專利名稱：：急性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤特異的cd43表位及其用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種人急性白血病和'淋巴母細胞性淋巴瘤細胞上表達的CD43表位及其用途。具體而言，本發(fā)明涉及一種在人急性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤細胞上表達、但不在成熟造血細胞和造血干細胞上表達的CD43表位，還涉及它在急性白血病和、淋巴母細胞性、淋巴瘤細胞的診斷和治療上的用途。
背景技術：
：CD43分子也被稱為涎福林或白涎蛋白，它是一種在除紅細胞外的大多數(shù)造血細胞中表達的細胞表面分子。人CD43具有粘蛋白樣的胞外域(235個氨基酸(aa))、跨膜域(23個aa)和胞質(zhì)內(nèi)域(123個aa)，三者均由一個外顯子編碼(Pallantetal.,ProcNailAcadSciUSA.1989，86:1328-32;Shelleyetal.，ProcNatlAcadSciUSA1989，86:2819-23)。人CD43的胞外域富含氨基酸絲氨酸(46個殘基)和蘇氨酸(47個殘基)，它們大部分攜帶大約80個O-連接的糖鏈。另外，CD43攜帶1個N-連接的糖鏈。這些O-聚糖的結(jié)構(gòu)在不同類型的細胞之間不同(Carlsson"fl/.，C7^附.1986，261:12787-95)。CD43基因由被一個378bp的內(nèi)含子分開的兩個外顯子組成，藉此，整個翻譯產(chǎn)物由第二個外顯子編碼(Shelleyetal.，肌oc/^附丄1990，270:569-76)。CD43已經(jīng)被認為是限于除紅細胞外的大部分白細胞、血小板和造血干細胞的特異性白細胞型標記(Remold-O'DonnellWfl/.，1987，70:104-9;Fukuda，Glycobiology.1991，1:347-56)。然而，已經(jīng)證明CD43在非造血源的人肺瘤細胞中表達，所述人腫瘤細胞為例如人宮頸癌細胞系(CaSKI)、人肺癌細胞系(A549)、人乳腺癌細胞系(MCF7)、人纖維肉瘤細胞系(HT108Q)和人結(jié)腸腺癌細胞系(COLO205、HT29、Caco國2、DLD國1和SW480)(Fernandez-Rodriguez"a/"rwmo"r祝o/.2002，23:193-201)。CD43還在人結(jié)腸癌組織中表達(SikutCa/，/Cflw亂1999，82:52-8;Jung"/，/尸fl麵，38:8-14)。生物合成研究表明，具有大約40kDa的預測大小(包括一個N-聚糖)的CD43前體在電泳時在54kDa的分子量處形成明顯遷移條帶。該前體隨后被轉(zhuǎn)化為一個成熟的糖基化分子，其分子量由于不同的糖基化作用而從115kDa到最高至200kDa以上不等。胸腺細胞、CD4+T淋巴細胞和單核細胞主要表達115kDa的同種型，而130kDa的形式大部分在激活的CD4+T細胞、CD8，靜息細胞和激活T細胞、嗜中性并立細胞、血小板和B細月包上存在(Rosensteinetal"ImmunolRes.1999，20:89-99)。在同一細胞的表面似乎可以有多于一種的同種型共表達。被嚴格調(diào)節(jié)的翻譯后O糖基化模式產(chǎn)生了在不同細胞類型中差異表達的這些特征性分子量同種型。特別地，核心2P-1,6-7V-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶(C2GnT)的表達使得130kDaCD43同種型在胸腺細胞和T細胞中表達(Pilleretal"JBiolChem.1988，263:15146-50)。直到最近，多于17種的抗-人CD43抗體已經(jīng)被報道。這些抗體大部分與胞外域上的糖表位作用，并且所有已知的抗-CD43抗體檢測到在成熟造血細胞上表達的CD43蛋白質(zhì)(表l)。因此，它們對檢測或消除白血病或淋巴瘤細胞是無效的。表1抗-CD4抗體CD43-陽性細胞CD43-陰性細胞表位*參考文獻激活的CD4+T細胞、CD8+T細胞、胸腺細^立細胞、T305胞、骨髓中的髓細胞核心-21,2,紅細胞、血小板前體<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*1.Foxeta!"http://附附wwc;/.1983，131:762-7;2.Saitohetal.，1991,77:1491-9;3.Remold-O'Do腿lletal"1987，70:104-9;4.Borcheetal"￡^尸J/畫畫/.1987，17:1523-6;5.Stefa,aetal"F函腸/1988，34:255-65;6.Alvaradoetal"http://附m""o/.1995，25:1051-5;7.Strossetal，/C7/w尸fl,/io/.1989，42:953-61;8.Horejsietal"1997，JK/s/"'/wo勿T'Wfl/，_Le"cocj^eT);/7/wg，PW.1^7:附"eO//Z)斷尸eWfl"卯JAi紐ew51Garland,NewYorkandLondon;9.Tkaczuketal.，7Y^Me1999，54:1-15;10.Sikutetal"/CVmc".1999，82:52-8;11.Mukasaetal，J/"/畫畫/.1999,11:259-68.
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤相關的CD43表位，其中該表位在人急性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤細胞上表達，但不在成熟的造血細胞和造血干細胞上表達。因此，本發(fā)明提供一種CD43表位的分離的多肽，包括SEQIDNO:1的氨基酸序列。本發(fā)明的另一個目的是提供識別CD43表位的物質(zhì)。優(yōu)選地，本發(fā)明提供一種與包括SEQIDNO:1氨基酸序列的CD43表位特異性結(jié)合的抗體或其片段。本發(fā)明的第三個目的是提供一種產(chǎn)生識別CD43表位的物質(zhì)的方法。本發(fā)明的第四個目的是提供用于急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤診斷的物質(zhì)。