專(zhuān)利名稱(chēng)：：通過(guò)抑制程序性細(xì)胞死亡1(pd-1)途經(jīng)治療持續(xù)性感染和癌癥的方法及組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明大體上涉及治療持續(xù)性感染和腫瘤的方法及組合物。
背景技術(shù)：
：盡管預(yù)防性疫苗的出現(xiàn)已經(jīng)顯著的降低了病毒感染的死亡率，但使用這些疫苗對(duì)抗導(dǎo)致持續(xù)性感染的病毒(例如，C型肝炎病毒)僅僅取得了有限的成功。與能夠?qū)е录毙愿腥竞妥韵扌愿腥?self-limitedinfections)的病毒相比，針對(duì)引起持續(xù)性感染的孩吏生物而進(jìn)4于的免疫應(yīng)答通常是短暫的，并且不足以清除感染。因此，感染性微生物會(huì)在被感染的宿主體內(nèi)保持一段長(zhǎng)期的時(shí)間，不必然導(dǎo)致長(zhǎng)期的宿主損傷。根除導(dǎo)致持續(xù)性感染的微生物的一個(gè)主要的障礙是這類(lèi)微生物具備躲避宿主生物體的免疫系統(tǒng)的能力。例如，某些病毒和寄生蟲(chóng)下調(diào)宿主分子的表達(dá)，這些宿主分子的表達(dá)對(duì)于T細(xì)胞有效識(shí)別#皮感染細(xì)胞來(lái)i兌是必要的。持續(xù)性感染還導(dǎo)致抗原特異性CD8+T細(xì)胞的功能性損傷，這對(duì)于控制和才艮除病毒感染來(lái)"i兌是至關(guān)重要的。盡管使用加入細(xì)胞因子佐劑的疫苗是有用的，但由此引起的免疫應(yīng)答并不能成功的根除病原體。因此，需要更好的方法來(lái)治療、預(yù)防或者緩解持續(xù)性感染。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了用于治療、預(yù)防或者減輕、或者緩和持續(xù)性感染或者肺瘤的一種或者多種癥狀的方法及組合物。本發(fā)明基于下述發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用程序性死亡多肽(PD-1)進(jìn)行誘導(dǎo)之后，抗原特異性CD8+T細(xì)胞對(duì)感染性制劑產(chǎn)生功能性耐受("衰竭的")。因此，通過(guò)減少程序性死亡多肽-1(PD-1)、程序性死亡多肽-1配體(PD-L1)或者程序性死亡多肽-1配體2(PD-L2)的表達(dá)或者活性，使功能性耐受CD8+T細(xì)胞的擴(kuò)增、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、以及感染性制劑(例如，病毒，細(xì)菌，真菌，寄生蟲(chóng)，支原體或者肺瘤)的清除速率都增加了，因而針對(duì)感染性制劑的特異性免疫應(yīng)答被加強(qiáng)了。因此，本發(fā)明提供一種緩解或者預(yù)防持續(xù)性感染(例如，病毒感染，細(xì)菌感染，真菌感染，支原體感染以及寄生蟲(chóng)感染)或者腫瘤的癥狀的方法，該方法通過(guò)向需要4妻受治療的宿主施用一種能夠降低CD28類(lèi)家族成員(例如，程序性死亡多肽-1，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4(CTLA-4),B、T淋巴細(xì)胞衰減因子(BTLA)以及它們的功能性片段或者突變體)或者CD28類(lèi)家族配體成員(例如，程序性死亡多肽-l配體，或者程序性死亡多肽-l配體2)的活性或者表達(dá)的4t合物來(lái)完成?；蛘?，向該宿主施用一種抗原特異性T細(xì)力包或者抗原特異性B細(xì)力包，所述細(xì)胞^與一種可以減少細(xì)胞中的程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的化合物相接觸。例如，上述抗原特異性T細(xì)胞或者B細(xì)胞特異于一種病毒抗原。所述T細(xì)月包或者B細(xì)月包可以來(lái)自于宿主本身，也可以來(lái)自于與凈皮治療的宿主屬于相同種類(lèi)或者不同種類(lèi)的其4也宿主。除此之外，本發(fā)明描述了一種增加T細(xì)胞(例如，免疫無(wú)能型T細(xì)胞或者對(duì)抗原具有增強(qiáng)的耐受性的T細(xì)力包)的細(xì)胞毒素活性的方法，該方法通過(guò)將所述T細(xì)胞與能夠減少程序性死亡多肽-1的活性或者表達(dá)的化合物相接觸來(lái)完成。在本發(fā)明的上述所有方面中，持續(xù)性病毒感染來(lái)自于下述病毒的感染，例如肝炎病毒，人類(lèi)免疫缺陷型病毒(HIV)，人類(lèi)T淋巴細(xì)月包白血病病毒(HTLV),皰滲病毒，Epstein-Barr病毒，或者人乳頭瘤病毒。持續(xù)性病毒感染還可以包括由潛伏性病毒引起的感染。腫瘤包括淋巴增殖性疾病例如血管淋巴瘤以及結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞為主型的霍奇金淋巴瘤。期望的是，本發(fā)明的化合物通過(guò)增加#:治療宿主體內(nèi)的細(xì)l包毒性T細(xì)月包活性(例如，加強(qiáng)細(xì)胞^毒性細(xì)胞因子例如干4尤素y(IFNy)、腫瘤壞死因子a(TNFa)、或者白細(xì)胞介素-2(IL-2)的產(chǎn)生，增強(qiáng)T細(xì)胞的擴(kuò)增，或者增強(qiáng)病毒的清除)來(lái)增強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答。例如，該化合物減少程序性死亡多肽-1配體(pd-L1)或者程序性死亡多肽-1配體2(pd-L2)的表達(dá)或者活性，或者減少程序性死亡多肽-1(pd-1)與程序性死亡多肽-1配體(pd-L1)間的相互作用，或者減少程序性死亡多肽-1(pd-1)與程序性死亡多肽-1配體2(pd-L2)間的相互作用。范例性的化合物包括抗體(例如，抗程序性死亡多肽-1抗體，抗程序性死亡多肽-1配體抗體，以及抗程序性死亡多肽-1配體2抗體)，RNAi分子(例如，抗程序性死亡多肽-1RNAi分子，抗程序性死亡多肽-1配體RNAi分子，以及抗程序性死亡多肽-1配體2RNAi分子)，反義分子(例如，抗程序性死亡多肽-1反義RNA,抗程序性死亡多肽-1配體反義RNA，抗程序性死亡多肽-1配體2反義RNA)，顯性負(fù)性蛋白(例如，顯性負(fù)性程序性死亡多肽-1蛋白，顯性負(fù)性程序性死亡多肽-1配體蛋白，顯性負(fù)性程序性死亡多肽-1配體2蛋白)以及小分子抑制劑?？贵w包括單克隆抗體，人源化抗體，去免疫抗體，以及Ig(免疫球蛋白)融合抗體。一個(gè)范例性的抗程序性死亡多肽-1配體抗體包4舌克隆EH12。除了減少禾呈序性死亡多肽-1(PD-1)的表達(dá)或者活性的4匕合物之外，還可以向需要被治療的宿主施用疫苗，該疫苗可以包括或者不包括佐劑或者灌泵升壓注射器(primeboostershot)。可選擇的，向宿主施用另一種化合物，例如抗病毒化合物(例如，阿糖腺苷，無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，丙氧鳥(niǎo)香，valgancyclovir,核苷酸類(lèi)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI)例如AZT(齊多夫定)，ddl(去羥肌苷)，ddC(二脫氧胞苷)，d4T(司他夫定)，或者3TC(拉米夫定)，非核苦酸類(lèi)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI)例如奈韋^立平或者地4立韋定，蛋白酶抑制劑例如沙查那韋，利托那韋，茚地那韋，或者奈非那韋，利巴韋才木，以及干擾素)，坑細(xì)菌4匕合物，^元真菌^f匕合物，抗寄生蟲(chóng)化合物，抗炎癥化合物，抗腫瘤化合物或者止痛劑。所述的另一種化合物也可以是減少細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原4(CTLA-4)或者B、T'淋巴細(xì)月包衰減因子(BTLA)的表達(dá)或者活性的化合物。可以給宿主施用的其4也范例性化合物是抗細(xì)月包毒性T、淋巴細(xì)胞抗原4抗體，抗B、T、淋巴細(xì)胞衰減因子抗體，抗CD28抗體，抗可^"導(dǎo)共刺激分子(ICOS)抗體，抗可誘導(dǎo)共刺激分子西己體^元體，^元B7-13元體，4元B7-2抗體，抗B7-H3抗體，以及抗B7-H4抗體。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種鑒定候選化合物的方法，所述候選化合物調(diào)節(jié)程序性死亡多肽-1的活性或者表達(dá)，該方法包4舌下述步驟(a)將表達(dá)程序性死亡多肽-1基因的細(xì)胞(例如，程序性死亡多肽融合基因)與候選化合物進(jìn)行接觸；(b)測(cè)定程序性死亡多肽-1在細(xì)月包中的表達(dá)或者活性(例如，通過(guò)測(cè)定程序性死亡多肽-1mRNA或者蛋白質(zhì)的表達(dá))；以及(c)將程序性死亡多肽-1在細(xì)月包中的表達(dá)或者活性與其在對(duì)照細(xì)萬(wàn)包中的表達(dá)或者活性相比較，其中對(duì)照細(xì)胞沒(méi)有與化合物進(jìn)行接觸。程序性死亡多肽-1在表達(dá)或者活性上的增加或者減少表明該候選化合物能夠有效的調(diào)節(jié)程序性死亡多肽-1的活性或者表達(dá)?；蛘?，上述篩選方法可以包括下列步驟(a)將過(guò)表達(dá)程序性死亡多肽-1基因的T細(xì)胞與候選化合物進(jìn)行接觸；以及(b)測(cè)定T細(xì)力包的細(xì)月包毒素活性；(c)將該T細(xì)力包中的細(xì)力包毒素活性與對(duì)照細(xì)月包中的細(xì)月包毒素活性進(jìn)4亍比舉交，其中對(duì)照細(xì)月包沒(méi)有與化<合物進(jìn)行接觸。這種活性的增加或者降低鑒定出該候選化合物能夠有效的調(diào)節(jié)程序性死亡多肽-1的活性或者表達(dá)。細(xì)萬(wàn)包毒素活性包括細(xì)胞因子的生成，T細(xì)胞的擴(kuò)增以及病毒的清除。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種篩選方法，包括下列步驟(a)將程序性死亡多肽-1與候選化合物進(jìn)行接觸；(b)測(cè)定上述候選化合物是否與程序性死亡多肽-i發(fā)生相互作用；以及(c)鑒定出該爿陵選化合物對(duì)于調(diào)節(jié)程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性是有效的。所期望的是，^皮鑒定的候選化合物與程序性死亡多肽-1發(fā)生相互作用，并且減少其活性。使用這里描述的篩選方法鑒定的候選化合物可以減少程序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體間的相互作用，或者減少程序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體2間的相互作用。這里描述的篩選方法中使用的細(xì)胞包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞例如嚙齒動(dòng)物細(xì)胞或者人類(lèi)細(xì)胞。所述細(xì)胞是免疫細(xì)胞，例如T細(xì)胞。所期望的是，在這類(lèi)篩選方法中使用的程序性死亡多肽-1是人類(lèi)程序性死亡多肽-1。這里還提供了一種用于診斷宿主是否已經(jīng)患有持續(xù)性感染或腫瘤、或者存在患有持續(xù)性感染或腫瘤的危險(xiǎn)的方法，包括下列步驟(a)提供一個(gè)來(lái)自于宿主的含有免疫細(xì)月包(例如，T細(xì)胞或者B細(xì)胞)的樣品；并且(b)測(cè)定程序性死亡多肽-1在樣品中的表達(dá)或者活性。與對(duì)照樣品中的表達(dá)或者活性相比，程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的增加鑒定出該宿主已經(jīng)患有持續(xù)性感染或腫瘤，或者存在患有持續(xù)性感染或者胂瘤的危險(xiǎn)。所期望的是，步驟(b)包括鑒定抗原特異性免疫細(xì)胞，例如病毒抗原，細(xì)菌抗原，寄生蟲(chóng)抗原，或者真菌抗原。還公開(kāi)了一種為患有持續(xù)性感染或腫瘤、或者存在患有持續(xù)性感染或腫瘤的宿主選擇治療方式的方法。該方法包纟舌下列步驟(a)提供一個(gè)來(lái)自于宿主的含有免疫細(xì)胞(例如，T細(xì)胞或者B細(xì)J包)的樣品；并且(b)測(cè)定程序性死亡多肽-1在免疫細(xì)胞中的表達(dá)或者活性，這樣，與對(duì)照樣品中的表達(dá)或者活性相比，程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的增加鑒定出該宿主已經(jīng)患有持續(xù)性感染或腫瘤、或者存在患有持續(xù)性感染或者腫瘤的危險(xiǎn)；以及(c)為診斷為已經(jīng)患有持續(xù)性感染或腫瘤、或者4皮診斷為存在患有持續(xù)性感染或腫瘤的危險(xiǎn)的宿主選擇治療方式，所述的治療方式包括一種能夠減少程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的化合物。所期望的是，步驟(b)包括鑒定抗原特異性免疫細(xì)月包，例如病毒抗原，細(xì)菌抗原，寄生蟲(chóng)抗原，或者真菌抗原。來(lái)自于宿主的樣品包括血液樣品，活體組織，以及骨髓樣品。而且，對(duì)照細(xì)胞可以來(lái)自于不患有持續(xù)性感染或者不存在患有持續(xù)性感染的危險(xiǎn)的宿主。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種組合物，該組合物包括(a)能夠降低程序性死亡多肽-1的活性水平的化合物；以及(b)另外一種化合物，例如抗病毒化合物，抗細(xì)菌化合物，抗真菌化合物，抗寄生蟲(chóng)化合物，抗炎癥化合物，止痛劑，抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原4抗體，抗B、T淋巴細(xì)胞衰減因子抗體，抗CD28抗體，抗可誘導(dǎo)共刺激分子(ICOS)抗體，抗可i秀導(dǎo)共刺激分子配體抗體，抗B7-1抗體，抗B7-2抗體，抗B7-H3抗體，或者抗B7-H4抗體。本發(fā)明還提供了一種試劑盒，該試劑盒包括(a)能夠降低考呈序性死亡多肽-1的活性水平的化合物；以及(b)用于i兌明如何向宿主施用該化合物的說(shuō)明書(shū)。或者，該試劑盒包括(a)能夠降低程序性死亡多肽-1的活性水平的第一種化合物；(b)另外一種化合物，例如抗病毒化合物，抗細(xì)菌化合物，抗真菌化合物，抗寄生蟲(chóng)化合物，抗炎癥化合物，止痛劑，抗細(xì)I包毒性T淋巴細(xì)月包抗原4抗體，抗B、T淋巴細(xì)Jf包衰減因子抗體，抗CD28抗體，抗可誘導(dǎo)共刺激分子(ICOS)抗體，抗可誘導(dǎo)共刺激分子g己體凈元體，^元B7-14元體，4元B7-24元體，4元B7誦H3^元體，或者4元B7-H4抗體；以及(c)用于說(shuō)明如何向宿主施用所述第一種化合物和第二種化合物的i兌明書(shū)。與用于治療、預(yù)防以及減輕或者緩解持續(xù)性感染的一種或者多種癥狀的標(biāo)準(zhǔn)治療方法相比，本發(fā)明的方法提供了顯著的優(yōu)點(diǎn)。施用能夠降低程序性死亡多肽-1的活性水平的治療制劑增加了CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性，由此增加了對(duì)可引起持續(xù)性感染的感染性制劑的免疫應(yīng)答。除此之外，本發(fā)明提供的篩選候選化合物的方法也涉及新療法的鑒定，用來(lái)^f奮飾損傷處理，而不Y義Y義是減輕癥狀。除非特別定義，這里使用的全部技術(shù)術(shù)語(yǔ)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)都具有發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員理解的通常含義。盡管在本發(fā)明的實(shí)踐或試一驗(yàn)中可以^吏用與這里描述的方法和物質(zhì)相類(lèi)似或者等同的方法和物質(zhì)，zf旦下面描述了適合的方法和物質(zhì)。這里提及的全部7>開(kāi)出版物、專(zhuān)利申請(qǐng)、專(zhuān)利、以及其他參考文件的全部?jī)?nèi)容都在此引入作為參考。如果產(chǎn)生矛盾，則以這里的詳細(xì)描述包括定義為準(zhǔn)。除此之外，這里提及的物質(zhì)、方法和實(shí)施例僅僅是描述性的，并不構(gòu)成限制。本_明的其4也凈爭(zhēng)征和<尤點(diǎn)^夸從-下面的詳細(xì)4笛述以及^又利要求中體現(xiàn)出來(lái)。附圖1A的柱狀圖表示的是使用基因排列分析方法進(jìn)行測(cè)量得到的轉(zhuǎn)基因小鼠、經(jīng)過(guò)淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)Armstrong免疫的(大約在感染后30天)感染型小鼠、或者CD4缺陷型LCMV-C1-13感染型小鼠(大約在感染后30天)的DbGP33-41特異性T細(xì)月包和/或DbGP276-286特異性T細(xì)胞中的程序性死亡多肽-lmRNA的水平。附圖IB是流式細(xì)胞術(shù)試-驗(yàn)得到的一系列圖〗象，圖Y象表明大約在感染之后的60天，在經(jīng)過(guò)、淋巴細(xì)胞j^纟各叢腦膜炎病毒(LCMV)Armstrong免疫的感染型小鼠和CD4缺陷型LCMV-C1-13感染型小鼠中，程序性死亡多肽-1在CD8+四聚體陽(yáng)性(16仕&1^1"+)T細(xì)胞上進(jìn)行表面表達(dá)。當(dāng)使用LCMV-C1-13病毒(標(biāo)記為"慢性")產(chǎn)生慢性感染大約60天之后，免疫無(wú)能性CD8+T細(xì)胞在細(xì)胞表面上表達(dá)高水平的程序性死亡多肽-1，但是當(dāng)急性淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)Armstrong感染(標(biāo)記為"免疫的")被清除之后，病毒特異性CD8+T細(xì)胞不表達(dá)考呈序性死亡多肽-1。附圖1C是流式細(xì)胞術(shù)試驗(yàn)得到的一系列圖像，圖像證明了在患有慢性感染的小鼠和未被感染的小鼠的脾細(xì)胞中存在程序性死亡多肽-1。這i正明了程序性死亡多肽-1在脾細(xì)月包中具有最高水平的表達(dá)，所述脾細(xì)月包是^皮病毒感染的。附圖2A是一系列散點(diǎn)圖，該圖表明如果在感染后的第23天至第27天時(shí)對(duì)感染了C1-13的小鼠進(jìn)行治療，與未經(jīng)治療的對(duì)照組相比，DbNP396-404特異性CD8T細(xì)胞和DbGP33-41特異性CD8T細(xì)胞的數(shù)量增加了大約3倍。為了確定是否會(huì)產(chǎn)生功能上的改變，測(cè)定應(yīng)答于8個(gè)不同的、淋巴細(xì)月包l^纟各叢腦膜炎病毒(LCMV)抗原決定基的干擾素-Y(IFN-Y)和腫瘤壞死因子-oc(TNF國(guó)a)的生成。附圖2B的散點(diǎn)圖表明，當(dāng)將所有已知的CD8T細(xì)月包特異性計(jì)算在內(nèi)時(shí)，淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)特異性CD8T細(xì)胞的總凄t量增加了2.3倍。附圖2C的一系列流式細(xì)胞術(shù)試-驗(yàn)表明應(yīng)答于8個(gè)不同淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)抗原決定基的干擾素-Y(IFN-Y)和腫瘤壞死因子-a(TNF-a)的生成。