專利名稱:淫羊藿堿a的分離提取方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明屬于淫羊藿堿A的分離提取方法。
背景技術(shù):
淫羊藿(Herba Epimedii)又名仙靈脾,系小檗科(Berberbidaceae)淫羊藿屬(Epimedium)植物的地上干燥部分,具有補腎壯陽,強筋骨,祛風(fēng)濕之功效,現(xiàn)代藥理研究表明,淫羊藿還具有防治骨質(zhì)疏松、提高免疫系統(tǒng)功能作用等。2000年版中國藥典收載了5種淫羊藿屬植物,朝鮮淫羊藿是其中的一種,且為長白山道地中藥材之一。朝鮮淫羊藿中化學(xué)成分的研究多集中在黃酮類化合物方面,而對其生物堿類化合物的研究較少,自1957年發(fā)現(xiàn)木蘭堿后,一直未有該方面的報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種淫羊藿堿A的分離提取方法。
生物堿一般是指存在于植物中的堿性含氮化合物,許多生物堿是極有價值的藥物。自1957年在朝鮮淫羊藿中發(fā)現(xiàn)木蘭堿后,一直未有該方面的報道。本發(fā)明先從朝鮮淫羊藿葉片中提取總生物堿,將總堿純化,然后采用柱層析分離,最后用高效液相色譜法進一步分離、純化,得到純品。采用核磁、傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜、紅外光譜技術(shù),確定化合物的結(jié)構(gòu),為淫羊藿堿A。這種生物堿是首次在朝鮮淫羊藿葉片中分離得到的新化合物。
本發(fā)明首先從朝鮮淫羊藿葉片中提取總生物堿,用90-95%乙醇回流,提取液經(jīng)濃縮、過濾、除葉綠素,得到總生物堿;總堿以0.2-0.5%的HCl或H2SO4水溶液處理,過濾除去不溶于水的親脂性雜質(zhì),再將HCl或H2SO4的酸水液用氨水調(diào)至pH為9.5-10.5,使生物堿游離,用氯仿萃取即得較純的總生物堿。然后采用硅膠柱,氯仿-甲醇-氨水體系進行柱層析,并收集餾分,濃縮后通過堿性三氧化二鋁層析柱,用氯仿作洗脫劑進行洗脫,收集餾分,濃縮。
用高效液相色譜a條件進行分離,收集保留時間為9-12min的餾分;將餾分蒸干溶于甲醇和甲酸水的體系,二者的體積比為,甲醇∶甲酸水=1-1.5∶10-10.5、pH=3-3.5,加入氯仿,水層以氨水調(diào)至pH為9.5-10.5,平衡后,將氯仿層用高效液相色譜b條件進行分離,收集保留時間為10.45-11.15min的組分,揮干溶劑,得淡黃色粉末,mp 298℃~299℃。
液相條件a,流動相為乙睛∶水=50∶50-52;流速4ml/min,色譜柱YWG-C18,ID 11mm×30cm,30μm,波長210nm,進樣1ml,總體積50ml氯仿,柱溫30℃;液相條件b,流動相為乙睛∶水=1∶1-1.1,流速1ml/min,色譜柱YWG-C18,ID 4.6mm×250mm,30μm,波長210nm,柱溫30℃。
采用核磁、傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜、紅外光譜技術(shù),確定新化合物的結(jié)構(gòu)。
附圖1是淫羊藿堿A的結(jié)構(gòu)式。
依據(jù)圖1的結(jié)構(gòu)式命名為6-羥基-11,12-二甲氧基-2,2-二甲基-1,8-二氧-1,3,4,8-四氫-2H-7-氧雜-2-氮鎓-苯并[c]菲,簡稱淫羊藿堿A。
附圖2FT-ICRMS高分辨質(zhì)譜圖FT-ICRMS高分辨質(zhì)譜給出分子式為C20H20O6N1,分子量為370.1285012(M+),不飽和度為11.5。