本發(fā)明的第五個目的是提供一種對急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤進行診斷的方法。因此，本發(fā)明提供一種診斷急性白血病的方法，包括將生物樣品中的白血病細胞與抗-CD43表位抗體一起孵育，并檢測對抗-CD43表位抗體的陽性反應。本發(fā)明提供一種診斷具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病的方法，包括將生物樣品中的白血病細胞與抗-CD43表位抗體一起孵育，并檢測對抗-CD43表位抗體的陽性反應。本發(fā)明提供一種診斷淋巴母細胞性淋巴瘤的方法，包括將生物樣品中的淋巴瘤細胞與權(quán)利要求6的抗-CD43表位抗體一起孵育，并檢測對抗-CD43表位抗體的陽性反應。本發(fā)明的第六個目的是提供一種能殺死急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤的腫瘤細胞的藥物組合物。本發(fā)明的第七個目的是提供一種通過應用本發(fā)明的診斷物質(zhì)進行-診斷的方法。另外，本發(fā)明提供一種應用本發(fā)明的治療物質(zhì)進行治療的方法。通過在與附圖一起考慮時參照下面的詳細描述，本發(fā)明可得到更好的理解，從而對本發(fā)明更為完整的理解及與之相伴的許多優(yōu)點可容易地顯而易見，其中圖1是通過雜交瘤克隆的上清液進行的、胸腺的免疫組織化學染色的照片，所述雜交瘤克隆產(chǎn)生特異性針對CD43表位的EB-1單克隆抗體。圖2是EB-1單克隆抗體在人胸腺細胞表面的反應性的三色流式細胞術照片。圖3是EB-1單克隆抗體在人外周血白細胞和臍帶血造血干細胞表面的反應性的三色流式細胞術照片。圖4是EB-1單克隆抗體在人骨髓細胞表面的反應性的三色流式細胞術照片。圖5是BB-1單克隆抗體在人CD43轉(zhuǎn)染的29T細胞系表面的反應性的單色流式細胞術照片。圖6是用或者不用唾液酸酶處理時EB-1單克隆抗體在人Molt-4細胞系表面的反應性的單色流式細胞術照片。圖7是用或者不用唾液酸酶處理時，人胸腺細胞和Molt-4細胞系的細胞溶胞產(chǎn)物在SDA-PAGE分析后、經(jīng)EB-1單克隆抗體免疫印跡的照片。圖8是11種類型的CD43缺失突變體示意圖。圖9是11種類型的CD43缺失突變體的SDA-PAGE分析后、用EB-1單克隆抗體和抗-GST多克隆抗體進行的免疫印跡的照片。圖10是EB-1單克隆抗體在人白血病細胞表面的反應性的單色流式細胞術照片。圖11是用EB-1單克隆抗體對淋巴母細胞性淋巴瘤組織進行免疫組織化學染色的照片。圖12是EB-1單克隆抗體和抗-人I類MHC單克隆抗體在RAG-1缺陷型小鼠的外周血中的白血病細胞表面的反應性的雙色流式細胞術照片，所述RAG-1缺陷型小鼠通過靜脈內(nèi)途徑注射CCRF-CEM細胞并用EB-1或?qū)φ湛贵w處理。圖13是用CD43表位免疫小鼠產(chǎn)生的兩種其他抗-CD43抗體(EB-2和EB-3)在CD43轉(zhuǎn)染的ETA細胞系、人胸腺細胞、人外周血白細胞和人白血病樣品的表面的反應性的單色流式細胞術照片。圖14是5種類型的CD43缺失型突變體的SDA-PAGE分析后的、用EB-2和EB-3單克隆抗體進行免疫印跡的照片。具體實施例方式本發(fā)明提供一種在急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤的腫瘤細胞上表達、但不在成熟的造血細胞和造血干細胞上表達的CD43表位。本發(fā)明的CD43優(yōu)選為人CD43,其序列已經(jīng)^皮提交到NCBIGenBank,登記號為No.M61827。CD43表位是任何包括SEQIDNO:1氨基酸序列(下文中，EP6)并且更優(yōu)選包括SEQIDNO:2氨基酸序列(下文中，EP9)的多肽。EP6:ProLeuTipThrSerIk(SEQIDNO:1)EP9:GluGlySerProLeuTipThrSerHe(SEQIDNO:2)。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供一個長度小于200個氨基酸、更優(yōu)選長度小于100個氨基酸、更優(yōu)選長度小于50個氨基酸的多肽，包含SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的氨基酸序列。本發(fā)明也提供了基本上由SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的氨基酸序列組成的多肽。本發(fā)明也提供了由SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的氨基酸序列組成的多肽。該CD43表位(EP6和EP9)可以從人組織純化、通過化學合成或者由生物技術產(chǎn)生。而且，本發(fā)明提供了識別本發(fā)明的CD43表位的物質(zhì)。該物質(zhì)選自抗體、其片段和配體，并且所述抗體優(yōu)選地選自單克隆抗體和多克隆抗體，更優(yōu)選地，抗體來源于人和動物。所述抗體包括含抗原識別區(qū)域(l&和V￡)的抗體的一部分，因此具有優(yōu)先識別抗原的能力。另外，它也包括抗體片段，例如F(ab')2、Fab和Fv。優(yōu)選地，抗體片段(Fv)包含抗體的單鏈多肽片段(被稱為單鏈Fv)，它通過在Fw和^兩個多肽之間插入增加熱穩(wěn)定性的連接肽制備得到。本發(fā)明進一步提供了識別本發(fā)明的CD43表位的嵌合抗體。本文使用的術語"嵌合抗體"是指這樣一種抗體其中來源于一個物種的抗體的可變區(qū)與來源于另外一個物種的抗體的恒定區(qū)結(jié)合，或者是指CDR移植抗體。嵌合抗體通過重組DNA才支術構(gòu)建，例如Shaw，etal.,J.Immun.，138:4534(1987)，Sun，LK.，etal"Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84:214-218(1987)中對嵌合抗體有所描述。其他已知的技術可以被用來產(chǎn)生CDR移植抗體和嵌合抗體。"CDR"或"互補決定區(qū)"或"高變區(qū)"被定義為抗體的輕鏈和重鏈上的這樣一種氨基酸序列，所述氨基酸序列形成有助于形成抗原結(jié)合位點的三維的環(huán)結(jié)構(gòu)。本文使用的術語"CDR移植"抗體是指具有這樣一段氨基酸序列的抗體其中在輕鏈和/或可變域中的一個或多個CDR序列的至少一部分^f皮來自一種抗體的CDR序列的類似部分取^，所述抗體對給定的抗原或受體具有一種不同的結(jié)合特異性。