專利名稱：：作為丙型肝炎病毒抑制劑的三肽的制作方法作為丙型肝炎病毒抑制劑的三肽本公開一般涉及抗病毒化合物，并且更具體地說，涉及抑制由丙型肝炎病毒(HCV)編碼的NS3蛋白酶(在本文也稱為"絲氨酸蛋白酶")功能的化合物、包含這樣的化合物的組合物和抑制NS3蛋白酶功能的方法。HCV是主要的人類病原體，在全球感染估計1.7億人-約為感染1型人免疫缺陷病毒人數(shù)的五倍。這些HCV感染個體中的相當(dāng)大部分發(fā)展為包括肝硬化和肝細(xì)胞性肝癌的嚴(yán)重的進(jìn)行性肝病。目前，最有效的HCV療法使用ot-干擾素和利巴韋林的聯(lián)合，導(dǎo)致40。/。的患者的持續(xù)效應(yīng)。近期的臨床結(jié)果證明，作為單一療法的聚乙二醇化(pegylated)ot-干擾素優(yōu)于未經(jīng)修飾的ot-干擾素。然而，即使采用包括聚乙二醇化a-干擾素和利巴韋林聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)性治療方案，相當(dāng)大部分的患者并不使病毒載量持續(xù)降低。因而，開發(fā)用于治療HCV感染的有效的治療劑成為明顯和未曾滿足的需求。HCV是正鏈RNA病毒?；谠?'未翻譯區(qū)域的推論的氨基酸序列和擴(kuò)展相似性的比較，將HCV分類為黃病毒科(Flaviviridae)家族中的單獨(dú)的屬。所有黃病毒科家族成員均具有含正鏈RNA基因組的包膜病毒體，所述基因組經(jīng)由單個的、不間斷的、開放閱讀框翻譯編碼所有已知病毒-特異性蛋白質(zhì)。在全部HCV基因組的核苷酸和編碼的氨基酸序列中發(fā)現(xiàn)相當(dāng)大的異質(zhì)性。已經(jīng)鑒定了6個主要的基因型并描述了多于50個亞型。HCV的主要的基因型在全球分布不同，且盡管對基因型在發(fā)病機(jī)制和治療的可能作用已經(jīng)進(jìn)行了大量的研究，但HCV的基因異質(zhì)性的臨床意義尚不了解。單股HCVRNA基因組長度約為9500個核香酸并且具有編碼約300個氨基酸的單個大聚合蛋白質(zhì)的單個開放閱讀框(ORF)。在感染細(xì)胞中，此聚合蛋白質(zhì)在多處位點(diǎn)上被細(xì)胞性和病毒性蛋白酶裂解，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白。在HCV病例中，兩個病毒蛋白酶影響成熟的非結(jié)構(gòu)蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的產(chǎn)生。第一個在NS2-NS3連接處裂解；第二個是包含在NS3的iV-末端區(qū)域內(nèi)的絲氨酸蛋白酶，并在NS3-NS4A裂解位點(diǎn)上以順式和對于殘余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位點(diǎn)以反式，均介導(dǎo)NS3的所有后續(xù)的裂解下游過程。NS4A蛋白似乎提供多重功能，作為輔因子作用于NS3蛋白酶和可能在NS3和其它病毒復(fù)制酶成分的膜定位上有幫助。NS3蛋白質(zhì)與NS4A復(fù)合物的形成對于高效的聚合蛋白質(zhì)加工、增強(qiáng)在所有位點(diǎn)的蛋白水解的裂解是重要的。NS3蛋白質(zhì)還表現(xiàn)出核普三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B是涉及HCV復(fù)制的RNA-依賴性RNA聚合酶。本公開提供例如在與NS4A蛋白酶聯(lián)合時可抑制NS3蛋白酶功能的肽化合物。再有，本公開描述了給予患者以治療HCV感染的聯(lián)合療法，其中有效抑制HCVNS3蛋白酶的依據(jù)本公開的化合物可與另一個具有抗-HCV活性的化合物聯(lián)合給予，所述另一個具有抗-HCV活性的化合物為例如有效抑制選自以下目標(biāo)功能的化合物HCV金屬蛋白酶、HCV絲氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCVNS4B蛋白質(zhì)、HCV進(jìn)入、HCV裝配、HCV外出、HCVNS5A蛋白質(zhì)和IMPDH。在本公開的一個實(shí)施方案中，提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中n為1、2或3;R選自羥基和-NHS。2R7;W選自氫、烯基、烷基、氰基烷基、環(huán)烷基和鹵代烷基；R"選自烯基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；W選自氫和羥基；Rs選自烯基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷基、羧基烷基、tt烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、鹵代烷基、羥基烷基和(NRaRb)烷基；R6選自烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、(NRaR"羰基和(NRaRb)磺酰基；R選自烷基、芳基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和-NRCRd;Ra和Rb獨(dú)立選自烷基、夢基、芳基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；和RC和Rd獨(dú)立選自烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；或Re和Rd與它們連接的氮原子一起形成5-元或6-元單環(huán)雜環(huán)；前提是R"為氫時，則113不是雜環(huán)基。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供式(II)化合物或其藥學(xué)上可接W選自氫、烯基、烷基、氰基烷基、環(huán)烷基和鹵代烷基;受的鹽(II)其中n為1、2或3;R"選自烯基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；R5選自烯基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷基、羧基烷基、M烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、鹵代烷基、羥基烷基和(NRaRb)烷基；RS選自烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺?；?、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、-(NRaRb)羰基和-(NRaRb)磺?；籖選自烷基、芳基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和-NRCRC;Ra和Rb獨(dú)立選自烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；和Re和Rd獨(dú)立選自烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；或Re和Rd與它們連接的氮原子一起形成5-元或6-元單環(huán)雜環(huán)。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供式(II)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中n為1;W為烯基；W選自烯基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；'R5為烷基；R6為烷氧基羰基；和R7為環(huán)夂克基。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供式(m)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中n為1或2;f選自氳、烯基、烷基、M烷基、環(huán)烷基和鹵代烷基；113選自烯基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基和雜環(huán)基烷基；W選自烯基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷基、烷基、氰基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、鹵代烷基、羥基烷基和(NRaRb)烷基；RS選自烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、-(NRaRb)羰基和-(NRaRb)磺?；籖選自烷基、芳基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和-NRCRd;Ra和Rb獨(dú)立選自烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；和RC和Rd獨(dú)立選自烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；或Re和Rd與它們連接的氮原子一起形成5-元或6-元單環(huán)雜環(huán)。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供式(III)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中n為1;W為烯基；W選自烯基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基和(環(huán)烷基)烷基；R5為烷基；W為烷氧基羰基；和117為環(huán)烷基。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供選自以下的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體的組合物。在另一個實(shí)施方案中，所述組合物還包含干擾素和利巴韋林。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、第二個具有抗-HCV活性的化合物和藥學(xué)上可接受的載體的組合物。在另一個實(shí)施方案中，所述第二個具有抗-HCV活性的化合物是干擾素。在另一個實(shí)施方案中，所述干擾素選自干擾素a2B、聚乙二醇化干擾素a、重組復(fù)合(consensus)干擾素、干擾素a2A和類'淋巴母細(xì)胞干擾素"c(tau)。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、第二個具有抗-HCV活性的化合物和藥學(xué)上可接受的載體的組合物。其中所述第二個具有抗-HCV活性的化合物選自白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞介素6、白細(xì)月包介素12、促進(jìn)1型T輔助細(xì)胞反應(yīng)進(jìn)展的化合物、干擾RNA、抗-反義RNA、咪喹莫特、利巴韋林、肌苷5'-單磷酸脫氬酶抑制劑、金剛烷胺和金剛乙胺。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供抑制HCV絲氨酸蛋白酶功能的方法，所述方法包括使HCV絲氨酸蛋白酶與式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽接觸。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供在患者中治療HCV感染的方法，所述方法包括給予患者有效治療量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供在患者中治療HCV感染的方法，所述方法包括給予患者有效治療量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和在給予式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽之前、之后或同時給予第二個具有抗-HCV活性的化合物。在另一個實(shí)施方案中，所述第二個具有抗-HCV活性的化合物是干擾素。在另一個實(shí)施方案中，所述干擾素選自干擾素ot2B、聚乙二醇化干擾素ct、重組復(fù)合干擾素、干擾素a2A和類淋巴母細(xì)胞干擾素T。在本公開的另一個實(shí)施方案中，提供在患者中治療HCV感染的方法，所述方法包括給予患者有效治療量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和在給予式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽之前、之后或同時給予第二個具有抗-HCV活性的化合物，其中所述第二個具有抗-HCV活性的化合物選自白細(xì)月包介素2、白細(xì)胞介素6、白細(xì)胞介素12、促進(jìn)1型T輔助細(xì)胞反應(yīng)進(jìn)展的化合物、干擾RNA、抗-反義RNA、咪喹莫特、利巴韋林、肌苷5'-單磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺和金剛乙胺。除非在本文另有特別指明，以下所列術(shù)語將具有如下定義。如在本文所使用的，除非在上下文另外清除地指明，單數(shù)形式"一"、"一個"和"該"包括所提到的復(fù)數(shù)。如在本文所使用的，術(shù)語"烯基"指含至少一個碳-碳雙鍵的2-6個碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)。如在本文所使用的，術(shù)語"烷氧基"指通過氧原子連接至母體分子部分的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"烷氧基烷基"指由一個、二個或三個烷氧基取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"烷氧基羰基"指通過羰基連接至母體分子部分的烷氧基。如在本文所使用的，術(shù)語"烷氧基羰基烷基"指被一個、二個或三個烷氧基羰基取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"烷基"指衍生自含1-10個碳原子的直鏈或支鏈飽和的烴的基團(tuán)。如在本文所使用的，術(shù)語"烷基羰基"指通過羰基連接至母體分子部分的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"烷基磺酰基"指通過磺?；B接至母體分子部分的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"芳基"指苯基或其中一個或兩個環(huán)是苯基的雙環(huán)稠合環(huán)系統(tǒng)。雙環(huán)稠合環(huán)系統(tǒng)由稠合至4-6元的芳族環(huán)或非芳族碳環(huán)的苯基組成。本公開的芳基可通過基團(tuán)中任何可取代的碳原子連接至母體分子部分。芳基的代表性實(shí)例包括，但不限于茚滿基、茚基、萘基、苯基和四氫萘基。本公開的芳基可被一個、二個、三個、四個或五個取代基任選取代，所述取代基獨(dú)立選自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、第,二個芳基、氰基、鹵代、鹵代烷氧基、卣代烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、羥基、羥基烷基、硝基、-NRxRy、(NRXRy)烷氧基、(NRXR》烷基、(NRXR。羰基和氧代；其中所述第二個芳基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基的雜環(huán)基部分還可^皮一個、二個、三個、四個或五個獨(dú)立選自烷氧基、烷基、氰基、卣代、卣代烷氧基、卣代烷基、羥基和硝基的取代基任選取代。如在本文所使用的，術(shù)語"芳基烷基"指被一個、二個或三個芳基取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"羰基"指-C(O)-。如在本文所使用的，術(shù)語"羧基"指-C02H。如在本文所使用的，術(shù)語"羧基烷基"指被一個、二個或三個羧基取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"氰基"指-CN。如在本文所使用的，術(shù)語"氰基烷基"指被一個、二個或三個氰基取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"環(huán)烷基，，指具有3-14個碳原子和0個雜原子的飽和的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)烴環(huán)系統(tǒng)。環(huán)烷基的代表性實(shí)例包括，但不限于環(huán)丙基、環(huán)戊基、雙環(huán)[3丄1]庚基和金剛烷基。本公開的環(huán)烷基可被一個、二個、三個或四個獨(dú)立選自烯基、烷氧基、烷基、鹵代、卣代烷氧基和囟代烷基的取代基任選取代。如在本文所使用的，術(shù)語"(環(huán)烷基)烷基"指被一個、二個或三個環(huán)烷基取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"鹵代"和"鹵素"指F、Cl、Br和I。如在本文所使用的，術(shù)語"卣代烷氧基，，指通過氧原子連接至母體分子部分的囟代烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"卣代烷基，，指被一個、二個、三個或四個卣原子取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"雜環(huán)基，，指含一個、二個或三個獨(dú)立選自氮、氧和硫的雜原子的5-、6-或7-元環(huán)。5-元環(huán)具有0-2個雙鍵和6-元和7-元環(huán)具有0-3個雙<睫。術(shù)語"雜環(huán)基，，也包括其中雜環(huán)基環(huán)稠合至4-元-6-元芳族環(huán)或非芳族碳環(huán)或另一個單環(huán)雜環(huán)基的雙環(huán)基團(tuán)。本公開的雜環(huán)基可通過基團(tuán)中的碳原子或氮原子連接至母體分子部分。雜環(huán)基的實(shí)例包括，但不限于苯并噻喻基、呋喃基、咪唑基、二氫吲哚基、卩引咮基、異瘞唑基、異嗯唑基、嗎啉基、嗯唑基、哌嗪基、哌啶基、p比哇基、p比1^^、他咯烷基、吡咯并吡啶基、p比咯基、p塞峻基、噻吩基和硫代嗎啉基。本公開的雜環(huán)基可被一個、二個、三個、四個或五個取代基任選取代，所述取代基獨(dú)立選自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、芳基、氰基、鹵代、鹵代烷氧基、鹵代烷基、第二個雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、羥基、羥基烷基、硝基、-NRxRy、(NRXRy)烷氧基、(NRXRy)烷基、(NRXRy)羰基和氧代；其中的芳基、第二個雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基的雜環(huán)基部分還可被一個、二個、三個、四個或五個獨(dú)立選自烷氧基、烷基、氰基、鹵代、卣代烷氧基、面代烷基、羥基和硝基的取代基任選取代。如在本文所使用的，術(shù)語"雜環(huán)基烷基"指被一個、二個或三個雜環(huán)基取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"羥基"指-OH。如在本文所使用的，術(shù)語"羥基烷基"指被一個、二個或三個羥基取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"-NRaRb"指通過氮原子連接母體分子部分的兩個基團(tuán)Ra和Rb。Ra和Rb獨(dú)立選自烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"(NRaRb)烷基，，指神皮一個、二個或三個-NRaRb基團(tuán)取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"(NRaRb)羰基"指通過羰基連接母體分子部分的-NRaRb基團(tuán)。如在本文所使用的，術(shù)語"(NRaRb)磺酰基"指通過磺?；B接母體分子部分的-NRaRb基團(tuán)。如在本文所使用的，術(shù)語"-NReRd"指通過氮原子連接母體分子部分的兩個基團(tuán)Re和Rd。R^和Rd獨(dú)立選自烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；或Re和Rd與它們連接的氮原子一起形成5-元或6-元單環(huán)雜環(huán)。如在本文所使用的，術(shù)語"-NRxRy"指通過氮原子連接母體分子部分的兩個基團(tuán)RX和Ry。RX和Ry獨(dú)立選自氫和烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"(NRXRY)烷氧基"指通過氧原子連接母體分子部分的(NRXRy)烷基。如在本文所使用的，術(shù)語"(NRXRy)烷基，，指被一個、二個或三個-NRXRy基團(tuán)取代的烷基。如在本文所使用的，術(shù)語(NRXRy)羰基"指通過羰基連接母體分子部分的-NRXRy基團(tuán)。如在本文所使用的，術(shù)語"硝基"指-N02。如在本文所使用的，術(shù)語"氧代"指=0。如在本文所使用的，術(shù)語"磺?；?指-SCV。本公開化合物可作為藥學(xué)上可接受的鹽存在。如在本文所使用的，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"表示本公開化合物的鹽或兩性離子形式，其為水或油可溶性的或可分散的，即在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適宜用于與患者的組織接觸而沒有過度的毒性、刺激性和變態(tài)反應(yīng)，或與合理的利益/風(fēng)險比相稱的其它問題或并發(fā)癥，并且有效用于它們預(yù)期的應(yīng)用?？稍诨衔锏淖罱K分離和純化期間制備所述鹽，或分別通過使適宜的氮原子與適宜的酸反應(yīng)制備所述鹽。典型的酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯曱酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氬鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽；二葡萄糖酸鹽(digluconate)、丙三醇磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、三曱苯基磺酸鹽、曱烷磺酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酯酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、三甲基乙酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、三氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、磷酸、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對-甲苯磺酸鹽和十一酸鹽?？捎糜谛纬伤帉W(xué)上可接受的加成鹽的酸的實(shí)例包括無機(jī)酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸以及有機(jī)酸諸如草酸、順丁烯二酸、丁二酸和檸檬酸?？稍诨衔锏淖罱K分離和純化期間通過使羧基與適宜的堿諸如氫氧化物、金屬陽離子的碳酸鹽或碳酸氬鹽反應(yīng)，或與氨或有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺反應(yīng)制備堿加成鹽。藥學(xué)上可接受的鹽的陽離子包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁，以及無毒的季胺陽離子諸如銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基胺、二甲基胺、三曱基胺、三乙基胺、二乙基胺、乙基胺、三丁基胺、吡啶、W，W-二曱基苯胺、,甲基哌啶、W-甲基嗎啉、二環(huán)己基胺、普魯卡因、二千基胺、^v，,二千基苯乙基胺和WAr-二千基乙二胺。用于形成堿加成鹽的其它的代表性有機(jī)胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌咬和p底嗪。如在本文所使用的，術(shù)語"抗-HCV活性，，意指化合物有效抑制選自以下的目標(biāo)的功能HCV金屬蛋白酶、HCV絲氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCVNS4B蛋白質(zhì)、HCV進(jìn)入、HCV裝配、HCV外出、HCVNS5A蛋白質(zhì)和IMPD，以用于治療HCV感染。術(shù)語"本公開的化合物"和相同意義的表達(dá)，指包括式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、鹽和溶劑化物，如水合物。同樣地，當(dāng)談到中間體時，在上下文允許時，指包括它們的鹽和溶劑化物。術(shù)語"患者"同時包括人和其它的哺乳動物。術(shù)語"藥用組合物"意指包含本公開化合物并混合至少一個額外的藥用載體的組合物，所述載體即為佐劑、賦形劑或溶i某，諸如稀釋劑、防腐劑、填充劑、流動性調(diào)節(jié)劑、崩解劑、濕潤劑、乳化劑、懸浮劑、甜味劑、矯味劑、芳香劑、抗細(xì)菌劑、抗真菌劑、潤滑劑和分散劑，依據(jù)給藥模式和劑型的性質(zhì)不同而異。