，J.Biol.Chem.2001，276，4199)。
因此，可抑制炎性趨化因子與其受體間相互作用的分子，將可用于治療炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病和過度增殖性疾病。
相關公開國際專利申請WO 0164676要求保護作為p38激酶抑制劑的(順)-4-(4-氟芐基)-1-(7甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪。
該文獻涉及可用于治療炎性疾病和心臟病的化合物。更具體地講，該文獻涉及用于治療促炎病癥、心臟病和腎病的化合物。沒有要求保護或示例說明其它的具體苯并呋喃化合物。
美國專利5,814,644公開了一種作為合成結(jié)構單元的吲哚-2-羰基衍生物，用于制備多巴胺拮抗劑，而多巴胺拮抗劑可用于治療精神病。
美國專利4,115,569和4,374,990要求保護含苯并呋喃取代基的哌嗪衍生物，該類衍生物用作精神病治療藥物。
發(fā)明內(nèi)容
令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，以下通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物在抑制趨化因子受體CCR1信號傳導方面具有預料不到的效果 其中X為氟原子或氯原子；位于哌嗪環(huán)2位和5位的兩個甲基彼此為反式構型；Y為NH或O；R1選自氫、氯、溴、硝基、甲基或三氟甲基；R2選自氫、鹵素、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
在以上定義的式(I)化合物中，一組優(yōu)選的式(I)的化合物是這樣的化合物，其中X為氟原子；
Y為NH或O；R1選自氫、氯或溴；R2選自氫、氯、溴、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
優(yōu)選的化合物有(1)(反)-1-(5-溴-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(2)(反)-4-(4-氯芐基)-1-(5-氯-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪(3)(反)-4-(4-氟芐基)-1-(6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪(4)(反)-4-(4-氟芐基)-1-(6-三氟甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪(5)(反)-1-(5-氯-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(6)(反)-1-(5-溴-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(7)(反)-1-(5-氯-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(8)(反)-1-(5-溴-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(9)(反)-1-(5，6-二氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(10)(反)-1-(6-溴-5-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(11)(反)-1-(5-溴-6-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(12)(反)-1-(5-氯-6-三氟甲基-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(13)(反)-1-(5-氯-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪。
下表1中列出了本發(fā)明以上式(I)的優(yōu)選化合物的實例。
表1
定義本文使用的術語“治療”包括預防以及減輕疾病的癥狀。
除非另有說明，否則“鹵代”或“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
“硝基”是指基團-NO2。
CHCl3是指氯仿。
CH2Cl2是指二氯甲烷。
“反”是指兩個甲基位于哌嗪平面的相反兩側(cè)?！绊槨笔侵竷蓚€甲基位于哌嗪平面的同側(cè)。
結(jié)構活性關系現(xiàn)有技術化合物及對照化合物(順)-4-(4-氟芐基)-1-(7-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪、4-(4-氟芐基)-1-(吲哚-2-基-羰基)-哌嗪、4-(4-氯芐基)-1-(苯并呋喃-2-基-羰基)-哌嗪和(反)-4-(4-氟芐基)-1-(7-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪為現(xiàn)有技術化合物及對照化合物，在下文中分別稱為化合物A、B、C和D?；衔顰在國際專利申請WO 0164676中披露?；衔顲在美國專利4,115,569中披露?；衔顱和D是非本發(fā)明化合物的對照化合物。