附圖2D的散點(diǎn)圖表明，在經(jīng)過(guò)治療的小鼠中更多的病毒特異性CD8T細(xì)l包具有生成腫瘤壞死因子-ct(TNF-a)的能力。附圖2E的一系列柱狀圖表明，在脾、肝、肺以及血清中的程序性死亡多肽-1阻滯劑同樣導(dǎo)致對(duì)病毒控制(viralcontrol)的增強(qiáng)。附圖3A的圖表i正明，與對(duì)照組(標(biāo)記為"untx，，)相比，在被感染后的第46天至第60天時(shí)使用抗程序性死亡多肽-1配體(標(biāo)記為"aPD-Ll")處理CD-4缺陷型C1-13感染型小鼠，小鼠的DbGP33-41特異性CD8+T細(xì)胞和DbGP276-286特異性CD8+T細(xì)月包(標(biāo)記為"GP33"和"GP276")會(huì)增加。這i正明了與未經(jīng)過(guò)處理的小鼠相比，^使用抗程序性死亡多肽-1配體處理過(guò)的小鼠含有的DbGP276-286特異性脾臟CD8+T細(xì)胞增加了7倍，而DbGP33-41特異性脾臟CD8+T細(xì)胞增加了4倍。附圖3B中的一系列圖傳4正明，與對(duì)照組(標(biāo)i己為"untx")相比，在^皮感染后的第46天至第60天時(shí)4吏用抗程序性死亡多肽-1配體(標(biāo)記為"ocPD-LlTx，，)處理CD-4缺陷型C1-13感染型小鼠，小鼠脾內(nèi)的DbGP33-41特異性CD8+T細(xì)胞和DbGP276國(guó)286特異')"生CD8+T細(xì)月包的頻率(frequency)會(huì);t曾力口。附圖3C的一系列圖像證明，經(jīng)過(guò)抗程序性死亡多肽-1配體處理的小鼠的DbGP276-286特異性CD8+T細(xì)月包的擴(kuò)增增加了，該結(jié)果是通過(guò)導(dǎo)入BrdU(溴化脫氧尿嘧咬核普)和進(jìn)行Ki67表達(dá)來(lái)測(cè)定的。附圖3D的圖表表明了小鼠產(chǎn)生了高水平的CD8+T細(xì)胞擴(kuò)張，這證明其對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)產(chǎn)生了顯著的應(yīng)答，該結(jié)果是通過(guò)比較外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)(PBMC)的DbGP276-286特異性CD8+T細(xì)胞與脾內(nèi)的DbGP276-286特異性CD8+T細(xì)胞而4尋到的。附圖4A的一系列圖表i正明，與對(duì)照組相比，在經(jīng)過(guò)抗禾呈序性死亡多肽-1配體處理的小鼠中，生成干4尤素-Y(IFN-Y)的DbGP276-286特異性CD8+T細(xì)l包增加了。在經(jīng)過(guò)抗程序性死亡多肽-1配體處理的小鼠中，同樣檢測(cè)到DbNP396-404特異性CD8+T細(xì)胞、KbNP205-212特異性CD8+T細(xì)胞、DbNP166-175特異性CD8+T細(xì)胞以及DbGP92-101特異性CD8+T細(xì)胞的高頻率。附圖4B的圖表證明，在經(jīng)過(guò)抗程序性死亡多肽-1配體處理的小鼠中，50%的DbGP276-286特異性CD8+T細(xì)胞生成干擾素一y(IFN-y)，而在對(duì)照纟且小鼠中，20%的DbGP276-286凈爭(zhēng)異性CD8+T細(xì)J包生成干擾素—Y(IFN-Y)。附圖4C的一系列圖像證明，與未經(jīng)過(guò)處理的慢性感染型小鼠相比，經(jīng)過(guò)抗程序性死亡多肽-1配體處理的慢性感染型小鼠產(chǎn)生4交高水平的腫瘤壞死因子-a(TNF-cx)，^旦與經(jīng)過(guò)、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)Armstrong感染的免疫小鼠相比，仍然產(chǎn)生豐交^f氐水平的肺瘤壞死因子-a(TNF-a)。附圖4D的圖表證明，與未經(jīng)過(guò)處理的感染型小鼠相比，使用抗^呈序性死亡多肽-1配體對(duì)感染了LCMV-C1-13的小鼠進(jìn)4亍處理會(huì)恢復(fù)病毒特異性T細(xì)胞的體外裂解活性，該結(jié)果是通過(guò)51Cr釋放試驗(yàn)來(lái)測(cè)定的。附圖4E的一系列圖表i正明，當(dāng)4吏用aPD-Ll對(duì)感染了LCMV-C1-13的小鼠進(jìn)行處理后，其不同器官中的病毒滴度會(huì)降低。與未經(jīng)過(guò)處理的對(duì)照小鼠相比，在使用抗程序性死亡多肽-l配體處理兩周之后，其脾內(nèi)的病毒滴度減少大約3倍，肝內(nèi)的病毒滴度減少4倍，肺內(nèi)的病毒滴度減少2倍，血清中的病毒滴度減少2倍。附圖5A中的流式細(xì)胞術(shù)試-驗(yàn)得到的一系列圖像表示的是程序性死亡多肽-1的表面表達(dá)，其中使用特異于顯性抗原決定基的IO個(gè)人類(lèi)免疫缺陷型病毒(HIV)四聚體，該顯性抗原決定基作用于慢性C亞型人類(lèi)免疫缺陷型病毒(HIV)感染。其中的百分含量指的是陽(yáng)性程序性死亡多肽-1(PD-r)占四聚體陽(yáng)性細(xì)胞(tetramer+cells)的百分含量。附圖5B的一系列圖表i正明，與抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療初級(jí)個(gè)體中的CD8T細(xì)月包總凄t相比(p<0.0001)，在HIV(人類(lèi)免疫缺陷型病毒)-特異性CDST細(xì)胞中程序性死亡多肽-1的百分含量及平均熒光強(qiáng)度(MFI)發(fā)生了顯著的上調(diào)，與HIV(人類(lèi)免疫缺陷型病毒)-血清陰性對(duì)照組相比(分另U為p=0.0033以及p<0.0001)，感染了人類(lèi)免疫缺陷型病毒后在全部CD8T細(xì)胞總數(shù)中程序性死亡多肽-1的數(shù)量增加了。在此項(xiàng)試驗(yàn)中對(duì)來(lái)自于65個(gè)感染人類(lèi)免疫缺陷型病毒的個(gè)體的120個(gè)人類(lèi)免疫缺陷型病毒四聚體染色(stains)以及11個(gè)人類(lèi)免疫缺陷型病毒血清陰性對(duì)照組進(jìn)行了分析。附圖5C的一系列圖表表示的是程序性死亡多肽-1在四聚體陽(yáng)性細(xì)胞中進(jìn)行抗原決定基特異性表達(dá)的百分?jǐn)?shù)及平均焚光強(qiáng)度(MFI)。附圖5D的圖表描述了對(duì)于多種可探測(cè)應(yīng)答來(lái)說(shuō)，個(gè)體中的不同抗原決定基特異性群體上的程序性死亡多肽-1陽(yáng)性細(xì)J包百分凄t的變化。；鏡線表示的是每個(gè)個(gè)體的程序性死亡多肽-1陽(yáng)性人類(lèi)免疫缺陷型病毒四聚體陽(yáng)性細(xì)胞(PD-1+HIVtetramer+cells)的平均百分?jǐn)?shù)。附圖6A的一系列圖表表明，人類(lèi)免疫缺陷型特異性CD8T細(xì)胞數(shù)量與血漿病毒載量之間不存在相關(guān)性，這是通過(guò)四聚體染色檢-驗(yàn)得到的結(jié)果,而在血漿病毒載量與四聚體陽(yáng)性細(xì)月包上的程序性死亡多肽-1的百分凄史和程序性死亡多肽-1的平均熒光強(qiáng)度(MFI)之間存在正才目關(guān)(分另'J為p-0.0013和p0.0001)。附圖6B的一系列圖表表明，人類(lèi)免疫缺陷型特異性CD8T細(xì)胞Jt量與CD4計(jì)凄t之間不存在相關(guān)性，而在CD4計(jì)凄t與人類(lèi)免疫缺陷型病毒四聚體陽(yáng)性細(xì)月包上的禾呈序性死亡多肽-1的百分凄t和程序性死亡多肽-1的平均熒光強(qiáng)度(MFI)之間存在負(fù)相關(guān)(分別為p=0.0046和p=0.0150)。附圖6C的一系列圖表表明，全部CD8T細(xì)胞群上的程序性死亡多肽-1的百分?jǐn)?shù)及程序性死亡多肽-1的平均熒光強(qiáng)度(MFI)與血漿病毒載量之間存在正相關(guān)(分別為p=0.0021和pO.0001)。附圖6D的一系列圖表表明，全部CD8T細(xì)萬(wàn)包群上的禾呈序性死亡多肽-1的百分?jǐn)?shù)及程序性死亡多肽-1的平均熒光強(qiáng)度(MFI)與CD4i十凄史之間存在負(fù)才目關(guān)(分另'J為p=0.0049和p=0.0006)。附圖7A的一系列流式細(xì)胞術(shù)試^r圖^f象表示的是來(lái)自于宿主SK222的B*4201TL9特異性CD8T細(xì)月包的4、表性的表型染色，其中在該宿主中98%的B*4201TL9特異性CD8T細(xì)胞是程序性死亡多肽-1陽(yáng)'性的。附圖7B的圖表描述了來(lái)自于人的表型數(shù)據(jù)的概括，在這些人中大于95%的人類(lèi)免疫缺陷型特異性CD8T細(xì)胞是程序性死亡多肽-1陽(yáng)性的。針對(duì)每種涉及到的表型標(biāo)記物，分析7個(gè)到19個(gè)樣品。橫線表示的是四聚體陽(yáng)性程序性死亡多肽-1陽(yáng)性細(xì)胞的百分比中間值，這些細(xì)胞對(duì)于上述標(biāo)記物來(lái)i兌是陽(yáng)性的。附圖8A的一系列流式細(xì)胞術(shù)試驗(yàn)圖像表示的是來(lái)自于一個(gè)B*4201陽(yáng)性宿主的典型的擴(kuò)增檢測(cè)凄t據(jù)。在抗程序性死亡多肽-1配體封閉抗體的存在下，使用肽刺激6天之后，B*4201TL9特異性CD8T細(xì)月包的百分含量/人5.7%增加到12.4%。附圖8B的線形圖描述了擴(kuò)增檢測(cè)數(shù)據(jù)的概況，表明當(dāng)抗程序性死亡多肽-1配體封閉抗體存在時(shí)，人類(lèi)免疫缺陷型病毒特異性CD8T細(xì)胞的擴(kuò)增發(fā)生了顯著的增加(n=28,p=0.0006,酉己#t才企&)。附圖8C的柱狀圖表示的是對(duì)于同一個(gè)個(gè)體患者來(lái)說(shuō)，程序性死亡多肽-1/程序性死亡多肽-1配體阻滯劑對(duì)人類(lèi)免疫缺陷型病毒特異性CD8T細(xì)胞的擴(kuò)增所起的不同作用。白色的柱表示的是僅使用肽時(shí)四聚體陽(yáng)性細(xì)胞增加的倍數(shù)，黑色的柱表示的是同時(shí)使用肽和抗程序性死亡多肽-1配體封閉抗體時(shí)四聚體陽(yáng)性細(xì)胞增加的倍數(shù)。對(duì)試驗(yàn)個(gè)體中的多于一個(gè)的抗原決定基進(jìn)行CFSE(羧基熒光素雙乙酸鹽琥珀酸酯)4企測(cè)，結(jié)果用星號(hào)、方塊兒或者三角表示。具體實(shí)施例方式抗生素和疫苗在近幾十年來(lái)的應(yīng)用已經(jīng)顯著的降低了由樣吏生物感染而導(dǎo)致的死亡率。然而，由于某些感染性制劑具備躲避宿主器官免疫系統(tǒng)的能力，使抗微生物治療方式的成功受到了限制，也因此形成了持續(xù)性感染。例如，針對(duì)于例如肝炎病毒和人類(lèi)免疫缺陷型病毒這樣的病毒而激發(fā)的免疫應(yīng)答不足以清除感染性制劑，該制劑仍然存在于被感染的宿主體內(nèi)。在這類(lèi)感染中，抗原特異性CD8+T細(xì)胞對(duì)感染性制劑產(chǎn)生功能性耐受，即以已知的"免疫無(wú)能"或者"衰竭"狀態(tài)存在。免疫無(wú)能型T細(xì)胞失去其細(xì)胞毒素活性，即失去了生成細(xì)胞因子、擴(kuò)增、以及清除感染性制劑的能力。本發(fā)明基于下述令人驚訝的發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞的免疫無(wú)能伴隨著程序性死亡多肽-1表達(dá)的誘發(fā)，這種程序性死亡多肽-1的表達(dá)與某些類(lèi)型的淋巴增殖性病變相關(guān)。因此，本發(fā)明提供了增加T細(xì)力包的細(xì)胞毒性的方法，該方法通過(guò)將T細(xì)"包與一種能夠減少程序性死亡多肽-1、程序性死亡多肽-1配體(PD-L1)或者程序性死亡多肽-1配體2(PD-L2)的表達(dá)或者活性的制劑進(jìn)行接觸來(lái)完成的。更具體的，本發(fā)明提供了治療或者預(yù)防持續(xù)性感染或者'淋巴增殖性病變(例如，肺瘤，例如血管'淋巴瘤和結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)l包為主型的霍奇金、淋巴瘤)的方法，該方法通過(guò)給宿主施用一種能夠減少程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的制劑來(lái)完成。禾呈序性死亡多肽-1、禾呈序性死亡多肽-1配體或者禾呈序性死亡多肽-1配體2的表達(dá)或者活性的減少導(dǎo)致細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性的增加，增加了對(duì)感染性制劑的特異性免疫應(yīng)答。該方法提供的結(jié)果表明，給患有持續(xù)性感染的小鼠施用抗程序性死亡多肽-1配體(PD-L1)封閉抗體會(huì)增加免疫無(wú)能型T細(xì)胞的細(xì)胞毒素活性。特別的，阻斷程序性死亡多肽-1的信號(hào)會(huì)"i秀發(fā)免疫無(wú)能型CD8+T細(xì)月包的擴(kuò)張，增加細(xì)胞因子的生成以及增強(qiáng)病毒的清除。而且，經(jīng)過(guò)抗程序性死亡多肽-1配體治療后，患有持續(xù)性感染的CD4缺陷型小鼠的CD8+T細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生擴(kuò)增，并且恢復(fù)大部分的功能。為了使T細(xì)胞對(duì)異源蛋白產(chǎn)生應(yīng)答，必須提供兩種抗原呈遞細(xì)胞信號(hào)(APCs)使T淋巴細(xì)胞休眠。第一信號(hào)使免疫應(yīng)答具有特異性，該信號(hào)在識(shí)別了存在于主要組織相容性復(fù)合體(MHC)中的異源抗原多肽之后，經(jīng)由T細(xì)胞受體(TCR)進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)。第二信號(hào)，稱(chēng)為共刺激性信號(hào)，誘導(dǎo)T細(xì)胞擴(kuò)增并具備功能性。共刺激既不是抗原特異性的，也不是主要組織相容性復(fù)合體限制性的，是由一種或者多種獨(dú)特的細(xì)胞表面多肽引起的，這些細(xì)胞表面多肽是抗原呈遞細(xì)胞(APCs)表達(dá)的。如果T細(xì)胞僅僅在T細(xì)胞受體中受到刺激，而不接收額外的共刺激性信號(hào)，它們會(huì)變得無(wú)應(yīng)答，免疫無(wú)能，或者死亡，從而導(dǎo)致對(duì)免疫應(yīng)答的下調(diào)節(jié)。在抗原呈遞細(xì)胞(APCs)上表達(dá)的CD80(B7-l)和CD86(B7-2)蛋白是臨界共刺激多肽。由于在初級(jí)免疫應(yīng)答中B7-2占支配性地位，隨后在免疫應(yīng)答期間B7-l發(fā)生上調(diào)節(jié)，以延長(zhǎng)初級(jí)T細(xì)胞應(yīng)答或者共刺激刺激T細(xì)月包應(yīng)答。B7多肽能夠向免疫細(xì)胞發(fā)出共刺激性信號(hào)或者抑制信號(hào)，來(lái)促進(jìn)或者抑制免疫細(xì)胞應(yīng)答。例如，當(dāng)程序性死亡多肽-l配體(B7-4)以一種可溶形式存在時(shí)，將其與一種共刺激受體結(jié)合，其會(huì)誘發(fā)免疫細(xì)胞的共刺激或者抑制免疫細(xì)胞的共刺激。當(dāng)與抑制性受體相結(jié)合時(shí)，B7-4分子可以向免疫細(xì)胞傳輸一種抑制性信號(hào)。范例性的B7家族成員包括B7-1，B7-2,B7-3(由抗體BB-1識(shí)別)，B7h(程序性死亡多肽-1配體)，以及B7-4和它們的可溶性片段或者書(shū)f生物。B7家》矣成員與免疫細(xì)J包上的一種或者多種受體相結(jié)合，例如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4(CTLA-4)，CD28,可誘導(dǎo)共刺激分子(ICOS)，程序性死亡多肽-1和/或其他受體，并且，B7家族成員具有向免疫細(xì)胞傳輸抑制性信號(hào)或者共刺激性信號(hào)的能力，信號(hào)的種類(lèi)取決于受體。CD28是一種主要在休眠性T細(xì)胞上表達(dá)的受體。當(dāng)信號(hào)經(jīng)過(guò)T細(xì)胞受體后，CD28的結(jié)合和共刺激性信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)誘發(fā)T細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增并且分泌白細(xì)胞介素-2(IL-2)。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4(CD152)是一種與CD28同源的受體，該受體在休眠性T細(xì)胞中缺失，但T細(xì)胞被激活后會(huì)誘導(dǎo)其表達(dá)。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4(CTLA-4)在T細(xì)胞應(yīng)答的負(fù)性調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用?？烧T導(dǎo)共刺激分子(ICOS),—種與CD28和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)月包抗原-4相關(guān)的多肽，參與白細(xì)月包介素-10(IL-10)的生產(chǎn)。程序性死亡多肽-1,程序性死亡多肽-1配體及程序性死亡多肽-1配體2結(jié)合的受體，也被迅速誘導(dǎo)于T細(xì)胞表面。程序性死亡多肽同樣在B細(xì)胞表面進(jìn)行表達(dá)(應(yīng)答于抗免疫球蛋白M)，也在胸A艮細(xì)月包及骨骨逸細(xì)月包子集中表達(dá)。程序性死亡多肽-1的結(jié)合(例如通過(guò)交聯(lián)或者聚合的方式)導(dǎo)致了免疫細(xì)胞中抑制性信號(hào)的傳輸，從而減少了免疫應(yīng)答，隨之增加了免疫細(xì)胞的免疫無(wú)能性。程序性死亡多肽-1家族成員與抗原呈遞細(xì)月包上的一種或者多種受體相結(jié)合，例如程序性死亡多肽-1配體以及程序性死亡多肽-1配體2。程序性死亡多肽-1配體和程序性死亡多肽-1配體2都是人類(lèi)程序性死亡多肽-1的配體多肽，是B7多肽家族的成員。每種程序性死亡多肽-1配體含有一個(gè)信號(hào)序列，一個(gè)IgV結(jié)構(gòu)域，一個(gè)IgC結(jié)構(gòu)i或，一個(gè)^爭(zhēng)膜結(jié)構(gòu)i或，以及一個(gè)短的i包質(zhì)尾區(qū)。這些配體在胎盤(pán)、脾臟、淋巴結(jié)、胸腺以及心臟中表達(dá)。程序性死亡多肽-1配體2還在胰腺、肺以及肝中表達(dá)，而程序性死亡多肽-1配體在胎兒的肝中、活化的T細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。兩種程序性死亡多肽-1配體都在活化的單核細(xì)月包以及樹(shù)突細(xì)月包中發(fā)生上調(diào)節(jié)。定義這里使用的"持續(xù)性感染"指的是感染性制劑(例如，病毒，細(xì)菌，寄生蟲(chóng)，支原體，或者真菌)不能從被感染宿主中被清除或者除去的感染，即使在誘發(fā)了免疫應(yīng)答之后。持續(xù)性感染可以是慢性感染，潛伏性感染，或者慢感染。急性感染時(shí)間比較短(持續(xù)幾天或者幾個(gè)星期)，并且可以通過(guò)免疫系統(tǒng)從才幾體中分解出來(lái)，而持續(xù)性感染可能持續(xù)幾個(gè)月，幾年，甚至是一生。