專利名稱：：13,13a-二氫小檗堿衍生物及其藥物組合物和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物化學(xué)和藥物治療學(xué)領(lǐng)域，具體涉及可作為胰島素增敏劑的13,13a-二氫小檗堿衍生物及其藥物組合物和醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：糖尿病(diabetesmellitus)是一組由遺傳和環(huán)境因素相互作用而引起的臨床代謝性疾病，因胰島素分泌絕對或相對不足以及靶組織細(xì)胞對胰島素敏感性降低，引起糖、蛋白、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂。臨床以高血糖為主要共同標(biāo)志，久病可引起多個系統(tǒng)損害，病情嚴(yán)重和應(yīng)激時可發(fā)生急性代謝紊亂如酮癥酸中毒等。在糖尿病人群中發(fā)生心血管疾病、腎臟損傷、失明、肢端壞疽等嚴(yán)重并發(fā)癥均明顯高于非糖尿病人群。因此，糖尿病及其并發(fā)癥已成為嚴(yán)重威脅人類健康的世界性公共衛(wèi)生問題。目前一般將糖尿病分為兩類，l型糖尿病(胰島素依賴型糖尿病，IDDM)與2型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病，NIDDM)。糖尿病中95%以上是2型糖尿病。隨著生活水平的提高，人口老齡化、肥胖、不健康的飲食以及缺乏運動的生活方式，使糖尿病的發(fā)病率越來越高，據(jù)統(tǒng)計，現(xiàn)在全球糖尿病病人超過1.9億，專家預(yù)測到2025年這個數(shù)字將達到3.3億。1型糖尿病病人由于第6對染色體短臂上的HLA-D基因決定了遺傳易感性，對環(huán)境因素，特別是病毒感染或化學(xué)毒性物質(zhì)刺激的反應(yīng)異常，直接或間接通過自身免疫反應(yīng)，引起胰島(3細(xì)胞破壞，以致胰島素不足。臨床特點是起禍急、多食、多尿、多飲、體重減輕等癥狀較明顯，有發(fā)生酮癥酸中毒的傾向，必須依賴胰島素治療維持生命。2型糖尿病也有很強的遺傳性和環(huán)境因素，并呈顯著的異質(zhì)性，發(fā)病機制多樣而復(fù)雜，各病人間存在較大差異。總的來說可概括為胰島素分泌的相對不足和胰島素抵抗。對2型糖尿病人，尤其是肥胖性糖尿病患者的一系列研究證實，胰島素^y元是2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展過程中的關(guān)鍵因素。在研究脂肪細(xì)胞和肌肉細(xì)胞內(nèi)胰島素信號傳導(dǎo)途徑的基礎(chǔ)上，設(shè)計開發(fā)胰島素增敏劑，以改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，是目前2型糖尿病新藥研究的重點，也是其主要方向之一。目前臨床上用于治療糖尿病的口服藥物主要有三大類胰島素分泌促進劑、胰島素增敏劑和減少碳水化合物吸收的藥物?；酋ｋ孱愐葝u素分泌促進劑其作用機理為刺激胰島|3細(xì)胞分泌胰島素，從而降低人體血糖水平。該類藥物包括格列苯脲、格列他。秦、格列壹酮、格列齊特、格列美脲(Glimepiride)等?；酋ｋ孱愃幬锸欠欠逝值?型糖尿病病人的一線治療用藥，所有的磺酰脲類藥物均存在引發(fā)低血糖的危險。非磺酰脲類促胰島素分泌劑能促進胰島素在第一時間的分泌。通過關(guān)閉胰島(3細(xì)胞膜上的ATP依賴性K+通道，造成Ca"內(nèi)流，使細(xì)胞內(nèi)Ca"濃度增加，從而刺激細(xì)胞胰島素的分泌。此類藥物包括瑞格列奈(Repaglinide)、那格列奈(Nateglinide)等，主要作為膳食調(diào)節(jié)劑，用于控制餐后高血糖，并不能改善胰島素抵抗，并有短時的過每文反應(yīng)。p塞唑烷二酮類胰島素增敏劑能改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，糾正糖及脂質(zhì)代謝異常，是一類高選擇性的PPARY激動劑，其作用機理為通過增加胰島素的敏感性從而有效地控制人體血糖水平。該類藥物包括鹽酸曲格列酮(因肝毒性方面存在安全問題已撤出市場，產(chǎn)生不良反應(yīng)的根本原因不清)、羅格列酮(Rosiglitazone)和吡格列酮(Pioglitazone)等。主要不良反應(yīng)包括體重增加、水腫等。雙胍類胰島素增敏劑不促進胰島素分泌，其降糖作用機理主要是通過增加外周組織(例如肌肉)對葡萄糖的攝取和利用，促進組織無氧糖酵解，加強肌肉等組織對葡萄糖的利用，同時抑制肝糖原的異生，降低糖尿病時的高血糖生成率。雙胍類藥物能改善糖代謝，降低體重，但不影響血清胰島素水平，血糖在正常范圍者服用后無降血糖危險，是肥胖糖尿病病人的一線用藥。該類藥物包括苯乙雙胍(因存在安全問題，現(xiàn)已停用)、鹽酸二曱雙胍、鹽酸二甲雙胍緩釋片等。為達到改善胰島素敏感性的效果，需服用較大劑量的此類藥物(以鹽酸二曱雙胍為例，口服1500mg/d，是我國所規(guī)定的藥物用量的上限)。伴隨的不良反應(yīng)主要是消化道癥狀(惡心，腹瀉和腹痛性痙攣等h且心腎功能障礙的老人服用該藥有引發(fā)乳酸中毒的危險。減少碳水化合物吸收的藥物主要包括a-葡萄糖普酶抑制劑和醛糖還原酶抑制劑。a-葡萄糖苷酶抑制劑能通過竟?fàn)幰种菩∧c絨毛中參與碳水化合物降解的a-葡萄糖香酶活性，抑制碳水化合物和雙糖的分解和消化，延遲并減少在小腸上段葡萄糖的吸收，從而控制餐后血糖的升高?？梢宰鳛橐痪€藥物配合飲食、運動使用，或與磺酰脲類藥物、雙胍類藥物以及胰島素合用，此類藥物包括阿卡波糖(Acarbose)、伏格列波糖(Voglibose)以及米格列醇(Miglitol)等。其主要的不良反應(yīng)為腹部不適、脹氣、排氣等消化道反應(yīng)。醛糖還原酶(AldoseReduetase,AR)是聚醇代謝通路中的關(guān)鍵限速酶。從70年代開始，AR抑制劑成為糖尿病治療研究領(lǐng)域的新熱點。大量動物實驗和臨床研究表明，AR抑制劑可以有效改善機體聚醇代謝通路異常，從而達到預(yù)防和延緩糖尿病并發(fā)癥的目的。托瑞司他(Tolrestat)是由WyethAyerst公司(美國惠氏制藥)研究開發(fā)，并于1989年在愛爾蘭上市的糖尿病治療用藥。但該藥因引起視覺損害和腎衰竭，沒能通過FDA審查，于1996年從市場上招"肖。依帕司他(Epalrestat)是最近于日本上市的糖尿病治療藥物，同樣會引起一定的類似不良反應(yīng)?，F(xiàn)臨床上使用的治療2型糖尿病藥物不能完全控制血糖，且不是對所有的糖尿病人有效；每類藥物都存在或多或少的副反應(yīng)，因此尋找新作用機制和安全有效的治療2型糖尿病的藥物仍然是當(dāng)前的研究熱點。小檗石成(Berberine)又名黃連素，系異喚啉類生物石成，是黃連、黃柏、三棵針、南天竹等植物的主要成分。在臨床上主要用于治療細(xì)菌性痢疾和腸炎，其最大特點是副作用極為少見。小檗堿作為抗菌藥在臨床上已應(yīng)用多年，是一種廣譜抗菌藥物，對多種革蘭氏陽性、陰性菌以及真菌、霉菌、病毒、原蟲、線蟲具有抑制殺滅作用。從上世紀(jì)五十年代起，一些專家學(xué)者和醫(yī)務(wù)人員對臨床上廣泛使用的鹽酸黃連素進行了大量的動物實驗和臨床試驗，提出黃連素除了抗菌也可以治療糖尿病及其并發(fā)癥。研究文獻總結(jié)于下表。、檗堿治療糖尿病的動物實驗與臨床研究總結(jié)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>作用。且作用溫和而持久，無嚴(yán)重毒副作用，無肝腎功能損害，對糖尿病常見并發(fā)癥均有良好療效。1999,22(3):67。石利天等(太原市商業(yè)職工醫(yī)院)治療2型糖尿病患者68例，血糖明顯下降，總有效率為86.8%。其降糖機制是多方面的，治療后血清胰島素水平明顯升高。山西臨床醫(yī)藥雜志，2000，9(3):181-182。王冬口(江蘇省泰州市泰山衛(wèi)生院)57例糖尿病患者服用第二代磺脲類藥物或與二甲雙胍合用，3年后發(fā)生繼發(fā)性失效，經(jīng)加服黃連素1個月后血糖不同程度下降，總有效率81%。浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002，12(1):50。蔣建東等黃連素與胰島素受體相互作用并顯著提高胰島素受體基因和過氧化酶體增殖因子活化受體基因的表達，從而可作為胰島素增敏劑，并可單獨或與胰島素或其它2型糖尿病治療劑聯(lián)合用于治療2型糖尿-病。C雨121906.8吳開敏硫酸小檗堿、磷酸小檗堿等高溶解度小檗堿易溶于水，可促進機體對藥物的吸收，促使療效大幅度提高，可用于治療和預(yù)防糖尿病或其并發(fā)癥。