化合物A化合物B 化合物C化合物D與現(xiàn)有技術化合物A和C以及對照化合物B和D相比，本發(fā)明化合物在Ca2+流出測定中具有強得多的抑制作用。本發(fā)明化合物功效的改善尤其與以下結(jié)構特征有關1.對于在Ca2+流出測定中在納摩爾范圍內(nèi)獲得活性，在芐基哌嗪部分的對位引入氯或優(yōu)選的氟是至關重要的。用另外的官能團(例如烷基或氫)置換X將降低功效和親和力。
2.2，5-位的兩個甲基為反式構型。反-2，5-位的甲基用氫取代以及改變?nèi)∠驗轫?2，5取代，則化合物在Ca2+流出測定中功效顯著下降。
3.R1必須是摩爾折射率(molrefractory，MR)值為5.0≤MR≤9.0的基團，例如氯、溴、甲基、硝基或三氟甲基。
4.苯并呋喃和吲哚環(huán)系統(tǒng)的4位和7位必須是未取代的。
綜合以上4項特征的本發(fā)明提供具有令人驚奇又意想不到的功效的化合物(見表2)。
本發(fā)明化合物顯示有利的藥代動力學特性。
MR概念的定義及其值可以參見下面的兩個參考文獻
Hansch，C.和Leo，A.，In Exploring QSARFundamentals andApplications in Chemistry and Biology.ACS，Washington，DC 1995。
Hansch，C.，Leo，A.和Hoekman，D.，In Exploring QSARHydrophobic，Electronic，and Steric Constants.ACS，Washington，DC1995。
化合物的制備本發(fā)明還提供以下制備式(I)化合物的方法。
方法 可以如下制備式(I)化合物將式(II)哌嗪衍生物用式(III)化合物處理，其中X如式(I)中的定義，L1為離去基團(例如鹵離子(例如氯離子)、羥基、苯并三唑-1-基酯、異脲基)，Y、R1和R2如式(I)中的定義。本發(fā)明方法可以方便地在CH2Cl2或CHCl3中于例如0℃以上(例如20-120℃)實施。
最優(yōu)選這樣的方法在摩爾過量的碳二亞胺(例如N-環(huán)己基碳二亞胺)、N′-甲基聚苯乙烯和1-羥基苯并三唑存在下，將式(II)胺衍生物的氯仿溶液用摩爾過量的式(III)化合物處理，其中L1為羥基。在微波烘箱(Personal Chemistry的Smith Synthesiser)中，通常將反應混合物在60℃-150℃攪拌100-1000秒。在這些條件下，收率提高到99％。式(II)化合物可通過例如Tabia等(J.Med.Chem.1999，42，2870)介紹的已知方案制備。式(II)范圍內(nèi)的化合物可以由通常類似于所述文獻的方法制備。式(III)化合物是市售的或者實施例1、實施例2和實施例4描述的。式(III)范圍內(nèi)的化合物可以由通常類似于所述文獻的方法制備(Hodeges等，J.Med.Chem.1981，24，1184；Hino等，Chem.Pharm.Bull.1990，38，59)或者按照實施例1、實施例2和實施例4制備。
本發(fā)明還可使用二甲基-哌嗪衍生物的酸加合物，其中這樣的酸包括例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸、碳酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸、酒石酸、草酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、三氟乙酸，等等。其它合適的鹽參見Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1985，第1418頁。
實施例15-溴-1-苯并呋喃-2-甲酸向5-溴水楊醛(20g，98.5mmol)和溴丙二酸二乙酯(95％，37g，148mmol)的丁酮(200ml)溶液中加入碳酸鉀(27.5g，197mmol)。將混合物回流4小時，然后讓其達到室溫。濾出碳酸鉀，真空除去溶劑。殘余物在CH2Cl2和1M硫酸水溶液間分配。干燥有機層，濃縮，得到油狀物。將油狀物用10％KOH/EtOH(125ml)處理，回流45分鐘。濃縮反應混合物，加入2M硫酸水溶液(350ml)，將混合物升至90℃。在冷卻至室溫后，沉淀出產(chǎn)物，用EtOH/H2O(4∶1)重結(jié)晶(產(chǎn)量6.6g，28％)。
1H NMRδ(DMSO-d6)13.55(bs，1H)，7.97(d，1H)，7.67(d，1H)，7.60(m，2H).
其它1-苯并呋喃-2-甲酸可以按照類似的方法獲得。
實施例25，6-二氯-1-吲哚-2-甲酸在劇烈攪拌下，向3，4-二氯甲苯(10.0g，62.1mmol)和硫酸(96-98％，50ml)的冰冷混合物中滴加硝酸(100％，2.87ml，68.3mmol)，滴加速度應該使反應溫度不超過15℃。加入完畢后，讓反應混合物達到室溫，再攪拌60分鐘。將反應混合物倒在250ml冰上，通過抽吸過濾分離出沉淀產(chǎn)物，用水洗滌，真空干燥，最后用庚烷重結(jié)晶(4，5-二氯-2-硝基甲苯的產(chǎn)量4.4g，34％)。
1H NMRδ(CDCl3)8.10(s，1H)；7.65(s，1H)；2.57(s，3H).
