專利名稱：氟代吡啶n-氧化物凝血酶調(diào)節(jié)劑和含氮雜芳基化合物的n-氧化方法
專利說明氟代吡啶N-氧化物凝血酶調(diào)節(jié)劑和含氮雜芳基化合物的N-氧化方法 發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及用做凝血酶抑制劑的新型化合物；本發(fā)明還涉及新型含氮雜芳基化合物的N-氧化方法。

背景技術(shù)：
絲氨酸蛋白酶凝血酶在止血和血栓形成中起著重要的作用，作為多因子蛋白，其可在血小板、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、白細(xì)胞、心臟和神經(jīng)中誘導(dǎo)許多作用。通過內(nèi)在途徑(接觸激活)或外在途徑(通過將血漿暴露于非內(nèi)皮表面、破壞血管壁或組織因子釋放來激活)激活凝血級聯(lián)導(dǎo)致一系列集中于凝血酶的生化反應(yīng)。凝血酶裂解纖維蛋白原最終產(chǎn)生止血栓塞(血塊形成)，通過獨(dú)特的細(xì)胞表面凝血酶受體的溶蛋白性裂解強(qiáng)效激活血小板，并通過反饋機(jī)制自動擴(kuò)大其自身的產(chǎn)生。因此，凝血酶功能抑制劑可有效治療宿主的心血管和非心血管疾病。
以前已報道過血管內(nèi)血栓的體內(nèi)診斷成像方法。這些成像方法采用由可檢測到的放射性或順磁性原子標(biāo)記的化合物。例如，由γ-發(fā)射體In-111標(biāo)記的血小板可用作檢測血栓的成像劑。此外，已報道過順磁性造影劑二乙烯三胺五乙酸釓在用溶栓方法治療的急性心肌梗塞患者的磁共振成像中的用途。
一直需要比現(xiàn)有蛋白酶抑制劑的生物利用度高、副作用低的用作強(qiáng)效的選擇性蛋白酶抑制劑的非肽類化合物。因此，以其強(qiáng)抑制能力和低哺乳動物毒性為特征的新型蛋白酶抑制劑為各種病癥的強(qiáng)效的有價值的治療藥物，包括治療許多哺乳動物蛋白水解性疾病狀態(tài)。
在藥物發(fā)現(xiàn)過程中，有時會應(yīng)用將吡啶類化合物和其它含N雜芳基如嘧啶、喹啉、吡嗪、苯并_二唑和噠嗪并喹啉轉(zhuǎn)化為其N-氧化物的氧化反應(yīng)。已經(jīng)發(fā)展了許多影響該轉(zhuǎn)化的方法。在許多情況下，這種轉(zhuǎn)化可通過采用過酸來完成，如間氯過氧苯甲酸、單過氧鄰苯二甲酸鎂或從如30％過氧化氫水溶液和三氟乙酸酐或乙酸酐原位形成的過酸。采用催化性MTO(MeReO3)和30％H2O2作為共氧化劑或三氟乙酸酐和過氧化氫-脲復(fù)合物(Tet.Lett.412299，2000)或從Oxone_和硫酸原位形成的過硫酸(J.Org.Chem.421869，1977)來氧化一些缺電子吡啶。采用上述方法在將高度缺電子吡啶轉(zhuǎn)化為N-氧化物時常遇到困難；參見，如Tet.Lett.412299，2000。因此，仍需要將高度缺電子含氮雜芳基氧化為其N-氧化物的實(shí)用方法。
發(fā)明簡述 本發(fā)明涉及新型式I化合物(如下)。還提供了制備式I化合物的方法。本發(fā)明的新型化合物為強(qiáng)效凝血酶抑制劑。還提供了通過給予有效量的式I化合物治療哺乳動物血栓形成的方法

式I 其中X為

或

和 Y為

或
本發(fā)明還包括將含氮雜芳基氧化為其相應(yīng)的N-氧化物的方法。試劑系統(tǒng)可由相對安全和可購買得到的試劑來制備。此外，反應(yīng)在如某些酸敏感性甲酯和腈基可耐受的中性-酸性條件下進(jìn)行。
本發(fā)明還包括用于在哺乳動物中抑制血小板凝集物形成、抑制纖維蛋白形成、抑制血栓形成和抑制栓塞形成的組合物，所述組合物包含在藥學(xué)可接受載體中的本發(fā)明化合物。這些組合物可任選包含抗凝劑、抗血小板劑和血栓溶解劑。所述組合物可加入倒血液、血液制品或哺乳動物器官中以達(dá)到所需的抑制作用。
本發(fā)明還提供了治療心肌梗塞；不穩(wěn)定心絞痛；中風(fēng)；再狹窄；深部靜脈血栓形成；由外傷或膿毒性血液透析(septic hemodialysis)引起的深部靜脈血栓形成；心肺旁路手術(shù)；成人呼吸窘迫綜合征；內(nèi)毒素性休克；化療過程中的過高血液凝固性；Alzheimer′s病；和眼部纖維蛋白形成的方法。本發(fā)明化合物的其它用途為包埋在或與用于血液收集、血液循環(huán)和血液儲存的設(shè)備如導(dǎo)管、血液透析裝置、血液收集注射器和管、輸血導(dǎo)管和支架的制備材料物理結(jié)合作為抗凝劑。
本發(fā)明還包括降低哺乳動物表面凝血活性的方法，所述方法為將本發(fā)明化合物共價或非共價與所述表面結(jié)合。
在另一方面，本發(fā)明包括用于哺乳動物體內(nèi)血栓成像的組合物，所述組合物包含可從體外被檢測到的本發(fā)明化合物。優(yōu)選的組合物包含本發(fā)明化合物和可檢測標(biāo)記如放射性或順磁性原子。
在另一方面，本發(fā)明提供了用于哺乳動物體內(nèi)血栓成像的診斷組合物，所述組合物包含藥學(xué)可接受載體和診斷有效量的本發(fā)明化合物或組合物。
在另一方面，本發(fā)明包括用于哺乳動物體內(nèi)血栓成像的方法。
發(fā)明詳述 本發(fā)明涉及式I化合物。


式I 其中X為

或

和 Y為

或
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案為其中X為

本發(fā)明另一優(yōu)選的實(shí)施方案為其中Y為
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)例為2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺及其藥學(xué)可接受鹽。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)例為2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺二鹽酸鹽。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)例為2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺一氫溴酸鹽。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)例為2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺磺酸鹽。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)例為2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺萘-1，5-二磺酸鹽。
本發(fā)明化合物還可為多晶形式，所有多晶形式都包含在本發(fā)明內(nèi)。
式I化合物還可被溶劑化，特別是被水合。水合作用可在化合物或包含化合物的組合物制備過程中發(fā)生，或者，水合作用可由于化合物的吸濕性質(zhì)隨時發(fā)生。
在另一方面，本發(fā)明包括用于哺乳動物體內(nèi)血栓成像的方組合物，所述組合物包含可在體外被檢測到的本發(fā)明化合物。優(yōu)選的組合物為包含本發(fā)明化合物和可檢測標(biāo)記如放射性或順磁性原子的組合物。
在另一方面，本發(fā)明提供了用于哺乳動物體內(nèi)血栓成像的診斷組合物，所述組合物包含藥學(xué)可接受載體和診斷有效量的本發(fā)明化合物或組合物。
在另一方面，本發(fā)明包括用于哺乳動物體內(nèi)血栓成像的方法。
根據(jù)優(yōu)選方面，有效化合物為其中與二氟亞甲基相鄰的吡啶取代基被可檢測標(biāo)記如放射性碘原子如I-125、I-131或I-123取代的化合物?？蓹z測標(biāo)記還可為其中合適的配體(L)直接或通過二價連接基團(tuán)A″與所述吡啶取代基連接的放射性或順磁性螯合物。合適的配體是指可與放射性或順磁性金屬離子螯合的有機(jī)部分。
在這些化合物中，二價連接基團(tuán)A″包括可與吡啶基和螯合工具(chelating means)共價連接的基團(tuán)。如A″可為-C(＝S)-、-C(＝O)-、-C(＝NH)-(CH2)6-C(＝NH)-、-C(＝O)-(CH2)6-C(＝O)-等。
同樣，在由式I表示的化合物中，螯合配體L包括可與放射性或順磁性原子共價結(jié)合或非共價結(jié)合的基團(tuán)。螯合工具包括通常用于絡(luò)合放射性或順磁性原子的基團(tuán)。其包括含3-12個，優(yōu)選3-8個亞甲基膦酸基團(tuán)、亞甲基羧肟胺(carbohydroxamic acid)基團(tuán)、羧基亞乙基基團(tuán)或特別是羧基亞甲基基團(tuán)的與氮原子連接的螯合工具。如果只有一個或兩個酸基團(tuán)與氮原子連接，則那個氮通過任選取代的亞乙基或通過最多4個被氮或氧或硫原子隔開的分離的亞乙基單元與另一個具有所述基團(tuán)的氮原子連接。優(yōu)選的螯合工具為二乙烯三胺-N，N，N′，N″，N″-五乙酸(DTPA)。DTPA為本領(lǐng)域中眾所周知的放射性原子銦-111(In-111)、锝-99m(Tc-99m)和順磁性原子釓(Gd)的螯合工具。Khaw，et al，Science 209295(1980)；Paik C.H.等，美國專利No.4,652,440(1987)；Gries，H.等，美國專利No.4,957,939(1990)。優(yōu)選的螯合配體L為1-(對氨基芐基)-二乙烯三胺五乙酸。螯合工具還包括包含巰基或胺部分的化合物，所述巰基或胺部分在任何組合中的總數(shù)至少為4個。這些巰基或胺部分通過至少兩個原子各自分離，所述原子可為碳、氮、氧或硫。特別優(yōu)選的螯合工具L為金屬硫蛋白，其為本領(lǐng)域眾所周知的Tc-99m螯合工具。
