專利名稱：氨基酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及氨基酸衍生物、它們的制備方法、它們的用途和包含它們的藥物組合物。
更具體而言，本發(fā)明提供了游離形式或鹽形式的式I化合物 其中R1是任選地被OH、C1-2烷氧基或1-6個氟原子取代的C1-6烷基；C2-6鏈烯基；或C2-6炔基；R2是式a、b或c的基團 其中R6是C1-12烷基，其任選地被以下基團取代鹵素、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的苯基、任選地被取代的雜芳基或任選地被取代的雜環(huán)基，其中C1-12烷基任選地被一個或多個O或C＝O間斷；并且其中苯基、雜芳基、環(huán)烷基和/或雜環(huán)基可以被1-5個取代基取代，該取代基選自羥基；鹵素；C1-4烷基；被1-5個氟原子取代的C1-4烷基；C1-4烷氧基；被1-5個氟原子取代的C1-4烷氧基；氰基；苯基；和被1-5個選自羥基、鹵素、C1-4烷基、被1-5個氟原子取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、被1-5個氟原子取代的C1-4烷氧基和氰基的取代基取代的苯基；
R7是H、任選地被取代的苯基、任選地被取代的雜芳基，其中苯基和/或雜芳基獨立地可以被1-5個選自羥基、鹵素、C1-4烷基、被1-5個氟原子取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、被1-5個氟原子取代的C1-4烷氧基和氰基的取代基取代；X是O、C＝O、S或鍵；Z是N或CH；R3是-A-B-COOH，其中A和B各自獨立地是鍵、C＝O或CDE，其中D和E各自獨立地是H、鹵素、C1-3烷基、OH；條件是A和B不均是C＝O；和R4和R5各自獨立地是H、任選地被1、2或3個鹵素原子取代的C1-4烷基或?；?。
烷基或烷基部分可以是直鏈或支鏈，例如甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基。鏈烯基可以是例如乙烯基。炔基可以是例如丙炔-2-基。環(huán)烷基可以是例如C3-6環(huán)烷基。
?；梢允菤埢鵚-CO，其中W是C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、苯基或苯基C1-4烷基。
鹵素可以是F、Cl或Br，優(yōu)選為F或Cl。
雜芳基可以是包含1-4個選自N、O和S的雜原子的5-8元芳環(huán)，例如吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、呋喃基、唑基、異唑基、噻吩基、噻唑基、異噻唑基、吡咯基、咪唑基或吡唑基。
雜環(huán)基是指3-8元、優(yōu)選5-8元的飽和或不飽和的雜環(huán)，包括例如四氫呋喃基、四氫吡喃基、吖丙啶基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基。
式I化合物可以以游離形式或以鹽形式存在，所述鹽形式例如與例如無機酸的加成鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽或硫酸鹽；與有機酸的加成鹽，如乙酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、甲磺酸鹽或苯磺酸鹽；羧酸基團也可以以鹽形式存在，例如銨鹽或與金屬如鈉、鉀、鈣、鋅或鎂的鹽，或它們的混合物。水合物或溶劑合物形式的式I化合物和它們的鹽也是本發(fā)明的一部分。
當(dāng)式I化合物在分子中具有不對稱中心時，可以獲得多種旋光異構(gòu)體。本發(fā)明也包括對映體、外消旋物、非對映異構(gòu)體以及它們的混合物。例如，帶有R1、R3和NR4R5的中心碳原子可以具有R或S構(gòu)型。具有以下三維構(gòu)型的化合物一般是優(yōu)選的 另外，當(dāng)式I化合物包括幾何異構(gòu)體時，本發(fā)明包括順式-化合物、反式-化合物以及它們的混合物。類似的考慮也適用于存在上述不對稱碳原子或不飽和鍵的原料，例如下述的式II、III或IV化合物。
在式I化合物中，單獨地或以任何亞組合優(yōu)選以下含義1.R1是CH3或CH2-OH；2.R3是CH2-COOH；3.R4和R5各自是氫；4.R7是氫、苯基或噻吩基；5.X是O或鍵；和6.如果R2是式a的基團，XR6在-(CH2)2-CR1R3(NR4R5)的對位。
本發(fā)明也包括制備式I化合物的方法，該方法包括除去式II化合物中存在的保護基團， 其中R1、R2和R5如上文所定義，R3’是-A-B-COOR8，其中A和B如上文所定義，R8是可水解的或可氫解的基團，并且R4’是氨基保護基團，和，如果需要，將獲得的游離形式的式I化合物轉(zhuǎn)化為所需的鹽形式，反之亦然。
