專利名稱：來(lái)自鹽芥的一個(gè)耐鹽、抗旱基因及其編碼蛋白與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物中與抗脅迫相關(guān)的基因及其編碼蛋白與應(yīng)用，特別涉及鹽芥中的一個(gè)耐鹽、抗旱基因及其編碼蛋白與其在培育耐鹽、抗旱性提高植物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
研究表明，擬南芥的一些近親具有極強(qiáng)的耐逆性，并且較適宜進(jìn)行遺傳操作。其中，鹽生植物-鹽芥與擬南芥極為相似，基因序列同源性可達(dá)70-90％，不僅具有遺傳學(xué)模式植物令人滿意的形態(tài)、生長(zhǎng)特性及遺傳特點(diǎn)，還對(duì)海水的高鹽濃度具有較強(qiáng)的耐受能力。因此，鹽芥不但是一種可供研究植物自然耐鹽機(jī)制的優(yōu)異遺傳模式植物，更是一種分離優(yōu)異耐鹽、抗旱相關(guān)基因的資源植物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一個(gè)鹽芥的耐鹽、抗旱基因及其編碼蛋白。
本發(fā)明所提供的耐鹽、抗旱基因，名稱為ST6-66，來(lái)源于十字花科植物鹽芥(Thellungiella halophila)，是下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID №1的DNA序列；2)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中SEQ ID №1限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
所述高嚴(yán)謹(jǐn)條件為在0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃條件下雜交并洗膜。
序列表中的SEQ ID №1由695個(gè)堿基組成，其編碼序列為自5’端第50-583位堿基，編碼具有序列表中SEQ ID №2的氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)。
本發(fā)明耐鹽、抗旱基因所編碼的蛋白(ST6-66)，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。它是具有序列表中SEQ ID №2的氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)。序列表中的SEQ ID №2由177個(gè)氨基酸殘基組成。
含有本發(fā)明基因的表達(dá)載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系及宿主菌均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
擴(kuò)增ST6-66中任一片段的引物對(duì)也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
利用植物表達(dá)載體，將本發(fā)明的耐鹽、抗旱基因?qū)胫参锛?xì)胞，可獲得對(duì)高鹽、干旱耐受力增強(qiáng)的的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系及轉(zhuǎn)基因植株。
所述植物表達(dá)載體包括雙元農(nóng)桿菌載體和可用于植物微彈轟擊的載體等。所述植物表達(dá)載體還可包含外源基因的3’端非翻譯區(qū)域，即包含聚腺苷酸信號(hào)和任何其它的可參與mRNA加工或基因表達(dá)的DNA片段。所述聚腺苷酸信號(hào)可引導(dǎo)聚腺苷酸加入到mRNA前體的3’端，如農(nóng)桿菌冠癭瘤誘導(dǎo)(Ti)質(zhì)?；?如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆貯存蛋白基因)3’端轉(zhuǎn)錄的非翻譯區(qū)均具有類似功能。
使用ST6-66構(gòu)建植物表達(dá)載體時(shí)，在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前可加上任何一種增強(qiáng)型啟動(dòng)子或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，如花椰菜花葉病毒(CAMV)35S啟動(dòng)子、根部特異表達(dá)啟動(dòng)子等，它們可單獨(dú)使用或與其它的植物啟動(dòng)子結(jié)合使用；此外，使用本發(fā)明的基因構(gòu)建植物表達(dá)載體時(shí)，還可使用增強(qiáng)子，包括翻譯增強(qiáng)子或轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，這些增強(qiáng)子區(qū)域可以是ATG起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個(gè)序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號(hào)和起始密碼子的來(lái)源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來(lái)自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。