例如，可使用列于Remington'sPharmaceuticalSciences,18thed.,MackPublishingCompany,Easton,PA(1999)中的成分。本文使用的詞組"藥學(xué)上可接受的"指那些在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)的、適宜用于與患者的組織接觸而沒有過度毒性、刺激性、變態(tài)物、原料、組合物和/或劑型。術(shù)語"有效治療量，，意指足以顯示有意義的患者利益(如，病毒載量持續(xù)降低)的每個活性成分的總量。當(dāng)用單一活性成分單獨(dú)給予個體時，則術(shù)語僅指該成分。當(dāng)聯(lián)合應(yīng)用時，該術(shù)語指引起治療效應(yīng)的各活性成分(不論是合并、連續(xù)或同時給藥)的合計量。術(shù)語"治療"指(i)預(yù)防可能易患但尚未被診斷為已患所述疾病、紊亂和/或病癥的患者中所出現(xiàn)的疾病、紊亂或病癥；(ii)抑制疾病、紊亂或病癥，即阻止其發(fā)展；和/或(iii)緩解疾病、紊亂或病癥，即使疾病、紊《L和/或病癥減退。談及氨基酸或氨基酸衍生物時，術(shù)語"殘基"意指衍生自相應(yīng)的ot-氨基酸的、通過消除夢l^的羥基和a-氨基酸基團(tuán)的一個氫的基團(tuán)。例^口，術(shù)i吾Gln、Ala、Gly、Ile、Arg、Asp、Phe、Ser、Leu、Cys、Asn、Sar和Tyr分別表示丄-谷氨酰胺、丄-丙氨酸、甘氨酸、丄-異亮氨酸、丄-精氨酸、丄-天冬氨酸、丄-苯丙氨酸、丄-絲氨酸、丄-亮氨酸、丄-半胱氨酸、丄-天冬酰胺、肌氨酸和丄-酪氨酸的"殘基"。談及氨基酸或氨基酸殘基時，術(shù)語"側(cè)鏈"意指連接至oc-氨基酸的oc-碳原子的基團(tuán)。例如，甘氨酸的R-基團(tuán)側(cè)鏈?zhǔn)菤?，丙氨酸的是曱基，纈氨酸的是異丙基。a-氨基酸的具體的R-基團(tuán)或側(cè)鏈參考A丄.Lehninger關(guān)于Biochemistry的教科書(見第4章)。但用于命名本公開化合物時，如在本文所使用的指示P1'、Pl、P2、P2*、P3和P4，畫在圖中蛋白酶抑制劑的氨基酸殘基結(jié)合于相對于天然肽裂解底物結(jié)合點(diǎn)相關(guān)的位置上。裂解發(fā)生在天然底物P1和Pl，之間，此處非主要位置指明氨基酸從肽天然裂解位點(diǎn)的C-末端末開始擴(kuò)展到W-末端；反之，主要位置從裂解位點(diǎn)指示的W-末端起始并擴(kuò)展到C-末端。例如，Pl，指遠(yuǎn)離裂解位點(diǎn)的C-末端末右手端的最初位置(即7V-末端的最初位置)；而Pl從C-末端裂解位點(diǎn)的左手側(cè)開始編號，P2:從C-末端第二個位置開始編號，等)。(見BergerA.&SchechterI.,TransactionsoftheRoyalSocietyLondonseries(1970),B257,249-264]。下列圖顯示本公開化合物結(jié)構(gòu)的命名。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>本公開化合物中存在不對稱中心。例如，所述化合物可包括下式的Pl環(huán)丙基成分R2其中C和C2各自表示在環(huán)丙基環(huán)的1和2位置上的不對稱碳原子。在化合物的其它的部分不抗拒其它可能的不對稱中心，此兩個不對稱中心的存在意指化合物可作為非對映異構(gòu)體的外消旋混合物存在，諸如如下所示的其中f或者在酰胺的同側(cè)或者在羰基的同側(cè)構(gòu)成的非對映異構(gòu)體。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>應(yīng)該理解，本公開包括所有具有抑制HCV蛋白酶能力的立體化學(xué)異構(gòu)形式或其混合物。從商業(yè)上可獲得的含手性中心的起始原料合成，或通過制備對映異構(gòu)體產(chǎn)物的混合物，隨后分離諸如轉(zhuǎn)化為非對映異構(gòu)體的混合物，再經(jīng)分離或再結(jié)晶、層析技術(shù)技術(shù)或在手性層析柱上直接分離對映異構(gòu)體，可合成制備化合物的單個立體異構(gòu)體。具體立體化學(xué)起始化合物或者是商業(yè)上可獲得的或可通過本領(lǐng)域已知的技術(shù)制備和拆分。某些本公開化合物也可以不同的穩(wěn)定性的、可分離的構(gòu)象形式存在。扭力不對稱由于不對稱單鍵的限制的旋轉(zhuǎn)(例如由于空間位阻或環(huán)應(yīng)變(ringstmin)可允許不同的構(gòu)象異構(gòu)體分離。本公開包括這些化合物的各構(gòu)象異構(gòu)體及其混合物。某些本公開化合物也可以兩性離子形式存在并且本公開包括這些化合物的每個兩性離子形式及其混合物。當(dāng)可能用于治療時，可給予有效治療量的作為原料化學(xué)品的式(I)化合物及其藥學(xué)上可"t妄受的鹽，可能作為藥用組合物的活性成分存在。因此，本公開還提供包含有效治療量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥用組合物。式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽如上描述。從與制劑的其它成分相容的意義上說，載體、稀釋劑或賦形劑必須是可接受的并且對其接受者沒有害處。依據(jù)本7>開的另一個方面，還提供包括將式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一個或更多個藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合而制備藥用制劑的方法。藥用制劑可以每單位劑量含預(yù)定量的活性成分的單位劑型呈現(xiàn)。在預(yù)防和治療HCV介導(dǎo)的疾病單一療法中，本公開化合物的劑量水平在每天每公斤體重約0.01和約250毫克("mg/kg")之間，優(yōu)選典型地在約0.05和約100mg/kg體重之間。典型地，將每天給予本公開藥用組合物約1至約5次，或者持續(xù)輸注。這樣的給藥可用于慢性或急性治療?？膳c載體物質(zhì)聯(lián)合生產(chǎn)單一劑型的活性成分的量，將根據(jù)被治療的病癥、病癥的嚴(yán)重程度、所使用化合物給藥次數(shù)、給藥途徑、排泄速率、療程和患者的年齡、性別、體重和病癥的不同而異。優(yōu)選的單位劑型是那些含本文以上陳述的或其適當(dāng)?shù)牟糠值幕钚猿煞值拿刻靹┝炕騺唲┝?sub-dose)的劑型。一般，以基本小于化合物的最佳劑量的小劑量開始治療。之后，以小的增量增加劑量直到在這種情況下達(dá)到最佳效應(yīng)。一般地，最需要以通常提供抗病毒有效的結(jié)果而不產(chǎn)生任何有害的或有毒的副作用的濃度水平給予所述化合物。當(dāng)本公開組合物包含本公開化合物和一種或多種額外的治療劑或預(yù)防劑的聯(lián)合時，通?；衔锖皖~外的藥物均以單一治療方案中正常給藥劑量的約10至150%之間和更優(yōu)選約10和80%之間的劑量水平呈現(xiàn)。可適于以任何適當(dāng)?shù)耐緩浇o予藥用制劑，例如通過口服(包括口顛或舌下含服)、直腸、經(jīng)鼻、局部(包括口頰、舌下或透皮)、陰道或胃腸夕卜(包括皮下、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、胸骨內(nèi)、推管內(nèi)、病灶內(nèi)(intralesional)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi)注射或輸注)途徑?？赏ㄟ^制藥領(lǐng)域已知的任何方法，例如通過將活性成分與載體或賦形劑混合制備這樣的制劑。適于口服給藥的藥用制劑可以不連續(xù)的單位呈現(xiàn)，所述制劑有諸如膠嚢劑或片劑；粉劑或顆粒劑；在水或非水液體中的溶液劑或懸浮劑；可食用的泡沫劑或whips;或水包油液體乳劑或油包水乳劑。例如，對于口服給藥的片劑或膠嚢劑形式，可將活性藥物成分與口服、無毒性的藥學(xué)上可接受的惰性載體諸如乙醇、丙三醇、水等混合。通過將化合物粉碎至適宜的細(xì)度并與同樣粉碎的藥用載體諸如可食用的碳水化合物，例如，淀4分或甘露醇混合，制備粉劑。也可存在矯味劑、防腐劑、分散劑和著色劑。通過如上描述的制備粉劑混合物并將其填充至成形的明膠殼嚢中，制備膠嚢劑。在填充操作前，可將助流劑和潤滑劑諸如膠體二氧化硅、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇加至粉末混合物中。也可加入崩解劑或增溶劑諸如瓊脂-瓊脂、碳酸鉤或碳酸鈉以改善膠嚢劑攝入后的藥物利用度。而且，當(dāng)想要或需要時，也可將適宜的粘合劑、潤滑劑、崩解劑和著色劑摻入混合物中。適宜的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖諸如葡萄糖或P-乳糖、玉米甜味劑、天然和合成樹膠諸如阿拉伯樹膠、黃蓍膠或藻酸鈉、羧基甲基纖維素、聚乙二醇等。用于這些劑型的潤滑劑包括油酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括，但不限于淀粉、曱基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等。例如，通過制備粉末混合物，造粒或造小塊(slugging)，添加潤滑劑和崩解劑并且壓制成片劑，配制片劑。通過將適當(dāng)粉碎的化合物與稀釋劑或如上描述的基質(zhì)混合，并且任選與粘合劑諸如羧基曱基纖維素、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮、溶液阻滯劑諸如石蠟、再吸收加速劑諸如季銨鹽和/或吸收劑諸如膨潤土、高嶺土或磷酸氫鈣混合，制備粉末混合物?？赏ㄟ^用粘合劑諸如糖漿、淀粉糊、阿卡迪亞粘液(acadiamucilage)或纖維質(zhì)或聚合物原料的溶液濕潤粉末混合物，并且擠壓通過篩網(wǎng)造粒。作為造粒的另一種選擇，可將粉末混合物通過壓片機(jī)，結(jié)果不完美地形成粉碎成顆粒的小塊。可釆用添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石粉或植物油的方法使顆粒潤滑以防片劑粘附在成形沖模上。然后將潤滑的混合物壓制成片劑。也可將本公開化合物與自由流動的惰性載體混合，并無需進(jìn)行造?；蛟煨K步驟，直接壓制成片劑?？商峁┯上x膠的密封層組成的透明或不透明的保護(hù)層、糖或聚合原料的包衣和蠟拋光包衣?？蓪⑷玖霞又吝@些包衣中以區(qū)別不同的單位劑量。可制備為劑量單位形式的口服液體劑諸如溶液劑、糖漿劑和酏劑，這樣，所給的量含預(yù)定量的化合物。通過將化合物溶解于適宜的經(jīng)過矯味處理的水溶液中，可制備糖漿劑，而通過使用無毒性的溶々某，可制備酏劑。也可加入增溶劑和乳化劑諸如乙氧基化的異硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚，防腐劑、矯味添加劑諸如薄荷油或天然甜味劑或糖精或其它的人造甜味劑等。適當(dāng)時，口服給藥的劑量單位制劑可以是微嚢化的。如通過包衣或?qū)⑽⒘Ｔ习襁M(jìn)聚合物、蠟等中，也可制備成延長或持續(xù)釋放的制劑。也可以脂質(zhì)體傳遞系統(tǒng)諸如小單層脂質(zhì)體(vesicles)、小單層脂質(zhì)體和多層脂質(zhì)體的形式，給予式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。從多種磷脂諸如膽固醇、十八烷基胺或磷脂酰膽堿可形成脂質(zhì)體。也可通過使用與化合物分子偶聯(lián)的單克隆抗體作為單個的載體傳遞式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽?；衔镆部膳c作為的可耙向藥物載體的可溶性聚合物偶聯(lián)。這樣的聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羥基乙基天冬酰胺苯酚或—皮palitoyl殘基取代的聚環(huán)氧乙烷聚賴氨酸。此外，化合物可偶聯(lián)至一類生物可降解的聚合物，用于實(shí)現(xiàn)藥物的控制釋放，例如，聚乳酸、聚s-己內(nèi)酯(polepsiloncaprolactone)、聚羥基丁(butyric)酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)的或兩親的嵌段共聚物。適于透皮給藥的藥用制劑可呈現(xiàn)為分散的貼片劑，其意欲以延長的時間保持與接受者的表皮的密切接觸。例如，可將活性成分從貼片通過在PharmaceuticalResearch,3(6),318(1986)中通常描述的離子電滲療法傳遞。可將適于局部給藥的藥用制劑配制成軟膏、乳膏、懸浮劑、洗劑、粉劑、溶液劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油劑。為了治療鹽眼或其它的外部組織，例如口和皮膚，優(yōu)選應(yīng)用局部用軟膏或乳膏的制劑。在軟膏配制中，可將活性成分與或者石蠟或者水-可混溶的軟膏基質(zhì)一起使用。或者，可用水包油乳膏基質(zhì)或油包水基質(zhì)將活性成分配制在乳膏中。適于局部給予眼睛的藥用制劑包括滴眼液，其中活性成分溶解或懸浮于適宜的載體尤其是水溶劑中。適于局部給予口腔的藥用制劑包括糖錠、錠劑和洗口液。適于直腸給藥的藥用制劑可以呈現(xiàn)為栓劑或灌腸劑。適于經(jīng)鼻給藥的藥用制劑，其中的載體是固體，包括用鼻吸入的方法給藥的、具有粒子大小例如在范圍20-500微米的一種粉末，即通過從緊靠近鼻子的裝有粉末的容器通過鼻通道快速吸入。適宜作為鼻噴霧劑或滴鼻劑給藥的、其中載體是液體的制劑，包括活性成分的水或油溶液。適于通過吸入給藥的藥用制劑包括可通過不同類型有刻度的、劑量壓縮的氣霧劑、噴霧器或吹藥器產(chǎn)生的細(xì)粒子粉末或薄霧。適于陰道給藥的藥用制劑可呈現(xiàn)為子宮套、陰道塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫劑或噴霧制劑。適于胃腸外給藥的藥用制劑包括水和非水滅菌注射溶液，其可含抗-氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和致使制劑與計劃中的接受者血液等滲的soutes;以及可包括懸浮劑和增稠劑的水和非水滅菌混懸液。制劑可以單位-劑量或多個-劑量容器例如密封的安培和小瓶存在，并可儲存在冷凍-干燥(凍干)條件下，僅需要在使用前臨時添加滅菌液體載體，例如用于注射的水。臨配型(Extemporaneous)注射溶液劑和混懸劑可由滅菌粉末、顆粒和片制備。應(yīng)該理解，除了以上具體才是到的成分外，所述制劑可包括具有與提及的制劑類型有關(guān)的、本領(lǐng)i^的其它常規(guī)試劑，例如那些適宜于口服給藥的制劑可含矯味劑?？膳c本公開化合物一起給予的某些示例性HCV抑制劑化合物包括那些在下列出版物中公開的那些化合物于2002年1月17日公布的WO02/04425A2、2003年1月30日公布的WO03/007945Al、2003年2月6日公布的WO03/010141A2、2003年2月6日公布的WO03/010142A2、2003年2月6日公布的WO03/010143Al、2003年1月3日公布的WO03/000254Al、2001年5月10日公布的WO01/32153A2、2000年2月10日7>布的WO00/06529、2000年4月6日公布的WO00/18231、2000年3月2日公布的WO00/10573、2000年3月16日公布的WO00/13708、2001年11月15日公布的WO01/85172Al、2003年5月8日公布的WO03/037893Al、2003年5月8日公布的WO03/037894Al、2003年5月8日公布的WO03/037895Al、2002年12月9日公布的WO02/100851A2、2002年12月19日公布的WO02/100846Al、2002年11月13日公布的EP1256628A2、1999年1月14日公布的WO99/01582、2002年2月24日公布的WO00/09543。下表1列出了一些可與本/>開化合物一起給予的示例性化合物的實(shí)例。在聯(lián)合療法中，本公開化合物可與其它的抗-HCV活性化合物或者合在一起或者分開或者通過將各化合物混合在組合物中一起給予。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>商品名抑制劑或靶標(biāo)的類型利巴韋林利巴韋林Schering-PloughCorporation,Kenilworth,NJPEG-Intron/利巴韋林聚乙二醇化IFN-a2b/利巴韋林Schering-PloughCorporation,Kenilworth,NJZadazim免疫調(diào)節(jié)劑SciClonePharmaceuticalsInc.,SanMateo，CARebif畫匿piaSerono,Geneva,SwitzerlandIFN-f3和EMZ701IFN-(3和EMZ701Transition治療sInc.，Ontario,CanadaT67P-微管蛋白抑制劑TularikInc.,SouthSanFrancisco,CAVX-497IMPDH抑制劑VertexPharmaceuticalsInc.,Cambridge,MAVX-950/LY-570310絲氨酸蛋白酶抑制劑VertexPharmaceuticalsInc.,Cambridge,MA/EliLilly和Co.Inc.,Indianapolis,INOmniferon天然IFN-aViragenInc.,Plantation,FLXTL-002單克隆抗體XTLBiopharmaceuticalsLtd.,Rehovot，Isreal本公開化合物也可用作實(shí)-驗(yàn)室試劑。化合物可有助于提供研究設(shè)計病毒復(fù)制分析、驗(yàn)證動物檢驗(yàn)系統(tǒng)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究的工具，以更加深了解HCV疾病的機(jī)制。再有，本公開化合物用于例如，通過竟?fàn)幮砸种拼_立或測定其它的抗病毒化合物的結(jié)合位點(diǎn)。本公開化合物也可用于治療或預(yù)防材料的病毒污染，并且因此降低實(shí)驗(yàn)室或與這些材料接觸的醫(yī)務(wù)人員或患者的病毒感染的風(fēng)險，所述材料有例如血液、組織、手術(shù)器械和外表面、實(shí)驗(yàn)室器械和外表面以及血液收集或輸血儀器和材料。本公開意欲包括通過合成方法制備或通過包括那些發(fā)生在人或動物體(體內(nèi))或在體外加工的代謝方法制備的具有式①的化合物。在本申請中所用的縮寫，特別包括在以下的說明性流程和實(shí)施例中的縮寫，為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉。一些縮寫應(yīng)用如下CDI表示1,1，-羰基二咪唑；THF表示四氫呋喃；DBU表示1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯；TFA表示三氟乙酸；HATU表示CK7-氮雜苯并三唑-l-基)-A^A^iV'，iV'-四甲基脲輸磷酸鹽；PyBOP表示六氟磷酸苯并三唑-l-基-氧基-三-吡咯烷子基憐；Mel表示甲基碘；Boc或BOC表示叔-丁氧基羰基；OtBu表示叔-丁氧基；TBME表示叔-丁基甲醚；EtsN表示三乙胺；DMSO表示二甲基亞砜；OAc表示乙酸鹽；DPPA表示二苯基磷?；B氮化物；Me表示甲基；TBAF表示四丁基氟化銨；DMAP表示4-W-二曱基氨基吡啶；tBuLi表示叔-丁基鋰；LiHMDS表示六甲基二硅基胺基鋰；Tle表示叔-丁基亮氨酸，也稱為叔-丁基甘氨酸；4-BiphMgBr表示4-聯(lián)苯基溴化鎂；DCM表示二氯甲烷；MeO表示曱氧基;EDAC或EDC表示l-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸；和HOBt表示1-羥基苯并三唑?？梢子谥苽浠蚴巧虡I(yè)上可獲得的。接下來在以下所列的方法，是為了說明的目的而提供的，并不打算限制權(quán)利要求的本公開的范圍。應(yīng)該承認(rèn)，制備這樣的化合物可為必須用常規(guī)保護(hù)基團(tuán)保護(hù)其中的官能團(tuán)，然后去除保護(hù)基團(tuán)以提供本公開化合物。關(guān)于依據(jù)本公開的使用保護(hù)基團(tuán)的細(xì)節(jié)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。例如，依據(jù)如在流程I中"i兌明的通用方法，可合成本公開化合物(其中CPG是羧基保護(hù)基團(tuán)和APG是氨基保護(hù)基團(tuán))。流程IPI——P1-CPG+APG-P2~~^~APG-P2-P1-CPGbAPG-P3-P2-P1-CPG^*-P2-P1-CPG+APG-P3dB-P3-P2-P1-B-P3-P2-P1-P1'簡言之，可通過熟知的肽偶聯(lián)技術(shù)連接Pr、Pl、P2、P3和P4。Pl、、Pl、P2、P3和P4基團(tuán)可以任何順序連接在一起，只要最終的化合物與本公開的肽相符。例如，P3可連接至P2-P1;或P1連接至P3-P2。一般地，使用描述的方法，通過使N-末端殘基的ot-氨基去保護(hù)和通過肽聯(lián)接使下一個合適的N-保護(hù)氨基酸的未保護(hù)羧基偶聯(lián)，使肽延長。重復(fù)此去保護(hù)和偶聯(lián)過程直至得到所需的序列。如在流程I所圖示的，可采用組成氨基酸逐步實(shí)施該偶聯(lián)?？刹捎脴?biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)方法，進(jìn)行兩個氨基酸、氨基酸和肽或兩個肽片段之間的偶聯(lián)，所述方法包括諸如疊氮化物法、混合的碳酸-羧酸酸酐(氯曱酸異丁酯)法、碳二亞胺(二環(huán)己基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺或水-可溶性碳二亞胺)法、活性酯(對-硝基苯基酯、7V-羥基丁二酸亞氨基酯)法、伍德沃德試劑K-法、羰基二咪唑法、磷試劑法或氧化-還原法。這些方法中的某些方法(特別是碳二亞胺法)可通過加入1-羥基苯并三唑或4-DMAP增強(qiáng)。可在溶液(液相)中或固相進(jìn)行這些偶聯(lián)反應(yīng)。更明確地，偶聯(lián)步驟包括在偶聯(lián)劑的存在下，一個反應(yīng)物的游離羧基與其它反應(yīng)劑的游離氨基的脫水性偶聯(lián)形成偶聯(lián)的酰胺鍵。這樣的偶聯(lián)劑的描述可在有關(guān)肽化學(xué)的普通教科書，例如，M.Bodanszky,"PeptideChemistry",2ndreved.,Springer-Verlag,Berlin,Germany,(1993)中找到。適宜的偶聯(lián)劑的實(shí)例為在JV,AT-二環(huán)己基碳二亞胺或,乙基-A^-[(3-二曱基氨基)丙基]碳二亞胺存在下的鳳A^二環(huán)己基碳二亞胺、1-羥基苯并三唑。實(shí)用和有益的偶聯(lián)劑是商業(yè)上可獲得的六氟磷酸(苯并三唑-l-基氧基)三-(二曱基氨基)轔，其或者單獨(dú)或者在1-羥基苯并三唑或4-DMAP的存在下起作用。另一個實(shí)用和有益的偶聯(lián)劑是商業(yè)上可獲得的2-(lH-苯并三唑-l-基)-風(fēng)A^V，,AP-四曱基脲鏡四氟硼酸鹽。再一個實(shí)用和有益的偶聯(lián)劑是商業(yè)上可獲得的0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-iV，iVU-四甲基脲錄、六氟磷酸鹽。偶聯(lián)反應(yīng)在惰性溶劑，如二氯甲烷、乙腈或二甲基曱酰胺中進(jìn)行。加入過量的叔胺，如二異丙基乙基胺、,曱基嗎啉、W-甲基吡咯烷或4-DMAP以維持反應(yīng)混合物于約8的pH。反應(yīng)溫度通常在0。C和50。C之間和反應(yīng)時間通常在15分鐘和24小時之間。在偶聯(lián)反應(yīng)期間一般必須保護(hù)組成氨基酸的官能團(tuán)，以避免形成不想要的鍵?？捎玫谋Ｗo(hù)基團(tuán)列于，例如，Greene,"ProtectiveGroupsinOrganicChemistry",JohnWiley&Sons,NewYork和"ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology",Vol.3,AcademicPress,NewYork(1981)中。必須保護(hù)偶聯(lián)至成長肽鏈的每個氨基酸的a-氨基(APG)。可使用本領(lǐng)域已知的任何保護(hù)基團(tuán)。這樣的基團(tuán)實(shí)例包括1)?；T如曱?；?、三氟乙?；?、酞?；蚿-曱苯磺?；?；2)芳族的氨基甲酸酯基團(tuán)諸如千氧基羰基(Cbz或Z)和取代的千氧基^基和9-藥基曱基氧基羰基(Fmoc);3)脂族氨基甲酸酯基團(tuán)諸如叔-丁氧基羰基(Boc)、乙氧基羰基、二異丙基甲氧基羰基和烯丙氧基羰基；4)環(huán)烷基氨基甲酸酯基團(tuán)諸如環(huán)戊基氧基羰基和金剛烷基氧基羰基；5)烷基諸如三苯基甲基和千基；6)三烷基曱硅烷基諸如三甲基曱硅烷基；和7)含硫醇的基團(tuán)諸如苯基硫代羰基(pheny他iocarbonyl)和二硫代琥珀酰(dithiasuccinoyi)。在一個實(shí)施方案中，a-氨基保護(hù)基團(tuán)或者是Boc或者是Fmoc。用于肽合成的適宜保護(hù)的許多氨基酸衍生物為商業(yè)上可獲得的。在偶聯(lián)下一個氨基酸之前，使新加入的氨基酸殘基的a-氨基保護(hù)基團(tuán)裂解。當(dāng)使用Boc基團(tuán)時，選擇的方法是純凈的三氟乙酸或是在二氯曱烷中的三氟乙酸，或在二氧六環(huán)或在乙酸乙酯中的HC1。然后將得到的銨鹽，或者在偶聯(lián)之前或者在原位用堿性溶液諸如緩沖水溶液，或于二氯甲烷或乙腈或二甲基甲酰胺中的叔胺中和。當(dāng)使用Fmoc基團(tuán)時，選擇的試劑是二甲基甲酰胺中的哌啶或取代的哌啶，但是可使用任何仲胺。去保護(hù)在0。C和通常20-22。C的室溫(rt或RT)之間的溫度下進(jìn)行。