WO03090749A1,CN1771944A近年來，在臨床上，小檗石威被廣泛用于治療2型糖尿病。最初研究認(rèn)為其降血糖作用與它抗升血糖激素、促進胰島b細(xì)胞再生和功能恢復(fù)有關(guān)(鄭洪艷，徐為人-.中草藥.2004,35:708-711)。研究認(rèn)為，小檗堿5-100)^mol/L可使HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗量增加32-60%，但沒有刺激bTC3細(xì)胞分泌胰島素的作用。因此認(rèn)為小檗堿的降糖作用并非由于刺激了胰島素的分泌，而是通過增加肝細(xì)胞的葡萄糖消耗量，即小檗堿通過肝細(xì)胞發(fā)揮非胰島素依賴的降糖作用。王娟(王娟.中華中西醫(yī)學(xué)雜志.2004,2(12):65-66)報道，用小檗堿治療糖尿病時臨床觀察發(fā)現(xiàn)血糖下降而血清胰島素水平上升，說明小檗堿除具有抗升糖激素的作用外，還可促進胰島b細(xì)胞再生及功能恢復(fù)。小檗堿又有抑制糖異生和促進糖酵解的作用，使血糖下降。小檗堿的降糖作用屬于胰島素增敏劑的范疇。因小檗堿同時有降壓、降脂、抗感染作用，故對于預(yù)防糖尿病并發(fā)癥也有積極意義。截至目前為止，雖然小檗堿治療糖尿病效果明顯，但抗糖尿病的作用機制至今仍未明確闡明。最近西安交通大學(xué)的楊廣德等人報道小檗堿的類似物鹽酸巴馬汀可用于治療2型糖尿病(CN1582930A)，并合成了一些小檗石威、四氫小檗^威類似物，采用細(xì)胞膜色語技術(shù)來和由alloxan誘導(dǎo)的糖尿病老鼠評價它們的降血糖活性(Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,2006,16:1380-1383)。在研究中，我們發(fā)現(xiàn)小檗堿同雙胍類糖尿病臨床用藥相似，能明顯增加人體外周組織(例如肌肉)對葡萄糖的攝取和利用，從而降低糖尿病患者的血糖水平，達到治療糖尿病的目的，屬于非胰島素依賴性的人體外周組織葡萄糖吸收促進劑。據(jù)文獻報道(Amira，K.,et.al,2006，130，2535-2544;Yamamoto,N.etal,腸.2006,351,139-145.)在應(yīng)用L6肌肉細(xì)胞葡萄糖吸收評價模型試驗中，鹽酸二甲雙胍可明顯增強人體肌肉組織中葡萄糖的攝取量。在L6肌肉細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運模型試驗中，鹽酸二曱雙胍400時可使L6肌肉細(xì)胞3-曱基葡萄糖轉(zhuǎn)運效果增加0.5倍左右。相比于二曱雙胍，在體外L6肌肉細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運模型試驗中鹽酸小檗堿達到相同效果時需用劑量更低。在我們的試驗中，當(dāng)鹽酸小檗堿達到lOinM時，可使L6肌肉細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運效果增加3倍左右。在進一步的L6肌肉細(xì)胞葡萄糖吸收模型試驗中，葡萄糖細(xì)胞濃度20mM，鹽酸d、檗堿濃度5fiM時可使L6肌肉細(xì)胞葡萄糖吸收量增加2倍以上。通過對L6肌肉細(xì)胞進行免疫印跡實驗，我們發(fā)現(xiàn)小檗堿對胰島素信號通路影響較弱，而顯著增強了AMPK和p38MAPK激酶的活性。經(jīng)過胰島素信號通路的特異性抑制劑wortmannin的處理，胰島素所引發(fā)的葡萄糖吸收增強得到了明顯抑制，而小檗堿引發(fā)的葡萄糖吸收增強則不受影響。經(jīng)過AMPK和p38MAPK特異性抑制劑(分別為CompoundC和SB202190)的處理，小檗堿引發(fā)的葡萄糖吸收明顯降低。進一步的免疫印跡實驗表明，在小檗堿影響的細(xì)胞信號通路中.AMPK位于p38MAPK的上游。以上實驗結(jié)果表明，AMPK是小檗堿促進葡萄糖吸收的關(guān)鍵靶點蛋白。我們通過高效液相層析發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)AMP:ATP比率顯著提高，顯示出細(xì)胞內(nèi)能量代謝水平的變化，這是AMPK激活的關(guān)鍵原因。綜上所述，我們的研究表明小檗堿不是通過胰島素信號通路影響了葡萄糖吸收，而是通過改變細(xì)胞能量代謝水平，激活A(yù)MPK蛋白而引起了葡萄糖吸收的增強。綜上所述，小檗石威在4唐尿病治療上效果明顯，《旦該4匕合物存在溶解度差，口服吸收難于到達體內(nèi)等不利因素。這限制了它在糖尿病治療上的進一步應(yīng)用，因此有必要深入研究該化合物結(jié)構(gòu)與活性之間的關(guān)系，尋找體內(nèi)活性更強、吸收更好的小檗堿衍生物。
發(fā)明內(nèi)容為解決上述問題，提出本發(fā)明。本發(fā)明的一個目的是提供如式1所示的13,13a-二氬小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽。1其中，二代表雙鍵或單鍵；R,、112各自獨立地為H、OH、C廣C4烷氧基或C廣Q酰氧基，或Rl和R2連接形成-0-CH2-0;R3為H、OH、C廣C4烷氧基、d-C4酰氧基、C廣C4烷基、d-Ct鹵代烷基或芳香基；R4、Rs為H、OH、C-C4烷氧基或d-C4酰氧基，或&和115連接成為-0-CH2-0-;R6為H、OH、Q-Ct烷基、Q-C4鹵代烷基、芳香基、Q-Ct烷氧基或C,-Ct酰氧基。優(yōu)選，本發(fā)明的13，13a-二氫小檗堿衍生物為下表中2~18所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>本發(fā)明的13，13a-二氬小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽可通過如下的合成方法合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>鹽酸小檗堿溶于丙酮，經(jīng)堿(如NaOH)處理得到8位被丙酮a位進攻后的產(chǎn)物2-羰基丙基小檗堿(acetonylberberine);該化合物再與卣代60%硫酸/間苯三盼60°/。硫酸/間苯三酷13-烷基取代的小檗堿(13-alkylberberine);13-烷基取代的小檗堿與格氏試劑反應(yīng)生成8，13-二烷基取代二氳小檗堿衍生物；13-烷基取代的小檗堿在強堿性條件下與醇鈉負(fù)離子反應(yīng)得到8-烷氧取代-13-烷基取代二氫d、檗堿衍生物。小檗堿在無水四氫呋喃中被氫化鋁鋰還原為二氫小檗堿，它可被MCPBA氧化得到13-羥基二氫小檗堿，再經(jīng)醚化、酯化反應(yīng)合成系列13-烷氧取代或13-烷酰氧取代二氬小檗堿。本發(fā)明的另一目的是提供包含治療有效劑量的13，13a-二氮小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽的藥物組合物。本發(fā)明的再一目的是提供上述13,13a-二氫小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽在制備用于治療由胰島素抵抗引起的糖尿病、肥胖癥、脂肪肝及其并發(fā)癥的藥物中的用途。本發(fā)明的再一目的是提供包含治療有效劑量的13,13a-二氫小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽的藥物組合物在制備用于治療由胰島素抵抗引起的糖尿病、肥胖癥、脂肪肝及其并發(fā)癥的藥物中的用途。有益效果本發(fā)明設(shè)計與合成了一類13，13a-二氫小檗堿衍生物，其對肌肉細(xì)胞有促進葡萄糖吸收的作用，整體動物試驗表明，該類化合物具有改善糖耐量和胰島素抵抗、減輕肥胖、緩解脂肪肝等功效。該類化合物可用于治療由胰島素抵抗引起的糖尿病、肥胖癥、脂肪肝及其并發(fā)癥。本發(fā)明化合物合成簡單，易于制備，且合成原料豐富。圖1顯示本發(fā)明化合物在濃度5pM時對L6肌肉細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運的促進效果；圖2A為經(jīng)二氫小檗堿衍生物19及其硫酸鹽治療肥胖小鼠2周后，腹腔注射葡萄糖耐受(ipGTT)曲線圖；圖2B為經(jīng)二氫小檗堿衍生物19及其硫酸鹽治療肥胖小鼠2周后腹腔注射葡萄糖耐受(ipGTT)曲線下面積；圖3A為經(jīng)二氫小檗堿衍生物19及其硫酸鹽治療2周后小鼠體重的變化圖；圖3B為經(jīng)二氫小檗堿衍生物19及其硫酸鹽治療2周后小鼠內(nèi)臟脂肪/體重比例的變化圖；圖4A為經(jīng)二氯小檗堿衍生物19及其硫酸鹽慢性治療2周后的小鼠，其血漿中的自由脂肪酸含量的變化圖；圖4B為經(jīng)二氫小檗堿衍生物19及其硫酸鹽慢性治療2周后的小鼠，其血漿中的甘油三酯含量的變化圖。