為了便于對(duì)轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞或植物進(jìn)行鑒定及篩選，可對(duì)所用植物表達(dá)載體進(jìn)行加工，如加入可在植物中表達(dá)的編碼可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因(GUS基因、螢光素酶基因等)、具有抗性的抗生素標(biāo)記物(慶大霉素標(biāo)記物、卡那霉素標(biāo)記物等)或是抗化學(xué)試劑標(biāo)記基因(如抗除莠劑基因)等。從轉(zhuǎn)基因植物的安全性考慮，可不加任何選擇性標(biāo)記基因，直接以逆境篩選轉(zhuǎn)化植株。
攜帶有本發(fā)明ST6-66的植物表達(dá)載體可通過(guò)使用Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、微注射、電導(dǎo)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)等常規(guī)生物學(xué)方法轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞或組織，并將轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞或組織培育成植株。被轉(zhuǎn)化的植物宿主既可以是水稻、小麥等單子葉植物，也可以是擬南芥、大豆、油菜等雙子葉植物。
通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)化本發(fā)明所提供的耐鹽、抗旱基因ST6-66后所得到的轉(zhuǎn)基因擬南芥植株進(jìn)行逆境脅迫試驗(yàn)，證明該基因在轉(zhuǎn)入植物后可顯著提高植株的耐鹽性。本發(fā)明為人為控制植物中抗逆和耐逆相關(guān)基因的表達(dá)提供了基礎(chǔ)，將在培育抗逆性和耐逆性增強(qiáng)的植物(特別是水稻、小麥、油菜等農(nóng)作物)中發(fā)揮重要的作用。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。


圖1A為載體pCB2004的物理圖譜圖1為經(jīng)100Mm NaCl脅迫處理的ST6-66轉(zhuǎn)化體和野生型擬南芥的生長(zhǎng)情況圖2為經(jīng)150Mm NaCl脅迫處理的ST6-66轉(zhuǎn)化體和野生型擬南芥的生長(zhǎng)情況圖3為經(jīng)100Mm NaCl、150Mm NaCl脅迫處理的ST6-66轉(zhuǎn)化體和野生型擬南芥的生物量統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖4為經(jīng)100Mm NaCl、150Mm NaCl、165Mm NaCl和180Mm NaCl脅迫處理的ST6-66轉(zhuǎn)化體和野生型擬南芥的成活率統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖5A為經(jīng)含250Mm NaCl的土壤脅迫處理ST6-66轉(zhuǎn)化體和野生型擬南芥在中的生長(zhǎng)情況圖5B為ST6-66轉(zhuǎn)化體和野生型擬南芥在不含鹽的土壤環(huán)境中的生長(zhǎng)情況圖6為分別經(jīng)含OMm NaCl和含250Mm NaCl土壤處理9天后的ST6-66轉(zhuǎn)化體和野生型擬南芥的蓮苔直徑統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖7為分別經(jīng)含250Mm NaCl土壤處理后的ST6-66轉(zhuǎn)化體和野生型擬南芥所結(jié)的果莢中種子顆粒數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖8為ST6-66轉(zhuǎn)基因擬南芥和野生型擬南芥在土壤中進(jìn)行的干旱脅迫20天后植株的生長(zhǎng)情況圖9為ST6-66轉(zhuǎn)基因擬南芥和野生型擬南芥在土壤中進(jìn)行的干旱脅迫15天后蓮苔直徑統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖10為ST6-66轉(zhuǎn)基因擬南芥和野生型擬南芥在土壤中進(jìn)行的干旱脅迫20天后恢復(fù)澆水三天后的植株生長(zhǎng)情況具體實(shí)施方式