這類(lèi)感染也可能在一段長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)頻繁復(fù)發(fā)，包括隱性感染以及產(chǎn)毒性感染階段，不具備細(xì)胞殺傷能力或者甚至對(duì)宿主細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)多的損傷。即使在免疫應(yīng)答結(jié)束后，使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)也可以在宿主中(例如，在被感染個(gè)體的特異性細(xì)胞內(nèi))檢測(cè)到引起感染的感染性制劑。使用本領(lǐng)域已知的任何標(biāo)準(zhǔn)方法診斷患有持續(xù)性感染的哺乳動(dòng)物，在例如下列文件中描述，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)碼6368832,6579854以及6808710,美國(guó)專(zhuān)利申^青7>開(kāi)號(hào)石馬20040137577,20030232323，20030166531,20030064380，20030044768,20030039653，20020164600，20020160000，20020110836，20020107363，以及20020106730，上述所有文件在此引入作為參考。例如，在使用PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))分析法對(duì)來(lái)自于宿主生物樣本中的衣原體種類(lèi)進(jìn);f于:探測(cè)之后，可以將該宿主i貪斷為患有持續(xù)性衣原體感染。沒(méi)有被-珍斷為患有持續(xù)性感染的哺乳動(dòng)物不需要依據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療。能夠引起持續(xù)性感染的微生物包括病毒(例如，乳突淋瘤，肝炎病毒，人類(lèi)免疫缺陷型病毒，以及皰滲病毒)，細(xì)菌(例如，大腸埃希氏桿菌，以及衣原體屬)，寄生蟲(chóng)(例如，癡原蟲(chóng)，利什曼原蟲(chóng)屬，裂體吸蟲(chóng)屬，錐形蟲(chóng)屬，弓形蟲(chóng)屬)以及真菌。"緩解持續(xù)性感染的癥狀"指的是在持續(xù)性感染發(fā)生之前或者之后，改善與持續(xù)性感染相關(guān)的任何狀況或者癥狀。或者，緩解持續(xù)性感染的癥狀可以包括減少負(fù)載于宿主中的感染性孩吏生物(例如，病毒，細(xì)菌，真菌，支原體，或者寄生蟲(chóng))，這種減少是相對(duì)于未接受治療的對(duì)照組中的載量而言的。與未接受治療的對(duì)照組相比，這種減少或者預(yù)防的程度為至少5%，10%，20%，40%,50%,60%，80%,90%，95%,或者100%,通過(guò)任何標(biāo)準(zhǔn)」技術(shù)測(cè)得的結(jié)果。所期望的是，如果<吏用本領(lǐng)域/[壬4可的已知標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)檢測(cè)到持續(xù)性感染被完全清除了，這種情況就表明持續(xù)性感染被治愈了。接受持續(xù)性感染治療的患者是醫(yī)學(xué)從業(yè)者已經(jīng)診斷為具有這種癥狀的人。診斷可以通過(guò)任何適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行。診斷和監(jiān)測(cè)可以包括例如檢測(cè)生物樣品中(例如，活體組織，血液測(cè)試，或者尿液測(cè)試)的微生物載量，檢測(cè)生物樣品中微生物感染的替代標(biāo)記(surrogatemarker)的水平，才企測(cè)與持續(xù)性感染相關(guān)的癥狀，或者檢測(cè)持續(xù)性感染的典型免疫應(yīng)答中存在的免疫細(xì)胞(例如，檢測(cè)免疫無(wú)能型抗原特異性T細(xì)力包)。對(duì)于已經(jīng)預(yù)防了持續(xù)性感染的形成的患者來(lái)說(shuō)，可以接受或者不接受上述診斷。本領(lǐng)域:技術(shù)人員應(yīng)該明白，可以對(duì)這些患者進(jìn)行上述標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試，也可以在不進(jìn)4亍檢查的情況下確it該患者由于具有一種或者多種危險(xiǎn)因素(例如，家族病史或者接觸感染性制劑)而存在患病的高度危險(xiǎn)。這里使用的"程序性死亡多肽-1(PD-1)"指的是能夠與程序性死亡多肽-1配體蛋白或者程序性死亡多肽-1配體2蛋白形成復(fù)合體的多肽，也因此參與免疫應(yīng)答，例如T細(xì)月包的共刺;敫。本發(fā)明的程序性死亡多肽-1蛋白與天然存在的程序性死亡多肽-1在本質(zhì)上等同(例如，參見(jiàn)Ishida等人于1992年在EMBOJ.ll:3887-3895中發(fā)表的文章；Shinohara等人于1994年在Genomics(《遺傳學(xué)》)23:704-706中發(fā)表的文章，以及美國(guó)專(zhuān)利NO.5698520,在此引入作為參考)。程序性死亡多肽-l的信號(hào)可以通過(guò)例如減少T細(xì)月包的擴(kuò)增、細(xì)月包因子的生成或者病毒的清除來(lái)降低CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性。根據(jù)本發(fā)明，程序性死亡多肽-1以i氐于對(duì)照水平的至少5%，10%,20%，30%,40%,50%,60%,70%,80%，90%,或者多于100%的水平降低CD8+T細(xì)月包的細(xì)月包毒素活性，該結(jié)果是通過(guò)任何標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量得到的。"程序性死亡多肽-1基因"指的是編碼程序性死亡多肽-1蛋白的核酸。"程序性死亡多肽-1融合基因"指的是一個(gè)程序性死亡多肽-1啟動(dòng)子和/或與另外一個(gè)異源核酸序列形成可操作連接的程序性死亡多肽-1編碼區(qū)域的全部或者一部分。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述的另外一個(gè)異源核酸序列是凈艮道基因，該基因的表達(dá)可以^皮測(cè)定；才艮道基因包招:<旦不局限于，編石馬葡萄津唐苷酸酶(GUS)、熒光素酶、氯霉素轉(zhuǎn)乙酰酶(CAT)、綠色熒光蛋白(GFP)、堿性磷酸酶、以及P-半乳糖苷酶的基因。"減少程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性"指的是降低程序性死亡多肽-1的水平或者生物活性，這種降低是與未接受治療的對(duì)照組中的禾呈序性死亡多肽-1水平或者生物活性相比而言的。4艮才居本發(fā)明，相乂十于未接受治療的對(duì)照組相比，這種水平或者活性降{氐了至少5%,10%,20%，30%,40%，50%，60%,70%,80%,90%,100%，甚至多于100%。例:i口，3口果^1,禾呈序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-1配體2或者禾呈序性死亡多肽-1配體和程序性死亡多肽-1配體2進(jìn)行結(jié)合，程序性死亡多肽-1的生物活性會(huì)降低，從而導(dǎo)致程序性死亡多肽-1的^言號(hào)減弱，因jt匕增力。CD8+T細(xì)月包的細(xì)月包毒性。這里使用的關(guān)于程序性死亡多肽-1的術(shù)語(yǔ)"活性"包括天然存在的程序性死亡多肽-1蛋白具有的任4可活性，例如在活化的免疫細(xì)胞中調(diào)節(jié)抑制性信號(hào)的能力，例如通過(guò)與抗原呈遞細(xì)胞上的天然配體相結(jié)合的方式。這種對(duì)免疫細(xì)胞中的抑制性信號(hào)的調(diào)節(jié)作用導(dǎo)致對(duì)擴(kuò)增和/或由免疫細(xì)胞分泌的細(xì)月包因子進(jìn)行的調(diào)節(jié)。程序性死亡多肽-1也可以調(diào)節(jié)共刺激性信號(hào)，通過(guò)與共刺激受體竟?fàn)幗Y(jié)合B7分子來(lái)調(diào)節(jié)。因此，術(shù)語(yǔ)"程序性死亡多肽—1活性"包括程序性死亡多肽-1與其天然配體相結(jié)合的能力，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞共刺激性信號(hào)或者抑制性信號(hào)的能力，以及調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的能力。因此，降低程序性死亡多肽-1的活性包括減少程序性死亡多肽-1與禾呈序性死亡多肽-1配體或者程序性死亡多肽-1配體2的相互作用。這可以通過(guò)例如阻滯程序性死亡多肽-1配體或者程序性死亡多肽-1配體2來(lái)完成。"免疫細(xì)胞"指的是在免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用的造血起源細(xì)胞。免疫細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞(例如，B細(xì)胞和T細(xì)胞)，天然殺傷細(xì)月包，以及骨髓細(xì)月包(例如，單核細(xì)月包，巨噬細(xì)月包，嗜曙紅細(xì)月包，月巴大細(xì)月包，嗜石咸細(xì)l包，以及4立細(xì)l包)。"T細(xì)胞，，指的是CD4+T細(xì)胞或者CD8+T細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)T細(xì)胞包括TH1細(xì)胞和TH2細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)"T細(xì)胞的細(xì)胞毒性"包括由CD8+T細(xì)胞活性介導(dǎo)的任何免疫應(yīng)答。范例性的免疫應(yīng)答包括細(xì)J包因子的生成，CD8+T細(xì)胞的擴(kuò)增，粒酶或者穿孔素的生成，以及感染性制劑的清除。"無(wú)應(yīng)答性"包括免疫細(xì)月包對(duì)刺激的屈光性(refractivity)，例如經(jīng)過(guò)活化受體或者細(xì)胞因子的刺激。無(wú)應(yīng)答性可以發(fā)生在例如暴露于免疫抑制劑或者暴露于高劑量抗原的情況中。這里使用的術(shù)語(yǔ)"免疫無(wú)能性"或者"耐受性"包括對(duì)活化受體介導(dǎo)的刺激的屈光性。這種屈光性通常是抗原特異性的，并且在與tolerizing抗原的接觸終止之后仍然持續(xù)。例如，T細(xì)萬(wàn)包的免疫無(wú)能性(與無(wú)應(yīng)答性相反)的特征是細(xì)胞因子例如白細(xì)胞介素-2(IL-2)的產(chǎn)量的缺失。當(dāng)T細(xì)胞暴露于抗原并且在第二信號(hào)(共刺激性信號(hào))缺失的條件下接受了第一信號(hào)(T細(xì)胞受體或者CD-3介導(dǎo)的信號(hào))時(shí)，T細(xì)胞的免疫無(wú)能性產(chǎn)生了。在這種情況下，將細(xì)胞重新暴露于相同抗原(即使這種重新暴露在共刺激分子存在的情況下發(fā)生)會(huì)導(dǎo)致生產(chǎn)細(xì)胞因子的失敗，也因此導(dǎo)致了擴(kuò)增的失敗。然而，如果4吏用細(xì)月包因子(例如白細(xì)月包介素-2)對(duì)免疫無(wú)能型T細(xì)J包進(jìn)4于培養(yǎng)，所述T細(xì)月包可以對(duì)不相關(guān)抗原產(chǎn)生應(yīng)答并且發(fā)生擴(kuò)增。例如，由T淋巴細(xì)胞生成的白細(xì)胞介素-2的缺乏可以導(dǎo)致T細(xì)萬(wàn)包的免疫無(wú)能，該結(jié)果是通過(guò)ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)進(jìn)行測(cè)定的，或者〗吏用指示細(xì)J包系進(jìn)^亍的擴(kuò)增試驗(yàn)來(lái)測(cè)定的?；蛘?，可以利用報(bào)道基因的構(gòu)建。例如，在5，白細(xì)胞介素-2基因增強(qiáng)子或者在該增強(qiáng)子內(nèi)發(fā)現(xiàn)的API序列多聚體的控制下，免疫無(wú)能型T細(xì)胞不能激發(fā)由異源啟動(dòng)子誘導(dǎo)的白細(xì)胞介素-2基因轉(zhuǎn)錄(參見(jiàn)Kang等人于1992年在Science(《科學(xué)》)257:1134中發(fā)表的文章)。免疫無(wú)能的抗原凈爭(zhēng)異性T細(xì)月包可以減少至少10%，20。/。，30%,40%,50%,60%,70%,80%，90%,95%，或者甚至100%的細(xì)胞毒素活性，與相應(yīng)的對(duì)照組抗原4爭(zhēng)異性T細(xì)月包相比而言。"純化抗體"指的是至少60%的重量不含蛋白質(zhì)以及與其天然相關(guān)的天然存在的有才幾分子的抗體。優(yōu)選的，該重量為抗體重量的至少75%，更優(yōu)選為90%,最優(yōu)選為至少99%,抗體的例子例如程序性死亡多肽-1特異性抗體，程序性死亡多肽-1酉己體特異性抗體，或者程序性死亡多肽-1配體2特異性抗體。純化抗體可以通過(guò)例如親合色鐠法來(lái)制備，該方法^吏用重組蛋白或者保守基序多肽以及標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)完成。"特異'性結(jié)合"指的是識(shí)別和結(jié)合于一種抗原例如程序性死亡多肽-1、程序性死亡多肽-1配體多肽、或者程序性死亡多肽-1配體2多肽的抗體在本質(zhì)上不能與才羊品例如天然的含有蛋白的生物樣品中的其他非抗原分子進(jìn)行識(shí)別和結(jié)合。與程序性死亡多肽-1、程序性死亡多肽-1配體多肽、或者程序性死亡多肽-1配體2多肽結(jié)合的優(yōu)選抗體在下列文獻(xiàn)中祐」^開(kāi)美國(guó)專(zhuān)利NO.6808710,美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)Nos.20040137577,20030232323,20030166531，20030064380,20030044768,20030039653,20020164600,20020160000，20020110836,20020107363,以及20020106730,上述全部文件在此引入作為參考。"中和抗體"指的是影響程序性死亡多肽-1的任何生物活性、特別是影響其減少免疫應(yīng)答例如T細(xì)胞的細(xì)胞毒性的能力的抗體。所述中和抗體^f吏程序性死亡多肽-1減少免疫應(yīng)答的能力優(yōu)選降低50%,更優(yōu)選降低70%，最優(yōu)選降低90%或者更多?？梢?吏用測(cè)試免疫應(yīng)答的任意標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)評(píng)〗介潛在的中和抗體，包括^使用這里描述的方法。涉及到蛋白或者多肽的"本質(zhì)上等同，，指的是與參考氨基酸序列相比，這類(lèi)蛋白或者多肽表王見(jiàn)出至少75%、優(yōu)選85%、更優(yōu)選90%、最優(yōu)選95%、或者甚至99%的同一'性。對(duì)于蛋白或者多肽來(lái)iJt，比較序列的長(zhǎng)度通常為至少20個(gè)氨基酸，優(yōu)選至少30個(gè)氨基酸，更優(yōu)選至少40個(gè)氨基酸，最優(yōu)選至少50個(gè)氨基酸，或者是該蛋白或者多肽的全長(zhǎng)。編碼這類(lèi)"本質(zhì)上等同"的蛋白或者多肽的核酸構(gòu)成了"本質(zhì)上等同"的核酸的例子；由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，這類(lèi)核酸#皮7>認(rèn)為包4舌編碼上述蛋白或者多肽的4壬意序列。除此之外，"本質(zhì)上等同"的核酸序列還包括:在高度嚴(yán)格的條件下與參考核酸分子雜交的多核苷酸。"高度嚴(yán)格的條件"指的是被設(shè)置為高溫、低離子強(qiáng)度的任意條件，并且可以發(fā)生與下列條件下進(jìn)4于的相似的雜交<吏用至少40個(gè)核苷長(zhǎng)度的DNA探針、在含有0.5M磷酸氫鈉的緩沖液中、PH7.2、7。/。十二烷基磺酸鈉(SDS)、lmM乙二胺四乙酸(EDTA)、以及1%牛血清白蛋白(BSA)(片^V),65。C下進(jìn)4亍的雜交，或者是在含有48%曱酰胺、4.8XSSC、0.2MTris-鹽酸的緩沖液中，PH7.6，lXDenhardt，s溶液，10%葡聚糖疏酸酯以及0.1%十二烷基磺酸鈉(SDS),42。C下進(jìn)行的雜交。高度嚴(yán)格雜交的其他條件，例如PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))、Northern雜交、Southern雜交、或者原位雜交的條件是分子生物學(xué)領(lǐng)域的才支術(shù)人員熟知的。參見(jiàn)例如F.Ausubel等人于1998年在CurrentProtocolinMolecularBiology(《分子生物學(xué)當(dāng)*見(jiàn)禾呈》)，JohnWiley&Sons，NewYork,N.Y中發(fā)表的文章，該文章在此引入作為參考。"本質(zhì)上純的"指的是已經(jīng)與其天然共存的組分進(jìn)行分離了的核酸、多肽或者其他分子。典型的，當(dāng)所述多肽至少60%、70%、80%、90%、95%、或者甚至99%的重量不含蛋白質(zhì)以及與其天然相關(guān)的天然存在的有機(jī)分子時(shí)，上述多肽是本質(zhì)上純的。例如，本質(zhì)上純的多肽可以通過(guò)從天然來(lái)源中提取的方式獲4尋，或者通過(guò)在通常不表達(dá)蛋白的細(xì)J包中表達(dá)重組核酸的方法獲得，或者通過(guò)化學(xué)合成的方法獲得。術(shù)語(yǔ)"分離的DNA"指的是不含有來(lái)自于有才幾體天然存在的基因組、與DNA側(cè)面連接的基因的DNA。因此，術(shù)語(yǔ)"分離的DNA，，包括例如cDNA,克隆的基因組DNA，以及合成DNA。"有效劑量"指的是減少或者預(yù)防高血壓或者治療或預(yù)防哺物的量?；钚曰衔锏挠行┝扛鶕?jù)給藥路徑、宿主年齡、宿主體重、以及宿主的大致{建康狀況而不同。最終，主治醫(yī)師或者獸醫(yī)會(huì)決定合適的劑量以及給藥方案。"候選化合物，，指的是天然存在的或者人工合成的化學(xué)制劑。候選化合物可以包括，例如，肽，多肽，合成有機(jī)分子，天然有才幾分子，核酸分子，肽核酸分子，以及上述物質(zhì)的成分和書(shū)于生物。例如，根據(jù)本發(fā)明，一個(gè)有效的候選化合物能夠減少程序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-1配體2或者與兩者的結(jié)合。術(shù)語(yǔ)"藥物組合物"指的是含有至少一種治療活性制劑或者生物活性制劑、并且適合施用于患者的任意組合物?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的以及已經(jīng)接受的方法制備上述組合物中的任意一種，例如，Remington于2000年在TheScienceandPracticeofPharmacy(《藥劑學(xué)-牛學(xué)與實(shí)踐》)20sup.thedition(ed.ARGennaro),MarkPublishingCo.，Easton,Pa中發(fā)表的文章。