向4，5-二氯-2-硝基甲苯(2.0g，9.7mmol)的CCl4(15ml)溶液中加入N-溴丁二酰亞胺(2.6g，15mmol)和Bz2O2(50mg)。將反應混合物回流120小時，然后讓其達到室溫。反應混合物用水洗滌兩次，干燥，濃縮，得到3.54g粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物由約70％4，5-二氯-2-硝基芐基溴和30％4，5-二氯-2-硝基芐基二溴組成。將此混合物懸浮于1，4-二烷(35ml)和水(35ml)的混合物。加入CaCO3(6.2g，62mmol)，將反應混合物回流18小時。讓反應混合物達到室溫，然后濃縮至干。向殘余物的CH2Cl2(50ml)懸浮液中加入2M HCl水溶液，直到?jīng)]有固體殘留。水層用CH2Cl2萃取，干燥合并的有機層，濃縮。將粗產(chǎn)物溶于甲苯，用快速色譜純化(硅膠60，庚烷/乙酸乙酯(19∶1→4∶1))(4，5-二氯-2-硝基芐基醇的產(chǎn)量1.15g，53％)。
1H NMRδ(CDCl3)8.27(s，1H)；7.98(s，1H)；5.02(s，2H).
向4，5-二氯-2-硝基芐基醇(1.15g，5.2mmol)的CHCl3(20ml)溶液中加入MnO2(4.0g，47mmol)。將反應混合物回流18小時，然后讓其達到室溫。通過硅藻土過濾反應混合物，濃縮(4，5-二氯-2-硝基苯甲醛的產(chǎn)量1.0g，87％)。
1H NMRδ(CDCl3)10.20(s，1H)；8.07(s，1H)；7.84(s，1H).
將4，5-二氯-2-硝基苯甲醛(0.85g，3.85mmol)和(乙氧羰基亞甲基)-三苯基正膦(phophorane)(1.84g，5.55mmol)的苯(25ml)溶液回流3小時。讓反應混合物達到室溫，然后濃縮。粗產(chǎn)物由快速色譜(硅膠60，甲苯)純化((順，反)-4，5-二氯-2-硝基肉桂酸乙酯的產(chǎn)量1.01g，90％)。將(順，反)-4，5-二氯-2-硝基肉桂酸乙酯(1.01g，3.48mmol)溶于亞磷酸三乙酯(2ml)。在125℃下，將溶液滴加到亞磷酸三乙酯(5ml)中。加入完畢后，使溫度升至145℃，反應混合物在此溫度靜置2小時。讓反應混合物達到室溫，然后濃縮。粗產(chǎn)物由快速色譜(硅膠60，庚烷/甲苯(10∶1→5∶1→1∶1→0∶1))純化(5，6-二氯吲哚-2-甲酸乙酯的產(chǎn)量0.18g，20％)。
1H NMRδ(CDCl3)8.90(bs，1H)；7.81(s，1H)；7.57(s，1H)；7.16(s，1H)；4.48(q，2H)；1.45(t，3H).
向5，6-二氯吲哚-2-甲酸乙酯(0.16g，0.64mmol)的乙醇(99％，5ml)溶液中加入1M NaOH水溶液(5ml)。將反應混合物回流5分鐘，然后讓其達到室溫。蒸發(fā)除去乙醇，用1M HCl水溶液酸化水性殘余物。過濾收集沉淀產(chǎn)物，用水洗滌，真空干燥(5，6-二氯吲哚-2-甲酸的產(chǎn)量0.14g，96％)。
1H NMRδ(DMSO-d6)13.26(bs，1H)；12.06(s，1H)；7.94(s，1H)；7.60(s，1H)；7.07(d，1H).