下述實(shí)施例中所用方法如無(wú)特別說(shuō)明均為常規(guī)方法。
實(shí)施例1、鹽芥耐鹽基因ST6-66的獲得一、鹽芥cDNA文庫(kù)的構(gòu)建提取鹽芥總RNA，反轉(zhuǎn)錄得到鹽芥全基因組的cDNA，采用高通量構(gòu)建載體的方法(Gateway Technology)(汪宗桂，鄭文嶺，馬文麗；通路克隆系統(tǒng)DNA重組技術(shù)的新進(jìn)展.中國(guó)生物工程雜志(2003)，第23卷第7期)，將鹽芥cDNA先重組克隆到pDONR207載體(Invitrogen公司)，得到Entry cDNA文庫(kù)，然后再以重組克隆將整個(gè)cDNA文庫(kù)穿梭至含有35S啟動(dòng)子的植物過(guò)量表達(dá)雙元載體pCB2004(物理圖譜如圖1A所示)中，得到鹽芥cDNA文庫(kù)。上述重組反應(yīng)完全按照Invitrogen提供的實(shí)驗(yàn)指南進(jìn)行。
二、將鹽芥cDNA文庫(kù)轉(zhuǎn)化野生型擬南芥將步驟一構(gòu)建的鹽芥cDNA文庫(kù)穿梭到雙元載體pCB2004中，電轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌C58，采用擬南芥花序浸花轉(zhuǎn)化的方法(floral dip method)(Steven J.Clough and AndrewE.BentFloral dipa simplified method forAgrobacterium-mediatedtransformation of Arabidopsis thaliana.The Plant JournalVolume 16 Issue6 Page 735-December 1998)大規(guī)模轉(zhuǎn)化擬南芥。
三、擬南芥耐鹽轉(zhuǎn)化體的篩選
1、擬南芥轉(zhuǎn)化體庫(kù)的創(chuàng)建在土壤中大規(guī)模播種步驟二獲得的轉(zhuǎn)化有鹽芥cDNA文庫(kù)的擬南芥轉(zhuǎn)化體的種子，在種子發(fā)芽后約5天，表面噴灑濃度為0.2％的除草劑(glufosinate ammonium，商用名為L(zhǎng)iberty，法國(guó)Aventis作物科學(xué)公司)進(jìn)行篩選，以野生型擬南芥為對(duì)照。約1周后可以觀察到轉(zhuǎn)化體植株和野生型植株具有明顯差別，野生型植株在0.2％除草劑glufosinate條件下不能存活，而轉(zhuǎn)化體植物不受影響，可以正常生長(zhǎng)。以200株轉(zhuǎn)化體植株為一單位進(jìn)行收種。
2、高通量方法初篩耐鹽轉(zhuǎn)化體植株下述各實(shí)驗(yàn)中所用的種子均用如下方法進(jìn)行表面滅菌處理用50％消毒液(廣州藍(lán)月亮有限公司)在室溫下滅菌15分鐘，再用經(jīng)滅菌的純凈水沖洗4-5遍。
將經(jīng)消毒的步驟1收獲的種子在4℃下放置3天，以使種子發(fā)芽一致。然后將種子播種于MS基本培養(yǎng)基(含2％蔗糖，1.5％瓊脂粉，pH值5.8，高溫蒸汽滅菌15分鐘)上使其發(fā)芽，種子發(fā)芽生長(zhǎng)條件為22℃，光照培養(yǎng)。發(fā)芽后，再將其播種于含有220mM NaCl和25mg/L除草劑glufosinate的MS培養(yǎng)基上高通量篩選耐鹽轉(zhuǎn)化體，每個(gè)培養(yǎng)皿播3,000粒種子。待植株生長(zhǎng)10天后，將存活下來(lái)的轉(zhuǎn)化體植株移栽到土中，并單株收種。
3、耐鹽轉(zhuǎn)化體的復(fù)篩對(duì)每一可能的耐鹽轉(zhuǎn)化體，選取其大約25至30粒種子用上述步驟2的方法進(jìn)行表面滅菌后，播種于不同濃度的含鹽MS培養(yǎng)基上，鹽濃度在0-200mM NaCl之間。種子生長(zhǎng)一周左右后進(jìn)行觀察并記錄相應(yīng)數(shù)據(jù)，觀察10天后，統(tǒng)計(jì)存活的植株數(shù)量，計(jì)算存活植株數(shù)量和死亡植株數(shù)量，兩者之間比例高于3∶1的符合分離比例，可能為耐鹽株系，將存活植株移入含有25mg/L除草劑glufosinate的MS培養(yǎng)基上，一周后觀察小苗存活情況。如果小苗全部存活，表明上述可能的耐鹽株系的耐鹽性狀和抗除草劑基因連鎖，符合篩選要求。