治療方法通過(guò)將T細(xì)胞與一種減少程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的化合物相接觸，來(lái)增加T細(xì)胞的細(xì)胞毒性。所述T細(xì)胞是天然T細(xì)胞，記憶性T細(xì)胞或者活化T細(xì)胞。或者，所述T細(xì)月包是一種抗原特異性T細(xì)胞。這種抗原特異性T細(xì)胞對(duì)于感染性制劑來(lái)說(shuō)是免疫無(wú)能的或者是耐受的。T細(xì)胞的細(xì)胞毒性的特征是增加了的細(xì)i包擴(kuò)增和細(xì)月包因子釋》文。本方法有效的i爰解了各種感染和腫瘤引起的癥狀。通過(guò)向宿主施用程序性死亡多肽-1抑制劑，達(dá)到治療或者預(yù)防感染或者肺瘤、或者緩解由此帶來(lái)的癥狀的目的。所述的宿主是哺乳動(dòng)物例如人類(lèi)，靈長(zhǎng)類(lèi)，鼠類(lèi)，狗，貓，牛，馬以及豬。所述的宿主患有感染或者存在患有感染的危險(xiǎn)。所述患有感染或者存在患有感染危險(xiǎn)的宿主可以進(jìn)4亍適用于特1木感染的才示準(zhǔn)方法進(jìn)4亍治療。所述的感染例如細(xì)菌、病毒、真菌、支原體、或者寄生蟲(chóng)感染是一種持續(xù)性感染。持續(xù)性感染不同于急性感染，不能通過(guò)宿主免疫應(yīng)答的誘發(fā)被有效的清除。感染性制劑和免疫應(yīng)答達(dá)到一種平衡，使得被感染宿主在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)保持著感染性，而不必須表現(xiàn)出癥狀。持續(xù)性感染包括例如，潛伏性感染，慢性感染以及f曼感染。在慢性感染中，任何時(shí)刻都能夠從機(jī)體中檢測(cè)到感染性制劑的存在。然而，在一段4艮長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)該疾病的跡象和癥狀可能出現(xiàn)，也可能不出現(xiàn)。'l"曼性感染的例子包括肝炎B腺病毒(由B型肝炎病毒引起)和肝炎C腺病毒(由C型肝炎病毒引起)，細(xì)月包巨^f匕病毒，Epstein—Barr病毒，單純皰滲病毒l，單純皰滲病毒2，人類(lèi)皰滲病毒6,霍亂弧菌病毒，B型肝炎病毒，D型肝炎病毒，乳頭瘤病毒，細(xì)小病毒B19,多瘤病毒BK,多瘤病毒JC,麻滲病毒，風(fēng)療病毒，人類(lèi)免疫缺陷型病毒(HIV)，人類(lèi)T細(xì)胞白血病病毒I,以及人類(lèi)T細(xì)胞白血病病毒II。利什曼原蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)、錐形蟲(chóng)、癡原蟲(chóng)、裂體吸蟲(chóng)、以及腦炎微孢子蟲(chóng)的感染可以引起寄生蟲(chóng)性持續(xù)性感染。在潛伏性感染中，感染性制劑(例如病毒)是表面上滅活和靜止的，因此宿主并不總是表現(xiàn)出跡象或者癥狀。在潛伏性病毒感染中，在癥狀再次出現(xiàn)之前的很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)，病毒在宿主中保持一種平衡狀態(tài)，然而，直到疾病被再次激活，才能檢測(cè)到實(shí)際的病毒。潛伏性感染的例子包括由HSV-1(發(fā)熱性皰療)、HSV-2(生殖皰滲)以及VZV(禽痘帶狀皰滲)引起的感染。在慢感染中，感染性制劑的數(shù)量在一段相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)逐漸增加，在這個(gè)過(guò)程中》見(jiàn)察不到明顯的跡象或者癥狀。'隄感染的例子包括獲得性免疫功能缺陷綜合癥(由人類(lèi)免疫缺陷型病毒-1以及人類(lèi)免疫缺陷型病毒-2引起的)，能在動(dòng)物體內(nèi)引起腫瘤的慢病毒屬，以及朊病毒。除此之外，持續(xù)性感染通常作為急性感染的晚期并發(fā)癥而被引發(fā)。例如，在急性麻療感染之后可以發(fā)生亞急性硬化全腦炎(SSPE)，或者在風(fēng)滲感染之后可以發(fā)生退4匕性腦炎。腫瘤包括例如血管淋巴瘤或者結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)月包為主型的霍奇金、淋巴瘤。血管淋巴瘤(AIL)是一種激進(jìn)(發(fā)展快速)類(lèi)型的T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤，其標(biāo)志是擴(kuò)大的淋巴結(jié)點(diǎn)和血丙種球蛋白過(guò)多(血液中的抗體增多)。其他癥狀包括皮療，發(fā)燒，體重減輕，陽(yáng)性Coomb's測(cè)試或者夜間盜汗。這種惡性疾病通常發(fā)生在成人當(dāng)中?；颊咄ǔＴ?0至90歲之間(年齡平均值為65歲左右)，并且多為男性。當(dāng)血管淋巴瘤發(fā)生時(shí)，肝脾腫大、溶血性貧血以及多克隆高血丙種球蛋白癥也可能隨之發(fā)生。在大約40-50%的患者中還存在皮膚病變。結(jié)節(jié)性'淋巴細(xì)胞為主型的霍奇金、淋巴瘤是一種B細(xì)力包腫瘤，起源于具有變異的、非功能性免疫球蛋白基因的次級(jí)淋巴小結(jié)B細(xì)胞。與血管淋巴瘤相似，腫瘤細(xì)I包與濾泡性樹(shù)突狀細(xì)J包的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)相關(guān)聯(lián)。禾呈序性死亡多肽-1的在T細(xì)月包中的表達(dá)與結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞為主型的霍奇金淋巴瘤中的CD20+細(xì)胞相關(guān)，其表達(dá)方式與CD57+T細(xì)胞中的相似。CD57與CXCR5被鑒定為次級(jí)淋巴小結(jié)相關(guān)T細(xì)月包的又一個(gè)標(biāo)i己，這個(gè)發(fā)現(xiàn)i正明了下述結(jié)i侖在結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞為主型的霍奇金淋巴瘤中的腫瘤細(xì)胞與次級(jí)淋巴小結(jié)相關(guān)T細(xì)胞之間具有高度相關(guān)性。程序性死亡多肽-1抑制劑是具備能夠減少細(xì)胞中程序性死亡多肽-1、程序性死亡多肽-l配體、或者程序性死亡多肽-1配體2的表達(dá)或者活性的能力的4壬4可制劑。與對(duì)照細(xì)月包中的表達(dá)或者活性相比，程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性#1減少了至少10%，20%，30%，40%,50%，60%,70%，80%，90%,或者100%。所述對(duì)照細(xì)胞指的是沒(méi)有使用程序性死亡多肽-1抑制劑進(jìn)4亍處理的細(xì)月包。程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性通過(guò)本領(lǐng)域任何的標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)測(cè)定，包括這里所描述的方法。可選擇的，程序性死亡多肽-1抑制劑抑制或者減少程序性死亡多肽-i與程序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-1配體2之一的結(jié)合或者與兩者的結(jié)合。程序性死亡多肽-1抑制劑包括多肽，多核苷酸，小分子拮抗劑，或者siRNA。程序性死亡多肽-1抑制劑多肽包^r，例如，能夠減少程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者信號(hào)的程序性死亡多肽-1抗體或其片4爻。范例性的抗體包括抗程序性死亡多肽-1抗體，抗程序性死亡多肽-1配體抗體，抗程序性死亡多肽-1配體2抗體，抗細(xì)月包毒性T'淋巴細(xì)胞4元原-4抗體，抗B、T'淋巴細(xì)月包衰減因子抗體，抗CD28抗體，抗可i秀導(dǎo)共刺激分子抗體，抗可i秀導(dǎo)共刺激分子配體抗體，抗B7-1抗體，抗B7-2抗體，抗B7-H3抗體，或者抗B7-H4抗體?；蛘?，程序性死亡多肽-1抑制劑是一種能夠影響程序性死亡多肽-1的生物活性(即程序性死亡多肽-1與禾呈序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-1配體2之一的結(jié)合或者與兩者的結(jié)合)的顯性負(fù)性蛋白，或者是編碼該顯性負(fù)性蛋白的核酸。這種顯性負(fù)性蛋白是含有下述序列的任何氨基酸分子，該序列與該顯性負(fù)性蛋白相對(duì)應(yīng)的野生型蛋白的至少10個(gè)、20個(gè)、35個(gè)、50個(gè)、100個(gè)、或者多于150個(gè)氨基酸具有至少50%、70%、80%、90%、95%或者甚至99%的序列同一性。例如，顯性負(fù)性程序性死亡多肽-1發(fā)生變異，使其不能再與程序性死亡多肽-1酉己A才目^A。上述顯性負(fù)性蛋白可以作為一種表達(dá)載體進(jìn)行施用。這種表達(dá)載體可以是非病毒載體，或者是病毒載體(例如，逆轉(zhuǎn)錄酶病毒載體，重組腺病毒相關(guān)病毒載體，或者重組腺病毒載體)?；蛘?，這種顯性負(fù)性蛋白可以作為重組蛋白直接進(jìn)行全身施用，或者直接施用于^皮感染部位，通過(guò)利用孩史注射才支術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)。小分子包括，但不局限于，肽，模擬肽(例如，類(lèi)肽)，氨基酸，氨基酸類(lèi)似物，多核苷酸，多核苦酸類(lèi)似物，核苷，核苷類(lèi)似物，分子量小于大約5000克的有才幾化合物以及無(wú)才幾化合物(包括異器官化合物以及有機(jī)金屬化合物)，分子量小于大約2000克的有機(jī)化合物或者無(wú)機(jī)化合物，分子量小于大約1000克的有機(jī)化合物或者無(wú)機(jī)化合物，分子量小于大約500克的有機(jī)化合物或者無(wú)機(jī)化合物，以及鹽，酯，和這些化合物的其他藥物可接受性形式。程序性死亡多肽-1抑制劑是一種反義分子，一種RNA干拔i(siRNA)分子，或者是一種作用于程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的小分子拮抗劑。術(shù)語(yǔ)"siRNA"指的是阻止目標(biāo)mRNA進(jìn)行翻譯的雙鏈RNA分子。使用向細(xì)胞中導(dǎo)入siRNA的標(biāo)準(zhǔn)4支術(shù)，包括以DNA為才莫板轉(zhuǎn)錄siRNA的技術(shù)。所述siRNA包括正義考呈序性死亡多肽-1核酸序列、正義程序性死亡多肽-1配體核酸序列、正義禾呈序性死亡多肽-1配體2核酸序列、反義禾呈序性死亡多肽-1核酸序列、反義程序性死亡多肽-1配體核酸序列、反義程序性死亡多肽-1配體2核酸序列，或者兩者均包含?？蛇x擇的，從目標(biāo)基因中構(gòu)建一個(gè)siRNA，這才羊在一個(gè)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中既含有正義序列也含有反義序列，例如發(fā)夾結(jié)構(gòu)。在目標(biāo)細(xì);l包中發(fā)生的siRNA與程序性死亡多肽-1轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、程序性死亡多肽-1配體轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、或者程序性死亡多肽-1配體2轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的結(jié)合會(huì)導(dǎo)致細(xì)月包生成的禾呈序性死亡多肽-1、程序性死亡多肽-1配體、或者程序性死亡多肽-1配體2的減少。其中寡核苷酸的長(zhǎng)度為至少10個(gè)核苷，并且可以與天然存在的程序性死亡多肽-1轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、程序性死亡多肽-1配體轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、或者程序性死亡多肽-1配體2轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物具有相同的長(zhǎng)度。優(yōu)選的，該寡核苷酸具有19到25個(gè)核苷的長(zhǎng)度。最優(yōu)選的，該寡核苷酸具有少于75個(gè)、50個(gè)、25個(gè)核苷的長(zhǎng)度。其他適合的考呈序性死亡多肽-1抑制劑在例如下述文件中有所描述美國(guó)專(zhuān)利No.6808710，美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)Nos.20040137577,20030232323，20030166531,20030064380,20030044768，20030039653，20020164600,20020160000,20020110836，20020107363,和20020106730，上述全部文件在此引入作為參考。程序性死亡多肽-1抑制劑的優(yōu)選劑量是生物活性劑量。生物活性劑量是指能夠誘發(fā)CD8+T細(xì)胞中的細(xì)胞毒素活性增加、導(dǎo)致針對(duì)感染性制劑的特異性免疫應(yīng)答增加的劑量。所期望的是，這種程序性死亡多肽-1抑制劑具備將抗原特異性免疫細(xì)胞(例如，T細(xì)胞如CD8+T細(xì)胞)中的程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活寸生減少至少5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或者多于100%的能力，這些百分?jǐn)?shù)是相對(duì)于未經(jīng)過(guò)處理的對(duì)照水平而言的。可以使用本領(lǐng)域已知的任何方法測(cè)定免疫細(xì)胞中的程序性死亡多肽-1的水平或者活性，包括:例如Western印跡分才斤，免疫組織化學(xué)分才斤，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定分才斤，以及Northern印跡分4斤?；蛘?，可以通過(guò)評(píng)^f介考呈序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-1配體2中的一個(gè)或者兩個(gè)的結(jié)合來(lái)測(cè)定禾呈序性死亡多肽-1的生物活性。對(duì)禾呈序性死亡多肽-1的生物活性的測(cè)定取決于它增加CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性的能力，包括例如細(xì)胞因子的生成，感染性制劑的清除以及抗原特異性CD8+T細(xì)胞的擴(kuò)增。優(yōu)選的，所述制劑減少程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性，從而增加針對(duì)感染性制劑的特異性免疫應(yīng)答，與未經(jīng)處理的對(duì)照水平相比，這種增加為至少5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或者多于100%。因此，本發(fā)明所述的制劑是具有上述任意一種或者多種活性的任何制劑。盡管本發(fā)明的制劑優(yōu)選的在CD8+T細(xì)胞中表達(dá)，可以理解，能夠影響針對(duì)持續(xù)性感染的免疫應(yīng)答的任何細(xì)胞都可以運(yùn)用到本發(fā)明的方法中，包括例如B細(xì)胞?？蛇x擇的，給宿主施用一種或者多種其他的治療劑。其他的治療劑包括，例如，抗病毒化合物(例如，阿糖腺苷，無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，丙氧鳥(niǎo)苷，valgancyclovir，核苷酸類(lèi)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI)(例如，AZT(齊多夫定)，ddl(去羥肌苷)，ddC(二脫氧胞苷)，d4T(司他夫定)，或者3TC(拉米夫定))，非核苷酸類(lèi)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI)(例如，奈韋4i平或者地4立韋定)，蛋白酶抑制劑(沙奮那韋，利托那韋，茚地那韋，或者奈非那韋，利巴韋林，或者干擾素)，抗細(xì)菌化合物，抗真菌化合物，抗寄生蟲(chóng)化合物，抗炎癥化合物，抗腫瘤化合物或者止痛劑。其他的治療劑可以在施用程序性死亡多肽-1抑制劑之前、之中或者之后進(jìn)行施用。例如，將程序性死亡多肽-1抑制劑與其他的治療劑以至少1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、IO小時(shí)、12小時(shí)、18小時(shí)、或者多于24小時(shí)的時(shí)間間隔分別施用?？蛇x擇的，將其他的治療劑與程序性死亡多肽-1抑制劑配置在一起。當(dāng)所述其他的治療劑存在于不同的組合物中時(shí)，可以利用不同的給藥路徑。所述制劑的施用量是能夠有效達(dá)到治療、緩解或者預(yù)防感染的目的的量。程序性死亡多肽-1抑制劑及其他的治療劑的濃度取決于4艮多因素，包括給藥方式，作用位點(diǎn)，哺乳動(dòng)物的生理狀況，以及其^^藥物治療因素。因此，可以4吏用滴定測(cè)量法確定治療劑量，以獲得最佳的安全性和功效性，這是在本領(lǐng)域技工的能力范圍內(nèi)的。確定特定情況下的合適劑量和給藥方案在本領(lǐng)域:技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。可選擇的，進(jìn)一步向宿主施用疫苗，該疫苗能夠引起4十對(duì)于感染性制劑的保護(hù)性免疫應(yīng)答，其中所述感染性制劑能夠?qū)е鲁掷m(xù)性感染。例如，給宿主接種能夠針對(duì)人類(lèi)免疫缺陷型病毒(HIV)、肺結(jié)核、流行性感冒、或者C型肝炎引起免疫應(yīng)答的疫苗。范例性的疫苗在例^r下述文^f牛中有所描述Berzofsky等人于2004年在J.Clin.Invest.(《臨床研究雜志》)114:456-462中發(fā)表的文章。如果需要，可以使用灌泵升壓注射器(primeboostershot)或者j吏用佐劑來(lái)4妄種疫苗。程序性死亡多肽-1抑制劑以足以增加T細(xì)月包例如CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性的量來(lái)施用。T細(xì)胞的細(xì)胞毒性的增加導(dǎo)致免疫應(yīng)答的增加以及持續(xù)性感染的緩解。例如可以通過(guò)免疫細(xì)胞例如T細(xì)胞或者B細(xì)月包擴(kuò)增的增加、細(xì)月包因子生成量的增加、以及感染性制劑清除率的增加來(lái)測(cè)定免疫應(yīng)答的增加。這種緩解包括緩解與持續(xù)性感染相關(guān)的一種或者多種癥狀。與未經(jīng)過(guò)治療的宿主相比，施用禾呈序性死亡多肽-1一p制劑能夠以至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或者100。/。的7jc平緩解持續(xù)性感染或者緩解由持續(xù)性感染帶來(lái)的一種或者多種癥狀o如果這種治療取得了臨床上的效果，例如減少了感染性制劑在宿主中的載量，則該治療是有效的。當(dāng)進(jìn)4亍預(yù)防性的治療時(shí)，"有效，，指的是該治療能夠阻止或者預(yù)防感染的形成。