其它吲哚-2-甲酸可以按照類似的方法獲得。
實施例33.1(反)-1-(5-溴-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪將(反)-1-(4-氟芐基)-2，5-二甲基-哌嗪(220mg，1.0mmol)、5-溴-1-苯并呋喃-2-甲酸(342mg，1.5mmol)、1-羥基苯并三唑(200mg，1.5mmol)以及N-環(huán)己基碳二亞胺、N′-甲基聚苯乙烯(167g，3mmol載荷1.8mmol/g的樹脂)在CHCl3中的混合物在微波烘箱中于110℃加熱5分鐘。讓混合物達到室溫，加入TBD-甲基聚苯乙烯(1000mg，3mmol載荷2.9mmol/g的樹脂)，攪拌混合物過夜。將兩種樹脂濾出，用CHCl3和EtOAc洗滌。真空濃縮濾液，將殘余物上樣到快速柱色譜(甲苯→甲苯∶EtOAc，20∶1→甲苯∶EtOAc，1∶1)，得到標題產(chǎn)物，收率93％。
1H NMRδ(CDCl3)7.78(d，1H)，7.48(dd，1H)，7.38(d，1H)，7.33(dd，2H)，7.19(s，1H)，7.01(dd，2H)，4.63(bs，1H)，4.14(bs，1H)，3.62(m，2H)，3.46(d，1H)，3.08(bs，1H)，2.79(dd，1H)，2.30(d，1H)，1.43(d，3H)，1.06(d，3H).
按照類似的方法制備下列化合物3.2(反)-1-(5-氯-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氯芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.62(d，1H)，7.43(d，1H)，7.33(m，1H)，7.29(m，4H)，7.19(d，1H)，4.63(bs，1H)，4.14(bs，1H)，3.54(m，3H)，3.08(bs，1H)，2.80(dd，1H)，2.29(d，1H)，1.43(d，3H)，1.06(d，3H).
3.3(反)-4-(4-氟芐基)-1-(5-硝基-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.67(s，1H)，8.65(s，1H)，8.20(d，1H)，7.49(d，1H)，7.35(dd，2H)，7.04(dd，2H)，6.92(s，1H)，4.81(m，1H)，4.33(d，1H)，3.57(m，3H)，3.15(bs，1H)，2.82(dd，1H)，2.35(d，1H)，1.51(d，3H)，1.07(d，3H).
3.4(反)-4-(4-氟芐基)-1-(5-硝基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)8.60(d，1H)，8.32(dd，1H)，7.61(d，1H)，7.34(m，3H)，7.02(dd，2H)，4.61(bs，1H)，4.15(bs，1H)，3.56(m，3H)，3.11(bs 1H)，2.82(dd，1H)，2.33(d，1H)，1.46(d，3H)，1.08(d，3H).
3.5(反)-4-(4-氟芐基)-1-(7-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪(對照化合物D)1H NMRδ(CDCl3)7.34(dd，2H)，7.27(s，1H)，7.20(m，2H) 7.01(dd，2H)，6.87(dd，1H)，4.69(bs，1H)，4.20(bs，1H)，3.99(s，3H)，3.62(m，2H)，3.46(d，1H)，3.07(bs，1H)，2.80(dd，1H)，2.30(d，1H)，1.43(d，3H)，1.07(d，3H).
3.6(反)-1-(5-溴-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)10.17(s，1H)，7.77(s，1H)，7.36(m，4H)，7.04(dd，2H)，6.70(d，1H)，4.86(m，1H)，4.38(d，1H)，3.56(m，3H)，3.13(bs，1H)，2.81(dd，1H)，2.33(d，1H)，1.49(d，3H)，1.05(d，3H).
3.7(反)-4-(4-氟芐基)-1-(5-甲基-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.54(s，1H)，7.43(s，1H)，7.36(m，3H)，7.12(d，1H)，7.04(dd，2H)，6.70(d，1H)，4.88(m，1H)，4.40(d，1H)，3.56(m，3H)，3.12(bs，1H)，2.81(dd，1H)，2.46(s，3H)，2.32(d，1H)，1.49(d，3H)，1.06(d，3H).
3.8(反)-1-(5-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.40(s，1H)；7.61(d，1H)；7.36(d，1H)；7.34(dd，2H)；7.23(dd，1H)；7.03(m，2H)；6.69(d，1H)；4.82(m，1H)；4.34(d，1H)；3.56(m，3H)；3.12(m，1H)；2.80(dd，1H)；2.32(dd，1H)；1.48(d，3H)；1.05(d，3H).