保護基團的除去可以根據(jù)本領(lǐng)域中公知的方法進行。氨基保護基團的除去可以方便地根據(jù)本領(lǐng)域中公知的方法進行，例如通過水解進行，例如在酸性介質(zhì)中、例如用鹽酸水解。氨基保護基團的實例有例如在“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”T.W.Greene，J.Wiley & Sons NY，第二版，第七章，1991以及其中的參考文獻(xiàn)中所公開的那些，例如芐基、對-甲氧基芐基、甲氧基甲基、四氫吡喃基、三烷基硅烷基、酰基、叔丁氧基羰基、芐氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、三氟乙?；?。
本發(fā)明也包括制備式II化合物的方法，其中X是O，該方法包括將式III化合物烷基化， 其中R1、R3’、R4’和R5如上文所定義，且R2’是式a’或b’的基團， 以引入所需的殘基R6。
式III化合物的烷基化可以根據(jù)本領(lǐng)域中公知的方法進行，例如通過親核取代進行，例如通過與烷基化劑R6-X3反應(yīng)，其中X3是甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根、硝基苯磺酸根(nosylate)或鹵素如氯、溴或碘。烷基化也可以按照Mirsunobu方法(例如，如Hughes，Organic Preparationsand Procedures International 28，127-64，1996或D.L.Hughes，Org.React.42，335，1992中所公開的那樣)在溶液中或在固相支持合成物上、例如通過將式III化合物連接到樹脂上進行。或者，可以使用三苯膦或例如與樹脂例如聚苯乙烯鍵合的偶氮二甲酸二乙酯。
本發(fā)明也包括制備式I化合物的方法，該方法包括水解式IV化合物中存在的氰基， 其中R1、R2和R5如上文所定義，R3’是-A-B-CN并且R4’是氨基保護基團，和，如果需要，將獲得的游離形式的式I化合物轉(zhuǎn)化為所需的鹽形式，反之亦然。
在沒有具體描述原料的制備的情況下，這些化合物是已知的或者可以根據(jù)與本領(lǐng)域中公知的方法相類似的方法或如下文實施例中所公開的那樣進行制備。
用下面的實施例來對本發(fā)明進行說明。熔點是未經(jīng)校正的。
RT ＝室溫DMF＝二甲基甲酰胺HPLC ＝高效液相色譜法DMSO ＝二甲亞砜THF＝四氫呋喃AcOEt ＝乙酸乙酯實施例1(R)-3-氨基-5-(4-庚氧基-苯基)-3-甲基-戊酸 在微波容器中，將攪拌的[(R)-1-氰甲基-3-(4-庚氧基-苯基)-1-甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(136mg，0.34mMol)在二烷(2mL)中的溶液用鹽酸(37％水溶液，1mL)處理。將混合物加熱至160℃達(dá)1.3小時。然后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并且在減壓下濃縮。用制備型HPLC處理，用5％→95％乙腈的水溶液(+0.1％三氟乙酸)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無定形白色粉末。
1H-NMR(d6-DMSO)7.95(br s，1H)，7.06(d，J＝9Hz，2H)，6.83(d，J＝9Hz，2H)，3.89(t，J＝7Hz，2H)，3.40-3.20(m，2H)，2.53-2.45(m，2H)，1.86-1.75(m，2H)，1.66(q，J＝8Hz，2H)，1.41-1.20(m，11H)，0.85(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI+)m/z＝322.1[M+H]+。-氨基甲酸叔丁酯的制備
向攪拌的(R)-4-[2-(4-庚氧基-苯基)-乙基]-4-甲基-2，2-二氧代-2λ*6*-[1，2，3]噻唑烷(oxathiazolidine)-3-甲酸叔丁酯(174mg，0.40mMol)在DMF(5mL)中的溶液中加入氰化鈉(94mg，1.91mMol)。將混合物在室溫下攪拌25小時。加入另外的氰化鈉(37mg，0.76mMol)并且將混合物在室溫下攪拌18小時。然后，將反應(yīng)混合物倒在AcOEt與NaHCO3(飽和水溶液)的二相混合物上。水相用AcOEt萃取兩次。將合并的有機層干燥(Na2SO4)并在減壓下濃縮。用柱色譜法處理，用5％AcOEt的甲苯溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物。
1H-NMR(CDCl3)7.09-7.04(m，2H)，6.83-6.78(m，2H)，4.59(br s，1H)，3.91(t，J＝7Hz，2H)，3.08(br d，J＝7Hz，1H)，2.78(d，J＝7Hz，1H)，2.59-2.50(m，2H)，2.32-2.20(m，1H)，1.82-1.70(m，3H)，1.48(s，9H)，1.48-1.18(m，11H)，0.90(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI+)m/z＝468.3[M+CH3CN+Na]+，827.6[2M+Na]+。