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但不限制本發(fā)明。下述制備例中，'H-NMR用VarianMercuryAMX300型儀測定。MS用VGZAB-HS或VG-7070型以及Esquire3000plus-01005測定。所有溶劑在使用前均經(jīng)過重新蒸餾，所使用的無水溶劑均是按標(biāo)準(zhǔn)方法千燥處理獲得。除另有說明外，所有反應(yīng)均是在氬氣保護下進行并用TLC跟蹤，后處理時均經(jīng)飽和食鹽水洗和無水石克酸鎂干燥過程。產(chǎn)品的純化除另有說明外均使用硅膠的柱色譜法，所使用的硅膠為200-300目，GF254為青島海洋化工廠或煙臺緣博硅膠公司生產(chǎn)。制備實施實例化合物2的制備8-丙酮基二氬小檗堿(3g)和碘曱烷溶于lOOmL二氯甲烷中，加壓加熱至IOO'C反應(yīng)3個~、時。反應(yīng)結(jié)束后過濾掉固體副產(chǎn)物，濾液減壓蒸干。殘留物在甲醇中重結(jié)晶，得化合物2(1.53g,480/0)?；衔?，C21H20INO4，MW:477;黃色晶體，易溶于氯仿和曱醇的混和溶劑。'HNMR(300MHz,DMSO-d6):59.89(1H，s，H-8)，8.20(1H，d,/=9.0Hz,H-12),8.19(1H,d，/=9.0Hz,H-ll),7.48(1H,s，H-l),7.15(IH，s，H-4),6.18(2H,s,-OCH!O-)，4.80(2H,m，H-6),4.10(3H,s，-OCH3)，4.09(3H,s，-OCH3)，3.15(2H，m，H-5)，2.92(3H,s，-CH3)?；衔?的制備8-丙酮基二氫小檗堿(1.5g)和溴乙烷溶于100mL二氯曱烷中，加壓加熱至IO(TC反應(yīng)5個小時。反應(yīng)結(jié)束后過濾掉固體副產(chǎn)物，濾液減壓蒸干。殘留物在曱醇中重結(jié)晶，得化合物3(0.83g,53%)?；衔?，C22H22IN04，MW:491;白色晶體，易溶于氯仿和曱醇的混和〉容劑。NMR(300MHz,DMSO-d6):59.90(1H，s，H-8)，8.21(2H,ABq，/=9.0Hz，H-ll和12)，7.30(1H，s,H-l),7.17(1H，s,H-4),6.19(2H，s,-OCH20-)，4.80(2H，m，H-6),4.10(3H，s,-OCH3),4.09(3H,s，-OCH3)，3.36(2H，q,J=7.5Hz，H-l，)，3.09(2H，m，H-5)，1.47(3H，t，J=7.5Hz，H-2')?；衔?的制備8-丙酮基二氫小檗堿(0.5g)和1-石典丙烷(0.43g)溶于50mL二氧六環(huán)中，回流反應(yīng)5個小日r。反應(yīng)結(jié)束后過濾掉固體副產(chǎn)物，濾液減壓蒸干。殘留物經(jīng)硅膠柱純化(曱醇:二氯甲烷=1:10),得化合物4(0.25g，52%)。化合物4，C23H24IN04，MW:505;黃色晶體，易溶于氯仿和曱醇的〉'昆禾口〉容劑。固R(300MHz,DMSO-d6):59.96(1H,s,H-8),8.20(2H，ABq,/=9.0Hz，H-ll和12)，7.23(1H,s，H-l),7.19(1H，s，H腸4),6.21(2H,s，-OCH20-)，4.80(2H,m，H-6),4.10(3H，s,-OCH3)，4.09(3H，s，-OCH3)，3.08(2H，m，H-5)，1.83(2H,m，H-l，)，1.10(2H,m，H-2，)，1.05(3H，t,=7.0Hz,H-3')。化合物5的制備8-丙酮基二氫小檗堿i:1.0g)和l-碘丁烷(9.2g)溶于50mL乙腈中，回流反應(yīng)5個小時。反應(yīng)結(jié)束后過濾掉固體副產(chǎn)物，濾液減壓蒸干。殘留物經(jīng)硅膠柱純化(甲醇:氯仿=l:9)，得化合物5(0.42g，43%)?；衔?，C24H26IN04,MW:519;黃色粉末，易溶于氯仿和甲醇的混和:容劑。'H畫R(300MHz,DMSO-d6):59.89(1H,s，H-8)，8.23(2H,ABq,/=9.0Hz,H-ll和12),7.31(1H，s,H-l)，7.20(1H，s,H-4)，6.11(2H，s，-OCH20-)，4.80(2H,m,H-6)，4.01(6H，s，-OCH3)，3.31(2H，m,H-l,)，3.14(2H,m,H隱5)，1.82(2H,m，H-2,)，1.47(2H,m，H-3'),0.95(3H，t,J=7.5Hz,H-4，)?；衔?的制備8-丙酮基二氫小檗堿(2.65g)和1，3-二碘丙烷(7.4mL)溶于75mL乙腈中，回流反應(yīng)6個小時。反應(yīng)結(jié)束后過濾^^固體副產(chǎn)物，濾液減壓蒸千。殘留物經(jīng)硅膠柱純化(曱醇:氯仿=1:9)，得化合物6(0.37g，8.7%)。化合物6，C23H23I2N04,MW:631;黃色粉末，易溶于氯仿和甲醇的混和溶劑。'H蘭R(300MHz,CDC13):510.26(1H，s，H-8)，8.00(1H，d，/=9.0Hz,H-ll)，7.89(1H,d,J=9.0Hz，H-12)，7.09(1H，s，H-l),6.89(1H，s，H-4)，6.10(2H,s,-OCH20-)，5.08(2H，m,H-6),4.37(3H，s，-OCH3)，4.07(3H，s，-OCH3)，3.51(2H，t,/=8Hz,CHrAr)，3.32(2H,t,/=6Hz,H-5)，3.23(2H，t，《/=5Hz，CH2-I),2.30(2H，m，CH2(propyl))?；衔?的制備8-丙酮基二氫小檗堿(4g)和碘化鈉(1.87g)溶于50mL乙腈中，再加入2mL氯化千，加熱至8(TC回流6個小時。反應(yīng)混合物過濾，濾餅用乙腈洗滌，合并液相減壓蒸去乙腈，殘余物經(jīng)硅膠柱純化(CHC13/CH30H=20:1)，得化合物7(1.83g，45%)?；衔?，C27H24C1N04，MW:461;棕紅色無定型粉末，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。'HNMR(300MHz，CDC13):510.10(1H，s,H-8),7.63(2H,dd,/=15.0和9.0Hz，H-3，和5')，7.32—7.23(3H，m,H-l，和4，和5，)，7.05(2H，d,/=7.0Hz，H-ll和12),6.卯(1H,s,H-l)，6.84(1H,s,H-4)，5.93(2H，s，-OCH20-)，4.98(2H,m，H-6)，4.27(3H，s，-OCH3)，3.96(3H，s,-OCH3),3.18(2H，m，H-5)?；衔?的制備8-丙酮基二氫小檗堿(4g)和碘化鈉(1.87g)溶于50mL乙腈，再加入2mL氯曱酸乙酯，加熱至80。C回流6個小時。反應(yīng)混合物過濾，濾餅用乙腈洗滌，合并液相減壓蒸去乙腈，殘余物經(jīng)硅膠柱純化(CHCl3/CH3OH=20:1),得化合物8(1.61g，40%)?；衔?，C23H22C1N06,MW:443;黃色無定型粉末，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。'HNMR(300MHz,CDC13):(510.82(1H，s，H-8)，7.88(1H，d，/=9.0Hz，H-12),7.73(1H，d，J::9.0Hz，H-ll)，7.21(1H,s,H-l)，6.89(1H，s，H-4)，6.13(2H，s，-OCH20-)，5.38(2H,m，H-6)，4.40(2H，q，J=7.5Hz，H-2，)，4.08(3H，s，-OCH3),4.02(3H，s,-OCH3)，3.38(2H，m，H-5),1.19(3H，t,h7.5Hz，H-3,)。化合物9的制備8-丙酮基二氫小檗堿(4g)溶于30mL乙腈，再加入2mL氯乙酸乙酯，加熱至80。C回流6個小時。反應(yīng)混合物過濾，濾餅用乙腈洗滌，合并液相減壓蒸去乙腈，殘余物經(jīng)硅膠柱純化(CHCl3/CH3OH-20:1),得化合物9(1.34g，35%)?；衔?，C24H24C1N06,MW:457;黃色結(jié)晶，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。NMR(300MHz,CDC13):510.00(1H，s,H-8)，7.84(1H，d,J=9.0Hz，H-2),7.70(1H,d,J=9.0Hz,H-ll),7.13(1H,s，H-l),6.86(1H，s,H-4),6.0(2H,s,-OCH20-)，4.28(2H，m，H-3')，4.26(2H,m，H扁6)，4.23(3H,s,-OCH3),4.01(3H，'s，-OCH3),3.62(2H，s,H-l，)3.10(2H，m,H-5)，1.28(3H,t，J=7.2Hz，H-4，)?