3.9(反)-4-(4-氯芐基)-1-(5-氯-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.35(s，1H)；7.61(d，1H)；7.35(d，1H)；7.32(dd，4H)；7.23(dd，1H)；6.69(d，1H)；4.81(m，1H)；4.34(d，1H)；3.56(m，3H)；3.12(m，1H)；2.80(dd，1H)；2.32(dd，1H)；1.48(d，3H)；1.05(d，3H).
3.10(反)-4-(4-氯芐基)-1-(5-硝基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)8.60(d，1H)；8.33(dd，1H)；7.62(d，1H)；7.36(d，1H)；7.31(dd，4H)；4.61(m，1H)；4.12(m，1H)；3.56(m，3H)；3.11(m，1H)；2.82(dd，1H)；2.32(dd，1H)；1.46(d，3H)；1.08(d，3H).
3.11(反)-1-(5-溴-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氯芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.79(d，1H)；7.49(dd，1H)；7.39(d，1H)；7.31(dd，4H)；7.20(d，1H)；4.63(m，1H)；4.14(m，1H)；3.55(m，3H)；3.09(m，1H)；2.80(dd，1H)；2.30(d，1H)；1.44(d，3H)；1.07(d，3H).
3.12(反)-4-(4-氟芐基)-1-(5-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪
1H NMRδ(CDCl3)7.51(d，1H)；7.34(dd，2H)；7.31(s，1H)；7.23(d，1H)；7.12(d，1H)；7.02(t，2H)；4.67(bs，1H)；4.21(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bs，1H)；3.46(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.49(s，3H)；2.29(d，1H)；1.43(d，3H)；1.07(d，3H).
3.13(反)-4-(4-氟芐基)-1-(6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.42(s，1H)；7.38(d，1H)；7.34(dd，2H)；7.20(m，2H)；7.02(t，2H)；4.68(bs，1H)；4.20(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.59(bs，1H)；3.51(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.32(s，3H)；2.29(d，1H)；1.43(d，3H)；1.06(d，3H).
3.14(反)-4-(4-氟芐基)-1-(6-三氟甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.51(m，2H)；7.28(dd，2H)；7.25(m，2H)；7.02(t，2H)；5.23(bs，1H)；4.15(bs，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.09(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.31(d，1H)；1.44(d，3H)；1.07(d，3H).
3.15(反)-1-(5-氯-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.63(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.17(s，1H)；7.06(s，1H)；7.00(t，2H)；4.66(bs，1H)；4.19(bd，1H)；3.95(s，3H)；3.63(d，1H)；3.59(bd，1H)；3.47(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.30(d，1H)；1.43(d，3H)；1.07(d，3H).
3.16(反)-1-(5-溴-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.81(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.16(s，1H)；7.04(s，1H)；7.02(t，2H)；4.65(bs，1H)；4.19(bd，1H)；3.95(s，3H)；3.62(d，1H)；3.58(bd，1H)；3.47(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.30(d，1H)；1.43(d，3H)；1.07(d，3H).
3.17(反)-4-(4-氟芐基)-1-(6-甲氧基-5-硝基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪
1H NMRδ(CDCl3)8.17(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.24(s，1H)；7.17(s，1H)；7.02(t，2H)；4.62(bs，1H)；4.13(bs，1H)；3.63(d，1H)；3.59(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.10(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.32(d，1H)；1.44(d，3H)；1.07(d，3H).
3.18(反)-1-(5-氯-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.62(s，1H)；7.38(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.17(s，1H)；7.00(t，2H)；4.63(bs，1H)；4.16(bs，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bd，1H)；3.46(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.49(s，3H)；2.30(d，1H)；1.43(d，3H)；1.06(d，3H).
3.19(反)-1-(5-溴-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.82(s，1H)；7.40(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.16(s，1H)；7.02(t，2H)；4.63(bs，1H)；4.15(bs，1H)；3.62(d，1H)；3.59(bs，1H)；3.46(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.51(s，3H)；2.29(d，1H)；1.43(d，3H)；1.06(d，3H).
3.20(反)-1-(5，6-二氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.31(bs，1H)；7.72(s，1H)；7.54(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.03(t，2H)；6.67(d，1H)；4.79(bs，1H)；4.31(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.12(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.32(d，1H)；1.47(d，3H)；1.05(d，3H).
