專利名稱：一種黃芪甲苷純品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以中藥黃芪為原料大量制備黃芪甲苷純品的方法。
背景技術(shù)：
中國藥典收載的黃芪為豆科植物膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.及蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。黃芪具有補氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌等功效。
黃芪的主要化學成分有三萜皂苷、黃酮和多糖類。三萜類主要有黃芪皂苷I～VIII(astragaloside I～VIII)及大豆皂苷I。其中黃芪皂苷IV(即黃芪甲苷)是黃芪中的主要活性成分之一，是目前評價黃芪質(zhì)量及黃芪制劑質(zhì)量的重要指標性成分。黃芪甲苷具有穩(wěn)定紅細胞膜、增加蛋白質(zhì)合成、促進肝細胞再生及增加血漿內(nèi)cAMP、抗血小板聚集、降壓等作用，是抗病毒性心肌炎、保護腦組織的活性成分。
黃芪甲苷(Astragaloside IV)的化學結(jié)構(gòu)式如下
據(jù)文獻報道，黃芪甲苷在黃芪藥材中的含量極低，約為0.04％，提取分離十分困難(張宇，呂哲，李鑫昶等，黃芪總皂甙水解為黃芪甲苷的工藝研究)，這是黃芪甲苷未能研制出單體制劑應(yīng)用于臨床的主要原因之一；有關(guān)黃芪甲苷制備方法的文獻報道較少，僅有一篇用RP-HPLC制備黃芪甲苷的報道(張鑒，張振海，余增亮.RP-HPLC制備色譜法分離黃芪甲苷)，用RP-HPLC只能小量制備，生產(chǎn)成本很高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
綜上所述，黃芪甲苷具有明確的生理活性，但在植物中的含量很低(約0.04％)，分離純化相當困難，制約了黃芪甲苷的深度開發(fā)。本發(fā)明的目的是公開一種黃芪甲苷純品的制備方法。
本發(fā)明方法可通過以下方式得以實施以中藥黃芪為原料，包括提取、富集、除去雜質(zhì)、水解轉(zhuǎn)化、溶劑萃取和純化精制等步驟。
本發(fā)明具體過程如下將黃芪根粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加70～95％乙醇加熱回流提取2～5次，每次60～120分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上大孔吸附樹脂柱，所用的吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂，如D101，HPD100，D140，樹脂用量為藥材量的0.5～5倍，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用3～10倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以3～10倍量樹脂床體積的70～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(每100kg藥材得浸膏約10～15kg)，加堿液進行堿水解，水解所用的堿性水溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀等強堿的水溶液，堿用量為藥材量的0.1~1.0％，水解溫度10～100℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取2～6次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結(jié)晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品，該粗品經(jīng)重結(jié)晶純化即得黃芪甲苷純品，產(chǎn)品純度大于99％。
大孔吸附樹脂是20世紀60年代發(fā)展起來的一類新型吸附劑，它是一類不含交換基團且具有大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子材料。其理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及常用有機溶劑，對有機物的吸附選擇性好，不受無機鹽類、強離子及低分子化合物存在的影響。它的吸附作用是通過表面吸附、表面電性或形成氫鍵而達到。自問世以來，大孔吸附樹脂已廣泛應(yīng)用于環(huán)保、化工、食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域。在醫(yī)藥領(lǐng)域中大孔樹脂常用于富集、分離和純化樣品。
非極性大孔吸附樹脂對黃芪皂苷有很好的吸附選擇性，通過大孔吸附樹脂可以富集黃芪皂苷，去除部分色素及糖類等雜質(zhì)。
黃芪甲苷在黃芪中的含量極低，一般為0.04％左右，但黃芪中的黃芪甲苷類似物見下圖，通過堿水解可以轉(zhuǎn)化為黃芪甲苷。本發(fā)明的原理之一即是基于此，通過該方法可以大大提高黃芪甲苷的收率。



本方法具有以下優(yōu)點1、黃芪皂苷用乙醇或甲醇作溶劑比用水作溶劑提取更完全，收率比水提取的高很多，因此本發(fā)明選用有機溶劑作提取溶劑能更完全有效的提取出黃芪皂苷。
2、用大孔吸附樹脂富集皂苷，可以除去大部分雜質(zhì)，洗脫濃縮后樣品量大幅度減少，因此，水解時堿的用量大大降低，減少了環(huán)境污染。有報道在樹脂上用堿液進行脫色，堿的用量很大，勢必會對環(huán)境造成較嚴重的污染。
3、本方法進行堿水解時可在常溫下進行。
4、本方法的分離純化不用上柱層析分離，即可使產(chǎn)品純度達99％以上，大大降低了生產(chǎn)成本，且生產(chǎn)方法簡便，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，這是本方法的最大優(yōu)點。
5、本方法操作簡便、產(chǎn)品收率高。
四

下面接合附圖詳細說明本發(fā)明方法將黃芪根粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加70～95％乙醇加熱回流提取2～5次，每次60～120分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上大孔吸附樹脂柱，所用的吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂，如D101，HPD100，D140，樹脂用量為藥材量的0.5～5倍，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用3～10倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以3～10倍量樹脂床體積的70～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(每100kg藥材得浸膏約10～15kg)，加堿液進行堿水解，水解所用的堿性水溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀等強堿的水溶液，堿用量為藥材量的0.1～1.0％，水解溫度10～100℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取2～6次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結(jié)晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品，該粗品經(jīng)重結(jié)晶純化即得黃芪甲苷純品，產(chǎn)品純度大于99％。
