專利名稱：一種分離提純10－去乙?；涂ㄍあ蟮姆椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種分離提純10-去乙酰基巴卡亭III的方法，尤其涉及一種結(jié)合正反相液相色譜技術(shù)分離提純10-去乙?；涂ㄍII的方法。
背景技術(shù)：
10-去乙?；涂ㄍII(10-DeacetylbaccatinIII，以下簡稱10-DABIII)的分子結(jié)構(gòu)式如下 10-DABIII是合成抗癌藥物多烯紫杉醇和半合成紫杉醇的主要原料，它主要存在于紅豆杉的枝、葉、皮、根內(nèi)。隨著紫杉烷系抗癌藥的獨(dú)特療效得到證實，該類藥物的市場需求量與日俱增，這就迫切的需要更經(jīng)濟(jì)更合理的利用現(xiàn)有的紅豆杉植物，盡可能多的并且高效的從紅豆杉的有效部位中分離提純所需要的物質(zhì)，減少對現(xiàn)有紅豆杉資源的浪費(fèi)。
Ramadoss等(USP.6,124,482，2000)用脂肪醇浸提歐洲紅豆杉的干燥樹葉，提取液部分濃縮后用脂肪酮萃取，取出不溶物，然后把母液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥，將得到的固體用水和酮的混合液溶解，除去不溶物，經(jīng)脫色，再利用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，有機(jī)層結(jié)晶得到純度為93.5～94.1％的10-DABIII。
Margraff等(USP.5,736,366，1998)用水浸提歐洲紅豆杉，調(diào)節(jié)浸提液的PH值至4.6-5.4之間，利用固相萃取分離10-DABIII，結(jié)晶，所得產(chǎn)品的純度為75～90％，收率在75.4～92％之間。
Gaullier等(USP.5,453,521；USP.5,393,895，1998)用脂肪醇提取歐洲紅豆杉枝葉，用水稀釋溶液，去除不溶物，完全除掉酒精，用有機(jī)溶劑萃取水層，結(jié)晶，得到產(chǎn)品純度為75.8～93.8％，收率為69.5～93.8％。
Nair等(USP.5,478,736，1995)用含有50～95％的甲醇、乙醇或丙酮的水溶液浸提紅豆杉組織，用活性炭過濾得到的浸提液，并利用真空加壓的正相色譜分離，再利用中壓色譜柱分離，收集相應(yīng)餾分，得到10-DABIII。
國際公布號為WO94/07882的專利文獻(xiàn)中公開了用甲醇浸提紅豆杉組織，得到的浸提液用水稀釋，去除不溶物，除盡甲醇后得到的溶液用合適的有機(jī)溶劑萃取，結(jié)晶得到10-DABIII，純度95.8％，收率為93.6％。
中國專利申請公開說明書CN1398859A中公開了采用水浸提紅豆杉枝葉殘渣，提取液噴霧干燥，再利用高壓正相色譜柱分離，分段收集淋洗液，得純度為99.5％以上的10-DABIII。
中國專利申請公開說明書CN1616441A中公開了用連續(xù)滲漉提取紅豆杉枝葉中的紫杉烷類化合物，經(jīng)過硅膠柱層析，得到10-DABIII。
中國專利申請公開說明書CN1660827A中公開了采用70～80％乙醇提取紅豆杉枝葉，濃縮浸提液，去除沉淀物，用大孔吸附樹脂吸附濾液中10-DABIII，乙醇洗脫，得到10-DABIII粗品。
中國專利申請公開說明書CN1473821A中公開了用醇類溶劑從紅豆杉超細(xì)粉(粒徑≤10μm)中快速提取10-DABIII，然后用萃取法獲得5～10％粗品原料，經(jīng)硅膠柱層析，常壓色譜柱層析以及水解等提純、轉(zhuǎn)化、精制步驟，工業(yè)化獲得純度大于99.5％以上的10-DABIII。
Rao等(Pharmaceutical Research 12(7)，1995)采用甲醇浸提紅豆杉組織，浸提液用氯仿萃取后濃縮蒸干，將所得的提取物溶于乙腈，通過反相色譜進(jìn)行分離，分段收集含10-DABIII的淋洗液后兩次結(jié)晶得到10-DABIII。
