專利名稱：黃酮苷類化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥及天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及黃酮苷類化合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
黃酮及黃酮苷類是一大類天然化學(xué)產(chǎn)物，在植物界分布廣泛，從植物中提取的該類化學(xué)產(chǎn)物具有保護心腦血管、抗炎、抗氧化、雄性或雌性激素樣作用等多種生理活性，它是許多中草藥的主要活性成分，其中有許多被開發(fā)成新型植物藥，如銀杏總黃酮、大豆異黃酮等，獲得良好效果，但是研究人員仍在不斷探索，以求獲得更多的該類化合物的活性成份，滿足人們對中草藥日益增多的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供黃酮苷類化合物。
本發(fā)明的另一個目的在于提供從天然植物材料中分離制備上述黃酮苷類化合物的方法。
本發(fā)明的再一個目的在于提供上述黃酮苷類化合物的應(yīng)用領(lǐng)域。
本發(fā)明所提供的黃酮苷類化合物的化學(xué)名稱分別為高圣草素-7，4’-雙-O-β-D-葡萄糖苷(homoeriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside，化合物1)及圣草素-7，4’-雙-O-β-D-葡萄糖苷(eriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside，化合物2)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示 1 R＝OCH3高圣草素2 R＝OH圣草素上述黃酮苷類化合物具有下述化學(xué)及光譜學(xué)特征化合物1高圣草素，淡黃色無定型粉末，鹽酸-鎂粉及Molish反應(yīng)均呈陽性，AlCl3反應(yīng)呈黃綠色熒光。UV(MeOH)λmax(nm)286，326sh；IRυmax(KBr，cm-1)3423，2924，1641，1579，1524，1500，1448，1352，1296，1273，1198，1173，1115，1074，1022，864，816高分辨質(zhì)譜給出分子離子峰ESI-MS(m/z)649.1740([M+Na]+，計算值649.1735)，分子式C28H34O16；1HNMR(DMSO-d6，500MHz)δ12.05(1H，d，J＝2.2Hz，OH)，9.08(1H，br s，OH)，9.03(1H，br s，OH)，6.88(1H，br s，H-2′)，6.76(2H，br s，H-5′and H-6′)，6.14(1H，d，J＝2.5Hz，H-8)，6.13(1H，d，J＝2.5Hz，H-6)，5.34(1H，dd，J＝12.5，3.0Hz，H-2)(1H，br d，J＝12.5Hz，H-2)，4.97(1H，dd，J＝12.0，7.8Hz，H-1″)，3.68(1H，br d，J＝3.6Hz，H-6″eq)，3.65(1H，br d，J＝4.7Hz，H-6″ax)，3.20-3.46(4H，m，H-2″，H-3″，H-4″，H-5″)，3.14(1H，dd，J＝17.1，12.5Hz，Htrans-3)，2.73(1H，dd，J＝17.1，3.0Hz，Hcis-3)；13CNMR(DMSO-d6，125MHz)數(shù)據(jù)見表1；基于以上數(shù)據(jù)確定化合物1的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其名稱為高圣草素-7，4’-雙-O-β-D-葡萄糖苷(homoeriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside)。