(R)-4-[2-(4-庚氧基-苯基)-乙基]-4-甲基-2，2-二氧代-2λ*6*-[1，2，3]噻唑烷-3-甲酸叔丁酯的制備 向攪拌的(R)-4-[2-(4-庚氧基-苯基)-乙基]-4-甲基-2-氧代-[1，2，3]噻唑烷-3-甲酸叔丁酯(275mg，0.63mMol)在乙腈/水(9/1，10mL)中的溶液中加入高碘酸鈉(401mg，1.88mmol)和氯化釕(III)(13mg，0.06mMol)。將混合物在室溫下攪拌18小時。加入另外的氯化釕(III)(65mg，0.3mMol)并且將混合物在室溫下攪拌65小時。然后，將反應(yīng)混合物通過硅藻土墊過濾，將濾液倒在AcOEt與Na2S2O3(飽和水溶液)的二相混合物上。水相用AcOEt萃取三次。將合并的有機層干燥(Na2SO4)并在減壓下濃縮。用柱色譜法處理，用5％→15％AcOEt的庚烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物。
1H-NMR(CDCl3)7.07(d，J＝8Hz，2H)，6.81(d，J＝8Hz，2H)，4.42(d，J＝9Hz，1H)，4.16(d，J＝9Hz，1H)，3.92(t，J＝6Hz，2H)，2.67-2.50(m，2H)，2.43-2.32(m，1H)，2.09-1.95(m，1H)，1.75(qt，J＝7Hz，2H)，1.62(s，3H)，1.53(s，9H)，1.50-1.22(m，8H)，0.90(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI+)m/z＝478.2[M+Na]+，933.4[2M+Na]+。
(R)-4-[2-(4-庚氧基-苯基)-乙基]-4-甲基-2-氧代-[1，2，3]噻唑烷-3-甲酸叔丁酯的制備 將攪拌的亞硫酰氯(0.14mL，1.91mMol)在乙腈(10mL)中的溶液冷卻至-40℃。在該溫度下，依次加入[(R)-3-(4-庚氧基-苯基)-1-羥甲基-1-甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.76mMol)在乙腈(5mL)中的溶液和吡啶(0.31mL，3.81mMol)。使混合物歷經(jīng)2.5小時溫?zé)嶂?0℃。然后，將反應(yīng)混合物倒在AcOEt與HCl(水溶液，1M)的二相混合物上。水相用AcOEt萃取兩次。將合并的有機層用NaHCO3(飽和水溶液)洗滌、干燥(Na2SO4)并在減壓下濃縮。用柱色譜法處理，用5％→15％AcOEt的庚烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物(2種非對映體，dr＝1∶1)。
非對映體11H-NMR(CDCl3)7.07(d，J＝9Hz，2H)，6.81(d，J＝9Hz，2H)，4.95(br d，J＝9Hz，1H)，4.28(d，J＝9Hz，1H)，3.92(t，J＝6Hz，2H)，2.62(dt，J＝5Hz，8Hz，1H)，2.50(dt，J＝5Hz，8Hz，1H)，2.40-2.28(m，1H)，2.10-1.99(m，1H)，1.76(qt，J＝7Hz，2H)，1.66-1.23(m，20H)，0.90(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI+)m/z＝462.3[M+Na]+，901.6[2M+Na]+。
非對映體21H-NMR(CDCl3)7.04(d，J＝8Hz，2H)，6.80(d，J＝8Hz，2H)，4.82(br d，J＝9Hz，1H)，4.59(d，J＝9Hz，1H)，3.91(t，J＝7Hz，2H)，2.59(dt，J＝5Hz，8Hz，1H)，2.39(dt，J＝5Hz，7Hz，1H)，2.28-2.16(m，1H)，1.93-1.82(m，1H)，1.80-1.22(m，22H)，0.90(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI+)m/z＝462.3[M+Na]+，901.6[2M+Na]+。-氨基甲酸叔丁酯的制備 向攪拌的[(R)-1-羥甲基-3-(4-羥基-苯基)-1-甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(2.06g，6.98mMol)在乙醇(100mL)中的溶液中加入碳酸鉀(2.90g，20.8mMol)和甲磺酸庚酯(2.04g，10.5mMol)。將混合物加熱至回流溫度并在該溫度下攪拌6小時。然后，將混合物冷卻至室溫并在室溫下攪拌過夜。然后，將反應(yīng)混合物倒在AcOEt與HCl(水溶液，1M)的二相混合物上。水相用AcOEt萃取兩次。將合并的有機層用NaHCO3(飽和水溶液)洗滌、干燥(Na2SO4)并在減壓下濃縮。用柱色譜法處理，用8％AcOEt的甲苯溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物。