可用放射性碘通過交換反應(yīng)來標(biāo)記式I化合物。將強(qiáng)放射性碘(hot iodine)交換為弱放射性碘(cold iodine)的反應(yīng)為本領(lǐng)域眾所周知的?；蛘?，可從相應(yīng)的溴代化合物通過三丁基錫烷基中間體來制備放射性碘標(biāo)記的化合物。參見美國專利No.5,122,361，通過引用并入本文。
本發(fā)明還包括用于哺乳動物體內(nèi)血栓成像的組合物，其中所述組合物包含式I化合物與放射性原子的混合物；合適的放射性原子包括Co-57、Cu-67、Ga-67、Ga-68、Ru-97、Tc-99m、In-Ill、In-113m、Hg-197、Au-198和Pb-203。一些放射性原子具有可用于放射化學(xué)成像技術(shù)的優(yōu)良特性。特別地，由于其原子核的性質(zhì)，锝-99m(Tc-99m)為用于成像的理想的放射性原子。錸-186和-188也具有可使其成像的γ發(fā)射。優(yōu)選的組合物包含放射性原子Tc-99m。
式I化合物可被任何本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)標(biāo)記，得到本發(fā)明組合物。例如，本發(fā)明化合物可通過螯合劑標(biāo)記，所述螯合劑如二乙烯三胺五乙酸(DTPA)或金屬硫蛋白，兩者都可與式I化合物共價連接。
通常，可通過生成锝-99m和還原劑以及水溶性配體的水性混合物，然后將該混合物與由式I代表的本發(fā)明化合物接觸來制備包含锝-99m的本發(fā)明組合物。例如，可通過將锝-99m(氧化態(tài))與具有螯合工具的本發(fā)明化合物在還原劑存在下反應(yīng)在還原態(tài)的锝-99m(IV或V價態(tài))之間生成穩(wěn)定絡(luò)合物來制備本發(fā)明的成像化合物。
本發(fā)明組合物的一個實(shí)施方案為通過用锝-99m標(biāo)記具有DTPA螯合工具的式I化合物來制備。這可通過下面的步驟來完成將預(yù)定量(如5μg-0.5mg)的本發(fā)明化合物與包含檸檬酸鹽緩沖液和亞錫還原劑混合，然后加入剛被洗脫的包含預(yù)定水平放射(如15mCi)高锝酸鈉。在室溫下將該混合物孵育后，通過無菌濾器(0.2-0.22微米)將反應(yīng)混合物裝在隔離注射器(shielded syringe)上，然后如果需要，將其配制到0.9％注射用鹽水中。
本發(fā)明組合物的另一實(shí)施方案為通過用锝-99m標(biāo)記具有金屬硫蛋白螯合工具式I化合物來制備。這可通過下面的步驟來完成將高锝酸鈉-99m水溶液與葡庚糖酸亞錫水溶液混合形成具有兩個葡庚糖酸鹽分子的锝-99m(還原態(tài))可溶性復(fù)合物，然后將該溶液與連有金屬硫蛋白的式I化合物混合。將該混合物在可使來自葡庚糖酸復(fù)合物的锝-99m交換式I化合物的金屬硫蛋白的條件下孵育一段時間，然后可形成本發(fā)明的锝標(biāo)記的組合物。
用于該方法的還原劑為生理學(xué)可接受，可將锝-99m從其氧化態(tài)還原為IV或V價態(tài)，或?qū)㈠n從其氧化態(tài)還原。可用的還原劑為氯化亞錫、氟化亞錫、葡庚糖酸亞錫、酒石酸亞錫和低亞硫酸鈉。優(yōu)選的試劑為亞錫還原劑，特別是氯化亞錫或葡庚糖酸亞錫。還原劑的量為可將锝-99m還原以便在該放射性同位素的還原態(tài)與式I化合物的螯合工具結(jié)合所必需的量。例如，氯化亞錫(SnCl2)為還原劑，其可在1-1,000μg/mL范圍內(nèi)使用。
檸檬酸與锝-99m迅速復(fù)合形成锝-99m-檸檬酸鹽復(fù)合物。當(dāng)與式I化合物接觸時，在溫和條件下，锝-99m基本上定量地迅速從其檸檬酸鹽復(fù)合物轉(zhuǎn)移到式I化合物的螯合工具上。檸檬酸(為檸檬酸鈉)的量可為約0.5mg/ml直到在介質(zhì)中的最大溶解量。優(yōu)選的檸檬酸的量為15-30μg/ml。
具有螯合工具的式I化合物的量可為約0.001-約3mg/m，優(yōu)選約0.017-約0.15mg/mL。最后，高锝酸鹽形式的锝-99m的量優(yōu)選為約1-50mCi。每mg本發(fā)明化合物的mCi量優(yōu)選為約30-150。
式I化合物和金屬離子轉(zhuǎn)移配體復(fù)合物之間的反應(yīng)優(yōu)選在具有使式I化合物穩(wěn)定的pH值的水溶液中進(jìn)行。穩(wěn)定是指化合物仍舊可溶并保留其對α-凝血酶的抑制活性。通常，反應(yīng)的pH可為約5-9，優(yōu)選的pH為大于6-8。將锝-99m-檸檬酸鹽復(fù)合物和式I化合物，優(yōu)選在約20℃-約60℃，最優(yōu)選在約20℃-約37℃，孵育足夠長的時間以使金屬離子從檸檬酸鹽復(fù)合物轉(zhuǎn)移到式I化合物的螯合工具上。通常，在這些條件下不到一小時的時間足以完成轉(zhuǎn)移反應(yīng)。
本發(fā)明的備選組合物包括In-111標(biāo)記的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還包括可用于哺乳動物體內(nèi)血栓成像的本發(fā)明化合物的組合物，所述化合物包含與順磁性原子復(fù)合的由式I表示的化合物。
優(yōu)選的順磁性原子為原子序數(shù)為21-29、42、44和58-70的二價或三價元素。合適的離子包括鉻(III)、錳(II)、鐵(III)、鐵(II)、鈷(II)、鎳(II)、銅(II)、鏷(III)、釹(III)、釤(III)和鐿(III)。由于它們非常強(qiáng)的磁矩，釓(III)、鋱(III)、鏑(dysprosium)(III)、鈥(III)和鉺(III)為優(yōu)選的。特別優(yōu)選的順磁性原子為釓(III)。
本發(fā)明的組合物可通過將式I化合物與順磁性原子混合來制備。例如，將合適的順磁性原子的金屬氧化物或金屬鹽(硝酸鹽、氯化物或硫酸鹽)溶于或懸浮于包含水和醇如甲醇、乙醇或異丙醇的介質(zhì)中。將該混合物加入到等摩爾量的式I化合物在同樣水性介質(zhì)中并攪拌?？蓪⒎磻?yīng)混合物適當(dāng)加熱直到反應(yīng)完成?？赏ㄟ^過濾分離所形成的不溶性組合物，通過蒸發(fā)溶劑分離可溶性組合物。如果螯合工具上的酸性基團(tuán)仍存在于本發(fā)明化合物的組合物上，則可加入無機(jī)或有機(jī)堿甚至氨基酸將酸性復(fù)合物轉(zhuǎn)化為中性復(fù)合物以便于均勻組合物的分離和純化。與無機(jī)堿如鈉、鉀或鋰的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽一樣，有機(jī)堿或堿性氨基酸可用做中和劑。
本發(fā)明還包括可用于哺乳動物體內(nèi)血栓成像的診斷組合物，所述組合物包含藥學(xué)可接受載體和診斷有效量的得自式I化合物的組合物。
所述組合物一次劑量所需的“診斷有效量”取決于給藥途徑、所治療哺乳動物的類型和所治療的特定哺乳動物的體格特征。醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域中的熟練從業(yè)者非常清楚這些因素及它們與確定該劑量的關(guān)系。同樣，可定制診斷有效量和給藥方法以達(dá)到最佳效果，但這藥取決于一下因素如體重、飲食、同時使用的藥物和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域熟練技術(shù)人員知道的其它因素。成像劑量應(yīng)足以檢測到所討論的血栓位點(diǎn)的成像劑的存在。通常，放射學(xué)成像需要本發(fā)明藥用組合物所提供的劑量為約5-20μCi，優(yōu)選約10μCi。磁共振成像需要所提供的劑量為約0.001-5mmole/kg，優(yōu)選約0.005-0.5mmole/kg式I化合物與順磁性原子的復(fù)合物。在任一情況下，本領(lǐng)域人員都知道實(shí)際劑量取決于血栓的位置。
用于體內(nèi)的“藥學(xué)可接受載體”為藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知，在Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)中有描述。本發(fā)明的藥用組合物可由藥學(xué)可接受載體制備，得到用于注射給藥的無菌溶液或混懸液。特別地，注射劑可被制成常規(guī)形式，可為液體溶液劑或混懸劑、適于在注射前制成液體溶液或混懸液的固體形式或乳劑。合適的賦形劑如水、鹽水、葡萄糖、甘露醇、乳糖卵磷脂、白蛋白、谷氨酸鈉、鹽酸半胱氨酸等。另外，如果需要，可注射藥用組合物可包含少量的無毒輔助物質(zhì)，如濕潤劑、pH緩沖劑等。如果需要，還可使用吸收增強(qiáng)劑(如脂質(zhì)體)。
本發(fā)明還包括用于儲存或給藥的診斷組合物。這些還包含防腐劑、穩(wěn)定劑和染料。如可加入苯甲酸鈉、山梨酸和對羥基苯甲酸酯作為防腐劑。出處同上在1449頁。另外，還可用抗氧化劑和助懸劑。
本發(fā)明的體內(nèi)成像方法還具有優(yōu)于以前的用于檢測或監(jiān)控血栓存在、大小、消退或增加的成像技術(shù)的幾個優(yōu)勢。特別地，本發(fā)明提供了可緊密結(jié)合與血栓有關(guān)的凝血酶的化合物、組合物和診斷組合物，從而降低由循環(huán)放射性或來自未結(jié)合成像劑的順磁性而引起的“背景”。此外，通過冠狀動脈內(nèi)注射本發(fā)明化合物、組合物或診斷組合物的體內(nèi)成像預(yù)計幾乎是同時發(fā)生的，因?yàn)檫@些成像劑會立即使與血栓結(jié)合的凝血酶飽和。