術語"輕鏈可變區(qū)"和"重鏈可變區(qū)"分別指輕鏈和重鏈的N-末端部分的區(qū)域或結(jié)構(gòu)域，對于每種抗體，它們具有各不相同的一級氨基酸序列。抗體的可變區(qū)由輕鏈和重鏈的氨基末端結(jié)構(gòu)域組成，它們折疊在一起形成抗體的三維結(jié)合位點。據(jù)報道，類似的CDR序列是被"移植"到底物或受體抗體上。"供體"抗體是提供CDR序列的抗體，接受置換序列的抗體是"底物"抗體。用這里提供的教導并結(jié)合本領域已知的方法(見Borrebaeck，C.A.，AntibodyEngineering:APracticalGuide,W.H.FreemanandCompany,NewYork,1992，通過引用納入)，本領域的技術人員可以容易地產(chǎn)生這些CDR移植抗體。本發(fā)明還提供識別本發(fā)明的CD43表位的人源化抗體。本文使用的術語"人源化抗體"是指包含非人類(例如鼠類)抗體和人抗體的序列的抗體形式。這些抗體是包含來自非人類免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。通常，人源化抗體可包括至少一個可變區(qū)、通常兩個可變域的幾乎全部，其中所有的或幾乎所有的高變環(huán)與非類人免疫球蛋白的高變區(qū)對應，并且所有的或幾乎所有的FR區(qū)域為人免疫球蛋白序列的FR區(qū)域。任選地，人源化抗體也可以包括免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)的至少一部分，通常包括人免疫球蛋白恒定區(qū)的至少一部分。參見例如美國專利4，816，567(Cabilly);Queenetal.(1989)Proc.Nat'lAcad.Sci.USA86:10029-10033;和ANTIBODYENGINEERING:APRACTICALAPPROACH(OxfordUniversityPress1996)。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，抗體與由SEQIDNO:l中顯示的氨基酸序列組成的肽相結(jié)合?？贵w或其片段可以進一步包括選自放射性同位素、毒素、熒光物質(zhì)和染色物質(zhì)的標記物質(zhì)。熒光物質(zhì)的實例有熒光素-5-異硫氰酸(FITC)、藻紅蛋白(PE)、別藻藍蛋白(APC)和生物素，但是不局限于這些?？贵w或其片段可以進一步包括選自放射性同位素、毒性化學物質(zhì)、毒性蛋白質(zhì)和抗腫瘤劑的毒性物質(zhì)。抗體或其片段與毒性蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生融合蛋白。毒性蛋白質(zhì)的實例包括蓖麻毒蛋白、皂草毒蛋白、多花白樹毒蛋白、苦瓜毒蛋白、白喉類毒素和假單胞菌毒素，但是不局限于這些。本發(fā)明也提供產(chǎn)生該物質(zhì)的一種方法，并且提供產(chǎn)生該抗體的細胞。產(chǎn)生該抗體或其片段的方法包括如下步驟(a)用包含CD43表位的多肽、蛋白質(zhì)或者蛋白質(zhì)片段或表達CD43表位的細胞免疫動物，(b)從該免疫的動物提取脾細胞，(c)將脾細胞與骨髓瘤細胞融合，并(d)篩選產(chǎn)生針對CD43表位的抗體的雜交瘤細胞。該物質(zhì)可以通過體外培養(yǎng)或?qū)a(chǎn)生該物質(zhì)的細胞注射到動物中獲得。該物質(zhì)可以從腹膜內(nèi)注射產(chǎn)生該物質(zhì)的細胞的動物的腹水中獲得。該物質(zhì)可以通過離子交換色諳或親和柱色譜從培養(yǎng)上清液或腹水中純化。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種治療急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性、淋巴瘤的藥物組合物，包括抗CD43表位抗體或其片段和可藥用載體。根據(jù)本發(fā)明的抗體或其片段的給藥可以使用藥物組合物的任何可接受的給藥模式進行。因此，給藥例如可以是，抗原識別物質(zhì)可以以固體、半固體、凍干粉劑的形式，或者以液體劑型，例如片劑、栓劑、丸劑、軟彈性明膠膠嚢和硬明膠膠嚢、粉劑、溶液、懸浮液、或氣霧劑等等，優(yōu)選以適合精確劑量的簡單給藥的單位劑型，口服給予或更優(yōu)選通過腸胃外途徑給予患者。該藥物組合物通常包括常規(guī)的藥物載體或賦形劑和作為活性藥劑(或其中一種活性藥劑)的本發(fā)明的抗體，并且另外可以包括其他醫(yī)學試劑、藥用試劑、載體、佐劑、稀釋劑、運載體或它們的組合。這些可藥用的賦形劑、載體或添加劑以及用于各種給藥模式的藥物組合物的制備方法是本領域的技術人員所熟知的?；钚越M分的合適劑量可以基于受試者的狀況選擇，例如每天從3mg到6,000mg。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種使用抗體或其片段治療急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤的方法，所述抗體或其片段選自抗體、抗體片段、單鏈多肽抗體片段和配體。該抗體或抗體片段優(yōu)選選自單克隆抗體和多克隆抗體，并且更優(yōu)選地，它來源于人和動物。優(yōu)選地，該抗體或其片段進一步包括選自放射性同位素、毒性化學物質(zhì)、毒性蛋白和抗腫瘤劑的毒性物質(zhì)。而且，本發(fā)明提供了一種使用抗體或其片段進行急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤診斷的方法。該方法包括如下步驟(a)將抗體或其片段與生物樣品中的細胞一起孵育，并(b)檢測顯示出針對該抗體的陽性反應的樣品。腫瘤優(yōu)選為急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病或淋巴母細胞性淋巴瘤。另外，本發(fā)明提供了一種利用該物質(zhì)的急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤的診斷試劑盒。除了該物質(zhì)外，該診斷試劑盒可包括檢測抗原-抗體反應的方法。該檢測方法優(yōu)選地選自流式細胞術、免疫組織化學、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射性免疫測定(RIA)、酶免疫測定(EIA)、熒光免疫測定(FIA)和發(fā)光免疫測定(LIA)。