1H-NMR(CDCl3)7.10-7.05(m，2H)，6.81-6.76(m，2H)，4.60(br s，1H)，4.07(br s，1H)，3.92(t，J＝6Hz，2H)，3.70(d，J＝12Hz，1H)，3.62(d，J＝12Hz，1H)，2.65-2.43(m，2H)，2.07-1.94(m，1H)，1.88-1.69(m，1H)，1.68-1.60(m，2H)，1.45(s，9H)，1.50-1.25(m，8H)，1.22(s，3H)，0.88(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI+)m/z＝416.1[M+Na]+。
實施例2(R)-2-氨基-4-(4-庚氧基-苯基)-2-甲基-丁酸
向攪拌的(R)-2-叔丁氧基羰基氨基-4-(4-庚氧基-苯基)-2-甲基-丁酸(43mg，0.11mMol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(0.1mL)。將混合物在室溫下攪拌8小時。然后，將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮。用柱色譜法處理，用5％→25％MeOH的CH2Cl2溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物。
1H-NMR(d6-DMSO)8.32(br s，3H)，7.02(d，J＝8Hz，2H)，6.81(d，J＝8Hz，2H)，3.88(t，J＝7Hz，2H)，2.70-2.58(m，1H)，2.42-2.31(m，1H)，2.04-1.83(m，2H)，1.70-1.62(m，2H)，1.45(s，3H)，1.44-1.21(m，8H)，0.72(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI-)m/z＝306.3[M-H]+。
(R)-2-叔丁氧基羰基氨基-4-(4-庚氧基-苯基)-2-甲基-丁酸的制備 向攪拌的[(R)-1-甲?；?3-(4-庚氧基-苯基)-1-甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(103mg，0.26mMol)在叔丁醇(1mL)和10％KH2PO4水溶液(1mL)中的溶液中加入2-甲基-2-丁烯(0.66mL，5.27mMol)和亞氯酸鈉(59mg，0.52mMol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。然后，將反應(yīng)混合物倒在AcOEt與HCl(水溶液，1M)的二相混合物上。水相用AcOEt萃取兩次。將合并的有機層用少量NaHCO3(飽和水溶液)洗滌、干燥(Na2SO4)并在減壓下濃縮。用柱色譜法處理，用5％MeOH的CH2Cl2溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物。
MS(ESI+)m/z＝430.2[M+Na]+。-氨基甲酸叔丁酯的制備
向攪拌的[(R)-1-羥甲基-3-(4-羥基-苯基)-1-甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(1.98g，5.03mMol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入N-嗎啉-N-氧化物(884mg，7.54mMol)和過鐐酸四正丙基銨(177mg，0.50mMol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。然后，將混合物通過短SiO2墊過濾并用乙醚洗脫。將濾液在減壓下濃縮，得到標(biāo)題混合物。該粗產(chǎn)物足夠純，可不經(jīng)進一步純化直接用于下一步驟。
1H-NMR(CDCl3)9.33(s，1H)，7.06-7.01(m，2H)，6.82-6.76(m，2H)，5.18(br s，1H)，3.92(t，2H)，2.60-2.49(m，1H)，2.44-2.19(m，2H)，2.01-1.93(m，1H)，1.80-1.71(m，2H)，1.55(s，3H)，1.48-1.25(m，17H)，0.89(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI+)m/z＝414.2[M+Na]+。
實施例3(R)-4-氨基-6-(4-庚氧基-苯基)-4-甲基-己酸 向攪拌的(R)-4-叔丁氧基羰基氨基-6-(4-庚氧基-苯基)-4-甲基-己酸(24mg，0.06mMol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(0.1mL)。將混合物在室溫下攪拌6.5小時。然后，將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物，為無定形白色粉末。該粗產(chǎn)物足夠純，可不經(jīng)進一步純化直接使用。
