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小麥麩皮總烷基酚提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法

文檔序號:3477107閱讀:220來源:國知局
專利名稱:小麥麩皮總烷基酚提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及藥用植物成分提取物和其制備工藝以及該提取物的藥理應(yīng)用,屬于農(nóng)產(chǎn)品加工領(lǐng)域。具體說是一種小麥麩皮總烷基酚提取物及其制備工藝,以該提取物作為活性成分的藥物或食品添加劑在治療癌癥中的用途。
二、技術(shù)背景小麥麩皮為禾本科植物小麥Triticum aestivum L.的種皮。主治時疾熱瘡,湯火瘡爛,撲損傷折淤血?!侗静菥V目》“麩乃麥皮也,與浮麥同性,而止汗之功次于浮麥,蓋浮麥無肉也?!鼻濉侗静輦湟酚涊d用醋炮制后“能散血止痛,熨腰腳折傷,風(fēng)濕痹痛,寒濕腳氣,互易至汗出良”,麥麩性涼而軟,還可為瘡瘍痘瘡患者作席墊。近代的《藥物圖考》說,麥皮能和緩神經(jīng),除熱,去煩,潤臟腑,安神經(jīng)?!妒朝煴静荨飞线€指出麥麩可以“益顏色,滑肌膚”,具有美容功效。在中藥的炮制中有麩炒法,既將凈制或切制后的藥物用麥麩熏炒的方法,具有增強(qiáng)療效、緩和藥性、矯臭矯味的作用。
將小麥麩炒香,研細(xì),開水沖服,對血尿、尿淋有一定療效。與面粉按適當(dāng)比例混合,加適量食油、雞蛋、蔬菜蒸熟替代飲食長期食用,可減緩糖尿病的癥狀?,F(xiàn)代藥理實驗證明,麥麩膳食纖維具有抗氧化、清除自由基作用和減少憩室病、膽結(jié)石和結(jié)腸癌發(fā)生的重要作用。此外小麥麩中含有多量維生素B1和蛋白質(zhì),有治療腳氣病、末梢神經(jīng)炎的功效。鑒于小麥麩皮在資源上具有明顯的優(yōu)勢,因此充分開發(fā)利用麥麩中的化合物具有十分重要的現(xiàn)實意義。
小麥化學(xué)成分方面的研究較少,更缺乏系統(tǒng)研究,目前為止有文獻(xiàn)報道的主要為酚酸類、黃酮類、甾體類、烷基酚類等。
植物中所含烷基酚類成分主要有抑菌活性、抗腫瘤作用、抗蟲害等活性。麥麩中所含烷基酚類主要為5-烷基間苯二酚(5-alkylresorcinol)類型,以同系物形式存在,相互間僅相差2個CH2。目前國內(nèi)外尚沒有對麥麩烷基酚類成分藥理活性進(jìn)行研究。
現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)被鑒定的存在于小麥麩皮中烷基酚類化合物有5-十七烷基間苯二酚(5-heptadecylresorcinol)、5-十九烷基間苯二酚(5-nonadecylresorcinol)、5-二十一烷基間苯二酚(5-heneicosylresorcinol)、5-二十三烷基間苯二酚(5-tricosylresorcinol)和5-二十五烷基間苯二酚(5-pentacosylresorcinol),以及極少量的5-烯基間苯二酚(C17:1、C19:1、C21:1、C23:1、C25:1)、5-(2-氧代烷基)間苯二酚(5-(2-oxoalkyl)resorcinol)和5-(2-氧代烯基)間苯二酚(5-(2-oxoalkenyl)resorcinol),包括5-(2-oxononadecyl)resorcinol、5-(2-oxoheneicosyl)resorcinol、5-(2-oxotricosyl)resorcinol、5-(2-oxopentacosyl)resorcinol、5-(2-oxoheneicosenyl)resorcinol、5-(2-oxotricosenyl)resorcinol等。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明目的之一是提供以烷基酚類化合物為主要成分的小麥麩皮總烷基酚提取物;本發(fā)明還提供一種提取率高、工藝流程簡單的從小麥麩皮中提取總烷基酚提取物的工藝方法;本發(fā)明的產(chǎn)品或提取物可以通過適宜的方式配制成藥物或食品添加劑,用于癌癥治療。