該檢測方法包括標記物質(zhì)，選自酶(例如辣根過氧化物酶(HRP))、熒光物質(zhì)(例如FITC)、發(fā)光物質(zhì)(例如魯米諾、異氨基苯二酰肼和光澤精)和同位素(例如1251、3H、14C和1311)，但是并不認為以任何方式僅限于這些。抗原識別物質(zhì)的反應性可以利用檢測酶反應、熒光、發(fā)光或輻射的裝置確定。該診斷試劑盒可以被做成包含抗體或其片段的流式細胞術試劑盒、免疫組織化學試劑盒、ELISA試劑盒或條帶試劑盒(stripkit)。參考如下的實施例對本發(fā)明作進一步地更詳細地解釋。然而，這些實施例并不能以任何方式解釋為對本發(fā)明的范圍的限制。實施例1為了研究胸腺細胞上的特異性細胞表面蛋白質(zhì)，按照以下實施例，將人胸腺細胞給予至Balb/c小鼠體內(nèi)，以產(chǎn)生針對人胸腺細胞的抗體。107個人胸腺細胞經(jīng)腹膜內(nèi)給予至Balb/c小鼠并將其免疫，六周內(nèi)每兩周免疫一次。在最后一次給藥后3天取出該Balb/c小鼠的脾臟來制備脾細胞懸液。通過將人胸腺細胞免疫的Balb/c的脾細胞與對9-氮鳥噤呤具有抗性的SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞融合產(chǎn)生單克隆抗體。細月包融合方法參照Koeler和Milstein的方法(Koeler&MilsteiniVflZwre，1975，256，495-497)。用50%的聚乙二醇4000使108個脾細胞與107個骨髓瘤細胞融合。洗滌細胞并將其重新懸浮于DMEM(Dulbeco'smodifiedEagle'smedium)培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基含20%牛血清白蛋白、100(iM的次黃嘌呤、0.44nM氨基蝶呤和16nM脫氧胸腺嘧啶苷(HAT培養(yǎng)基)。將細胞接種到四個96-孔板上并且在37°0和5%C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。經(jīng)過兩周時間當集落形成后，制備上清液并且用免疫組織化學和流式細胞術觀察抗體的反應性。每孔含有105個以上細胞的孔被認為是陽性組。從含有高反應性抗體的孔中收集細胞，并且通過有限稀釋法以每個孔0.5個細胞進行亞克隆以產(chǎn)生具有高反應性抗體的穩(wěn)定的雜交瘤克隆。這個雜交瘤克隆分泌抗體至培養(yǎng)基中，存儲上清液為下一步備用。實施例2為了在實施例1產(chǎn)生的雜交瘤克隆中發(fā)現(xiàn)分泌可識別胸腺細胞上的特異性細胞表面抗原的抗體的克隆，根據(jù)通過將抗生物素蛋白和生物素結(jié)合的抗生物素蛋白-生物素復合物(ABC)染色法，利用實施例1產(chǎn)生的雜交瘤克隆的上清液，在4pm厚的新鮮組織切片和福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片上進行免疫過氧化物酶染色。單克隆細胞的上清液用作一抗。石蠟包埋的組織在除去石蠟之后用正常小鼠血清處理，并且保持1小時以防止非特異性背景染色。在加入一抗后，將它們放置過夜并用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌三次。加入用作二抗的生物素化的山羊抗小鼠免疫球蛋白。在室溫下放置l小時，用PBS洗滌三次。然后加入鏈親和素和辣根過氧化物酶的綴合物。將DAKO生產(chǎn)的3，3'-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽(DAB)和H202溶液加入到染色細胞中，處理20分鐘并用PBS洗滌三次。蓋上蓋玻片后在光學顯微鏡下觀察。選出產(chǎn)生特異性針對人胸腺細胞的抗體的雜交瘤克隆系。具有識別胸腺細胞的抗體的一個克隆叫做EB-1。圖1是用產(chǎn)生EB-1抗體的雜交瘤克隆的上清液進行胸腺免疫組織化學染色的照片。如圖1所示，大部分的胸腺細胞被陽性染色。胸腺細胞的細胞表面被強染色，因此EB-1抗體識別的抗原是細胞表面抗原。實施例3為了根據(jù)胸腺細胞的發(fā)育階段評估EB-1抗體的反應性，進行了流式細胞術。將在心外科手術中從患者體內(nèi)摘除的人胸腺充分地剪碎，制備成單細胞的懸浮液。將lxl(^個細胞懸浮于100nlPBS中，并且分裝到各測試管中。加入IOOnlEB-1培養(yǎng)上清液并攪拌。使該溶液在4。C下反應30分鐘，以1,500rpm離心5分鐘，沉淀用PBS洗滌兩次以除去未反應的抗體。將該沉淀懸浮于含稀釋的二抗(FITC-綴合的山羊抗-30小鼠Ig，由Zymed生產(chǎn))的50|ul溶液中，在4。C避光反應30分鐘。洗滌兩次以后，將沉淀懸浮于含藻紅蛋白(PE)-綴合的抗-CD8抗體和別藻藍蛋白(APC)-綴合的抗CD4抗體的50!il溶液中，在4"C避光反應30分鐘，然后洗滌兩次。最后，在離心后，向細胞沉淀中加入200plPBS。根據(jù)CD4和CD8的表達模式將胸腺細胞分成四種亞型(即CD4CD8雙陰性胸腺細胞、CD4+CD8+雙陽性胸腺細胞和CD4+CD8或CD4CD8+單陽性胸腺細胞)，用流式細胞術分析EB-l-陽性細胞的比率和EB-1染色的強度。圖2顯示三色流式細胞術分析的結(jié)果，顯示了BB-1對所有胸腺細胞亞型的反應性，特別地，在雙陽性胸腺細胞上的染色強度最高。在圖2中，實線表示EB-1抗體的染色，實心直方圖表示無關抗體的陰性染色圖。實施例4為了獲得EB-1分泌型雜交瘤克隆分泌的高濃度的抗體，制備腹水。在將0.5ml的降植烷(pristine)通過腹膜內(nèi)途徑給予Balb/c小鼠體內(nèi)后三周，用含10%牛血清的DMEM培養(yǎng)107個EB-1雜交瘤克隆。在2到3周后，收集腹水。這時抗體的濃度是5到10mg/ml。因為有許多污染蛋白質(zhì)，例如腹水中的白蛋白，僅純化對人胸腺細胞有應答的免疫球蛋白。為了從含大量抗體的腹水中純化抗體，進行Q-Sepharose色i普和羥基磷灰石(Bio-gelHTPGel，由Pharmacia生產(chǎn))色譜過程，所述腹水是從經(jīng)腹膜內(nèi)途徑給予了EB-1單克隆雜交瘤細胞的Balb/c小鼠獲得的。在冰上，向每10ml腹水中緩慢加入3.14g硫酸銨(用50%的(NH4)2S04沉淀)。將混合物以15，000rpm離心30分鐘，重新懸浮于去離子水中并用l升緩沖液(20mM磷酸鹽，pH7.4)透析。