；衔?0的制備二氫小檗石咸(337mg)溶于35mL二氯甲烷中，氬氣保護，保持體系的溫度在-25。C~-30°C,向其中緩慢滴加溶有258mgMCPBA(1.5mmol)的二氯曱烷溶液8mL,待滴加完畢，保持溫度不變繼續(xù)攪拌反應(yīng)1小時。升溫至0°C,向體系中加入亞石危酸鈉250mg(2.0mmol),室溫繼續(xù)攪拌1小時。停止反應(yīng)，過濾，濾液減壓濃縮除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱(CHCl3/CH30H=10:l)層析純化，得到化合物10(280mg，80%)?；衔?0，C20H18NO5，MW:352;黃色粉末，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。'HNMR(300MHz,CDC13)，38.83(1H，s，H-8),8.28(1H,d，J=8.1Hz,H-ll)，7.78(1H，s，H-l)，7.29(1H，d，J=8.1Hz，H-12)，6.52(1H，s,H-4),5.88(2H,s,-OCH2()-)，4.44(2H,t,/=6.3Hz,H-6)，3.95(3H，s,OMe-9或10),3.94(3H，s,OMe-10或9)，2.95(2H，t,J=6.3Hz，H-5)?；衔?1的制備化合物10(1.0g)和碳酸鉀(200mg)溶于20mL丙酮中，再加入碘曱烷0.2mL，加熱回流3個小時，反應(yīng)混合物過濾，濾液減壓濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱(CHCl3/CH3OH=20:1)純化，得化合物11(0.41g，37%)?；衔飈l，C21H20INO5，MW:493;棕色粉末，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。'HNMR(300MHz,CDC13)，58.97(1H，s,H-8),8.33(1H，d，《/=8.1Hz，H-ll)，7.91(IH，s,H-O，7.45(IH，<!，/=8.1Hz，H-12),6.76(1H,s，H-4)，5.97(2H,s,-OCH20-)，4.32(2H，t，《/=6.3Hz,H-6),4,01(3H,s,-OMe)，3.94(3H,s，-OMe),3.73(3H，s,-OMe),2.95(2H,t，J=6.3Hz,H-5)。化合物12的制備化合物10(1.0g)和碳酸鉀(200mg)溶于20mL丙酮中，再加入溴乙烷0.25mL，加熱回流3個小時，反應(yīng)混合物過濾，濾液減壓濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱(CHCl3/CH3OH=20:1)純化，得化合物12(0.37g，34%)?；衔?2，C22H22BrN05，MW:459;棕黃色粉末，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。'HNMR(300MHz,CDC13),59.01(1H，s，H-8),8.45(1H,d，8.1Hz，H-ll)，7.99(1H,s，H-l)，7.63(1H，d，《/=8.1Hz，H-12),6.81(1H,s,H-4)，6.08(2H，s，-0CH2O),4.35(2H，t,J=6.3Hz，H-6),4.11(3H，s，-OMe)，4.01(3H,s,-OMe)，3.92(2H，m,H-l，)，2.95(2H，t，/=6.3Hz，H-5),1.35(3H，t，《/=7.5Hz，H-2')?；衔?3的制備化合物10(34mg，0.1mmol)溶于1mL吡咬和1mL乙酸酐的混合溶液中，室溫攪拌反應(yīng)過夜。減壓濃縮移除溶劑，殘留物經(jīng)SephdexLH-20(CHC13/CH30H=10:1)層析純化，得到化合物13(28mg,80%)。化合物13,C22H2()N06,MW:394;黃色粉末，易溶于氯仿和甲醇的混合溶劑。'HNMR(300MHz,C:DC13),38.81(1H,s，H-8)，8.27(1H，d,■/=8.1Hz，H-ll),7.76(1H,s,H-l),7.29(1H,(!，/=8.1Hz，H-12),6.56(1H，s,H-4),5.89(2H,s,-OCH20-)，4.45(2H，t,/=6.3Hz,H-6)，3.95(3H，s,OMe-9或10),3.94(3H，s，OMe-lO或9)，2.95(2H,t,/=6.3Hz,H-5),2.10(3H，s,OAc)。化合物14的制備小檗石成(4.5g，12.1mmol)放入50mL圓底燒并瓦中，以油泵保持反應(yīng)體系真空度(20-30mmHg),加熱至190。C，反應(yīng)40分鐘。待溫度降至室溫后，停止真空泵的運作。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱(CHCl3/CH30H=15:1和10:1持續(xù)洗脫至化合物不再流下為止)層析純化，得到化合物14(3.3g，85%)?；衔飈4，C19H15N04，MW:321;棕紅色無定形粉末，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。'HNMR(300MHz,CDC13)，59.06(1H,s,H-8),8.60(1H，s，H-13),8.18(1H,d，/=8.1Hz,H-ll)，8.10(1H，d,/=8.1Hz，H國12)，7.57(1H,s，H-l),6.87(1H，s,H-4),6.10(2H，s，-OCH20-)，4.90(2H,t,6.3Hz，H-6)，4.63(3H,s，OMe-10)，3.20(2H，t,/=6.3Hz，H-5)?；衔?5的制備化合物14(33mg，0.1mmol)溶于1mL吡。定和1mL乙酸酐的混合溶液中，室溫攪拌反應(yīng)過夜。減壓濃縮移除溶劑，殘留物經(jīng)S印hdexLH-20(CHCl3/CH3OH=10:1)層析純化，得到化合物15(32mg，88%)?；衔?5,C21H18N()5,MW:364;紅色粉末，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。'HN魔(300MHz,CDC13+CD3OD):59.16(1H，s，H-8)，8.64(1H，s,H-13)，8.18(1H，d,J=8.1Hz，H-ll)，8.04(1H，d，/=8.1Hz，H-12)，7.55(1H，s,H-l)，6.87(1H,s,H-4),6.09(2H,s，-OCH20-)，4.99(2H，t,/=6.3Hz,H-6),4.03(3H，s，OMe-10),3.20(2H,t，《/=6.3Hz,H-5)，2.10(3H，s,OAc)。化合物16的制備化合物14(360mg，1.0mmol)和三乙胺(1.08g)溶于50mL無水二氯甲烷中，室溫攪拌，向其中緩慢滴加溶有氯甲酸乙酯(1.2g，11.1mmol)的二氯甲烷溶液3mL。滴加完畢后，繼續(xù)反應(yīng)30min,減壓濃縮移除溶劑，殘留物經(jīng)SephdexLH-20(CHC13/CH30H=1:1)層析純化，得到化合物16(202mg，88%)?；衔?6,C22H2()N()6,MW:394;黃色無定形粉末，易溶于氯仿和甲醇。'H畫R(300MHz,CDC13):59.18(1H，s,H-8)，8.60(1H,s，H陽13),8.12(1H，d,/=8.1Hz，H-il)，8.06(1H，d，《/=8.1Hz,H-12),7.54(1H，s,H-l)，6,57(1H,s，H畫4),6.04(2H，s,-OCH20-)，4.49(2H,t，/=6.3Hz,H-6)，4.25(2H,q，《/=6.0Hz，H誦2，)，4.13(3H，s，OMe隱lO)，3.20(2H，t，《/=6.3Hz，H-5),1.10(3H，t，6.0Hz，H-3,)?；衔?7的制備小檗堿(370mg，1.0mmol)和間苯三酚(504mg,4.0mmol)溶于10mL60。/。的硫酸溶液中(體積比)，加熱到80。C，回流反應(yīng)1小時。冷卻，冰浴下向體系中加入15mL碘化鈉(30mg/mL)溶液，過濾。將濾餅溶于2mL含1%氬氧化鉀的溶液中，以亞辟u酸氯鈉調(diào)節(jié)該溶液pH值4~5，再次過濾，濾餅經(jīng)SephdexLH-20(CHCl3/CH3OH=10:1)層析純化，得到化合物17(108mg，33%)?