專利名稱：一種黃芩總黃酮苷元提取物、黃芩單體黃酮苷元及其制備方法與應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制藥領(lǐng)域，具體涉及一種黃芩總黃酮苷元提取物、黃芩單體黃酮苷元及其制備方法與用途。
背景技術(shù)：
黃芩(Scutcllaia Baicalensis Ceorgi)為唇形科植物黃芩的干燥根，是傳統(tǒng)中藥，用于濕熱瀉痢、肺熱咳嗽、熱病煩渴、黃疸、目赤腫痛、積熱吐血、胎動不安、痛腫瘡節(jié)等癥。中醫(yī)在治療病毒性乙型肝炎的許多重要組方中配伍黃芩，如三物黃芩湯、清肝顆粒、乙肝解毒膠囊等，表明黃芩具有治療乙型肝炎的作用。中醫(yī)在艾滋病預防與治療中，也十分重視黃芩的作用。黃芩主要有效成分為黃酮類化合物，迄今已分離出40余種黃酮，其中黃芩苷(baicalin)含量最高，漢黃芩苷(wogonoside)較少，黃芩素(黃芩苷元，baicalein)及其他黃酮類成分含量很少。有研究認為，黃芩苷與黃芩素具有相同的代謝途徑，而黃芩素口服吸收較快、生物利用度優(yōu)于黃芩苷。也有文獻證明，黃芩素具有較其它黃芩黃酮更強的藥理作用并且毒副作用小，如1.具有特異的抗艾滋病毒(HIV)作用，能誘導感染HIV的細胞發(fā)生凋亡，可抑制艾滋病毒(HIV-1)并抑制其逆轉(zhuǎn)錄酶(HIV-1RT)，黃芩素抑制HIV-1RT活性及細胞毒性均強于黃芩苷。2.能促進細胞調(diào)亡，對人肝癌細胞的拓撲異構(gòu)酶II有強烈抑制作用，并抑制細胞增殖；對人肝癌細胞誘導死亡的方式是，誘導細胞調(diào)亡和產(chǎn)生細胞壞死。因此，對黃芩總黃酮苷元和單體黃酮苷元的研究開發(fā)具有廣闊的應用前景和巨大的商業(yè)價值。
黃芩素雖然具有諸多特異的藥理作用，但其制備技術(shù)難度很大，難以進行規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)，因此無法滿足制劑和臨床需要，影響了其潛在作用的發(fā)揮?，F(xiàn)在用于黃芩素制備的方法主要有1.從黃芩中提取分離黃芩素，由于黃芩中游離黃芩素含量低，一般在0.1～0.5％之間，因此基本不具備工業(yè)應用價值。2.常規(guī)水解方法水解黃芩苷制備黃芩素，有研究表明，常規(guī)水解方法不能使黃芩苷水解為黃芩素與葡萄糖醛酸。3.強烈的化學條件水解黃芩苷制備黃芩素，如在濃硫酸中進行水解，雖可使黃芩苷水解，但隨著反應的進行，也使黃芩素的分解破壞增加，因此收率很低，不適用于工業(yè)生產(chǎn)。黃芩炮制學認為，在一定濕度和溫度條件下，黃芩中黃芩酶可使苷分解為兩個苷元——黃芩素和漢黃芩素，以及葡萄糖醛酸。黃芩素可進一步氧化為醌式結(jié)構(gòu)而導致黃芩質(zhì)量降低，為保證黃芩質(zhì)量采取了各種“殺酶保苷”的炮制方法，表明黃芩中有黃芩苷分解酶存在；也有學者從黃芩中分離得到黃芩酶(β-葡萄糖醛酸酶)并實驗證實了其對黃芩苷的分解作用。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對已有技術(shù)的不足，提供一種便捷、實用、可靠的、可以進行規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)的黃芩總黃酮苷元提取物和黃芩單體黃酮苷元及其制備方法與應用。
黃芩總黃酮苷元提取物，主含黃芩素(baicalein)、漢黃芩素(Wogonin)和千層紙素-A(Oroxylin-A)黃芩單體黃酮苷元，黃芩黃酮苷元具有黃酮類母體結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)如下
利用黃芩黃酮苷與黃芩酶(β-葡萄糖醛酸酶)在黃芩中共存的現(xiàn)象，將黃芩粉碎，加水，加熱至41～46℃并保持4.1～4.8h進行酶解反應，黃芩酶便可將黃芩黃酮苷完全酶解轉(zhuǎn)化為苷元和葡萄糖醛酸，熱風干燥，將干粉置索氏提取器中通過加無水乙醇回流提取，制得黃芩總黃酮苷元提取物。
上述提取物中黃芩素含量＞54％、黃芩總黃酮苷元含量≥85％，均為重量百分比。