上述方法主要采用醇類溶劑提取紅豆杉枝葉中的10-DABIII，然后分別采用結(jié)晶，正相硅膠柱層析或反相色譜分離等方法進(jìn)行提純，因此，這些方法存在以下缺陷收率較低、雜質(zhì)分離不徹底、處理量小、大量使用有機(jī)溶劑導(dǎo)致成本偏高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種能有效去除雜質(zhì)，高收率地獲得高純度的10-DABIII的方法。
本發(fā)明的分離提純10-DABIII的方法包括以下步驟1)用含有機(jī)溶劑50～90體積％的水性提取劑于30-40℃提取紅豆杉枝葉，并將提取物吸附在硅膠上，得到硅膠吸附料；2)將步驟1)所得的硅膠吸附料裝入第一正相預(yù)處理柱，以洗脫液洗脫，收集含10-DABIII的洗脫液，減壓濃縮除去70～80體積％的溶劑，然后在濃縮液中加入硅膠，蒸干溶劑，得到負(fù)載了提取物的硅膠吸附料；3)將步驟2)所得的硅膠吸附料裝入第二正相預(yù)處理柱，首先以洗脫液洗脫，然后串接裝填了硅膠的正相分離柱，繼續(xù)以上述洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，將含10-DABIII的洗脫液合并，減壓濃縮除去50～60體積％的溶劑，得到10-DABIII濃縮液；4)在步驟3)所得的10-DABIII濃縮液中加入反相固定相，蒸干溶劑，得到反相吸附料，將反相吸附料裝入反相預(yù)處理柱，然后串接裝填了反相固定相的反相分離柱，以含有機(jī)溶劑5～60體積％的水性洗脫液梯度洗脫，收集含10-DABIII的洗脫液；5)將步驟4)所得的含10-DABIII的洗脫液減壓濃縮，除去有機(jī)溶劑，剩余溶液經(jīng)萃取、濃縮、結(jié)晶后，得到10-DABIII。
在步驟1)中，所述的水性提取劑是指有機(jī)溶劑與水的混合溶劑，其中的有機(jī)溶劑可選自甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯中的一種或多種。步驟1)中將提取物吸附在硅膠上的步驟可以包括將所得提取液減壓濃縮，除去其中的有機(jī)溶劑，然后將剩余液靜置，過濾，將濾液以萃取劑萃取3次，合并有機(jī)相，加入質(zhì)量為紅豆杉枝葉質(zhì)量的0.5-3％的硅膠，減壓除去有機(jī)溶劑，得到硅膠吸附料，所述的萃取劑可選自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙酸丙酯、二氯甲烷、1，1-二氯甲烷、1，2-二氯甲烷或三氯甲烷中的一種或多種。所得的沉淀物可用于回收其他的紫杉烷類。
步驟1)中所述的紅豆杉可以是漿果(歐洲)紅豆杉(T.baccata)、太平洋紅豆杉(T.brevifolia)、加拿大紅豆杉(T.canadensis)、中國紅豆杉(T.chinensis)、東北紅豆杉(T.cuspidata)、佛羅里達(dá)紅豆杉(T.floridana)、西藏紅豆杉(T.wallichiana)、云南紅豆杉(T.yunnanensis)或南方紅豆杉(T.media)。
步驟2)中，在作為第一正相預(yù)處理柱的未裝填硅膠的色譜柱內(nèi)裝入步驟1)所得的硅膠吸附料，經(jīng)洗脫液洗脫，進(jìn)行第一次提純，以去除部分雜質(zhì)。所述的洗脫液可選自下述混合溶劑中的一種乙酸乙酯和石油醚、乙酸乙酯和己烷，或乙酸乙酯和環(huán)己烷，且混合溶劑中兩種溶劑的體積比為1∶1至1∶9；步驟2)中在所述的濃縮液中加入硅膠的量可以為步驟1)中的紅豆杉枝葉質(zhì)量的0.5-3％。
步驟3)中，在作為第二正相預(yù)處理柱的未裝填硅膠的色譜柱內(nèi)裝入步驟2)所得的硅膠吸附料，經(jīng)洗脫液洗脫，然后串接裝填了硅膠的正相分離柱，進(jìn)行第二次提純，以去除大部分的雜質(zhì)，從而有利于保護(hù)成本較高的反相色譜固定相。所述的洗脫液可選自下述混合溶劑中的一種乙酸乙酯和石油醚、乙酸乙酯和己烷，或乙酸乙酯和環(huán)己烷，且混合溶劑中兩種溶劑的體積比為1∶1至1∶4，并可以首先以所述的洗脫液洗脫約2倍柱體積，然后串接正相分離柱，繼續(xù)以所述洗脫液進(jìn)行梯度洗脫。