3.21(反)-1-(6-溴-5-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.38(bs，1H)；7.73(s，1H)；7.72(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.03(t，2H)；6.66(d，1H)；4.78(bs，1H)；4.31(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.12(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.32(d，1H)；1.47(d，3H)；1.05(d，3H).
3.22(反)-1-(5-溴-6-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.60(bs，1H)；7.89(s，1H)；7.57(s，1H)；7.35(dd，2H)；7.03(t，2H)；6.66(s，1H)；4.79(bs，1H)；4.32(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.59(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.12(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.33(d，1H)；1.47(d，3H)；1.05(d，3H).
3.23(反)-1-(5-氯-6-三氟甲基-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.93(bs，1H)；7.82(s，1H)；7.75(s，1H)；7.35(dd，2H)；7.03(t，2H)；6.72(d，1H)；4.80(bs，1H)；4.33(bd，1H)；3.67(bs，1H)；3.64(d，1H)；3.48(d，1H)；3.13(bs，1H)；2.81(dd，1H)；2.34(d，1H)；1.49(d，3H)；1.05(d，3H).
實施例44.1(反)-1-(5-氯-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪將5-氯-1-苯并呋喃-2-甲酸(827mg，4.2mmol)的亞硫酰二氯(4ml)溶液回流過夜。真空除去溶劑，以定量產(chǎn)量得到5-氯-1-苯并呋喃-2-羰基氯。
向(反)-1-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪(712mg，3.2mmol)和三乙胺(506mg，5mmol)的CH2Cl2(5ml)冰冷溶液中滴加5-氯-1-苯并呋喃-2-羰基氯(4.2mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液。在室溫下攪拌反應混合物過夜，用0.5M NaOH水溶液洗滌。干燥有機層，濃縮后上樣到快速柱色譜(CHCl3/MeOH；1∶0→10∶1)，得到1.05g(82％)標題化合物。
1H NMRδ(CDCl3)7.59(d，1H)，7.40(d，1H)，7.31(m，3H)，7.17(d，1H)，6.99(dd，2H)，4.61(bs，1H)，4.12(bs，1H)，3.60(m，2H)，3.44(d，1H)，3.06(bs，1H)，2.77(dd，1H)，2.28(d，1H)，1.41(d，3H)，1.04(d，3H).
藥理學方法體外試驗在競爭性結(jié)合親和性測定中，通過測量化合物從CCR1受體置換出125I-Mip-1α的能力，可以確定化合物對CCR1受體的結(jié)合親和性。
Mip-1α在CCR1受體的結(jié)合導致胞內(nèi)鈣濃度升高。在Ca2+流出測定中確定本發(fā)明化合物對CCR1受體的這種生物反應的阻斷能力。
體外競爭性結(jié)合親和性測定法試劑和溶液1.Screen ReadyTMTargets克隆的人CCR1趨化因子受體，在CHO細胞中表達，包被在96孔FlashPlate上(Perkin Elmer Cat#6120525)2.配體將125I-MIP-1α(Perkin Elmer，比活為2200Ci/mmol)用水復溶至25μCi/ml。
3.測定緩沖液50mM HEPES，1mM CaCl2，5mM MgCl2，0.2％BSA，pH7.4。
4.MIP-1α(Peprotech EC Ltd Cat#300-08)。
5.將本發(fā)明化合物溶于DMSO。進行連續(xù)稀釋，每種化合物篩選10個濃度，繪制劑量曲線，IC50值根據(jù)劑量曲線確定。
測定程序?qū)辉贔lashPlate上的細胞膜與125I-MIP-1α一起在不同濃度的化合物存在或不存在下于室溫孵育1小時。各個孔的放射性用微量培養(yǎng)板閃爍計數(shù)器測定。非特異性結(jié)合定義為在1250倍未標記的MIP-1α存在下的結(jié)合。按照生產(chǎn)商的Screen ReadyTMTargets說明書進行測試。在此測定中，證明本發(fā)明化合物對CCR1受體具有親和性。