技術(shù)方案本發(fā)明中的烷基酚類化合物指以5-烷基間苯二酚(5-alkylresorcinol)、5-烯基間苯二酚(5-alkenylresorcinol)、5-(2-氧代烷基)間苯二酚(5-(2-oxoalkyl)resorcinol)和5-(2-氧代烯基)間苯二酚(5-(2-oxoalkenyl)resorcinol)為主要類型的一系列同系物,以及他們與單糖或寡糖形成的糖苷或其他形式的衍生物。同類同系物相互間僅相差若干個CH2。
本發(fā)明提供的小麥麩皮總烷基酚提取物是指采用任何方法從小麥麩皮中提取得到的以烷基酚類化合物作為主要成分(或主要功效成分)的提取物。該提取物中烷基酚類成分的總重量之和占提取物總重量的25%~99.6%。提取物中的各種烷基酚類化合物之間的含量比例可以與天然小麥麩皮中的含量一致,也可以與原料中的含量比例不一致。
本發(fā)明的提取物的制備方法用小麥麩皮作原料,采用含水或不含水的有機(jī)溶劑作提取溶劑,所述提取過程包括1、漂洗將小麥麩皮用流水漂洗1-5分鐘,除去面粉和泥沙,再瀝干殘水;2、提取用含水或不含水石油醚、溶劑石油、工業(yè)酒精或其他類似物之一種或幾種任意比例的混合物作溶劑,將小麥麩皮中加入為其5-20倍重量的溶劑中,經(jīng)浸泡、滲漉后在60~90℃溫度下提取或回流提取至檢測不到烷基酚類物質(zhì)為止?;厥杖軇┑眯←滬熎び椭猿煞?;3、皂化所得油脂性成分以5-20倍重量的皂化液皂化2-10小時,回收甲醇,得皂化物;4、萃取皂化物用水溶解,石油醚、乙酸乙酯或其他類似物之一種或幾種任意比例的混合物萃取2-10次,有機(jī)溶劑層用水返洗至中性,過濾,回收溶劑,得到不皂化物;5、粗結(jié)晶不皂化物用熱石油醚溶解,待冷卻后析出結(jié)晶,過濾,得到小麥麩皮總烷基酚粗結(jié)晶;6、精制粗結(jié)晶重溶后進(jìn)入硅膠柱,以石油醚:乙酸乙酯混合溶劑洗脫,收集含烷基酚成分的洗脫液,合并,重結(jié)晶,得小麥麩皮總烷基酚。
上述步驟3中的皂化液是指質(zhì)量體積比為4%的氫氧化鉀甲醇溶液;上述步驟6中硅膠柱為30-200目,石油醚∶乙酸乙酯混合溶劑比例為100∶1~7∶3。
其中,經(jīng)過步驟2提取后過濾得到的殘渣還可用于提取其他可再利用物質(zhì),如總黃酮;經(jīng)減壓濃縮后的有機(jī)溶劑可分別返回到上一步驟中再利用,如再對小麥麩皮原料進(jìn)行提取,或?qū)π←滬熎げ辉砘镞M(jìn)行萃取;步驟6所用硅膠填料可反復(fù)使用,洗脫液也可減壓濃縮后再利用。
前述步驟5所得的總烷基酚粗結(jié)晶中烷基酚類化合物的重量之和為粗結(jié)晶總重量的25~80%。通過步驟6的精制,總烷基酚提取物的純度可達(dá)到80%~99.6%。
本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)小麥麩皮總烷基酚提取物能夠降低S180腫瘤株的肉瘤模型動物的肉瘤的重量,有一定的腫瘤生長抑制率;能延長腫瘤腹水的模型動物的生存時間,有一定的生命延長率。說明小麥麩皮烷基酚能夠抑制S180腫瘤細(xì)胞的生長,延長S180腫瘤小鼠的存活時間,改善腹水癥狀,對于由S180癌癥有一定的治療作用??煽紤]作為低毒性的抗腫瘤藥物或食品添加劑。
