專利名稱：一種具噻吩和炔烯鍵的化合物、其制備方法和其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物，具體地說，本發(fā)明涉及一種具噻吩和炔烯鍵的化合物、其制備方法和其用途。
背景技術(shù)：
光照能夠提高藥物的藥效，光能作為藥物發(fā)揮藥效的一個(gè)激發(fā)因子已經(jīng)應(yīng)用于農(nóng)藥和醫(yī)藥中。光照能使一些農(nóng)藥對有害生物的活性大幅度提高，這類農(nóng)藥稱為光活化農(nóng)藥。由于高毒高殘留農(nóng)藥引發(fā)的人畜中毒、食品安全、有害生物抗藥性等問題越來越受到人們的關(guān)注，許多國家在不斷加強(qiáng)對高毒高殘留農(nóng)藥的管理，鼓勵(lì)發(fā)展高效低毒、對環(huán)境安全的農(nóng)藥，即環(huán)境和諧型農(nóng)藥。光活化農(nóng)藥就是一類優(yōu)良的環(huán)境和諧型農(nóng)藥。
光活化農(nóng)藥是一類具有全新設(shè)計(jì)思路的農(nóng)藥，它利用陽光和氧氣來殺蟲、殺菌、除草或殺滅其它有害生物，活性成分僅僅是傳輸光能的介質(zhì)，發(fā)揮作用的過程也是活性成分本身光降解的過程，所以活性成分不會(huì)在環(huán)境中持久殘留。由于光和氧是生態(tài)環(huán)境中兩個(gè)無所不在的自然因子，與農(nóng)藥發(fā)揮藥效的條件達(dá)到了統(tǒng)一，因而光活化農(nóng)藥被稱為生態(tài)農(nóng)藥。光活化農(nóng)藥具有諸多優(yōu)點(diǎn)
第一，光活化農(nóng)藥的活性成分在自然界能徹底降解，無殘留，不污染環(huán)境，不通過食物鏈被生物富集，環(huán)境相容性很好。
第二，光活化農(nóng)藥具有廣泛的生物活性。光活化農(nóng)藥依靠光照激發(fā)產(chǎn)生的活性氧或自由基來發(fā)揮毒殺活性，活性氧或自由基的靶標(biāo)包括生物膜和生物大分子等，這種特殊的作用機(jī)理使光活化農(nóng)藥不僅能殺蟲、除草，還能殺滅真菌、細(xì)菌、病毒等微生物和其它有害生物。
第三，光活化農(nóng)藥具有極高的生物活性。光活化農(nóng)藥依靠光照激發(fā)產(chǎn)生的活性氧或自由基來攻擊靶標(biāo)，在這個(gè)過程中活性成分本身并不參與毒性反應(yīng)，而是傳遞能量的介質(zhì)，僅僅起到催化劑的作用，一個(gè)分子從被激發(fā)到回到基態(tài)，大約只要10ms或更短的時(shí)間，如一個(gè)染料分子能在“吸收能量——躍遷到激發(fā)態(tài)——向底物轉(zhuǎn)移能量——回到基態(tài)”的過程中循環(huán)，整個(gè)過程需要約10ms，所以一個(gè)染料分子能在1min內(nèi)完成數(shù)千次反應(yīng)，產(chǎn)生數(shù)千個(gè)1O2，一個(gè)染料分子有數(shù)千個(gè)靶標(biāo)分子，而不象其它殺蟲劑(如有機(jī)磷類)的一個(gè)分子只有一個(gè)靶標(biāo)分子。這種特殊的作用方式使光活化農(nóng)藥在接受光照后的活性大幅度增加，有些甚至達(dá)到數(shù)千倍，所以用極低的劑量就可以達(dá)到理想的效果。
第四，有害生物對光活化農(nóng)藥的抗性發(fā)展緩慢，無交互抗性。光活化農(nóng)藥產(chǎn)生的活性氧和自由基有很多作用位點(diǎn)，這種特殊的作用方式不易引發(fā)抗性，也不易與傳統(tǒng)的單靶標(biāo)農(nóng)藥產(chǎn)生交互抗性。
光活化農(nóng)藥高效、低毒、不污染環(huán)境、沒有持久殘留，順應(yīng)了當(dāng)前農(nóng)藥的發(fā)展要求，代表著農(nóng)藥發(fā)展的方向，是理想的環(huán)境和諧型農(nóng)藥，具有廣闊的前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有光活化殺蟲、殺菌、除草、殺微生物活性的化合物。
本發(fā)明的另一目的是提供一種從黃纓菊(Xanthopappussubacaulis C.Winkl.)中提取此類化合物的方法。
本發(fā)明所提供的化合物用下述通式(I)表示
其中R1、R2、R3和R4分別是氫、低級(jí)烷基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、