可以利用任何本領(lǐng)&戈已知的用于i貪斷或者治療特定感染的方法來(lái)測(cè)定這種有效性。治療性給藥本發(fā)明包括給宿主施用一種組合物，該組合物包括一種能夠減少程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性(在這里使用"程序性死亡多肽-l抑制劑，，或者"治療性組合物"表示)的化合物。治療性化合物的有效劑量?jī)?yōu)選為大約0.1亳克/千克至大約150毫克/千克。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以知曉，有效劑量根據(jù)給藥路徑、賦形劑的^f吏用、以及與其他治療方法共同^f吏用的情況而有所變化，其中所述的其他治療方法包括^使用其他抗感染制劑或者治療劑，用于治療、預(yù)防或者緩解特定感染或者腫瘤引發(fā)的癥狀。通過(guò)4吏用標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)患有感染或者肺瘤(或者存在患有的危險(xiǎn))的哺乳動(dòng)物例如人類(lèi)患者進(jìn)4于it斷，來(lái)確定治療方案。使用本領(lǐng)域已知的方法向這類(lèi)個(gè)體施用藥物化合物。優(yōu)選的，該化合物通過(guò)口服給藥、直腸給藥、鼻內(nèi)給藥、局部給藥或者非腸道注射給藥形式施用，其中非腸道注射給藥形式包括皮下注射、腹膜內(nèi)注射、月幾肉內(nèi)注射、以及靜脈內(nèi)注射。所述化合物可以進(jìn)4于預(yù)防性的施用，或者是在檢測(cè)到感染之后施用?？梢赃x擇的將該化合物配置成治療性藥物混合物中的一個(gè)組分的形式來(lái)治療感染。適合于非腸道注射給藥形式的混合物的例子包括活性制劑在等壓鹽溶液、5%葡萄糖溶液、或者在其他標(biāo)準(zhǔn)的藥物學(xué)可接受賦形劑中形成的含水溶液的形式。標(biāo)準(zhǔn)的增溶劑例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或者環(huán)糊^晴也可以作為藥物學(xué)1!武形劑來(lái)佳_用，用于運(yùn)送治療性化合物。這里描述的治療性化合物可以利用通常的方法制備成組合物形式，以其他的給藥方式進(jìn)4亍施用。例如，將程序性死亡多肽-1抑制劑制備成膠嚢或者片劑的形式用于口服給藥。膠嚢可以包含任何標(biāo)準(zhǔn)的藥物學(xué)可接受原料例如凝膠或者纖維素。片劑可以才艮據(jù)傳統(tǒng)的加工方法通過(guò)壓縮治療性化合物與固體載體以及潤(rùn)滑劑的混合物來(lái)制備。固體載體的例子包括淀粉和蔗糖膨潤(rùn)土(sugarbentonite)。以硬殼狀片劑或者膠嚢的形式施用該化合物，其中硬殼狀片劑或者膠嚢中含有粘合劑，例如乳糖或者甘露醇，傳統(tǒng)的填充劑，以及成片劑。其他的形式包括藥膏、栓劑、藥糊、噴霧、藥片、乳液、凝膠、重復(fù)吸收的海綿、或者泡沫形式。這類(lèi)形式可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)行制備。當(dāng)所述的治療性化合物是編碼蛋白質(zhì)的核酸時(shí)，該治療性核酸以體內(nèi)給藥的形式被施用，促進(jìn)其編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)，通過(guò)將其構(gòu)建成合適的核酸表達(dá)載體的一部分并且進(jìn)^f亍施用，4吏其變?yōu)榧?xì)胞內(nèi)物質(zhì)(例如，通過(guò)4吏用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，通過(guò)直4妻注射，通過(guò)使用^f效粒子轟擊，通過(guò)涂覆脂質(zhì)體或者細(xì)胞表面受體或者轉(zhuǎn)染性制劑，或者通過(guò)與已知的進(jìn)入核子中的同源盒樣肽(homeobox-likepeptide)聯(lián)接施用(參見(jiàn)例如Joliot等人于1991年在Proc.NatlAcadSciUSA88:1864—1868中發(fā)表的文章)，以及類(lèi)似的方法)?；蛘?，將核酸治療劑導(dǎo)入細(xì)月包內(nèi)并且導(dǎo)入宿主細(xì)胞DNA中用于進(jìn)4亍表達(dá)，以同源重《且物的形式或者仍然以;摔離型載體的形式。使用標(biāo)準(zhǔn)基因治療載體進(jìn)行DNA的局部施用。這類(lèi)載體包括病毒載體，包括那些來(lái)自于復(fù)制缺陷型肝炎病毒(例如，B型肝炎病毒，C型肝炎病毒)、逆轉(zhuǎn)錄病毒(參見(jiàn)例如WO89/07136;Rosenberg等人于1990年在N.Eng丄Med.323(9):570-578中發(fā)表的文章)、腺病毒(參見(jiàn)例如Morsey等人于1993年在J.Cell.Biochem.(《細(xì)胞生物化學(xué)雜志》)，Supp.l7E中發(fā)表的文章)、腺病毒相關(guān)病毒(Kotin等人于1990年在Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:2211-2215中發(fā)表的文章)、復(fù)制缺陷型單純皰滲病毒(HSV;Lu等人于1992年在基因治療會(huì)議上的摘要，摘要第66頁(yè)，九月，22-26日，冷7良港實(shí)-驗(yàn)室，冷泉港，紐約)的載體，以及這些載體的^壬意《奮飾形式。本發(fā)明可以應(yīng)用能夠完成核酸至真核細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)移的任意其他運(yùn)送系統(tǒng)。例如，可以將核酸包裹在脂質(zhì)體例如陽(yáng)離子脂質(zhì)體(Lipofectin試劑)中、受體介導(dǎo)的運(yùn)送系統(tǒng)中、非病毒核酸基載體中、紅細(xì)胞血影中、或者孩O求體中(例如樣吏粒子；參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利No.4789734;美國(guó)專(zhuān)利No.4925673;美國(guó)專(zhuān)利No.3625214;Gregoriadis于1979年在DrugCarrierinBiologyandMedicine(《生物學(xué)和藥物學(xué)藥物載體》)，pp.287-341(AcademicPress學(xué)術(shù)出版社)中發(fā)表的文章)。也可以施用棵DNA。用于進(jìn)行基因治療的DNA可以通過(guò)非腸道注射方式施用于患者，例如，靜樂(lè)K內(nèi)注射，皮下注射，月幾肉內(nèi)注射，以及腹膜內(nèi)注射。將DNA或者誘導(dǎo)劑置于藥物學(xué)可接受性載體中進(jìn)行施用，藥物學(xué)可接受性載體即適用于向動(dòng)物施用的生物學(xué)可相容性溶媒，例如生理鹽水。治療有效劑量指的是能夠產(chǎn)生藥物學(xué)期望性結(jié)果的劑量，例如，能夠使被治療動(dòng)物體內(nèi)的程序性死亡多肽-1基因產(chǎn)物減少的劑量。這種劑量可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定。在藥物領(lǐng)域已知，對(duì)于任意給定的患者來(lái)說(shuō)，劑量取決于許多因素，包括患者的大小，體表面積，年齡，施用的特定化合物，性別，給藥時(shí)間和給藥途徑，一般健康狀況，以及同時(shí)施用的其他藥物。劑量可以發(fā)生變化，但用于DNA的靜脈內(nèi)給藥的優(yōu)選劑量是大約106至1022個(gè)拷貝數(shù)的DNA分子。典型的，施用于哺乳動(dòng)物的質(zhì)i^立的劑量為大約1納克DNA至大約5000樣吏克DNA。所期望的是，組合物中含有大約5納克至1000樣史克DNA，10納克至800微克DNA，0.1微克至500微克DNA，1微克至350微克DNA,25孩史克至250微克DNA，或者100樣史克至200微克DNA?；蛘撸梢韵虿溉閯?dòng)物施用編碼程序性死亡多肽-1才中制劑的重組腺病毒載體，可以以至少105,106，107,108,109,101G，或者IO"個(gè)蝕斑形成單位(pfu)的濃度來(lái)施用。將程序性死亡多肽-1基因產(chǎn)物溶于藥物學(xué)可接受性載體例如生理鹽水中，通過(guò)靜脈內(nèi)注射的方式進(jìn)行施用?？梢允褂眉?xì)胞內(nèi)運(yùn)送多肽的標(biāo)準(zhǔn)方法，例如將其包裹在脂質(zhì)體中的方法。這類(lèi)方法是本領(lǐng)域普通4支術(shù)人員熟知的?？梢灶A(yù)期，靜樂(lè);K內(nèi)注射的劑量大約為每千克體重每天施用1至100摩爾本發(fā)明所述的多肽。本發(fā)明所述的組合物能夠有效的用于非腸道注射給藥，例如靜l^內(nèi)注射，皮下注射，月幾肉內(nèi)注射，以及腹膜內(nèi)注射。將上述化合物直接與被接觸組織進(jìn)行接觸，可以使程序性死亡多肽-1抑制劑發(fā)揮藥效。因此，上述化合物可以通過(guò)局部給藥形式施用?；蛘?，程序性死亡多肽-1抑制劑可以通過(guò)全身給藥形式施用。此外，可以將上述化合物灌輸至(直接進(jìn)入器官(例如腸或者肝)或者通過(guò)皮下方式)固體或者重復(fù)吸收性基質(zhì)中進(jìn)行施用，所述固體或者基質(zhì)將化合物纟爰t曼的釋》文到宿主的鄰近組織和周?chē)M織中。例如，在對(duì)胃腸感染的治療中，可以將上述化合物進(jìn)行全身施用(例如，靜脈內(nèi)注射，直腸內(nèi)施用或者口服)或者局部施用(例如，直接施用到胃組織)?；蛘?，將浸漬了程序性死亡多肽-1抑制劑的晶片或者可重復(fù)吸收的海綿直接與胃組織進(jìn)行接觸。通過(guò)晶片上的藥物的擴(kuò)散以及聚合物基質(zhì)的侵蝕(erosion)使程序性死亡多肽-1抑制劑在體內(nèi)緩慢的釋放。作為另外一個(gè)實(shí)施例，可以通過(guò)向肝血管中注入含有程序性死亡多肽-1抑制劑的溶液來(lái)治療肝感染(即肝炎病毒)。為了治療神經(jīng)感染，可以通過(guò)靜脈內(nèi)注射或者鞘內(nèi)注射(即，直接注入到腦脊髓液中)的形式施用禾呈序性死亡多肽-1抑制劑。如果要局部施用，可以將浸漬了上述化合物的晶片或者可重復(fù)吸收的海綿直接與中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)組織進(jìn)4亍接觸。通過(guò)晶片上的藥物的擴(kuò)散以及聚合物基質(zhì)的侵蝕，使上述化合物或者該化合物的混合物在體內(nèi)緩慢的釋放?；蛘?，使用標(biāo)準(zhǔn)方法將化合物注入到大腦或者腦脊髓液中。例如，可以;改置一個(gè)帶有導(dǎo)管的磨孔環(huán)作為注射位點(diǎn)，該磨孔環(huán)在鉆入頭骨的磨孔處與頭骨相接合，導(dǎo)管連接一個(gè)儲(chǔ)液室，儲(chǔ)液室內(nèi)的液體通過(guò)穿透磨孔環(huán)上方隔膜的針或者探針流入。導(dǎo)管組(描述于例如美國(guó)專(zhuān)利No.5954687)提供了流體的流通路徑，該路徑適合于將流體傳豐lr至大腦、大腦旁或者大腦內(nèi)部的選定位置，或適合于Y吏流體從上述4立置中流出，以4呆i正在一,殳時(shí)間內(nèi)完成藥物的施用。為了治療心臟感染，可以將4匕合物運(yùn)送至例如心臟組織中(例如，心肌，心包膜，或者心內(nèi)膜)，通過(guò)穿透胸壁的直接冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射的方式，或者在熒光鏡的引導(dǎo)下使用標(biāo)準(zhǔn)的經(jīng)皮導(dǎo)管方法。因此，所述抑制劑可以被直接注射到組織中，或者通過(guò)插入肌體內(nèi)腔的血管內(nèi)支架或者導(dǎo)管被注入?？梢允褂萌魏畏N類(lèi)的冠狀動(dòng)脈導(dǎo)管或者灌流導(dǎo)管來(lái)施用該組合物。或者，將組合物涂覆于或者浸潰于血管內(nèi)支架上，所述支架被置于冠狀血管內(nèi)?？梢酝ㄟ^(guò)例如吸入的方式施用該組合物以進(jìn)4亍對(duì)肺部感染的治療。所述組合物以氣霧劑噴霧的形式通過(guò)壓力容器或者壓力分配器進(jìn)行運(yùn)送，其中含有適當(dāng)?shù)耐七M(jìn)劑，例如氣體或者噴霧器，所迷氣體是例如二氧化碳的氣體。本領(lǐng)域^支術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，通過(guò)本發(fā)明的方法進(jìn)4亍治療的患者可以是通過(guò)上述相同的測(cè)試被:〖t斷出患有持續(xù)性感染的患者，也可以是未經(jīng)檢查的、由于具備一種或者多種危險(xiǎn)因素(例如，與感染性制劑接觸，與被感染宿主接觸，遺傳傾向性，或者呈現(xiàn)出誘發(fā)繼發(fā)性感染的病理狀態(tài))而被鑒定為存在患有持續(xù)性感染的高度危險(xiǎn)的患者。減少持續(xù)性感染的癥狀或者損傷也可以包括，但不局限于，緩解癥狀，減小疾病程度，穩(wěn)定(即，不惡化)病情，延緩或者減慢疾病的發(fā)展，以及改善或者減輕病情。可以在保健提供者的嚴(yán)密監(jiān)督下在家中進(jìn)行治療，也可以在保健機(jī)構(gòu)進(jìn)行治療。測(cè)量免疫應(yīng)答的方法才艮據(jù)本發(fā)明的方法進(jìn)4于治療之后，測(cè)量免疫應(yīng)答的方法是本領(lǐng)域熟知的。例如可以通過(guò)4全測(cè)細(xì)胞因子的生成量、測(cè)量T細(xì)胞^的擴(kuò)增量、測(cè)量微生物制劑的清除率、以及測(cè)量CD8+T細(xì)胞的細(xì)月包毒性來(lái)評(píng)^f介T(mén)細(xì)"包的活性。這些測(cè)量方法在例如下述文4牛中有所描述美國(guó)專(zhuān)利No.6808710，美國(guó)專(zhuān)利申^貪Nos.20040137577，20030232323，20030166531，20030064380，20030044768，20030039653,20020164600，20020160000，20020110836，20020107363，以及20020106730，上述全部文件在此引入作為參考?？蛇x擇的，可以通過(guò)測(cè)量CD8+T細(xì)月包的擴(kuò)增(例如，胸苷結(jié)合，溴化脫氧尿嘧啶核苷檢測(cè)，以及細(xì)胞周期標(biāo)記物(例如，Ki67和CFSE)的染色，在例如Dong等人(于1999年在Nature(《自然》)5:1365-1369)的文章中有所描述)來(lái)評(píng)-f介程序性死亡多肽-1抑制劑增加CD8+T細(xì)月包的細(xì)月包毒性的能力。在一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)使用程序性死亡多肽-1抑制劑、如上所述的初級(jí)活化信號(hào)、以及311-胸苷培養(yǎng)純化T細(xì)胞來(lái)控制T細(xì)月包的擴(kuò)增。通過(guò)測(cè)量胸苦結(jié)合來(lái)確定T細(xì)"包的擴(kuò)增水平。也可以通過(guò)溶菌檢觀寸(lysisassays)(侈'J^口，51Cr^釋^:才企領(lǐng)'J或者穿孔素的釋》文;險(xiǎn)測(cè)或者粒酶的釋i文才企測(cè))、半胱天冬蛋白酶活化的4企測(cè)、或者測(cè)量微生物制劑從被感染宿主中的清除率來(lái)評(píng)價(jià)CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性。例如，可以檢測(cè)治療前后來(lái)自于被:感染宿主的生物樣品中(例如血清、脾臟、肝臟、肺、或者具有病毒趨向性的組織)的病毒載量。也可以測(cè)量細(xì)萬(wàn)包因子的生成量，例3口干4尤素y、月中瘤壞死因子a、以及白細(xì)胞介素-2的生成量。例如，在程序性死亡多肽-1抑制劑以及初級(jí)活化信號(hào)存在的條件下，對(duì)純化的T細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)?？梢詫?duì)上清液中各種細(xì)胞因子的水平進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法或者其^f也慣用的4企測(cè)方法，例如參見(jiàn)Dong等人(于1999年在Nature(《自然》)5:1365-1369)發(fā)表的文章。如果需要，可以通過(guò)程序性死亡多肽-1抑制劑誘發(fā)T細(xì)胞的共刺激的能力來(lái)評(píng)<介它的功效性。例如，體外T細(xì)力包共刺;敫的方法包括向表達(dá)程序性死亡多肽-1的純化T細(xì)胞j是供第一活化信號(hào)或者初級(jí)活化信號(hào)，該信號(hào)來(lái)自于抗CD3單克隆抗體或者佛波酯，或者來(lái)自于II型主要組織相容性復(fù)合體的相關(guān)抗原。之后，可以使用本領(lǐng)域已知的幾種常用方法中的任何一種來(lái)測(cè)定候選化合物制劑減少程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的能力，從而測(cè)定該化合物制劑向T細(xì)力包提供次級(jí)信號(hào)或者共刺激信號(hào)的能力，所述信號(hào)是調(diào)節(jié)免疫功能的必要條件。B細(xì)力包的應(yīng)答可以通過(guò)抗原特異性酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(例如，'淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦力莫炎病毒，人類(lèi)免疫缺陷型病毒，肺結(jié)核或者癡疾)、漿細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法、記憶性B細(xì)胞檢測(cè)法、B細(xì)月包表現(xiàn)型、以及對(duì)次級(jí)淋巴小結(jié)的免疫組織化學(xué)分4斤進(jìn)4亍評(píng)價(jià)。篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供了一種篩選方法，該方法用于鑒定能夠抑制程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的化合物。有效的化合物包括能夠抑制程序性死亡多肽-1的生物活性或者減少程序性死亡多肽-1的細(xì)"包水平的4壬-f可制劑。例如，4美選化合物可以減少考呈序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-l配體2其中之一或者兩者的結(jié)合。使用這類(lèi)制劑作為先導(dǎo)化合物，例如，本發(fā)明的篩選方法也可以用來(lái)鑒定其他新的程序性死亡多肽-l特異性抑制劑，該抑制劑具有治療、緩解、或者預(yù)防持續(xù)性感染、或者減輕這類(lèi)感染帶來(lái)的一種或者多種癥狀的功效。篩選方法可以包括大規(guī)模篩選技術(shù)。"候選化合物，，指的是天然存在的化學(xué)制劑或者人工合成的化學(xué)制劑。候選化合物可以包括，例如肽，多肽，合成有才幾分子，天然有才幾分子，核酸分子，肽核酸分子，以及上述物質(zhì)中的成分或者衍生物。例如，本發(fā)明所述的有效的候選化合物減少程序性死亡多肽-1與禾呈序性死亡多肽-1配體、禾呈序性死亡多肽-1配體2其中之一或者兩者的結(jié)合。可以使用許多方法來(lái)完成這樣的篩選。在一種方法中，向表達(dá)程序性死亡多肽-1的細(xì)胞培養(yǎng)基中加入不同濃度的候選化合物。"程序性死亡多肽-1基因，，指的是編碼程序性死亡多肽-1蛋白的核酸。"程序性死亡多肽-l融合基因，，指的是程序性死亡多肽-1啟動(dòng)子和/或與另外一種異源核酸序列形成可操作連接的禾呈序性死亡多肽-1編碼區(qū)域的全部或者一部分。