化合物2圣草素，淡黃色無定型粉末，鹽酸-鎂粉及Molish反應(yīng)均呈陽性，AlCl3反應(yīng)呈黃綠色熒光。UV(MeOH)λmax(nm)283，326sh；IRυmax(KBr，cm-1)3396，2926，1647，1578，1520，1446，1390，1367，1340，1300，1271，1234，1176，1090，1078，1047，1032，893，854，827；高分辨質(zhì)譜給出分子離子峰ESI-MS(m/z)635.158399([M+Na]+，計算值635.1578)，分子式C27H32O16；1HNMR(DMSO-d6，500MHz)δ12.05(1H，d，J＝5.0Hz，OH)，9.16(1H，br s，OH)，7.11(1H，br s，H-2′)，6.92(1H，d，J＝8.3Hz，H-5′)，6.79(1H，d，J＝8.3Hz，H-6′)，6.17(1H，d，J＝2.0Hz，H-8)，6.13(1H，d，J＝2.0Hz，H-6)，5.49(1H，dd，J＝13.0，2.6Hz，H-2)，4.96(1H，dd，J＝13.0，7.80Hz，H-1″)，3.79(3H，s，OCH3)，3.66(1H，d，J＝11.4Hz，H-6″ax)，3.20-3.46(4H，m，H-2″，H-3″，H-4″，H-5″)，3.14(1H，m，Htrans-3)，2.76(1H，dd，J＝17.1，2.6Hz，Hcis-3)；13CNMR(DMSO-d6，125MHz)數(shù)據(jù)見表1；基于以上數(shù)據(jù)確定化合物2的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其名稱為圣草素-7，4’-雙-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(eriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside)。
上述化合物1和化合物2的高分辨質(zhì)譜(ESI-MS)、氫譜(1HNMR)及碳譜(13CNMR)特征分別如附圖1～附圖6所示。
表1.化合物1和化合物2的氫譜和碳譜特征


上述兩個新黃酮苷類化合物主要從高等植物中分離制備，其中優(yōu)選的是種子植物，或者是桑寄生科(Loranthaceae)槲寄生屬(Viscum L.)植物。有關(guān)桑寄生科及槲寄生屬的科學(xué)定義和范疇，參見《中國高等植物科屬詞典》(修訂版)(候?qū)捳丫?，北京科學(xué)出版社，1984.12)及中國植物志第24卷(北京科學(xué)出版社，1986)。用于制備這兩個新黃酮苷類化合物的植物材料一般為這些植物的莖枝和葉。
本發(fā)明提出的黃酮苷類化合物的制備方法，具體步驟為(1)高等植物原料以4-15倍質(zhì)量的水或10-100wt％的含水乙醇、甲醇或丙酮溶劑提取；(2)提取液回收溶劑后濃縮至稠浸膏；(3)上述獲得的稠浸膏依次用醚類、酯類、氯仿、正丁醇有機溶劑萃取，合并正丁醇萃取部分；或者將所獲得的稠浸膏用水充分?jǐn)嚢柘♂尯?，采用非極性或弱極性大孔吸附樹脂，進(jìn)行吸附，然后依次用水、20-50wt％的含水乙醇洗脫，收集洗脫液濃縮至干；(4)將上述正丁醇萃取部分或收集大孔吸附樹脂30-50wt％洗脫液濃縮至干的產(chǎn)物經(jīng)柱層析分離即可。
具體實施時，上述稠浸膏萃取時可以3-10倍體積的水將稠浸膏充分?jǐn)嚢柘♂?，然后用有機溶劑萃取。根據(jù)實踐結(jié)果，每次萃取有機溶劑的用量可為水體積的百分之一至二分之一，萃取2-5次即可獲得良好效果。
大孔吸附樹脂法同樣先以上述量的水將稠浸膏充分?jǐn)嚢柘♂?，然后過濾得澄清液，將澄清液通過適當(dāng)體積的非極性或弱極性大孔吸附樹脂，如D101等，待全部澄清液通過柱床之后，依次用3-5倍柱床體積的水、20wt％-50wt％的含水乙醇洗脫。
本發(fā)明的兩個化合物主要存在于30-50wt％的洗脫流份中?？刹捎霉枘z柱層析、SephadexLH20柱層析或ODS柱層析方法進(jìn)一步分離化合物1、化合物2。依據(jù)兩個化合物分子極性大小，該領(lǐng)域技術(shù)人員即可從柱層析產(chǎn)物中分別獲得化合物1、化合物2。
實驗結(jié)果表明當(dāng)采用硅膠柱層析時，洗脫劑可采用氯仿-甲醇-水系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫；當(dāng)采用Sephadex LH20柱層析時，洗脫劑可采用甲醇-水或乙醇-水系統(tǒng)洗脫；當(dāng)采用ODS柱層析時，洗脫劑可采用甲醇-水或乙睛-水系統(tǒng)洗脫。
本發(fā)明中，植物原料的高等植物是種子植物。
本發(fā)明中，植物原料的高等植物是桑寄生科種子植物。