有益效果本發(fā)明具有如下優(yōu)點1、本發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)小麥麩皮中所含的烷基酚類化合物對癌癥有一定的治療作用。發(fā)明人采用合適的制備方法獲得了具有較好抑制S180腫瘤細(xì)胞生長作用的小麥麩皮總烷基酚提取物,一方面有望給癌癥患者提供一種新的低毒性的抗腫瘤藥物或食品補(bǔ)充劑,另一方面對于更加有效的利用小麥麩皮這種面粉加工業(yè)副產(chǎn)品,拓寬小麥的綜合應(yīng)用具有重要意義。
2、本發(fā)明以物理加工為主,使用無毒溶劑,且熱質(zhì)溫度小于100℃,既可去除小麥麩皮中污染的有害金屬或類金屬元素,又完全保存了總烷基酚類化合物的原始成分結(jié)構(gòu),保證其作為抗腫瘤藥物或食品添加劑使用時的安全和可靠性。
3、本發(fā)明提供了一種提取率高、工藝流程簡單的從小麥麩皮中提取總烷基酚提取物的工藝方法。本發(fā)明工藝提取率達(dá)到0.31%~1.85%,固體產(chǎn)品的烷基酚含量能達(dá)到25.3%~99.6%。工序少,操作簡便,生產(chǎn)周期短,容易實現(xiàn)機(jī)械化和自動化生產(chǎn),且用本法提取的烷基酚,來源充足,生產(chǎn)成本低,產(chǎn)品市場競爭力強(qiáng),利于大面積推廣使用。


圖1為本發(fā)明從小麥麩皮中提取烷基酚類化合物的工藝方法的流程圖。
圖2為小麥麩皮總烷基酚提取物HPLC譜圖五具體實施例方式實施例1小麥麩皮總烷基酚的提取實施例1.11、漂洗將小麥麩皮用流水漂洗4分鐘,除去面粉和泥沙,再瀝干殘水;2、提取在小麥麩皮中加入為其8倍重量的石油醚(60-90℃)溶劑,70℃加熱回流提取,2小時/次,共3次?;厥杖軇┑眯←滬熎び椭猿煞郑?、皂化所得油脂性成分以8倍重量的質(zhì)量體積比為4%的氫氧化鉀甲醇溶液皂化3小時,回收甲醇,得皂化物;4、萃取皂化物用水溶解,乙酸乙酯萃取3次,乙酸乙酯層用水返洗至中性,加適量無水硫酸鈉脫水,濾過,回收乙酸乙酯,得到不皂化物;5、粗結(jié)晶不皂化物用熱石油醚溶解,待冷卻后析出結(jié)晶,過濾,得到小麥麩皮總烷基酚粗結(jié)晶;6、精制粗結(jié)晶重溶后進(jìn)入硅膠(100目)柱,以石油醚∶乙酸乙酯9∶1洗脫,收集洗脫液,重結(jié)晶,得小麥麩皮總烷基酚。
實驗分析表明小麥麩皮每1公斤,運用本技術(shù)方案提取物有3.12克,其能最大限度的提高烷基酚提取率,其提取率達(dá)到0.31%。固體產(chǎn)品的烷基酚含量能達(dá)到99.6%以上。提取液的過濾、回收溶劑、干燥等過程易于進(jìn)行,且工藝流程簡單,以工業(yè)化、省時、耗能較少。
實施例1.21、漂洗將小麥麩皮用流水漂洗4分鐘,除去面粉和泥沙,再瀝干殘水;2、提取在小麥麩皮中加入為其8倍重量的溶劑石油,浸泡滲漉3天,共3次?;厥杖軇┑眯←滬熎び椭猿煞郑?、皂化所得油脂性成分以8倍重量的4%氫氧化鉀甲醇溶液皂化3小時,回收甲醇,得皂化物;4、萃取皂化物用水溶解,乙酸乙酯萃取3次,乙酸乙酯層用水返洗至中性,加適量無水硫酸鈉脫水,濾過,回收乙酸乙酯,得到不皂化物;5、粗結(jié)晶不皂化物用熱石油醚溶解,待冷卻后析出結(jié)晶,過濾,得到小麥麩皮總烷基酚粗結(jié)晶,再用熱石油醚仿佛重結(jié)晶,得小麥麩皮總烷基酚提取物。
實驗分析表明小麥麩皮每1公斤,運用本技術(shù)方案提取物有18.51克,其能最大限度的提高烷基酚提取率,其提取率達(dá)到1.85%。固體產(chǎn)品的烷基酚含量能達(dá)到25.3%。
實施例1.31、漂洗將小麥麩皮用流水漂洗4分鐘,除去面粉和泥沙,再瀝干殘水;2、提取在小麥麩皮中加入為其8倍重量的工業(yè)酒精,70℃加熱回流提取,2小時/次,共3次?;厥杖軇┑眯←滬熎そ啵?、萃取水重溶小麥麩皮浸膏,等體積石油醚(60-90℃)萃取三次,合并有機(jī)相,減壓回收溶劑得油脂性成分。