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述的另外一種異源核酸序列是報(bào)道基因，其表達(dá)可以-陂測(cè)定；才艮道基因包4舌，但不局限于，編碼葡萄l唐苷酸酶(GUS)、熒光素酶、氯霉素轉(zhuǎn)乙酰酶(CAT)、綠色熒光蛋白(GFP)、堿性磷酸酶、以及p-半乳糖苦酶的基因。隨后，通過(guò)例如標(biāo)準(zhǔn)的Northern印跡分析或者通過(guò)具有適當(dāng)引物的實(shí)時(shí)PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))(參見(jiàn)Ausubel等人的文章，見(jiàn)上)來(lái)測(cè)定程序性死亡多肽-1的基因表達(dá)，Northern印跡分析^f吏用來(lái)自于程序性死亡多肽-1核酸分子的任意適當(dāng)?shù)钠?炎作為雜交探針。將使用候選化合物得到的基因表達(dá)水平與不含候選化合物的對(duì)照培養(yǎng)基中的水平進(jìn)行比較。如果需要，可以使用相同的常規(guī)方法和標(biāo)準(zhǔn)的免疫技術(shù)通過(guò)程序性死亡多肽-1的水平來(lái)測(cè)定候選化合物的作用，例如通過(guò)Western印跡或者利用程序性死亡多肽-1特異性抗體的免疫沉淀反應(yīng)。例如，可以Y吏用免疫檢測(cè)來(lái)探測(cè)或者監(jiān)測(cè)程序性死亡多肽-1的水平?？梢允褂靡?lt;壬<可標(biāo)準(zhǔn)免疫纟僉測(cè)形式存在的(例如，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定或者》文射免疫性測(cè)定)具有結(jié)合程序性死亡多肽-1的能力的多克隆抗體或者單克隆抗體來(lái)沖全測(cè)禾呈序性死亡多肽-1的水平。還可以4吏用質(zhì)鐠分析、高效液相色語(yǔ)、分光光度測(cè)定技術(shù)或者熒光分析技術(shù)、或者它們的組合來(lái)測(cè)定程序性死亡多肽-1?；蛘?，本發(fā)明的篩選方法可以用于鑒定4美選化合物，所述4美選化合物能夠通過(guò)減少程序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-1配體2其中之一或者兩者的結(jié)合來(lái)降低^f呈序性死亡多肽-1的生物活性，與未經(jīng)過(guò)處理的對(duì)照組相比，減少的量為至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或者100%。例如，可以才企測(cè)候選化合物在天然表達(dá)程序性死亡多肽-1的細(xì)l包中降^f氐程序性死亡多肽-1活性的能力，在使用cDNA轉(zhuǎn)染程序性死亡多肽-1之后，或者在含有程序性死亡多肽-1的不含細(xì)月包的溶液中，下面將會(huì)進(jìn)一步描述。候選化合物對(duì)程序性死亡多肽-1的結(jié)合作用或者活化作用可以通過(guò);^文射性結(jié)合分析以及非放射性結(jié)合分析、竟?fàn)幮苑治?、以及受體信號(hào)分析來(lái)測(cè)定。作為一個(gè)特殊的實(shí)施例，在4美選化合物(例如，肽，多肽，合成有才幾分子，天然有才幾分子，核酸分子，或者上述物質(zhì)的組分)存在的條件下培養(yǎng)能夠表達(dá)編碼程序性死亡多肽-1的核酸的哺乳動(dòng)物細(xì)胞(例如，嚙齒動(dòng)物細(xì)胞)。上述細(xì)胞可以?xún)?nèi)源性表達(dá)程序性死亡多肽-1，或者可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(例如，轉(zhuǎn)染以及病毒感染)將細(xì)月包遺傳工程化，^f吏其過(guò)表達(dá)程序性死亡多肽-1。4吏用Western印跡分4斤測(cè)定這些細(xì)l包中禾呈序性死亡多肽-1的表達(dá)水平，隨后與對(duì)照細(xì)胞中相同蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行比4交，所述對(duì)照細(xì)胞是沒(méi)有與候選化合物進(jìn)行接觸的細(xì)胞。能夠通過(guò)減少程序性死亡多肽-1的合成性或者生物活性因而促進(jìn)其活性水平降低的化合物被認(rèn)為是能夠有效應(yīng)用于本發(fā)明的。在一個(gè)特殊的實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明，能夠影響程序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-1配體2其中之一或者兩者的結(jié)合(從而降低程序性死亡多肽-1的生物活性)、導(dǎo)致免疫應(yīng)答的增加的化合物是有效的。如果一個(gè)分子具有降低程序性死亡多肽-1的生物活性的能力，這樣的分子可以4皮用來(lái)例如作為治療劑治療、減輕、或者預(yù)防持續(xù)性感染，或者緩解與這類(lèi)感染相關(guān)的一種或者多種癥狀。作為一個(gè)特殊的實(shí)施例，候選化合物可以與兩種蛋白進(jìn)行接觸，第一種蛋白是與程序性死亡多肽-1在本質(zhì)上等同的多肽，第二種蛋白是程序性死亡多肽-1配體或者程序性死亡多肽-1配體2(即，在可以發(fā)生結(jié)合的條件下與程序性死亡多肽-1結(jié)合的蛋白，并且這種結(jié)合導(dǎo)致降低的免疫應(yīng)答)。在這種特殊的篩選方法中，在加入候選化合物之后測(cè)定兩種蛋白之間的相互作用。在加入候選化合物之后，程序性死亡多肽-1與第二種多肽的結(jié)合的減少(相對(duì)于不加入化合物時(shí)的結(jié)合)表明這種候選化合物具有抑制兩種蛋白間的相互作用的能力。最終，本發(fā)明所述的篩選方法可以在例如不含細(xì)胞的系統(tǒng)或者在酵母雙雜交系統(tǒng)中使用。如果需要，可以將兩種蛋白中的一種或者候選化合物固定于前迷的載體上，或者可以具有一個(gè)可探測(cè)基團(tuán)。作為選擇的，或者在此基礎(chǔ)之上，可以從那些能夠特異性結(jié)合程序性死亡多肽-1并因而抑制程序性死亡多肽-1的物質(zhì)中篩選候選化合物。這類(lèi)候選化合物的效果取決于其與程序性死亡多肽-1相互作用的能力。這種相互作用可以很容易的通過(guò)任何標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)合技術(shù)以及功能檢測(cè)進(jìn)行測(cè)定(例如，那些描述于Ausubel等人發(fā)表的文章中的方法，見(jiàn)上)。例如，可以在體外測(cè)定候選化合物與程序性死亡多肽-1的相互作用及結(jié)合情況，并且可以通過(guò)任何標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)(例如，這里描述的那些方法)來(lái)測(cè)定其調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的能力。例如，可以使用基于色譜的技術(shù)鑒定結(jié)合于程序性死亡多肽-l的候選化合物。例如，使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)從工程化細(xì)胞中純化重組程序性死亡多肽-1(例如，通過(guò)上面描述的方法)，該工禾呈4匕細(xì)月包表達(dá)程序性死亡多肽-1，并且將重組程序性死亡多肽-1固定于柱上。之后，讓候選化合物溶液流經(jīng)該柱，由于具有與程序性死亡多肽-1結(jié)合的能力，特異于程序性死亡多肽-1的化合物被鑒定出來(lái)并被固定于柱上。為了分離上述化合物，對(duì)柱進(jìn)行清洗以除去非特異性結(jié)合的分子，然后將目標(biāo)化合物從柱中分離并且被收集。如果需要，通過(guò)這種方法(或者通過(guò)其他任何適當(dāng)?shù)姆椒?分離的化合物可以^皮進(jìn)一步純化(例如，通過(guò)高效液相色i普法)。新抑制劑的篩選以及先導(dǎo)化合物的優(yōu)化可以通過(guò)下述方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，例如通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)評(píng)價(jià)它們調(diào)節(jié)細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性的能力或者調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的能力來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。除此之外，可以檢測(cè)這些候選化合物作為抗微生物制劑(例如，上面所描述的)的能力。通過(guò)這種方法分離的化合物也可以?xún)羝び脕?lái)作為治療劑治療、減輕、或者預(yù)防持續(xù)性感染，或者緩解這類(lèi)感染帶來(lái)的一種或者多種癥狀。被鑒定為與程序性死亡多肽-1以小于或者等于10mM的親合常數(shù)相結(jié)合的化合物被認(rèn)為在本發(fā)明中是格外有效的。可能的治療劑包括有機(jī)分子，肽，模擬肽，多肽，以及與編碼程序性死亡多肽-1的核酸序列或者多肽相結(jié)合并因此抑制或者消除程序性死亡多肽-1活性的抗體?？赡艿目筤:生物制劑還包^^與這類(lèi)多肽結(jié)合并且占用這類(lèi)多肽的結(jié)合位點(diǎn)并因此阻止其與細(xì)胞結(jié)合分子相結(jié)合的小分子，這種方式阻止了其正常的生物活性。其他可能的抗微生物制劑包括反義分子。i貪斷方法和預(yù)測(cè)方法對(duì)腫瘤，例如血管T細(xì)胞淋巴瘤或者結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞為主型的霍奇金淋巴瘤的探測(cè)是通過(guò)檢查測(cè)試樣品(即，來(lái)自于患者的樣品)中的程序性死亡多肽-1含量來(lái)完成的。與對(duì)照樣品相比，程序性死亡多肽-1水平的變化意p未著宿主體內(nèi)存在腫瘤。相對(duì)于對(duì)照樣品而言，這種變化可以是程序性死亡多肽-1的增加或者減少。所述的對(duì)照樣品是通過(guò)與測(cè)試樣品相似的方式制備得到的(即，分離得到的)。樣品是例如血液、血清、acsitesfluid、尿液、或者其他體液。優(yōu)選的該一羊品是T細(xì)力包或者B細(xì)月包。測(cè)定測(cè)試才羊品中的程序性死亡多肽-1的量，并且與正常對(duì)照水平的表達(dá)進(jìn)行比較。正常對(duì)照水平指的是不存在肺瘤的宿主中通常存在的程序性死亡多肽-1的表達(dá)水平。來(lái)自于患者的樣品中增加的程序性死亡多肽-1水平意味著該宿主患有肺瘤，或者存在患有腫瘤的危險(xiǎn)。相反的，當(dāng)以預(yù)防為目的應(yīng)用本方法時(shí)，來(lái)自于患者的樣品中相似水平的或者降低水平的程序性死亡多肽-l意p木著該宿主不存在腫瘤或者不存在患有腫瘤的危險(xiǎn)。來(lái)自于患者的樣品中增加的程序性死亡多肽-1水平意味著該宿主患有腫瘤，或者存在患有胂瘤的危險(xiǎn)。程序性死亡多肽-1的量的變化是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著指的是這種變化大于僅僅是偶然產(chǎn)生的變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)確定。例如可以使用p值來(lái)確定統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。p值是指在一個(gè)試驗(yàn)中由偶然因素導(dǎo)致的組間差別的才既率值。(P(Z》Z觀察))。例如，pl直為0.01指的是有百分之一的結(jié)果是由偶然因素導(dǎo)致的。p值越低，表明組間差別更可能是由于不同處理方式而導(dǎo)致的。如果p^直至少為0.05,則表明這種變化是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。優(yōu)選的，p值是0.04,0.03,0.02,0.01，0.005,0.001或者更低。試驗(yàn)、檢測(cè)、或者方法的"i貪斷準(zhǔn)確率"表示該試-驗(yàn)、檢測(cè)或者方法鑒別患有腫瘤、或者存在患有腫瘤的危險(xiǎn)的患者的能力，所述"診斷準(zhǔn)確率"是根據(jù)患者是否具有"臨床顯著存在的"程序性死亡多肽-1來(lái)決定的。"臨床顯著存在"指的是患者體內(nèi)(通常是指來(lái)自于患者的樣品)存在的程序性死亡多肽-1高于或者低于預(yù)定的點(diǎn)值(或者閾值)，因此表明該患者患有腫瘤，這種相當(dāng)高的蛋白水平是一種標(biāo)記。術(shù)語(yǔ)"高度診斷準(zhǔn)確率"以及"相當(dāng)高度的診斷準(zhǔn)確率"指的是借助預(yù)定點(diǎn)值對(duì)程序性死亡多肽-1進(jìn)4于測(cè)定的試-驗(yàn)或者檢測(cè)能夠準(zhǔn)確的(精確的)指示出腫瘤的存在或者不存在。優(yōu)秀的試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)具有優(yōu)秀的準(zhǔn)確率。因此，對(duì)于糖尿病患者來(lái)"i兌，該試驗(yàn)只能顯示出陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)果，而無(wú)法將任何患者報(bào)告為"陰性"(不存在"假陰性")。換句話(huà)說(shuō)，該試驗(yàn)的"靈敏性(sensitivity)"(實(shí)際陽(yáng)性率)應(yīng)當(dāng)是100%。另一方面，對(duì)于非糖尿病患者來(lái)i兌，該試驗(yàn)只能顯示出陰性試l^結(jié)果，而無(wú)法將任何患者凈艮告為"陽(yáng)性"(不存在"假陽(yáng)性")。換句話(huà)說(shuō)，"特異性(specificity)"(實(shí)際陰性率)應(yīng)當(dāng)是100%。參見(jiàn)例如，O，MarcaighAS，JacobsonRM于1993年發(fā)表的文章"EstimatingThePredictiveValueOfADiagosticTest，HowToPreventMisleadingOrConftisingResults(《估算診斷試驗(yàn)的預(yù)測(cè)值，防止產(chǎn)生誤導(dǎo)和混亂的結(jié)果》)"，Clin.Ped.32(8):485-491，i亥文章中i寸論了在i式-驗(yàn)侈'^口i降床it斷試-驗(yàn)中的特異性、靈敏性、以及陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值。改變?cè)囼?yàn)(或者檢測(cè))的點(diǎn)值或者閾值通常會(huì)改變靈敏性和特異性，這種改變呈定性反比關(guān)系。例如，當(dāng)點(diǎn)值減小時(shí)，參與試-驗(yàn)的更多個(gè)體將會(huì)產(chǎn)生高于該點(diǎn)值或者閾值的試驗(yàn)結(jié)果。由于產(chǎn)生高于點(diǎn)值的試-驗(yàn)結(jié)果的個(gè)體^皮認(rèn)為患有纟皮檢測(cè)的疾病、狀況或者癥狀，降低點(diǎn)值會(huì)導(dǎo)致更多的個(gè)體被認(rèn)為是具有陽(yáng)性結(jié)果的(即，^也們患有肺瘤)。因》匕，與實(shí)際患有力中瘤的個(gè)體比例相比，會(huì)有更高比例的個(gè)體^皮該試驗(yàn)指定為患有腫瘤。因此，該試驗(yàn)的靈壽文性(實(shí)際的陽(yáng)性率)會(huì)增加。然而，與此同時(shí)，更多的4艮陽(yáng)性會(huì)出現(xiàn)，因?yàn)楦鄬?shí)際上不存在疾病、狀況、或者癥狀的人(即，實(shí)際上是"陰性"的人)會(huì)被該試驗(yàn)指定為具有高于點(diǎn)值的程序性死亡多肽-1，因而^皮凈艮告為陽(yáng)性(即，存在疾病、^i犬況或者癥狀)，而不會(huì)通過(guò)試-險(xiǎn)凈皮準(zhǔn)確的it斷為陰性。因此，該試-驗(yàn)的特異性(實(shí)際的陰性率)會(huì)降低。類(lèi)似的，升高點(diǎn)值將會(huì)導(dǎo)致降低的靈敏性和增大的特異性。因此，在評(píng)價(jià)一個(gè)用于診斷患者狀況的醫(yī)學(xué)試驗(yàn)、檢測(cè)或者方法的時(shí)候，應(yīng)當(dāng)既考慮到靈敏性也考慮到特異性，并且要留意這種靈敏性和特異性是在何種點(diǎn)值的情況下測(cè)定的，因?yàn)殪`敏性和特異性可以隨著點(diǎn)值范圍的變化而發(fā)生顯著變化。然而，存在一種指示物，它能夠用一個(gè)單一的數(shù)值代表全部點(diǎn)值范圍內(nèi)的試驗(yàn)、檢測(cè)、或者方法的靈敏性和特異性。這種指示物是被討論的試驗(yàn)、檢測(cè)、或者方法的接受物操作特性("ROC，，)曲線。參見(jiàn)例如Shultz的文章"ClinicalInterpretationOfLaboratoryProcedures(《實(shí)-驗(yàn)室工作程序的臨床釋義》)，第14章，Teitz的FundamentalsofClinicalChemistry(臨床4匕學(xué)基本原理)，Burtis和Ashwood(eds.編l專(zhuān))，4thedition(第四片反)，1996年，W.B.SaundersCompany,192-199頁(yè)；以及Zweig等人于1992年在Clin.Chem(臨床4匕學(xué))38(8):1425-1428中發(fā)表的文章"ROCCurveAnalysis:AnExampleShowingTheRelationshipsAmongSerumLipidAndApolipoproteinConcentrationsInIdentifyingPatientsWithCoronaryArteryDisease(《才妄受4勿操作凈爭(zhēng)性曲線分才斤一個(gè)能夠在i貪斷冠心病患者的方法中表示出血清油脂與阿樸脂蛋白濃度關(guān)系的例子》)"。接受物操作特性(ROC)曲線是一個(gè)x-y圖，y軸表示靈敏性，其刻度在0到1(即100%)之間，靈敏性數(shù)值與1減去特異性得到的數(shù)值相反，特異性在x軸表示，其刻度在0到1(即100%)之間。換句話(huà)說(shuō)，這是一個(gè)關(guān)于試驗(yàn)、檢測(cè)或者方法的實(shí)際陽(yáng)性率與假陽(yáng)性率的圖線。為了構(gòu)建被討論的試驗(yàn)、檢測(cè)、或者方法的接受物操作特性(ROC)曲線，使用一種特別準(zhǔn)確的方法或者"黃金標(biāo)準(zhǔn)"方法對(duì)患者進(jìn)行評(píng)價(jià)，該方法不同于凈皮討i侖的試-驗(yàn)、檢測(cè)、或者方法，以確定患者針對(duì)于某種疾病、狀況、或者癥狀來(lái)說(shuō)實(shí)際上是陽(yáng)性還是陰性(例如，冠狀動(dòng)脈血管造影術(shù)是用于檢測(cè)冠狀動(dòng)l^粥樣石更化的黃金標(biāo)準(zhǔn)方法)。同時(shí)4吏用一皮討i侖的試-驗(yàn)、檢測(cè)或者方法對(duì)患者進(jìn)4于檢查，4十對(duì)于不同的點(diǎn)值，這些患者^(guò)^皮診斷為屬于陽(yáng)性或者陰性。針對(duì)每個(gè)點(diǎn)值，得到一個(gè)靈敏性(實(shí)際的陽(yáng)性率)數(shù)值以及一個(gè)1減去特異性得到的數(shù)值(該值等于假陽(yáng)性率)，將每對(duì)x-y值作為一個(gè)點(diǎn)畫(huà)在x-y圖表中。