本發(fā)明中，桑寄生科植物是槲寄生屬植物。
本發(fā)明中，提取時加熱30-95℃回流1-3小時，提取1-3次，合并提取液。
本發(fā)明中，提取液是含水乙醇。
本發(fā)明中，提取液濃縮成稠浸膏的比重為1.02-1.10。
本發(fā)明中，稠浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶劑萃取。
本發(fā)明中，采用大孔吸附樹脂吸附后，依次用水、20wt％、30wt％、40wt％、50wt％的含水乙醇洗脫，收集30-50wt％洗脫液即為產(chǎn)物。
本發(fā)明中，層析分離采用硅膠柱層析、SephadexLH20柱層析或ODS柱層析。
本發(fā)明所述的新的黃酮苷類化合物的用途可作為藥物組合物的應(yīng)用，效果令人滿意。
本發(fā)明的化合物具有良好的抗炎、抗氧化、激素樣作用。從高等植物中分離提取方法簡便，原料來源廣泛，成本不高。本發(fā)明產(chǎn)物與中藥、西藥等藥物制成組合藥物，具有誘人的應(yīng)用前景。


圖1為化合物1的高分辨質(zhì)譜圖。
圖2為化合物1的氫譜(1HNMR)圖。
圖3為化合物1的碳譜(13CNMR)圖。
圖4為化合物2的高分辨質(zhì)譜圖。
圖5為化合物2的氫譜(1HNMR)圖。
圖6為化合物2的碳譜(13CNMR)圖。
圖7為本發(fā)明實施例1的提取分離流程圖。
具體實施例方式
以下以具體實施例更具體地說明本發(fā)明實施例1.化合物1和化合物2的分離制備植物材料桑寄生科槲寄生屬植物槲寄生(Viscus coloratum(Kom.)Nakai)干燥帶葉莖枝。
分離制備方法槲寄生帶葉莖枝2.0kg，用95％乙醇20L回流提取兩次，每次2小時，合并提取液，回收乙醇并濃縮至無醇味，加入水調(diào)節(jié)至4.0L，抽濾，澄清液通過D101大孔吸附樹脂柱(1.0Kg)，依次用4-5L的水、20％、40％的含水乙醇洗脫，收集40％洗脫部分，濃縮至干。將40％乙醇洗脫部位分次用Sephadex LH20反復(fù)分離，即得化合物1，2。提取分離流程圖如附圖7。
實施例2.化合物1及化合物2對羥基自由基及超氧陰離子自由基的清除作用1.儀器與材料1.1儀器UV-260型分光光度計(Shimadzu)，電子天平(Sartorius)，PHB-3型酸度計(Sanxin)，ER200D-SRC型電子順磁共振儀，ER4111-VT變溫裝置(Bruker)。
1.2試劑黃嘌呤(X)、黃嘌呤氧化酶(XO)、5，5-二甲基-1-吡咯啉-N-氮化物(DMPO)和茶多酚(EGCG)購自美國Sigma公司，氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)等試劑均為國產(chǎn)分析純。
實驗所用的化合物1和化合物2均為發(fā)明人自制，其化學(xué)結(jié)構(gòu)經(jīng)氫譜、碳譜、紫外光譜和紅外光譜確定無誤，HPLC法測定純度在95％以上。
2.實驗方法2.1比色法(Fenton反應(yīng))檢測仙茅苷對·OH清除作用Fenton反應(yīng)是產(chǎn)生羥基自由基最常用的反應(yīng)，是利用Fe2+被H2O2氧化生成Fe3+、OH-和·OH。反應(yīng)所產(chǎn)生的·OH可以與水楊酸反應(yīng)生成2，3-二羥基苯甲酸，在510nm處有最大吸收。測定方法根據(jù)賈之慎等人的方法進(jìn)行。
2.2比色法(X/XO反應(yīng))檢測仙茅苷對O2-的清除作用利用黃嘌呤(X)與黃嘌呤氧化酶(XO)反應(yīng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，該自由基可與NBT反應(yīng)形成藍(lán)色，于560nm處測定吸收度。
2.3自由基清除率的計算自由基的抑制率％＝[(A空白-A樣品)/A空白]×100％。
IC50值通過線性回歸得到。
3.實驗結(jié)果見表1。說明化合物1及化合物2對羥基自由基及超氧陰離子自由基均有顯著的清除作用，其作用效果(IC50)均優(yōu)于陽性對照藥茶多酚(EGCG)。
表1.化合物1和化合物2對羥基自由基及超氧陰離子自由基的清除作用

權(quán)利要求