步驟4)中的反相分離柱中所使用的反相固定相可以是以硅膠或氧化鋁為基質(zhì)，鍵合或包覆十八烷基硅烷、聚乙烯、聚苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯中的一種，或交聯(lián)聚苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯中的一種。在所述的濃縮液中加入反相固定相的量可以為步驟1)中的紅豆杉枝葉質(zhì)量的0.5-2％。并且使用后的反相預(yù)處理柱和反相分離柱可以采用有機(jī)溶劑進(jìn)行在線清洗，并在下一輪的分離中使用，所述的有機(jī)溶劑可以選自甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃或異丙醇中的一種或多種。步驟4)中所述的水性洗脫液中的有機(jī)溶劑可選自甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃或異丙醇中的一種或多種。
步驟3)和步驟4)中所述的色譜柱的串接可采用以下方式用不銹鋼管通過高壓接頭從預(yù)處理柱下端出口連接至分離柱入口。
步驟5)中的萃取、濃縮步驟可以包括在剩余溶液中加入等體積的萃取劑萃取，然后將萃取液濃縮至原體積的5～15％，所述的萃取劑可選自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙酸丙酯、二氯甲烷、1，1-二氯甲烷、1，2-二氯甲烷或三氯甲烷中的一種或多種；步驟5)中的結(jié)晶步驟可以包括在濃縮液中加入6～17倍體積的結(jié)晶劑，于-5～5℃下結(jié)晶，所述的結(jié)晶劑可選自戊烷、己烷、庚烷、環(huán)己烷、石油醚或溶劑汽油中的一種或多種。
可重復(fù)進(jìn)行上述的步驟4)和5)，以獲得純度更高的10-DABIII。
上述步驟中的減壓濃縮最好在60℃以下進(jìn)行，以防止紫杉烷類化合物分解轉(zhuǎn)化。
本發(fā)明首次采用正反相色譜技術(shù)相結(jié)合，將正相色譜作為第一級處理，去除了大部分雜質(zhì)，有利于保護(hù)成本較高的反相色譜固定相，延長反相色譜固定相的使用壽命；而反相色譜可以處理較大的上樣量，并且對正相色譜不易分離掉的一部分雜質(zhì)有更好的去除效果，溶劑易回收且成本也更低廉。因此，將正反相色譜技術(shù)結(jié)合不但可以獲得純度大于99.5％的10-DABIII，還能夠降低成本。此外，本發(fā)明還首次采用了兩級色譜串聯(lián)分離技術(shù)，通過預(yù)處理柱分離一部分雜質(zhì)，再串接分離柱進(jìn)行細(xì)分離，提高了分離效果，增加了色譜柱的負(fù)載上樣量。


圖1為本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案的工藝流程圖；圖2為本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中串接預(yù)處理柱和分離柱的示意圖。
具體實施例方式
下面將結(jié)合具體實施例和相關(guān)附圖，對本發(fā)明進(jìn)行詳盡的解釋。但是，下面所提供的實施例只是為了說明本發(fā)明，并不是對本發(fā)明的限制。
實施例1本實施例的工藝流程圖參見圖1，預(yù)處理柱和分離柱的串接方式參見圖2。
(1)取1公斤粉碎后的歐洲紅豆杉(T.baccata)枝葉，加入7L 50％的甲醇水溶液，恒溫水浴40℃，攪拌提取8小時，過濾，得一次浸提液及一次濾渣；(2)將一次濾渣返回提取容器中，再加入5L 50％甲醇水溶液，恒溫水浴40℃，攪拌提取8小時，過濾，得二次浸提液及二次濾渣；(3)將二次濾渣返回提取容器中，再加入5L 50％甲醇水溶液，恒溫水浴40℃，攪拌提取8小時，過濾，得三次浸提液及三次濾渣；(4)合并上述的三次浸提液，在50℃下減壓濃縮至無有機(jī)溶劑，濃縮液室溫放置12小時以上，過濾去除不溶物，得水溶液4.8L；(5)在水溶液中加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入乙酸乙酯4.8L，合并乙酸乙酯相；(6)將所得的乙酸乙酯相濃縮至500ml以內(nèi)，加入30g硅膠，在60℃減壓濃縮至干，得硅膠吸附料；(7)將所得硅膠吸附料裝入ф20×200mm的作為預(yù)處理柱的玻璃柱，以體積比為1∶4的乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑作為洗脫液洗脫，收集所得含10-DABIII的洗脫液；