因此，本發(fā)明還包括哺乳動物體內(nèi)血栓成像的方法，所述方法包括以下步驟(1)給予哺乳動物診斷可接受量的本發(fā)明化合物、組合物或診斷組合物，和(2)檢測血管中的血栓。
本文所用術(shù)語“體內(nèi)成像”涉及檢測哺乳動物體內(nèi)血栓，監(jiān)控哺乳動物血栓大小、位置和數(shù)量以及血栓溶解或生長的方法。
在通過該方法在體內(nèi)使用本發(fā)明化合物組合物或診斷組合物時，“給藥”通過全身或局部定向的胃腸外方式進(jìn)行。全身給藥通過將本發(fā)明化合物、組合物或診斷組合物注射入方便的和可進(jìn)入的靜脈或動脈來完成。這包括但不限于肘前靜脈給藥。局部定向給藥通過將本發(fā)明化合物、組合物或診斷組合物注射入懷疑含有血栓的靜脈或動脈內(nèi)完成，其中靜脈血栓應(yīng)位于注射位點(diǎn)的近端，動脈血栓應(yīng)位于注射位點(diǎn)的遠(yuǎn)端(Local targeted administration is accomplishedby injecting the compounds，compositions or diagnostic compositions ofthe present invention proximal in flow to a veinor artery suspected tocontain thrombi distal to the injection site)。這包括但不限于直接注射到冠狀動脈對冠狀動脈血栓成像，注射到頸動脈對大腦脈管系統(tǒng)的血栓成像或注射到足靜脈對小腿深靜脈血栓成像。
同樣，本發(fā)明組合物向血栓位點(diǎn)的遞送方式被認(rèn)為是在術(shù)語“給藥”的范圍內(nèi)。例如，將連有螯合工具的由式I表示的化合物可被注射入哺乳動物，稍后再注射入放射性原子從而在體內(nèi)血栓位點(diǎn)形成包含式I化合物與放射性原子復(fù)合物的組合物。或者，可將包含式I化合物與放射性原子復(fù)合物的組合物注射給哺乳動物。
如前所述，本發(fā)明方法中所用的化合物、組合物或診斷組合物的“診斷有效量”取決于給藥途徑、所治療的哺乳動物的類型和所治療哺乳動物的體格特征。醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域中的熟練從業(yè)者非常清楚這些因素及它們與確定該劑量的關(guān)系。體內(nèi)成像劑量應(yīng)足以檢測到所討論的血栓位點(diǎn)的成像劑的存在。通常，放射學(xué)成像需要本發(fā)明診斷組合物所提供的劑量為約5-20μCi，優(yōu)選約10μCi。磁共振成像需要診斷組合物所提供的劑量為約0.001-5mmole/kg，優(yōu)選約0.005-0.5mmole/kg式I化合物與順磁性原子的復(fù)合物。在任一情況下，本領(lǐng)域人員都知道實(shí)際劑量取決于血栓的位置。
定位于這種血栓的放射性或順磁性原子的存在使得通過成像檢測血栓成為可能。
與本發(fā)明組合物和診斷組合物有關(guān)的放射性原子優(yōu)選采用可檢測γ輻射如γ照相機(jī)等的放射檢測方法成像。通常放射成像照相機(jī)使用轉(zhuǎn)換介質(zhì)(其可吸收高能量的γ射線，在其回到基態(tài)后置換發(fā)射光子的電子)，裝在立體檢測室的光電檢測器(確定所發(fā)射光子的位置)和分析在檢測室內(nèi)檢測到的光子的電路并產(chǎn)生影像。
與本發(fā)明的組合物和診斷組合物有關(guān)的順磁性原子在磁共振成像(MRI)系統(tǒng)中檢測。在該系統(tǒng)中，用強(qiáng)磁場來排列患者體內(nèi)原子的自選矢量。所述場被定位于血栓的順磁性原子的存在干擾，當(dāng)原子核恢復(fù)至其平衡排列時讀取患者的影像。
定義 當(dāng)修飾所用試劑的量時，本文所用術(shù)語“約”是指+/-15％；如“約1mmol”是指0.85mmol-1.15mmol。當(dāng)談到溫度時，本文所用術(shù)語“約”是指+/-5℃；例如“約40℃”是指35℃-45℃。
本文所用術(shù)語“烷基”，無論是單獨(dú)使用還是作為另外基團(tuán)的一部分，都是指最多12個碳的直鏈和支鏈基團(tuán)，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異叔丁基、戊基、己基、異己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基。優(yōu)選地，烷基為1-6個碳原子。
除非限定鏈的長度，否則本文所用術(shù)語“烯基”是指2-20個碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。優(yōu)選地，烯基鏈長為2-8個碳原子，最有選為2-4個碳原子。
除非限定鏈的長度，否則本文所用術(shù)語“炔基”是指2-20個碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)，其中在鏈中至少存在一個兩個碳原子之間的叁鍵，包括但不限于乙炔、1-丙炔(propylene)、2-丙炔(propylene)等。優(yōu)選地，炔基鏈長為2-10個碳原子，最有選2-4個碳原子。
在本文任何烯基或炔基部分作為取代基的情況下，不飽和鍵如二價乙烯基或乙炔鍵優(yōu)選不直接與氮、氧或硫部分連接。
術(shù)語“吸電子基團(tuán)”是指使電子密度朝向自己而遠(yuǎn)離其它區(qū)域的取代基。吸電子基團(tuán)的實(shí)例為苯基、雜芳基、鹵素、-NO2、-CN、砜、亞砜、酯、磺酰胺、氨甲酰、烷氧基、烷氧基醚、烯基、炔基、-OH、-C(O)烷基、-CO2H5-O苯基、-O雜芳基和-CF3。
本文所用術(shù)語“雜芳基”是指具有5-14個環(huán)原子；6、10或14π電子參與環(huán)排列；并包含碳原子和1、2或3個氧、氮或硫雜原子的基團(tuán)(雜芳基的實(shí)例包括噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、苯并_唑基、色原烯基、呫噸基、吩氧硫雜環(huán)已二烯基(phenoxathiinyl)、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4αH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、萘嵌間二氮(雜)苯基(perimidinyl)、菲咯啉基、吩嗪基、異噻唑基、吩噻嗪基、異_唑基、呋咱基和吩_嗪基)。
本文所用術(shù)語“雜原子”是指氧原子(″O″)、硫原子(″S″)或氮原子(″N″)。應(yīng)了解當(dāng)雜原子為氮時，其可形成NRaRb部分，其中Ra和Rb相互獨(dú)立，可為氫或C1-C8烷基，或與連接它們的氮原子一起形成飽和/或不飽和5-、6-或7-元環(huán)。
術(shù)語“三氟甲磺酸鹽”是指三氟甲磺酸鹽陰離子CF3SO3-，簡稱Otf-。“三氟甲磺酸鹽”的形容詞形式為“三氟甲磺酸的”。例如，三氟甲磺酸的脫水物是指三氟甲磺酸酐(CF3SO2)2O，簡稱Tf2O。
藥學(xué)可接受鹽 式I化合物的藥學(xué)可接受鹽(水或油溶性或可分散產(chǎn)物形式)包括常規(guī)無毒鹽或從無機(jī)或有機(jī)酸或堿形成的季銨鹽。這種酸加成鹽的實(shí)例包括乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、重硫酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、campliorate、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽(glucoheptanoate)、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、三氟乙酸鹽和十一酸鹽。堿鹽包括銨鹽，堿金屬鹽如鈉和鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣和鎂鹽，與有機(jī)堿形成的鹽如二環(huán)己基胺鹽、N-甲基-D-葡萄糖胺鹽，以及與氨基酸形成的鹽如精氨酸、賴氨酸等，包括與胍基部分形成的鹽。同樣，包含堿性氮原子的基團(tuán)可被象低級烷基鹵化物一樣的試劑季銨化，如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸鹽如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸鹽；長鏈鹵化物如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基(stearyl)氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基鹵化物如芐基和苯乙基溴化物等。優(yōu)選的形成酸加成鹽的酸包括HCl、HBr、硫酸和萘-1，5-硫酸。