；衔?7，C19H18C1N04，MW:359;黃色粉末，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。'HNMR(300MHz,DMSO)，59.83(1H，s，H-8)，8.75(1H，s，H-13)，8.18(1H，d，《/=8.1Hz,H-ll)，8.04(1H,d，J=8.1Hz，H-12),7.53(1H，s，H-l)，6.84(1H，s，H-4)，4.89(2H,t，J=6.3Hz,H-6),4.08(3H,s,OMe-9或10)，4.05(3H,s,OMe-10或9)，3.11(2H，t，J=6.3Hz，H-5)?；衔?8的制備化合物2(490mg，1.0mmol)和間苯三酚(504mg，4.0mmol)溶于10mL^Q/。的硫酸溶液中(體積比)，加熱到80。C,回流反應(yīng)1小時。冷卻，冰浴下向體系中加入15mL碘化鈉(30mg/mL)溶液，過濾。將濾餅溶于2mL含1%氫氧化鉀的溶液中，以亞石克酸氬鈉調(diào)節(jié)該溶液pH值4~5，再次過濾，濾餅經(jīng)SephdexLH-20(CHCl3/CH3OH=10:1)層析純化，得到4b合物18(123mg，31%)。化合物18，C21H22C1N04，MW:387;黃色粉末，易溶于氯仿和曱醇的混合溶劑。'H畫R(300MHz,DMSO-d6),59.96(1H，s，H-8)，8.91(1H,s，H-13),8.23(1H,d,J=8.1Hz，H曙ll)，8.11(1H，d，J=8.1Hz，H-12)，7.72(1H，s,H-l),6.91(1H,s,H-4)，4.98(2H，t,/=6.3Hz,H-6)，4.23(3H，s，OMe誦9或10)，4.15(3H，s,OMe-lO或9)，4.01(2H,m，H-l，),3.27(2H,t,/=6.3Hz，H畫5),1.45(3H，t，J二7.5Hz,H-2')?；衔?9的制備小檗堿(370mg，l.Ommol)溶于10mL無水四氯呋喃中。加入190mgLiAlH4(5.0mmol),室溫攪拌反應(yīng)2小時。反應(yīng)完畢后，減壓濃縮除去反應(yīng)溶劑，加入0.2mL水，0.2mL30%氬氧化鈉溶液，再力口0.6mL水，反應(yīng)液放置過濾，濾液，用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，經(jīng)硅力交柱(CHCl3/CH30H=50:1持續(xù)洗脫至化合物不再流下為止)層析純化，得到化合物19(240mg，65%)?；衔?9,C20H19NO4,MW:337;黃色無定形粉末，易溶于氯仿和丙酮。'H畫R(300MHz,CDC13),(57.18(1H，d，J=8.7Hz，H-ll),6.73(2H，m，H-12和H-l)，6.56(1H，s,H-4),5.95(1H，s，H-13)，5,94(2H，s，-OCH20-)，4.32(2H,s,H-8)，3.84(6H,s，OMex2)，3.20(2H，t,/=8.1Hz:H-6),2.90(2H，t,/=8.1Hz,H-5)?；衔?0的制備4美條(240mg，10mmol)和溴乙烷(1.08g，10mmol)溶于15mL無水乙醚中，氬氣保護，等劇烈反應(yīng)停止后，繼續(xù)回流2小時。反應(yīng)液冷卻到0。C，分批緩慢加入小檗堿(370mg，l.Ommol)，撤去冰浴，室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)溶液注入冰水(20mL)中，以2N鹽酸調(diào)節(jié)pH值為5,乙醚/水分配，水相冷卻，用濃氨水調(diào)節(jié)pH值為11~12,用氯仿萃取(20mLx3)，無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，所得油狀物在乙醚中重結(jié)晶，得到化合物20(220mg,59%)?；衔?0，C22H23N()4,MW:365;黃色粉晶，易溶于氯仿和丙酮。'H畫R(300MHz,CDC13):57.12(1H，s,H-l)，6.80(2H,m,H-ll和12),6.57(1H，s,H-4),6.00(2H,s,-OCH20-)，5.89(1H，s，H-13),3.85(6H,s，OMex2),3.32(2H，m,H-6),3.06(1H,t，《/=6.0Hz，H-8),2.81(2H，m,H畫5)，1.72(2H,m,H-l,),0.94(3H，t，6.3Hz，H-2')?；衔?1的制備4美條(240mg,10mmol)和千溴(1.7g,10mmol)溶于15mL無水乙醚中，氬氣保護，等劇烈反應(yīng)停止后，繼續(xù)回流2小時。反應(yīng)液冷卻到0。C,分批緩慢加入小檗堿(370mg，l.Ommol),招t去冰浴，室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)溶液注入冰水(20mL)中，以2mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值為5，乙醚/水分配。用濃氨水調(diào)節(jié)水相的pH值為11~12，用氯仿萃取(20mLx3)，無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，所得油狀物在乙醚中重結(jié)晶，得到化合物21(280mg，59%)。化合物21,C27H25N04，MW:427;黃色粉晶，易溶于氯仿和丙酮。'HNMR(300MHz,CDC13)，58.80(1H，s，H-l)，8.53(1H，(!，/=8.7Hz，H-ll),7.39(1H,d,/=8.7Hz，H-12),7.08-7.34(6H，m),6.53(1H,s,H-13),6.00(2H，s,-OCH2(>),4.35(2H,t,J=6.0Hz,H-6)，3.95(3H，s，OMe),3.93(1H,m,H-8)，3.81(1H，m，H-l，/),3.43(3H，s，OMe)，2.75(3H,m，H-5和l，a);ESIMSm/z428.2([M+H]+)?；衔?2的制備小檗堿(370mg，l.Ommol)溶于10mL乙醇(分析純)中，氬氣保護，加入1.5g乙醇鈉，室溫攪拌反應(yīng)過夜。減壓濃縮除去溶劑，加入10mL水(用氫氧化鈉堿化處理過)，用乙酸乙酯萃取(IOmLx3),無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，所得黃色粉末在甲醇中重結(jié)晶，得到針狀晶體22(94mg，27%)?；衔?2,C20H19NO5,MW:353;黃色針晶，易溶于氯仿和丙酮。'HNMR(300MHz,CDC13):57.16(1H,s，H-l)，6.97(1H，d，J=8.7Hz，H-ll),6.88(1H，d，/=:8.7Hz，H隱12),6.62(1H，s，H-4),6.10(1H,s,H-13),5.95(2H,s,-OCH20-)，5.64(1H，s，H-8),3.88(3H,s,OMe-9或10)，3.86(3H,s,OMe隱lO或9)，3.86(1H,m，H-6歷,3.72(1H,m，H-6a)，3.36(1H，m，H-5灼,2.76(1H,m，H-5a)?；衔?3的制備小檗堿(370mg,l.Ommol)溶于10mL曱醇(分析純)中，氬氣保護，加入1.5g甲醇鈉，室溫攪拌反應(yīng)過夜。減壓濃縮除去溶劑，加入10mL水(用氫氧化鈉^W匕處理過)，用乙酸乙酯萃取(10mLx3),無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，所得黃色粉末在曱醇中重結(jié)晶得到針狀晶體23(114mg,30%)?；衔?3,C21H21N05，MW:367;黃色針晶，易溶于氯仿和丙酮。'H畫R(300MHz,CDC13),57.17(1H，s,H-l),6.96(1H,d,/=8.7Hz,H-11),6.89(1H，d,8,7Hz，H-12),6.64(IH，s,H-4)，6.11(1H，s,H-8),6.03(IH，s，H-13),6.00(2H，s，-OCH20-)，3.88(3H，s，OMe-9或10)，3.86(3H,s,OMe-10或9),3.64(1H,m,H-6a)，3.52(1H,m,H-6歷,3.05(3H,s,OMe-8),2.89(2H,m,H-5)?；衔?4的制備金屬鈉(0.85g)緩慢加入到10mL無水乙醇中，加入完畢后，氬氣保護，加入小檗堿370mg(1.0mmo1)，室溫攪拌反應(yīng)過夜。減壓濃縮除去溶劑，加入IOmL水(用氫氧化鈉^/f匕處理過)，用乙酸乙酯萃取(IOmLx3),無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，所得黃色粉末在乙醇中重結(jié)晶，得到黃色針狀晶體24(130mg,34%)?