(8)含10-DABIII的洗脫液共計2.4L，濃縮至500ml以內(nèi)，加入30g硅膠，60℃減壓濃縮至干，得吸附料；將吸附料勻漿法裝入ф20×200mm的作為預(yù)處理柱的玻璃柱中，以體積比為1∶1的乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑作為洗脫液洗脫2倍柱體積；(9)采用勻漿法裝填ф20×500mm的玻璃柱凈硅膠，作為分離柱，將步驟(8)中的預(yù)處理柱串接分離柱，以體積比為1∶1至1∶5的乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑作為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫10～13倍柱體積，收集所得含10-DABIII的部分；(10)60℃減壓濃縮含10-DABIII的洗脫液至500ml以內(nèi)，加入14g鍵合十八烷基硅烷固定相，繼續(xù)濃縮至干，將所得吸附料以5％甲醇水溶液勻漿裝入ф20×200mm的作為預(yù)處理柱的玻璃柱中；(11)將步驟(10)中的預(yù)處理柱串接分離柱(該分離柱已裝填滿鍵合十八烷基硅烷固定相，并以5％甲醇水溶液平衡2倍柱體積)，以5～50％甲醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫10倍柱體積，洗脫液流速為10ml/min，以50ml/瓶收集餾出液，收集液通過HPLC檢測，分出含10-DABIII段和不含10-DABIII段；不含10-DABIII段回收溶劑，含10-DABIII段進(jìn)行下一步操作；收集完成后以100％的甲醇洗柱，檢測洗柱液中無10-DABIII，然后分別以純水和5％甲醇水溶液平衡預(yù)處理柱和分離柱備用；(12)步驟(11)共得含10-DABIII段的溶液3.3L，將所得含10-DABIII的洗脫液在50℃下減壓濃縮除去有機(jī)溶劑，得水溶液1.1L；(13)分三次加入1.1L乙酸乙酯(第一、二次各加入400ml，第三次加入300.ml)萃取步驟12所得水溶液，合并有機(jī)相；(14)將有機(jī)相于50℃下減壓濃縮至160ml，冷卻至室溫，緩慢加入1600ml己烷，并同時進(jìn)行攪拌，加完后于0℃放置12小時，結(jié)晶；(15)過濾結(jié)晶液，得濾餅和母液；母液濃縮回收10-DABIII，重復(fù)步驟(10)～(14)進(jìn)行再次提純；濾餅以160ml乙酸乙酯溶解，過濾除去雜質(zhì)；緩慢加入1600ml己烷，并同時進(jìn)行攪拌，加完后0℃放置12小時，進(jìn)行重結(jié)晶；
(16)過濾結(jié)晶液，母液同步驟(15)處理，所得濾餅50℃減壓干燥至恒重，稱重得0.71g10-DABIII，HPLC檢測純度為99.53％，收率為87％。
實施例2取加拿大紅豆杉(T.canadensis)1公斤，具體操作步驟同實施例1，其區(qū)別是步驟(1)中的提取液更換為70％的丙酮，浸提三次；步驟(10)中的固定相更換為包覆聚苯乙烯-二乙烯苯，步驟(11)中的洗脫液更換為5～50％的乙醇水溶液，重復(fù)分離兩次；步驟(13)中的萃取劑更換為乙酸丁酯，步驟(14)中的結(jié)晶劑更換為石油醚；干燥后得純度為99.61％的10-DABIII0.23g，收率為78％。