將該溶液經(jīng)過并吸附于預先用緩沖液(20mM磷酸鹽，pH7.4)平衡過的Q-Sepharose柱，然后使緩沖液再次通過該柱以除去柱中的游離蛋白質(zhì)，在這之后用緩沖液I(20mM磷酸鹽，pH7.4)和緩沖液I1(20mM磷酸鹽和8.5MNaCl,pH7.4)以0M到0.8MNaCl的線性梯度洗脫柱中吸附的蛋白質(zhì)。每個級分在SDA-PAGE中進行電泳，收集含EB-1抗體的級分。該級分然后用緩沖液(20mM磷酸鹽，pH6.8)透析，并且通過預先用緩沖液(20mM磷酸鹽，pH6.8)平衡過的羥磷灰石柱。緩沖液(20mM磷酸鹽，pH6.8)中的級分經(jīng)過柱子以除去游離蛋白質(zhì)，并且用緩沖液III(20mM磷酸鹽，pH6.8)和緩沖液(300mM磷酸鹽，pH6.8)以0到0.3M的磷酸鹽線性梯度洗脫。每個級分在SDS-PAGE中進行電泳，收集含多于95%的EB-1抗體的級分。收集的EB-1抗體用合適的緩沖液透析并存儲。經(jīng)過重復實驗，從1ml的腹水制備得到5至10mg的BB-1抗體。實施例5使用實施例4所純化的EB-1抗體作為一抗，根據(jù)實施例3的流式細胞分析實施本實施例，來研究EB-1抗體是否對胸腺之外的正常白細胞產(chǎn)生反應。對于此分析，將純化的EB-1抗體直接結(jié)合到FITC或PE，在這種情況下不需要使用二抗來獲得熒光，或者生物素-綴合的EB-1抗體與熒光-綴合的鏈親和素結(jié)合使用。下面的表2顯示正常外周血白細胞、培養(yǎng)在含10嗎/ml植物凝集素(PHA)或5嗎/ml抗-CD3抗體的培養(yǎng)基中的激活的外周血單核細胞、正常脾細胞、正常胸腺細胞和臍帶血中的CD34+AC133+造血干細胞的細胞表面上EB-1抗體的反應性。除了胸腺細胞外，所有這些細胞都對EB-1抗體呈陰性。正常白細胞的流式細胞分析的代表性結(jié)果在圖3中顯示，其中實線代表EB-1抗體的染色，實心直方圖表示無關抗體的陰性染色圖。表2細胞EB-l-陽性外周血細胞紅細S包>-淋巴細胞_單核細胞-粒細胞-血小板-激活的外周血PHA(10|Hg/ml)-抗CD3抗體(5|ag/ml)-脾細胞-胸腺細胞++*臍帶血中的CD34+AC133+造血-干細胞_*陰性染色**多于90%細胞陽性染色PHA，植物凝集素實施例6使用實施例4所純化的EB-1抗體作為一抗，根據(jù)實施例2的免疫組織化學測定法實施本實施例，以確定BB-1抗體是否對胸腺之外的正常組織產(chǎn)生反應。下面的表3顯示EB-1抗體在各個不同組織中的反應性。除了胸腺細胞之外，所有其他組織包括外周淋巴組織、小腦、胰、卵巢和睪丸、皮膚、肺、腎上腺和腎均為陰性染色。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實施例7使用實施例4所純化的EB-1抗體作為一抗，根據(jù)實施例3的流式細胞分析實施本實施例，來研究EB-1抗體是否對正常骨髓細胞產(chǎn)生反應。對于此分析，將生物素-綴合的EB-1抗體和APC-綴合的鏈霉親和素，與FITC-綴合的抗CDIO、抗CD33、抗CD38、抗CD71或抗AC133和PE-綴合-抗CD34結(jié)合使用。圖4是三色流式細胞分析的結(jié)果，其中對CD34+細胞設門。多能干細胞被定義為骨髓或臍帶血中的CD34+AC133+(圖4A)或CD34+CD38々暗(圖4B)細胞，并且它們完全不會顯示出對EB-1抗體的反應性。另外，含有幾乎所有的集落形成細胞(例如能夠形成粒細胞、紅細胞、單核細胞、巨核細胞(CFU-GEMM)、CFU-GM和爆發(fā)集落形成單位紅細胞的祖細胞)的CD34+CD33+細胞(圖4D)和CD34+CD71"工細胞定向祖細胞(圖4E)也沒有被EB-1抗體染色。相反，在大部分的淋巴定向CD34+CD10+前體(圖4C)上觀察到EB-1抗體的陽性染色?？偨Y(jié)本結(jié)果，EB-1-反應性^^限制在胸腺細胞和骨髓中的部分造血前體中，但是在包括成熟外周血細胞和造血干細胞的任何其他造血細胞和非造血組織中不存在。實施例8為了明確EB-1抗體識別的抗原，4吏用Invitrogen生產(chǎn)的poly(A)十RNA和pcDNA3表達載體制備人胸腺細胞的cDNA文庫。該文庫包含3.5xl(^個獨立集落。使用的宿主菌的菌抹是大腸埃希氏菌(Ew/ien'c/n'flco//)MC1061/P3。質(zhì)粒pMIK/D3T31的構(gòu)建是通過將Gb3合酶克隆pD3T31(Haraguchietal"Proc.Natl.Acad.Sci.US.A.1994，91:10455-9)的Xhol片段插入到pMIK/Neo表達載體中。如前人所述(Davisetal.，MethodsinMolecularBiology,ElsevierScience,NewYork1986:285-289),先擴增cDNA文庫的質(zhì)粒并使用DEAE-葡聚糖將其與質(zhì)粒pMIK/D3T-31—起轉(zhuǎn)染到293T細胞中。10-cm的培養(yǎng)皿上1.5xl(^個未完全匯合的293T細胞用cDNA文庫質(zhì)粒和pMIK/D3T-31各8pg共轉(zhuǎn)染。在60h后，轉(zhuǎn)染的細胞從培養(yǎng)皿上解離并且與1:200稀釋的EB-1抗體在冰上共孵育45分鐘。如前人所述(Wysockietal"Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1978,75:2844-8),將細胞接種于包#1了山羊抗小鼠IgM的培養(yǎng)亞上。將從長于培養(yǎng)亞中細胞(pannedcell)獲得的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化到293T中。擴增得到的質(zhì)粒DNA被再次轉(zhuǎn)染，并且同樣的步驟被再重復4次。之后制得每個包含30個集落的96個孔(pool)并通過EB-1反應性進行篩選。最后，篩選出來自兩個陽性孔的17個克隆，并且利用微量DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染和免疫熒光測定分離在293T上產(chǎn)生EB-1反應性的三個單克隆。分離的cDNA質(zhì)粒用Xhol和HindIII消化，并且克隆進噬菌凈立BhieScript(pBSK)KS(+)載體中。該克隆的缺失型突變體用Kilo-S叫uence缺失試劑盒制備。使用T3/T7染料引物或者四個其他常用的雙脫氧終止子進行雙脫氧核香酸終止測序，用的是AppliedBiosystems生產(chǎn)的PRISM染料終止子循環(huán)測序試劑盒和377型DNA測序儀。