應(yīng)用 至于其最終應(yīng)用，本發(fā)明可用于許多治療目的。本發(fā)明可抑制凝血酶。因此，這些化合物可用于治療或預(yù)防以涉及凝血酶生成或作用嘎的異常靜脈或動脈血栓形成為特征的狀態(tài)。這些狀態(tài)包括但不限于深部靜脈血栓形成；肺栓塞；動脈血栓形成；通常得自動脈肌纖維震顫期間的心房引起的或由透壁性心急梗塞之后的左心室(leftventricule)的全身性栓塞；不穩(wěn)定心絞痛；再狹窄；成人呼吸窘迫綜合征；內(nèi)毒素性休克；化療或放療過程中或之后的過高血液凝固性；在感染性休克、病毒感染和癌癥期間出現(xiàn)的彌散性血管內(nèi)凝血??；心肌梗塞；中風(fēng)；冠狀動脈搭橋術(shù)；眼部纖維蛋白形成；矯形外科手術(shù)如髖關(guān)節(jié)置換術(shù)；和由血栓溶解療法或經(jīng)皮穿刺冠狀動脈成形術(shù)(PCTA)引起的血栓形成。本發(fā)明優(yōu)選的應(yīng)用為預(yù)防或治療深部靜脈血栓形成。
本發(fā)明化合物預(yù)計可用于治療和預(yù)防由任何機(jī)制包括細(xì)菌、多重創(chuàng)傷和中毒引起的彌散性血管內(nèi)凝血。
本發(fā)明化合物預(yù)計可用于其中沒有過高血液凝固性體征的凝血酶水平升高的情況，如Alzheimer′s病和胰腺炎。
其它用途包括所述凝血酶抑制劑植入或物理結(jié)合在用于制造用于血液采集、血液循環(huán)和血液儲存的醫(yī)學(xué)設(shè)備如導(dǎo)管、血液透析裝置、血液采集注射器和試管和輸血導(dǎo)管上的材料上作為抗凝劑的用途。本發(fā)明化合物還可在體外血液回路中用作抗凝劑。
據(jù)顯示，支架可減少再狹窄，但會形成血栓。一種降低支架致血栓性的策略為在支架表面涂漬、植入吸附或共價連接凝血酶抑制劑。本發(fā)明化合物可用于該目的。本發(fā)明化合物可附著或植入可溶性和/或生物可降解的聚合物中，然后涂漬在支架材料上。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、聚羥基-丙基異丁烯酰胺-苯酚、聚羥基乙基-天冬酰胺(aspartamide)-苯酚或被棕櫚酰殘基取代的聚環(huán)氧乙烷-聚賴氨酸、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸共聚物、聚ε己內(nèi)酯(polyepsilon caprolactone)、聚羥基丁酸、聚正酯、縮醛樹脂、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)或雙親嵌段共聚物。參見歐洲專利申請761251、歐洲專利申請604,022、加拿大專利No.2,164,684和PCT公開申請Nos.WO 96/11668、WO 96/32143和WO96/38136。
由于凝血酶對許多細(xì)胞類型都有作用，如平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，所以還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物可用于治療或預(yù)防成人呼吸窘迫綜合征；炎癥應(yīng)答；創(chuàng)傷愈合；再灌注損傷；動脈粥樣硬化；和損傷如氣囊血管成形術(shù)、經(jīng)皮腔內(nèi)斑塊旋切術(shù)和動脈支架放置之后的再狹窄。
本發(fā)明化合物可用于治療神經(jīng)退化性疾病如Alzheimer′s病和Parkinson′s病。
本發(fā)明化合物的給藥有效劑量范圍為約0.1-約500mg/kg，優(yōu)選為0.1-10mg/kg體重，一次給藥或每天分2-4次給藥。
本發(fā)明化合物可與血栓溶解劑如組織纖維蛋白溶酶原激活劑、鏈激酶和尿激酶聯(lián)用。另外，本發(fā)明化合物可與其它抗血栓藥或抗凝血藥如但不限于纖維蛋白原拮抗劑和血栓素受體拮抗劑聯(lián)用。
本發(fā)明化合物還可與可溶性聚合物偶聯(lián)作為靶向藥物載體。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基-丙基異丁烯酰胺-苯酚、聚羥基乙基-天冬酰胺-苯酚或被棕櫚酰殘基取代的聚環(huán)氧乙烷-聚賴氨酸。此外，本發(fā)明化合物還可與一類可用于控制藥物釋放的生物可降解聚合物如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸共聚物、聚ε己內(nèi)酯、聚氰基丁酸、聚正酯、縮醛樹脂、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)或雙親嵌段共聚物偶聯(lián)。
本發(fā)明的藥用組合物可給予任何可經(jīng)受本發(fā)明化合物有益作用的動物。盡管發(fā)明者不想這樣限定，但排在最前的動物為人。
本發(fā)明的藥用組合物可以任何能達(dá)到其預(yù)計目的的方式給予。例如，可經(jīng)胃腸外、皮下、靜脈、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)皮、口腔含化或眼部途徑給藥。備選的或可同時進(jìn)行的給藥方式可為口服途徑。給藥劑量取決于受者的年齡、健康狀況和體重，同期治療的類型，如果還有的話，治療頻率、和所需效果的性質(zhì)。
除了藥理學(xué)活性化合物以外，新型藥物制劑可包含合適的藥學(xué)可接受載體，所述載體包括便于降化學(xué)化合物加工成可藥用的制劑的賦形劑和助劑。
本發(fā)明的藥用組合物由已知方式制備，如通過混合、制粒、包糖衣、溶解或凍干過程制備。因此，用于口服的藥物制劑可通過下面的方法獲得將活性化合物與固體賦形劑混合，任選將所得混合物研磨并將混合物加工成顆粒，加入合適的助劑后(如果需要或必需的話)得到片劑或糖衣片核。
對于適于給予敵人的本發(fā)明組合物，術(shù)語“賦形劑”是指包括但不限于Handbook of Pharmaceutical Excipients，AmericanPharmaceutical Association，2nd Ed.(1994)中描述的那些賦形劑，將該文獻(xiàn)通過引用以其整體并入本文。特別地，合適的賦形劑為填充劑如糖類如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇，纖維素制品和/或磷酸鈣如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘合劑如采用如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍樹膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮制成的淀粉糊。如果需要，可加入崩解劑，如上述淀粉，還有羧甲基淀粉，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽如海藻酸鈉。。重要的助劑為流動調(diào)節(jié)劑和潤滑劑如硅膠、滑石粉、硬脂酸或其鹽如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇。如果需要，糖衣片核具有可啼抵抗胃液的合適的包衣。為了該目的，可采用濃縮糖溶液，其可任選包含阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、保護(hù)膜涂液(lacquer solutions)和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。為了得到可抵抗胃液的包衣，可采用合適的纖維素質(zhì)譜的溶液，如鄰苯二酸乙酰纖維素或羥丙基甲基-纖維素鄰苯二甲酸酯。為了區(qū)分或?yàn)榱髓b別活性化合物制品的劑量，可向片劑或糖衣片包衣中加入顏料或色素。
其它可口服的藥物制劑包括由明膠制備的推-適膠囊(push-fitcapsule)以及用明膠和增塑劑如甘油或山梨醇制備的軟、密封膠囊。推-適膠囊可包含顆粒形式的活性化合物，其可與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉和/或潤滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂和任選穩(wěn)定劑混合物。在軟膠囊中，活性化合物優(yōu)選溶于或懸浮于合適的液體中，如脂肪油或液體石蠟。此外，可加入穩(wěn)定劑。
合適的胃腸外給藥的制劑包括活性化合物的水可溶性形式如水可溶性鹽的、堿性溶液和環(huán)糊精包合絡(luò)合物的水溶液劑。特別優(yōu)選的堿性鹽為用Tris、膽堿氫氧化物、Bis-Tris丙烷、N-甲基葡萄糖胺或精氨酸制備的銨鹽。可用一種或多種改性或未改性的環(huán)糊精來溫度和增加本發(fā)明化合物的水溶性。在美國專利Nos.4,727,064，4,764,604和5,024,998中公開了可用于該目的的環(huán)糊精 此外，可給予活性化合物的混懸液如合適的油性注射混懸液。合適的親脂溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油，或合成脂肪酸酯如乙基油酸酯或甘油三酸酯或聚乙二醇-400(化合物可溶于PEG-400)。水性注射混懸液可包含能增加混懸液粘度的物質(zhì)如羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖。任選地，所述混懸液還可包含穩(wěn)定劑。
下面的實(shí)施例示例了但并不限制本發(fā)明的方法和組合物。其它經(jīng)常遇到的并為本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所知的各種條件和參數(shù)的合適的修飾和改變都在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)。