1H-NMR(d6-DMSO)7.81(br s，3H)，7.12-7.07(m，2H)，6.85-6.81(m，2H)，3.90(t，J＝7Hz，2H)，2.52-2.29(m，4H)，1.88-1.80(m，2H)，1.77-1.62(m，4H)，1.40-1.21(m，11H)，0.85(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI+)m/z＝336.2[M+H]+。
(R)-4-叔丁氧基羰基氨基-6-(4-庚氧基-苯基)-4-甲基-己酸的制備
向攪拌的(E)-(R)-4-叔丁氧基羰基氨基-6-(4-庚氧基-苯基)-4-甲基己-2-烯酸(53mg，0.12mMol)在AcOEt(10mL)中的溶液中加入披鈀碳(10mg，10％)。將反應(yīng)在H2氣氛下于室溫下攪拌17小時。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，將濾液在減壓下濃縮，得到標(biāo)題混合物，為無色油狀物。該粗產(chǎn)物足夠純，可不經(jīng)進一步純化直接用于下一步驟。
1H-NMR(CDCl3)7.06(d，J＝9Hz，2H)，6.80(d，J＝9Hz，2H)，4.42(br s，1H)，3.92(t，J＝6Hz，2H)，2.51(t，J＝8Hz，2H)，2.38(t，J＝8Hz，2H)，2.28-2.17(m，1H)，2.11-2.00(m，1H)，1.97-1.70(m，4H)，1.50-1.22(m，20H)，0.90(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI-)m/z＝434.4[M-H]+。
(E)-(R)-4-叔丁氧基羰基氨基-6-(4-庚氧基-苯基)-4-甲基-己-2-烯酸的制備 向攪拌的(E)-(R)-4-叔丁氧基羰基氨基-6-(4-庚氧基-苯基)-4-甲基己-2-烯酸乙酯(56mg，0.12mMol)在甲醇(0.5mL)、THF(0.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中加入氫氧化鋰(14mg，0.61mMol)。將混合物在室溫下攪拌3.5小時。然后，將反應(yīng)混合物倒在AcOEt與HCl(水溶液，1M)的二相混合物上。水相用AcOEt萃取兩次。將合并的有機層用少量NaHCO3(飽和水溶液)洗滌、干燥(Na2SO4)并在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物。該粗產(chǎn)物足夠純，可不經(jīng)進一步純化直接用于下一步驟。
1H-NMR(d6-DMSO)12.3(br s，1H)，7.08-7.00(m，2H)，6.91(br s，1H)，6.83(d，J＝16Hz，1H)，6.79-6.75(m，2H)，5.67(d，J＝16Hz，1H)，3.88(t，J＝7Hz，2H)，2.50-2.31(m，1H)，2.00-1.89(m，1H)，1.79-1.60(m，4H)，1.40-1.19(m，20H)，0.83(t，J＝7Hz，3H)。MS(ESI+)m/z＝456.3[M+Na]+。
(E)-(R)-4-叔丁氧基羰基氨基-6-(4-庚氧基-苯基)-4-甲基-己-2-烯酸乙酯的制備
在-78℃下，向攪拌的(二乙氧基-磷?；?-乙酸乙酯(429mg，1.92mMol)在干燥THF(7mL)中的溶液中加入正丁基鋰(0.66mL，2.5M的己烷溶液，1.66mMol)。將混合物在-78℃下攪拌1小時。然后，加入[(R)-1-甲?；?3-(4-庚氧基-苯基)-1-甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.28mMol)在THF(4mL)中的溶液并且在-78℃下繼續(xù)攪拌1.5小時。使混合物溫?zé)嶂潦覝?，然后在室溫下攪?小時。然后，將反應(yīng)混合物倒在AcOEt與NaHCO3(飽和水溶液)的二相混合物上，水相用AcOEt萃取兩次。將合并的有機層干燥(Na2SO4)并在減壓下濃縮。用柱色譜法處理，用4％AcOEt的甲苯溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物。
1H-NMR(CDCl3)7.10-7.01(m，2H)，7.00(d，J＝16Hz，1H)，6.83-6.78(m，2H)，5.86(d，J＝16Hz，1H)，4.60(br s，1H)，4.20(q，J＝7Hz，2H)，3.92(t，J＝7Hz，2H)，2.55-2.48(m，2H)，2.11-2.01(m，1H)，1.99-1.86(m，1H)，1.80-1.71(m，2H)，1.56(s，3H)，1.48-1.22(m，20H)，0.89(t，J＝7Hz，3H)。
游離形式或可藥用鹽形式的式I化合物表現(xiàn)出有價值的藥理學(xué)性質(zhì)，例如淋巴細(xì)胞再循環(huán)調(diào)節(jié)性質(zhì)，例如如在體外和體內(nèi)試驗中所顯示的那樣，因此它們適合用于治療。
A體外如在以下測定中所測定的那樣，式I化合物對于各個人S1P受體具有結(jié)合親和性。