4、分離油脂性成分進(jìn)入硅膠(60目)柱,以石油醚∶乙酸乙酯梯度洗脫,收集V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)為9∶1和8∶2比例的洗脫液,重結(jié)晶,得小麥麩皮總烷基酚。
實驗分析表明小麥麩皮每1公斤,運用本技術(shù)方案提取物有5.31克,其能最大限度的提高烷基酚提取率,其提取率達(dá)到0.53%。固體產(chǎn)品的烷基酚含量能達(dá)到78.3%。
實施例2小麥麩皮總烷基酚的檢測實施例2.1HPLC譜圖色譜條件高效液相色譜儀Agilent 1100;固定相Agilent Eclipse XDB-C18(4.6×250mm,5μm);流動相MeOH;流速1ml/min;柱溫30℃;檢測波長270nm;進(jìn)樣量10μl。所得HPLC圖譜如圖2示。
實施例2.2主要組分的鑒定小麥麩皮總烷基酚提取物含有五個主成分,經(jīng)反復(fù)柱層析分離和高效液相制備純化得到單體,并對其理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。
5-十七烷基間苯二酚(5-heptadecylresorcinol)白色針狀結(jié)晶(MeOH),mp94~95℃,三氯化鐵反應(yīng)陽性。微溶于甲醇、石油醚,易溶于乙酸乙酯、熱石油醚。ESI-/MS 347[M-H]-。1H-NMR(300MHz,CD3COCD3)δ0.87(3H,t,CH3),1.28(28H,s,14CH2),1.55(2H,m,8-H),2.43(2H,t,J=7.6Hz,7-H),6.16(3H,m,2,4,6-H),7.97(2H,s,1,3-OH);13C-NMR(300MHz,CD3COCD3)δ14.0(23-C),23.0(22-C),28.7~31.7(10~21-C),32.3(9-C),32.4(8-C),36.3(7-C),100.6(2-C),107.4(4,6-C),145.5(5-C),159.0(1,3-C)。
5-十九烷基間苯二酚(5-nonadecylresorcinol)白色針狀結(jié)晶(MeOH),mp96~97℃,三氯化鐵反應(yīng)陽性。微溶于甲醇、石油醚,易溶于乙酸乙酯、熱石油醚。ESI-/MS 375[M-H]-。1H-NMR(300MHz,CD3COCD3)δ0.87(3H,t,J=6.7Hz,CH3),1.28(32H,s,16CH2),1.55(2H,m,8-H),2.43(2H,t,J=7.6,7-H),6.16(3H,m,2,4,6-H),7.96(2H,s,1,3-OH);13C-NMR(300MHz,CD3COCD3)δ14.4(25-C),23.3(24-C),29.4~30.3(10~23-C),32.1(9-C),32.6(8-C),36.6(7-C),100.7(2-C),107.4(4,6-C),145.7(5-C),159.2(1,3-C)。
5-二十一烷基間苯二酚(5-heneicosylresorcinol)白色針狀結(jié)晶(MeOH),mp99~100℃,三氯化鐵反應(yīng)陽性。微溶于甲醇、石油醚,易溶于乙酸乙酯、熱石油醚。ESI-/MS 403[M-H]-。1H-NMR(300MHz,CD3COCD3)δ0.87(3H,t,J=6.7Hz,CH3),1.28(36H,s,18CH2),1.55(2H,m,8-H),2.43(2H,t,J=7.6,7-H),6.16(3H,m,2,4,6-H),7.98(2H,s,1,3-OH);13C-NMR(300MHz,CD3COCD3)δ14.0(27-C),23.0(26-C),28.7~30.3(10~25-C),31.7(9-C),32.3(8-C),36.3(7-C),100.6(2-C),107.4(4,6-C),145.5(5-C),158.9(1,3-C)。