通過這個方法鑒定的DNA序列的Blast檢索表明EB-1抗體識別的抗原是人CD43。為了確認EB-1抗體識別的人CD43抗原，用EB-1抗體和一種已知的抗CD43抗體DFT-1對人CD43轉(zhuǎn)染的293T細胞染色。如圖5所示，EB-1抗體對野生型293T細胞不反應，而CD43轉(zhuǎn)染的293T細胞被EB-1和DFT1兩種抗體染色。因此，EB-1是抗人CD43的單克隆抗體。因為CD43是高度糖基化的蛋白質(zhì)，所以我們研究了對CD43分子的唾液酸酶處理是否改變EB-1抗體對CD43抗原的免疫反應性。圖6顯示經(jīng)過或未經(jīng)過唾液酸酶處理的Molt-4細胞的流式細胞分析。虛線表示無關抗體的陰性染色曲線，細實線和粗實線分別表示EB-1抗體對未經(jīng)過和經(jīng)過唾液酸酶處理的Molt-4細胞的免疫反應性。BB-1抗體對Molt-4細胞的免疫反應性不受唾液酸酶處理的影響。為了確認這些結(jié)果，進行了SDS-PAGE和Western印跡。將lx107個經(jīng)過或未經(jīng)過唾液酸酶處理的人胸腺細胞或Molt-4腫瘤細胞懸浮于1ml的裂解緩沖液(50mMTris國HCl，pH74，150mMNaCl，0.5%w/vNonidetP-40和lmM苯曱磺酰氟(PMSF))中，4'C下振搖30分鐘，并且在13,000g下離心15分鐘除去細胞核。在還原的條件下，在10%的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)上電泳分離上清液。分離膠的丙烯酰胺的濃度是10%，并使用合適分子量的標記。蛋白質(zhì)向硝酸纖維素膜的電泳轉(zhuǎn)移在45V下進行16小時。在蛋白轉(zhuǎn)移以后，該硝酸纖維素膜用含5%脫脂乳和0.05%吐溫20的PBS的封閉緩沖液孵育兩個小時，然后與經(jīng)封閉緩沖液稀釋、濃度為1ng/ml的EB-1抗體孵育過夜。該膜用洗滌緩沖液(含0.05%吐溫20的PBS)沖洗三次，并且與親和純化的山羊抗小鼠免疫球蛋白G孵育1h，該免疫球蛋白G綴合有辣根過氧化物酶，并由封閉緩沖液1:3000稀釋。在洗滌三次以后，每個反應蛋白帶用AmershamPharmaciaBiotech生產(chǎn)的增強化學發(fā)光(ECL)試劑盒檢測。圖7顯示胸腺細胞(A&B)和Molt-4細胞(C&D)的溶胞產(chǎn)物采用EB-1抗體的SDA-PAGE和Western印跡分析。泳道A和C表示未經(jīng)過唾液酸酶處理的細胞溶胞產(chǎn)物的電泳，而泳道B和D是經(jīng)過唾液酸酶處理的溶月包產(chǎn)物的電泳。EB-1抗體識別經(jīng)過和未經(jīng)過唾液酸酶處理的兩種CD43分子。這說明EB-1抗體可能識別CD43分子的未糖基化的區(qū)域。實施例9為了確定EB-1抗體識別的CD43表位，構(gòu)建CD43突變體。人CD43基因的編碼序列從CD43cDNA擴增得到并被用來構(gòu)建表達栽體。例如，為了產(chǎn)生谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)-融合蛋白，通過將PCR片段克隆進Pharmacia生產(chǎn)的pGEX-2T載體中來構(gòu)建CD43重組質(zhì)粒。PCR擴增用的引物的選擇是基于GeneBank中的序列，并且經(jīng)過修飾以包含BamHI和EcoRl或者和BglII限制性位點，以易于克隆。純化的PCR產(chǎn)物和pGEX-2T載體都被BamHI和BglII或者和EcoRl在37°C下消化過夜，用由生產(chǎn)的T4DNA連接酶在16。C連接過夜，并且接著用來轉(zhuǎn)化大腸埃希氏菌感受態(tài)TOPIOF'細胞。圖8顯示出11個CD43缺失型突變體的示意圖。例如，pGEXl-253表示包含人CD43的第1到第253個氨基酸的pGEX-2T載體。為了表達含人CD43序列的GST融合蛋白，用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的大腸埃希氏菌TOP10細胞在含50jig/ml氨千青霉素的LB(Luriabroth)培養(yǎng)基中37。C培養(yǎng)過夜。過夜培養(yǎng)的細胞用含相同濃度的氨千青霉素的新鮮LB培養(yǎng)基稀釋20倍，并在37。C下培養(yǎng)3到4h，直至光密度值達到0.6。在培養(yǎng)物中加入終濃度1mM的IPTG以誘導基因表達。37。C下持續(xù)振搖孵育4h之后，4。C下6000g離心15分鐘沉淀細胞，然后每克沉淀細胞用3ml的裂解緩沖液(50mMTris-HCI，pH8.0，1mMEDTA,100mMNaCl)重新懸浮。懸浮液中加入終濃度0.2mM的PMSF，水育30min。為了用BB-1抗體進行CD43突變體的Western印跡，GST-CD43融合蛋白每個溶胞產(chǎn)物的等份試樣用10%的十二烷基硫酸鈉(SDS)-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，隨后被印跡到硝酸纖維素膜上。該硝酸纖維素膜用EB-1抗體或抗-GST多克隆抗體染色，并且每個反應蛋白帶用根據(jù)實施例8的方法的增強化學發(fā)光檢測。圖9顯示用EB-1(A)和抗-GST(B)抗體進行的CD43突變體的Western印跡分析。泳道1代表pGEXl-253、泳道2為pGEXl-98、泳道3為pGEXl-87、泳道4為pGEXl-81、泳道5為pGEXl-75、泳道6為pGEXl-70、泳道7為pGEX70-99、泳道8為pGEX71-81、泳道9為pGEX73-81、泳道10為pGEX76-81、泳道11為pGEX73-80、泳道12為pGEX2T,以及泳道13為人胸腺細胞溶胞產(chǎn)物。如圖9中所示，pGEX73-81包含通過EB-1進行CD43抗原識別的最小序列，因此針對EB-1抗體的CD43表位是CD43的第73到第81位氨基酸序列。該序列如下GluGlySerProLeuTrpThrSerlie(SEQIDNO:2)。因此，從EB-1抗體識別的表位不在成熟血細胞、造血干細胞、骨髓中的造血前體的亞型或任何非造血組織中表達這一角度來看，該序列是非常有用的。實施例10實施例3、5、6和7顯示，EB-1免疫反應性局限于骨髓中除造血千細胞之外的造血前體的亞型。在本實施例中，才艮據(jù)實施例3的流式細胞分析，對EB-1抗體識別的CD43表位在白血病細胞上的表達進行研究。