黃芩單體黃酮苷元，分別是黃芩素、漢黃芩素和千層紙素-A，由上述黃芩總黃酮苷元提取物進行分離制得。用無水乙醇溶解黃芩總黃酮苷元提取物，上聚酰胺層析柱層析分離，以體積百分比濃度10％～90％的乙醇或10％～90％甲醇進行洗脫，分段收集洗脫液，洗脫的先后順序依此是黃芩素，漢黃芩素，千層紙素-A。
上述的酶解反應，其特征在于，該反應是指天然存在于黃芩中的黃芩酶與黃芩黃酮苷，在未經(jīng)提取分離的情況下，直接在黃芩中發(fā)生的酶解反應。
黃芩總黃酮苷元提取物的制備方法如下取黃芩(生條芩)，粉碎，過四號～五號篩使為中粉。在每100g黃芩粉末中加入41～46℃蒸餾水110～120ml，攪拌均勻，加熱至41～46℃并保持溫度恒定4.1～4.8h進行酶解反應，取出，50～80℃熱風干燥。將干粉置索氏提取器中，加無水乙醇回流提取。提取液減壓回收乙醇，收集殘留物，粉碎，過篩，即得黃芩總黃酮苷元提取物，收率＞11.5％。
黃芩單體黃酮苷元的制備方法如下取上述黃芩總黃酮苷元提取物，用無水乙醇溶解，上聚酰胺層析柱層析分離，以體積百分比濃度10％～90％的乙醇或10％～90％甲醇進行洗脫，分段收集洗脫液(每管20ml)，根據(jù)硅膠G薄層板層析結(jié)果合并相同組分洗脫液，分別減壓濃縮干燥，即制得黃芩素、漢黃芩素和千層紙素-A單體黃酮苷元。
本發(fā)明的黃芩總黃酮苷元提取物及單體黃酮苷元，用于制備治療肝疾病、艾滋病藥學制劑。
本發(fā)明的黃芩總黃酮苷元提取物及單體黃酮苷元，用作藥學活性成分與藥用輔料組成藥物制劑，用于加工制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、軟膏劑。
本發(fā)明方法最顯著的優(yōu)點在于，利用了黃芩酶與黃芩黃酮苷于黃芩中共同存在的天然性質(zhì)，不經(jīng)提取分離，不加酸、堿等化學試劑，也不另加酶解底物和分解酶，只需將黃芩粉碎為中粉、加入適量水分并給予適宜的溫度，即可發(fā)生酶解反應，使黃芩黃酮苷完全轉(zhuǎn)化為苷元和葡萄糖醛酸，進行提取即得黃芩總黃酮苷元提取物(為酶解產(chǎn)生的和原有游離的苷元之和)，由提取物分離便制得黃芩單體黃酮苷元。該法反應條件溫和，收率高，產(chǎn)品質(zhì)量好，能耗低，工藝簡單，無污染，生產(chǎn)成本低，適用于規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)。HPLC分析顯示提取后的藥渣中幾不含黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素；提取物中不含黃芩苷和漢黃芩苷，表明苷的水解是徹底的，苷元的提取是完全的，優(yōu)于現(xiàn)有黃芩黃酮苷元制備方法。
有許多學者在探索黃芩總黃酮苷元和單體黃酮苷元制備問題，由于各家的研究方法不同，因此制備的效果也各不相同，若要比較制備效果的優(yōu)劣則需要比較制備的黃芩總黃酮苷元和單體黃酮苷元是否具有產(chǎn)品收率高、質(zhì)量好，生產(chǎn)成本低，是否適用于規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)的優(yōu)勢，要比較方法的科學性和實用性。本發(fā)明方法真正達到了簡便、快速、經(jīng)濟、科學、高效率、規(guī)模化生產(chǎn)制備黃芩總黃酮苷元提取物的最佳效果。黃芩資源豐富，黃酮苷含量高，某些產(chǎn)地的黃芩黃酮苷含量高達20％以上，是制備黃芩黃酮苷元的理想原料。應用本發(fā)明能夠科學有效地開發(fā)黃芩資源、拓展黃芩應用空間。


圖1是實施例1所得的黃芩總黃酮苷元提取物樣品的HPLC色譜圖，橫坐標是保留時間，縱坐標是信號強度。其中，A代表2種黃芩黃酮苷元對照品，B代表黃芩總黃酮苷元提取物；1是黃芩素、2是漢黃芩素。
圖2是實施例1所得的黃芩總黃酮苷元提取物樣品的三維HPLC色譜圖，X軸是保留時間，Y軸是波長，Z是信號強度。1是黃芩素、2是漢黃芩素。
圖3是實施例1-3所得的黃芩總黃酮苷元提取物樣品的HPLC色譜圖。其中，a代表實施例1的樣品(批號050308)，b代表實施例2的樣品(批號050311)，c代表實施例3的樣品(批號050320)。由圖3可見，三個樣品的HPLC色譜基本一致，表明該法制備的提取物質(zhì)量穩(wěn)定。
具體實施方式
實施例1.