A表示氫、低級(jí)烷基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、
k＝1～10，m＝0～20，n＝1～10。
其中，R1、R2、R3和R4分別優(yōu)選為氫、低級(jí)烷基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、
上述低級(jí)烷基是-CH3、-C2H5；鹵素是-F、-Cl、-Br、-I；低級(jí)烷氧基是-OCH3、-OC2H5。
進(jìn)一步講，R1、R2、R3和R4分別更優(yōu)選為氫、-CH3、
k＝2，m＝0，n＝1。
本類化合物可采用偶聯(lián)的方法合成。以取代噻吩乙炔為原料，然后與其它所需端炔偶聯(lián)合成目標(biāo)化合物，反應(yīng)通式如下圖
上述化合物可用于制備殺蟲殺菌劑或除草劑。
當(dāng)R1是-H，R2是-H，R3是-H，R4是-CH3，k＝2，m＝0，n＝1時(shí)，此化合物名稱為2-(反)-庚-5-烯-1，3-二炔基噻吩(黃纓菊素A)，結(jié)構(gòu)式如下
當(dāng)R1為
,R2是-H，R3是-H，R4是-CH3，
k＝2，m＝0，n＝1時(shí)，此化合物名稱為5-(2-氯-1-羥基乙基)-2-(反)-庚-5-烯-1，3-二炔基噻吩(黃纓菊素C)，結(jié)構(gòu)式如下
當(dāng)R1為
R2是-H，R3是-H，R4是-CH3，k＝2，m＝0，n＝1時(shí)，此化合物名稱為1，2-二-(5-庚-5-烯-1，3-二炔基噻吩-2-基)-2-羥基-1，4-戊二酮(黃纓菊素F)，結(jié)構(gòu)式如下
黃纓菊素A、C、F是從我國特有植物黃纓菊(Xanthopappussubacaulis C.Winkl.)中用硅膠柱層析、凝膠柱層析和硅膠薄層制備等方法分離出的化合物，波譜數(shù)據(jù)如下
黃纓菊素A、C的1H NMR數(shù)據(jù)(CDCl3為溶劑)1)
1)數(shù)據(jù)是通過1H-1H COSY，13C-1H COSY，和HMBC等二維核磁共振譜歸屬。
黃纓菊素A、C的13C NMR數(shù)據(jù)(CDCl3為溶劑)1)
1)數(shù)據(jù)是通過1H-1H COSY，13C-1H COSY，和HMBC等二維核磁共振譜歸屬。
黃纓菊素F的1H和13C NMR數(shù)據(jù)(CDCl3為溶劑)1)
1)數(shù)據(jù)是通過1H-1H COSY，13C-1H COSY，和HMBC等二維核磁共振譜歸屬。黃纓菊素A、C、F的紫外吸收光譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)
黃纓菊素AUV(CH3CN)λmax(logε)nm206.00(4.31)，251.50(4.22)，312.50(4.08)；APCIMS m/z(相對豐度)172[M]+(47)，171[M-H]+(34)，144[M-C2H4]+(32)；HRTOFMS m/z173.0428[M+H]+，其分子式為C11H8S，分子量為172。
黃纓菊素CUV(CH3CN)λmax(logε)nm209.20(4.37)，268.20(4.44)；APCIMS m/z(相對豐度)250[M]+(38)，201[M-CH2Cl]+(100)，171[M-CH2ClCH(OH)]+(18)；HRTOFMS m/z273.0112[M+Na]+；分子式為C13H11OSCl，分子量為250。
黃纓菊素FUV(CH3CN)λmax(logε)nm215.40(4.72)，269.00(4.83)，352.80(4.52)；APCIMS m/z(相對豐度)456[M]+(4)，398[M-CH3COCH3]+(17)，370[M-CH3COCH3-CO]+(9)，257[M-HCOC4H2SC≡CC≡CCH＝CHCH3]+(25)，200[HCOC4H2SC≡CC≡CCH＝CHCH3]+(18)，199[HCOC4H2SC≡CC≡CCH＝CHCH3-H]+(100)，171(6)；HRTOFMSm/z479.0737[M+Na]+，分子式為C27H20O3S2，分子量為456。
本發(fā)明提供的化合物，不僅能殺蟲、除草，還能殺滅真菌、細(xì)菌、病毒等微生物，在光照條件下的活性大幅度提高。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)
1、提供了一類結(jié)構(gòu)新穎的具噻吩和炔烯鍵的化合物。