在使用任何以上描述的基團(tuán)制備肽期間，必須保護(hù)任何具有側(cè)鏈官能團(tuán)的氨基酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，選擇和使用保護(hù)這些側(cè)鏈官能團(tuán)的適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)，這取決于氨基酸和肽中其它的保護(hù)基團(tuán)的存在。選擇這樣的保護(hù)基團(tuán)是重要的，即在a-氨基的去保護(hù)和偶聯(lián)期間不必去除所述基團(tuán)。例如，當(dāng)使用Boc作為a-氨基保護(hù)基團(tuán)時，以下的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)是適宜的對-曱苯磺酰基(tosyl)部分可用于保護(hù)氨基酸諸如Lys和Arg的氨基側(cè)鏈；乙酰氨基曱基、芐基(Bn)或叔-丁基磺?；糠挚捎糜诒Ｗo(hù)半胱氨酸的含硫化物的側(cè)鏈；千基(Bn)醚可用于保護(hù)絲氨酸、蘇氨酸或羥基脯氨酸的含羥基的側(cè)鏈；和千基酯可用于保護(hù)天冬氨酸和谷氨酸的含羧基的側(cè)鏈。當(dāng)選擇Fmoc用于a-胺保護(hù)時，通常以叔-丁基為基礎(chǔ)的保護(hù)基團(tuán)是可接受的。例如，Boc可用于保護(hù)賴氨酸和精氨酸、叔-丁基醚用于保護(hù)絲氨酸、蘇氨酸和幾基脯氨酸和叔-丁墓酯用于保護(hù)天冬氨酸和谷氨酸。三苯基甲基(Trityl)部分可用于保護(hù)半胱氨酸的含硫化物的側(cè)鏈。一旦完成肽的延長，則去除所有的保護(hù)基團(tuán)。這些方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。再有，在制備本公開化合物中可遵循以下指導(dǎo)。例如，為了形成W為烷基羰基或烷基磺酰基的化合物，將保護(hù)的P3或全肽或肽片段分別偶聯(lián)至適當(dāng)?shù)孽Ｂ然蚧酋Ｂ壬?，所述酰氯或磺酰氯或者為商業(yè)上可獲得的或者通過本領(lǐng)域熟知的方法合成。在制備W為烷氧基羰基的化合物中，將保護(hù)的P3或全肽或肽片段偶聯(lián)至適當(dāng)?shù)穆燃姿狨ド希笳呋蛘邽樯虡I(yè)上可獲得的或者通過本領(lǐng)域熟知的方法合成。對于Boc-衍生物，使用(Boc)20。例如用碳酰氯處理環(huán)戊醇，得到相應(yīng)的氯甲酸酯。在堿諸如三乙胺的存在下，用想要的麗2-三肽處理氯曱酸酯得到氨基甲酸環(huán)戊酯。在制備R"為(NRaRb)羰基的化合物中，如在分".L故.Feb1995;(2);142-144中描述的用碳酰氯，隨后用胺處理處理保護(hù)的P3或全肽或肽片段，或使保護(hù)的P3或全肽或肽片段與商業(yè)上可獲得的異氰酸酯和適宜的堿諸如三乙胺反應(yīng)。在制備R6為(NRaRb)磺?；幕衔镏?，如在WO98/32748中描述的用或者新鮮制備的或者商業(yè)上可獲得的氨磺酰氯、隨后用胺處理保護(hù)的P3或全肽或肽片段。C-末端殘基的a-羧基通常作為可被裂解以形成羧酸的酯(CPG)被保護(hù)?？墒褂玫谋Ｗo(hù)基團(tuán)包括1)烷基酯諸如甲基、三曱基甲硅烷基乙基和叔-丁基，2)芳基烷基酯諸如千基和取代的千基或3)可被溫和的堿處理或溫和的還原手段諸如三氯乙基酯和苯甲酰甲基酯裂解的酯。將得到的Ot-羧酸(由溫和的酸、溫和的堿處理或溫和的還原手段裂解獲得)，在肽偶聯(lián)劑諸如CDI的存在下，與R7S02NH2(^5R7S02C1在氨飽和的四氫呋喃溶液中處理制備)偶聯(lián)，或在堿諸如4-二甲基氨基吡啶(4-DMAP)和/或1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)的存在下與EDAC偶聯(lián)，以結(jié)合于P1，部分，有效地裝配三肽P1'-P1-P2-P3-APG。典型地，在該過程中，使用l-5個當(dāng)量的Pl，偶聯(lián)劑。此外，如果通過以上描迷的方法去除P3保護(hù)基團(tuán)APG并用P4部分置換，和得自裂解(得自由溫和的酸、溫和的^5威處理或溫和的還原手段裂解)的所得到的a-羧酸，在肽偶聯(lián)劑諸如CDI的存在下，與R、02NH2(由在氨飽和的四氫呋喃溶液的R7S02C1處理或者由本文描述方法制備)偶聯(lián)，或在堿諸如4-二甲基氨基吡啶(4-DMAP)和/或1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)的存在下與EDAC偶聯(lián)，以結(jié)合于P1，部分，制備三肽P1，-P1-P2-P3-P4。典型地，在該過程中，使用1_5個當(dāng)量的Pl'偶聯(lián)劑。流程II還顯示其中由三肽羧酸與pr磺酰胺偶聯(lián)構(gòu)成式(i)化合物的通用方法。所述偶聯(lián)反應(yīng)需要使用在溶劑諸如THF中的偶聯(lián)試劑諸如羰基二咪唑，處理羧酸(l)，可加熱至回流，隨后，在^^諸如DBU存在下，在溶劑諸如THF或二氯甲烷中，加入形成的(l)的衍生物至Pl、磺酰胺中。流程II方'法P4-P3-P2-P1P1，P4-P3^>2-P1-PT<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>構(gòu)成式(I)化合物的備選的方法示于流程III中。采用示于流程I的方法使P1、磺酰胺單元偶聯(lián)至P1單元。然后得到的P1-P1、部分可在其氨基末端去保護(hù)。在此通用的實(shí)施例中，使用Boc保護(hù)基團(tuán)，但本領(lǐng)域技術(shù)人員將會認(rèn)識到，一些適宜的氨基保護(hù)基團(tuán)可用于該方法中?？墒褂盟嶂T如三氟乙酸在溶劑諸如二氯乙烷中去除Boc保護(hù)基團(tuán)，提供去保護(hù)的胺如TFA鹽。如流程in中所示，TFA胺鹽可直接用在后續(xù)的偶聯(lián)反應(yīng)中，或作為選擇，可將TFA胺鹽首先轉(zhuǎn)變成HC1胺鹽，并將該HC1胺鹽用于所述偶聯(lián)反應(yīng)。可使用偶聯(lián)試劑，諸如HATU，在溶劑諸如二氯甲烷中，實(shí)現(xiàn)HC1胺鹽(3)與羧基末端P4-P3-P2中間體的偶聯(lián)，提供式(X)化合物(4;)。流程III方法p1pi'，pi-p1'p4—p3-p2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>式(I)化合物構(gòu)成式(I)化合物的備選方法示于流程IV中。在此用偶聯(lián)劑諸如PyBOP，在堿諸如二異丙胺的存在下和在溶劑諸如二氯甲烷中，使Pl-Pr末端胺(l)的鹽酸鹽偶聯(lián)至P2單元的游離夢友基上?？蓪⒌玫降腜2-P1-P1、中間體以兩步法轉(zhuǎn)化為式(I)化合物，其中第一步是用酸諸如TFA在溶劑諸如二氯甲烷中使P2胺末端去保護(hù)。可在堿諸如二異丙胺的存在下，使用標(biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)劑諸如PyBOP和使用溶劑諸如二氯甲烷，將得到的三氟乙酸鹽與P4-P3單元的羧基末端偶聯(lián)，提供式(I)化合物(4)。流程IV方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>如前描述的，用示于通用流程V中的進(jìn)一步描述的該方法，可構(gòu)成用于以上流程中的P4-P3-P2中間體。在此，可將P4-P3中間體(l)的游離羧基末端偶聯(lián)至P2單元的氨基末端，以提供P4-P3-P2二肽(2)。通過使酯基團(tuán)皂化，可使P4-P3-P2中間體的羧基末端去保護(hù)，得到作為游離羧酸(3)的P4-P3-P2。采用本文描述的方法可將中間體樣(3)轉(zhuǎn)化為式①化合物。流程V堿偶聯(lián)劑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>(4)式(I)化合物堿偶聯(lián)劑P2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>方法P4-P3-^P4-P3-P2如本文描述的式(I)化合物也可轉(zhuǎn)化為其它的式(I)化合物。這樣的方法實(shí)例示于流程VI中，其中在P4位具有Boc基團(tuán)的式(I)化合物(l)轉(zhuǎn)化為在P4位具有脲基的式(I)化合物(3)。(1)至(3)的轉(zhuǎn)化可用兩步法進(jìn)行，首先，通過在溶劑諸如二氯甲烷中，用酸諸如TFA處理(l)使(l)轉(zhuǎn)化為胺(2)。可在1個當(dāng)量的堿的存在下，用異氰酸酯諸如異氰酸3又-丁基酯處理所得到的胺TFA鹽，提供其中P3部分;波脲封端的式(I)化合物(3)。如之前指出的，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會認(rèn)識到，中間體(2)可用作起始原料用于制備其中P3基團(tuán)被酰胺或磺酰胺或硫脲或磺酰胺封端的式(I)化合物。可采用形成所述P4官能團(tuán)的標(biāo)準(zhǔn)條件，由胺構(gòu)成所述式(I)化合物。流程VI方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>在構(gòu)成式(I)化合物中，采用以上概述和以下將更詳細(xì)描述的通用方法將pr末端結(jié)合到分子中。在某些實(shí)施例中，pr單元是環(huán)烷基-或烷基-磺酰胺，其為商業(yè)上可獲得的或可從相應(yīng)的烷基-或環(huán)烷基-磺?；龋ㄟ^用氨處理所述磺酰氯制備?；蛘?，采用流程vn中概述的通用方法，可合成這些磺酰胺。在此，例如通過用叔-丁基胺處理，使市售可獲得的3-氯代-丙基石黃酰氯(l)轉(zhuǎn)化為適宜的保護(hù)磺酰胺。然后通過用2當(dāng)量的堿諸如丁基鋰，在溶劑諸如THF中，將得到的磺酰胺(2)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的環(huán)烷基磺酰胺。通過用酸處理，可使得到的環(huán)烷基磺酰胺去保護(hù)，以提供想要的未保護(hù)的環(huán)烷基磺酰胺。流程VII<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>偶聯(lián)至PI酸，隨后延長式(l)化合物)也可采用以上所述方法的修正法，將取代的環(huán)烷基磺酰胺結(jié)合到式(I)化合物中。例如，可用2個當(dāng)量的堿諸如丁基鋰處理流程VIII中的中間體2,并可用親電子試劑諸如曱基碘處理所得到的反應(yīng)混合物，以提供取代的環(huán)烷基磺酰胺(3)?？墒乖撝虚g體(3)在N-末端去保護(hù)，所得到的化合物(4)用作制備式(I)化合物中的中間體。流程VIII<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>(2)2)親電子試劑，egMel(3)酸H2NP1'(4)Y.Me偶聯(lián)至Pl酸，隨后延長式(l)化合物可按下法在原位制備氨磺酰氯(2)。向于維持在低溫諸如-20。C的溶劑諸如THF中的氯磺酰異氰酸酯1(如1當(dāng)量)中加入水(如1當(dāng)量)，并且將得到的溶液使之溫?zé)嶂?°C。向該溶液中加入堿，諸如無水三乙胺(如l當(dāng)量)，隨后加入胺(如l當(dāng)量)。然后使該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀^濾并濃縮濾液得到想要的磺酰胺(3)。依照在流程X中闡釋的合成路徑，可將磺酰胺結(jié)合到式(I)化合物中。在那里，用活性劑諸如CDI處理羧酸P1單元(l)。在分開的燒瓶中，將強(qiáng)堿加至以上描述的磺酰胺溶液中并且攪拌所得到的反應(yīng)混合物數(shù)小時，之后，將反應(yīng)混合物加至含活化的羧酸的燒瓶中，以提供酰基磺酰胺衍生物(2)。如本文描述的中間體樣2可轉(zhuǎn)化為式(I)化合物。流程X<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>式(I)化合物(2)械應(yīng)該注意的是，如在流程XI中闡釋的，也可從三肽羧酸經(jīng)一步制備?；酋０费苌铩Ｔ谏墒?i)化合物中使用的pr中間體在某些情況下衍生自磺酰胺衍生物。在這樣的情況下，可通過幾種合成途徑，例如通過在流程ix中概述的通路獲得磺酰胺中間體。流程IX<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>式(I)化合物在生成式(I)化合物中使用的Pl單元在某些情況下是商業(yè)上可獲得的，但可使用對本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法和以本文描述的非限制的含義另外合成，隨后使用本文描述的方法結(jié)合到式(I)化合物中?？砂凑樟鞒蘹n中概述的通用方法合成取代的pi環(huán)丙基氨基酸。在堿產(chǎn)物的存在下，用1,4-二卣代丁烯(2)處理商業(yè)上可獲得的或易于合成的亞胺(l),提供產(chǎn)物亞胺(3)。然后使(3)經(jīng)酸解，提供具有與羧基同側(cè)的烯丙基取代基的(4)作為主要產(chǎn)物?？墒褂肂oc基團(tuán)保護(hù)(4)的胺部分，以提供完全保護(hù)的M酸(5)。該中間體是可經(jīng)酶法拆分的外消旋物，其中(5)的酯部分經(jīng)蛋白酶裂解以提供相應(yīng)的羧酸。不受限于任何特別的理論，相信該反應(yīng)是選擇性的，其中對映異構(gòu)體之一以比其鏡像經(jīng)歷更高速率的反應(yīng)，提供對中間體外消旋物的動力學(xué)拆分。在本文所引用的實(shí)例的實(shí)施方案中，整合進(jìn)式(I)化合物的立體異構(gòu)體是具有(lR,2S)立體化學(xué)的(5a)。在酶的存在下，該對映異構(gòu)體不經(jīng)歷酯裂解并由此從反應(yīng)混合物收獲對映異構(gòu)體(5a)。然而，其它的對映異構(gòu)體，具有(lS,2R)立體化學(xué)的(5b)經(jīng)歷酯裂解，即水解，以提供游離酸(6)。至該反應(yīng)完成時，用常規(guī)方法例如，水提取方法或?qū)游?，可將?5a)從酸產(chǎn)物(0中分離。提取含水流程XI方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>RPh、haloN、CO,R("R=H,烷基，芳基halo(2)1)MOtBu/甲苯HCIH2nZC02P(4)(Boc)20,減H、ZBocNTC02PB45(外消旋物)1:1混合物(5a)(1R，2S)和(5b)(1S,2R).2)TBME提取3)含水HCIR(3)H、N|Z、C02PBoc+H(2R)H(5a)分離的NC02HBoc(6)制備P2中間體和式(I)化合物的非限制性方法在以下的流程中顯示。應(yīng)該注意的是，在許多情況下，僅對中間體的一個位置的反應(yīng)進(jìn)行描述。然而，應(yīng)該理解，這才羊的反應(yīng)可用于賦予對該中間體中其它的位置進(jìn)行<務(wù)飾。而且，在具體實(shí)例中給定的所述中間體、反應(yīng)條件和方法廣泛應(yīng)用于具有其它取代模式的化合物中。例如，按照闡述的合成路徑，可合成在流程xin中的式(i)化合物中發(fā)現(xiàn)的P2單元。此處，用有機(jī)金屬劑諸如Grignard試劑(或者選擇烷基或芳基鋰物質(zhì)或者選擇烷基或芳基鋅物質(zhì))處理商業(yè)上可獲得的W-Boc-4-氧代-L-脯氨酸，以提供其中脯氨酸的C4位置上具有R取代基和游離叔羥基的中間體(2)。然后可將中間體(2)偶聯(lián)至所示的P1-P1、片段和將得到的中間體(3)轉(zhuǎn)化為所示的式00化合物。流程XIII<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>如在流程XIII中描述的合成式(I)化合物的備選途徑示于流程XIV中。經(jīng)由Grignard加成至后期的中間體(5),產(chǎn)生脯氨酸基團(tuán)的C4位置的官能化，以提供式(I)化合物。從商業(yè)上可獲得的中間體(l)開始，經(jīng)由4-步驟程序，可用到中間體(5)，第一步包括使(l)偶聯(lián)至本領(lǐng)域確定的P1-P1、中間體偶聯(lián)試劑。對中間體(2)的iV-Boc基團(tuán)進(jìn)行酸-催化的去保護(hù)，提供游離胺中間體(3),其隨后與P3-P4片段偶聯(lián)以提供中間體(4)?？墒褂醚趸噭┲T如Dess-Martin試劑，使中間體(4)中C4氬基經(jīng)選擇性氧化，以提供中間體(5)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula>可從相應(yīng)的R4是羥基的式(I)化合物合成R4是氫的式(I)化合物。備選地，可從任何用于制備R4是羥基的式(I)化合物的中間體合成R是氫的式(I)化合物。例如可如流程XV中所示，制備合成R"是氫的式(I)化合物?？蓮南鄳?yīng)的羥基類似物(1)制備所述化合物(3)。從類似(l)的化合物形成類似(3)的化合物的方法需要使脯氨酸C4羥基還原或脫氧化。有相當(dāng)多的本領(lǐng)域確定的技術(shù)用于醇類的還原和/或脫氧化，并且特別是叔醇可提供從類似(1)的化合物形成類似(3)的化合物。例如在如下參考文獻(xiàn)中已有報告使醇直接還原為相應(yīng)的鏈烷(流程XV的方法1):Org.C/zew.2001,66,7741。在所述文獻(xiàn)中，描述了醇還原為鏈烷，其中用氯代二苯基硅烷和于溶劑諸如二氯乙烷中的催化量的三氯化銦處理所述醇類，以提供相應(yīng)的鏈烷。所述反應(yīng)可在室溫中進(jìn)行,但在某些情況下可需要加熱。從R"是羥基的式(I)化合物形成W是氫的式(I)化合物的備選方法在流程XV中的過程2顯示。在那里，類似流程XIV<formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula>(例如使用Barton脫氧化方法)。備選地，例如使用還原劑那樣，可使示于2中的活化的醇還原為相應(yīng)的鏈烷。流程XV中這些用于使1轉(zhuǎn)化為3的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。流程XV方法l:使醇直接還原為鏈烷OH1^H、N'Y'V^N'OR*HVR3,一52(1)式(I)化合物R6-N"。oXHR5H0。4-R7H、N'T'V、、N^方法2的步驟R52活化基團(tuán)的還原<3)式oo化合物方法2的步驟l醇的活化(2>式(I)化合物應(yīng)該注意的是，將有機(jī)金屬試劑加至脯氨酸衍生物1的酮部分(流程XVI)在本領(lǐng)域是非常確定的。例如，Hruby和合作者f7.Og.C/2ew.2001,M,3593)已經(jīng)描述加入溴化苯基鎂至通式結(jié)構(gòu)1的中間體中(流程XVI)。這些結(jié)果提供證據(jù)，證明在用叔-丁基酯基團(tuán)作為C2羧基部分的保護(hù)基團(tuán)時，得到想要的1,2加成產(chǎn)物(流程XVI的2)的最佳得率。另外，該工作提供了清楚的的證據(jù)，即X-線結(jié)晶學(xué)的形成是由于該加成反應(yīng)的立體化學(xué)結(jié)果。特別地，作為前述的Grignard加成至酮1的結(jié)果，得到其中C4羥基和C2羧基呈現(xiàn)關(guān)于5元環(huán)的順位相對取向(arelativeorientation)的單一產(chǎn)物。在流程XVI的結(jié)構(gòu)1的上下文中，從此結(jié)構(gòu)確定，在R3M加至酮1的端面(face)選擇性推測為a。即，有機(jī)金屬選擇性地加至l的羰基的潛手性面(re-face)底面(bo加mface),以提供相應(yīng)的具有立體化學(xué)顯示的叔醇(2)。流程XVI<formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula>NlfOPl(2I)Hruby的上述工作描述加入特殊的Grignard試劑至1的衍生物(流程XVI)。然而，加入多種Grignard試劑至脯氨酸1是在本公開中的示例。描述將有機(jī)金屬劑包括Grignard試劑加成至酮的文獻(xiàn)的主要部分是重要的并且在本領(lǐng)域的一般概述中作了總結(jié)，諸如C謹(jǐn)/re/ze服》e(9rg顯'cF朋c"owa/Graw/7"ra"一，加'o肌Volume2:S"f/2e^:CaHo/7w"/owe/她rac^纖加ac/7e(iZ)_yay'"g7eEditorinChiefAlan.R.Katritzky,etal.1995.Chapter2.02,page37。此類反應(yīng)也在C/7re/2e腦've5y涵w's.EditorinChiefBarryMTrost,Volume1:AdditionstoC國Xpi-鍵s(part1).1991中描述。本領(lǐng)域近期的研究提供進(jìn)一步使在對酮的加成反應(yīng)中的Grignard試劑最優(yōu)化的條件，并且這些著作在本公開中可能是有用的。例如Ishihara和合作者(Org.Lett.2005,Vol.7,No.4,573)最近描述形成和使用鎂鹽復(fù)合物(magnesiumatecomplexes)。4美鹽復(fù)合物R3MgLi，衍生自Grignard試劑和烷基鋰。如由Ishihara描述的，在對酮的反應(yīng)中，這些復(fù)合物提供極好的1,2加成產(chǎn)物得率。在分開的研究中，Knochel和合作者(Angew.ChemInt.Ed.2006,",497)已經(jīng)描述聯(lián)合使用可溶性鑭系鹽諸如LnCl3和有機(jī)金屬鎂試劑。這些鑭系鹽的存在導(dǎo)致改善對羰基化合物的1,2加成反應(yīng)效率。這些在本文引用的著作和參考文獻(xiàn)，確立關(guān)于在簡單的加成至羰基化合物中優(yōu)化Grignard反應(yīng)技術(shù)狀況并用作本公開重要的信息來源D還應(yīng)該注意的是，參與對酮的加成反應(yīng)中的一系列有機(jī)金屬試劑。包括在該著作主體的是試劑諸如芳基鋰、烷基鋰和雜芳基鋰試劑，在以1,2方式加至羰基部分方面，它們是熟知的。例如，由Dondoni和合作者(丄Og.C/zem.2005，76,9257)近期的研究中，用BuLi使苯并噻唑(benzothioazole)鋰化并且將得到的C2-鋰物質(zhì)以1,2方式加至內(nèi)酯。通過類似的鋰化的苯并噻唑?qū)⑵谕?,2方式加至流程XVI的酮1中，以提供2a類的中間體。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)可，衍生自雜環(huán)諸如嗯哇和p塞峻以及咪唑的有機(jī)金屬試劑也可以參與對酮1的1,2加成反應(yīng)。文獻(xiàn)中有相當(dāng)?shù)钠U釋用于這些雜環(huán)系統(tǒng)中的每一個的獨(dú)特條件，并且該信息易于為本領(lǐng)域技術(shù)人員所利用。例如，在對酮的加成反應(yīng)中，應(yīng)用衍生自苯并噁唑或嗯唑的有機(jī)金屬試劑，需要使用鋰鎂鹽。由Bayh和合作者近期的特殊研究在J.C/ze肌，2005,70,5190中描述。流程XVI的苯并嗨唑與酮1的加成將提供獲得2b樣中間體的途徑。有重要的在先文獻(xiàn)，涉及使用一系列寬范圍的衍生自雜環(huán)的有機(jī)金屬試劑與酮的加成。例如Behinda和合作者的著作(Tet.Lett.42,2001,647)描述鋰化的苯并咪唑的形成和其與簡單內(nèi)酯的加成。類似地，在流程XVI的對酮的加成反應(yīng)中使用該鋰化的苯并咪唑?qū)⑻峁┇@得2c樣中間體的途徑。另夕卜，由Kawasaki和合作者(Bioorganic和MedicinalChem.Lett.73,2003,87)的近期研究描述一系列鋰化的雜芳族化合物的形成和它們的針對活化的酰胺的加成反應(yīng)。類似于在流程XVI的對酮的加成反應(yīng)中使用這些鋰化的雜芳族中間體，將提供獲得中間體2d-2k的途徑。在對酮1的加成1,2反應(yīng)中使用衍生自聯(lián)芳基或雜芳基-芳基系統(tǒng)的有機(jī)金屬劑，也與本公開有關(guān)。將這類有機(jī)金屬試劑加成至酮1中將提供獲得21和2m樣中間體的途徑。應(yīng)該注意的是，在本發(fā)明的例證中，為了后續(xù)的在流程XVI的對酮的加成反應(yīng)中使用，合成聯(lián)芳基或雜-芳基有機(jī)金屬劑可能是必需的。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識到描述制備該類型的有機(jī)金屬劑及其前體的文獻(xiàn)中有意義的主要部分。例如由Chinchilla和合作者近期的綜述(Chem.Rev.2004,104,2667)描述了金屬化的雜環(huán)的制備及其使用。制備聯(lián)芳或雜芳基-芳基系統(tǒng)的基礎(chǔ)化學(xué)常常應(yīng)用Suzuki樣偶聯(lián)反應(yīng)。由GregoryFu發(fā)表的文獻(xiàn)主要部分描如下Jy4GS2004,"6,1340;Jv4GS,2002,"《13662;C/em.五d2002,4/,No.ll,1945;Xngew.C&m.J敗五d2002,W,No.20,3910;WGS2002，"2,4020;JJGS2001,"3,10099;Og.2001，Vol.3,No.26，4295;JwgewCZze附./W.1998,37,No.24,3387。除了該著作的主體外，本領(lǐng)域的重要的綜述可易于獲得，諸如Rossi在5y"f/e^y2004,No.15,2419中的文獻(xiàn)。實(shí)施例本公開現(xiàn)在將結(jié)合某些優(yōu)選的實(shí)施方案加以描述，所述實(shí)施方案并不意欲限制本公開的范圍。相反，本公開涵蓋所有的如可包括在權(quán)利要求書范圍內(nèi)的備選方案、》多正和等價物。因而，以下的包括具體實(shí)施方案的實(shí)施例將闡明本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)踐，應(yīng)該理解，這些實(shí)施例是為了闡明某些實(shí)施方案的目的，并且呈現(xiàn)出來以提供相信是最有用的并使^f方法和概念方面的描述易于理解。除非另有指明，溶液百分率表示重量對體積的關(guān)系，而溶液比率表示體積對體積的關(guān)系?