通用合成方法 本發(fā)明化合物可根據(jù)方案I合成。
方案I
在-40℃-150℃下，優(yōu)選室溫下，在空氣下將H2N-CH2-Y在溶劑如DCM或CH3CN中的溶液加入到實(shí)施例1i中制備的(6-氯-3-氰基-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基)-乙酸4-硝基-苯基酯在溶劑如CHCl3的混合物中，得到化合物III。式H2N-CH2-Y的化合物可購買得到或可根據(jù)已知方法合成；參見Org.Process Res.Dev.Vol 8，p.192，2004和J.Med.Chem.Vol 46，p.461，2003。然后將化合物III，X-NH2，一種堿如二異丙基乙胺(DIEA)和溶劑如DMSO的混合物在空氣下在室溫-150℃，優(yōu)選100℃下攪拌，得到化合物I。式X-NH2的化合物可由已知方法制備；參見Org.Process Res.Dev.Vol 8，p.192，2004，J.Org.Chem.Vol 68，p.8838，2003、WO 9911267、WO 2004091613、J.Med.Chem.46461，2003和Chem.Pharm.Bull.48982，2000。
本申請不僅提供了能制備新型化合物的實(shí)用方法，還提供了廣泛適用于將高度缺電子吡啶類和其它含N雜芳基化合物氧化為其N-氧化物的方法。優(yōu)選的含N雜芳基為吡啶、嘧啶、吡嗪和喹啉。該反應(yīng)發(fā)生在特定酸敏感性官能團(tuán)可耐受的中性至酸性條件下。該反應(yīng)在CH3CN或CH3CN和DCM(二氯甲烷)的混合物中進(jìn)行。該反應(yīng)還適用于缺電子嘧啶類和缺電子喹啉類化合物。方案2中顯示了通用反應(yīng)條件。
方案2
其中EWG為吸電子基團(tuán)，優(yōu)選鹵素、-CF3、酯或-CN；和 n為1、2、3、4或5。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員會認(rèn)識到除了吸電子基團(tuán)外，雜芳基上還可存在烷基。方案3中顯示了優(yōu)選的實(shí)例，特別優(yōu)選的實(shí)例為其中EWG為-CO2烷基。
方案3
該反應(yīng)最重要的方面為過碳酸鈉和三氟甲磺酸酐的結(jié)合使用。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員能夠領(lǐng)會，盡管該反應(yīng)在3.5小時或16小時后被停止，但采用約30分鐘至一周的任何時程，該反應(yīng)均可順利進(jìn)行。通過TLC檢測反應(yīng)起始原料的損耗是最可靠的確定反應(yīng)終點(diǎn)的方法。還應(yīng)了解，也可用超出0℃-室溫范圍的溫度。我們預(yù)計反應(yīng)可在-50℃-40℃的溫度范圍下順利進(jìn)行。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員還了解還可采用除乙腈之外的溶劑，特別是溶劑混合物如乙腈和二氯甲烷(注意為了安全，在強(qiáng)氧化劑存在下我們不推薦采用醚溶劑)。最后，應(yīng)了解猝滅反應(yīng)(將反應(yīng)物倒入碎冰和碳酸氫鈉混合物中)、用二氯甲烷萃取、用亞硫酸鈉破壞過量的過氧化氫、采用ISOLUTE_硅膠柱分離產(chǎn)物的步驟不是本發(fā)明的關(guān)鍵方面，本領(lǐng)域任何熟練技術(shù)人員都會猝滅該反應(yīng)并通過其它的方法分離產(chǎn)物。
通用方法向烘干的4-打蘭管中加入吡啶(1.0mmol)、過碳酸鈉(157mg，1.0eq.)和無水CH3CN(5.0mL)。將該混懸液在冰水浴中冷卻，向其中逐滴加入三氟甲磺酸酐(339μL，2.0eq.)。在加入三氟甲磺酸酐過程中有氣泡產(chǎn)生。在0℃下將所得混合物繼續(xù)攪拌3.5小時。3小時后大部分固體過碳酸鈉消失?？刹捎肨LC(或NMR光譜)檢測反應(yīng)進(jìn)行過程中的等分部分(worked-up aliquot)中起始原料的消耗來監(jiān)控反應(yīng)，當(dāng)TLC或NMR光譜顯示不再發(fā)生反應(yīng)時，可猝滅反應(yīng)。然后將反應(yīng)混合物倒入碎冰(10g)和飽和碳酸氫鈉溶液(40mL)中。攪拌30分鐘后，將混合物用DCM(3×20mL)萃取。用鹽水(20mL)洗滌和合并的DCM溶液，用硫酸鈉干燥。水溶液用10％Na2S2O5溶液處理。濃縮后，將DCM溶液裝在20g ISOLUTE_硅膠柱上，用己烷/EtOAc洗脫。表1顯示了缺電子吡啶類化合物的代表性的氧化。
表1.用Tf2O/Na2CO3-1.5H2O2在0℃-室溫下的吡啶類化合物的氧化
*過夜反應(yīng)經(jīng)2-3小時升至室溫。
或者，優(yōu)選的缺電子吡啶、嘧啶、喹啉或噠嗪的氧化可采用脲過氧化氫代替過碳酸鈉來完成。方案4中顯示了優(yōu)選的反應(yīng)條件。 方案4
其中EWG為吸電子基團(tuán)，優(yōu)選鹵素、-CF3、酯或-CN；和 n為1、2、3、4或5. 本發(fā)明最重要的方法為脲過氧化氫和三氟甲磺酸酐的結(jié)合。
實(shí)施例1 2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺二鹽酸鹽
a.2，5，6-三氟-尼克腈(nicotinonitrile)
將剛剛在空氣下制成粉以除去凝塊的2，6-二氯-5-氟-尼克腈(25.67g，134mmol)和噴霧干燥的KF(23.6g，406mmol)(Aldrich)一起振搖，確保在加入無水DMSO(30mL)之前完全混合。將該混合物在氬氣下室溫充分?jǐn)嚢?-2分鐘，然后置于100℃的油浴中攪拌5分鐘。經(jīng)10分鐘將溫度升至130℃，將該混合物在此溫度下攪拌40分鐘。反應(yīng)物等分部分的NMR光譜證明在130℃下反應(yīng)10分鐘后轉(zhuǎn)化率為86％，40分鐘后轉(zhuǎn)化率＞95％。然后將粘稠紫色混合物冷至室溫，在冰浴中與DCM(30mL)一起振搖，然后將其直接裝在用DCM預(yù)平衡的快速硅膠柱(1.0kg硅膠；120mm×6″)上。用DCM洗脫(140mL流分；合并流分10-19)，得到20.65g澄清淺琥珀色油狀物。NMR光譜證明為1∶0.58mol比率的標(biāo)題化合物DMSO(16.0g標(biāo)題化合物；76％).1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.99(m，1H).LC/MS(ESI)質(zhì)譜計算值158.0，實(shí)測值159.5(MH)+。
b.6-叔丁氧基-2，5-二氟-尼克腈
將與THF(20mL)預(yù)混合的1.04M KOtBu的t-BuOH溶液(110mL，114mmol)經(jīng)15分鐘逐滴加入到前面的步驟制備的含4.6gDMSO雜質(zhì)的0℃的2，5，6-三氟-尼克腈(16.0g，101mmol)的t-BuOH(80mL)和THF(15mL；防止凍結(jié))溶液中。所得均勻紅琥珀色溶液在0℃下再攪拌5分鐘，然后除去冰浴，將該溶液在室溫下再攪拌20分鐘。然后用5M NH4Cl(100mL)猝滅反應(yīng)，用醚(2×100mL)萃取。用水(1×100mL)、1M NaCl(1×150mL)和4M NaCl(1×100mL)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(Na2SO4)澄清紫色有機(jī)層，減壓濃縮，置入醚(50mL)中，通過硅藻土濾墊過濾。用醚(3×50mL)洗滌濾餅，在50-60℃下減壓濃縮合并的濾液，得到20.89g澄清紫色油狀物。NMR顯示為89∶11mol比率的標(biāo)題化合物和2，6-二-叔丁氧基-5-氟-尼克腈(18.22g標(biāo)題化合物；85％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.60(dd，1H)，1.67(s，9H)。
c.丙二酸叔丁酯甲酯，鈉鹽
將NaH(1.50g，59.4mmol)在醚(50mL)中的室溫混合物置入-78℃浴中，然后立即在空氣下在間歇振蕩下用5份約2mL的丙二酸叔丁酯甲酯(10.33g，59.4mmol)處理。未出現(xiàn)氣泡或放熱。丙二酸酯加入完成后，立即將松開蓋子的燒瓶在0℃的浴中振蕩1-2分鐘(無氣泡)，然后在室溫下小心間歇用噴槍加熱10分鐘。出現(xiàn)輕微冒泡后，將反應(yīng)在室溫下靜置1小時，偶爾進(jìn)行振蕩，此時得到粘稠糊狀物。然后在40℃通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，接著通過高度真空除去揮發(fā)物，得到標(biāo)題化合物，為易處理的基本上不吸濕的白色粉末(11.37g，98％)。
d.2-(6-叔丁氧基-3-氰基-5-氟-吡啶-2-基)-丙二酸叔丁酯甲酯
將實(shí)施例Ib中制備的6-叔丁氧基-2，5-二氟-尼克腈(18.22g，85.9mmol)、前面的步驟制備的丙二酸叔丁酯甲酯鈉鹽(34.49g，176mmol)和二氧六環(huán)(110mL)的粘稠混合物在氬氣下在95℃(油浴)攪拌14小時。所得均勻深紫色溶液冷至室溫，用醚(150mL)稀釋，用含2.0M檸檬酸(40mL)的1.0M NaH2PO4(200mL)溶液洗滌。水層用醚(1×100mL)反萃取，合并有機(jī)層，用4M NaCl(1×100mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮。在高度真空下在95℃經(jīng)1小時從殘留物中除去大部分丙二酸叔丁酯甲酯，得到標(biāo)題化合物，為澄清深棕色粘稠油狀物(32.37g，約100％粗產(chǎn)率)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.48(d，1H)，5.06(s，1H)，3.80(s，3H)，1.62(s，9H)，1.47(s，9H)。