2、本發(fā)明提供的具噻吩和炔烯鍵的化合物，不僅能殺蟲、除草，還能殺滅真菌、細(xì)菌、病毒等微生物，在光照條件下的活性大幅度提高。
3、本發(fā)明提供的具噻吩和炔烯鍵的化合物能徹底降解，沒有殘留，不通過食物鏈被生物富集，環(huán)境相容性很好，對人畜安全。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
制備實(shí)施例1
用化學(xué)合成的途徑制備時(shí)可采用1-(2′-噻吩基)-1，3-二炔-5-庚烯的化學(xué)合成方法，化學(xué)反應(yīng)步驟如下
在100ml三口瓶中加入氫氧化鈉3.66g(0.92mol)，冰浴冷卻至0℃，滴加溴3.898g(0.0244mol)。于0℃反應(yīng)2h，再降至-4℃，然后滴加噻吩乙炔(10mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下自然升至室溫，避光反應(yīng)50h，乙醚萃取，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下減壓蒸餾除溶劑，得1-溴-噻吩乙炔，用于下一步反應(yīng)。
將3-戊烯-1-炔(1.5mmol)和1-溴-噻吩乙炔(1mmol)溶于無水四氫吡咯，通入氮?dú)獾榷栊詺怏w保護(hù)，加入碘化亞銅(0.1mmol)，于室溫?cái)嚢?h。加入飽和氯化銨水溶液終止反應(yīng)，用乙醚萃取，用無水MgSO4干燥，減壓除去溶劑，過硅膠柱進(jìn)一步純化，得產(chǎn)物1-(2′-噻吩基)-1，3-二炔-5-庚烯。
制備實(shí)施例2
用化學(xué)合成的途徑制備時(shí)也可采用1-(2′-噻吩基)-1，3-二炔-6，8-癸二烯的化學(xué)合成方法，化學(xué)反應(yīng)步驟如下
在100ml三口瓶中加入氫氧化鈉3.66g(0.92mol)，冰浴冷卻至0℃，滴加溴3.898g(0.0244mol)。于0℃反應(yīng)2h，再降至-4℃，然后滴加噻吩乙炔(10mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下自然升至室溫，避光反應(yīng)50h，用乙醚萃取，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下減壓蒸餾除溶劑，得1-溴-噻吩乙炔用于下一步反應(yīng)。
將3-氯丙炔(1.5mmol)和1-溴-噻吩乙炔(1mmol)溶于無水四氫吡咯，通入氮?dú)獾榷栊詺怏w保護(hù)，加入碘化亞銅(0.1mmol)，室溫?cái)嚢?h。加入飽和氯化銨水溶液終止反應(yīng)，用乙醚萃取，用無水MgSO4干燥，減壓除去溶劑，過硅膠柱進(jìn)一步純化，得產(chǎn)物5-氯-1-(2′-噻吩基)-1，3-戊二炔。
在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向三口燒瓶中加入50ml無水乙醚、1mmol的5-氯-1-(2′-噻吩基)-1，3-戊二炔和10mmol的潔凈金屬鎂，然后加入少量碘單質(zhì)開始反應(yīng)，回流1h，快速攪拌下滴加1，3-戊二烯的無水乙醚溶液，滴加完畢后回流4h，減壓除溶劑，過硅膠柱進(jìn)一步純化，得產(chǎn)物1-(2′-噻吩基)-1，3-二炔-6，8-癸二烯。
制備實(shí)施例3
用化學(xué)合成的途徑制備時(shí)可采用2-{5-(庚-5-烯-1，3-二炔)噻吩-2-基}噻吩的合成方法，反應(yīng)步驟如下
在100ml三口瓶中加入氫氧化鈉4g(0.1mol)，冰浴冷卻至0℃，滴加溴4g(0.025mol)。于0℃反應(yīng)2h，再降至-4℃，然后滴加5-乙炔基-2，2′-二聯(lián)噻吩(10mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下自然升至室溫，避光反應(yīng)72h，用乙醚萃取，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下減壓蒸餾除溶劑，得2-{5-(2′-溴-乙炔)噻吩-2-基}噻吩粗品直接用于下一步反應(yīng)。
將3-戊烯-1-炔(1.5mmol)和2-{5-(2′-溴-乙炔)噻吩-2-基}噻吩(1mmol)溶于無水四氫吡咯，通入氮?dú)獾榷栊詺怏w保護(hù)，加入碘化亞銅(0.1mmol)，于室溫?cái)嚢?h。加入飽和氯化銨水溶液終止反應(yīng)，用乙醚萃取，用無水MgSO4干燥，減壓除去溶劑，過硅膠柱進(jìn)一步純化，得產(chǎn)物2-{5-(庚-5-烯-1，3-二炔)噻吩-2-基}噻吩。