最后，移栽以上耐鹽株系到土壤中，單株收種，將種子保存?zhèn)溆谩?br> 四、耐鹽、抗旱基因ST6-66的獲得根據(jù)鹽芥cDNA在載體pCB2004中插入位點(diǎn)的上、下游序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增cDNA序列，引物序列如下Omega5’TTTTTACAACAATTACCAACAACAACAA3’；attB25’-TACAAGAAAGCTGGGTTTTTTTTTTTT-3’提取步驟三篩選得到的耐鹽轉(zhuǎn)化體的基因組DNA，并以此為模板，在引物Omega和attB2的引導(dǎo)下進(jìn)行PCR擴(kuò)增，50uLPCR擴(kuò)增體系為，0.25uL ExTaq聚合酶(寶生物工程(大連)有限公司)，2uL基因組DNA，10*PCR緩沖液5uL，dNTPs 100uM，上、下游引物各25uM，再用雙蒸水將反應(yīng)體系補(bǔ)充至50uL。用PCR技術(shù)擴(kuò)增轉(zhuǎn)入的鹽芥cDNA。PCR反應(yīng)條件為先95℃ 1min，再66℃ 1min，最后72℃ 2min，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果表明該基因具有序列表中的SEQ ID№1的核苷酸序列，由695個(gè)堿基組成，其編碼序列為自5’端第50-583位堿基，編碼具有序列表中SEQ ID №2的氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)。在網(wǎng)站TAIR(www.arabidopsis.org)上和擬南芥基因組基因組序列進(jìn)行序列比對(duì)，比對(duì)結(jié)果表明該基因與擬南芥同源基因的同源性高達(dá)79％，將該耐鹽、抗旱基因命名為ST6-66。
實(shí)施例2、轉(zhuǎn)化有基因ST6-66的擬南芥在培養(yǎng)基上的耐鹽實(shí)驗(yàn)用實(shí)施例1的方法構(gòu)建ST6-66的過(guò)量表達(dá)載體，將ST6-66克隆入含有35S啟動(dòng)子的過(guò)量表達(dá)雙元載體pCB2004中，得到ST6-66的過(guò)量表達(dá)載體，命名為pCB2004/ST6-66。經(jīng)測(cè)序鑒定正確后，將pCB2004/ST6-66用電轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，再用花序轉(zhuǎn)化方法(floral dip method)轉(zhuǎn)化野生型擬南芥植株。然后對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行耐鹽實(shí)驗(yàn)，方法為選擇其中一株轉(zhuǎn)基因植株(命名為ST6-66)，將其種子分別播種于含100Mm NaCl、150Mm NaCl、165Mm NaCl和180Mm NaCl的MS固體培養(yǎng)基上，以野生型擬南芥為對(duì)照，在常規(guī)條件下培養(yǎng)，觀察并記錄發(fā)芽及生長(zhǎng)情況，結(jié)果如圖1和圖2所示(圖中，黑線左側(cè)播種的是轉(zhuǎn)基因植株ST6-66，黑線右側(cè)播種的是野生型植株(WT))，在100mM NaCl脅迫下，轉(zhuǎn)化體(ST6-66)生長(zhǎng)受到的抑制比野生型(WT)低，在150mM NaCl鹽脅迫條件下，野生型生長(zhǎng)明顯受到抑制，而轉(zhuǎn)化體的生長(zhǎng)狀況則顯著優(yōu)于野生型，表明耐鹽性增強(qiáng)。測(cè)定轉(zhuǎn)化體(ST6-66)和野生型(WT)在上述不同濃度鹽脅迫下的生物量，結(jié)果如圖3所示，轉(zhuǎn)化體的生物量值顯著高于野生型，表明其抗鹽性較野生型顯著增強(qiáng)。統(tǒng)計(jì)在上不同鹽濃度脅迫下植株的成活率，結(jié)果如圖4所示，在鹽濃度不超過(guò)150mM NaCl的情況下，植株的成活不受影響，轉(zhuǎn)化體與野生型無(wú)差異；當(dāng)NaCl濃度達(dá)到165mM時(shí)，野生型成活率降低至20％，而轉(zhuǎn)化體還保持在80％；當(dāng)鹽濃度至180mM時(shí)，野生型完全死亡，而轉(zhuǎn)化體的存活率大約還可保持在40％。
實(shí)施例3、轉(zhuǎn)化有基因ST6-66的擬南芥在土壤中的耐鹽實(shí)驗(yàn)將實(shí)施例2獲得的ST6-66轉(zhuǎn)基因植株ST6-66和野生型擬南芥(WT)的種子播種于土壤中，在相同條件下培養(yǎng)，待生長(zhǎng)約2周后，將兩種擬南芥植株移至含0mM NaCl(對(duì)照)和含250mM NaCl的土壤中繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，觀察并記錄其生長(zhǎng)情況，經(jīng)鹽脅迫處理1周后的植株的生長(zhǎng)情況如圖5A和圖5B所示，轉(zhuǎn)化體耐鹽性顯著強(qiáng)于野生型植株。經(jīng)上述鹽脅迫處理9天后，測(cè)定蓮苔直徑，結(jié)果如圖6所示，野生型植物生長(zhǎng)明顯受到抑制，其植株大小顯著小于轉(zhuǎn)化體。經(jīng)上述鹽脅迫處理后對(duì)種子產(chǎn)量的影響也較顯著，但野生型受到的影響更為嚴(yán)重，如圖7所示，經(jīng)鹽脅迫后，轉(zhuǎn)化體每個(gè)果夾中的種子數(shù)顯著高于野生型。