；蛘咴贐ruker300、400或500MHz光譜儀上記錄核磁共振(NMR)頻譜；以每百萬分之幾報告化學(xué)位移(S)?？焖賹游鲆罁?jù)Stiir的快速層析技術(shù)(丄(>g.C/2e/n.1978,43,2923)在硅膠CSi02)上進(jìn)行。部分A:中間體的制備I.Pl中間體的制備1.外消旋的n凡2"/a&2i^-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的制備(7個方法中的)方法1C1H3N、/CC^Et步驟1:CHC)H3ClN八C02EtNa2S04/TBMEEt3N、N'C02Et將甘氨酸乙酯鹽酸鹽(303.8g,2.16mol)懸浮于叔-丁基曱醚(1.6L)中。加入苯甲醛(231g,2.16mol)和無水硫酸鈉(154.6g,1.09mol)且用水-水浴將該混合物冷卻至0。C。于室溫下，經(jīng)30分鐘逐滴加入三乙胺(455mL，3.26mol)并攪拌混合物48小時。然后通過加入冰冷的水(lL)猝滅反應(yīng)，并分離有機(jī)層。用叔-丁基甲醚(0.5L)提取水相并用飽和經(jīng)MgS04干燥，過濾并真空濃縮得到392.4g稠厚的黃色油樣W-千基亞胺產(chǎn)物，其可直接用于下一步驟。〗HNMR(CDCl3,300MHz)S1.32(t，J=7.1Hz,3H),4.24(q,J=7.1Hz,2H),4.41(d,J-l.lHz,2H),7.39-7.47(m,3H),7.78-7.81(m,2H),8.31(s,1H)。步驟2:、、N^^C02EtBOC(乖C〇2Et1)ldOtBu甲苯/RT2)H30+3)NaOH4)(BOC)20向于無水曱苯(l.2L)中的叔-丁醇鋰(84.06g,1.05mol)的懸浮液中，用60分鐘逐滴加入甘氨酸乙酯(100.4g,0.526mol)的W-千基亞胺和反式-1,4-二溴代-2-丁烯(107,0g,0.500mol)于無水甲苯(0.6L)中的混合物中。加入完成后，通過加入水(lL)和叔-丁基曱醚(TBME,1L)幹滅該深紅色混合物。分離水相并用TBME(lL)第二次提取。合并有機(jī)相，加入1NHC1(1L)并于室溫下攪拌該混合物2小時。分離有機(jī)相并用水(0.8L)提取。然后合并水相，用鹽(700g)飽和，加入TBME(1L)和使該混合物冷卻至0。C。然后逐滴加入10NNaOH使攪拌的混合物堿化至pH14，分離有機(jī)層并用TBME(2x500mL)提取水相。合并的有機(jī)提取物經(jīng)干燥(MgS04),過濾并濃縮至1L的體積。向該游離胺的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(131.0g,0.6mol)并于室溫下攪拌該混合物4天，將額外的二碳酸二叔丁基酯(50g,0.23mol)加入反應(yīng)物中，使該混合物回流3小時，然后使之冷卻至室溫過夜。反應(yīng)混合物經(jīng)MgS04干燥，過濾并真空濃縮得到80g的粗原料。該殘余物經(jīng)快速層析(2.5kg的Si02,用1%至2%甲醇/二氯甲烷洗脫)純化，得到57g(53%)黃色油樣外消旋的7V-Boc-(lA,lSy(l&M)-l-MJ-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯，將其置于水箱中固化^NMR(CDCl3,300MHz)S1.26(t,J=7.1Hz,3H),1.46(s,9H),1.43-1.49(m,1H),1.76-1.82(brm,1H),2.14(q,J=8.6Hz,1H),4.18(q,J=7.2Hz,2H),5.12(ddJ-10.3,1.7Hz,1H),5.25(brs,IH),5.29(dd,J=17.6,1.7Hz,IH),5.77(ddd,J47.610.3,8.9Hz,IH);MSm/z254.16(M-l)。步驟3:將iV-Boc-(l尺25)/(l&2i)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(9.39g,36.8mmol)溶解于4NHCl/二氧六環(huán)(90mL,360mmol)中并于室溫下攪拌2小時。濃縮反應(yīng)混合物以提供(1^25)/(1&2巧-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽，定量得率(7g,100%)。'HNMR(甲醇-d4)S1.32(t,J=7.1,3H),1.72(dd,J=10.2,6.6Hz,IH),1.81(dd,J=8.3,6.6Hz,IH),2.38(q,J=8.3Hz,IH),4.26-4.34(m,2H),5.24(dd,10.3，1.3Hz,IH)5.40(d,J=17.2，IH),5.69-5.81(m,IH)。制備外消旋的W-Boc-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的備選途徑〖2個方法中的〗方法21)KOtBu/甲苯一78。Cto0GC、NC02EtrC1H,,C02Et2)頻HC1于-78。C，向叔-丁醇鉀(11.55g,102.9mmol)于THF(450mL)的溶液中加入商業(yè)上可獲得的于THF(112mL)中的甘氨酸乙酯(25.0g,93.53mmol)的A^V-二千基亞胺。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?。C,攪拌40分鐘，然后冷卻回到-78。C。向該溶液中加入反式-l,4-二溴代-2-丁烯(20.0g,93.50mmol)，于0。C攪拌該混合物1小時并冷卻回到-78。C。加入叔-丁醇鉀(11.55g,102.9mmol),使該混合物立即溫?zé)嶂?。C和再攪拌1小時，之后真空濃縮。使粗產(chǎn)物溶于乙醚(530mL)中，加入1Naq.HCl溶液(106mL,106mmo1)，將得到的兩相混合物于室溫下攪拌3.5小時。各層分離并用乙醚(2x)洗滌水層并用飽和的aq.NaHC03溶液堿化之。用乙醚(3x)提取想要的胺，并且用鹽水洗涂合并的有機(jī)提取物，干燥(MgS04)并真空濃縮以得到游離胺。用4NHC1的二氧六環(huán)溶液(100mL,400mmol)處理該材料并濃縮，得到棕色半-固體樣(1&25)/(1&2/)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(5.3g,34%得率)，與得自方法A的物質(zhì)相同，不同的是存在少量未鑒定的芳族雜質(zhì)(8%)。2.7^600(1尺2^/0&2^)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的拆全外消旋物(1/，2S)和(1&2W)的1:1混合物拆分A向維持于39°C和于300rpm攪拌的裝在12升夾套反應(yīng)器中的磷酸鈉緩沖溶液(0.1M,4.25L,pH8)中，加入511克的堿性蛋白酶(Alcalase)2.4L(約425mL)(NovozymesNorthAmericaInc.)。當(dāng)〉'昆合物的溫度達(dá)到39°C時，通過加入50%NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)至8.0。然后用40分鐘時間加入外消旋的A^Boc-(lR,2S)/(lS,2R)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(85g)于850mL的DMSO中的溶液。然后使反應(yīng)溫度維持于40。C計24.5小時，在此期間，于1.5小時和19.5小時的時間點(diǎn)，用50。/。NaOH水溶液將混合物的pH調(diào)節(jié)至8.0。24.5小時后，經(jīng)測定酯的對映體過量為97.2%并將反應(yīng)冷卻至室溫(26。C)并攪拌過夜(16小時)，之后經(jīng)測定酯的對映體過量為100%。然后用50%NaOH將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至8.5，用MTBE(2x2L)提取得到的混合物。然后用5%NaHCO3(3xl00mL)、水(3x100mL)洗滌合并的MTBE提取液，真空濃縮得到淺黃色固體樣對映異構(gòu)體純的A^Boc-(lR,2S)M-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(42.55g;純度97%@210nm，不含酸；100。/o對映異構(gòu)體過量("ee").然后用50%H2S04使得自才是取過程的水層酸化值pH2并用MTBE(2x2L)提取。用水(3x100mL)洗滌MTBE提取液并濃縮，得到淺黃色固體樣酸(42.74g;純度99%@210nm,不含酯)。<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>拆分B向于24孔板(容量10mL/孔)的孔中的0.5mL100mMHepsWa緩沖液(pH8.5)中，力口入O.lmL的灑維奈斯16.0L(來自克勞氏芽孢桿菌(Bacillusclausii)的蛋白酶)(NovozymesNorthAmericaInc.)和夕卜消S走的7V-Boc-(lR，2S)/(lS,2R)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(10mg)于0.1mL的DMSO中的溶液。密封板并于40°C、250rpm下孵育。18小時后，經(jīng)如下測定酯的對映體過量為44.3%:去除O.lmL的反應(yīng)混合物并用1mL乙醇均勻混合；離心后，取IO微升("iliL")的上清液用手性HPLC分析。向剩余的反應(yīng)混合物中加入O.lmL的DMSO,并于40°C、250rpm下將板再孵育3天，之后將4mL乙醇加至孔中。離心后，取10卞L的上清液用手性HPLC分析，經(jīng)測定酯的對映體過量為100%。拆分C向于24孔板(容量10mL/孑L)的孔中的0.5mL100mMHeps-Na緩沖液(pH8.5)中，加入0.1mL的內(nèi)肽酶(Esperase)8.0L(來自嗜堿耐高溫桿菌(Bacillushalodurans)的蛋白酶)(NovozymesNorthAmericaInc.)和外消旋的iV-Boc-(lR，2S)/(lS,2R)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(IOmg)于0.1mL的DMSO中的溶液。密封板并于40°C、250rpm下孵育。18小時后，如下測定酯的對映體過量為39.6%:去除0.1mL的反應(yīng)混合物并用1mL乙醇均勻混合；離心后，取10pL的上清液用手性HPLC分析。向剩余的反應(yīng)混合物中加入0.1mL的DMSO,并于40。C、250rpm下將板再孵育3天，之后將4mL乙醇加至孔中。離心后，取10pL的上清液用手性HPLC分析，經(jīng)測定酯的對映體過量為100%。樣品分析按照以下方法進(jìn)行1)樣品制備將約0.5mL的反應(yīng)混合物與IO體積的乙醇均勻混合。離心后，將10pL的上清液注射至HPLC柱上樣。2)轉(zhuǎn)化測定;f主YMCODSA,4.6x50mm,S-5jim溶劑A,lmMHCl于水中；B,乙腈梯度30%B1分鐘；30%-45%B超過0.5分鐘；45%B1.5分鐘；45%-30%B超過0.5分鐘。流速2mL/minUV沖全測210nm保留時間酸，1.2分鐘；酯，2.8分鐘。3)酯的對映體過量測定柱CHIRACELOD-RH,4.6xl50mm,S-5pm流動相乙腈/50mMHC104于水(67/33)中流速0.75mL/分鐘。UV檢測210nm.保留時間(lS^R)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸5.2分鐘；外消旋物(lR,2S)/(lS,2R)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯18.5分鐘和20.0分鐘；(lR,2S)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯18.5分鐘。拆分D在20L夾套反應(yīng)器中，將5L的0.3M磷酸鈉緩沖液(pH8)維持于38。C并于130rpm下攪拌。將4升的堿性蛋白酶(Alcalase)2.4L(NovozymesNorthAmericaInc.)和1升的DI水力口至反應(yīng)器中。當(dāng)混合物的溫度接近38。C時，用10NNaOH調(diào)節(jié)pH至7.8。在超過l小時的時期內(nèi)，經(jīng)由加液漏斗將外消旋的7^800(111,23)/(15,211)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(500克)于5升的DMSO的溶液加至反應(yīng)器中。然后調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度至48。C。21小時后，酯的對映體過量達(dá)到99.3%。于24小時時停止加熱并使反應(yīng)緩慢冷卻降至室溫(約25。C)并攪拌過夜。用10NNaOH調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物的pH至8.5,并用MTBE(2x4L)提取該混合物。用5%NaHC03(3x400mL)和水(3x400mL)洗滌合并的MTBE提取液并濃縮，得到淺黃色結(jié)晶樣對映異構(gòu)體純的A^Boc-(lR,2S)Al-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(259g;純度96.9%@210nm，不含酸；100%ee)。拆分E在20L夾套反應(yīng)器中，將10L的0.1M磷酸鈉緩沖液(pH8)維持于40°C并于360rpm下攪拌。將1.5L的堿性蛋白酶(Alcalase)2.4L(NovozymesNorthAmericaInc.)力口至反應(yīng)器中。當(dāng)混合物的溫度接近38。C時，用10NNaOH調(diào)節(jié)pH至8.0。在超過l小時的時期內(nèi)，經(jīng)由加液漏斗將外消旋的A^-Boc-(lR,2S)/(lS,2R)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(200克)于2L的DMSO的溶液加至反應(yīng)器中。然后調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度至40。C。3小時后，用10NNaOH調(diào)節(jié)pH至8.0。21小時后，使反應(yīng)冷卻降至25°C。用10NNaOH調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物pH至8.5，且用MTBE(2x5L)提取反應(yīng)混合物。用5%NaHC03(3x500mL)和水(3x200mL)洗滌合并的MTBE提取液并濃縮，得到110g的黃色油。將油置于室溫、低真空(housevacuum)下，得到無色長棒狀結(jié)晶樣對映異構(gòu)體純的A^Boc-(lR,2S)M-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(101g;純度97.9%@210nm,不含酸；100%ee)。用單晶分析(X-線NB#:52795-093,參數(shù)編碼(refcode):634592N1)對結(jié)晶結(jié)構(gòu)對映異構(gòu)體純的A^Boc-(lR,2Sy-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯進(jìn)行特性描述。由于缺乏已知的手性中心或較重的原子，未確定絕對構(gòu)型。經(jīng)由酰胺基與羰基氧原子之間的分子內(nèi)氬鍵(N...03.159A),形成沿著結(jié)晶的a-軸的鏈結(jié)構(gòu)。W-Boc-(lR，2S)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula>晶格參數(shù)的S范圍(。)2.2-65.2觀測到的反射數(shù)(/^2:2284結(jié)晶數(shù)據(jù)化學(xué)式C13H21N104結(jié)晶系統(tǒng)正交晶的空間基團(tuán)尸22Aa=5.2902(1)Aa=90o6=13.8946(2)A90。c=19.9768(3)Ay=90。F=1468.40(4)A3Z=4dx=1.155gcm.晶格參數(shù)反射數(shù)6817晶源MTBE結(jié)晶描述無色棒狀結(jié)晶大小(mm):0.12X0.26X0.30溫度(K):293^鵬(。)65.2(CuKa)測量的反射數(shù)7518獨(dú)立的反射數(shù)2390(i,r=0.0776)吸收系數(shù)(mm"):0.700吸收校正數(shù)(r油-r卿》0.688-1.000拆分F在20L夾套反應(yīng)器中，將5L的0.2M硼酸鈉緩沖液(pH9)維持于45°C并于400rpm下攪拌。將3L的DI水和4L的EX型的灑維奈斯(Savinase)16L(NovozymesNorthAmericaInc.)力口至反應(yīng)器中。當(dāng)混合物的溫度接近45。C時，用10NNaOH調(diào)節(jié)pH至8.5。在超過40分鐘的時期內(nèi)，經(jīng)由加液漏斗將外消旋的7V-Boc-(lR,2S)/(lS,2R)-l畫氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(200克)于2L的DMSO的溶液加至反應(yīng)器中。然后調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度至48。C。2小時后，用10NNaOH調(diào)節(jié)pH至9.0。18小時后，酯的對映體過量達(dá)到72%，并用10NNaOH調(diào)節(jié)pH至9.0。在24小時，溫度降低至35。C。在42小時，溫度升至48。C，并用10NNaOH調(diào)節(jié)pH至9.0。于48小時時，停止加熱，使反應(yīng)緩慢冷卻降至室溫(約25。C)并攪拌過夜。在66小時，反應(yīng)混合物的pH為8.6。用MTBE(2x4L)提取混合物。用5%NaHC03(6x300mL)和水(3x300mL)洗滌合并的MTBE提取液并濃縮，得到淺黃色結(jié)晶對映異構(gòu)體純的iV-Boc-(lR,2Sy-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(101Ag;純度95.9%@210跳不含酸；98.6%ee)。3.手性(lR,2SVl-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的制備oXo丫X、0《于二氧六環(huán)中,hci.hAa\01的4nhci'II，|于N2氣氛下將iV-BOC-(lR,2S)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(8.5g,33.3mmol)與200mL的4NHCl/二氧六環(huán)(Aldrich)于室溫下一起攪拌3小時。減壓下去除溶劑并保持溫度低于40。C。這樣得到6.57g(~100%)淺棕褐色固體樣(lR，2S)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽。^NMR(300MHz,CD3OD)S1.31(t,J=7.0Hz,3H),1.69-1.82(m,2H)，2.38(q,J=8.8Hz,1H),4.29(q,J=7.0Hz,2H),5.22(d,/=10.3Hz,1H),5.40(d,J=17.2Hz,1H),5.69-5.81(m,IH)。MSm/z156(MVl)。4.W-Boc-nR,2S)-l-氨基-2-環(huán)丙基環(huán)丙烷羧酸乙酯的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>6.1-氨基環(huán)丁烷羧酸甲基酯鹽酸鹽的制備Me0"、cl將l-氨基環(huán)丁烷羧酸(100mg,0.869mmol)(Tocris)溶解于10mL甲醇。鼓泡通入HC1氣體2小時。攪拌反應(yīng)混合物18小時，然后真空濃縮，得到144mg的黃色油。用10mL乙醚研磨，提供100mg的白色固體樣標(biāo)題產(chǎn)物。HNMR(CDCl3)S2.10-2.25(m,1H),2.28-2.42(m,1H),2.64-2.82(m,4H),3.87(s,3H)，9.21(brs,3H)。7.外消旋的aR,2RVnS,2S)l-氨基-2-乙基環(huán)丙烷羧酸叔-丁基酯的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>用乙酸釔(5mg,0.022mmol)處理W-Boc-(lR,2S)-l-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸(255mg，1.0mmol)于乙醚(IOmL)的溶液。將該橙色/紅色溶液置于N2氣氛下。在超過l小時的時間內(nèi)，逐滴加入過量的重氮曱烷的乙醚溶液。于室溫下攪拌得到的溶液18小時。用氮?dú)饬魅コ^量的重氮甲烷。將得到的溶液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到粗產(chǎn)物。快速層析(10%乙酸乙酯/己烷)提供210mg(78%)無色油樣A^-Boc-(lR,2S)-l-氨基-2-環(huán)丙基環(huán)丙烷羧酸乙酯。MSm/e270QVT+1)。5.1-叔-丁氣基羰基氨基-環(huán)丙烷-羧酸是商業(yè)上可獲得的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>乙基在M的同側(cè)步驟1:下面所示的2-乙基環(huán)丙烷-l,l-二羧酸二-叔-丁基酯的制備向千基三乙基氯化銨(21.0g,92.2mmol)于50%NaOH水溶液(92.4g于185mLH20中)的懸浮液中加入1,2-二溴代丁烷(30.0g，138.9mmol)和丙二酸二-叔-丁酯(20.0g,92.5mmol)。于室溫下劇烈攪拌反應(yīng)混合物18小時，然后加入水和水的混合物。用二氯甲烷(3x)提取該粗產(chǎn)物并相繼用水(3x)、鹽水洗滌，合并有機(jī)提取液。有機(jī)層經(jīng)過干燥(MgS04)、過濾并真空濃縮。得到的殘余物經(jīng)快速層析(100gSi02,3%乙醚于己烷中)得到直接用于下一步反應(yīng)的標(biāo)題產(chǎn)物(18.3g,67.8mmol,73%得率)。步驟2:下面所示的外消:旋的2-乙基環(huán)丙烷-U-二羧酸叔-丁基酯的制備于0。C，將步驟1的產(chǎn)物(18.3g,67.8mmol)加至叔-丁醇鉀(33.55g,299.0mmol)于無水乙醚(500mL)的懸浮液中，隨后加入H20(1.35mL,75.Ommo1)，并于室溫下劇烈攪拌過夜。將反應(yīng)混合物傾入冰和水的混合物中并用乙醚(3x)洗滌。于0。C,水層用10Q/。aq檸檬酸溶液酸化，用乙酸乙酯(3x)提取。合并的有機(jī)層用水(2x)、鹽水洗滌，干燥(MgS04)、過濾并真空濃縮，得到淡黃色油樣標(biāo)題產(chǎn)物(10g,46.8mmol,69%得率)。歩驟3:下面所示的(！R.2RVnS,2S)2-乙基-l-f2-三曱基硅烷基乙氧基羰基氨基)環(huán)丙烷-羧酸叔-丁基酯的制備向步驟2的產(chǎn)物(IOg，46.8mmol)和3g的新鮮活化的4A分子篩于無水苯(160mL)的懸浮液中，加入三乙胺(7.50mL,53.8mmol)和DPPA(llmL，10.21mmol)。使反應(yīng)混合物回流3.5小時，然后加入2-三曱基甲硅烷基-乙醇(13.5mL,94.2mmol)并使反應(yīng)混合物回流過夜。反應(yīng)混合物經(jīng)過濾，用乙醚稀釋，用10°/"寧檬酸水溶液、水、飽和的NaHC03水溶液、水(2x)、鹽水(2X)洗滌，干燥(MgS04)、過濾并真空濃縮。用10g的Aldrich聚異氰酸酯清除劑樹脂使殘余物懸浮于120mL的二氯甲烷中，于室溫下攪拌過夜并過濾，得到淡黃色油樣標(biāo)題產(chǎn)物(8g,24.3mmol;52%》！HNMR(CDC13)50.03(s,9H),0.97(m,5H),1.20(brm,1H),1.45(s，9H),1.40-1.70(m,4H),4.16(m,2H),5.30(brs,1H)。歩驟4:下面所示的外消旋的nR,2RVOS,2S)l-氨基-2-乙基環(huán)丙烷羧酸叔-丁基酯的制備向步驟3的產(chǎn)物(3g,9mmol)中加入1.0MTBAF的THF(9.3mL,9.3mmol)溶液并將該混合物加熱至回流1.5小時，冷卻至室溫，然后用500mL乙酸乙酯稀釋。該溶液經(jīng)相繼用水(2x100mL)、鹽水(2x100mL)洗滌，干燥(MgS04)，過濾并真空濃縮，提供標(biāo)題中間體。II.Pl'中間體的制備1.環(huán)丙基磺酰胺的制備(7個方法中的)方法1:乙基在羧基的同側(cè)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula>向冷卻至0°C的100mL的THF溶液中鼓泡通入氨氣直至達(dá)到飽和。向該溶液中加入5g(28.45mmol)的環(huán)丙基磺酰基氯(購自ArrayBiopharma)的50mL的THF溶液，將該溶液溫?zé)嶂潦覝剡^夜并再攪拌一天。濃縮該混合物直至剩余1-2mL的溶劑，將其施用于30g的Si02塞上(用30%-60%乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到3.45g(100。/o)白色固體樣環(huán)丙基磺酰胺。^NMR(甲醇-d4)S0.94-1.07(m,4H),2.52-2.60(m,1H);"CNMR(甲醇-d4)55.92,33.01?！?個方法中的)方法2:步驟l:AM夂-丁基-(3-氯代)丙基磺酰胺的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula>將叔-丁基胺(3.0mol,315.3mL)溶解于THF(2.5L)。將溶液冷卻至-20。C。緩慢加入3-氯代丙烷磺?；?1.5mol,182.4mL)。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?4小時。過濾該混合物且真空濃縮濾液。