生物實(shí)施例1
實(shí)驗(yàn)證明，在光照條件下，本發(fā)明提供的具噻吩和炔烯鍵的化合物對昆蟲的毒殺活性大幅度提高，對白紋伊蚊4齡幼蟲的毒殺活性見表1。
對白紋伊蚊4齡幼蟲的生物活性測定方法將待測樣品先用少量丙酮溶解，然后加入脫氯自來水中，丙酮/水的體積比控制在2％以下，配120mL藥液，將配好的藥液分作6等份(每份20mL)轉(zhuǎn)入6只100mL燒杯，分別向每只燒杯中加入30頭幼蟲，避光使蚊幼蟲吸藥3h后將6只燒杯分作兩組，每組3只燒杯作為3次重復(fù)，將其中的一組繼續(xù)避光，另一組放于UV-A紫外燈下(光照強(qiáng)度為2074μW/cm2)光照1.5h后也置于相同的避光環(huán)境中，光照結(jié)束后向所有燒杯中加入少量的酵母粉供試蟲取食。光照結(jié)束后24h調(diào)查死蟲數(shù)，按下式計(jì)算死亡率
對照組含有與處理組等量的丙酮。
測試出活性化合物對試蟲的致死中濃度值(LC50)后，按下式計(jì)算每種化合物的光活化比
表1活性化合物對白紋伊蚊4齡幼蟲的LC50值(24h)
化合物1～15的結(jié)構(gòu)如下
化合物1
化合物2
化合物3
化合物4
化合物5
化合物6
化合物7
化合物8
化合物9
化合物10
化合物11
化合物12
化合物13
化合物14
化合物15
生物實(shí)施例2
實(shí)驗(yàn)證明，在光照條件下，本發(fā)明提供的具噻吩和炔烯鍵的化合物對昆蟲的毒殺活性大幅度提高，對斜紋夜蛾3齡幼蟲的毒殺活性見表2。
對斜紋夜蛾3齡幼蟲的生物活性測定方法(注射法)將化合物配成系列濃度的藥液，用微量注射器向每頭幼蟲的腹腔注入1μL藥液，然后將試蟲置于保濕的培養(yǎng)皿中并加入少量木署葉片供取食，每皿20頭蟲，每濃度重復(fù)10次，避光3h后分作兩組，每組5皿作為5次重復(fù)，將其中的一組繼續(xù)避光，另一組放于UV-A紫外燈下(光照強(qiáng)度為2074μW/cm2)光照1.5h后也置于相同的避光環(huán)境中，光照結(jié)束后24h調(diào)查死蟲數(shù)，按下式計(jì)算死亡率
測試出活性化合物對試蟲的致死中量值(LD50)后，按下式計(jì)算每種化合物的光活化比
表2活性化合物對斜紋夜蛾3齡幼蟲的LD50值(24h)
注化合物1～15的結(jié)構(gòu)同生物實(shí)施例1。
生物實(shí)施例3
實(shí)驗(yàn)證明，在光照條件下，本發(fā)明提供的具噻吩和炔烯鍵的化合物的除草活性大大增強(qiáng)，用稗草小杯法測定的除草活性見表3。
除草活性試驗(yàn)方法(稗草小杯法)在100mL燒杯底部先鋪滿一層大小一致、直徑約2mm的玻璃珠(到20mL刻度)，再放入與燒杯內(nèi)徑大小一致的濾紙，加入配制好的待測藥劑10mL，以加蒸餾水為對照。播種出芽一致的稗草(Echinochloacrus galli)種子(芽長0.5～1.0mm)12粒，在28℃黑暗培養(yǎng)箱培養(yǎng)20h后取出，先在波長300～400nm范圍的紫外燈下(光照強(qiáng)度為2074μW/cm2)照射2h，再放入黑暗培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)50h，測量稗草幼苗的根莖鮮重。每處理重復(fù)3次。同樣方法在無紫外光照射下，在黑暗培養(yǎng)箱培養(yǎng)72h，測量無紫外光照下稗草幼苗的根莖鮮重。按下式分別計(jì)算在光照和無光照下的鮮重抑制率，計(jì)算抑制中濃度值(IC50)。同時(shí)計(jì)算藥劑的光活化比。
表3活性化合物對稗草鮮重的IC50值(72h)
注化合物1～15的結(jié)構(gòu)同生物實(shí)施例1。
生物實(shí)施例4
實(shí)驗(yàn)證明，在光照條件下，本發(fā)明提供的具噻吩和炔烯鍵的化合物的殺線蟲活性大大增強(qiáng)，對南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita)的活性見表4。