；衔?4，C22H23N05,MW:381;黃色針晶，易溶于氯仿和丙酮。'H畫R(300MHz,CDC13),57.17(1H，s,H-l),6.95(1H,d，■/=8.7Hz，H-ll)，6.86(1H,d,■/=:8.7Hz，H國12)，6.63(1H,s,H-4)，6.13(1H，s,H-8),6.03(1H，s,H-13),6.01(2H，s，-OCH20-)，3.88(3H,s，OMe畫9或10)，3.85(3H,s,OMe-lO或9)，3.60(1H，m，H-6a),3.51(1H,m,H-6歷，3.25(2H，q,J=6.3Hz，H-l，)，2.87(2H，m，H-5)，1.00(3H，t，■/=6.3Hz，H-2')。化合物25的制備小檗堿(370mg,l.Ommol)溶于10mL氯仿(分析純)中，氬氣保護，加入0.5g氫化鈉，室溫攪拌反應(yīng)過夜。減壓濃縮除去溶劑，加入10mL水(用氫氧化鈉堿化處理過)，用乙酸乙酯萃取(IOmLx3)，無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，所得黃色粉末在曱醇中重結(jié)晶，得到黃色針狀晶體25(80mg，21%)?；衔?5,C21H18C13N04,MW:453;黃色針晶，易溶于氯仿和丙酮。NMR(300MHz,CDC13),57.16(1H,s，H-l)，6.97(1H，d,/=8.7Hz,H-ll),6.86(1H，d,/=:8.7Hz，H-12),6.61(1H,s,H-4)，6.10(1H,s,H-13),6.00(2H,s，-OCH20-)，5.64(1H，s,H-8)，3.94(3H，s,OMe-9或10)，3.88(3H,s，OMe-lO或9)，3.87(1H，m，H-6a)，3.70(1H，m，H-6歷,2.89(2H,m，H畫5)?；衔?6的制備小檗堿(1g)溶于5mol/L的NaOH水溶液(5mL)，在攪拌下逐滴加入丙酮(2ml)，在室溫下繼續(xù)反應(yīng)1小時。反應(yīng)混合物過濾，濾餅用甲醇洗滌，得黃色粉末固體26(780mg,78%)?；衔?6，C23H23N05，MW:393;黃色無定形粉末，易溶于氯仿和丙酮。'HNMR(300MHz,CDC13):57.13(1H，s,H-l),6.78(2H，m，H-ll和12),6.57(1H，s，H-4)，5.94(2H，s,-OCH20-)，5.89(1H,s,H-13),5.32(1H，dd,J=6.9，15.3Hz，H誦8)，3.85(6H,s，OMex2),3.32(2H，m,H-6)，3.06(1H，dd,3.9,6.9Hz，H-l，a)，2.81(2H,m，H-5),2.42(1H,dd,/=3.9，15.3Hz,H-l，/),2.04(3H，s，H-3')。化合物27的制備化合物2(480mg)溶于20mL無水四氬呋喃，緩慢加入四氪鋰鋁(120mg)室溫反應(yīng)3個小時，向反應(yīng)液中分別滴加水(0.1mL)、5N氬氧化鈉溶液(0.1mL)、水(0.9mL)，過濾。濾液減壓蒸干，殘留物在二氯曱烷曱醇中重結(jié)晶，得化合物27(300mg，61%)?；衔?7，C21H21N04，MW:351;黃色4分晶，易溶于氯仿和丙酮。NMR(300MHz,CDC13):57.17(1H,s，H-l),7.03(1H，d，</=8.4Hz，H-ll)，6.84(1H，d,/=8.4Hz,H-12),6.68(1H,s，H-4)，5.98(2H,s,-OCH20-)，4.33(2H，s，H-8)，3.86(6H，s，-OCH3)，3.13(2H，m,H-6)，2.83(2H，m,H-5)，2.78(3H,s，-CH3)?；衔?8的制備化合物3(490mg)溶于20mL無水四氬呋喃，緩慢加入四氪鋰鋁(120mg)室溫反應(yīng)3個小時，向反應(yīng)液中分別滴加水(0.1mL)、5N氫氧化鈉溶液(0.1mL)、水(0.9mL),過濾。濾液減壓蒸干，殘留物在二氯曱烷甲醇中重結(jié)晶，得化合物28(320mg，63%)?；衔?8，C22H23N(〕4，MW:365;黃色粉晶，易溶于氯仿和丙酮。畫R(300MHz,CDC13):57.19(1H，s，H-l)，7.09(1H,d，《/=8.4Hz,H-ll),6.77(1H，d,■/=8.4Hz，H-12),6.69(1H，s，H-4)，6.01(2H，s,-OCH20-)，4.23(2H，s,H-8),3,78(6H，s，-OCH3),3.13(2H，m，H-6),2.83(2H,m，H-5),2,78(2H，m，H-l，)，1.34(3H,t，《/=7.5Hz,H-2，)?；衔?9的制備鎂條(240mg，10mmol)和碘曱烷(1.40g，10mmol)溶于15mL無水乙醚中，氬氣保護，等劇烈反應(yīng)停止后，繼續(xù)回流2小時。反應(yīng)液冷卻到0。C，分批緩慢加入小檗堿(370mg，l.Ommol)，撤去冰浴，室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)溶液注入冰水(20mL)中，以2N鹽酸調(diào)節(jié)pH值為5，乙醚/水分配。水相冷卻，用濃氨水調(diào)節(jié)pH值為11~12，用氯仿萃取(20mLx3)，無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，所得油狀物在乙醚中重結(jié)晶，得到化合物29(245mg，610/0)。化合物29，C21H21N()4，MW:351;黃色粉晶，易溶于氯仿和丙酮。'HNMR(300MHz,CDC13):57.17(1H,s，H-l)，6.85(2H,m,H-ll和12),6.62(1H,s,H-4)，6.05(2H,s,-OCH20-)，5.94(1H,s,H-13),3.90(6H，s，OMex2)，3.37(2H,m,H國6),3.11(1H，t,/=6.0Hz，H-8)，2.86(2H，m,H-5)，1.31(3H，t，《/=7.0Hz，H-2,)。化合物30的制備鎂條(240mg，10mmol)和碘曱烷(1.40g,10mmol)溶于15mL無水乙醚中，氬氣保護，等劇烈反應(yīng)停止后，繼續(xù)回流2小時。反應(yīng)液冷卻到0。C，分批緩慢加入化合物2(480mg,1.0mmol)，撤去冰浴，室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)溶液注入水水(20mL)中，以2N鹽酸調(diào)節(jié)pH值為5，乙醚/水分配。水相冷卻，用濃氨水調(diào)節(jié)pH值為11~12，用氯仿萃取(20mLx3),無水〃琉酸鈉+燥有機相，減壓濃縮，所得油狀物在乙醚中重結(jié)晶，得到化合物30(232mg,43%)?；衔?0,C22H23N04,MW:365;黃色粉晶，易溶于氯仿和丙酮。麗R(300MHz，CDC13):57.09(1H,s，H-l),6.81(2H,m,H-ll和12)，6.52(1H,s,H-4),6.01(2H,s,-OCH20-)，3.73(6H,s,OMex2),3.21(2H，m，H-6),3.08(1H，m，H-8),2.86(2H，m，H-5)，1.83(3H，s，H-l，)，1.38(3H，d乂-6.3Hz,H-2')?；衔?1的制備鎂條(240mg,10mmol)和溴乙烷(1.08g,10mmol)溶于15mL無水乙醚中，氬氣保護，等劇烈反應(yīng)停止后，繼續(xù)回流2小時。反應(yīng)液冷卻到0。C,分批緩慢加入化合物3(490mg，1.0mmol),撤去水浴，室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)溶液注入水水(20mL)中，以2N鹽酸調(diào)節(jié)pH值為5,乙醚/水分配。水相冷卻，用濃氨水調(diào)節(jié)pH值為11~12，用氯仿萃取(20mLx3)，無水硫酸鈉+燥有機相，減壓濃縮，所得油狀物在乙醚中重結(jié)晶，得到化合物31(220mg,43%)?；衔?1，C24H27N04，MW:393;黃色粉晶，易溶于氯仿和丙酮。&NMR(300MHz,CDC13):57.07(1H,s,H隱l)，6.75(2H,m,H-ll和12)，6.51(1H,s，H誦4)，5.98(2H,s,-OCH20-)，3.85(6H,s,OMex2)，3.32(2H,m,H-6),3.06(1H,t，/=6.0Hz,H-8)，2.98(2H，m,H-3'),2.81(2H,m，H-5),1.72(2H,m,H-l，)，1.33(3H，t,J:6.0Hz，H國4，)，0.94(3H，t,7=6.3Hz,H-2')?；衔?2的制備化合物19(337mg,1.0mmol)和間苯三酚(504mg，4.0mmol)溶于10mL60。/。的硫酸溶液中(體積比)，加熱到80。