實施例3取云南紅豆杉(T.yunnanensis)1公斤，具體操作步驟同實施例1，其區(qū)別是步驟(1)中的提取液更換為65％的乙醇，浸提三次；步驟(10)中的固定相更換為交聯(lián)聚苯乙烯-二乙烯苯，步驟(11)中的洗脫液更換為5～50％的乙腈水溶液，重復(fù)分離兩次；步驟(13)中的萃取劑更換為乙酸甲酯，步驟(14)中的結(jié)晶劑更換為環(huán)己烷；干燥后得純度為99.55％的10-DABIII0.18g，收率為76％。
實施例4取南方紅豆杉(T.media)1公斤，具體操作步驟同實施例1，其區(qū)別是步驟(1)中的提取液更換為50％的乙酸乙酯，浸提三次；步驟(10)中的固定相更換為包覆聚甲基丙烯酸酯，步驟(11)中的洗脫液更換為5～55％的丙酮水溶液，重復(fù)分離兩次；步驟(13)中的萃取劑更換為三氯甲烷，步驟(14)中的結(jié)晶劑更換為6#溶劑汽油；干燥后得純度為99.57％的10-DABIII0.20g，收率為81％。
實施例5取西藏紅豆杉(T.wallichiana)1公斤，具體操作步驟同實施例1，其區(qū)別是步驟(1)中的提取液更換為50％的乙酸丁酯，浸提三次；步驟(10)中的固定相更換為交聯(lián)聚甲基丙烯酸酯，步驟(11)中的洗脫液更換為5～50％的異丙醇水溶液，重復(fù)分離兩次；步驟(13)中的萃取劑更換為二氯甲烷，步驟(14)中的結(jié)晶劑更換為庚烷；干燥后得純度為99.66％的10-DABIII0.26g，收率為90％。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可知，對上述實施例所進(jìn)行的許多變化和改進(jìn)都不偏離本發(fā)明的廣義的發(fā)明實質(zhì)。因此可以認(rèn)為，本發(fā)明不限于上述優(yōu)選的實施例，而意在包括任何在本發(fā)明的權(quán)利要求書所確定的保護(hù)范圍內(nèi)的所有改進(jìn)。
權(quán)利要求
1.一種分離提純10-去乙酰基巴卡亭III的方法，包括以下步驟1)用含有機(jī)溶劑50～90體積％的水性提取劑于30-40℃提取紅豆杉枝葉，并將提取物吸附在硅膠上，得到硅膠吸附料；2)將步驟1)所得的硅膠吸附料裝入第一正相預(yù)處理柱，以洗脫液洗脫，收集含10-去乙?；涂ㄍII的洗脫液，減壓濃縮除去70～80體積％的溶劑，然后在濃縮液中加入硅膠，蒸干溶劑，得到負(fù)載了提取物的硅膠吸附料；3)將步驟2)所得的硅膠吸附料裝入第二正相預(yù)處理柱，首先以洗脫液洗脫，然后串接裝填了硅膠的正相分離柱，繼續(xù)以上述洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，將含10-去乙?；涂ㄍII的洗脫液合并，減壓濃縮除去50～60體積％的溶劑，得到10-去乙酰基巴卡亭III濃縮液；4)在步驟3)所得的10-去乙?；涂ㄍII濃縮液中加入反相固定相，蒸干溶劑，得到反相吸附料，將反相吸附料裝入反相預(yù)處理柱，然后串接裝填了反相固定相的反相分離柱，以含有機(jī)溶劑5～60體積％的水性洗脫液梯度洗脫，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的洗脫液；5)將步驟4)所得的含10-去乙酰基巴卡亭III的洗脫液減壓濃縮，除去有機(jī)溶劑，剩余溶液經(jīng)萃取、濃縮、結(jié)晶后，得到10-去乙?；涂ㄍII。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中所述的水性提取劑中的有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟2)中，所述的洗脫液選自下述混合溶劑中的一種乙酸乙酯和石油醚、乙酸乙酯和己烷，或乙酸乙酯和環(huán)己烷，且混合溶劑中兩種溶劑的體積比為1∶1至1∶9；步驟3)中，所述的洗脫液選自下述混合溶劑中的一種乙酸乙酯和石油醚、乙酸乙酯和己烷，或乙酸乙酯和環(huán)己烷，且混合溶劑中兩種溶劑的體積比為1∶1至1∶4，并首先以所述的洗脫液洗脫2倍柱體積，然后串接正相分離柱，繼續(xù)以所述洗脫液進(jìn)行梯度洗脫。