專利名稱：一種復(fù)合蛋白沉淀劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白沉淀劑。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的有機(jī)溶劑蛋白沉淀劑、酸性或堿性蛋白沉淀劑與重金屬蛋白沉淀劑多為單一組分，蛋白沉淀率低，提取分離效果差。雖然，10％的三氯醋酸與6％的高氯酸有較高的蛋白沉淀率，與樣本等體積的情況下蛋白沉淀率達(dá)98.5％～99.5％，但存在酸性過強(qiáng)，對色譜柱損害大，成本高的問題；而采用液-液萃取法進(jìn)行生物樣本中的藥物提取，耗時長、操作繁瑣、樣本中藥物成分損耗大，極大的影響了體內(nèi)藥物分析的效率與準(zhǔn)確性，不能滿足快速、準(zhǔn)確提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有單一組分蛋白沉淀劑蛋白沉淀率低、提取分離效果差，10％的三氯醋酸與6％的高氯酸酸性過強(qiáng)對色譜柱損害大、成本高以及采用液-液萃取法提取生物樣本中藥物耗時長、操作繁瑣、樣本損耗大的缺陷，從而提供了一種復(fù)合蛋白沉淀劑。復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1～1.5份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、75～85份濃度為分析純的甲醇和15～25份蒸餾水制成。本發(fā)明復(fù)合蛋白沉淀劑配制簡單，組分少，蛋白沉淀率高，達(dá)99％以上。本發(fā)明復(fù)合蛋白沉淀劑pH呈弱酸性，對色譜柱損害小(樣本PH＜2.5對色譜柱損害大)，成本低。使用本發(fā)明的復(fù)合蛋白沉淀劑，蛋白沉淀與生物樣本中的藥物提取分離一步完成，操作簡單，用時少，樣本中藥物成分損耗少，藥物提取回收率達(dá)70％以上，大大提高了體內(nèi)藥物分析的效率與準(zhǔn)確性，能夠滿足藥物研究的需要。


圖1是經(jīng)濃度為6％的高氯酸處理的空白血漿色譜圖，圖2是經(jīng)復(fù)合蛋白沉淀劑處理的空白血漿色譜圖。
具體實(shí)施例方式
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式為復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1～1.5份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、75～85份濃度為分析純的甲醇和15～25份蒸餾水制成。
本實(shí)施方式將濃度為分析純的5-磺基水楊酸、濃度為分析純的甲醇和蒸餾水按重量份數(shù)比混合、溶解后即可使用。
本實(shí)施方式復(fù)合蛋白沉淀劑應(yīng)用于鹽酸塞利洛爾等心血管類藥物生物樣本的前處理，以便進(jìn)行反相高效液相色譜分析。生物樣本(血漿)的處理步驟(一)按1∶1的體積比將生物樣本與本實(shí)施方式復(fù)合蛋白沉淀劑混合、振蕩；(二)離心，蛋白沉淀，取上清液進(jìn)行液相色譜分析，分析生物樣本中的藥物成分。
生物樣本經(jīng)本實(shí)施方式復(fù)合蛋白沉淀劑沉淀后高效液相色譜分析的精密度高于現(xiàn)有其它蛋白沉淀劑采用液-液萃取后高效液相色譜分析的精密度。對幾種蛋白沉淀劑進(jìn)行比較，結(jié)果如表1所示。
表1

分別以濃度為6％的高氯酸和本實(shí)施方式復(fù)合蛋白沉淀劑為蛋白沉淀劑對空白血漿生物樣本進(jìn)行沉淀，然后再進(jìn)行液相色譜分析，檢測波長254nm，流動相甲醇∶H2O(65∶35，色譜柱C18柱，流速1mL/min，運(yùn)行時間10min，進(jìn)樣量20μL。色譜分析結(jié)果如圖1和圖2所示，血漿雜質(zhì)峰均在開始后4.5分鐘內(nèi)出現(xiàn)，其后無任何雜質(zhì)峰干擾，說明復(fù)合蛋白沉淀劑的應(yīng)用有利于藥物樣品與雜質(zhì)的分離測定。
具體實(shí)施方式
二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)是復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1.1～1.4份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、76～84份濃度為分析純的甲醇和16～24份蒸餾水制成。其它步驟與實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)是復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1.2～1.3份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、78～82份濃度為分析純的甲醇和18～22份蒸餾水制成。其它步驟與實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)是復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1.2份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、80份濃度為分析純的甲醇和20份蒸餾水制成。其它步驟與實(shí)施方式一相同。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合蛋白沉淀劑，其特征在于復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1～1.5份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、75～85份濃度為分析純的甲醇和15～25份蒸餾水制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合蛋白沉淀劑，其特征在于復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1.1～1.4份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、76～84份濃度為分析純的甲醇和16～24份蒸餾水制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合蛋白沉淀劑，其特征在于復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1.2～1.3份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、78～82份濃度為分析純的甲醇和18～22份蒸餾水制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合蛋白沉淀劑，其特征在于復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1.2份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、80份濃度為分析純的甲醇和20份蒸餾水制成。
全文摘要
一種復(fù)合蛋白沉淀劑，它涉及一種蛋白沉淀劑。它解決了現(xiàn)有單一組分蛋白沉淀劑蛋白沉淀率低、提取分離效果差，10％的三氯醋酸與6％的高氯酸酸性過強(qiáng)對色譜柱損害大及采用液－液萃取法提取生物樣本中藥物耗時長、操作繁瑣、樣本損耗大的缺陷。復(fù)合蛋白沉淀劑按重量份數(shù)比由1～1.5份濃度為分析純的5－磺基水楊酸、75～85份濃度為分析純的甲醇和15～25份蒸餾水制成。所發(fā)明的復(fù)合蛋白沉淀劑的蛋白沉淀率達(dá)99％以上，pH呈弱酸性對色譜柱損害小。使用本發(fā)明的復(fù)合蛋白沉淀劑，蛋白沉淀與生物樣本中的藥物提取分離一步完成，操作簡單，用時少，樣本中藥物成分損耗少，藥物提取回收率達(dá)70％以上，大大提高了體內(nèi)藥物分析的效率與準(zhǔn)確性，能夠滿足藥物研究的需要。
文檔編號C07K1/00GK1908005SQ200610010399
公開日2007年2月7日 申請日期2006年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月11日
發(fā)明者杜智敏, 張波 申請人:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)