1-磷酸鞘氨醇(S1P)受體的情況用人S1P受體EDG-1(S1P1)、EDG-3(S1P3)、EDG-5(S1P2)、EDG-6(S1P4)和EDG-8(S1P5)試驗了化合物的激動劑活性。通過對化合物誘導(dǎo)的GTP[γ-35S]與膜蛋白的結(jié)合進行定量來評價功能受體活化，所述的膜蛋白是由穩(wěn)定表達(dá)適當(dāng)?shù)娜薙1P受體的轉(zhuǎn)染的CHO或RH7777細(xì)胞制備的。所用的測定技術(shù)是SPA(閃爍親近測定法)。簡言之，將DMSO溶解的化合物連續(xù)稀釋并在50mM Hepes、100mM NaCl、10mM MgCl2、10μM GDP、0.1％無脂肪BSA和0.2nM GTP[γ-35S](1200Ci/mmol)存在下加入到SPA-珠(Amersham-Pharmacia)固定的表達(dá)S1P受體的膜蛋白(10-20μg/孔)中。在96孔微量滴定板中于室溫下孵育120分鐘后，通過離心步驟分離未結(jié)合的GTP[γ-35S]。用TOPcount讀板儀(Packard)定量由膜結(jié)合的GTP[γ-35S]引發(fā)的SPA珠的發(fā)光。用標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合軟件計算EC50。在該測定中，式I化合物對S1P1受體的結(jié)合親和性＜50nM。
Agon＝激動劑B.體內(nèi)血淋巴細(xì)胞消減將式I化合物或媒介物通過管飼法口服施用于大鼠。在第1天尾部采血以進行血液監(jiān)測，得到各個基線值，并且在施用后2、6、24、48和72小時尾部采血以進行血液監(jiān)測。在該測定中，當(dāng)以0.03-3mg/kg的劑量施用時，式I化合物消減外周血淋巴細(xì)胞。例如，獲得以下結(jié)果外周血淋巴細(xì)胞消減大于50％。
實施例13.2mg/kg，口服，6小時后因此，式I化合物可用于治療和/或預(yù)防淋巴細(xì)胞相互作用介導(dǎo)的疾病或障礙，例如在移植中，如細(xì)胞、組織或器官的同種異體移植物或異種移植物的急性或慢性排斥反應(yīng)或移植物功能延遲恢復(fù)(delayed graftfunction)、移植物抗宿主病、自身免疫性疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、橋本甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、I型或II型糖尿病和與其相關(guān)的障礙、脈管炎、惡性貧血、舍格倫綜合征、眼色素層炎、銀屑病、格雷夫斯眼病(Graves ophthalmopathy)、斑禿等、變應(yīng)性疾病例如變應(yīng)性哮喘、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性鼻炎/結(jié)膜炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、任選地伴有潛在異常反應(yīng)的炎性疾病例如炎性腸病、克隆病或潰瘍性結(jié)腸炎、內(nèi)源性哮喘、炎性肺損傷、炎性肝損傷、炎性腎小球損傷、動脈粥樣硬化、骨關(guān)節(jié)炎、刺激性接觸性皮炎以及另外的濕疹性皮炎、脂溢性皮炎、免疫學(xué)介導(dǎo)的障礙的皮膚表征、炎性眼病、角膜結(jié)膜炎、心肌炎或肝炎、缺血/再灌注損傷例如心肌梗死、中風(fēng)、腸局部缺血、腎衰竭或出血性休克、外傷性休克、血管生成、阿爾茨海默病、癌癥例如乳腺癌、T細(xì)胞淋巴瘤或T細(xì)胞白血病、感染性疾病例如中毒性休克(例如超抗原誘導(dǎo)的)、敗血癥性休克、成人型呼吸窘迫綜合征或病毒性感染例如AIDS、病毒性肝炎、慢性細(xì)菌性感染或老年性癡呆。細(xì)胞、組織或?qū)嶓w器官移植的實例包括例如胰島、干細(xì)胞、骨髓、角膜組織、神經(jīng)元組織、心、肺、心肺聯(lián)合、腎、肝、腸、胰腺、氣管或食管。對于以上用途，所需劑量當(dāng)然將根據(jù)施用方式、待治療的特定疾病和所需的效果而變化。
一般而言，表明以約0.03-2.5mg/kg體重的日劑量全身性施用時可獲得令人滿意的結(jié)果。在較大的哺乳動物例如人中，適用的日劑量在約0.5mg至約100mg范圍內(nèi)，該日劑量可以方便地例如以每天不超過4次的分劑量施用或以緩釋形式施用。對于口服施用而言，適合的單位劑量形式包含約0.1-50mg活性成分。
式I化合物可以通過任何常規(guī)途徑施用，特別是腸道施用，例如口服施用，例如以片劑或膠囊劑的形式腸道施用；或胃腸外施用，例如以可注射溶液劑或混懸劑的形式胃腸外施用；局部施用，例如以洗劑、凝膠劑、軟膏劑或乳膏劑的形式局部施用；或以鼻用形式或栓劑形式施用。包含游離形式或可藥用鹽形式的式I化合物以及至少一種可藥用的載體或稀釋劑的藥物組合物可以用常規(guī)方法通過與可藥用的載體或稀釋劑混合來制備。