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟4)中所述的反相固定相是以硅膠或氧化鋁為基質(zhì)，鍵合或包覆十八烷基硅烷、聚乙烯、聚苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯中的一種，或交聯(lián)聚苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟4)中所述的水性洗脫液中的有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃或異丙醇中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟5)中所述的萃取中所用的萃取劑選自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙酸丙酯、二氯甲烷、1，1-二氯甲烷、1，2-二氯甲烷或三氯甲烷中的一種或多種；步驟5)中所述的結(jié)晶中所用的結(jié)晶劑選自戊烷、己烷、庚烷、環(huán)己烷、石油醚或溶劑汽油中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2)中在所述的濃縮液中加入硅膠的量為步驟1)中的紅豆杉枝葉質(zhì)量的0.5-3％；步驟4)中在所述的濃縮液中加入反相固定相的量為步驟1)中的紅豆杉枝葉質(zhì)量的0.5-2％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法，其特征在于，步驟1)中將提取物吸附在硅膠上的步驟包括將所得提取液減壓濃縮，除去其中的有機(jī)溶劑，然后將剩余液靜置，過濾，將濾液以萃取劑萃取3次，合并有機(jī)相，加入質(zhì)量為紅豆杉枝葉質(zhì)量的0.5-3％的硅膠，減壓除去有機(jī)溶劑，得到硅膠吸附料，所述的萃取劑選自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙酸丙酯、二氯甲烷、1，1-二氯甲烷、1，2-二氯甲烷或三氯甲烷中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟5)中的萃取、濃縮步驟包括在剩余溶液中加入等體積的萃取劑萃取，然后將萃取液濃縮至原體積的5～15％；步驟5)中的結(jié)晶步驟包括在濃縮液中加入6～17倍體積的結(jié)晶劑，于-5～5℃下結(jié)晶。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，在步驟4)中，使用后的反相預(yù)處理柱和反相分離柱采用有機(jī)溶劑進(jìn)行在線清洗，并在下一輪的分離中使用，所述的有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃或異丙醇中的一種或多種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種分離提純10－DABIII的方法。該方法采用正反相色譜技術(shù)相結(jié)合，將正相色譜作為第一級處理，去除了大部分雜質(zhì)，有利于保護(hù)成本較高的反相色譜固定相，延長反相色譜固定相的使用壽命；而反相色譜可以處理較大的上樣量，并且對正相色譜不易分離掉的一部分雜質(zhì)有更好的去除效果，溶劑易回收且成本也更低廉。因此，將正反相色譜技術(shù)結(jié)合不但可以獲得純度大于99.5％的10－去乙酰基巴卡亭III，還能夠降低成本。此外，本發(fā)明還采用了兩級色譜串聯(lián)分離技術(shù)，通過預(yù)處理柱分離一部分雜質(zhì)，再串接分離柱進(jìn)行細(xì)分離，提高了分離效果，增加了色譜柱的負(fù)載上樣量。
文檔編號C07D305/14GK101045718SQ20061005848
公開日2007年10月3日 申請日期2006年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月28日
發(fā)明者朱德權(quán), 張平, 蘇萌 申請人:北京信匯科技有限公司