5-二十三烷基間苯二酚(5-tricosylresorcinol)白色針狀結(jié)晶(MeOH),mp103~104℃,三氯化鐵反應(yīng)陽性。微溶于甲醇、石油醚,易溶于乙酸乙酯、熱石油醚。ESI-/MS 431[M-H]-。1H-NMR(300MHz,DMSO)δ0.84(3H,t,J=6.1Hz,CH3),1.23(40H,s,20CH2),1.47(2H,m,8-H),2.35(2H,t,J=7.3,7-H),6.00(3H,m,2,4,6-H),8.85(2H,s,1,3-OH);13C-NMR(300MHz,DMSO)δ13.8(29-C),22.0(28-C),28.7~30.0(10~27-C),30.7(9-C),31.3(8-C),35.3(7-C),100.1(2-C),106.3(4,6-C),144.1(5-C),158.2(1,3-C)。
5-二十五烷基間苯二酚(5-pentacosylresorcinol)白色針狀結(jié)晶(MeOH),mp107~108℃,三氯化鐵反應(yīng)陽性。微溶于甲醇、石油醚,易溶于乙酸乙酯、熱石油醚。ESI-/MS 459[M-H]-。1H-NMR(300MHz,DMSO)δ0.84(3H,t,J=6.1Hz,CH3),1.23(44H,s,22CH2),1.47(2H,m,8-H),2.35(2H,t,J=7.3,7-H),6.00(3H,m,2,4,6-H),8.84(2H,s,1,3-OH);13C-NMR(300MHz,DMSO)δ13.8(31-C),22.0(30-C),28.7~39.0(10~29-C),30.7(9-C),31.3(8-C),35.3(7-C),100.0(2-C),106.3(4,6-C),144.1(5-C),158.1(1,3-C)。
實施例3藥效學(xué)檢測實施例3.1對S180腫瘤株復(fù)制的肉瘤模型小鼠的治療作用實驗方法取體重18~22g的小鼠50只,稱重后按體重隨機(jī)均分成模型組(等容量蒸餾水)、陽性組(25mg/kg)、小麥麩皮總烷基酚四個劑量組(30mg/kg、60mg/kg、120mg/kg、240mg/kg)各組小鼠均右腋皮下注射0.2ml由S180腫瘤株接種后傳代的小鼠腫瘤腹水(無菌取小鼠腹水,用無菌生理鹽水按1∶4倍稀釋)。24h后陽性組各鼠按劑量間日腹腔注射,連續(xù)3次;各藥物組按劑量灌腸給藥,0.2ml/10g體重,每日一次,連續(xù)7天,共8天,分別間日稱重;末次藥后30min,稱重,將各組小鼠頸椎脫臼處死,剝離肉瘤組織、取出脾、胸腺,稱重,并計算腫瘤生長抑制率。將剝離的S180實體瘤組織置10%中性甲醛中固定,乙醇脫水,常規(guī)石蠟包埋、切片(0.4μm),HE染色,光鏡下觀察、攝片。

實驗結(jié)果小麥麩皮總烷基酚能夠降低S180腫瘤株的肉瘤模型動物的肉瘤的重量,有一定的腫瘤生長抑制率,結(jié)果詳見表1、2、3。
表1小麥麩皮總烷基酚對腫瘤模型小鼠體重的影響(x±s)

表2小麥麩皮總烷基酚對模型小鼠肉瘤重量的影響(x±s)

與模型組比*P<0.05,**P<0.01
表3小麥麩皮總烷基酚對模型小鼠免疫器官的影響(x±s)

與模型組比*P<0.05,**P<0.01實施例3.2對S180腫瘤株復(fù)制腫瘤腹水模型小鼠的作用實驗方法取體重18~22g的小鼠50只,隨即分成模型組(等容量蒸餾水)、陽性組(25mg/kg)、小麥麩皮總烷基酚四個劑量組(20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg)。各組小鼠均腹腔注射0.2ml由S180腫瘤株接種后傳代的小鼠腫瘤腹水(用無菌生理鹽水按1∶4倍稀釋)。24h后陽性組各鼠按劑量間日腹腔注射,連續(xù)3次;各藥物組按劑量灌腸給藥,0.2ml/10g,每日一次,連續(xù)7天,共8天,停藥后觀察記錄各小鼠死亡時間(每天以Am10:00為準(zhǔn)),計算生命延長率。