式I化合物可以以游離形式或以可藥用鹽形式、例如上述的可藥用鹽形式施用。該類鹽可以用常規(guī)方法制備并且具有與游離化合物相同級別的活性。
根據(jù)前述內(nèi)容，本發(fā)明還提供了
1.1在需要這類治療的個體中預(yù)防或治療淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的障礙或疾病、例如上述那些的方法，該方法包括對所述個體施用有效量的式I化合物或其可藥用鹽；1.2在需要這類治療的個體中預(yù)防或治療急性或慢性移植物排斥反應(yīng)或T細(xì)胞介導(dǎo)的炎性或自身免疫性疾病、例如上述那些的方法，該方法包括對所述個體施用有效量的式I化合物或其可藥用鹽；2.用作藥物、例如在以上1.1或1.2項下所述的任意一種方法中用作藥物的游離形式或可藥用鹽形式的式I化合物。
3.藥物組合物，例如在以上1.1或1.2項下所述的任意一種方法中使用的藥物組合物，其包含游離形式或可藥用鹽形式的式I化合物以及可藥用的稀釋劑或載體。
4.用于制備在以上1.1或1.2項下所述的任意一種方法中使用的藥物組合物的式I化合物或其可藥用鹽。
式I化合物可以作為唯一的活性成分被施用，或者與例如作為輔劑的其它藥物聯(lián)合施用，所述的其它藥物例如免疫抑制或免疫調(diào)節(jié)劑或其它抗炎劑，例如用于治療或預(yù)防同種異體移植物或異種移植物的急性或慢性排斥反應(yīng)或者炎性或自身免疫性障礙的上述藥物；或化療劑，例如抗惡性細(xì)胞增殖劑。例如，式I化合物可以與以下物質(zhì)組合使用鈣調(diào)磷酸酶抑制劑，例如環(huán)孢菌素A、FK 506或ISATX247；mTOR抑制劑，例如雷帕霉素、40-O-(2-羥乙基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578、AP23573、AP23464、AP23675、AP23841、TAFA-93、biolimus 7或biolimus 9；具有免疫抑制性質(zhì)的子囊霉素，例如ABT-281、ASM981等；皮質(zhì)類固醇；環(huán)磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；來氟米特；咪唑立賓；麥考酚酸；麥考酚酸嗎乙酯；15-去氧斯潘格寧或其免疫抑制同系物、類似物或衍生物；免疫抑制單克隆抗體，例如白細(xì)胞受體例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、CD40、CD45、CD58、CD80、CD86或其配體的單克隆抗體；其它免疫調(diào)節(jié)化合物，例如具有至少一部分CTLA4或其突變體的胞外結(jié)構(gòu)域、例如至少與非-CTLA4蛋白序列結(jié)合的CTLA4或其突變體、例如CTLA4Ig(例如稱為ATCC 68629)或其突變體的胞外部分的重組結(jié)合分子，例如LEA29Y；粘附分子抑制劑，例如LFA-1拮抗劑、ICAM-1或-3拮抗劑、VCAM-4拮抗劑或VLA-4拮抗劑；或化療劑，例如紫杉醇、吉西他濱、順鉑、阿霉素或5-氟尿嘧啶；或抗感染劑。
當(dāng)式I化合物與其它免疫抑制/免疫調(diào)節(jié)、抗炎、化療或抗感染治療聯(lián)合施用時，共同施用的免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、化療或抗感染化合物的劑量當(dāng)然將根據(jù)所用的共同施用藥物的類型(例如其是甾類化合物還是鈣調(diào)磷酸酶抑制劑)、所用的特定藥物、待治療的病癥等而變化。根據(jù)上述內(nèi)容，本發(fā)明在另一方面還提供了5.如上所定義的方法，其包括共同施用、例如以并行或相繼方式共同施用治療有效的無毒量的式I化合物和至少一種第二種藥物，例如免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)、抗炎或化療藥物，例如上文所述的那些。
6.藥物組合，例如套藥盒，其包含a)第一種物質(zhì)，其是本文所公開的游離形式或可藥用鹽形式的式I化合物，和b)至少一種聯(lián)用物質(zhì)，例如免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎劑、化療劑或抗感染劑。該套藥盒可以包含關(guān)于其施用的說明書。
本文所用的術(shù)語“共同施用”或“組合施用”等意指將所選擇的治療劑施用于單個患者，并且旨在包括其中各物質(zhì)不一定通過相同的施用途徑或在相同時間進行施用的治療方案。
本文所用的術(shù)語“藥物組合”意指通過將一種以上的活性成分相混合或組合而得到的產(chǎn)品，它包括活性成分的固定組合和非固定組合。術(shù)語“固定組合”意指活性成分、例如式I化合物與聯(lián)用物質(zhì)以單一實體或劑量的形式被同時施用于患者。術(shù)語“非固定組合”意指活性成分、例如式I化合物與聯(lián)用物質(zhì)作為分開的實體被同時、并行或無特定時間限制地相繼施用于患者，其中所述施用在患者體內(nèi)提供治療有效水平的2種化合物。后者也適用于雞尾酒療法(cocktail therapy)，例如施用3種或更多種活性成分。