五具體實施例方式
實施例1取黃芪藥材10kg，粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加70％乙醇加熱回流提取3次，第一次120分鐘，第二、三次各90分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上D101大孔吸附樹脂柱(10kg)，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用3倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以3倍量樹脂床體積的70％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(浸膏約1.5kg)，加10g NaOH溶液進行堿水解，水解溫度30℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取3次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結(jié)晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品9g，該粗品經(jīng)重結(jié)晶純化即得黃芪甲苷純品8.4g，收率0.084％，產(chǎn)品中黃芪甲苷含量99.5％。
實施例2取黃芪藥材20kg，粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加80％乙醇加熱回流提取3次，每次各90分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上HPD100大孔吸附樹脂柱(20kg)，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用4倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以4倍量樹脂床體積的80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(浸膏約3.0kg)，加20g KOH溶液進行堿水解，水解溫度50℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取4次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結(jié)晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品18.2g，該粗品經(jīng)重結(jié)晶純化即得黃芪甲苷純品16.4g，收率0.091％，產(chǎn)品中黃芪甲苷含量99.7％。
實施例3取黃芪藥材100kg，粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加70％乙醇加熱回流提取3次，第一次120分鐘，第二、三次各90分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上D101大孔吸附樹脂柱(100kg)，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用4倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以5倍量樹脂床體積的80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(浸膏約13kg)，加150g KOH溶液進行堿水解，水解溫度20℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取3次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結(jié)晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品88g，該粗品經(jīng)重結(jié)晶純化即得黃芪甲苷純品85g，收率0.085％，產(chǎn)品中黃芪甲苷含量99.6％。
權(quán)利要求
1.一種黃芪甲苷純品的制備方法，其特征是以中藥黃芪為原料，包括提取、富集、除去雜質(zhì)、水解轉(zhuǎn)化、溶劑萃取和純化精制步驟。
2.權(quán)利要求1所述的黃芪甲苷純品的制備方法，其特征是將黃芪根粉碎成粗粉，在回流提取罐中加70～95％乙醇加熱回流提取2～5次，每次60～120分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上藥材量0.5～5倍非極性大孔吸附樹脂，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用3～10倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以3～10倍量樹脂床體積的70～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收，加堿液進行堿水解，水解溫度10～100℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取2～6次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結(jié)晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品，該粗品經(jīng)重結(jié)晶純化即得黃芪甲苷純品。
3.權(quán)利要求1或2所述的黃芪甲苷純品的制備方法，其特征是減壓濃縮至每100kg藥材得浸膏約10～15kg，水解所用的堿性水溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀等強堿的水溶液，堿用量為藥材量的0.1～1.0％，水解溫度10～100℃。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，針對目前黃芪甲苷制備量小，生產(chǎn)成本高等問題，公開了一種黃芪甲苷純品的制備方法，本方法以中藥黃芪為原料，包括提取、富集、除去雜質(zhì)、水解轉(zhuǎn)化、溶劑萃取和純化精制等步驟，能較大量地制備高純度的黃芪甲苷。本發(fā)明方法具有操作簡便、提取率高和污染小等優(yōu)點。
文檔編號C07J71/00GK1869060SQ20051002097
公開日2006年11月29日 申請日期2005年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月26日
發(fā)明者彭樹林, 李銳, 丁立生, 廖循, 梁健, 白冰如 申請人:中國科學院成都生物研究所