實驗結(jié)果小麥麩皮總烷基酚能延長腫瘤腹水的模型動物的生存時間,有一定的生命延長率,結(jié)果詳見表1。
表1小麥麩皮總烷基酚對模型小鼠存活時間的影響(x±s)

與模型組比*P<0.05,**P<0.0權(quán)利要求
1.一種小麥麩皮總烷基酚提取物,其特征在于從小麥麩皮中提取獲得,烷基酚類化合物之總量占中提取物總重量的25%~100%,所述的烷基酚類化合物指以5-烷基間苯二酚(5-alkylresorcinol)、5-烯基間苯二酚(5-alkenyl resorcinol)、5-(2-氧代烷基)間苯二酚(5-(2-oxoalkyl)resorcinol)和5-(2-氧代烯基)間苯二酚(5-(2-oxoalkenyl)resorcinol)為主要類型的一系列同系物,以及他們與單糖或寡糖形成的糖苷或其他形式的衍生物。
2.權(quán)利要求1所述的提取物的制備方法,其特征在于用小麥麩皮作原料,采用含水或不含水的有機(jī)溶劑作提取溶劑,提取過程包括(1)、漂洗將小麥麩皮用流水漂洗1-5分鐘,除去面粉和泥沙,再瀝干殘水;(2)、提取用含水或不含水石油醚、溶劑石油、工業(yè)酒精或其類似物之一種或幾種任意比例的混合物作溶劑,將小麥麩皮中加入為其5-20倍重量的溶劑中,經(jīng)浸泡、滲漉后在60~90℃溫度下提取或回流提取至檢測不到烷基酚類物質(zhì)為止,回收溶劑得小麥麩皮油脂性成分;(3)、皂化所得油脂性成分以5-20倍重量的皂化液皂化2-10小時,回收甲醇,得皂化物;(4)、萃取皂化物用水溶解,石油醚、乙酸乙酯或其類似物之一種或幾種任意比例的混合物萃取2-10次,有機(jī)溶劑層用水返洗至中性,過濾,回收溶劑,得到不皂化物;(5)、粗結(jié)晶不皂化物用熱石油醚溶解,待冷卻后析出結(jié)晶,過濾,得到小麥麩皮總烷基酚粗結(jié)晶;(6)、精制粗結(jié)晶重溶后進(jìn)入硅膠柱,以石油醚∶乙酸乙酯混合溶劑洗脫,收集含烷基酚成分的洗脫液,合并,重結(jié)晶,得小麥麩皮總烷基酚。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的小麥麩皮總烷基酚提取物的制備方法,其特征在于皂化液是指質(zhì)量體積比為4%的氫氧化鉀甲醇溶液;硅膠柱為30-200目;石油醚∶乙酸乙酯混合溶劑體積比例為100∶1~7∶3。
4.權(quán)利要求1所述的小麥麩皮總烷基酚提取物作為低毒性的抗腫瘤藥物或食品添加劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了小麥麩皮總烷基酚提取物及其制備方法,烷基酚類化合物占提取物總重量的25%~100%,用小麥麩皮作原料,采用含水或不含水的有機(jī)溶劑作提取溶劑,提取過程包括漂洗;有機(jī)溶劑提??;皂化;萃取不皂化物;用熱石油醚析晶;最后經(jīng)硅膠柱純化,精制,重結(jié)晶,得小麥麩皮總烷基酚。小麥麩皮總烷基酚提取物可作為低毒性的抗腫瘤藥物或食品添加劑。
文檔編號C07C37/00GK1948248SQ200610097289
公開日2007年4月18日 申請日期2006年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月27日
發(fā)明者姜東 , 馮旭, 曹衛(wèi)星 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
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