將殘余物溶解于二氯甲烷(2.0L)。得到的溶液經(jīng)用1NHC1(1.0L)、水(1.0L)、鹽水(1.0L)洗滌和經(jīng)Na2SO4干燥。過濾并真空濃縮，得到淺黃色固體，使其從己烷結(jié)晶得到白色固體樣產(chǎn)物(316.0g,990/。)。NMR(CDC13)S1.38(s,9H),2.30-2.27(m,2H),3.22(t,J=7.35Hz,2H),3.68(t,J=6.2Hz,2H),4.35(br,1H)。步驟2:環(huán)丙烷磺酸叔-丁基酰胺的制備o于-78。C,向W-^-丁基-(3-氯代)丙基磺酰胺(2.14g,10.0mmol)于THF(100mL)的溶液中加入正-丁基鋰(2.5M于己烷中，8.0mL,20.0mmol)。用超過l小時的時間使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。真空去除揮發(fā)物。使殘余物在乙酸乙酯和水(200mL,200mL)之間分配。分離的有機(jī)相經(jīng)用鹽水洗滌，經(jīng)Na2S04干燥、過濾并真空濃縮。將殘余物從己烷中再結(jié)晶，得到想要的白色固體樣產(chǎn)物(1.0g,56。/。)。^NMR(CD口3)S0.98-1.00(m,2H),1.18-1.19(m,2H),1.39(s,9H),2.48-2.51(m,1H),4.19(br,1H)。步驟3:環(huán)丙基磺酰胺的制備oO于室溫下攪拌環(huán)丙烷磺酸叔-丁基酰胺(110.0g,0.62mol)的TFA(500mL)溶液16小時。真空去除揮發(fā)物。將殘余物從乙酸乙酯/己烷(60mL/240mL)中再結(jié)晶，得到想要的白色固體樣產(chǎn)物(68.5g,91%)。]HNMR(DMSO-d6)S0.84-0.88(m,2H),0.95-0.98(m,2H),2.41-2.58(m,m),6.56(br,2H)。2.Cl-取代的環(huán)丙基磺酰胺的制備2a.N-叔-丁基-門-甲基)環(huán)丙基-磺酰胺的制備步驟l:N-叔-丁基-(3-氯代)丙基磺酰胺的制備H。w.Nci^^《、o如上描述的制備。步驟2:N-叔-丁基-(l-甲基)環(huán)丙基-磺酰胺的制備將iV-汆-丁基-(3-氯代)丙基磺酰胺(4.3g,20mmol)的溶液溶解于無水THF(100mL)中并冷卻至-78。C。向該溶液中緩慢加入正-丁基鋰(17.6mL,44mmo1,2.5M于己烷中)。去除干水浴并用超過1.5小時的時間使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。然后使該混合物冷卻至-78。C并加入正-丁基鋰(20mmol,8mL,2JM于己烷中)溶液。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，?jīng)2小時的時間再冷卻至-78。C，加入凈的曱基碘(5.68g,40mmol)溶液。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝剡^夜，然后于室溫下用飽和的NH4Cl(lOOmL)猝滅。用乙酸乙酯(100mL)提取之。有機(jī)相經(jīng)用鹽水(100mL)洗滌，干燥(MgS04)、過濾并真空濃縮，得到黃色油，其從己烷結(jié)晶，得到淺黃色固體產(chǎn)物(3.1g,81%):HNMR(CDCl3)S0.79(m,2H),1.36(s,9H),1.52(m,2H),1.62(s,3H),4.10(brs,1H)。步驟3:1-曱基環(huán)丙基磺酰胺的制備將AL^—丁基-(i-甲基)環(huán)丙基磺酰胺(1.91g,10mmol)溶液溶解于TFA(30mL)并于室溫下攪拌反應(yīng)混合物16小時。真空去除溶劑，得到黃色油，其從乙酸乙酯/己烷(1:4,40mL)中結(jié)晶，得到白色固體樣實(shí)施例3，l-甲基環(huán)丙基磺酰胺(1.25g,96。/。)力NMR(CDC13)50.84(m,2H),1.41(m,2H)，1.58(s,3H),4.65(brs，2H)。C4H9N02S的元素分析，計算值C,35.54;H，6.71;N,10.36。測定值C,35.67;H,6.80;N，10.40。2b.1-千基環(huán)丙基磺酰胺的制備采用所描述的合成W-叔-丁基-(l-甲基)環(huán)丙基磺酰胺的方法，但是使用1.05當(dāng)量的千基溴，隨后用10%乙酸乙酯的己烷溶液研磨，以60%得率得到該化合物力NMR(CDCl3)S0.92(m,2H),1.36(m,2H),1.43(s,9H),3.25(s,2H),4.62(brs,1H),7.29-7.36(m,5H)。步驟2:1-卡基環(huán)丙基磺酰胺的制備VNH2歩驟i:,炎-丁基-n-芐基)環(huán)丙基-磺酰胺的制備%，2Ph^X、、。采用所描述的合成1-甲基環(huán)丙基磺酰胺的方法，從iV-炎-丁基(l-千基)環(huán)丙基磺酰胺制備，隨后從最小量的10%乙酸乙酯的己烷溶液中再結(jié)晶，以66%得率得到該化合物力NMR(CDCl3)S0.90(m,2H),1.42(m,2H),3.25(s,2H),4.05(s,2H),7.29(m,3H),7.34(m，2H);13CNMR(CDC13)511.1,36.8,41.9，127.4,128.8,129.9,136.5。2c.1-丙基環(huán)丙基磺酰胺的制備采用所描述的制備1-甲基環(huán)丙基磺酰胺的方法，但在該方法的第二個步驟中使用丙基囟化物替代甲基碘，制備該化合物。2d.1-烯丙基環(huán)丙基磺酰胺的制備步驟l:,叔-丁基-(l-烯丙基)環(huán)丙基磺酰胺的制備依據(jù)在合成W-叔-丁基-(l-甲基)環(huán)丙基磺酰胺中所描述的方法，但用1.25當(dāng)量的烯丙基溴作為親電子試劑，以.97%得率得到該化合物。該化合物無需純化直接用于進(jìn)入下一步反應(yīng)1HNMR(CDC13)S0.83(m,2H),1.34(s,9H),1.37(m,2H),2.64(d,J=7.3Hz,2H),4.25(brs,1H),5.07-5.10(m,2H)，6.70-6.85(m,1H)。步驟2:1-烯丙基環(huán)丙基磺酰胺的制備依據(jù)所描述的合成l-曱基環(huán)丙基磺酰胺的方法，從A^炎-丁基-(l-烯丙基)環(huán)丙基磺酰胺，以40%得率得到該化合物，1-烯丙基環(huán)丙基磺酰胺。該化合物經(jīng)Si02的柱層析純化，使用2%甲醇的二氯甲烷溶液作為洗脫液^NMR(CDC13)S0.88(m,2H),1.37(m,2H),2.66(d,7=7.0Hz,2H),4.80(s,2H)，5.16(m,2H),5.82(m，1H);13CNMR(CDC13)S11.2,35.6,40.7,119.0,133.6.2e.l-n-環(huán)己烯基)環(huán)丙基-磺酰胺的制備步驟1:w-叔-丁基-「i-n-羥基)環(huán)己基i-環(huán)丙基磺酰胺的制備采用所描述的合成A^-叔-丁基-(l-曱基)環(huán)丙基磺酰胺的方法，但用1.30當(dāng)量的環(huán)己酮，隨后從從最小量的20%乙酸乙酯的己烷溶液中再結(jié)晶，以84%得率得到該化合物^NMR(CDCl3)S1.05(m,4H),1.26(m,2H),1.37(s,9H),1.57-1.59(m,6H),1.97(m,2H),2.87(brs,1H),4.55(brs,1H)。步驟2:l-(l-環(huán)己烯基)環(huán)丙基-磺酰胺的制備采用所描述的合成1-曱基環(huán)丙基磺酰胺的方法，從琴炎-丁基-[l-(l-羥基)環(huán)己基]-環(huán)丙基磺酰胺制備，隨后從最小量的乙酸乙酯和己烷中再結(jié)晶，以85%得率得到該化合物，l-(l-環(huán)己烯基)-環(huán)丙基磺酰胺^NMR(DMSO-d6)S0.82(m,2H),1.28(m,2H),1.51(m,2H),1.55(m,2H),2.01(s,2H),2.16(s,2H),5.89(s,1H),6.46(s,2H);13CNMR(DMSO-d6)S11.6,21.5,22.3,25.0,27.2,46.9,131.6,132.2;LR國MS(ESI):200(1Vf隱l)。2f.1-苯曱酰基環(huán)-丙基磺酰胺的制備步驟1:iV-叔-丁基-(l-苯曱?；?環(huán)丙基-磺酰胺的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>采用所描述的合成農(nóng)-丁基-(i-甲基)環(huán)丙基磺酰胺的方法，但用1.2當(dāng)量的苯甲酸甲酯作為親電子試劑，以66%得率得到該化合物。用柱層析經(jīng)Si02以30%-100%二氯甲烷的己烷洗脫使化合物純化^NMR(CDC13)51.31(s,9H),1.52(m,2H),1.81(m,2H),4.16(brs,IH),7.46(m,2H),7.57(m,IH),8.05(d,J=8.5Hz,2H)。步驟2:l-苯甲?；h(huán)丙基磺酰胺的制備采用所描述的合成l-甲基環(huán)丙基磺酰胺的方法，從TV-叔-丁基(l-苯曱?；?環(huán)丙基磺酰胺制備，隨后從最小量的乙酸乙酯的己烷溶液中再結(jié)晶，以87%得率得到該化合物^NMR(DMSO-d6)S1.39(m,2H),1.61(m,2H),7.22(s,2H),7.53(t,</=7.6Hz,2H),7.65(t,J=7.6Hz,IH),8.06(d,7=8.2Hz,2H);13CNMR(DMSO-d6)S12.3,48.4,128.1,130.0,133.4,135.3,192.0。2g.iv-叔-丁基-n-苯基氨基羧基v環(huán)丙基磺酰胺的制備采用所描述的合成w-炎-丁基-(i-曱基)環(huán)丙基磺酰胺的方法，用i當(dāng)量的異氰酸苯基酯，隨后從最小量的乙酸乙酯的己烷溶液中再結(jié)晶，以42%得率得到該化合物:HNMR(CDC13)S1.38(s,9H),1.67-1.71(m,4H),4.30(brs,IH),7.10(t,J=7.5Hz,IH),7.34(t,J=7.5Hz,2H),7.53(t,J=7.5Hz,2H)。3.Cl-取代的環(huán)丙烷磺酰胺的制備使用AA-Boc保護(hù)基團(tuán)3a.制備Cl-取代的環(huán)丙基磺酰胺的關(guān)鍵中間體環(huán)丙基磺酰氨基曱酸叔-丁酯的制備，▽oo1步驟l:3-氯丙基磺酰胺的制備ci\局o將3-氯代丙烷磺酰氯(55g,310.7mmol)溶液溶解于THF(200mL)并在超過30分鐘內(nèi)逐滴加入冷卻至0。C的NH4OH(200mL)的溶液。使該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪?小時，用二氯曱烷(4x500mL)使水層分配多次。合并的二氯甲烷層經(jīng)用1NHCl(150mL)、水(150mL)洗滌，經(jīng)MgS04干燥、過濾并真空濃縮。粗固體從最小量的二氯曱烷的己烷溶液中再結(jié)晶，得到白色固體樣3-氯丙基磺酰胺(45.3g,93%)。&NMR(CDC13)52.34(m,2H),3.32(t,7=7.3Hz,2H),3.70(t,J=6.2Hz,2H),4.83(s,2H);13CNMR(CDC")S27.10,42.63,52.57。步驟2:3-氯丙基磺酰氨基曱酸叔-丁酯的制備oo1用30分鐘向冷卻至0。C的3-氯丙基磺酰胺(30.2g,191.5mmol)、三乙胺(30.2mL,217.0mmol)和4-DMAP(2.40g,19.6mmol)于二氯曱烷(350mL)的溶液中，逐滴緩慢加入二碳酸二叔丁酯(47.2g,216.9mmol)的二氯甲烷(250mL)溶液。使該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀贁嚢?小時，并用1NHCl(300mL)、水(300mL)、鹽水(300mL)分配，經(jīng)MgS04干燥、過濾并真空濃縮得到粗產(chǎn)物。用70mL的5。/。二氯甲烷的己烷研磨該物質(zhì)，得到灰白色固體樣3-氯丙基磺酰氨基甲酸叔-丁酉旨(47.2g,96%):!HNMR(CDC13)S1.51(s,9H),2.33(m,2H),3.60(t，7=7.3Hz,2H),3.68(t,J=6.21Hz,2H);13CNMR(CDC13)S26.50,27.95,42.37,50.40，84.76,149.53。步驟3:環(huán)丙基磺酰氨基甲酸叔-丁酯的制備于氬氣氛下，將正-丁基鋰(74.7mL,119.:5mmo1,1.6M于己烷中)溶液溶解于無水THF(105mL)并冷卻至-78。C。經(jīng)20-30分鐘向該溶液中逐滴加入3-氯丙基磺酰氨基甲酸叔-丁酯(14g,54.3mmol)的無水THF(105mL)的溶液。去除干冰浴并用2小時的時間使該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。用水乙?3.4mL)猝滅該反應(yīng)混合物，真空濃縮并在二氯甲烷(IOOmL)和水(lOOmL)之間分配。有機(jī)相經(jīng)用鹽水(IOOmL)洗滌，干燥(MgS04)、過濾并真空濃縮，得到蠟樣灰-白色固體環(huán)丙基磺酰^4曱酸叔國丁酯(12.08g,100%):力NMR(CDC13)S1.10(m,2H),1.34(m,2H),1.50(s,9H),2.88(m,1H),7.43(s,1H)。13CNMR(CDC13)S6.21,28.00,31.13,84.07,149.82。3b.1-甲氧基-曱基環(huán)丙基-磺酰胺的制備歩驟1:1-甲氧基曱基環(huán)丙基磺酰氨基曱酸叔-丁酯的制備向冷卻至-78°C的溶解于THF(30mL)的環(huán)丙基磺酰氨基曱酸叔-丁酯(l.Og,4.5mmol)溶液中，加入正-丁基鋰(6.4mL,10.2mmol,1.6M于己烷中)并攪拌該反應(yīng)混合物1小時。向該溶液中加入純凈的氯代甲基曱醚(0.40mL,5.24mmol)溶液并使該混合物緩慢溫?zé)嶂潦覝剡^夜。用1NHC1水溶液調(diào)節(jié)溶液pH至3,然后用乙酸乙酯(4x50mL分次)提取。合并的提取液經(jīng)干燥(MgS04)、過濾并濃縮，得到無需再純化直接進(jìn)入下一步反應(yīng)使用的、蠟樣固體的1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰氨基曱酸叔誦丁酯(1.20g，100%):HNMR(CDC13)S1.03(m,2H)，1.52(s,9H),1.66(m,2H),3.38(s,3H),3.68(s,2H),7.54(s,1H);13CNMRVNH2(CDC13)S11.37,28.29,40.38,58.94,73.43,83.61,149.57。歩驟2:1-曱氧基曱基環(huán)丙基磺酰胺的制備°VNH2將1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰氨基曱酸叔-丁酯(l.14g,4.30mmol)溶液溶解于50。/。TFA/二氯甲烷(30mL)溶液中并于室溫下攪拌16小時。真空去除溶劑和殘余物經(jīng)80g的Si02層析(用0%-60%乙酸乙酉旨/己烷洗脫)得到白色固體樣1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰胺(0.55g,經(jīng)兩步總得率77%):HNMR(CDC13)S0.95(m,2H),1.44(m，2H),3.36(s,3H),3.65(s,2H),4.85(s,2H);13CNMR(CDC13)S11.17,40.87,59.23,74.80;LRMSm/z183(M"VNH4)。3c.1-環(huán)丙基甲基環(huán)丙基磺酰胺的制備步驟1:1-環(huán)丙基甲基環(huán)丙基磺酰氨基曱酸叔-丁酯的制備依據(jù)所描述的合成1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰氨基甲酸叔-丁酯的方法，但用1.10當(dāng)量的環(huán)丙基甲基溴作為親電子試劑，以92%得率得到1-環(huán)丙基甲基環(huán)丙基磺酰氨基曱酸叔-丁酯。該化合物無需純化直接進(jìn)入下一步反應(yīng)使用！HNMR(CDC13)50.10(m,2H)，0.51(m,2H),0.67(m，1H)，1.10(m，2H),1.49(s,9H),1.62(m，2H),1.87(d乂^7.0Hz,2H)。步驟2:的制備1-環(huán)丙基甲基-環(huán)丙基磺酰胺依據(jù)所描述的合成l-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰胺的方法，從1-環(huán)丙基甲基環(huán)丙基磺酰氨基甲酸叔-丁酯，以65%得率得到該化合物。該化合物經(jīng)SiCb用0%-60%乙酸乙酯的己烷作為洗脫液用柱層析純化HNMR(CDC13)S0.15(m,2H),0.51(m,2H),1.01(m，2H)，1.34(m,3H),I.86(d，J=7.0Hz,2H),4.83(s,2H);13CNMR(CDC13)54.65，7.74,II.26,35.62,41.21;LRMSm/z193(]VT+NH4)。3d.1-丙基氨甲酰基環(huán)丙烷-磺酰胺的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>步驟l:l-丙基氨甲?；h(huán)丙烷磺酰胺氨基曱酸叔-丁酯的制備依據(jù)所描述的合成1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰氨基甲酸叔-丁酯的方法，但用1.10當(dāng)量的正-丙基異氰酸酯作為親電子試劑，以100%的粗得率得到該化合物。該化合物無需純化直接進(jìn)入下一步反應(yīng)使用^NMR(CDC13)50.10(m,2H),0.51(m，2H),0.67(m,1H),1.10(m,2H),1.49(s,9H),1.62(m,2H),1.87(d,J-7.0Hz,2H)。步驟2:1-丙基氨甲?；h(huán)丙烷-磺酰胺的制備依據(jù)所描述的合成l-甲氧基曱基環(huán)丙基磺酰胺的方法，從1-丙基氨曱?；h(huán)丙烷磺酰胺氨基甲酸叔-丁酉旨，以50%的最佳得率得到該化合物。不同的是不使用層析，原料從最小量的二氯甲烷/己烷再結(jié)晶iHNMR(CDC13)S0.15(m,2H),0,51(m,2H),1.01(m,2H),1.34(m,3H),1.86(d乂7.0Hz,2H)，4.83(s,2H);13CNMR(CDC13)S4.65,7.74,11.26,35.62,41.21;LRMSm/z193(M""+NH4)。3e.l"3.5-二甲基異噁唑-4-基)氨曱酰基環(huán)丙烷磺酰胺的制備歩驟1:1-(3.5-二曱基異嚼唑-4-基)氨甲?；h(huán)丙烷磺酰胺氨基曱酸^又-丁酯的制備依據(jù)所描述的合成1-曱氧基曱基環(huán)丙基磺酰氨基曱酸叔-丁酯的方法，但用1.20當(dāng)量的3，5-二甲基異嗯唑-4-異氰酸酯作為親電子試劑,以100%的粗得率得到該化合物。該化合物無需純化直接進(jìn)入下一步反應(yīng)使用步驟2:l-f3,5-二曱基異嗯唑-4yF)氨甲?；h(huán)丙烷磺酰胺的制備依據(jù)所描述的合成l-曱氧基曱基環(huán)丙基磺酰胺的方法，從1.62g(4.52mmol)的l-(3,5-二甲基異嗯唑-4-基)氨甲?；h(huán)丙烷磺酰胺氨基甲酸叔-丁酯，使用30mL(120mmol)的4NHCl/二氧六環(huán)，攪拌過夜，濃縮并用層析經(jīng)Biotage40M柱(用0%-5%甲醇/二氯甲烷洗脫)，以50%得率得到該化合物(580mg):^h:NMR(曱醇-dt)s1.57(m,2H),1.61(m2H),2.15(s，3H),2.30(s,3H),4.84(s,3H);13CNMR(甲醇-d4)S9.65,10.94,15.01,46.11，114.82,159.45,165.55,168.15;LRMSm/z260(IVT+H)。4.從環(huán)烷基溴制備環(huán)烷基磺酰胺4a.從環(huán)丁基溴制備環(huán)丁基磺酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage77</formula>向冷卻至-78。C的、5.0g(37.0mmol)的環(huán)丁基溴于30mL的無水乙醚(乙醚)溶液中，加入44mL(74.8mmol)的1.7M叔-丁基鋰的戊烷，并用超過1.5小時的時間使該溶液緩侵溫?zé)嶂?35。C。用導(dǎo)管緩慢加入冷卻至-40°C的、新鮮蒸餾的5.0g(37.0mmol)磺酰氯于100mL的己烷溶液至該混合物中。用超過l小時的時間溫?zé)嶂?。C和小心真空濃縮。將該混合物再溶解于乙醚，用一些冰冷的水洗滌一次，干燥(MgS04)、過濾和小心濃縮。將該混合物再溶解于20mL的THF,逐滴加入至500mL的飽和NH3的THF中，并使之?dāng)嚢柽^夜。真空濃縮該混合物至粗黃色固體，并從最小量的二氯甲烷的己烷加上1-2滴曱醇再結(jié)晶，得到1.卯g(38。/。)的白色固體樣環(huán)丁基磺酰胺。HNMR(CDC13)S1.95-2.06(m,2H),2.30-2.54(m，4H),3.86(p，J=8Hz，1H),4.75(brs，2H);13CNMR(CDC13)S16.43,23.93,56.29。HRMSm/z(M-H)-，C4H8NS02:計算值134.0276,實(shí)測值134.0282。4b.環(huán)己基磺酰胺的制備將18.5mL(37.0mmol)的2M氯化環(huán)己基鎂的醚溶液，逐滴加入至冷卻至-78°C的、新鮮蒸餾的3.0mL(37.0mmol)磺酰氯(得自Aldrich)于100mL的己烷溶液中。用超過1小時的時間使該混合物溫?zé)嶂?。C，然后小心真空濃縮。將該混合物再溶解于乙醚(200mL)中，用一些冰冷的水(200mL)洗滌一次，干燥(MgS04)、過濾并小心濃縮。將該混合物再溶解于35mL的THF，逐滴加入至500mL的于THF飽和的NH3中，并使之?dāng)嚢柽^夜。真空濃縮該混合物至粗黃色固體，殘余物經(jīng)過50g的硅膠用70%乙酸乙酯-己烷作為洗脫液過濾，然后濃縮溶液。使殘余物從最小量的二氯甲烷的己烷加上1-2滴甲醇再結(jié)晶，得到2.49g(41%)的白色固體樣環(huán)己基磺酰胺。&NMR(CDC13)S1.58-1.72(m,2H),1.74-1.88(m,2H)，1.94-2.14(m,4H)，3.48-3.59(m,lH),4.80(brs,2H);13CNMR(CDC13)S25.90,28.33,63.54;MSm/e將18.5mL(37.0mmol)的2M氯化環(huán)己基鎂(TCIAmericas)的乙醚溶液，逐滴加入至冷卻至-78°C的、新鮮蒸餾的3.0mL(37.0mmol)磺酰氯于100mL的己烷溶液中。用超過1小時的時間使該混合物溫?zé)嶂?。C,然后小心真空濃縮。將該混合物再溶解于乙醚(200mL)中，用一些水冷的水(200mL)洗滌一次，干燥(MgS04)、過濾并小心濃縮。將該混合物再溶解于35mL的THF,逐滴加入至500mL的于THF飽和的NH3中，并使之?dāng)嚢柽^夜。真空濃縮該混合物至粗黃色固體，殘余物經(jīng)過50g的硅膠用70%乙酸乙酯-己烷作為洗脫液過濾并濃縮。148(M-H)-。4c.環(huán)己基磺酰胺的制備使殘余物從最小量的二氯甲烷的己烷加上l-2滴甲醇再結(jié)晶，得到1.66g(30%)的白色固體樣環(huán)己基-磺酰胺！HNMR(CDC13)S1.11-1.37(m,3H),1.43-1.56(m,2H),1.67-1.76(m,1H),1.86-1.96(m,2H),2.18-2.28(m,2H),2.91(tt,J=12,3.5Hz,1H),4.70(brs,2H);13CNMR(CDC13)S25.04,25.04,26.56,62.74;MSm/e162(M-l)-。按照制備環(huán)己基磺酰胺的方法，將49mL(37mmol)的0.75M氯化新戊基鎂(Alfa)的乙醚轉(zhuǎn)化為1.52g(27%)的新戊基磺酰胺白色固體樣。^NMR(CDC13)S1.17(s,9H),3.12(s,2H),4.74(brs,2H);13CNMR(CDC13)S29.46,31.51,67.38;MSm/e150(M-l)-。將12.3g(83mmol)的環(huán)丁基曱基溴(Aldrich)和13.7g(91mmol)碘化鈉于150mL的丙酮溶液回流過夜，然后冷卻至室溫。濾掉無機(jī)固體，并分別于室溫和150托、80°C下蒸餾掉丙酮和環(huán)丙曱基碘(8.41g,46%)。將冷卻至-78°C的4.0g(21.98mmol)的環(huán)丁基甲基碘于30mL的無水乙醚(乙醚)溶液，經(jīng)導(dǎo)管通入17mL(21.98mmol)的1.3M仲-丁基鋰于環(huán)己烷的溶液中，且攪^H亥溶液5分鐘。經(jīng)導(dǎo)管向該混合物中加入冷卻至-78°C的、新鮮蒸餾的3.0g(21.98mmol)磺酰氯于110mL的己烷溶液，用超過l小時的時間使該混合物溫?zé)嶂?。C,然后小心真空濃縮。將該混合物再溶解于乙醚中，用一些冰冷的水洗滌一次，干燥(MgS04)、過濾和小心濃縮。將該混合物再溶解于35mL的THF，逐滴加入至500mL的于THF飽和的NH3中，并使之?dāng)嚢柽^夜。真空濃縮該混合物至粗黃色固體，和從最小量的二氯曱烷的己烷加上1-24d.新戊基磺酰胺的制備4e.環(huán)丁基曱基磺酰胺的制備滴甲醇再結(jié)晶，得到1.39g(42。/。)的白色固體樣環(huán)丁基甲基JNMR(CDC13)S1.81-2.03(m,4H),2.14-2.28(m,2H),2.81-2.92(m,1H),3.22(d,J=7Hz,2H),4.74(brs,2H);13CNMR(CDC13)S19.10,28.21,30.64,60.93;MSm/e148(M-l)-;818(lvr+H)。4f.環(huán)丙基曱基磺酰胺的制備iiz0使用應(yīng)用于制備環(huán)丁基曱基磺酰胺的方法，從環(huán)丙基曱基溴(Aldrich)(也見JJGS1981,p.442-445)制備環(huán)丙基甲基磺酰胺。THNMR(CDC13)S0.39-0.44(m,2H),0.67-0.76(m,2H),1.13-1.27(m,1H),3.03(d,/=7.3Hz,2H),4.74(brs,2H);13CNMR(CDC13)S4.33,5.61,59.93;MSm/e134(M-1)。4g.2-噻吩磺酰胺的制備〇ii工0使用jM對tw丄/e^^爿朋.C/2em.