對人單核細胞的體外Ca2+流出測定法試劑和溶液1.細胞培養(yǎng)a)THP-1(ATCC Cat#TIB202)b)組織培養(yǎng)基補充了10％(v/v)胎牛血清的RPMI 1640和Ultraglutamine 1。在下文中稱該培養(yǎng)基為“生長培養(yǎng)基”。
2.測定緩沖液HBSS(Hanks平衡鹽溶液)，20mM HEPES，1mMCaCl2，1mM MgCl2，2.5mM丙磺舒，pH7.4。
3.Fluo-4AM(Molecular Probes Cat#F14201)
4.PluronicF-127(Molecular Probes Cat#P-6867)5.將本發(fā)明化合物溶于DMSO。進行連續(xù)稀釋，每種化合物篩選9個濃度，繪制劑量曲線，IC50值根據(jù)劑量曲線確定。
6.MIP-1α(Peprotech EC Ltd Cat#300-08)7.Victor21420(Perkin Elmer)8.MicroliteTM2+(Dynex Cat#7572)測定程序在T-75cm2培養(yǎng)瓶中，THP-1細胞在生長培養(yǎng)基中于37℃、5％CO2下生長。離心收獲細胞，重新懸浮于測定緩沖液。在37℃、5％CO2下將細胞加載5μM Fluo-4和0.02％pluronic acid(終濃度)30分鐘。用測定緩沖液洗滌以除去過量染料。將細胞重新懸浮，以105細胞/孔加入到裝有化合物的Microlite板中，然后在37℃、5％CO2下孵育15分鐘。將細胞用MIP-1α刺激，用Victor2測量胞內(nèi)游離Ca2+濃度變化。在此測定中，證明本發(fā)明化合物對THP-1細胞中MIP-1α介導的Ca2+動員具有抑制能力。
小鼠的體內(nèi)生物利用度給予雌性小鼠(SJL/N Tac)一劑靜脈內(nèi)(iv)或口服(po)劑量的每盒5種或6種化合物的混合物(標稱劑量1mg/kg/化合物)，混合物溶于包含0.5％N，N′-二甲基乙酰胺(DMA)和15％磺丁基醚β-環(huán)糊精(Captisol)的溶液。在每個時間點從每個劑量組的一只小鼠采集血樣，直到各自給藥24小時后。各個化合物的劑量制劑和血漿濃度由LC-MS/MS測定。用WinNonlin Professional(4.0.1版)通過非房室分析確定藥代動力學參數(shù)。線性回歸分析對數(shù)血漿濃度-時間曲線的末端斜率，估計消除速率常數(shù)λ。用線性/對數(shù)梯形法則計算血漿濃度-時間曲線下面積AUC0-t。用估計為Cz/λ的剩余面積計算AUCinf。計算的最后時間點的血漿濃度Cz由回歸方程得出?？诜锢枚?F)計算為
F口服＝(AUCinf，po/AUCinf，iv)·(劑量iv/劑量po)。
藥效動力學測定采用Horuk，R.和Ng，H.，Med.Res.Rev.，2000，20，155和Horuk，R.Methods，2003，29，369及其中的參考文獻所介紹的方法，證實了本發(fā)明化合物治療炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病或過度增殖性疾病(例如類風濕性關節(jié)炎、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性腸病或哮喘)的治療功效。
因此，本發(fā)明的一個實施方案提供包含式I化合物的組合物，用于治療炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病或過度增殖性疾病。
利用所述參考文獻中的方法，還證實了本發(fā)明化合物與環(huán)孢菌素A聯(lián)合使用的協(xié)同作用。因此，本發(fā)明的一個實施方案提供包含式I化合物以及低于腎毒性量的環(huán)孢菌素A的組合物。
采用競爭性結(jié)合親和性測定法以及Ca2+流出測定法描述的程序，測試了本發(fā)明不同化合物阻斷Ca2+流出的能力(IC50Ca)。表2列出了部分實施例以及化合物A、B、C和D的試驗結(jié)果，其中所有的IC50值單位都為nM(納摩爾)。表2僅僅示例性說明本發(fā)明，并非對本發(fā)明范圍進行限制。
表2 注解所有2，5-二甲基哌嗪衍生物都合成為外消旋混合物，經(jīng)測試也為外消旋混合物。
本發(fā)明化合物在小鼠中具有口服生物利用度。采用體內(nèi)生物利用度測定法描述的程序，在給予1mg/kg標稱劑量的本發(fā)明的不同化合物后，測試各種化合物的清除率(CL；L/h/kg)、血漿半衰期(t1/2；hrs)以及口服生物利用度(F；％)。表3列出了部分實施例的試驗結(jié)果。表3僅僅示例性說明本發(fā)明，并非對本發(fā)明范圍進行限制。
表3 給藥方法有效量的式(I)化合物優(yōu)選通過常用給藥途徑并配制為常用藥物組合物給予需要這種治療的患者，所述藥物組合物包含有效量的活性成分以及合適的藥用成分。這樣的組合物可以采用各種不同的形式，例如用于口服給藥的溶液劑、混懸劑、乳劑、片劑、膠囊劑和散劑，用于胃腸外給藥的無菌溶液劑，用于直腸給藥的栓劑，或者合適的局部制劑。選擇和制備合適藥物制劑的常規(guī)方法參見例如Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Design，M.B.Aulton，Churchill Livingstone，1988。