實(shí)施例4、ST6-66轉(zhuǎn)基因擬南芥在土壤中進(jìn)行的干旱脅迫實(shí)驗(yàn)將ST6-66轉(zhuǎn)基因植株ST6-40和野生型擬南芥(對(duì)照WT)的種子播種于土壤中，在相同條件下培養(yǎng)，待生長(zhǎng)至10天大小時(shí)，實(shí)施干旱脅迫，連續(xù)20天不澆水，以正常條件下生長(zhǎng)的ST6-40和野生型擬南芥為對(duì)照。結(jié)果如圖8所示，野生型植株出現(xiàn)萎焉，而轉(zhuǎn)基因植株只出現(xiàn)輕微的萎焉現(xiàn)象，表明ST6-66在擬南芥中表達(dá)，不但可增強(qiáng)其耐鹽性，還可增強(qiáng)其耐旱性。干旱脅迫處理15天后，測(cè)定蓮苔直徑，結(jié)果如圖9所示，野生型植物生長(zhǎng)明顯受到抑制，其植株大小顯著小于轉(zhuǎn)化體ST6-66。
在經(jīng)過(guò)干旱脅迫處理20天后，開(kāi)始灌水進(jìn)行恢復(fù)實(shí)驗(yàn)。經(jīng)過(guò)3天的澆水恢復(fù)，如圖10所示，轉(zhuǎn)化體明顯回復(fù)到正常生長(zhǎng)水平，但是野生性植株除有一株回復(fù)到基本正常狀況外，其余植株均沒(méi)有回復(fù)正常，干旱致死。
實(shí)施例5、RT-PCR檢測(cè)ST6-66在擬南芥的表達(dá)情況提取ST6-66轉(zhuǎn)基因植株和野生型擬南芥的RNA，并分別以兩種RNA為模板，在引物attB15’-acaagtttgtacaaaaaagcaggct-3’和引物attB25’-tacaagaaagctgggtttttttttttt-3’的引導(dǎo)下，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，以Tubulin為參照(擴(kuò)增Tubulin的引物序列為β-tubulinP15’-CGTGGATCACAGCAATACAGAGCC-3’和β-tubulinP25’-CCTCCTGCACTTCCACTTCGTCTTC-3’)，結(jié)果轉(zhuǎn)基因植株ST6-66可擴(kuò)增出ST6-66，，表明ST6-66轉(zhuǎn)入擬南芥后可在35S啟動(dòng)子作用下過(guò)量表達(dá)。
序列表<160>2<210>1<211>695<212>DNA<213>十字花科植物鹽芥(Thellungiella halophila)<400>1gcaggctggg gatccaacaa aaaaaaaact atattcagcg agaaaaaaaa aaccaaaaga 60tgaacttcat ctctgatcag gaaaaaaaac tctccaaccc gaaaacggcg gagccggagc120acatcaagcc cgtcgaagga accgaaacaa ccaaaaaacc agcttcctcc gccgaggtct180gggctggggc caagattgta cccaaagctg ctcaagccgc agctcgtaac gaatccgaca240aactcgacaa gggtaaagtc gccggagcca gcgttgatat cttaaacgcc gccgagaagt300acggtaagct cgatgaaaaa agcggtgttg gtcagtacct cgagaaggcc gagaagtttc360tcaacgagta cgaatctaca cactctactt ccggcgccgg tgctcctcct ccggcggcgg420caagtcatga tgatccggcg gcggcgagtc atgaggagcc ggcagctaaa aaagccattg480aaaagtctgg tggtggtttg ggaggttatg caaagatggc tcagggtttc atgaagggat540ttgtgatctt tatttgtagt tttattcatg cgcgtaataa taagattaaa taactaagtc600cgctatttag aaattatgtt ggatcgttaa gtatggccgt atgatgaaat aataactttt660ggagatcttc aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 695<210>2<211>177<212>PRT<213>十字花科植物鹽芥(Thellungiella halophila)<400>2Met Asn Phe Ile Ser Asp Gln Glu Lys Lys Leu Ser Asn Pro Lys Thr1 5 10 15Ala Glu Pro Glu His Ile Lys Pro Val Glu Gly Thr Glu Thr Thr Lys20 25 30