附圖3IR譜圖IR cm-13371~3241(OH);1079(OH);2951、2907、1463、1412、1376(CH2、CH3);3081、1598、1544、842、788、679(Ph-H);1713、1754(C=O);1132~1304(C-C、C-N、C-O、-C-O-C-)。
附圖41HNMR譜圖1HNMR(400MHz,CDCl3),在δ(ppm)2.633(2H,t,J=7.6Hz);3.484(2H,t,J=7.6Hz);7.162(1H,s);8.168與8.190(1H,d,J=8.8Hz);7.288與7.310(1H,d,J=8.8Hz)處可觀察到由3,4,5,9,10-H引起的峰信號;在2.373(6H,s);4.10(6H,s)處可見到N-CH3氫、O-CH3氫引起的峰信號。
附圖5、613CNMR譜圖及Dept譜根據(jù)13C-NMR(400MHz,CDCl3)譜和Dept譜,δ(ppm)158.531(C-1),157.494(C-8)均歸屬>C=O;δ60.129(C-3),32.834(C-4),136.491(C-4a),116.452(C-4b),111.246(C-5),151.058(C-6),118.123(C-6a),126.776(C-9),108.971(C-9a),137.597(C-9b),118.831(C-9c),116.452(C-10),150.760(C-11),144.250(C-12),56.513、56.414(O-CH3上的C),45.152(N-CH3上的2個C)。
具體實施例方式
實施例1將淫羊藿葉片3kg用95%乙醇回流提取3次,每次提取2小時,合并提取液,減壓濃縮得深綠色溶液,除去葉綠素,即得總生物堿。將總堿以0.2%鹽酸水溶液溶解,過濾除去不溶于水的親脂性雜質(zhì),再將酸水液用氨水堿化至pH=9.5,使生物堿游離,用氯仿萃取即得較純的總生物堿。用酸堿反復(fù)轉(zhuǎn)溶2次。
將總堿通過硅膠柱層析,依次用不同梯度的洗脫劑洗脫,洗脫液用電噴霧質(zhì)譜監(jiān)測,收集洗脫劑為氯仿∶甲醇∶氨水=10∶3∶0.6的餾分,濃縮后通過堿性三氧化二鋁層析柱,用氯仿作洗脫劑,收集餾分,濃縮。用高效液相色譜a條件進行分離,流動相比例乙睛∶水=50∶50,其它條件如a,收集保留時間為9-12min的餾分;將此餾分蒸干溶于甲醇∶甲酸水=1.5∶10的體系,甲酸水的pH=3,加入氯仿,水層以氨水調(diào)pH=10.5,平衡后,將氯仿層用高效液相色譜b條件進行分離,流動相比例采用,乙睛∶水=1∶1,收集保留時間為11.01min的組分揮干溶劑,得淡黃色粉末38mg。
實施例2將淫羊藿葉片3.5kg用90%乙醇回流提取2次,每次提取3小時,合并提取液,減壓濃縮得深綠色溶液,除去葉綠素,即得總生物堿。將總堿以0.5%鹽酸水溶液溶解,過濾除去不溶于水的親脂性雜質(zhì),再將酸水液用氨水堿化至pH=10,使生物堿游離,用氯仿萃取即得較純的總生物堿。用酸堿反復(fù)轉(zhuǎn)溶2次。
將總堿通過硅膠柱層析,依次用不同梯度的洗脫劑洗脫,洗脫液用電噴霧質(zhì)譜監(jiān)測,收集洗脫劑為氯仿∶甲醇∶氨水=9.5∶2.8∶0.5的餾分,濃縮后通過堿性三氧化二鋁層析柱,用氯仿作洗脫劑,收集餾分,濃縮。用高效液相色譜a條件進行分離,收集保留時間為9-12min的餾分;將此餾分蒸干溶于甲醇∶甲酸水=1∶10的體系,甲酸水的pH為3.2,加入氯仿,水層以氨水調(diào)至pH=10,平衡后,將氯仿層用用高效液相色譜b條件進行分離,流動相比例采用,乙睛∶水=1∶1.1,收集保留時間為10.45min的組分揮干溶劑,得淡黃色粉末49mg。
實施例3將淫羊藿葉片3.5kg用95%乙醇回流提取2次,每次提取3小時,合并提取液,減壓濃縮得深綠色溶液,除去葉綠素,即得總生物堿。將總堿以0.4%鹽酸水溶液溶解,過濾除去不溶于水的親脂性雜質(zhì),再將酸水液用氨水堿化至pH=10.5,使生物堿游離,用氯仿萃取即得較純的總生物堿。用酸堿反復(fù)轉(zhuǎn)溶2次。