連接這些點(diǎn)得到的"曲線"就是接受物操作特性(ROC)曲線。在曲線下的區(qū)i或("AUC，，)就是以一個(gè)單一的凌t值K表全部點(diǎn)值范圍內(nèi)的試驗(yàn)、檢測(cè)、或者方法的靈敏性和特異性的指示物。最大的曲線下區(qū)域(AUC)是1，最小的區(qū)域是二分之一。曲線下區(qū)i或越4妾近l，表明試—驗(yàn)的準(zhǔn)確率越高。"高度的診斷準(zhǔn)確率"指的是試驗(yàn)或者檢測(cè)(例如本發(fā)明所述的確定臨床顯著存在的程序性死亡多肽-1、進(jìn)而i貪斷出是否存在糖尿病的試驗(yàn))的AUC(該試驗(yàn)或者檢測(cè)的ROC曲線下的區(qū)域)為至少0.70,希望是至少0.75，更希望是至少0.80，優(yōu)選至少0.85,更優(yōu)選至少0.90，最優(yōu)選至少0,95。"相當(dāng)高度的診斷準(zhǔn)確率，，指的是試驗(yàn)或者檢測(cè)的AUC(該試-瞼或者檢測(cè)的ROC曲線下的區(qū)域)為至少0.875，希望是至少0.90，更希望是至少0.925，優(yōu)選至少0.95,更優(yōu)選至少0.975，最優(yōu)選至少0.98?？蛇x擇的，也可以測(cè)定其^也已知的生物標(biāo)記物對(duì)特定肺瘤的表達(dá)來(lái)進(jìn)一步指示宿主是否患有肺瘤。例如，測(cè)定CDIO,bcl-6,CD20，CD57，或者CXCR5?？梢允褂萌魏芜m當(dāng)?shù)姆绞綔y(cè)定程序性死亡多肽-1以及其他生物標(biāo)記物，但是通常使用下述方法進(jìn)行測(cè)定將來(lái)自于患者的樣品與抗體進(jìn)4于接觸，該抗體結(jié)合于程序性死亡多肽-1或者生物標(biāo)記物，之后，測(cè)定是否生成反應(yīng)產(chǎn)物。所述的抗體可以是單克隆抗體，多克隆抗體，嵌合抗體，或者是它們的片段，正如上面詳細(xì)討論過(guò)的，可以使用任何適當(dāng)?shù)拿庖邫z測(cè)方法對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行探測(cè)。來(lái)自于患者的樣品通常是如上所述的生物液，可以使用上述方法中<吏用過(guò)的相同的生物液樣品?？梢岳贸绦蛐运劳龆嚯?1的表達(dá)監(jiān)測(cè)腫瘤的治療過(guò)程。在該方法中，提供來(lái)自于經(jīng)過(guò)治療的宿主的生物樣品，所述的治療是例如針對(duì)腫瘤的外科手術(shù)治療、化療或者激素治療。如果需要，在治療前、治療中、或者治療后的不同時(shí)間點(diǎn)從宿主中提取生物樣品。然后，測(cè)定程序性死亡多肽-1的表達(dá)，并與參考組進(jìn)4亍對(duì)照，參考組是例如Jit瘤病情已知的對(duì)照組。對(duì)參考樣品進(jìn)行治療?；蛘?，不對(duì)參考樣品進(jìn)行治療?？蛇x擇的，先進(jìn)行上述測(cè)定，為第二期(secondlook)外科觀察操作及隨后的外科觀察操作做準(zhǔn)備。例如，從已經(jīng)接受了腫瘤的初級(jí)外科治療以及隨后的抗腫瘤制劑治療的宿主中提取才羊品，以監(jiān)測(cè)治療進(jìn)禾呈。如果參考樣品來(lái)自于不存在腫瘤的宿主，當(dāng)測(cè)試樣品中的程序性死亡多肽-1的量與參考樣品相似或者有所減少時(shí)，表明該治療是有效的。然而，當(dāng)測(cè)試沖羊品中的程序性死亡多肽-1的量與參考樣品相比有所增加時(shí)，表明該治療沒(méi)有取得有效的臨床成果或者預(yù)后。"有效的"指的是該治療導(dǎo)致程序性死亡多肽-1的量的減少，或者導(dǎo)致宿主體內(nèi)的腫瘤的大小、傳播、或者轉(zhuǎn)移可能性被減小。使用標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)對(duì)腫瘤進(jìn)行評(píng)價(jià)。有效性是使用診斷或者治療特定腫瘤的^f壬〗可已知方法進(jìn)4亍測(cè)定的。也可以利用禾呈序性死亡多肽-1的表達(dá)來(lái)鑒定能對(duì)全身系統(tǒng)治療產(chǎn)生應(yīng)答的宿主，所述的全身系統(tǒng)治療例如化療、激素治療或者》丈射治療。在該方法中，在對(duì)宿主進(jìn)4亍腫瘤外科手術(shù)治療之前，乂人該宿主中提取生物才羊品。然后，測(cè)定程序性死亡多肽-1的表達(dá)，并且與來(lái)自于經(jīng)過(guò)腫瘤外科切除術(shù)后的宿主的生物樣品進(jìn)行比較。如果在外科切除腫瘤之后程序性死亡多肽-1的量減少了，表明該患者可能對(duì)全身系統(tǒng)治療產(chǎn)生了應(yīng)答性。相反，如果在外科切除腫瘤之后程序性死亡多肽-1的量保持不變或者增加了，表明該患者可能沒(méi)有對(duì)全身系統(tǒng)治療產(chǎn)生應(yīng)答性?？梢?使用本4頁(yè)i或已知的4壬<可方法通過(guò)蛋白或者核酸的水平來(lái)測(cè)定程序性死亡多肽-1或者其他腫瘤生物標(biāo)記物的表達(dá)。例如，可以使用Northern雜交分析來(lái)測(cè)定基因表達(dá)，這種雜交分析使用的探針能夠特異性識(shí)別這些序列中的一種或者多種。或者，使用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)對(duì)表達(dá)進(jìn)行測(cè)定，例如使用特異于不同的基因表達(dá)序列的引物。也可以通過(guò)檢測(cè)蛋白水平來(lái)測(cè)定表達(dá)，即測(cè)定由上述基因產(chǎn)物編碼的肽的水平或者活性。這種方法是本領(lǐng)域已知的，包括例如基于針對(duì)上述基因編碼的蛋白的抗體的免疫檢測(cè)?？梢允褂萌魏紊锊牧蟻?lái)檢測(cè)/量化所述蛋白或者其活性?；蛘撸梢愿鶕?jù)每種被檢測(cè)蛋白的活性選擇適當(dāng)?shù)姆椒▉?lái)測(cè)定由標(biāo)記基因編碼的蛋白的活性。宿主優(yōu)選是哺乳動(dòng)物。所述哺乳動(dòng)物是例如人類(lèi)，非人類(lèi)的靈長(zhǎng)類(lèi)，鼠類(lèi)，狗，貓，馬，或者牛。宿主通常是人類(lèi)女性或者人類(lèi)男性。該宿主之前裙:it斷為患有腫瘤，并且可能已經(jīng)4妾受了腫瘤治療?；蛘?，該宿主之前沒(méi)有祐:it斷為患有腫瘤。本發(fā)明能夠有效應(yīng)用于存在患有腫瘤危險(xiǎn)的全部患者中。盡管每個(gè)種類(lèi)的肺瘤都具有各自不同的危險(xiǎn)因素，誘發(fā)腫瘤的危險(xiǎn)隨著年齡、性別、種族、個(gè)人病史及家族病史而增加。其他的危險(xiǎn)因素與生活方式非常相關(guān)，同時(shí)某些感染、職業(yè)性照射以及某些環(huán)境因素也能夠誘發(fā)腫瘤。通常通過(guò)質(zhì)i普鑒定來(lái)it斷腫瘤，《旦也可以通過(guò)其^也方式例如放射線診斷或者超聲波診斷。通常使用腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)進(jìn)行治療，然后使用抗腫瘤制劑進(jìn)行治療，抗腫瘤制劑例如多烯紫杉醇，長(zhǎng)春瑞濱，吉西他濱，卡培他濱，或者環(huán)磷酰胺、氨曱喋呤和氟尿嘧，定的纟且合物；環(huán)磷酰胺、阿霉素(亞德、利亞霉素)和氟尿n密，定的組合物；阿霉素(亞德利亞霉素)和環(huán)磷酰胺的組合物；阿霉素(亞德利亞霉素)和環(huán)磷酰胺、紫杉醇、阿霉素，并且通過(guò)連續(xù)超濾(CMF)處理；或者環(huán)磷酰胺，表柔比星和氟尿嘧，定。除此之外，許多患者還需要接受放射治療。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施的免疫檢測(cè)可以是同源檢測(cè)或者是異源檢測(cè)。在同源才企測(cè)中，免疫反應(yīng)通常包4舌特異性抗體(例如，禾呈序性死亡多肽-l)、標(biāo)記分析物、以及待測(cè)樣品。從標(biāo)記分析物發(fā)出的信號(hào)在抗體與標(biāo)記分析物結(jié)合處經(jīng)過(guò)直接的或者間接的修飾。上述免疫反應(yīng)以及對(duì)該反應(yīng)程度的檢測(cè)反應(yīng)是在同源溶液中進(jìn)行的。可以使用的免疫化學(xué)標(biāo)記物包括自由基、放射性同位素、熒光染料、酶、抗菌素、或者輔酶。在異源檢測(cè)方法中，使用的試劑通常是樣品、抗體、以及能夠生成可纟果測(cè)信號(hào)的工具?？梢詌吏用前面描述的樣品。所述抗體通常被固定化于載體例如珠、平板或者載玻片上，并且與被懷疑為含有抗原的液相樣本相接觸。然后，從液相中分離出載體，并且使用能夠產(chǎn)生可探測(cè)信號(hào)的工具在載體相或者液相中檢測(cè)信號(hào)。這種信號(hào)與樣品中存在的分析物有關(guān)。能夠產(chǎn)生可探測(cè)信號(hào)的工具包括放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記、或者酶標(biāo)記。例如，如果待測(cè)抗原上含有第二個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，那么結(jié)合于該位點(diǎn)之上的抗體可以與一個(gè)可探測(cè)基團(tuán)共軛連接，并且在分離步驟之前被加入到液相反應(yīng)溶液中。存在于固體載體上的可探測(cè)基團(tuán)表明在被測(cè)試樣品中含有抗原。合適的免疫檢測(cè)的例子是放射性免疫檢測(cè)、免疫熒光方法、或者酶聯(lián)免疫測(cè)定。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知能夠有效用于上述方法中的許多特異E.Maggio于1980年戶(hù)斤著的Enzyme-Immunoassay(《酶法免疫氺企測(cè)》)(CRCPress,Inc.,BocaRaton,Fla.);也可以參見(jiàn)Skold等人申請(qǐng)的、名稱(chēng)為"MethodsforModulatingLigand-ReceptorInteractionsandtheirApplication(《i周節(jié)酉己體-受體間4目互4乍用的方法及這類(lèi)方法的應(yīng)用》)"的美國(guó)專(zhuān)利No.4727022，F(xiàn)orrest等人申請(qǐng)的、名^爾為"ImmunoassayofAntigens(《4元原的免疫才企測(cè)》)"的美國(guó)專(zhuān)利No.4659678，David等人申i青的、名稱(chēng)為"ImmunometricAssaysUsingMonoclonalAntibodies(《使用單克隆抗體的免疫測(cè)量分析》)"的美國(guó)專(zhuān)利No.4376110,Litman等人申請(qǐng)的、名稱(chēng)為"MacromolecularEnvironmentControlinSpecificReceptorAssays(《特異性受體才企測(cè)中的大分子環(huán)境控制》)"的美國(guó)專(zhuān)利No.4275149,Maggio等人申i青的、名稱(chēng)為"ReagentsandMethodEmployingChanneling(《<吏用通道的i式劑以及方法》)"的美國(guó)專(zhuān)利No.4233402,以及Boguslaski等人申i青的、名稱(chēng)為"HeterogeneousSpecificBindingAssayEmployingaCoenzymeasLabel(《利用輔酶作為標(biāo)記的異源特異性結(jié)合分析》)"的美國(guó)專(zhuān)利No.4230767。使用已知的技術(shù)例如沉淀法將抗體共輒結(jié)合于用于i貪斷4全測(cè)的適當(dāng)固體載體上(例如，珠，平斧反，載玻片或者孔，由例如乳膠或者聚苯乙烯的材料制成)。也可以使用已知的技術(shù)將這里描述的抗體共軛結(jié)合到可探測(cè)基團(tuán)例如放射性標(biāo)記(例如，35S,1251,1311)、酶標(biāo)記(例如，辣才艮過(guò)氧化物酶，堿性;粦酸酯酶)、以及熒光標(biāo)記(例如，熒光素)之上。用于實(shí)施上述方法的i貪斷試劑盒可以通過(guò)許多方法來(lái)制備。在一種實(shí)施方式中，該i貪斷試劑盒包括(a)共輒結(jié)合于固體載體上的抗體(例如，程序性死亡多肽-1)以及(b)共扼結(jié)合于可探測(cè)基團(tuán)上的另一個(gè)抗體。該試劑也可以包括助劑例如緩沖劑以及蛋白穩(wěn)定劑例如多糖以及類(lèi)似物。如果需要的話(huà)，該診斷試劑盒可以進(jìn)一步包括含有可探測(cè)基團(tuán)的信號(hào)生成系統(tǒng)中的其他成員(例如，酶作用底物)，減少試驗(yàn)背景干擾的制劑，控制劑，進(jìn)行試驗(yàn)的儀器，以及類(lèi)似物?；蛘?，試驗(yàn)試劑盒包括(a)抗體，以及(b)針對(duì)共軛結(jié)合于可探測(cè)基團(tuán)的抗體的特異性結(jié)合伙伴。該試劑盒也可以包括前面描述的助劑?？梢砸匀魏芜m當(dāng)?shù)男问桨b該試驗(yàn)試劑盒，典型的將所有組分裝在一個(gè)容器中，并且裝入用于說(shuō)明如何進(jìn)行試-驗(yàn)的說(shuō)明書(shū)。本發(fā)明將下面描述的實(shí)施例作為部分基礎(chǔ)。這些實(shí)施例的目的在于描述本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)發(fā)明的限制。實(shí)施例1:抗程序性死亡多肽-1配體抗體對(duì)慢性感染小鼠中牙呈序性死亡多肽-1途徑的抑制使用經(jīng)過(guò)不同的淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)菌抹感染的小鼠，來(lái)研究'隄性病毒感染對(duì)CD8陽(yáng)性T細(xì)月包功能的影響。淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)Armstrong菌才朱引起的急性感染能夠在8天內(nèi)被清除，留下一批長(zhǎng)期存活的、具備高度功能性的休眠記憶性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞。相反，LCMVC1-13菌抹在宿主中形成持續(xù)性感染，表現(xiàn)為能夠持續(xù)3個(gè)月的病毒血。這種病毒不確定的4f留在某些組織中，因而抗原特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的功能被削弱。DbNP396-404CD8陽(yáng)性T細(xì)胞被物理性刪除，而DbGP33-41CD8陽(yáng)性T細(xì)胞以及DbGP276-286CD8陽(yáng)性T細(xì)胞依然存在，但是喪失了擴(kuò)增或者分泌抗病毒細(xì)胞因子例如干擾素-Y(IFN-Y)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)的能力。C57BL/6小鼠購(gòu)買(mǎi)自NationalCancerInstitute(國(guó)家月中瘤學(xué)會(huì))(Frederick,MD)。使用2xI06pfu個(gè)LCMV-C1-13對(duì)小鼠進(jìn)行感染。在感染當(dāng)天以及感染后的第二天，注射存在于PBS(磷酸緩沖液)中的500微克GK(雜交瘤細(xì)胞)1.5，以造成CD4缺失。通過(guò)給小鼠注射2x105pfu個(gè)LCMVArmstrong來(lái)獲得淋巴細(xì)力包脈絡(luò)叢腦力莫炎病毒(LCMV)免疫型小鼠。對(duì)經(jīng)過(guò)FACS(流式細(xì)月包術(shù))純化的天然DbGP33-41特異性P14轉(zhuǎn)基因CD8陽(yáng)性T細(xì)胞、來(lái)自于LCMVArmstrong免疫型小鼠的DbGP33-41特異性記憶性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞、以及來(lái)自于CD4陽(yáng)性缺陷型LCMVC1-13感染型小鼠的DbGP33-41CD8陽(yáng)性T細(xì)胞以及DbGP276-286CD8陽(yáng)性T細(xì)胞進(jìn)行基因排列分析。使用如Kaech等人(于2002年在Cell(《細(xì)胞》)111:837-51中)描述的方法進(jìn)行RNA分離和基因排列分析。與記憶性CD8陽(yáng)性T細(xì)月包相比，考呈序性死亡多肽-1mRNA在衰竭的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞中高度表達(dá)(附圖1A)。而且，程序性死亡多肽-1表達(dá)于LCMVC1-13感染型小鼠的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞表面，但經(jīng)過(guò)LCMVArmstrong清除后，CD8陽(yáng)性T細(xì)胞表面不存在程序性死亡多肽-l(附圖1B)。與未感染的小鼠相比，慢性感染型小鼠在大部分淋巴細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)l包(APC)上表達(dá)了更高水平的禾呈序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-1配體中的一種。因此，當(dāng)程序性死亡多肽-1的表達(dá)被誘發(fā)時(shí)，伴隨著病毒抗原的持續(xù)性存在以及CD8陽(yáng)性T細(xì)月包的衰竭。為了一瞼證在慢性、淋巴細(xì)J包脈絡(luò)叢腦力莫炎病毒感染過(guò)程中阻滯程序性死亡多肽-1/程序性死亡多肽-1配體的路徑能夠恢復(fù)T細(xì)胞功能并且增強(qiáng)對(duì)病毒的控制，在慢性淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染過(guò)禾呈中4吏用aPD-Ll封閉抗體阻斷程序性死亡多肽-1/程序性死亡多肽-1配體的共刺激。在感染后的第23天至第37天里，每隔三天向LCMVC1-13感染型小鼠(克隆10F.5C5或者10F.9G2)施用抗程序性死亡多肽-1配體的封閉單克隆抗體(200微克鼠用抗鼠類(lèi)PD-L1IgG2b單克隆抗體)。在第37天時(shí)，與未經(jīng)處理的對(duì)照癥且相比，經(jīng)過(guò)處理的小鼠中的DbNP396-404特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞增加了大約2.5倍，而DbGP33-41特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)萬(wàn)包增加了大約3倍(附圖2A)。由于經(jīng)過(guò)處理的小鼠和未經(jīng)處理的小鼠的脾臟中具有大致相同數(shù)量的CD4+T細(xì)胞(每個(gè)脾臟中含有大約6x104個(gè)IAbGP61-80CD4+T細(xì)胞)，因而誘發(fā)的擴(kuò)增是特異于CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的。除了CD8+T細(xì)胞擴(kuò)增的增加，程序性死亡多肽-l信號(hào)的抑制也可以導(dǎo)致病毒特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)月包中的4元病毒細(xì)J包因子產(chǎn)量的增加。測(cè)定由CD8+T細(xì)胞在8個(gè)不同的CTL(細(xì)胞毒性T、淋巴細(xì);!