，501,1933,p.174-182的方法從2-p塞吩磺酰基氯(購自Aldrich)制備。4h.4-溴代苯^黃酰胺的制備o通過用于THF中飽和的氨水處理商業(yè)上可獲得的4-溴代磺酰基氯，制備4-溴代苯基磺酰胺。5.制備石黃酰胺通用方法h200、、,^^crncocrnh2r1r1.hn—r20,0、？Y、h2一通過將水(l當(dāng)量)于THF加至冷的(-20。C)、攪拌的氯代磺?；惽杷狨?l當(dāng)量)于THF的溶液中，并使得到的溶液溫?zé)嶂?。C，制備中間體氨磺酰氯。向該溶液中加入無水三乙胺(l當(dāng)量)，隨后加入必需的仲胺(l當(dāng)量)。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，然后過濾并濃縮濾液，得到想要的磺酰胺。III.P1，-P1中間體的制備1a.環(huán)丙烷磺酸O"RV氨基-2-(SV乙烯基-環(huán)丙烷羰基)酰胺鹽酸鹽的制備，乂Sv^"'"'鹽酸鹽歩驟1:1(R)-叔-丁氧基羰基氨基-2(SV乙烯基-環(huán)丙烷羧酸的制備o向1(R)-炎-丁氧基羰基氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯(3.28g,13.2mmol)于THF(7mL)和甲醇(7mL)的溶液中加入LiOH(1.27g,53.0mmol)于水(14mL)的懸浮液。于室溫下攪拌該混合物過夜并用1NNaOH(15mL)和水(20mL)猝滅。用乙S臾乙酯(20mL)洗滌得到的混合物，且用20mL0.5NNaOH提取有機(jī)相。合并的水相經(jīng)用1NHC1使酸化直至pH4，并用乙酸乙酯(3x40mL)提取。合并有機(jī)提取物經(jīng)用鹽水洗滌，干燥(MgS04)、過濾并濃縮，得到白色固體樣標(biāo)題化合物(2.62g,87%)。！HNMR:(DMSO-d6)$1.22-1.26(m,1H),1.37(s,9H),1.50-1.52(m，1H),2.05(q,J二9Hz,1H),5.04(d，J,Hz,1H),5.22(d,747Hz,1H),5.64-5.71(m,1H),7.18,7.53(s，NH(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，12.4(brs,IH);MSm/z228(1VT+H)。步驟2:環(huán)丙烷磺酸(l-(RV叔-丁氧基羰基氨基-2-(S)-乙烯基環(huán)丙烷羰基V酰胺的制備ooW于氮?dú)夥障拢瑢⒉襟E1的產(chǎn)物(2.62g,11.5mmol)和CDI(2.43g,15.0mmol)于THF(40mL)的溶液于回流加熱50分鐘。使溶液冷卻至室溫并用導(dǎo)管轉(zhuǎn)移入環(huán)丙基磺酰胺(1.82g,15.0mmol)于THF(10mL)的溶液中。向得到的溶液中加入DBU(2.40mL,16.1mmol)和持續(xù)攪拌20小時。用1NHCl猝滅該混合物至pHl并真空濃縮THF。用乙酸乙酯(2x50mL)提取該懸浮液，且合并的有機(jī)提取物經(jīng)千燥(Na2S04)、過濾并濃縮。通過A/v己烷-乙酸乙酯(1:l)再結(jié)晶純化得到白色固體樣標(biāo)題化合物(2.4g)。母液通過Biotage40S柱(9%丙酮的二氯曱烷洗脫)純化，得到第二批標(biāo)題化合物(l.lg)。兩批合并(總得率92%)。^NMR(DMSO-d6)50.96-1.10(m,4H),1.22(dd，J=5.5,9.5Hz,1H),1.39(s,9H),1.70(5.5Hz,1H),2.19-2.24(m,1H),2.90(m,1H),5.08(d,/=10Hz,1H),5.23(d，/=17Hz,1H),5.45(m,IH),6.85,7.22(s,NH(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；MSm/z331(1Vf+H)。歩驟3:的制備環(huán)丙烷磺酸n-00-氨基-2-O乙烯基-環(huán)丙烷羰基)酰胺鹽酸鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage82</formula>將步驟2的產(chǎn)物(3.5g,10.6mmol)于二氯曱烷(35mL)和TFA(32mL)的溶液于室溫下攪拌1.5小時。真空去除揮發(fā)物，并將殘余物懸浮于1NHC1的乙醚(20mL)中并真空濃縮。重復(fù)該過程一次。用戊烷研磨得到的混合物并過濾，得到易吸濕的、灰-白色固體樣標(biāo)題化合物(2.60g,92%)。HNMR:(DMSO-d6)$1.01-1.15(m,4H),1.69-1.73(m,1H),1.99-2.02(m,1H),2.38(q,J=9Hz,IH),2.92-2.97(m,1H),5.20(d,7=11Hz,IH),5.33(d乂17Hz,IH),5.52-5.59(m,IH),9.17(brs,3H);MSm/z2310VT+H)。82lb.P1-P1，磺酰胺衍生物的制備鹽酸鹽向(1R,2S)l-叔-丁氧基羰基氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸(217mg,1.194mmol)于THF(5mL)的溶液中加入CDI(290mg,1.791mmol)，并將該反應(yīng)混合物于回流下加熱45分鐘。在另一個圓底燒瓶中，將LiHMDS(1.0M的己烷溶液，2.4mL,2.4mmol)加至W-乙基甲基磺酰胺(330mg,2.388mmol)于THF(5mL)的溶液中，并將反應(yīng)混合物于室溫下攪拌1小時。將兩個反應(yīng)混合物加在一起并于室溫下攪拌2小時。加水以猝滅反應(yīng)，用用乙酸乙酯提取該反應(yīng)溶液。有機(jī)層分離并經(jīng)MgS04干燥。過濾和蒸發(fā)溶劑，得到粗產(chǎn)物，其經(jīng)制備型HPLC純化得到想要的iV-Boc保護(hù)的7V-酰基磺酰胺。然后，將化合物溶解于4NHC1于二氧六環(huán)(2mL)的溶液，并于室溫下攪拌4小時，去除Boc保護(hù)基團(tuán)。蒸發(fā)溶液得到棕色樣油的鹽酸鹽。(112mg,33%得率)。]HNMR(400Mz,CD3OD)51.16(t,/=7.21Hz,3H),1.68(dd,7=10.03,7.83Hz,1H),2.15(m,1H),2.37(m,1H),2.89(s,3H),3.30(m,2H),5.31(d,J=10.27Hz,1H),5.42(d，J=17.12Hz,3H),5.68(m,IH)。MSm/z270(M+Na+)。部分B:本^^開化合物的制備實(shí)施例1:化合物1的制備HO.,0化合物i流程i步驟2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage84</formula>步驟3化合物1步驟1:向(2&4S)-Boc-4-苯基吡咯烷-2-羧酸(0.71lg2,44mmo1)(購自Chem-ImpexInternational,Inc.)、二異丙基乙胺(0.948g,7.33mmol)和環(huán)丙烷磺酸(l-(K)-氨基-2-(5)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)酰胺鹽酸鹽(0.561g，2.44mmol)于二氯曱烷(24mL)的混合物中，加入HATU(1.21g,3.18mmol)。攪拌該反應(yīng)混合物14小時之后，用5%NaHC03(50mL)水溶液和5。/。檸檬酸(50mL)水溶液洗滌。每個水層相繼用2x25mL二氯甲烷提取。合并的有機(jī)層經(jīng)MgS04干燥，過濾并濃縮。得到的棕色粘性油經(jīng)快速柱層析(Si02,97:3、二氯代曱烷甲醇)純化，得到棕色起泡的固體(0.973g,79%得率)。！HNMR(CD3OD,500MHz)S0.91(brs,1H),1.03(d,J=6.4Hz,IH),1.16-1.23(m,1H),1.31-1.38(m,1H),1.44(dd,J=9.6,5.6Hz,IH),1.48(s,4H),1.52(s,5H),1.89(t,J=6.4Hz),2.09(q,J=8.4Hz,0.4H),2.19(q，《/=8.6Hz,0.6H),2.85-2.90(m,0.4H),2.92-2.97(m,0.6H),3.44(t,J=9.6Hz,IH),3.65(p,J=8.0Hz,IH),3.93-4.01(m,IH),4.29(dd,J40.1,6.7Hz,IH)，5.12(d,/=10.1Hz,IH),5.30(d,J=18.0Hz,IH),5.75-5.82(m,IH),7.24(t,7=6.9Hz,IH),7.29-7.33(m,5H);MSw/z504(M+Na)。步驟2:向?qū)嵤├?的步驟1的產(chǎn)物(0.900g,1.79mmol)于二氯甲烷(5mL)的溶液中，加入TFA(5mL)。于室溫下攪拌30分鐘之后，真空下簡短地濃縮和干燥該反應(yīng)混合物。得到的棕色粘性油經(jīng)再溶解于二氯甲烷(lOmL)中并將之逐滴加入1NHC1的乙醚(10mL)溶液中。通過真空過濾并用乙醚洗滌形成并得到白色固體沉淀(0720mg，9P/。得率)。MSm/z404(MH+)。步驟3:向?qū)嵤├?的步驟2的產(chǎn)物(0.300g,0.682mmol)于二氯曱烷(7mL)的漿狀液中，加入二異丙基乙胺(0.265g,2.05mmo1)。使反應(yīng)混合物變得均勻。向該混合物中加入Boc-L-Tle-OH(也稱為叔-丁基甘氨酸)(0.189g,0.818mmol)和HATU(0.389g,1.02mmo1)。于室溫下攪拌6小時之后，如步驟l進(jìn)行反應(yīng)后處理，并經(jīng)快速柱層析(Si02,97:3、二氯代甲烷:曱醇)純化，得到白色固體的化合物1(0.382g,91%得率)。^NMR(CD3OD,500MHz)S1.04(brs,3H),1.06(s,9H),1.21-1.25(m,2H),1.40(dd乂-9.5,5.5Hz,2H),1.45(s,9H),1.88(dd,J=7.9,5.5Hz,1H),2.21(q,J-8.7Hz,1H),2.27(t,/=6.9Hz,2H),2.91-2.96(m,1H),3.70(p,7=6.5Hz,1H),4.04(dd，J=10.1,6.7Hz,1H),4.15(dd,J=9.9,6.7Hz,1H)4.34(t,7=7.2Hz,1H),4.37(d,J=9.5Hz,1H),5.12(d,7=10.4，1H),5.29(d,^16.8Hz),6.71(d,J=9.15Hz,1H),7.23(d,X6Hz,1H),7.28-7.34(m,5H);MSm/z639(M+Na)。實(shí)施例2:化合物2的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage85</formula>化合物2步驟1:向(2&4A)-Boc個千基-脯氨酸(0.516g1.64mmo1)、二異丙基乙胺(0.637g,4.92mmol)和環(huán)丙烷磺酸(1-(巧-氨基-2-(5>乙烯基-環(huán)丙烷羰基)酰胺鹽酸鹽(0.788g,2.96mmol)于二氯甲烷(16mL)的混合物中加入HATU(0.935g,2.46mmo1)。攪拌反應(yīng)混合物14小時之后，反應(yīng)物經(jīng)用二氯甲烷(50mL)稀釋并用1NHCl(10mL)洗滌。用2x25mL二氯甲烷提取水層。合并的有機(jī)層經(jīng)MgS04干燥，過濾并濃縮。得到的棕色粘性油經(jīng)快速柱層析(Si02,95:5、二氯代甲烷:甲醇)純化，得到黃色粘性油產(chǎn)物(0.651g,77%得率)。MSm/z517(MH4)。步驟2:向?qū)嵤├?的步驟1的產(chǎn)物(0.744g,1.43匪ol)于1:1二氯曱烷/二氯乙烷(4mL)溶液加入TFA(2mL)。于室溫下攪拌15min之后，濃縮反應(yīng)混合物。將得到的棕色粘性油再-溶解于二氯乙烷(6mL)中并再-濃縮。用1NHCl水溶液研磨油產(chǎn)物和加入乙醚(30mL)產(chǎn)生沉淀。通過真空過濾并用乙醚洗滌得到白色固體產(chǎn)物(0.386g,59%得率)。MS附/z417(Mrf")。步驟3:向?qū)嵤├?的步驟2的產(chǎn)物(0.154g,0.338mmo1)、二異丙基乙胺(0.131g,l.Olmmol)和Boc誦L-Tle-OH(0.117g,0.507mmol)于二氯甲烷(2mL)的溶液中加入HATU(0.193g,0.507mmol)。于室溫下攪拌14小時之后，反應(yīng)物經(jīng)用二氯甲烷(20mL)稀釋，然后用3x2mLlN水HC1和10%Na2CO3(3mL)水;容液洗滌?；旌衔镏谐恋淼漠a(chǎn)物如白色固體并通過真空過濾得到。產(chǎn)物經(jīng)反相HPLC純化，得到白色固體的化合物2(0.151g,70。/。得率)。^NMR(CD30D,500MHz)S1.02(s,9H),1.08(dd,^^7.9,1.9Hz,2H),1.16(dd,J=6.3,3.5Hz,1H),1.21-1.28(m,2H),1.37(dd，J=9,5,5.2Hz,1H),1.49(s,9H),1.87(dd,^8.2,5.5Hz，1H),1.94-1.99(m,2H),2.23(q,J=8.9Hz,1H),2.66-2.75(m,3Hz),2.91-2.96(m,1H),3.66(q,J=4.43Hz,1H),3.82(q,J=6.0Hz,1H),4.30(dJ=9.5Hz,1H),4.34(t乂-7.3Hz,IH),4.48(s,2H),5.15(d,/=10.1Hz,1H),5.32(d,^17.1Hz,1H),5.71-5.78(m,1H),6.61(d,J=9.2Hz,1H),7.21-7.25(m,3H),7.31(t,J=7.5Hz，2H);MSm/z631(M+H)。實(shí)施例3:化合物3的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage87</formula>化合物3方法，但用1.10當(dāng)量的正-丙基異氰酸酯作為親電子試劑，以100%的粗得率得到該化合物。該化合物無需純化直接進(jìn)入下一步反應(yīng)使用^NMR(CDC13)50.10(m,2H),0.51(m，2H),0.67(m,1H),1.10(m,2H),1.49(s,9H),1.62(m,2H),1.87(d,J-7.0Hz,2H)。步驟2:1-丙基氨甲酰基環(huán)丙烷-磺酰胺的制備依據(jù)所描述的合成l-甲氧基曱基環(huán)丙基磺酰胺的方法，從1-丙基氨曱?；h(huán)丙烷磺酰胺氨基甲酸叔-丁酉旨，以50%的最佳得率得到該化合物。不同的是不使用層析，原料從最小量的二氯甲烷/己烷再結(jié)晶iHNMR(CDC13)S0.15(m,2H),0,51(m,2H),1.01(m,2H),1.34(m,3H),1.86(d乂7.0Hz,2H)，4.83(s,2H);13CNMR(CDC13)S4.65,7.74,11.26,35.62,41.21;LRMSm/z193(M""+NH4)。3e.l"3.5-二甲基異噁唑-4-基)氨曱酰基環(huán)丙烷磺酰胺的制備歩驟1:1-(3.5-二曱基異嚼唑-4-基)氨甲?；h(huán)丙烷磺酰胺氨基曱酸^又-丁酯的制備依據(jù)所描述的合成1-曱氧基曱基環(huán)丙基磺酰氨基曱酸叔-丁酯的方法，但用1.20當(dāng)量的3，5-二甲基異嗯唑-4-異氰酸酯作為親電子試劑,以100%的粗得率得到該化合物。該化合物無需純化直接進(jìn)入下一步反應(yīng)使用步驟2:l-f3,5-二曱基異嗯唑-4yF)氨甲?；h(huán)丙烷磺酰胺的制備步驟3:向水冷的中間體2(150mg,0.25mmol)于1,4-二氧六環(huán)(1mL)的懸浮液中加入HC1(4M二氧六環(huán)，5mL)。于室溫下攪拌形成的溶液2小時并真空去除揮發(fā)物，高真空下干燥過夜。該產(chǎn)物直接用于下一步。MSw々496(lvr+H)。步驟4:向水冷的中間體3(134mg,0.25mmol)于二氯甲烷(2.5mL)的懸浮液中逐滴加入二異丙基乙胺(560mg,5.0mmo1)。向該形成的溶液中加入HATU(144mg,0.38mmol)和(S)-2-(炎-丁氧基羰基)陽3,3-二甲基丁酸(64mg,0.28mmol)。使最終的混合物溫?zé)嶂潦覝剡^夜并真空去除揮發(fā)物。用乙酸乙酯(10mL)研磨殘余物并過濾。濾液經(jīng)用5%檸檬酸(10mL,x2)和鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥，過濾并濃縮。殘余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到16mg(9。/。)想要的產(chǎn)物，白色固體樣化合物3。&NMR(CD3OD)S1.08-1.13(m,11H),1.27-1.29(m,2H),1.47-1.53(m,IOH)，1.89-1.93(m,1H)，2.26-2.32(m,2H),2.68-2.71(m,1H),2.97-2.99(m,1H),4.05-4.12(m,1H),4.34-4.37(m,2H),4.45-4.47(m,1H),5.15(d,/=12Hz,1H),5.33((!，/=18.5Hz,1H),5.77-5.82(m,1H)，7.36-7.37(m,1H),7.44-7.47(m,2H),7.62-7.67(m,6H);MSw/z709(IVT+H)。實(shí)施例4:化合物4的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage89</formula>化合物4步驟1:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>采用如在實(shí)施例3，步驟1中描述的同樣的方法，制備該產(chǎn)物,不同的是使用溴化苯基鎂。HNMR(DMS0-d6)S1.36-1.41(m,9H),2.25-2.28(m，1H),2.60-2.64(m,1H),3.56-3.66(m,2H),4.27-4.29(m,1H),5.50(s,1H),7.25-7.36(m,3H),7.46-7.48(m,2H),12.40(br,1H);MSm/z308(M++H)。步驟2:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>采用如在實(shí)施例3，步驟2中描述的同樣的方法，制備該產(chǎn)物，不同的是使用實(shí)施例4，步驟1的產(chǎn)物。MSm/z520(M++H)。步驟3:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>采用如在實(shí)施例3，步驟3中描述的同樣的方法，制備該產(chǎn)物，不同的是使用實(shí)施例4，步驟2的產(chǎn)物。MSm/z420(M++H)。步驟4:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>采用如在實(shí)施例3，步驟4中描述的同樣的方法，制備化合物4，不同的是使用實(shí)施例4，步驟3的產(chǎn)物。]HNMR(CD30D)51.08-1.12(m,11H),1.27-1.28(m,2H),1.48-1.52(m,10H),1.89-1.90(m，1H),2.26-2.32(m,2H),2.68-2.71(m,1H),2.97-2.99(m，1H),4.05-4.09(m,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage91</formula>化合物步驟1:采用如在實(shí)施例3，步驟1中描述的同樣的方法，制備該產(chǎn)物,不同的是使用溴化2-萘基鎂。！HNMR(CD3OD)S1.50,1.52(d，9H),2.54-2.56(m,IH)，2.89-2.91(m,IH),3.84-3.87(m，2H),4.51-4,53(m,IH)，7.45-7.52(m,2H),7.62-7.64(m,IH),7.85-7.94(m,3H),7.99(s,IH);MSm/z358(lVr+H)。步驟2:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage91</formula>采用如在實(shí)施例3，步驟2中描述的同樣的方法，制備該產(chǎn)物:不同的是使用實(shí)施例5，步驟1的產(chǎn)物。MSm/z570(M"+H)。步驟3:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage92</formula>、采用如在實(shí)施例3，步驟3中描述的同樣的方法，制備該產(chǎn)物，不同的是使用實(shí)施例5，步驟2的產(chǎn)物。MSw/z470(lV^+H)。步驟4:采用如在實(shí)施例3，步驟4中描述的同樣的方法，制備化合物5，不同的是使用實(shí)施例5，步驟3的產(chǎn)物。]HNMR(CD3OD)S1.05-1.12(m,11H),1.28-1.29(m,2H),1.48-1,53(m,10H),1.91-1.92(m,1H),2.25-2.40(m,2H),2.75-2.79(m,1H),2.97-3.00(m,1H),4.13-4.16(m,1H),4.38-4.47(m,2H),5.14(d,J=12Hz,1H),5.33((!，/=18.5Hz,1H),5.77-5.82(m,1H),7.49-7.51(m,2H),7.70-7.73(m,1H),7.86-7.92(m,3H),8.04(s,1H);MSw/z683(M>H)。實(shí)施例6:的制備化合物6<formula>formulaseeoriginaldocumentpage92</formula>化合物6cr、、o釆用如在實(shí)施例3，步驟1中描述的同樣的方法，制備該產(chǎn)物，不同的是使用溴化4-氟苯基鎂。^NMR(CD30D)51.48,l.50(d,9H),2.44-2.47(m,1H),2.74-2.95(m,2H),3.69-3.76(m,2H),4.45-4.53(m:1H),7.08-7.12(m,2H),7.52-7.54(m,2H);MSm/z326(1VT+H)。采用如在實(shí)施例3，步驟2中描述的同樣的方法，制備該產(chǎn)物，不同的是使用實(shí)施例6,步驟1的產(chǎn)物。MSw/z538(1VT+H)。采用如在實(shí)施例3，步驟3中描述的同樣的方法，制備該產(chǎn)物，不同的是使用實(shí)施例6，步驟2的產(chǎn)物。MSw々438(M^+H)。采用如在實(shí)施例3，步驟4中描述的同樣的方法，制備化合物6，不同的是使用實(shí)施例6，步驟3的產(chǎn)物。^NMR(CD30D)51.02-1.12(m,IIH)，1.26-1.28(m,2H),1.47-1.52(m,10H),1.89-1.90(m,1H),2.25-2.28(m,2H),2.55-2.65(m,1H)，2.92-2.99(m,1H),4.06-4.08(m,1H)，4.25-4.33(m,2H),4.41-4.49(m,1H),5.15(d,J=12Hz,1H),5.32(d,7=18.5Hz,1H),5.77-5.82(m,IH),7.09-7.12(m,2H),7.60-7.63(m,2H);MSm/"51(JV^+H)。實(shí)施例7:化合物7的制備步驟2:步驟3:步驟4:步驟3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula>步驟4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula>于0。C，向(2S,4R)-4-羥基吡咯烷-2-羧甲酯鹽酸鹽(5.45g,30.0mmol)、(S)-2國(叔-丁氧基羰基)-3,3-二甲基丁酸(6.93g,30.0mmol)和HATUg，45.0mmol)于二氯曱烷(100mL)的漿狀液中逐滴加入二異丙基乙胺(16.8g,15Ommo1)。將形成的溶液于室溫下攪拌過夜，用化合物7步驟2LiOH步驟5-^化合物7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula>冰冷的5%檸檬酸和1MNaOH(aq)洗滌兩次，然后用鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥并過濾。真空濃縮濾液以提供10.75g(100。/。)淺椋色樣泡沫。HNMR(CD3OD)S1.04(s,9H),1.46(s,9H),2.01-2.06(m,1H),2.27-2.29(m，1H),3.73(s,3H),3.77-3.87(m,2H),4.31(s，1H),4.49(br,lH),4.56(t,h8.5Hz,1H)。向?qū)嵤├?，步驟l的產(chǎn)物(10.75g,30.0mmol)于THF(100mL)和甲醇(IOOmL)的溶液中加入LiOH—水合物(6.30g,150mmol)的水(100mL)溶液。將最終的溶液于室溫下攪拌過夜。真空去除揮發(fā)物。殘余物經(jīng)用1MHCl(aq)酸化至pH2。用乙酸乙酯(IOOmL)提取。有機(jī)層經(jīng)用5%檸檬酸和鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥并過濾。濾液真空濃縮以提供8.95g(87。/。)的灰-白色泡沫樣想要的產(chǎn)物。HNMR(CD30D)S1.05(s,9H),1.45(s,9H),2.03-2.06(m,1H),2.32-2.36(m,1H),3.79-3.86(m,2H)，4.32(br,1H),4.49(br,1H),4.54(t,J=8.5Hz,1H)。于0。C，向?qū)嵤├?，步驟2的產(chǎn)物(1.95g,5.68mmol)于乙酸乙酯(150mL)的溶液中加入(lR,2S)-l-氨基-AK環(huán)丙基磺?；?-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酰胺鹽酸鹽(1.51g,5.68mmol)。將該混合物于此溫度下攪拌5分鐘，隨后逐滴加入二異丙基乙胺(1.91g,17.0mmo1)。形成的清澈溶液于0。C再攪拌5分鐘，隨后加入EDC(1.41g,7.38mmol)和HOBt步驟2:步驟3:(0.77g,5.68mmol)。最后的漿狀液于室溫下攪拌過夜。分別用冰冷的5%桿檬酸洗滌兩次，飽和的梓檬酸鈉(aq)和鹽水洗滌。經(jīng)MgS04干燥并過濾。真空濃縮濾液，經(jīng)快速柱用1:1己烷-丙酮洗脫純化，得到2.50g(79%)的白色泡沫樣想要的產(chǎn)物。！