取干燥的黃芩根，粉碎，過四號篩，稱取粉末100g，加41℃水120ml，攪拌均勻，置41℃水浴中，加蓋并保持41℃恒溫4.2小時后，取出，于80℃熱風干燥。將干粉置索氏提取器中，加無水乙醇加熱回流提取，減壓回收溶劑。收集殘留物，粉碎，過篩，得黃芩總黃酮苷元提取物12.8g，其中含黃芩素7.8g，黃芩總黃酮苷元11.3g。
實施例2.
取干燥的黃芩根，粉碎，過四號篩，稱取粉末100g，加42℃水120ml，攪拌均勻，置42℃水浴中，加蓋并保持42℃恒溫4.2小時后，取出，于80℃熱風干燥。將干粉置索氏提取器中，加無水乙醇加熱回流提取，減壓回收溶劑。收集殘留物，粉碎，過篩，得黃芩總黃酮苷元提取物12.6g，其中含黃芩素7.7g，黃芩總黃酮苷元11.1g。
實施例3.
取干燥的黃芩根，粉碎，過四號篩，稱取粉末100g，加45℃水110ml，攪拌均勻，置45℃水浴中，加蓋并保持45℃恒溫4.2小時后，取出，于60℃熱風干燥。將干粉置索氏提取器中，加無水乙醇加熱回流提取，減壓回收溶劑。收集殘留物，粉碎，過篩，得黃芩總黃酮苷元提取物12.9g，其中含黃芩素7.8g、黃芩總黃酮苷元11.2g。
實施例4.
取干燥的黃芩根，粉碎，過四號篩，稱取粉末100g，加45℃水110ml，攪拌均勻，置45℃水浴中，加蓋并保持45℃恒溫4.5小時后，取出，于60℃熱風干燥。將干粉置索氏提取器中，加無水乙醇加熱回流提取，減壓回收溶劑。收集殘留物，粉碎，過篩，得黃芩總黃酮苷元提取物12.8g，其中含黃芩素7.8g，黃芩總黃酮苷元11.2g。
實施例5.
取干燥的黃芩根，粉碎，過四號篩，稱取粉末100g，加45℃水115ml，攪拌均勻，置45℃水浴中，加蓋并保持45℃恒溫4.2小時后，取出，于70℃熱風干燥。將干粉置索氏提取器中，加無水乙醇加熱回流提取，減壓回收溶劑。收集殘留物，粉碎，過篩，得黃芩總黃酮苷元提取物12.8g，其中含黃芩素7.8g，黃芩總黃酮苷元11.4g。
實施例6.
取干燥的黃芩根，粉碎，過四號篩，稱取粉末100g，加45℃水115ml，攪拌均勻，置45℃水浴中，加蓋并保持45℃恒溫4.5小時后，取出，于70℃熱風干燥。將干粉置索氏提取器中，加無水乙醇加熱回流提取，減壓回收溶劑。收集殘留物，粉碎，過篩，得黃芩總黃酮苷元提取物13.2g，其中含黃芩素8.0g，黃芩總黃酮苷元11.5g。
實施例7.
取實施例1的黃芩總黃酮苷元提取物10g，加無水乙醇溶解，上聚酰胺層析柱進行層析分離，以50％的乙醇進行洗脫，分段收集，每管20ml，薄層層析檢測后，合并相同組分洗脫液，分別減壓濃縮干燥，即制得黃芩單體黃酮苷元，分別是黃芩素5.8g，純度＞90％；漢黃芩素1.7g，純度＞90％；千層紙素-A 0.3g，純度＞90％。
實施例8.
取實施例2的黃芩總黃酮苷元提取物10g，加甲醇溶解，上聚酰胺層析柱進行層析分離，以50％的甲醇進行洗脫，分段收集洗脫液，每管20ml，薄層層析檢測后，合并相同組分洗脫液，分別減壓濃縮干燥，即制得黃芩單體黃酮苷元，分別是黃芩素5.9g，純度＞90％；漢黃芩素1.8g，純度＞90％；千層紙素-A 0.3g，純度＞90％。
實施例9.
黃芩總黃酮苷元片劑 黃芩素片200mg，其中黃芩總黃酮苷元100mg。用于治療艾滋病，口服，每日3次，每次2片。
實施例10.
黃芩素膠囊劑 黃芩素膠囊200mg，其中黃芩素100mg。用于治療肝癌，口服，每日3次，每次2粒。
實施例11.