來自白血病患者的外周血被收集在EDTA管中，并且紅細胞和成熟粒細胞用AmershamPharmaciaBiotech生產(chǎn)的Ficoll-Hypaque離心除去。該純化的細胞用FITC-綴合的EB-1染色并用流式細胞儀分析。下面的表4是采用流式細胞術并利用EB-1抗體進行的白血病樣品的標記分析的結(jié)果。在38個白血病病例(包括急性骨髓性白血病(AML)、急性成淋巴性白血病(ALL)和具有白血病急性發(fā)作的慢性骨髓性白血病(CML))中的31例(81.6%)，肺瘤細胞都被EB-l抗體染色。圖IO示出使用了EB-1抗體的白血病細胞代表性流式細胞染色圖。實線表示EB-1抗體的染色，實心直方圖表示無關抗體的陰性染色圖。表4白血病類型EB-1陽性例數(shù)例數(shù)%AML222090.9Ml66100.0M2887.5M311100.0M444100.0其他3266.7AIX13969.2具有白血病急性發(fā)作的CML3266.7全部383181.6使用實施例4所純化的EB-1抗體作為一抗，根據(jù)實施例2的免疫組織化學分析實施本實施例，以研究EB-1抗體是否對淋巴母細胞性淋巴瘤細胞有反應。圖11顯示出〗吏用EB-1抗體的淋巴母細胞性'淋巴瘤組織代表性免疫染色圖。總體來說，9個淋巴母細胞性淋巴瘤病例中有4例(44.4%)表現(xiàn)出EB-1抗體染色陽性。因此，EB-1抗體及其CD43表位可能是各類急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤的有力的診斷和治療工具。實施例11為了確定EB-1抗體的治療能力，開發(fā)了EB-1免疫毒素和人白血病模型。為了產(chǎn)生免疫毒素，將Sigma生產(chǎn)的皂草毒蛋白和EB-1抗體通過化學插入的巰基(SH)基團間的二硫鍵綴合(Politoetal.,2004)。通過將300pl體積的PBS中的2x105個CCRF-CEM細胞注射到RAG-l-缺陷型小鼠的尾靜脈中建立小鼠的人白血病模型。一周以后，每隔一天(即第7、9、11和13天)，通過快速濃注(在300pl體積的PBS中)至尾靜脈，每只小鼠用四個100pg劑量的EB-1抗體，EB-l-皂草毒蛋白免疫毒素或者無關抗體處理。在CCRF-CEM細胞靜脈注射后四周，根據(jù)實施例3和10的流式細胞分析，用FITC綴合的EB-1抗體和PE-綴合的抗人I類MHC抗體，對從眼眶后網(wǎng)狀組織(retro-orbitalplexus)取得的血樣染色。圖12是小鼠血液中的白細胞的流式細胞分析的代表性結(jié)果。在對照小鼠中，23.4。/。的外周血細胞是人CD43和人I類MHC雙陽性的CCRF-CEM細胞，其中CCRF-CEM細胞在EB-1-皂草毒蛋白免疫毒素處理的小鼠中的減少最高到1.3%。與對照小鼠的白血病細胞負荷相比，僅用EB-l抗體處理的小鼠的白血病細胞負荷也降低大約2倍。因此，EB-l抗體可提供治療急性白血病細胞的有效的工具，這是通過將毒性物質(zhì)送遞到肺瘤細胞、抗體依賴的細胞介導的細胞毒性(ADCC)或其他機制實現(xiàn)。實施例12EB-1抗體識別CD43的第73至第81位的氨基酸序列即GluGlySerProLeuTipThrSerlie(SEQIDNO:2)。本實施例的進行是為了開發(fā)對白血病和淋巴瘤的診斷和治療有用的新的抗-CD43抗體。編碼包括SEQIDNO:2在內(nèi)的CD43的第70至第98位的氨基酸序列的DNA片段被克隆到pQE-40栽體中，并且隨后被用于轉(zhuǎn)化感受態(tài)的大腸埃希氏菌TOP10F'細胞。轉(zhuǎn)化的TOP10F'細胞根據(jù)實施例9的方法培養(yǎng)，并且通過使大腸埃希氏菌溶胞產(chǎn)物通過AmershamPharmaciaBiotech生產(chǎn)的Nickel柱，將CD43融合蛋白從大腸埃希氏菌溶胞產(chǎn)物中純化出來。將100SY-CD43融合蛋白與完全弗氏佐劑混合并通過腹膜內(nèi)途徑給予至Balb/c小鼠并將其免疫。四周以后，與不完全弗氏佐劑混合的另外2個100|ag劑量的SY-CD43融合蛋白間隔兩周經(jīng)腹膜內(nèi)給藥。在最后的加強免疫后三天，從免疫小鼠中取脾并且根據(jù)實施例1的融合方法制備雜交瘤細胞。雜交瘤細胞的培養(yǎng)上清通過流式細胞術用人CD43-轉(zhuǎn)染的鼠EL4細胞篩選，選出兩個與CD43-轉(zhuǎn)染的EL4細胞反應的雜交瘤克隆，并分別命名為EB-2和EB-3。圖13顯示使用了EB-2和EB-3抗體的CD43-轉(zhuǎn)染的EL4細胞系、人胸腺細胞、人外周血細胞和人急性白血病細胞的流式細胞分析。CD43-轉(zhuǎn)染的EL4細胞系、人胸腺細胞和人急性白血病細胞為陽性，但是人外周血細胞對EB-2和EB-3抗體兩者均呈陰性。因此，EB-2和EB-3抗體兩者的染色模式與EB-1的類似。實施例13根據(jù)使用了CD43缺失型突變體的實施例9的SDS-PAGE和Western印跡進行本實施例，以確定EB-2和EB-3抗體識別的CD43表位。圖14顯示采用了EB-2和EB-3的CD43突變體的Western印跡分析。EB-3抗體的CD43表位與EB1的類似。即，EB-1抗體和EB-3抗體的最小表位都是CD43的第73至第81位的氨基酸序列(SEQIDNO:2;GluGlySerProLeuTrpThrSerlie)。然而，EB-2抗體可識別比EB-1和EB-3更短的肽序列。EB-2的最小表位是CD43的第76至第81位的氨基酸序列。其序列如下ProLeuTrpThrSerlie(SEQIDNO:1)。通過確定該CD43表位是否在組織檢查或外周血檢查中表達，本發(fā)明的CD43表位可用于急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤的診斷，原因在于本發(fā)明的CD43表位不存在于正常的非造血組織、成熟血細胞和除胸腺細胞外的激活的外周血中。本發(fā)明的CD43表位可以用作急性白血病、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤治療的靶物質(zhì)，因為它不在造血干細胞和除胸腺細胞和骨髓中造血前體的亞型的正常組織中表達。具有生物學活性的多肽的例示性實施方案的描述是對本發(fā)明的說明。但是，由于對于本領域技術人員而言改變是顯而易見的，因此本發(fā)明并不旨在局限于以上的具體實施方案。本發(fā)明的范圍在以下的權(quán)利要求中限定。權(quán)利要求1.一種CD43表位的分離的多肽，包括SEQIDNO1的氨基酸序列。2.根據(jù)權(quán)利要求1的分離的多肽，其長度小于100個氨基酸。