HNMR(CD3OD)S1.00-1.10(m,11H),1.24-1.28(m,2H),1.41-1.46(m,10H),1.86-1.91(m,1H),2.00-2.04(m,1H),2.12-2.28(m,1H),2.92-2.99(m,1H),3.80-3.95(m,2H),4.30-4.40(m,2H),4.51(br,1H),5.14((!,</=12Hz,1H),5.35(d,J=18.5Hz,1H),5.77-5.82(m,1H);MSw/z557(M"+H)。向DessMartin試劑(940mg,2.2mmol)于二氯甲烷(20mL)的溶液中加入實(shí)施例7,步驟3的產(chǎn)物(556mg,1.0mmol)。于室溫下攪拌該溶液4小時并真空濃縮。殘余物經(jīng)用熱研磨乙酸乙酯(10mL)和通過硅藻土(^61^@)過濾。真空濃縮濾液。殘余物經(jīng)快速柱用1:1己烷-丙酮洗脫純化，得到550mg(99。/。)的白色泡沫樣想要的產(chǎn)物。^NMR(CD3OD)S1.09-1.14(m,11H),1.25-1.28(m,2H),1.43-1.46(m,10H),1.88-1.91(m，1H),2.22-2.28(m,1H),2.51-2.60(m，1H),2.92-2.96(m,1H),4.17-4.34(m,2H),4.77-4.80(m,1H),5.16(d，J=12Hz,1H),5.33(d,J=18.5Hz,1H),5.72-5.82(m,1H);MSw/z555(VT+H)。于-50。C,向?qū)嵤├?，步驟4的產(chǎn)物(23mg,0.05mmol)于THF(0.5mL)的溶液中逐滴加入溴化4-甲氧基苯基鎂(0.5mL，0.5M于THF中，0.25mmol)。形成的溶液于此溫度下攪拌2小時，并用氯化銨(aq)猝滅，然后用乙酸乙酯提取。有機(jī)層經(jīng)用鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥，過濾并濃縮。殘余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到4.5mg(14。/。)的白色固體樣化合物7。NMR(CD3OD)S1.09-1.12(m,IIH)，1.26-1.28(m,2H),步驟4:步驟5:1.46-1.52(m,10H),1.89-1.91(m，1H),2.25-2,28(m,2H)，2.58-2.65(m,1H),2.92-2.99(m,1H),3.81(s,3H),4.04-4.08(m,1H),4.25-4.35(m,2H),4.41-4.49(m,1H),5.15(d,J=12Hz,1H),5.32(d，J=18.5Hz,1H)5.74-5.82(m,1H),6.92-6.94(m,2H),7.48-7.50(m,2H);MSm/z663(W+H)。實(shí)施例8:化合物8的制備采用如在實(shí)施例7，步驟5中描述的同樣的方法，制備化合物8，不同的是使用溴化4'-甲氣基-3-聯(lián)苯基鎂。NMR(CD3OD)S1.02-1.10(m,11H),1.29-1.31(m,2H),1.40-1.50(m,10H),1.90-1.92(m,1H),2.25-2.27(m,2H),2.68-2.69(m,1H),2.92-2.98(m,1H),3.84(s,3H),4.10-4.15(m,1H),4.35-4.52(m,2H),5.15(d乂12Hz,1H),5.32(d,/=18.5Hz,1H),5.75-5.82(m,1H),7.00-7.03(m,3H),7.40-7.60(m,5H);MS附/z739(lvT+H)。實(shí)施例9:化合物9的制備化合物9于-78。C，向如在中描述的實(shí)施例7中制備的、叔-丁基(SH-((S)-2-U(lR,2S)-l-(環(huán)丙基磺酖基氨曱?；?-2-乙烯基環(huán)丙基]氨化合物8曱?；鶀_4-氧代吡咯烷-1-基}-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基-氨基曱酸鹽(77mg,0.14mmol)于THF(5mL)的溶液中加入溴化烯丙基鎂(l.OM于乙醚中，0.7mL,0.7mmol)。將該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^夜。用飽和的NH4Cl水溶液猝滅反應(yīng)。該混合物經(jīng)用乙酸乙酯提取，經(jīng)MgS04干燥，過濾并真空濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠用快速柱層析用2:1己烷/丙酮洗脫純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物(50mg,60%)。力NMR(400MHz,CD3OD)S0.92-0.96(m,2H),0.93-1.09(m，10H),1.19-1.25(m,2H),1.38-1.48(m,10H),1.83-1.94(m,2H),2.18-2.31(m,2H),2.31-2.46(m,2H),2.88-2.96(m,1H),3.70(d,J=9.82Hz,1H),3.81(d,J=10.32Hz,1H),4.22(d,Hz,1H),4.32(dd,J=9.06,4.78Hz,1H),5.09-5.20(m,3H),5.30(dd,J:17.25,1.38Hz,1H),5.69-5.80(m,1H),5.87-5.99(m,1H),6.69(d,J=9.06Hz,1H);MSm/z619(M+Na)+。制備化合物10-25的通用方法HO'、C+.—I—、々'^W、Os一于-78°C，向叔-丁基(S)-l-KS)-2-([(lR,2S)-l-(環(huán)丙基磺酰基氨曱?；?-2-乙烯基環(huán)丙基]氨曱?；鶀-4-氧代吡咯烷-1-基}-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸鹽(83mg,0.15mmol)于THF(1-5mL)的溶液中加入Grignard試劑(0.75-0.90mmol)。使該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢鑜-3小時。用飽和的NH4Cl(1mL)水溶液幹滅反應(yīng)。該混合物經(jīng)用1NHC1中和，用乙酸乙酯(2x20mL)提取，經(jīng)MgS04干燥，過濾并真空濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC純化，得到想要的產(chǎn)物。實(shí)施例10:化合物10的制備化合物IO如在通用方法中所描述的，使用溴化(3-氟苯基)鎂(1.0M于THF中0.75mL，0.75mmol)制備化合物10,得到5mg(6%)的產(chǎn)物。^NMR(400MHz,CD3OD)S0.98-1.01(m,2H),1.03-1.11(m,10H),1.21-1.27(m,2H),1.37-1.51(m,10H),1.87(dd乂二8.18,5.41Hz,1H),2.18-2.28(m,2H),2.56-2.64(m，1H),2.90-2.99(m,1H)，4.03(d,/=10.83Hz,1H),4.24(d,J-10.58Hz,1H),4.28(s,IH)，4.43(dd,J=9.06,4.03Hz,IH),5.12(dd,J=10.45，1.64Hz,IH),5.30(dd,J=17.12,1.51Hz,IH),5.70-5.82(m,IH)，6.99-7.07(m,IH),7.30-7.41(m,3H);MSm/z651(M+H)+。實(shí)施例11:化合物11的制備如在通用方法中所描述的，使用溴化(3-甲氧基苯基)鎂(1.0M于THF中，0.75mL,0.75mmol)制備化合物ll，得到7mg(7%)的產(chǎn)物。JHNMR(400MHz,CD3OD)S0.98-1.01(m,2H)，1.03-1.12(m,10H),1.20-1.27(m,2H),1.42-1.47(m,10H),1.87=8.18，5.41Hz,IH),2.17-2.29(m,2H),2.55-2.64(m,IH),2.90-3.00(m,IH),3.79(s,3H),3.98-4.06(m,IH),4.21-4.33(m,2H),4.43(dd,J=9.19,3.90Hz,IH)，化合物ll5.12(dd,7=10.45,1.64Hz,1H),5.29(dd,J=17.12,1.51Hz,1H),5.69-5.82(m,IH),6.85(dd,J=8.06,2.01Hz,IH),7.08(d,J=7.81Hz，1H),7.14(s,IH),7.23-7.30(m,IH);MSm/z663(M+H)+。實(shí)施例12:化合物12的制備如在通用方法中所描述的，使用溴化(3-氯代苯基)鎂(0.5M于THF中，1.8mL,0.90mmol)制備化合物12,得到5mg(5%)的產(chǎn)物。巾NMR(400MHz,CD3OD)S0.98-1.01(m,2H),1.03-1.11(m,10H),1.22-1.27(m,2H),1.41-1.50(m,10H),1.87(dd,J:8.18,5.41Hz,IH),2.19-2.28(m,2H),2.56-2.64(m,IH),2.90-2.98(m,IH),4.04(d，J=10.58Hz,IH),4.22(d乂40.83Hz,IH),4.27(s，IH),4.44(dd,7=9.19,3.90Hz,IH),5.12(dd乂10.32,1.51Hz,IH),5.30(dd,J=17.12,1.51Hz,IH),5.70-5.81(m,IH)，7.28-7.37(m，2H),7.47(t,7=7.68Hz,IH),7.61(s,IH));MSm/z689(M+Na)+。實(shí)施例13:化合物13的制備如在通用方法中所描述的，使用溴化間-甲苯基鎂(1.0M于THF中，0.90mL,0.90mmol)制備化合物13，得到llmg(11%)的產(chǎn)物。HNMR(400MHz，CD3OD)S0.99(s,2H),1.04-1.09(m,10H),1.21-1.27(m,2H):1.42-1.47(m,10H),1.87(dd,J=8.31,5.54Hz,1H),2.18-2.29(m,2H),化合物12化合物132.35(s,3H),2.56-2.63(m,1H),2.90-2.98(m,1H),4.03(d乂-11.08Hz,1H),4.24(d,J^10.83Hz,1H),4.28-4.32(m，1H),4.41(dd,J=9.06,4.03Hz,1H),5.12(dd,J=10.32,1.51Hz，1H),5.29(dd乂17.25,1.38Hz,1H),5.70-5.81(m,1H),7.11(d，7=7.55Hz,1H),7.23(t,^7.55Hz,1H〉7.32(d,/=7.81Hz,1H)，7.37(s,1H));MSm/z669(M+Na)+。實(shí)施例14:化合物14的制備如在通用方法中所描述的，使用溴化(3-異丙基苯基)鎂(0.5M于THF中，1.5mL,0.75mmol)制備化合物14，得到12mg(12%)的產(chǎn)物。HNMR(400MHz,CD3OD)S0.98-1.01(m,2H),1.04-1.11(m,10H),1.22-1.28(m,8H)，1.41-1.47(m,麗),1.87(dd,h8.18,5.41Hz,1H),2.18-2.34(m,2H),2.55-2.63(m,1H),2.87-2.98(m，2H),4.00-4.07(m,1H),4.26(d，hl0.83Hz，1H),4.29-4.33(m,1H),4.42(dd,J-9.06,4.03Hz,1H),5.12(dd乂40.45,1.64Hz,1H),5.29(dd,J=17.12,1.51Hz,1H),5.70-5.81(m,1H),7.17(d,J=7.30Hz,1H),7.24-7.36(m,2H),7.44(s，lH)。MSm/z675(M+H)+。實(shí)施例15:化合物15的制備如在通用方法中所描述的，使用溴化(3-異丙氧基苯基)鎂(0.5M于化合物14化合物15THF中，1.5mL,0.75mmol)制備化合物15，得到12mg(12%)的產(chǎn)物。HNMR(400MHz,CD3OD)S0.98-1.01(m,2H),1.04-1.11(m,10H),1.21-1.27(m,2H),1.29((1,7=6.04Hz,6H),1.42-1.47(m,10H),1.87(dd,J=8.18，5.41Hz,1H),2.18-2.29(m，2H),2.55-2.63(m,1H)，2.90-2.99(m:1H),3.98-4.06(m,1H),4.23(d,^10.83Hz,1H),4.29(s,1H),4.45(dd,J-9.32,3.78Hz,1H)，4.57-4.66(m,1H),5.12(dd,J=10.32,1.76Hz,1H〉5.30(dd,7=17.12,1.51Hz,IH),5.70-5.81(m,IH),6.83(dd,J=8.06,1.76Hz,IH),7.05(d,J=7.81Hz,IH),7.12(s,IH)，7.20-7.28(m,IH);MSm/z691(M+H)+。實(shí)施例16:化合物16的制備如在通用方法中所描述的，使用溴化[3-(Ay^-二甲基)苯胺]鎂(0.5M于THF中，1.5mL,0.75mmol)制備化合物16,得到7mg(7%)的產(chǎn)物。!HNMR(400MHz,CD3OD)S1.00(s,2H),1.02-1.13(m,9H),1.20-1.27(m,2H),1.40-1.47(m,10H),1.88(dd,J=8.18,5.41Hz,IH),2.19-2.29(m,2H),2.59-2.70(m,1H),2.90-3.00(m,1H),3.08-3.19(m,6H),4.01-4.14(m,2H),4.24(d,J=10.83Hz,1H)，4.28(s,1H),4.50(dd,7=9.44,3.15Hz,1H),5.13(dd,J=10.32,1.76Hz,1H),5.30(dd,W7.25:1.39Hz,1H),5.70-5.82(m,1H),7.16-7.23(m,1H),7.28-7.36(m,1H),7.42(t,J=7.43Hz,IH),7.52(s,IH);MSm/z676(M+H)+。實(shí)施例17:化合物17的制備化合物16<formula>formulaseeoriginaldocumentpage103</formula>化合物17如在通用方法中所描述的，使用溴化[3-(l-吡咯烷基曱基)苯基]鎂(0.25M于THF中，3.0mL,0.75mmol)制備化合物17,得到9mg(9%)的產(chǎn)物。！HNMR(400MHz,CD3OD)S0.98-1.02(m,3H),1.04-1.09(m,9H),1.24(d,J-1.51Hz,3H),1.39-1.51(m,11H),1.87(dd,/=8.31,5.54Hz,1H),2.18-2.29(m,2H),2.35(s,3H),2.56-2.63(m,1H),2.90-2.98(m,1H),4.03(d,7=11.08Hz,1H),4.24(d,7=10.83Hz,1H),4.30(s，1H),4.41(dd,J=9.06,4.03Hz,IH),5.12(dd,J=10.32,1.51Hz,IH),5.29(dd,J=17.25,1.38Hz,IH),5.70-5.81(m，1H),7.U(d,J=7.55Hz,IH)，7.23(t,J=7.55Hz,IH),7.32(d,J=7.81Hz,IH),7.37(s,IH);MSm/z716(M+H)+。實(shí)施例18:化合物18的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage103</formula>如在通用方法中所描述的，使用溴化[3-(l-哌啶基曱基)苯基]鎂(0.25M于THF中，3.0mL,0.75mmol)制備化合物18，得到15mg(14%)的產(chǎn)物。}HNMR(400MHz,CD3OD)S0.99-1.04(m,5H),1.07(s,9H),1.15-1.26(m,3H),1.41-1.47(m,13H),1.77-1.92(m,5H),2.11-2.40(m,2H),2.65-2.76(m,IH),2.86-2.97(m,IH),4.08-4.19(m,2H),4.28(s,化合物183H),4.52(dd,7=9.82,2.77Hz，1H),5.05-5.15(m,1H),5.22-5.34(m,1H),5.72-5.85(m，1H),7.44(d,^7.20Hz,1H),7.49(t,/=7.43Hz,IH)7.66(d,J=7.55Hz,IH),7.81(s,IH);MSm/z732(M+H)+。實(shí)施例19:化合物19的制備如在通用方法中所描述的，使用溴化[3-(4-嗎啉基甲基)苯基]鎂(0.25M于THF中，3.0mL,0.75mmol)制備化合物19,得到16mg(15%)的產(chǎn)物。&NMR(400MHz,CD3OD)S0.98-1.02(m,2H),1.07(s,9H),1.19-1.27(m,3H),1.40-1.50(m，10H),1.88(dd,J=7.93,5.67Hz,IH),2.16-2.38(m,2H),2.60-3.01(m,6H),3.71-3.83(m,4H),4.00-4.16(m,3H),4.22(d,J=10.83Hz,IH),4.26-4.32(m,IH),4.48(dd,J=9.32,2.77Hz，IH)，5.12(d,J-10.58Hz,IH),5.30(d,J-16.87Hz,IH),5.70-5.83(m,IH)，6.79(d,Hz,IH),7.33-7.45(m,2H),7.56(d,J=8.06Hz,IH),7.66(s,IH);MS732m/z(M+H)+。實(shí)施例20:化合物20的制備如在通用方法中所描述的，使用溴化[2-(4-嗎啉基甲基)苯基]鎂(0.25M于THF中，3.0mL，0.75mmol)制備化合物20,得到4mg(4%)的化合物19化合物20產(chǎn)物。!HNMR(400MHz,CD3OD)S0.94-0.98(m,2H),1.01-1.11(m,10H),1.16-1.24(m,2H),1.41-1.48(m,10H),1.85(dd,J:8.06,5.29Hz,IH),2.12-2.22(m,IH),2.45(dd,J=12.59,7.55Hz,IH),2.55-2.68(m,4H),2.72-2.85(m,IH),2.87-2.97(m,IH)，3.59-3.84(m,6H),4.00-4.07(m,IH),4.13-4.21(m，IH),4.34-4.38(m,IH),4.47(d,J=10.83Hz,IH),5.10(dd,/=10,20,1.64Hz,IH),5.26(dd,J=17.12，1.26Hz,IH),5.68-5.80(m，IH),6.77(d乂9.57Hz,IH),7.28-7.40(m,3H),7.44-7.49(m,IH);MSm/z(M+H)+。實(shí)施例21:化合物21的制備如在通用方法中所描述的，使用渙化(3,5-二曱基苯基)鎂(0.5M于THF中，1.8mL,0.90mmol)制備化合物21,得到7mg(7%)的產(chǎn)物。！HNMR(400MHz,CD3OD)S0.97-1.11(m,12H),1.19-1.27(m，2H),1.37-1.51(m,10H),1.87(dd，J=8.18,5.41Hz,IH),2.15-2.25(m,2H),2.30(s，6H),2.54-2.62(m,IH),2.90-2.98(m,IH),4.02(d,J=10.58Hz,IH),4.21(d,J=10.83Hz,IH),4.27-4.32(m,IH),4.41(dd,3.78Hz,IH),5.12(dd，J^0.32,1.51Hz,IH),5.29(dd,J=17.12,1.51Hz,IH),5.70-5.81(m,IH),6.94(s,IH)，7.15(s,2H);MSm/z683(M+Na)+。實(shí)施例22:化合物22的制備化合物21化合物22如在通用方法中所描述的，使用溴化(4-氟-3-曱基苯基)鎂(1.0M于THF中，0.9mL,0.90mmol)制備化合物22，得到8mg(8%)的產(chǎn)物。&NMR(400MHz,CD3OD)S0.97-1.02(m,2H),1.03-1.11(m,10H),1.20-1.27(m,2H),1.41-1.47(m,10H),1.87(dd,J-8.18,5.41Hz,1H),2.20-2.25(m，1H),2.27(4/=1.51Hz,3H),2.55-2.63(m,1H),2.89-2.98(m,1H),4.03(d，/=10.83Hz,1H),4.21(d,J=10.83Hz,1H),4.26-4.31(m,1H),4.41(dd,</=9.19,3.90Hz,1H),5.12(dd,/=10.32,1.76Hz,IH),5.30(dd乂-17.12,1.26Hz，IH),5.70-5.81(m,IH),6.79(d,J:9.06Hz,IH),6.96-7,03(m,IH)，7.33-7.40(m,IH),7.41-7.46(m,IH);MSm/z687(M+Na)+。實(shí)施例23:化合物23的制備如在通用方法中所描述的，使用溴化(3-氟-4-甲基苯基)鎂(0.5M于THF中，1.8mL,0.90mmol)制備化合物23，得到5mg(5%)的產(chǎn)物。HNMR(400MHz,CD3OD)S0.99(s,2H),1.03-1.10(m,10H),1.21-1.27(tn,2H),1.42-1.47(m,10H),1.87(dd，J:8.31,5.54Hz,1H),2.19-2.22(m,J:8.06Hz,1H),2.24(d，J=1.51Hz,3H)，2.54-2.61(m，1H),2.90-2.98(m,1H),4.01(d,J=10.83Hz,1H),4.22(d，h10.83Hz,1H),4.26-4.30(m,1H),4.41(dd,J=9.06，4.03Hz,1H),5.12(dd,J=10.32,1.76Hz,IH),5.29(dd,/-17.25，1.13Hz,IH),5.70-5.81(m,IH),7.20-7.27(m,3H);MSm/z665(M+H)+。實(shí)施例24:化合物24的制備化合物23如在通用方法中所描述的，使用渙化(2，5-二甲基苯基)鎂(0.5M于THF中，1.8mL,0.90mmol)制備化合物24,得到5mg(5%)的產(chǎn)物。HNMR(400MHz,CD3OD)S0.94-0.97(m,2H),1.02-1.10(m，10H),1.20-1.26(m,2H),1.40-1.49(m,10H),1.86(dd,J=8.18,5.41Hz,1H),2.16(d,X78Hz,1H),2.17-2.25(m,IH),2.28(s,3H),2.48(s,3H),2.72(dd,J-12.46,8.18Hz,IH),2.88-2.97(m,IH),4.09(d,J=10.83Hz,IH),4.13-4.21(m，IH),4.37(d,/=9.32Hz,IH),4.44(d,J=10.83Hz,IH),5.11(dd乂^0.32,1.51Hz,IH),5.28(dd,7=17.12,1.51Hz,IH),5.70-5.80(m,IH),6.82(d,J=9.57Hz,IH),6.99(t，J=7.68Hz,IH),7.11(d,J=7.30Hz,IH),7.17(d,J-7.81Hz,IH);MSm/z683(M+Na)+。實(shí)施例25:化合物25的制備化合物25如在通用方法中所描述的，使用溴化(5-氟-2-曱氧基苯基)鎂(0.5M于THF中，1.8mL,0.90mmol)制備化合物25，得到5mg(5%)的產(chǎn)物。^NMR(400MHz,CD3OD)S1.00-1.10(m,11H),1.20-1.26(m,2H),1.40-1.47(m,10H),1.83-1.89(m,1H),2.20-2.29(m,1H),2.34-2.43(m,1H),2.90-2.98(m,1H),3.80(s,1H),3.85(s,3H),3.93(d,J=10.83Hz,1H),4.18-4.28(m,1H)，4.45(d,/=10.83Hz,IH),4.56(dd,J=9.69,2.64Hz,IH),5.12(dd,J=10.58,1.51Hz,IH),5.30(d,J=17.37Hz,IH),5.68-5.83(m，1H),6.75(d,7=8.81Hz,1H),6.98-7.04(m,2H),7.36(d,7=10.32Hz,1H);MSm/z703(M+Na)+。生物學(xué)研究HCVNS3/4A蛋白酶復(fù)合物的酶檢測和基于細(xì)胞的HCV復(fù)制子檢測在本公開中應(yīng)用，并且制備、傳導(dǎo)和驗(yàn)證如下重組HCVNS3/4A蛋白酶復(fù)合物的產(chǎn)生衍生自BMS抹、H77抹或J4L6S林的HCVNS3蛋白酶復(fù)合物如下描述產(chǎn)生。產(chǎn)生這些純化的重組蛋白質(zhì)是用于均一性分析(見下述)，以提供本公開化合物將如何有效抑制HCVNS3蛋白水解活性的指示。取自HCV-感染患者的血清從舊金山醫(yī)院(SanFranciscoHospital)的Dr.T.Wright處獲得。HCV基因組(BMS株)的(遺傳)工程學(xué)的全長cDNA(互補(bǔ)的脫氧核糖核酸)才莫板，使用基于其它的基因型la林之間的同源性選擇的引物，由通過血清RNA(核糖核酸)的反轉(zhuǎn)錄-PCR(RT-PCR)得到的DNA片段構(gòu)成。從全部基因組序列的測定，依據(jù)Simmonds等(見PSimmonds,KARose,SGraham,SWChan,FMcOmish,BCDow,EAFollett,PLYap和HMarsden,J.Clin.Microbiol.:31(6),1493-1503(1993))的分類,將基因型la指定為HCV分離株。非結(jié)構(gòu)區(qū)域NS2-5B的氨基酸序列顯示與HCV基因型la(H77)的一致性>97%和與基因型lb(J4L6S)的一致性為87%。感染性克隆，H77(la基因型)和J4L6S(lb基因型)得自R.Purcell(NIH)并且該序列發(fā)表在Genbank(AAB67036,見Yanagi,M.,Purcell,R.H.,Emerson,S.U.和BukkJ.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(16),8738-8743(1997);AF054247,見Yanagi，M.，StClaire,M.,Shapiro,M.