e.(3-氰基-5-氟-6-羥基-吡啶-2-基)-乙酸甲酯
將茴香醚(6mL，55mmol)和TFA(58mL，750mmol)加入到前面步驟制備的2-(6-叔丁氧基-3-氰基-5-氟-吡啶-2-基)-丙二酸叔丁酯甲酯(31.87g，87mmol)中，所得均勻溶液在40℃下攪拌1.5小時。然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40℃下濃縮反應(yīng)物，再加入TFA(130mL，1.74mol)，將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。然后將反應(yīng)物在≤40℃下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，所得粘稠油狀物溶于CHCl3(100mL)。接著，在0℃下經(jīng)5-10分鐘在攪拌下以5-10mL一份分批加入2.0M K2CO3(100mL)，直至水層的pH為9。然后在0℃下在攪拌下分批加入2.0M檸檬酸(30mL)至pH 4，加入CHCl3(100mL)和水(100mL)。水層用CHCl3(2×100mL)萃取，合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，濃縮得到粘稠深色油狀物(16.6g)。殘留物用硅膠快速色譜法純化(9∶1→7∶3DCM/丙酮)，得到黃色固體標(biāo)題化合物(9.10g，51％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ12.73(br s，1H)，7.30(d，1H)，3.92(s，2H)，3.82(s，3H)。
f(6-氯-3-氰基-5-氟-吡啶-2-基)-乙酸甲酯
將前面步驟中制備的(3-氰基-5-氟-6-羥基-吡啶-2-基)-乙酸甲酯(9.10g，43.3mmol)和POCl3(40mL，433mmol)在95℃下攪拌7小時。然后減壓濃縮均勻的棕色溶液，將殘留物置于冰浴，用醚(200mL)稀釋，然后與冰水(100mL)一起振搖。水層用醚(1×100mL)萃取，合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，在40℃減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為澄清深琥珀色油狀物(9.45g，96％).1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.75(d，1H)，4.06(s，2H)，3.77(s，3H)。
g.(6-氯-3-氰基-5-氟-吡啶-2-基)-乙酸
將前面步驟中制備的(6-氯-3-氰基-5-氟-吡啶-2-基)-乙酸甲酯(9.36g，40.9mmol)、4.0M HCl(aq)(256mL)和二氧六環(huán)(51mL)在65℃下劇烈攪拌2小時。然后將均勻的琥珀色溶液冷至室溫，用DCM(3×100mL)萃取，干燥(Na2SO4)，在45℃下減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為澄清深琥珀色油狀物(7.40g，84％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.75(d，1H)，4.11(s，2H)。
h.(6-氯-3-氰基-5-氟-吡啶-2-基)-乙酸4-硝基-苯基酯
將前面步驟中制備的(6-氯-3-氰基-5-氟-吡啶-2-基)-乙酸(2.37g，11.0mmol)的均勻棕色溶液、4-硝基苯酚(1.84g，13.2mmol)和DCM(11mL)在0℃在氬氣下攪拌，同時在攪拌下經(jīng)3分鐘逐滴加入加入1，3-二異丙基碳化二亞胺(DIC)(1.90mL，12.1mmol)。DIC加入完成后，立即除去冰浴，將帶有淺黃色沉淀的棕色混合物在室溫下攪拌40分鐘。然后將粗反應(yīng)物直接裝在快速硅膠柱上，用96∶4甲苯/CH3CN洗脫，得到標(biāo)題化合物，為半透明淺黃色油狀物(3.11g，84％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.29(m，2H)，7.80(d，1H)57.35(m，2H)，4.35(d，0.7Hz，2H)。
i.(6-氯-3-氰基-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基)-乙酸4-硝基-苯基酯
方法A [注意盡管下面描述的反應(yīng)進(jìn)行時未發(fā)生事故，但還是在巨大的樹脂玻璃隔離罩后進(jìn)行]。將固體過碳酸鈉(4.54g，(含～25％wt％(～43mmol)H2O2)，得自Aldrich)在空氣下在攪拌下一次性加入到0℃的前面步驟中制備的(6-氯-3-氰基-5-氟-吡啶-2-基)-乙酸4-硝基-苯基酯(4.85g，14.5mmol)在CH3CN(110mL)中淺黃色溶液中。過碳酸鈉加完后，立即在0℃在攪拌下經(jīng)11分鐘逐滴加入三氟甲磺酸酐(7.58g，26.9mmol)，所得半透明黃色溶液在0℃下攪拌3小時。然后將反應(yīng)用冰冷的DCM(150mL)稀釋，并用冰冷的1M NaHCO3(150mL)猝滅，將兩層在0℃下攪拌7分鐘。然后收集有機(jī)層；水層用DCM(2×100mL)萃取，合并有機(jī)層，干燥(2×Na2SO4)，過濾，在室溫下減壓濃縮，得到4.89g標(biāo)題化合物粗品(NMR顯示68mol％標(biāo)題化合物，25mol％起始原料，和7mol％硝基苯酚)。將該物質(zhì)在室溫下在攪拌下用無水醚研磨5分鐘(1×50mL；1×25mL)。NMR顯示84mol％標(biāo)題化合物，16mol％起始原料，完全除去了硝基苯酚。再在室溫下在攪拌下研磨四次20分鐘(1×50mL醚，1×55mL 10∶1醚/DCM，1×50mL 1∶1醚/DCM，和1×50mL DCM)，每次研磨后除去上清液，得到標(biāo)題化合物，為類白色固體(2.96g，58％)。NMR顯示96mol％標(biāo)題化合物和4mol％起始原料。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.29(m，2H)，7.46(d，1H)，7.36(m，2H)，4.37(d，0.7Hz，2H)。
方法B 將(6-氯-3-氰基-5-氟-吡啶-2-基)-乙酸4-硝基-苯基酯(35.90g，106.95mmol)溶于乙腈(179.50mL)并用冰/水浴冷至0℃。向混合物中加入脲過氧化氫(23.14g，245.98mmol)攪拌5分鐘。然后在0℃下經(jīng)2.25小時向反應(yīng)混合物中加入三氟甲磺酸酐(66.38g，235.28mmol)，加入過程中保持溫度低于3.5℃。加入完成后，將混合物繼續(xù)在同樣的溫度下攪拌2小時。再向反應(yīng)混合物中加入脲過氧化氫(2.3g，24.4mmol)、三氟甲磺酸酐(4mL，23.8mmol)，然后在0℃下攪拌30分鐘。再向混合物中加入等分部分的脲過氧化氫(2.3g，24.4mmol)和三氟甲磺酸酐(4mL，23.8mmol)。將混合物在0℃下攪拌15分鐘，HPLC顯示反應(yīng)96％完全。向混合物中小心加入亞硫酸氫鈉溶液(5％，1000mL)，加入過程中保持溫度低于10℃。將混合物在0℃在冰/水浴中攪拌5分鐘，然后儲存在冰箱中過夜。過濾漿液，用水(2×100mL and 50mL)洗滌。所得固體在真空下在60℃干燥6小時，得到棕色固體(31.7g，84％)。1H-NMR(400MHz，d3-乙腈)8.32(m，2H)，7.75(m，1H)，7.37(m，2H)，4.32(s，2H)。19F-NMR(376MHz，d3-乙腈)-115ppm。C14H7N3O5ClF元素分析計算值C 47.81，H 2.00，N11.95，F(xiàn) 5.40，Cl 10.08.實(shí)測值C 47.66，H 1.70，N 11.82，F(xiàn) 5.84，Cl10.16.m.p.＝171.9-173.6℃。
j.(3-氟-吡啶-2-基)-甲基胺
將(3-氟-吡啶-2-基)-甲基胺二鹽酸鹽(1.313g，6.60mmol)(WO00/75134 A1；Chem.Pharm.Bull.33565，1985)在醚(6mL)和2.5MNaOH(5mL；12.5mmol)之間分配。水層(pH約8)用DCM(4×20mL)萃取。然后用2.5M NaOH將水層調(diào)至pH～12，用DCM(2×20mL)萃取，合并DCM和醚層，干燥(2×Na2SO4)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在＜30℃下濃縮，得到標(biāo)題化合物的游離堿，為澄清深棕色油狀物(780mg，94％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.38(dt，1H)，7.39-7.32(m，1H)，7.24-7.17(m，1H)，4.06(d，2H)，1.83(br s，2H)。
k.2-(6-氯-3-氰基-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基)-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺
在空氣下室溫將前面步驟中制備的(3-氟-吡啶-2-基)-甲基胺(698mg，5.53mmol)在DCM(35mL)和CH3CN(5mL)中的均勻溶液加入到實(shí)施例1i中制備的(6-氯-3-氰基-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基)-乙酸4-硝基-苯基酯(1.801g，5.12mmol)在CHCl3(10mL)中的混合物中。然后蓋上燒瓶，將混合物在室溫下攪拌10小時，此時其變?yōu)榘胪该麋晟芤?。[NMR顯示85％轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物，未剩余(3-氟-吡啶-2-基)-甲基胺]。反應(yīng)10小時后，再加入(3-氟-吡啶-2-基)-甲基胺(68mg，0.53mmol)，將反應(yīng)再攪拌12小時，然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至適于直接裝在用EtOAc預(yù)平衡的硅膠快速柱上的半透明琥珀色溶液(～15mL)。用EtOAc洗脫，得到標(biāo)題化合物，為類白色固體(1.29g，74％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.36(dt，1H)，7.55(br s，1H)，7.44-7.36(m，1H)，7.41(d，1H)，7.30-7.23(m，1H)，4.66(dd，2H)，4.20(s，2H)。
1.2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺
將前面步驟中制備的2-(6-氯-3-氰基-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基)-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺(1.156g，3.42mmol)、2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙胺(651mg，4.12mmol)(J.Med，Chem.46461，2003；Chem.Pharm.Bull.48982，2000)、DIPEA(622μL，3.76mmol)和DMSO-d6(2.8mL)的混合物在100℃下在空氣下攪拌2小時。此時粗反應(yīng)物的NMR顯示轉(zhuǎn)化率為～95％。然后將粗反應(yīng)物裝在用4∶1 EtOAc/丙酮預(yù)平衡的硅膠快速柱上(600mL無水硅膠)，用4∶1→3∶1 EtO Ac/丙酮洗脫，得到標(biāo)題化合物，為類白色固體(935mg，59％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.65(m，1H)，8.31(dt，1H)，7.99(m，2H)，7.83(td，1H)，7.67(m，1H)，7.42(m，1H)，7.36(m，1H)，7.31-7.20(m，2H)，4.63(dd，2H)，4.55(dt，2H)，4.15(s，2H)。
m.2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺二鹽酸鹽
方法A 在輕微加熱下將前面步驟中制備的2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺(920mg，2.00mmol)溶于無水CH3CN(42mL)中。在空氣下在振蕩下向該均勻熱溶液中一次性加入0.202M HCl/CH3CN(21mL；4.24mmol HCl)溶液。(0.202M HCl/CH3CN溶液通過簡單地將無水HCl氣體通入包含無水CH3CN的稱皮重的(tared)量筒中至終體積為47.7mL而得到)。蓋上所得均勻溶液，在室溫下靜置過夜，30分鐘內(nèi)開始有晶體析出。晶體完全析出后，潷出琥珀色上清液，將晶體與無水CH3CN(20mL)一起振搖，潷出溶劑，然后在CH3CN(20mL)存在下將晶體從燒瓶中刮出。然后將晶體在真空下干燥，用研缽和研棒研成粉末，在真空下干燥過夜，得到一批標(biāo)題化合物的一水合物，為淡粉色晶狀固體(612.3mg，57％)。1H-NMR(300MHz，CD3OD)δ8.82(d，1H)，8.65(m，1H)，8.51(dt，1H)，8.10-8.00(m，2H)，7.80(d，1H)，7.77(td，1H)，7.60(m，1H)，4.89(d，2H)，4.57(dt，2H)，4.15(s，2H).LC/MS(ESI)游離堿質(zhì)譜計算值460.1，實(shí)測值461.1(MH)+。游離堿·2.04HCl·1.07H2O·0.045CH3CN元素分析計算值C，45.57；H，3.68；N，15.23；Cl，13.02.實(shí)測值C，45.47；H，3.40；N，15.1；Cl，13.02.卡爾·費(fèi)歇爾法測定的水含量％3.46。
方法B 用油浴在攪拌下將400mg 2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺在8.0mL乙腈中的混懸液加熱至75℃。在72℃下固體開始溶解，在75℃下完全溶解形成黃色溶液。在油浴中將混合物緩慢冷至約53℃。在攪拌下向混合物中逐滴加入0.2mL鹽酸(37％，ACS試劑，ca.9.8M)在0.3mL乙腈中的溶液。幾乎立即生成沉淀。在劇烈攪拌下將所得混合物冷至室溫。將混合物冷至室溫。然后將混合物置入冰箱過夜。過濾所得漿液，用少量冷乙腈沖洗。所得固體用研缽和研棒研磨，在25℃下真空干燥過夜，得到白色晶狀固體(0.45g，94％)1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.78(dd，J＝1.14，5.77Hz，1H)，8.60(dm，J＝4.18Hz，1H)，8.46(dt，J＝1.16，8.70Hz，1H)，8.02(m，1H)，7.97(dt，J＝1.68，7.81Hz，1H)，7.77(d，J＝11.98Hz，1H)，7.71(td，J＝7.95，0.99Hz，1H)，7.53(dd，J＝4.91，7.59Hz，1H).4.86(d，J＝0.94Hz，2H)，4.54(t，J＝13.90Hz，2H)，4.12(s，2H).LC/MS(APCI)游離堿質(zhì)譜計算值460.1，實(shí)測值460.9(MH)+。游離堿·2HCl·H2O元素分析計算值C，45.75；H，3.66；N，15.24；Cl，12.86；H2O，3.27.實(shí)測值C，45.63；H，3.34；N，15.11；Cl，13.06.卡爾·費(fèi)歇爾法測定的水含量％3.15。
n.2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺一氫溴化物
在油浴中在攪拌下將2.0g 2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺在40mL乙腈中的混懸液加熱至75℃。在72℃時固體開始溶解，在75℃時完全溶解形成黃色溶液。將混合物在油浴中緩慢冷至約53℃。在攪拌下向混合物中逐滴加入0.59mL氫溴酸(48％，ACS試劑，ca.8.84M)在2mL乙腈中的溶液。幾乎立即生成沉淀。在劇烈攪拌下將混合物冷至室溫。然后將混合物置入冰箱過夜。過濾所得混合物，用少量冷乙腈沖洗。所得固體用研缽和研棒研磨，在78℃下真空干燥2小時，得到淺黃色晶狀固體(2.11g，86％)1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.76(dd，J＝1.12，5.71Hz，1H)，8.60(dm，J＝4.73Hz，1H)，8.42(dt，J＝1.11，8.72Hz，1H)，8.00(m，1H)，7.96(dt，J＝1.64，7.79Hz，1H)，7.77(d，J＝11.97Hz，1H)，7.70(td，J＝7.93，0.87Hz，1H)，7.52(dd，J＝4.98，7.45Hz，1H).4.85(s，2H)，4.54(t，J＝14.05Hz，2H)，4.12(s，2H).LC/MS(APCI)游離堿質(zhì)譜計算值460.1，實(shí)測值461.0(MH)+。游離堿·1.2HBr·0.6H2O元素分析計算值C，44.38；H，3.26；N，14.79；Br，16.87；H2O，1.90.實(shí)測值C，44.48；H，3.08；N，14.71；Br，17.21.卡爾·費(fèi)歇爾法測定的水含量％1.99。
實(shí)施例2 片劑制備 分別包含25.0、50.0和100.0mg活性化合物2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺二鹽酸鹽的片劑制備如下 含25-100mg活性化合物劑量的片劑 將所有活性化合物、纖維素和一份玉米淀粉混合并制粒成10％玉米淀粉糊。將所得顆粒過篩、干燥，與剩下的玉米淀粉和硬脂酸鎂混合。然后將所得顆粒分別壓成含25.0、50.0和100.0mg活性成分/片的片劑。
實(shí)施例3 靜脈注射液制備 上面提到的實(shí)施例1的活性化合物的靜脈給藥劑型制備如下 活性化合物 0.5-10.0mg 檸檬酸鈉5-50mg 檸檬酸 1-15mg 氯化鈉 1-8mg 注射用水(USP) 適量加至1ml 采用上面的分量，將活性化合物在室溫下溶于預(yù)先配置好的氯化鈉、檸檬酸和檸檬酸鈉的注射用水溶液中(USP，see page 1636 ofUnited States Pharmacopeia/National Formulary for 1995，published byUnited States Pharmacopeial Convention，Inc.Rockville，Maryland(1994)(美國藥典/美國國家處方集，1995版，第1636頁，美國藥典委員會出版))。