對南方根結(jié)線蟲的活性試驗(yàn)方法(藥液浸泡法)試驗(yàn)在24孔細(xì)胞板內(nèi)進(jìn)行，先向各樣品孔注入相同體積的線蟲懸浮液，再根據(jù)試驗(yàn)濃度加入相應(yīng)量的藥劑母液并補(bǔ)充無菌水，使各樣品孔內(nèi)的藥液總體積相同，混合均勻后置于22～24℃、濕度80％～90％的避光培養(yǎng)箱中，每處理10重復(fù)，每重復(fù)50～100條線蟲。避光培養(yǎng)3h后分作兩組，每組5重復(fù)，將其中的一組用UV-A紫外燈(光照強(qiáng)度為2074μW/cm2)照射1h，另一組仍避光培養(yǎng)，待光照組光照處理結(jié)束后將所有處理置于恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)20h后檢查結(jié)果。按下式計(jì)算死亡率
測試出活性化合物對供試線蟲的致死中濃度值(LC50)后，按下式計(jì)算每種化合物的光活化比
表4活性化合物對南方根結(jié)線蟲的LC50值(24h)
注化合物1～15的結(jié)構(gòu)同生物實(shí)施例1。
生物實(shí)施例5
實(shí)驗(yàn)證明，在光照條件下，本發(fā)明提供的具噻吩和炔烯鍵的化合物的殺真菌活性大大增強(qiáng)，對水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)的活性見表5。
對水稻紋枯病菌的活性試驗(yàn)方法(含毒介質(zhì)培養(yǎng)法)按配制1000mL瓊脂培養(yǎng)基的比例稱取馬鈴薯、葡萄糖和水的量，煮成馬鈴薯加葡萄糖湯，待冷卻后，向每個(gè)三角瓶準(zhǔn)確注入49mL，然后按常用瓊脂培養(yǎng)基的比例計(jì)算稱取49mL培養(yǎng)液所需要的瓊脂量，逐個(gè)加入裝有營養(yǎng)湯的三角瓶中(瓊脂稱前剪碎，加入的瓊脂必須能被營養(yǎng)湯浸濕)，經(jīng)高壓滅菌備用。將已準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基加熱融化，冷卻至50～55℃時(shí)加入1mL供試藥液(濃度是供試濃度的50倍)，充分搖勻后迅速倒入消毒培養(yǎng)皿中，待凝固后標(biāo)記各皿藥劑名稱及濃度，對照組的培養(yǎng)基加1mL無菌水。在避光條件下，以無菌操作，用切種環(huán)切取一塊純粹培養(yǎng)的菌種移植于各個(gè)凝固培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央，置于恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)4h后分作兩組，將其中的一組在UV-A紫外燈下(光照強(qiáng)度為2074μW/cm2)光照2h，另一組仍避光培養(yǎng)，待光照組光照處理結(jié)束后將所有處理置于恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)36h后檢查結(jié)果，量度菌落直徑大小，以菌落直徑長度表示，按下式計(jì)算抑制百分率
由一系列濃度的抑制百分率計(jì)算出抑制中濃度值(IC50)后，按下式計(jì)算每種化合物的光活化比
表5活性化合物對水稻紋枯病菌的IC50值(36h)
注化合物1～15的結(jié)構(gòu)同生物實(shí)施例1。
生物實(shí)施例6
實(shí)驗(yàn)證明，在光照條件下，本發(fā)明提供的具噻吩和炔烯鍵的化合物的殺細(xì)菌活性大大增強(qiáng)，對金黃色葡萄球菌(26076)的活性見表6。
對金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(26076)的活性試驗(yàn)方法(比濁法)制備水解酪蛋白(Mueller-Hinton)肉湯培養(yǎng)基(MH肉湯培養(yǎng)基)，分裝于試管中，每支9mL，滅菌后加入藥液配成一系列濃度梯度，然后接入相同量的菌液，以無藥MH肉湯培養(yǎng)基接種相同菌液作為對照，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h后分作兩組，將其中的一組在UV-A紫外燈下(光照強(qiáng)度為2074μW/cm2)光照1h，另一組仍避光培養(yǎng)，待光照組光照處理結(jié)束后將所有處理置于恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)15h后檢查結(jié)果，用721型分光光度計(jì)在480nm測定各處理液的吸光度，計(jì)算生長抑制率并計(jì)算出抑制中濃度值(IC50)，按下式計(jì)算每種化合物的光活化比
表6活性化合物對金黃色葡萄球菌的IC50值(15h)