，Emerson,S.U.,Purcell，R.H.和Bukh,J,Virology244(1),161-172.(1998》。H77和J4L6S林用于生產(chǎn)重組NS3/4A蛋白酶復(fù)合物。DNA編碼重組HCVNS3/4A蛋白酶復(fù)合物(氨基酸1027至1711)，由于這些林被操控(manipulated)，如由P.Gallinari等(見GallinariP,PaoliniC,BrermanD,NardiC,SteinkuhlerC,DeFrancescoR.Biochemistry.38(17):5620-32,(1999))所描述的。簡言之，在NS4A編碼區(qū)的3'-末端加入三個-賴氨酸增溶尾(solubilizingtail)。NS4A-NS4B裂解位點(diǎn)(氨基酸171l)的Pl位置中的半胱氨酸變?yōu)楦拾彼嵋员苊赓嚢彼針?biāo)志(tag)的蛋白水解裂解。此外，半胱氨酸至絲氨酸的突變由在氨基酸位置1454的PCR引導(dǎo)，以防止在NS3解旋酶結(jié)構(gòu)域自溶性裂解。按照由P.Gallinari等(見GallinariP,BrennanD,NardiC,BrunettiM,TomeiL,SteinkuhlerC,DeFrancescoR.,JVirol.72(8):6758-69(1998》描述的實(shí)驗(yàn)程序(protocol)及其修正，變異DNA片段在pET21b細(xì)菌表達(dá)載體(Novagen)中克隆而NS3/4A復(fù)合物在大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)林BL21(DE3)(Invitrogen)中表達(dá)。筒言之于20°C，用0.5毫摩爾(mM)異丙基P-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)22小時(h)，表達(dá)NS3/4A蛋白酶復(fù)合物。典型的發(fā)酵(l升(L))得到約10克(g)濕細(xì)胞糊(cellpaste)。將細(xì)胞再懸浮于裂解緩沖液(IOmL/g)中，所述裂解緩沖液含25mMAK2-羥基乙基)哌溱-iVH2-乙烷磺酸)(HEPES),pH7.5，20%丙三醇，500mM氯化鈉(NaCl)，0.5%TritonX-100，1微克/毫升('Vg/mL")溶菌酶，5mM氯化鎂(MgCl2)，1貼/ml脫氧核糖核酸醉I(Dnasel),5mM卩-巰基乙醇(PME),蛋白酶抑制齊'〗-乙二胺四乙酸(EDTA)(Roche)，勻漿并于4°C孵育20分鐘(min)。使勻漿經(jīng)超聲處理并于4。C于235000g用超速-離心1小時(h)澄清。將咪唑加至上清液使終濃度為15mM和pH調(diào)節(jié)至8.0。將粗蛋白質(zhì)提取液荷載于預(yù)裝緩沖液B(25mMHEPES,pH8.0,20%丙三醇，500mMNaCl,0.5%TritonX-100,15mM咪唑，5mMPME)的Nickel-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱上。以1mL/min的流速荷載樣品。用15倍柱體積的緩沖液C(與緩沖液B相同，除了0.2%TritonX-100)洗滌柱。蛋白質(zhì)用5倍柱體積的緩沖液D(與緩沖液C相同，除了200mM咪峻)洗脫。將含NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的部分匯集并荷載于用緩沖液D(25mMHEPES,pH7.5，20%丙三醇，300mMNaCl,0.2%TritonX-100,10mMpME)預(yù)平tf的去鹽柱Superdex-S200上。以1mL/min的流速荷載樣品。將含NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的部分匯集并濃縮至約0.5mg/ml。衍生自BMS、H77和J4L6S抹的NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的純度，經(jīng)SDS-PAGE和質(zhì)譜分析鑒定大于90。/。。將酶存儲于-80。C，用于檢測緩沖液之前在冰上解凍并且稀釋。FRET肽檢測以監(jiān)測HCVNS3/4A蛋白水解活性該體外檢測的目的是檢測由本公開化合物對如上描述的衍生自BMS林、H77株或J4L6S抹的HCVNS3蛋白酶復(fù)合物的抑制作用。該檢測提供本公開化合物將如何有效抑制HCVNS3蛋白水解活性的指示。為了監(jiān)測HCVNS3/4A蛋白酶活性，使用NS3/4A肽底物。所述底物為由Taliani等在Anal.Biochem.240(2):60-67(1996)中描述的RETSl(共振能量轉(zhuǎn)移縮酚肽(D印sipeptide)底物；AnaSpec,Inc.cat#22991)(FRET肽)。該肽的序列松散地基于(looselybasedon)HCVNS3蛋白酶的NS4A/NS4B天然裂解位點(diǎn)，只是在裂解位點(diǎn)上存在酯聯(lián)接而不是酰胺鍵。該肽還在近肽的末端含有焚光供體EDANS以及在近肽的另一末端含有受體DABCYL。通過供體和受體之間的分子內(nèi)共振能量轉(zhuǎn)移(RET)猝滅肽的熒光性，但是在NS3蛋白酶裂解肽時，產(chǎn)物從RET猝滅中釋放并且供體的熒光變得明顯。在缺乏或存在本公開化合物下，將肽底物用三個重組NS3/4A蛋白酶復(fù)合物之一孵育。通過用CytofluorSeries4000監(jiān)測實(shí)時的萸光反應(yīng)產(chǎn)物的形成，測定化合物的抑制作用。試劑如下HEPES和丙三醇(Ultrapure)得自GIBCO-BRL。二甲基亞砜(DMSO)得自Sigma。(3-巰基乙醇得自BioRad。檢測緩沖液50mMHEPES,pH7.5;0.15MNaCl;0.1%Triton;15%丙三醇；10mM(3ME。底物2終濃度(自儲存于-20。C的2mM儲存液的DMSO)。HCVNS3/4A蛋白酶型la(lb),2-3nM終濃度(自5儲存液于25mMHEPES,pH7.5,20%丙三醇，300mMNaCl,0.2%Triton-XlOO,10mMpME中)。由于化合物具有接近檢測限制的效價強(qiáng)度，通過加入50路/ml牛血清白蛋白(Sigma)至檢測緩沖液并將蛋白酶終濃度降低至300pM,使檢測更加敏感。該檢測在來自Falcon的96-孔聚苯乙烯黑色板上進(jìn)行。每個孔含25itilNS3/4A蛋白酶復(fù)合物的檢測緩沖液、50^1的本公開化合物的10%DMSO/檢測緩沖液和25pl底物的檢測緩沖液。對照組(無化合物)也在同樣的檢測板上制備。在加入底物開始酶促反應(yīng)前，將酶復(fù)合物與化合物或?qū)φ?容液混合1min。立即采用CytofluorSeries4000(PerspectiveBiosistem)讀取檢測板。設(shè)置儀器的發(fā)射波長為340nm和激發(fā)波長為490nm,于25。C讀板。一般跟進(jìn)反應(yīng)約15min。用以下方程式計算抑制百分率100-[(5Finh/SFcon)xl00]其中SF是在曲線的線性范圍的熒光變化。采用ExcelXL擬合軟件，并使用y-A+((B-A)/(l+((C/x)AD)))方程，將非線性曲線擬合應(yīng)用于抑制-濃度數(shù)據(jù)和計算50。/。有效濃度(IC50)。發(fā)現(xiàn)所有測試化合物抑制NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的活性，IC50為1.2pM或更小。另外，針對多于一種類型的NS3/4A復(fù)合物的測試，發(fā)現(xiàn)本公開化合物具有相似的抑制特性，雖然始終證明，與la抹相比，本化合物對lb林具有更大的效價強(qiáng)度。特異性檢測白酶復(fù)合物中的選擇性，與抑制其它絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶比較。針對多種絲氨酸蛋白酶人中心粒細(xì)胞彈性蛋白酶(HNE)、豬胰腺彈性蛋白酶(PPE)和人胰腺胰凝乳蛋白酶和一種半胱氨酸蛋白酶人肝臟組織蛋白酶B,測定本公開化合物的特異性。在所有情況下，如前(PCT專利申請?zhí)朩O00/09543)所描述的，使用特異性對每個酶的比色的對-硝基苯胺(pNA)底物的96-孔板格式協(xié)議以及一些修正條款，4皮應(yīng)用于絲氨酸蛋白酶檢測。所有酶購自Sigma而底物購自Bachem。每次檢測包括于室溫下2h的酶-抑制劑的預(yù)-孵育，隨后加入底物和水解至經(jīng)SpectramaxPro讀微板器上檢測的30%轉(zhuǎn)化。依據(jù)化合物的效價強(qiáng)度，它們的濃度在100-0.4范圍變化。每次檢測的最終條件如下50mM三(羥基甲基)氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)pH8，0.5M硫酸鈉(Na2S04),50mMNaCl，0.1mMEDTA,3%DMSO,0.01%土溫-20和:133succ-AAA-pNA和20nMHNE或8nMPPE;100succ-AAPF-pNA和250pM胰;疑乳蛋白酶(Chymotrypsin)。100mMNaHP04(磷酸氳鈉)pH6,0.1mMEDTA，3%DMSO,1mMTCEP(三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽)，0.01%土溫-20,30jliMZ-FR-pNA和5nM組織蛋白酶B(CathepsinB)(酶儲存液用前在含20mMTCEP的緩沖液中活化)。用下式計算抑制百分率[l-((UVinh-UVblank)/(UVctl-UVblank))]x100采用ExcelXL擬合軟件，將非線性曲線擬合應(yīng)用于抑制-濃度數(shù)據(jù)和計算50%有效濃度(10:50)。HCV復(fù)制子的產(chǎn)生^口由LohmannV,KornerF,KochJ,HerianU,TheilmannL,BartenschlagerR.,Science285(5424):110-3(1999)描述的，建立HCV復(fù)制子全細(xì)胞系統(tǒng)。該系統(tǒng)使發(fā)明人能夠評價HCV蛋白酶化合物對HCVRNA復(fù)制的作用。簡言之，使用在Lohmann論文(收錄號AJ238799)中描述的HCV抹lb序列，通過OperonTechnologies,Inc.(Alameda,CA)合成HCVcDNA,然后采用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物技術(shù)在質(zhì)粒pGem9zf(+)(Promega,Madison,WI)中裝配全長復(fù)制子。該復(fù)制子由以下組成(i)稠合至殼體蛋白質(zhì)的最初的12的氨基酸的HCV5，UTR，(ii)新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(neo),(iii)來自的腦心肌炎病毒(EMCV)的IRES和(iv)HCVNS3至NS5B基因和HCV3，UTR。用Seal使質(zhì)粒DNAs線性化和使用T7MegaScript轉(zhuǎn)錄試劑盒(Ambion,Austin,TX)依據(jù)制造商的說明書體外合成RNA轉(zhuǎn)錄本。在體外將cDNA的轉(zhuǎn)錄本轉(zhuǎn)染進(jìn)入人肝細(xì)胞瘤細(xì)胞系，HUH-7。在可選擇的標(biāo)記物新霉素(G418)的存在下，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞固有表達(dá)HCV復(fù)制子的選擇。得到的細(xì)胞系的特征是隨著時間的推移產(chǎn)生正鏈和負(fù)鏈RNA和產(chǎn)生蛋白質(zhì)。HCV復(fù)制子FRET檢測開發(fā)HCV復(fù)制子FRET4企測是為了監(jiān)測本公開描述的化合物對HCV病毒復(fù)制的抑制作用。將固有表達(dá)HCV復(fù)制子的HUH-7細(xì)胞生長在含10。/。胎牛血清(FCS)(Sigma)和1mg/mlG418(Gibco-BRL)的Dulbecco'sModifiedEagleMedium(DMEM)(Gibco國BRL)中。(實(shí)驗(yàn))前夜將細(xì)胞(1.5x104細(xì)胞/孔)接種于96-孔組織-培養(yǎng)滅菌板上。以含4%FCS、1:100青霉素/鏈霉素(Gibco-BRL)、1:100L-谷氨酰胺的DMEM制備化合物和不含化合物的對照品，并且在稀釋板中有5。/。DMSO(檢測中的DMSO終濃度為0.5%)。將化合物/DMSO混合物加至細(xì)胞并于37。C孵育4天。4天后，首先采用阿爾瑪藍(lán)(alamarBlue)(TrekDiagnotsticSystem)對細(xì)胞進(jìn)4亍毒性評估，讀取CCs。。通過加入1/10體積的阿爾瑪藍(lán)至培養(yǎng)基中孵育細(xì)胞，測定化合物的毒性(CCso)。4h后，采用CytofluorSeries4000(PerspectiveBiosystem)，于激發(fā)波長530nm和發(fā)射波長580nm，讀取每孔的熒光信號。然后用磷酸鹽-緩沖的鹽水(PBS)(3次150pl)徹底漂洗板。用25pl的裂解檢測試劑將細(xì)胞溶解，所述試劑含HCV蛋白酶底物(5X細(xì)胞熒光素酶細(xì)胞培養(yǎng)裂解試劑(Promega弁E153A)用蒸餾水稀釋至1X,NaCl加至終濃度150mM,FRET肽底物(如以上描述酶檢測)從2mM儲存液的100%DMSO稀釋至終濃度10pM。HCV蛋白酶底物。然后將板置于Cytofluor4000儀器中，設(shè)定340nm的激發(fā)波長/490nm的發(fā)射波長，自動才莫式進(jìn)行21個周期和以運(yùn)動模式(kineticmode)讀板。如用于描述測定IC5。的方法測定ECso。HCV復(fù)制子熒光素酶報告檢測作為次級檢測，由復(fù)制子FRET檢測確定的EC5。在復(fù)制子熒光素酶報告檢測中得到證實(shí)。復(fù)制子熒光素酶報告檢測的應(yīng)用由Krieger等(KriegerN,LohmannV和BartenschlagerR，J.Virol.75(10):4614-4624(2001))首先描述。用于描述發(fā)明者的FRET檢測的復(fù)制子構(gòu)成，經(jīng)過插入編碼類人形式(humanizedform)的Renilla熒光素酶基因的cDNA和直接稠合至熒光素酶基因的3'-末端的接頭(linker)序列改良。使用位于的新霉素標(biāo)記基因直接上游(directlyupstream)的核心的Ascl限制位點(diǎn)，將該插入物導(dǎo)入復(fù)制子構(gòu)成。也誘導(dǎo)在位置1179(絲氨酸至異亮氨酸)的適應(yīng)性突變(BlightKJ,Kolykhalov,AA,Rice,CM,Science290(5498):1972-1974)。如上描述的，固有表達(dá)該HCV復(fù)制子構(gòu)成產(chǎn)生穩(wěn)定的細(xì)胞系。如對于HCV復(fù)制子FRET檢測所描述的，作如下修正，設(shè)立熒光素酶報告檢測。在37。C/5o/。C02醉育器4天后，采用PromegaDual-Glo熒光素酶檢測系統(tǒng)檢測細(xì)胞Renilla熒光素酶活性。從每個含細(xì)胞的孔中去除培養(yǎng)基(100pl)。向剩余的50^的培養(yǎng)基中，加入50pi的Dual-Glo熒光素酶試劑和使板于室溫下振搖10min至2h。然后將Dual-GloStop&Glo試劑(50pl)力口至每個孔中和再于室溫下振搖板10min至2h。使用發(fā)光程序在PackardT叩CountNXT上讀板。使用下式計算百分抑制%抑制=實(shí)驗(yàn)孔(+化合物)中的平均熒光素酶信號DMSO對照孔(-化合物)中的平均焚光素酶信號使用XL擬合將值繪成圖表并分析，以得到ECsQ值。以HCV酶檢測、HCV復(fù)制子細(xì)胞檢測和/或幾個概述的特異性檢測，評估本公開的典型化合物。例如，在酶檢測中，發(fā)現(xiàn)化合物3對于NS3/4ABMS林具有4納摩爾(nM)的IC50。用發(fā)表的H77抹(ICso為1.6nM)和J4L6S林(ICso為0.9nM)得到類似的效價強(qiáng)度值。在復(fù)制子FRET檢測中ECso值為28nM和在復(fù)制子熒光素酶檢測中為14nM。在特異性檢測中，發(fā)現(xiàn)相同的化合物具有以下活性HLE〉100^M;PPE>100^M;胰凝乳蛋白酶>100pM;組織蛋白酶B=2^M。這些結(jié)果指出，該類化合物對NS3蛋白酶具高度特異性，并且這些成員的許多成員抑制HCV復(fù)制子復(fù)制。經(jīng)測試本公開化合物并發(fā)現(xiàn)具有活性范圍如下IC5?；钚苑秶?NS3/4ABMS林)A>1微摩爾OM);B為0.1-1C為0.001pM-O.l^M。ECso活性范圍(for化合物tested):A>10微摩爾(^M);B為1-10C為0.01-1iliM。注意，通過使用示于表2的本專利實(shí)施例號碼和本專利化合物號碼，可在本文找到化合物的結(jié)構(gòu)。依據(jù)本公開一個實(shí)施方案，化合物具有100pM或更低的生物活性(ECso)，而在另一個實(shí)施方案中，生物活性為1pM或更低。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage115</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table>本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然明白，本公開并不受限于前述的說明性的實(shí)施例，而且可用其它的不背離其基本特征的特定形式具體表達(dá)。因此，需要的是，參考附屬的權(quán)利要求書，而不是前述的實(shí)施例，在任何意義上來說實(shí)施例被認(rèn)為是說明性的而不是限制性的，因此，在權(quán)利要求的等價物的含義和范圍內(nèi)的所有變化，均意欲納入其中。權(quán)利要求1.一種式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中n為1、2或3；R1選自羥基和-NHSO2R7；R2選自氫、烯基、烷基、氰基烷基、環(huán)烷基和鹵代烷基；R3選自烯基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；R4選自氫和羥基；R5選自烯基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷基、羧基烷基、氰基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、鹵代烷基、羥基烷基和(NRaRb)烷基；R6選自烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺?；⒎蓟?、環(huán)烷基、雜環(huán)基、(NRaRb)羰基和(NRaRb)磺?；?；R7選自烷基、芳基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和-NRcRd；Ra和Rb獨(dú)立選自烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；和Rc和Rd獨(dú)立選自烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；或Rc和Rd與它們連接的氮原子一起形成5-元或6-元單環(huán)雜環(huán)；前提是R4為氫時，則R3不是雜環(huán)基。2.—種式(II)化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中n為1、2或3;W選自氫、烯基、烷基、氰基烷基、環(huán)烷基和面代烷基；Rs選自烯基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；Rs選自烯基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷基、羧基烷基、氰基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、囟代烷基、羥基烷基和(NRaRb)烷基；W選自烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺?；?、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、-(肌!^)羰基和-0\^1115)磺?；?；R"選自烷基、芳基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和-NRCRc;Ra和Rb獨(dú)立選自烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；和Rc和Rd獨(dú)立選自烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；或Re和Rd與它們連接的氮原子一起形成5-元或6-元單環(huán)雜環(huán)。3.權(quán)利要求2的化合物，其中n為1;R2為烯基；Rs選自棒基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；R5為烷基；W為烷氧基羰基；和W為環(huán)烷基。4.一種式(m)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中n為1或2;W選自氫、烯基、烷基、氰基烷基、環(huán)烷基和卣代烷基；Rs選自烯基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基和雜環(huán)基烷基；Rs選自烯基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷基、羧基烷基、氰基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、卣代烷基、羥基烷基和(NRaRb)烷基；W選自烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、-(^^1^)羰基和-(>1!11115)磺?；籖選自烷基、芳基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和-NRcRd;Ra和Rb獨(dú)立選自烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；和Rc和Rd獨(dú)立選自烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；或Re和Rd與它們連接的氮原子一起形成5-元或6-元單環(huán)雜環(huán)。5.權(quán)利要求4的化合物，其中n為1;W為烯基；Rs選自烯基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基和(環(huán)烷基)烷基；R5為烷基；R6為烷氧基羰基；和R7為環(huán)烷基。6.—種化合物，所述化合物選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>7.—種組合物，它包含權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。8.權(quán)利要求7的組合物，它還包含干擾素和利巴韋林。9.權(quán)利要求7的組合物，它還包含第二個具有抗-HCV活性的化合物。10.權(quán)利要求9的組合物，其中所述第二個具有抗-HCV活性的化合物是干擾素。11.權(quán)利要求10的組合物，其中所述干擾素選自干擾素a2B、聚乙二醇化干擾素a、重組復(fù)合干擾素、干擾素cx2A和類淋巴母細(xì)胞干擾素T。12.權(quán)利要求9的組合物，其中所述第二個具有抗-HCV活性的化合物選自白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞介素6、白細(xì)胞介素12、促進(jìn)l型T輔助細(xì)胞反應(yīng)進(jìn)展的化合物、干擾RNA、抗-反義RNA、咪喹莫特、利巴韋林、肌苦5'-單磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺和金剛乙胺。13.—種抑制HCV絲氨酸蛋白酶功能的方法，所述方法包括使HCV絲氨酸蛋白酶與權(quán)利要求1的化合物接觸。14.一種在患者中治療HCV感染的方法，所述方法包括給予所述患者有效治療量的權(quán)利要求1的化合物。15.權(quán)利要求14的方法，所述方法還包括在給予權(quán)利要求1的化合物之前、之后或同時給予第二個具有抗-HCV活性的化合物。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述第二個具有抗-HCV活性的化合物是干擾素。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述干擾素選自干擾素a2B、聚乙二醇化干擾素a、重組復(fù)合干擾素、干擾素oc2A和類淋巴母細(xì)胞干擾素T。18.權(quán)利要求15的方法，其中所述第二個具有抗-HCV活性的化合物選自白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞介素6、白細(xì)胞介素12、促進(jìn)l型T輔助細(xì)胞反應(yīng)進(jìn)展的化合物、干擾RNA、抗-反義RNA、咪喹莫特、利巴韋林、肌苷5'-單磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺和金剛乙胺。全文摘要本發(fā)明公開了具有通式(I)的丙型肝炎病毒抑制劑。還公開了包含本化合物的組合物和使用該化合物抑制HCV的方法。文檔編號C07K5/08GK101228180SQ200680025123公開日2008年7月23日申請日期2006年5月10日優(yōu)先權(quán)日2005年5月10日發(fā)明者A·C·古德,N·A·米恩威爾,N·辛,P·M·斯科拉,孫力強(qiáng),王向東,潔陳申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司