漢黃芩素顆粒劑 漢黃芩素顆粒400mg，其中漢黃芩素200mg。用于治療乙型肝炎，口服，每日3次，每次1袋。
實施例12.
黃芩素軟膏劑 黃芩素軟膏5g，其中黃芩素1g。用于治療艾滋病并發(fā)皮膚皮疹，外用，涂布于患處，一日1次。
權(quán)利要求
1.黃芩總黃酮苷元提取物，其特征在于，主含黃芩素、漢黃芩素和千層紙素-A黃芩單體黃酮苷元，黃芩黃酮苷元具有黃酮類母體結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)如下 利用黃芩酶與黃芩黃酮苷在黃芩中共存的現(xiàn)象，將黃芩粉碎，加水，加熱至41～46℃并保持4.1～4.8h進行酶解反應，黃芩酶將黃芩黃酮苷完全酶解轉(zhuǎn)化為苷元和葡萄糖醛酸，熱風干燥，將干粉置索氏提取器中通過加無水乙醇回流提取，制得黃芩總黃酮苷元提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的黃芩總黃酮苷元提取物，其特征在于，所述提取物中黃芩素含量＞54％、黃芩總黃酮苷元含量≥85％，均為重量百分比。
3.一種權(quán)利要求1所述的黃芩總黃酮苷元提取物的制備方法，其特征在于，取黃芩，粉碎，過四號～五號篩使為粉末，在每100g黃芩粉末中加入41～46℃蒸餾水110～120ml，攪拌均勻，加熱至41～46℃并保持溫度恒定4.1～4.8h進行酶解反應，取出，50～80℃熱風干燥，將干粉置索氏提取器中，加無水乙醇回流提取，提取液減壓回收乙醇，收集殘留物，粉碎，過篩，即得黃芩總黃酮苷元提取物，收率＞11.5％。
4.從權(quán)利要求1的黃芩總黃酮苷元提取物中分離得到的黃芩單體黃酮苷元，其特征在于，分別是黃芩素、漢黃芩素和千層紙素-A，是用無水乙醇溶解黃芩總黃酮苷元提取物，上聚酰胺層析柱層析分離，以體積百分比濃度10％～90％的乙醇或10％～90％甲醇進行洗脫，分段收集洗脫液，洗脫的先后順序依此是黃芩素，漢黃芩素，千層紙素-A。
5.如權(quán)利要求4所述的黃芩單體黃酮苷元，其特征在于，所述黃芩素、漢黃芩素或千層紙素-A是根據(jù)硅膠G薄層板層析結(jié)果合并相同組分洗脫液，分別減壓濃縮干燥而得。
6.一種權(quán)利要求1所述的黃芩總黃酮苷元提取物的應用，用作藥學活性成分與藥用輔料組成藥物制劑。
7.如權(quán)利要求6所述的黃芩總黃酮苷元提取物的應用，其特征在于，所述藥物制劑是片劑、顆粒劑、膠囊劑或軟膏劑。
8.一種權(quán)利要求4所述的黃芩單體黃酮苷元的應用，其特征在于，所述的黃芩素、漢黃芩素或千層紙素-A分別用作藥學活性成分與藥用輔料組成藥物制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的黃芩單體黃酮苷元的應用，其特征在于，所述藥物制劑是片劑、顆粒劑、膠囊劑或軟膏劑。
10.權(quán)利要求1所述的黃芩總黃酮苷元提取物或權(quán)利要求4所述的黃芩單體黃酮苷元的應用，用于制備治療肝疾病和艾滋病的藥物，其中肝疾病包括肝癌或乙型肝炎。
全文摘要
一種黃芩總黃酮苷元提取物、黃芩單體黃酮苷元及其制備方法與應用，屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明獲得的是主含黃芩素的黃芩總黃酮苷元提取物，或主含黃芩素或主含漢黃芩素或主含千層紙素－A的黃芩黃酮苷元單體化合物；將黃芩粉碎，加水，在41～46℃進行酶解反應，天然存在于黃芩中的黃芩酶與黃芩黃酮苷、在不經(jīng)提取分離的情況下、直接在黃芩中發(fā)生的酶解反應。藥學制劑包括以黃芩總黃酮苷元提取物為藥學活性成分或以單體黃酮苷元為藥學活性成分與藥用輔料組成的各種劑型的藥學制劑，用于制備治療肝疾病、艾滋病的藥物。本發(fā)明反應條件溫和，收率高，產(chǎn)品質(zhì)量好，能耗低，工藝簡單，無污染，生產(chǎn)成本低。
文檔編號C07D311/30GK1709885SQ200510043709
公開日2005年12月21日 申請日期2005年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月7日
發(fā)明者程秀民 申請人:山東大學