1.黃酮苷類化合物，其特征在于，分別為二氫黃酮類苷元高圣草素英文名為homoeriodictyol、圣草素英文名為eriodictyol的7，4’-雙葡萄糖苷，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下 1R＝OCH3高圣草素2R＝OH 圣草素，上述結(jié)構(gòu)特征分別命名為高圣草素-7，4’-雙-O-β-D-葡萄糖苷即homoeriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside，1及圣草素-7，4’-雙-O-β-D-葡萄糖苷即eriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside，2。
2.一種如權(quán)利要求1所述黃酮苷類化合物的制備方法，其特征在于(1)高等植物原料以4-15倍質(zhì)量的水或10-100wt％的含水乙醇、甲醇或丙酮溶劑提??；(2)提取液回收溶劑后濃縮至稠浸膏；(3)所獲得的稠浸膏依次用醚類、酯類、氯仿、正丁醇有機溶劑萃取，合并正丁醇萃取部分，或者將所獲得的稠浸膏用水充分?jǐn)嚢柘♂尯?，采用非極性或弱極性大孔吸附樹脂，進(jìn)行吸附，然后依次用水、20-50wt％的含水乙醇洗脫，收集洗脫液濃縮至干；(4)將上述正丁醇萃取部分或收集大孔吸附樹脂30-50wt％洗脫液濃縮至干的產(chǎn)物經(jīng)柱層析分離即可。
3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，植物原料的高等植物是種子植物。
4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，植物原料的高等植物是桑寄生科種子植物。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，桑寄生科植物是槲寄生屬植物。
6.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，提取時加熱30-95℃回流1-3小時，提取1-3次，合并提取液。
7.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，提取液是含水乙醇。
8.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，提取液濃縮成稠浸膏的比重為1.02-1.10。
9.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，稠浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶劑萃取。
10.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，采用大孔吸附樹脂吸附后，依次用水、20wt％、30wt％、40wt％、50wt％的含水乙醇洗脫，收集30-50wt％洗脫液即為產(chǎn)物。
11.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，柱層析分離采用硅膠柱層析、SephadexLH20柱層析或ODS柱層析。
12.如權(quán)利要求1或2所述的黃酮苷類化合物的用途是作為藥物組合物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及從植物中獲得的新黃酮苷類化合物及分離制備該化合物的方法。本發(fā)明的黃酮苷類化合物分別為高圣草素－7，4’－雙－O－β－D－葡萄糖苷(homoeriodictyol 7，4′－di－O－β－D－glucopyranoside)及圣草素－7，4’－雙－O－β－D－葡萄糖苷(eriodictyol 7，4′－di－O－β－D－glucopyranoside)。該類化合物主要從高等植物中分離獲得，其中主要是種子植物、尤其是桑寄生科槲寄生屬植物。通過水、乙醇、甲醇或丙酮的提取，然后濃縮、萃取、樹脂吸附、柱層析等步驟，即可從高等植物中分離獲得本發(fā)明的二個新黃酮苷類化合物。該類化合物組成藥物，是一種具有抗炎、抗氧化、激素樣作用等多種生理活性的有效藥物。
文檔編號C07H17/07GK1699393SQ20051002662
公開日2005年11月23日 申請日期2005年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月9日
發(fā)明者周銅水, 姚輝, 陳道峰, 陳家寬 申請人:復(fù)旦大學(xué)