治療RA的合適日劑量為0.005mg/kg體重至約10mg/kg體重，優(yōu)選0.025mg/kg體重至2mg/kg體重，這取決于所治療的具體疾病、患者的年齡和體重、以及患者對藥物治療的反應。準確的個體劑量以及日劑量將由醫(yī)生根據(jù)標準醫(yī)學原則確定。
權利要求
1.一種以下通式(I)的化合物或者其藥學上可接受的鹽或溶劑合物 其中X為氟原子或氯原子；位于哌嗪環(huán)2位和5位的兩個甲基彼此為反式構型；Y為NH或O；R1選自氫、氯、溴、硝基、甲基或三氟甲基；R2選自氫、鹵素、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
2.權利要求1的化合物，其中X為氟原子；Y為NH或O；R1選自氫、氯或溴；R2選自氫、氯、溴、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
3.權利要求1或2的化合物，所述化合物是(1)(反)-1-(5-溴-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪；(2)(反)-4-(4-氯芐基)-1-(5-氯-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪；(3)(反)-4-(4-氟芐基)-1-(6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪；(4)(反)-4-(4-氟芐基)-1-(6-三氟甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪；(5)(反)-1-(5-氯-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪；(6)(反)-1-(5-溴-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪；(7)(反)-1-(5-氯-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪；(8)(反)-1-(5-溴-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪；(9)(反)-1-(5，6-二氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪；(10)(反)-1-(6-溴-5-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪；(11)(反)-1-(5-溴-6-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪；(12)(反)-1-(5-氯-6-三氟甲基-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪；(13)(反)-1-(5-氯-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟芐基)-2，5-二甲基哌嗪。
4.一種制備式(I)化合物的方法 該方法包括將式(II)的哌嗪衍生物用式(III)的化合物在有機溶劑中于0℃-120℃處理，其中L1為離去基團。
5.一種組合物，該組合物包含治療有效量的下式(I)的化合物或者其藥學上可接受的鹽或溶劑合物以及藥學上可接受的成分 其中X為氟原子或氯原子；位于哌嗪環(huán)2位和5位的兩個甲基彼此為反式構型；Y為NH或O；R1選自氫、氯、溴、硝基、甲基或三氟甲基；R2選自氫、鹵素、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
6.權利要求5的組合物，所述組合物還包含低于腎毒性量的環(huán)孢菌素A。
7.權利要求1-2的化合物在制備用于治療以下疾病的藥物中的用途炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病或過度增殖性疾病。
8.權利要求7的用途，其中所述藥物用于治療類風濕性關節(jié)炎、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性腸病、同種異體移植物排斥或哮喘。
全文摘要
式(I)的化合物或者其藥學上可接受的鹽或溶劑合物、包含它們的藥物組合物以及它們的治療用途，它們用于治療炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病或過度增殖性疾??；式中X為氟原子或氯原子；位于哌嗪環(huán)2位和5位的兩個甲基彼此為反式構型；Y為NH或O；R
文檔編號C07D307/85GK1918122SQ200480041973
公開日2007年2月21日 申請日期2004年11月23日 優(yōu)先權日2004年2月25日
發(fā)明者E·維爾納, H·桑丁 申請人:活躍生物技術有限公司