注化合物1～15的結(jié)構(gòu)同生物實(shí)施例1。
生物實(shí)施例7
實(shí)驗(yàn)證明，在光照條件下，本發(fā)明提供的具噻吩和炔烯鍵的化合物對病毒有抑制作用，對流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1的活性見表7。
對流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1的活性測定方法(免疫熒光法)將長成單層的Hep-1細(xì)胞板感染FM1(100TCID50)，置37℃ CO2恒溫培養(yǎng)箱吸附1h后，用0.01mol/L、pH7.4PBS緩沖液洗去游離病毒，加入含不同化合物(使化合物在培養(yǎng)體系中的最終濃度為100μg/mL)的維持液避光培養(yǎng)3h后分作2組，將其中的一組在UV-A紫外燈下(光照強(qiáng)度為2074μW/cm2)光照1h，另一組仍避光培養(yǎng)，待光照組光照處理結(jié)束后將所有處理繼續(xù)避光培養(yǎng)。分別于吸附后10h吸去4孔含藥維持液，用PBS洗2次，用95％乙醇固定10min。染色時(shí)先加入相應(yīng)的兔抗FM1免疫血清，置37℃培養(yǎng)2h，取出用PBS沖洗，再抗羊抗兔IgG-FITC標(biāo)記抗體，用上述同樣方法進(jìn)行培養(yǎng)漂洗，最后用落射熒光顯微鏡觀察特異熒光細(xì)胞量。根據(jù)占整個(gè)細(xì)胞面的比例分為5級(jí)(0級(jí)0％；1級(jí)小于5％；2級(jí)5％～10％；3級(jí)10％～30％；4級(jí)大于30％)。
表7活性化合物對流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1在細(xì)胞內(nèi)增殖的影響(10h)
注化合物1～15的結(jié)構(gòu)同生物實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1、下述通式(I)化合物
其中R1、R2、R3和R4分別是氫、低級(jí)烷基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、
A表示氫、低級(jí)烷基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、
k＝1～10，m＝0～20，n＝1～10。
2、如權(quán)利要求1所述的化合物，其中，R1、R2、R3和R4分別是氫、低級(jí)烷基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、
3、如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中，低級(jí)烷基是-CH3、-C2H5；鹵素是-F、-Cl、-Br、-I；低級(jí)烷氧基是-OCH3、-OC2H5。
4、如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中，R1、R2、R3和R4分別是氫、-CH3、
k＝2，m＝0，n＝1。
5、如權(quán)利要求1或2所述的化合物的制備方法，其特征在于，采用偶聯(lián)的方法，以取代噻吩乙炔為原料，然后與其它所需端炔偶聯(lián)合成所述化合物。
6、權(quán)利要求1或2所述的化合物在制備殺蟲劑或殺菌劑中的應(yīng)用。
7、權(quán)利要求1或2所述的化合物在制備除草劑中的應(yīng)用。
8、權(quán)利要求1或2所述的化合物在制備治療流感藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類結(jié)構(gòu)新穎的具噻吩和炔烯鍵的化合物。該化合物，不僅能殺蟲、除草，還能殺滅真菌、細(xì)菌、病毒等微生物，在光照條件下的活性大幅度提高。此類化合物能徹底降解，沒有殘留，不通過食物鏈被生物富集，環(huán)境相容性很好，對人畜安全。
文檔編號(hào)C07D333/00GK1709889SQ200510012140
公開日2005年12月21日 申請日期2005年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月8日
發(fā)明者徐漢虹, 田永清, 魏孝義 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)