C,回流反應(yīng)1小時。冷卻，用乙酸乙酯萃取，有機相干燥旋干。經(jīng)硅膠柱純化(CHC13:MeOH=10:1),得到化合物32(108mg，33%)?；衔?2，C19H19N04,MW:325;棕色粉末，易溶于氯仿和甲醇。畫R(300MHz,CDC13):".87(1H，s,H-l)，6.52(1H,s，H-4)，6.75(1H，d，《/=8.1Hz，H-ll),6.47(1H，d，J=8.1Hz,H-12),5.88(1H,s,H-13),4.27(2H,s，H腦8)，3.76(6H，s，-OCH3)，3.01(2H,t，/=6.3Hz,H-6)2.54(2H，6.3Hz，H-5)?；衔?3的制備化合物14(321mg,1.0mmol)和間苯三酚(504mg，4.0mmol)溶于10mL60。/。的硫酸溶液中(體積比)，加熱到80。C,回流反應(yīng)1小時。冷卻，用乙酸乙酯萃取，有機相干燥旋干。經(jīng)硅膠柱純化((:11(:13^601{=10:1)，得到化合物33(98mg，31%)?；衔?3,C18H17N()4,MW:311;棕色粉末，易溶于氯仿和甲醇。NMR(300MHz,CDC13):".92(1H,s,H-l),6.57(1H，s，H-4)，6.70(1H,d，/=8.0Hz,H-ll)，6.41(1H，d,8.0Hz,H-12)，5.83(1H，s，H-13),4.33(2H,s，H-8)，3.87(3H,s，-OCH3),3.11(2H,t,J=6.3Hz，H-6)，2.33(2H，!;,7=6.3Hz,H-5)?；衔?4的制備化合物29(351mg,1.0mmol)和間苯三酚(504mg,4.0mmol)溶于10mL60%的硫酸溶液中(體積比)，加熱到80°C,回流反應(yīng)1小時。冷卻，用乙酸乙酯萃取，有機相干燥旋干。經(jīng)硅膠柱純化(CHCl3:MeOH=10:1),得到化合物34(103mg，32。/。)?；衔?4,C20H21NO4，MW:339;棕色粉末，易溶于氯仿和曱醇。'H畫R(300MHz,CDC13):".78(1H，s，H-l)，6.47(1H，s，H-4),6.31(IH，8.0Hz，H-11),6.23(IH，8.0Hz,H-12),4.37(2H，s，H-8),3.73(6H，s,-OCH3)，3.11(2H,t，/=6.3Hz，H-6)，2.43(2H,t，J=6.3Hz，H-5),1.79(3H,s，-CH3)?；衔?5的制備化合物27(351mg，1.0mmol)和間苯三酚(504mg，4.0mmol)溶于10mL60。/。的硫酸溶液中(體積比)，加熱到80。C，回流反應(yīng)1小時。冷卻，用乙酸乙酯萃取，有機相干燥旋干。經(jīng)硅膠柱純化(CHCl3:MeOH:10:1),得到化合物35(107mg,330/。)?；衔?5，C2。H21N04,MW:339;棕黃色粉末，易溶于氯仿和曱醇。畫R(300MHz,CDC13):56.77(1H,s，H-l),6.45(1H,s，H-4),6.29(1H,d,8.0Hz,H-ll)，6.21(1H，d,/=8.0Hz，H-12),4.51(2H,s，H-8),3.71(6H,s,-OCH3),3.13(2H，t，■/=6.3Hz，H-6),2.41(2H,t，J=6.3Hz,H-5)，1.34(3H，s，-CH3)?；衔?6的制備化合物30(365mg,1.0mmol)和間苯三酚(504mg,4.0mmol)溶于10mL60。/o的硫酸溶液中(體積比)，加熱到80。C，回流反應(yīng)1小時。冷卻，用乙酸乙酯萃取，有機相干燥旋干。經(jīng)硅膠柱純化(0^<:13:1^60^1=10:1)，得到化合物36(123mg，37%)?；衔?6，C21H23N04,MW:353;棕黃色粉末，易溶于氯仿和甲醇。'HNMR(300MHz,CDC13):".81(1H，s，H-l),6.55(1H，s,H-4),6.32(1H,d,/=8.0Hz,H-ll),6.22(1H,d，J=8.0Hz,H-12)，4.43(2H,s，H-8),3.70(6H，s，-OCH3),3.34(2H，t，/=6.3Hz，H-6)，2.58(2H，t,/=6.3Hz，H-5)，1.79(3H,s，-CH3),1.35(3H,s，-CH3)。化合物37的制備化合物32(325mg)il;于1mL吡。定和1mL乙酸酐的混合溶液中，室溫攪拌反應(yīng)過夜。咸壓濃縮移除溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱(CHC13/CH30H=20:1)層析純化，得到化合物37(132mg,37%)?；衔?7,C23H23N06，MW:409;棕黃色4分末，易溶于氯仿和曱醇。'H畫R(300MHz,CDC13):57.15(1H，s，H-l)，6.77(1H,d，《/=8.1Hz，H-ll),6.52(1H，s,H-4)，6.47(1H，d，《/=8.1Hz，H-12)，5.93(1H，s，H-13),4.42(2H，s，H-8),3.34(6H,s,-OCH3),3.13(2H，t,J=6.3Hz，H醫(yī)6):2.87(2H,t，/=6.3Hz,H-5>，2.08(6H，s，-OCOCH3)?；衔?8的制備2，3，9，10-四羥基二氫巴馬汀(297mg)溶于1mL吡啶和1mL乙酸酐的混合溶液中，室溫攪拌反應(yīng)過夜。加入飽和碳酸氬鈉溶液中和，用乙酸乙酯分配，有機相減壓濃縮。殘留物經(jīng)硅膠柱(CHCl3/CH30H=25:1)層析純化，得到化合物38(108mg,31%)?；衔?8,C23H23N06,MW:409;棕黃色粉末，易溶于氯仿和曱醇。麗R(300MHz,CDC13):57.21(1H，s,H-l)，6.79(1H,(!，■/=8.1Hz，H-11),6.55(1H,s,H-4)，6.47(1H,d,J=8.1Hz,H-12),5.91(1H，s，H-13),4.51(2H，s，H-8),3.17(2H,t，/=6.3Hz，H-6),2.84(2H,t，■/=6.3Hz,H-5)，2.08(6H，s，-OC()CH3)，2.06(6H,s,-OCOCH3)。化合物39的制備鹽酸巴馬汀(390mg，.Ommol)溶于10mL無水四氬吹喃中。加入190mgLiAlH4(5.0mmol:l,室溫攪拌反應(yīng)2小時。反應(yīng)完畢后，減壓濃縮除去反應(yīng)溶劑，加入0.2mL水，0.2mL30%氪氧化鈉溶液，再加0.6mL水，反應(yīng)液》文置過濾，濾液用乙酸乙酯萃取(IOmLx3),無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，經(jīng)硅膠柱(CHCVCH30H=50:l持續(xù)洗脫至化合物不再流下為止)層析純化，得到化合物39(253mg，67%)。化合物39，C21H23N04，MW:353;黃色無定形粉末，易溶于氯仿和丙酮。麗R(300MHz,CDC13),57.21(1H,s,H-l)，7.08(1H,d，J=8.4Hz,H陽12)，6.91(1H,d，/=:8.4Hz,H-ll),6.67(IH，s，H-4)，5.76(1H,s，H-13),4.33(2H,s，H-8)，3.90(6H，s,-OMex2),3.86(3H，s，-OMe),3.83(3H,s，-OMe)，3.18(2H，t,./=7.5Hz，H-6),2.91(2H，7.5Hz，H-5)?；衔?0的制備鹽酸巴馬汀(415mg，1.0mmol)溶于10mL無水四氫呋喃中。加入190mgLiAlH4(5.0mmol),室溫攪拌反應(yīng)2小時。反應(yīng)完畢后，減壓濃縮除去反應(yīng);容劑，力口入0.2mL7K,0.2mL30%氫氧化鈉;容液，再力口0.6mL水，反應(yīng)液放置過濾，濾液用乙酸乙酯萃取(10mLx3),無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，經(jīng)硅膠柱(CHCl3/CH30H=50:l持續(xù)洗脫至化合物不再流下為止)層析純化，得到化合物40(223mg，61%)?；衔?0,C23H27N04,MW:381;黃色無定形粉末，易溶于氯仿和丙酮。'H畫R(300MHz，CDC13)，57.17(1H，s，H-1)，7.03(1H，d，/=8.4Hz,H-12)，6.84(1H,d,/=8.4Hz，H-11),6.68(IH,s，H-4)，4.27(2H,s，H-8)，3.92(3H，s，-OMe)，3.91(3H，s,-OMe)，3.88(3H，s，-OMe)，3.85(3H，s,-OMe),3.08(2H,m,H-6),2.81(4H，m，H-5和l，)，1.34(3H,t,/=7.5Hz,H-2，)。化合物41的制備鹽酸黃連石咸(355mg,〗.0mmol)溶于10mL無水四氫呋喃中。