3.根據(jù)權(quán)利要求l的分離的多肽，其長度小于50個氨基酸。4.根據(jù)權(quán)利要求1的分離的多肽，其中所述CD43表位在胸腺細胞、骨髓中的造血前體的亞型、急性白血病細胞、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病的母細胞和淋巴母細胞性淋巴瘤細胞上特異性表達。5.根據(jù)權(quán)利要求1的分離的多肽，其中所述CD43表位包括SEQIDNO:2的氨基酸序列。6.—種特異性結(jié)合一種CD43表位的抗體或其片段，所述CD43表位包括SEQIDNO:1的氨基酸序列。7.—種特異性結(jié)合由SEQIDNO:1的氨基酸序列組成的肽的抗體或其片段。8.根據(jù)權(quán)利要求6或7的抗體或其片段，其中所述CD43表位在胸腺細胞、骨髓中的造血前體的亞型、急性白血病細胞、具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病的母細胞和淋巴母細胞性淋巴瘤細胞上特異性表達，而不在成熟造血細胞、造血干細胞和非造血細胞上特異性表達。9.根據(jù)權(quán)利要求6或7的抗體或其片段，其中所述抗體特異性結(jié)合包括SEQIDNO:2氨基酸序列的多肽。10.根據(jù)權(quán)利要求6或7的抗體或其片段，其中所述抗體是通過用包括SEQIDNO:1氨基酸序列的多肽免疫動物，并且篩選與包括SEQIDNO:1氨基酸序列的多肽特異性結(jié)合的抗體而產(chǎn)生的。11.根據(jù)權(quán)利要求6或7的抗體或其片段，其中所述抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。12.根據(jù)權(quán)利要求11的抗體或其片段，其中所述抗體為人或動物單克隆抗體。13.根據(jù)權(quán)利要求6或7的抗體或其片段，其中所述抗體是嵌合抗體或人源化抗體。14.根據(jù)權(quán)利要求6或7的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段用選自放射性同位素、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)、酶和染色物質(zhì)的化合物標記。15.根據(jù)權(quán)利要求6或7的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段被連接到選自放射性同位素、毒性化學物質(zhì)、毒性蛋白質(zhì)和抗腫瘤劑的毒性物質(zhì)上。16.根據(jù)權(quán)利要求15的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段與所述毒性蛋白質(zhì)結(jié)合以產(chǎn)生融合蛋白。17.—種產(chǎn)生權(quán)利要求6或7的抗體或其片段的細胞。18.—種i貪斷急性白血病的方法，包括將生物樣品中的白血病細胞與權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體孵育，并檢測對抗-CD43表位抗體的陽性免疫反應。19.根據(jù)權(quán)利要求18的診斷急性白血病的方法，其中所述陽性免疫反應的檢測可以用檢測酶反應、熒光、發(fā)光或輻射的裝置確認。20.—種診斷具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病的方法，包括將生物樣品中的白血病細胞與權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體孵育，并^r測對抗-CD43表位抗體的陽性免疫反應。21.—種診斷淋巴母細胞性淋巴瘤的方法，包括將生物樣品中的淋巴瘤細胞與權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體孵育，并檢測對抗CD43表位抗體的陽性免疫反應。22.—種治療急性白血病的方法，包括給予治療有效量的權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體。23.#4居權(quán)利要求22的治療急性白血病的方法，其中所述抗-CD43表位抗體被連接到選自放射性同位素、毒性化學物質(zhì)、毒性蛋白質(zhì)和抗腫瘤劑的毒性物質(zhì)上。24.—種治療具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病的方法，包括給予治療有效量的權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體。25.—種治療淋巴母細胞性淋巴瘤的一種方法，包括給予治療有效量的權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體。26.—種治療急性白血病的藥物組合物，包括權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體和一種可藥用載體。27.—種治療具有白血病急性發(fā)作的慢性白血病的藥物組合物，包括權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體和一種可藥用載體。28.—種治療淋巴母細胞性淋巴瘤的藥物組合物，包括權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體和一種可藥用載體。29.—種白血病診斷試劑盒，包括權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體。30.—種淋巴瘤診斷試劑盒，包括權(quán)利要求6或7的抗-CD43表位抗體。全文摘要本發(fā)明涉及一種在人急性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤細胞上表達的CD43表位及其用途。更具體地，本發(fā)明涉及一種在人急性白血病、淋巴母細胞性淋巴瘤細胞表達，但不在成熟造血細胞、造血干細胞和非造血細胞上表達的CD43表位，還涉及它在急性白血病和淋巴母細胞性淋巴瘤上的診斷和治療應用。文檔編號C07K14/435GK101193912SQ200680020846公開日2008年6月4日申請日期2006年3月10日優(yōu)先權(quán)日2005年5月11日發(fā)明者崔銀玲,樸圣會,樸承杓,鄭景天申請人:狄諾納有限公司