權(quán)利要求
1.游離形式或鹽形式的式I化合物 其中R1是任選地被OH、C1-2烷氧基或1-6個氟原子取代的C1-6烷基；C2-6鏈烯基；或C2-6炔基；R2是式a、b或c的基團 其中R6是C1-12烷基，其任選地被以下基團取代鹵素、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的苯基、任選地被取代的雜芳基或任選地被取代的雜環(huán)基，其中C1-12烷基任選地被一個或多個O或C＝O間斷；并且其中苯基、雜芳基、環(huán)烷基和/或雜環(huán)基可以被1-5個取代基取代，該取代基選自羥基；鹵素；C1-4烷基；被1-5個氟原子取代的C1-4烷基；C1-4烷氧基；被1-5個氟原子取代的C1-4烷氧基；氰基；苯基；和被1-5個選自羥基、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基和氰基的取代基取代的苯基；R7是H、任選地被取代的苯基、任選地被取代的雜芳基，其中苯基和/或雜芳基獨立地可以被1-5個選自羥基、鹵素、C1-4烷基、被1-5個氟原子取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、被1-5個氟原子取代的C1-4烷氧基和氰基的取代基取代；X是O、C＝O、S或鍵；Z是N或O；R3是-A-B-COOH，其中A和B各自獨立地是鍵、C＝O或CDE，其中D和E各自獨立地是H、鹵素、C1-3烷基、OH；條件是A和B不均是C＝O；和R4和R5各自獨立地是H、任選地被1、2或3個鹵素原子取代的C1-4烷基或?；?；條件是如果R4是H，R5是H，R3是COOH，R2是式a的基團并且R7是H，i)R1是CH2OH且XR6是未被取代的C1-12烷基，那么XR6不在(CH2)2-CR1R3(NR4R5)的對位；或者ii)R1是CH3且XR6是未被取代的OC1-12烷基，那么XR6不在(CH2)2-CR1R3(NR4R5)的間位。
2.式II化合物或其鹽 其中R1至R3和R5如權(quán)利要求1中所定義，并且R4’是保護基團。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的化合物，該化合物選自(R)-3-氨基-5-(4-庚氧基-苯基)-3-甲基-戊酸、(R)-4-氨基-6-(4-庚氧基-苯基)-4-甲基-己酸和(R)-2-氨基-4-(4-庚氧基-苯基)-2-甲基-丁酸。
4.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至3中任意一項所述的游離形式或可藥用鹽形式的化合物以及一種或多種可藥用的稀釋劑或載體。
5.用作藥物的權(quán)利要求1至3中任意一項所述的游離形式或可藥用鹽形式的化合物或權(quán)利要求4所述的組合物。
6.權(quán)利要求1-3中任意一項所述的游離形式或可藥用鹽形式的化合物或權(quán)利要求4所述的藥物組合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療或預(yù)防同種異體移植物排斥反應(yīng)、自身免疫性疾病、移植物抗宿主病、炎性疾病、心肌炎、肝炎、缺血/再灌注損傷、出血性休克、外傷性休克、血管生成、阿爾茨海默病、癌癥、感染性疾病或老年性癡呆。
7.藥物組合，其包含權(quán)利要求1至3中任意一項所述的游離形式或可藥用鹽形式的化合物和另一種選自免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎劑和化療劑的物質(zhì)。
8.制備權(quán)利要求1所述的化合物的方法，該方法包括除去式II化合物中存在的保護基團， 其中R1、R2和R5如權(quán)利要求1中所定義，R3’是-A-B-COOR8，其中A和B如權(quán)利要求1中所定義，且R8是可水解的或可氫解的基團，R4’是氨基保護基團，和，如果需要，將獲得的游離形式的式I化合物轉(zhuǎn)化為所需的鹽形式，反之亦然。
9.治療或預(yù)防同種異體移植物排斥反應(yīng)、自身免疫性疾病、移植物抗宿主病、炎性疾病、心肌炎、肝炎、缺血/再灌注損傷、出血性休克、外傷性休克、血管生成、阿爾茨海默病、癌癥、感染性疾病或老年性癡呆的方法，其包括對所述個體施用治療有效量的權(quán)利要求1至3中任意一項所述的游離形式或可藥用鹽形式的化合物或權(quán)利要求4所述的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的氨基酸衍生物、它們的制備方法、它們的用途、特別是在移植中的用途以及包含它們的藥物組合物。
文檔編號C07C271/00GK1934069SQ200580009575
公開日2007年3月21日 申請日期2005年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月9日
發(fā)明者K·欣特爾丁, K·赫根奧爾 申請人:諾瓦提斯公司