Lys Pro Ala Ser Ser Ala Glu Val Trp Ala Gly Ala Lys Ile Val Pro35 40 45Lys Ala Ala Gln Ala Ala Ala Arg Asn Glu Ser Asp Lys Leu Asp Lys50 55 60Gly Lys Val Ala Gly Ala Ser Val Asp Ile Leu Asn Ala Ala Glu Lys65 70 75 80Tyr Gly Lys Leu Asp Glu Lys Ser Gly Val Gly Gln Tyr Leu Glu Lys85 90 95Ala Glu Lys Phe Leu Asn Glu Tyr Glu Ser Thr His Ser Thr Ser Gly100 105 110Ala Gly Ala Pro Pro Pro Ala Ala Ala Ser His Asp Asp Pro Ala Ala115 120 125Ala Ser His Glu Glu Pro Ala Ala Lys Lys Ala Ile Glu Lys Ser Gly130 135 140Gly Gly Leu Gly Gly Tyr Ala Lys Met Ala Gln Gly Phe Met Lys Gly145 150 155 160Phe Val Ile Phe Ile Cys Ser Phe Ile His Ala Arg Asn Asn Lys Ile165 170 175Lys
權(quán)利要求
1.鹽芥的一個(gè)耐鹽、抗旱基因，具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID №1的DNA序列；2)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中SEQ ID №1限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的耐鹽、抗旱基因，其特征在于所述基因具有序列表中SEQ ID №1的DNA序列。
3.權(quán)利要求1所述耐鹽、抗旱基因的編碼蛋白，是具有序列表中SEQ ID №2的氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)。
4.含有權(quán)利要求1或2所述耐鹽、抗旱基因的表達(dá)載體。
5.含有權(quán)利要求1或2所述耐鹽、抗旱基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。
6.含有權(quán)利要求1或2所述耐鹽、抗旱基因的宿主菌。
7.一種培育耐鹽、抗旱植物的方法，是利用植物表達(dá)載體將權(quán)利要求1或2所述的耐鹽、抗旱基因?qū)胫参锛?xì)胞，獲得對(duì)高鹽、干旱耐受力增強(qiáng)的的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系及轉(zhuǎn)基因植株。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述被轉(zhuǎn)化的植物宿主為擬南芥、小麥、水稻或大豆。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了來(lái)自鹽芥的一個(gè)耐鹽、抗旱基因及其編碼蛋白。該基因可具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID №1的DNA序列；2)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中SEQ ID №1限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。該基因的編碼蛋白具有序列表中SEQ ID №2的氨基酸殘基序列。本發(fā)明的耐鹽、抗旱基因?qū)⒃谂嘤望}性增強(qiáng)的植物(特別是水稻、小麥等農(nóng)作物)中發(fā)揮重要的作用。
文檔編號(hào)C07K14/415GK1727482SQ20051008303
公開(kāi)日2006年2月1日 申請(qǐng)日期2005年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月12日
發(fā)明者杜金, 向成斌 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)