實(shí)施例4 純化酶的體外抑制作用 試劑AU緩沖鹽得自Sigma Chemical Company(St.Louis，MO)，為能得到的最高純度。
人α-凝血酶得自Enzyme Research Laboratories(South Bend，Indiana)。
用顯色底物進(jìn)行的動力學(xué)分析 用動力學(xué)分析法采用對硝基苯胺顯色底物在405nm監(jiān)測來評價化合物對凝血酶的抑制活性。所用的分析緩沖液為50mM HEPES，pH 7.5，200mM NaCl和新鮮配制的0.05％正辛基β-d-吡喃葡萄糖苷。DMSO的終濃度為4％，來自底物和抑制化合物母液。在96孔低結(jié)合聚苯乙烯板中，將底物在分析緩沖液中的280uL溶液與10μL試驗(yàn)化合物的DMSO溶液在37℃下預(yù)孵育15分鐘，得到與Ki值接近的(bracketed the Ki)的最終試驗(yàn)化合物濃度。加入10μL蛋白酶開始反應(yīng)，在37℃，405nm用Molecular Devices Spectramax 340板讀數(shù)器動力學(xué)監(jiān)測由于底物的溶蛋白性裂解而產(chǎn)生的吸光度的增加。通過分析反應(yīng)初期的線性部分確定初速度。將vo/vi對抑制劑濃度的曲線圖(其中vo＝?jīng)]有抑制劑的速度，vi＝抑制速度)進(jìn)行線性回歸，從斜率的倒數(shù)確定IC50。采用分析的特定Ki因子從IC50計算Ki，計算公式Ki＝IC50×Ki因子，或Ki＝IC50×(1/(1+[S]/Km))，其中S為分析中的底物濃度，Km為底物的Michaelis常數(shù)(Cheng Y andPrusoff WH(1973)Biochem Pharmacol 223099-3108)。
凝血酶分析摻入了底物SucAAPR pNA(Bacliem L-1720，[S]＝100uM final，Km＝320μM，Ki因子＝0.76)。將底物的DMSO溶液(10.7mM)在分析緩沖液中稀釋100倍至終濃度為100μM。將人α-凝血酶(Enzyme Research Laboratories HTl 002a)在分析緩沖液中稀釋1500倍至終分析濃度為1.1nM。
結(jié)果表明實(shí)施例的化合物對人凝血酶的Ki值在9.8和11nM之間。
現(xiàn)在完全描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)了解，在寬廣的和等同范圍的條件、制劑和其它參數(shù)也可進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn)而不影響本發(fā)明或其任何實(shí)施方案的范圍。本文所有引用的專利和公開通過引用以其整體完全并入本文。
權(quán)利要求
1.一種式I的化合物
式I
其中X為
或
和
Y為
或
及其藥學(xué)可接受鹽。
2.一種藥用組合物，所述組合物包含權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)可接受載體。
3.權(quán)利要求2的藥用組合物，還包含至少一種抗凝血劑、抗血小板劑或血栓溶解劑。
4.權(quán)利要求2的藥用組合物，其中所述化合物的量為約0.1-約500mg。
5.一種抑制或治療需要其的哺乳動物由血栓溶解療法或經(jīng)皮穿刺冠狀動脈成形術(shù)引起的深部靜脈血栓形成、彌散性血管內(nèi)凝血病、眼部纖維蛋白形成、心肌梗塞、中風(fēng)或血栓形成的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1的化合物。
6.一種在手術(shù)前或手術(shù)后治療人的方法，所述手術(shù)為冠狀動脈血管成形術(shù)、冠狀動脈搭橋術(shù)和髖關(guān)節(jié)置換術(shù)。
7.一種治療或預(yù)防以涉及哺乳動物凝血酶產(chǎn)生或作用的異常靜脈或動脈血栓形成為特征的狀態(tài)的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物權(quán)利要求2的組合物。
8.一種抑制哺乳動物血小板凝聚物形成、抑制纖維蛋白形成、抑制血栓形成或抑制栓塞形成的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求2的組合物。
9.一種用于血液采集、血液儲存或血液循環(huán)的醫(yī)學(xué)設(shè)備，所述所述設(shè)備包含植入或物理黏附于所述醫(yī)學(xué)設(shè)備上的權(quán)利要求1的化合物。
10.一種醫(yī)學(xué)設(shè)備，所述設(shè)備為導(dǎo)管、支架、血液透析儀、血液采集注射器或管或輸血導(dǎo)管，所述設(shè)備包含植入或物理黏附于所述醫(yī)學(xué)設(shè)備上的權(quán)利要求1的化合物。
11.一種治療化療中的哺乳動物不穩(wěn)定心絞痛、再狹窄、成人呼吸窘迫綜合征、內(nèi)毒素性休克或過高血液凝固性的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求2的組合物。
12.一種治療人的Parkinson′s病或Alzheimer′s病的方法，所述方法包括給予所述人有效量的權(quán)利要求2的組合物。
13.權(quán)利要求12的組合物，其中所述酶為凝血酶。
14.一種哺乳動物體內(nèi)血栓成像的方法，所述方法包括聯(lián)用式I化合物和放射性同位素。
15.一種合成吡啶N-氧化物的方法，所述方法包括
將吡啶與過碳酸鈉和三氟甲磺酸酐以各自約二分之一當(dāng)量-各自約10當(dāng)量的量在約-50℃-約40℃的溫度下在溶劑中反應(yīng)。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述溫度為-10℃-10℃。
17.一種合成嘧啶N-氧化物的方法，所述方法包括
將嘧啶與過碳酸鈉和三氟甲磺酸酐以各自約二分之一當(dāng)量-各自約10當(dāng)量的量在約-50℃-約40℃的溫度下在溶劑中反應(yīng)。
18.一種合成喹啉N-氧化物的方法，所述方法包括
將喹啉與過碳酸鈉和三氟甲磺酸酐以各自約二分之一當(dāng)量-各自約10當(dāng)量的量在約-50℃-約40℃的溫度下在溶劑中反應(yīng)。
19.一種合成吡嗪N-氧化物的方法，所述方法可
將吡嗪與過碳酸鈉和三氟甲磺酸酐以各自約二分之一當(dāng)量-各自約10當(dāng)量的量在約-50℃-約40℃的溫度下在溶劑中反應(yīng)。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述吡嗪起始原料在2-位被吸電子基團(tuán)取代，在5-位被甲基取代。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述吸電子基團(tuán)為-CONH2。
22.一種合成吡啶N-氧化物的方法，所述方法包括
將吡啶與脲過氧化氫和三氟甲磺酸酐以各自約二分之一當(dāng)量-各自約10當(dāng)量的量在約-50℃-約40℃的溫度下在溶劑中反應(yīng)。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述溫度為-10℃-10℃。
24.一種合成嘧啶N-氧化物的方法，所述方法包括
將嘧啶與脲過氧化氫和三氟甲磺酸酐以各自約二分之一當(dāng)量-各自約10當(dāng)量的量在約-50℃-約40℃的溫度下在溶劑中反應(yīng)。
25.一種合成喹啉N-氧化物的方法，所述方法包括
將喹啉與脲過氧化氫和三氟甲磺酸酐以各自約二分之一當(dāng)量-各自約10當(dāng)量的量在約-50℃-約40℃的溫度下在溶劑中反應(yīng)。
26.一種合成吡嗪N-氧化物的方法，所述方法包括
將吡嗪與脲過氧化氫和三氟甲磺酸酐以各自約二分之一當(dāng)量-各自約10當(dāng)量的量在約-50℃-約40℃的溫度下在溶劑中反應(yīng)。
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述吡嗪起始原料在2-位被吸電子基團(tuán)取代，在5-位被甲基取代。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述吸電子基團(tuán)為-CONH2。
29.一種化合物，為2-[3-氰基-6-(2，2-二氟-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-5-氟-1-氧基-吡啶-2-基]-N-(3-氟-吡啶-2-基甲基)-乙酰胺及其藥學(xué)可接受鹽。
全文摘要
本發(fā)明描述了式I化合物或其藥學(xué)可接受鹽，用于預(yù)防或治療與哺乳動物凝血酶活性相關(guān)的疾病和病癥。本發(fā)明還涉及含氮雜芳基的N-氧化的新型方法。
文檔編號C07D213/89GK101228129SQ200680021986
公開日2008年7月23日 申請日期2006年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月20日
發(fā)明者K·克羅伊特爾, T·盧, Y·K·李, C·特爾哈, M·普萊爾, X·朱 申請人:詹森藥業(yè)有限公司