加入190mgLiAlH4(5.0mmol),室溫攪拌反應(yīng)2小時。反應(yīng)完畢后，減壓濃縮除去反應(yīng)溶劑，加入0.2mL水，0.2mL30。/。氫氧化鈉溶液，再加0.6mL7jc，反應(yīng)液放置過濾，濾液用乙酸乙酯萃取(IOmLx3),無水硫酸鈉干燥有機相，減壓濃縮，經(jīng)硅膠柱(CHCl3/CH30H=50:1持續(xù)洗脫至化合物不再流下為止)層析純化，得到化合物41(223mg,61%)。化合物41,C19H15N04，MW:321;黃色無定形粉末，易溶于氯仿和丙酮。畫R(300MHz，CDC13)，57.13(IH,s,H-l)，7.02(1H，d，/=8.4Hz，H-12)，6.83(1H，d，8.4Hz，H-11),6.64(IH,s，H-4)，5.98(2H,s，-OCH20-)，5.96(2H，s,-OCH20-)，4.23(2H，s，H-8)，3.11(2H,t,J=7.5Hz，H-6),2.81(2H，t,7.5Hz，H-5)。試驗實施例試驗實施例1:應(yīng)用L6肌肉細(xì)胞葡萄糖攝取模型，在體外初步評價本發(fā)明部分化合物對葡萄糖吸收的促進作用。實驗步驟培養(yǎng)在24孔板中完全分化的L6肌肉細(xì)胞用lxPBS洗一次后，在含有0.2%BSA的高糖DMEM培養(yǎng)基中饑餓2小時，用含有5pM本發(fā)明的二氫小檗堿衍生物，0.2%BSA的高糖DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)孵育2.5小時。用含有5jiM二氫小檗堿衍生物的HBS溶液洗2次后，在5二氫小檗堿衍生物的HBS溶液中繼續(xù)孵育0.5小時。向HBS溶液中加入『3H]同位素標(biāo)記的2-脫氧葡萄糖(以HBS或KRP溶解為濃度1mM,5^Ci/mL臨時工作液)，使其終濃度為100^M，同位素0.5^Ci/mL。在37。C孵育10min。迅速吸去纟田胞卵孚育液，將纟田胞置于冰上，用冰冷PBS迅速洗3次。在42。C烘箱內(nèi)烘干。加入200(iL0.1%TritonX-100,4'C溫和振蕩45min裂解細(xì)胞。取150^iL裂解液，加入1.1mL閃爍液閃爍計數(shù)。取10裂解液稀釋10倍以Bradford法測蛋白濃度。最終結(jié)果以皮摩爾/分鐘/毫克蛋白質(zhì)表示。評判標(biāo)準(zhǔn)待測化合物溶于DMSO中，濃度5nM時，如果計算所得的葡萄糖攝取量比DMSO空白對照有提高，并且兩組數(shù)據(jù)在統(tǒng)計學(xué)上存在顯著性差異，則說明該化合物有促進葡萄糖吸收的效應(yīng)。測試結(jié)果圖1顯示了在L6肌肉細(xì)胞葡萄糖攝取模型中葡萄糖濃度為5.0mM時，本發(fā)明的部分化合物在濃度5|tiM時對葡萄糖轉(zhuǎn)運的促進效果，其中DMSO為空白對照，BBR為小檗堿。細(xì)胞水平上的篩選已發(fā)現(xiàn)數(shù)個化合物的促進葡萄糖吸收的活性強于小檗堿?；诤铣呻y易程度，我們選擇了二氫小檗堿衍生物19及其硫酸鹽進行了整體動物的藥效學(xué)試驗。試驗實施例2:評價本發(fā)明化合物的體內(nèi)抗糖尿病活性。實驗步驟采用正常的雄性C57BL/6J小鼠，經(jīng)高脂食物喂養(yǎng)10周形成明顯的胰島素抵抗癥狀，對葡萄糖耐受能力明顯下降。取造模成功的小鼠10只用于化合物藥效學(xué)評價。將二氫小檗堿衍生物19或它的^5危酸鹽攪拌在高脂食物中(劑量為100mg/kg/day)給予2周治療，饑餓過夜后，從尾靜脈取血測定基礎(chǔ)血糖值(O分鐘)，然后根據(jù)正常食物喂養(yǎng)的對照組體重給予腹腔注射葡萄糖2g/kg，分別在15、30、45、60、90和120分鐘測定血糖值，并計算其曲線下面積AUC;稱其體重、內(nèi)臟脂肪和測量小鼠血漿中的脂肪酸和甘油三酯含量。實驗結(jié)果圖24中，CH-con為正常小鼠，HF-con為肥胖小鼠，HF-BBR19為經(jīng)二氫小檗堿衍生物19治療2周后的肥胖小鼠，HF-BBR19Y為經(jīng)二氫小檗堿衍生物19硫酸鹽治療2周后的肥胖小鼠。圖2為顯示小鼠腹腔注射葡萄糖耐受(ipGTT)曲線和曲線下面積的圖。二氫小檗堿衍生物19或其硫酸鹽和對照組治療2周后，通過腹腔注射給予饑餓過夜的小鼠2g/kg的葡萄糖，分別在0、15、30、45、60、90和120分鐘測定其血糖值，并計算其曲線下面積AUC(*,P<0.05;**，P<0.01)。由圖2可知，經(jīng)二氫小檗堿衍生物19或其硫酸鹽治療肥胖小鼠2周后，發(fā)現(xiàn)肥胖d、鼠對葡萄糖的耐受能力明顯改善。圖3為經(jīng)二氫小檗堿衍生物19或其硫酸鹽治療2周后肥胖小鼠體重增長和內(nèi)臟脂肪/體重比例圖(,PO.05;**，P<0.01)。由圖3可知，經(jīng)二氫小檗堿衍生物19或它的硫酸鹽治療2周后的小鼠，其體重增加明顯小于對照組。而且腹部內(nèi)臟脂肪在體重中的比例與對照組相比呈顯著性下降。說明本發(fā)明的化合物具有抵抗小鼠由高脂食物誘導(dǎo)的體重增長和脂肪堆積趨勢，具有潛在的治療肥胖功效。圖4為經(jīng)二氫小檗堿衍生物19或其硫酸鹽治療2周后肥胖小鼠的血漿中的自由脂肪酸(NEFA)和甘油三酯(TG)含量變化圖(、PO.05;**,PO.Ol)。由圖4可知，經(jīng)二氫小檗堿衍生物19或其硫酸鹽慢性治療2周后的小鼠，其血漿中的自由脂肪酸NEFA(HF-ConvsHF-19，0.76±0.03mmo1/1vs0.6±0.05mmol/l)和甘油三酯TG含量(HF-ConvsHF-19,1.20±0.05mmol/lvs0.86±0.08mmol/l)都明顯下降。實驗結(jié)論在高脂飼養(yǎng)誘導(dǎo)的胰島素抵抗及肥胖小鼠模型上，二氫小檗堿衍生物19和它的硫酸鹽具有明顯療效改善糖耐量和胰島素抵抗、減輕肥胖及降低血漿中的自由脂肪酸和甘油三酯、緩解脂肪肝。權(quán)利要求1、具有下式1所示結(jié)構(gòu)的13，13a-二氫小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽其中，代表雙鍵或單鍵；R1、R2各自獨立地為H、OH、C1-C4烷氧基或C1-C4酰氧基，或R1、R2連接成為-O-CH2-O-；R3為H、OH、C1-C4烷氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或芳香基；R4、R5各自獨立地為H、OH、C1-C4烷氧基或C1-C4酰氧基，或R4、R5連接成為-O-CH2-O-；R6為H、OH、C1-C4烷氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或芳香基。2、如權(quán)利要求1所述的13，13a-二氫小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽，其特征在于，所述化合物具有以下式241中之一所示的結(jié)構(gòu)，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>40413、包含治療有效劑量的權(quán)利要求1所述的13,13a-二氫小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽的藥物組合物。4、權(quán)利要求1所迷13，13a-二氬小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽在制備用于治療由胰島素抵抗引起的糖尿病、肥胖癥、脂肪肝及其并發(fā)癥的藥物中的用途。5、權(quán)利要求3所述的藥物組合物在制備用于治療由胰島素抵抗引起的糖尿病、肥胖癥、脂肪肝及其并發(fā)癥的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明提供了一類具有右式所示結(jié)構(gòu)的13，13a-二氫小檗堿衍生物或其生理上可接受的鹽、其用途以及包括該衍生物的藥物組合物。所述13，13a-二氫小檗堿衍生物對肌肉細(xì)胞有促進葡萄糖吸收的作用，整體動物試驗表明該類化合物具有改善糖耐量和胰島素抵抗、減輕肥胖、緩解脂肪肝等功效。該類化合物可用于治療由胰島素抵抗引起的糖尿病、肥胖癥、脂肪肝及其并發(fā)癥。文檔編號C07D455/03GK101153039SQ200610140429公開日2008年4月2日申請日期2006年9月30日優(yōu)先權(quán)日2006年9月30日發(fā)明者葉冀明,戴維·E·詹姆斯,佳李,李靜雅,愛德華·W·克如艾根,哲程,章涵堃,胡立宏申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所;伽文醫(yī)學(xué)研究所