將總堿通過硅膠柱層析,依次用不同梯度的洗脫劑洗脫,洗脫液用電噴霧質(zhì)譜監(jiān)測,收集洗脫劑為氯仿∶甲醇∶氨水=10.5∶3.2∶0.7的餾分,濃縮后通過堿性三氧化二鋁層析柱,用氯仿作洗脫劑,收集餾分,濃縮。用高效液相色譜a條件進行分離,收集保留時間為9-12min的餾分;將此餾分蒸干溶于甲醇∶甲酸水=1.5∶10.5的體系,甲酸水的pH=3.5,加入氯仿,水層以氨水調(diào)至pH 9.5,平衡后,將氯仿層用用高效液相色譜b條件進行分離,流動相比例采用,乙睛∶水=1∶1.收集保留時間為11.15min的組分,揮干溶劑,得淡黃色粉末43mg。
權(quán)利要求
1.一種淫羊藿堿A具有如下結(jié)構(gòu)
2.一種如權(quán)利要求1所述淫羊藿堿A的分離提取方法,其特征是從朝鮮淫羊藿葉片中提取總生物堿,用90-95%乙醇回流,提取液經(jīng)濃縮、過濾、除葉綠素,得到總生物堿;總堿以0.2-0.5%的HCl或H2SO4水溶液處理,過濾除去不溶于水的親脂性雜質(zhì),再將HCl或H2SO4的酸水液用氨水調(diào)至pH為9.5-10.5,使生物堿游離,用氯仿萃取即得較純的總生物堿,然后采用硅膠柱,氯仿—甲醇—氨水體系進行柱層析,并收集餾分,濃縮后通過堿性三氧化二鋁層析柱,用氯仿作洗脫劑進行洗脫,收集餾分,濃縮;用高效液相色譜a條件進行分離,收集保留時間為9-12min的餾分;將餾分蒸干溶于甲醇和甲酸水的體系,二者的體積比為,甲醇∶甲酸水=1-1.5∶10-10.5、pH=3-3.5,加入氯仿,水層以氨水調(diào)至pH為9.5-10.5,平衡后,將氯仿層用高效液相色譜b條件進行分離,收集保留時間為10.45-11.15min的組分,揮干溶劑,得淡黃色粉末,mp298℃~299℃;液相條件a,流動相為乙睛∶水=50∶50-52;流速4ml/min,色譜柱YWG-C18,ID 11mm×30cm,30μm,波長210nm,進樣1ml,總體積50ml氯仿,柱溫30℃;液相條件b,流動相為乙睛∶水=1∶1-1.1,流速1ml/min,色譜柱YWG-C18,ID 4.6mm×250mm,30μm,波長210nm,柱溫30℃。
全文摘要
本發(fā)明屬于淫羊藿堿A的分離提取方法。該化合物是從本屬植物中首次分離得到的。首先將一定量的朝鮮淫羊藿葉片用乙醇提取,提取液經(jīng)濃縮、過濾、除葉綠素,得到總生物堿;再將總堿用酸堿反復(fù)轉(zhuǎn)溶,得到較純的總生物堿;最后采用柱層析法與高效液相法相結(jié)合的分離方法,得到了該化合物的純品,為淡黃色粉末。采用核磁、傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜、電噴霧質(zhì)譜、紅外光譜等現(xiàn)代化手段,確定了其化學(xué)結(jié)構(gòu),此化合物為季銨型生物堿。本發(fā)明不但提供了一種提取分離生物堿的新方法,而且這一新化合物的發(fā)現(xiàn)豐富了淫羊藿屬植物的化學(xué)成分,并為以后的藥理研究及新藥開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號C07D493/04GK1680385SQ20051001656
公開日2005年10月12日 申請日期2005年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月1日
發(fā)明者劉志強, 劉春明, 劉淑瑩, 宋鳳瑞, 竇建鵬, 李麗 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所