包)抗原決定基上生成的干擾素-Y(IFN-Y)、腫瘤壞死因子-a(TNF-ot)。與未經(jīng)處理的小鼠相比，經(jīng)過(guò)處理的小鼠的聯(lián)合應(yīng)答高出了2.3倍(附圖2B和2C)。在接受治療之后，也觀察到生產(chǎn)腫瘤壞死因子-oc(TNF-oc)的細(xì)胞的頻率增加了2倍(附圖2D)。病毒清除率也加速了，病毒/人經(jīng)過(guò)處理的小鼠的血清、脾臟和肝臟中清除了。在感染后的第37天(開(kāi)始治療后的第14天)，在經(jīng)過(guò)治療的小鼠的肺和腎內(nèi)觀察到降低的病毒滴度(大約10倍)。然而，未經(jīng)處理的小鼠的上述全部組織內(nèi)都顯示出高水平的病毒(附圖2E)。根據(jù)Ahmed等人(于1984年在J.Virol.51:34-41中)描述的方法利用Vero細(xì)胞測(cè)定血漿和組織勻漿中的病毒滴度。結(jié)果表明程序性死亡多肽-1抑制劑增加CD8+T細(xì)月包的擴(kuò)增和病毒清除率，因此表明禾呈序'性死亡多肽-1信號(hào)的抑制能夠恢復(fù)CD8+T細(xì)胞的功能。并且，程序性死亡多肽-1信號(hào)的抑制也可以增加B細(xì)胞的應(yīng)答，因?yàn)樵诮邮苤委熀螅⑴K中淋巴細(xì)胞J永I備叢腦膜炎病毒特異性抗體分泌細(xì)Jf包的數(shù)量也增加了(大約10倍)。CD4陽(yáng)性(CD4+)T細(xì)胞在CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的產(chǎn)生和維持中起到了重要的作用。在這點(diǎn)上，當(dāng)CD4+T細(xì)胞缺失時(shí)，待發(fā)的CD8+T細(xì)胞(所謂的"無(wú)功能型"CD8+T細(xì)胞)不能激發(fā)正常的免疫應(yīng)答。并且，當(dāng)CD4+T細(xì)胞缺失時(shí)，慢性淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染更加嚴(yán)重。因此，與CD4+T細(xì)胞的存在下生成的T細(xì)l包相比，在LCMV-C1-13感染中生成的無(wú)功能型T細(xì)胞表現(xiàn)出更嚴(yán)重的功能削弱。DP396-404特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞被刪除到無(wú)法探測(cè)的水平，而DbGP33-41CD8陽(yáng)性T細(xì)胞和DbGP276-286CD8陽(yáng)性T細(xì)J包完全喪失了分泌干擾素-Y(IFN-Y)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)的能力。當(dāng)被LCMV-C1-13感染時(shí)，CD4P曰性T細(xì)月包發(fā)生了缺失，在感染發(fā)生后的第46天至第60天時(shí)，使用抗程序性死亡多肽-1配體抗體處理小鼠。在處理前后^f吏用細(xì)胞內(nèi)干擾素-Y染色不能探測(cè)到LCMV-特異性CD4陽(yáng)性T細(xì)胞。在接受處理之后，與未經(jīng)處理的小鼠相比，處理過(guò)的小鼠的脾臟內(nèi)的DbGP276-286CD8陽(yáng)性T細(xì)胞增加了大約7倍，DbGP33-41CD8陽(yáng)性T細(xì)胞增加了4倍(附圖3A)。脾臟中的病毒特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)月包的凄t量也增加了(附圖3B)。處理過(guò)的小鼠的病毒特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)J包的增加歸因于擴(kuò)增的增加，是通過(guò)導(dǎo)入溴化脫氧尿嘧，定核苷(BrdU)來(lái)檢測(cè)的。對(duì)于未經(jīng)處理的小鼠而言，向43%的DbGP276-286CD8陽(yáng)性T細(xì)胞中導(dǎo)入中間水平的溴化脫氧尿嘧咬核苷(BrdU)，向2%的DbGP276-286CD8陽(yáng)性T細(xì)月包中導(dǎo)入高水平的溴化脫氧尿嘧，定核苷(BrdU)，而對(duì)于經(jīng)過(guò)處理的小鼠而言，向50%的DbGP276-286CD8陽(yáng)性T細(xì)胞中導(dǎo)入中間水平的溴化脫氧尿嗜咬核苷(BrdU)，向37%的DbGP276-286CD8陽(yáng)性T細(xì)月包中導(dǎo)入高水平的溴化脫氧尿嘧，定核苷(BrdU)。在處理過(guò)程中，導(dǎo)入1毫克/毫升渙化脫氧尿嘧咬核苷(BrdU)的飲用水溶液來(lái)進(jìn)行溴化脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)分析，并且才艮據(jù)操作者頭見(jiàn)禾呈(BDBiosciences,SanDiego，CA)來(lái)進(jìn)4亍染色。而且，經(jīng)過(guò)處理的小鼠含有更高百分含量的CD8陽(yáng)性T細(xì)月包表達(dá)細(xì)月包周期相關(guān)蛋白Ki67(60。/。比19%，19%是未經(jīng)處理的小鼠得到的結(jié)果，附圖3C)。在外周血單個(gè)核細(xì)胞中，CD8陽(yáng)性T細(xì)胞對(duì)處理的應(yīng)答限制小鼠產(chǎn)生高水平的CD8陽(yáng)性T細(xì);I包擴(kuò)張。程序性死亡多肽-1的抑制同樣增加了無(wú)功能型、衰竭的病毒特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞中抗病毒細(xì)胞因子的產(chǎn)生。在接受治療后，產(chǎn)生干擾素-y(IFN-Y)的DbGP33-41CD8陽(yáng)性T細(xì)胞和DbGP276-286CD8陽(yáng)性T細(xì)月包的凄t量顯著增加了(附圖4A),盡管在經(jīng)過(guò)處理的小鼠中也檢測(cè)到更高數(shù)量的D^P396-404特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞、KP205-212特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)J包、DbNP166-175特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞、以及DbGP92-101特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞(附圖4A)。經(jīng)過(guò)處理的小鼠中有50%的DbGP276-286特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞能夠生成干擾素-y(IFN-Y)，而在作為對(duì)照的未經(jīng)處理的小鼠中有20%的DbGP276-286特異性CD8陽(yáng)性t細(xì)^^能夠生成干擾素-y(ifn-y)(附圖4B)。然而，由經(jīng)過(guò)處理的小鼠的DbGP276-286特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞生成的干擾素-Y(IFN-Y)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)的水平低于功能性DbGP276-286特異性記憶細(xì)胞(附圖4C)。禾呈序性死亡多肽-1的抑制也可以增加無(wú)功能型、衰竭的病毒特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的細(xì)胞溶解酶活性。在進(jìn)行治療之后，使用51Cr釋放才企測(cè)(Wherry等人于2003年在J.Virol.77:4911-27中發(fā)表的文章)對(duì)病毒特異性CD8陽(yáng)性T細(xì)月包的體外細(xì)月包溶解酶活性進(jìn)4于測(cè)定。與未經(jīng)處理的小鼠相比，經(jīng)過(guò)2周的治療后，脾臟中的病毒滴度降低了大約3倍，肝臟中的病毒滴度降低了大約4倍，肺中的病毒滴度降低了大約2倍，而血清中的病毒滴度降低了大約2倍(附圖4E)。這些結(jié)果證明了阻滯程序性死亡多肽-1途徑能夠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)對(duì)慢性病毒感染的外周免疫耐受，因此喪失了CD4陽(yáng)性T細(xì)胞功能的衰竭的CD8陽(yáng)性T細(xì)月包并不是^皮不可逆滅活的。實(shí)施例2:抗病毒疫苗以及程序性死亡多肽-1抑制劑的施用在持續(xù)性感染過(guò)程中，推動(dòng)T細(xì)胞應(yīng)答的一種方法是治療性的接種疫苗。該方法的基本原理是，在慢性病毒感染過(guò)程中，內(nèi)源性抗原可能不能以最佳形式或者免疫原的形式存在，因而以疫苗的形式提供抗原可以提供一種對(duì)病毒特異性T細(xì)胞和B細(xì)胞來(lái)說(shuō)更加有效的刺激因素。使用慢性淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)小鼠模型，向小鼠施用表達(dá)LCMVGP33抗原決定基的重組牛痘病毒作為治療性疫苗(VVGP33)，該疫苗能夠在某些慢性感染型小鼠中適度增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的應(yīng)答。在4妄種了治療性疫苗的小鼠中，有九分之五的慢性感染型小鼠表現(xiàn)出陽(yáng)性應(yīng)答，而在對(duì)照組小鼠中沒(méi)有表現(xiàn)出對(duì)GP33的免疫應(yīng)答的顯著增加。當(dāng)將這種治療性疫苗的接種與程序性死亡多肽-1抑制劑聯(lián)合使用時(shí)，與單獨(dú)<吏用任<可一種處理相比，淋巴細(xì)胞J^絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)特異性T細(xì)胞的應(yīng)答被推動(dòng)到一個(gè)更高的水平，這種組合處理的作用比兩種單獨(dú)作用的疊加更加明顯。實(shí)施例3:程序性死亡多肽-lRNAi對(duì)慢性感染型小鼠的程序'性死亡多肽-1途^至的4中制RNA干擾(RNAi)能夠沉默哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的基因表達(dá)。將長(zhǎng)的雙鏈RNAS(dsRNAs)導(dǎo)入細(xì)J包中，并且繼續(xù)處理成小的、沉默RNAs(siRNAs),后者能夠作用于特異性mRNA分子或者小基團(tuán)mRNAs。當(dāng)抗體不具備功能性時(shí)，這項(xiàng)技術(shù)尤其有效。例:i口，當(dāng)單一4并才妻變體(uniquesplicevariants)生成可溶寸生的禾呈序性死亡多肽-1以及細(xì)月包毒性T、淋巴細(xì)胞^元原-4(CTLA-4)時(shí)，可以4吏用RNAi。將程序性死亡多肽-1沉默RNAs插入商業(yè)購(gòu)買(mǎi)的siRNA表達(dá)栽體例如pSilencerTM表達(dá)栽體或者腺病毒載體中(Ambion,Austin,TX)。之后，在體內(nèi)或者體外將這些載體與目標(biāo)衰竭的T細(xì)月包相4妾觸(參見(jiàn)實(shí)施例4)。實(shí)施例4:衰竭性T細(xì)月包的體外復(fù)壯使用磁性珠或者密度梯度離心方法，將病毒特異性衰竭CD8陽(yáng)性T細(xì)胞從LCMV-C1-13慢性感染型小鼠中分離出來(lái)。將轉(zhuǎn)染的CD8陽(yáng)性T細(xì)J包與作用于程序性死亡多肽-1配體、程序性死亡多肽-1配體2或者考呈序性死亡多肽-1的單克隆抗體相4妄觸。如實(shí)施例1中所述，程序性死亡多肽-1途徑的抑制導(dǎo)致CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的復(fù)壯。因此，例如CD8+T細(xì)胞的擴(kuò)增和細(xì)胞因子的生成被增加了。使用實(shí)施例1中描述的方法，將這些復(fù)壯的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞重新導(dǎo)入感染型小鼠中，并測(cè)定其病毒載量。實(shí)施例5:新的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞復(fù)壯化合物的體外篩選可以使用體內(nèi)篩選或者體外篩選的方法來(lái)鑒定能夠調(diào)節(jié)程序性死亡多肽-1途徑的化合物，這種鑒定基于它們逆轉(zhuǎn)CD8陽(yáng)性T細(xì)胞衰竭的能力，這種衰竭是由慢性病毒感染導(dǎo)致的。衰竭的CD8陽(yáng)性T細(xì)月包來(lái)自于經(jīng)過(guò)LCMV-C1-13'隄性感染的小鼠，之后將其與試驗(yàn)化合物進(jìn)行接觸。使用例如ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)或者其他定量方法測(cè)量從接觸的T細(xì)胞中釋放的抗病毒細(xì)胞因子(例如，干4尤素-y或者腫瘤壞死因子-oc)的凄史量，并且與未4妻觸過(guò)試-驗(yàn)化合物的衰竭T細(xì)l包中釋》文的抗病毒細(xì)胞因子的數(shù)量相比較，如果后者能夠釋放出抗病毒細(xì)胞因子的話(huà)。與未經(jīng)過(guò)處理的細(xì)月包釋》文的量相比，處理過(guò)的細(xì)月包釋it出的抗病毒細(xì)J包因子的凄t量的增加證明了該化合物是一種程序性死亡多肽-l抑制劑，能夠有效的調(diào)節(jié)T細(xì)胞活性。實(shí)施例6:新的CD8卩曰性T細(xì)月包復(fù)^H匕合物的體內(nèi)篩選衰竭的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞來(lái)自于經(jīng)過(guò)LCMV-C1-13慢性感染的小鼠。給感染型小鼠靜脈內(nèi)注射試驗(yàn)化合物。使用例如ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)或者其他定量方法測(cè)量釋放到血清當(dāng)中的抗病毒細(xì)胞因子(例如，干擾素-y或者腫瘤壞死因子-a)的數(shù)量，并且測(cè)量未經(jīng)過(guò)處理的小鼠血清中的抗病毒細(xì)月包因子的凄t量并進(jìn)行比較。與未經(jīng)過(guò)處理的小鼠相比，處理過(guò)的小鼠血清中檢測(cè)到的抗病毒細(xì)胞因子的數(shù)量的增加證明了這種試驗(yàn)化合物是一種程序性死亡多肽-1抑制劑?；蛘?，可以在l吏用試-驗(yàn)化合物之前或者之后測(cè)定病毒滴度(例如，血清病毒滴度)。實(shí)施例7:以黑猩猩作為模型的持續(xù)性HCV(C型肝炎病毒)感染的免疫治療將黑猩猩作為人類(lèi)C型肝炎病毒的感染^f莫型。由T細(xì)力包免疫缺失導(dǎo)致的長(zhǎng)期存活性病毒的持續(xù)包括HCV-特異性CD4+T輔助細(xì)胞的缺失以及CD8+T效應(yīng)細(xì)胞活性的削弱或者改變。用針對(duì)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4(CTLA-4)的抗體、針對(duì)程序性死亡多肽-1的抗體、或者兩者的組合對(duì)持續(xù)感染型黑猩猩進(jìn)^f亍處理。把阻滯抑制性途徑的效用與疫苗的接種相結(jié)合，其中接種的疫苗是具有重組結(jié)構(gòu)的HCV(C型肝炎病毒)蛋白以及非結(jié)構(gòu)性HCV(C型肝炎病毒)蛋白，并且測(cè)定這種方案能否增加病毒特異性記憶性T細(xì)胞的頻率以及壽命。在持續(xù)性感染型人類(lèi)和持續(xù)性感染型黑猩猩中，T細(xì)胞免疫性的缺失是具有專(zhuān)一的HCV-特異性的。；險(xiǎn)測(cè)在Treg細(xì)力包(調(diào)控T細(xì)i包)存在時(shí)，感染型黑猩猩血液和肝臟中的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4(CTLA-4)、程序性死亡多肽-1、B、T淋巴細(xì)月包衰減因子(BTLA)及其配體的表達(dá)。隨后，通過(guò)向黑猩猩提供人源化單克隆抗體，恢復(fù)其抗病毒活性，所述人源化單克隆抗體能夠阻滯這些分子中的信號(hào)。使用人源化aCTLA-4抗體(MDX-010，Medarex)或者ocPD-1抗體對(duì)持續(xù)性感染型黑猩猩進(jìn)4于處理。MDX-010的初始劑量是0.3毫克/千克，兩周之后，該劑量是1.0毫克/千克，之后以每三周為一個(gè)時(shí)間間隔，分別是3毫克/千克、10毫克/千克和30毫克/千克。在4吏用抗體處理共刺激分子之后，測(cè)定體液和細(xì)月包內(nèi)的免疫應(yīng)答，以及HCV(C型肝炎病毒)RNA的載量。在第1、2、3、5、8周時(shí)收集樣品，之后以每月為一個(gè)時(shí)間間隔收集樣品。樣品包括l)用于分析轉(zhuǎn)氨酶、自身抗體、針對(duì)HCV的中和抗體、以及細(xì)胞因子應(yīng)答的血清，2)用于負(fù)載病毒和基因組進(jìn)化的血漿，3)用于體外測(cè)定免疫性、共刺激性/抑制性受體的表達(dá)和功能的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，4)用于分離肝內(nèi)淋巴細(xì)胞和RNA的新鮮(未固定)肝臟，以及5)用于組織學(xué)分析和免疫組織化學(xué)分析的固定化(福爾馬林/石蠟包埋的)肝臟。還要在2個(gè)或者3個(gè)時(shí)間點(diǎn)處收集區(qū)域、淋巴結(jié)，用以通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)和分子技術(shù)評(píng)價(jià)共抑制性分子和接合變體的表達(dá)。按照這里描述的檢測(cè)方法對(duì)這些治療的安全性和有效性進(jìn)4于評(píng)<介。為了確定接種HCV(C型肝炎病毒)抗原能夠加強(qiáng)程序性死亡多肽-1的抗體的治療有效性，按照如下方法對(duì)黑猩猩進(jìn)行處理l)在第O周、第4周及第24周，使用重組包膜糖蛋白E1和E2(在MF59佐劑中)和其^f也蛋白(coreplusNS3,4,5,由ISCOMS(免疫刺激復(fù)合物)配置成)對(duì)黑猩猩進(jìn)行肌肉內(nèi)免疫；2)4吏用1)中所述的疫苗對(duì)其進(jìn)行肌肉內(nèi)免疫，l旦同時(shí)施用ocCTLA-4抗體(每千克體重施用30毫克，在注射疫苗后的第0周、第4周以及第24周時(shí)通過(guò)靜樂(lè):K內(nèi)注射方式施用)；3)與2)相同，不同的是使用aPD-l(或者B、T淋巴細(xì)胞衰減因子)抗體替代細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4(CTLA-4)抗體；4)與2)和3)步驟相同，不同的是除使用疫苗之外，還使用細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4抗體和程序性死亡多肽-1(或者B、T、淋巴細(xì)胞衰減因子)抗體。在進(jìn)行免疫之后的l年內(nèi)，以每月為一個(gè)時(shí)間間隔，監(jiān)測(cè)HCV-特異性T細(xì)胞和B細(xì)胞的應(yīng)答。在這項(xiàng)分析中，用于4企測(cè)HCV-四聚體和全部T細(xì)胞的標(biāo)記物包括分化標(biāo)記物(例如，CD45RA/RO,CD62L，CCR7，以及CD27),5舌4匕才示i己4勿(侈'J嗦口，CD25，CD69，CD38,k乂及HLA-DR(人白細(xì)胞位點(diǎn)DR抗原))，存活/擴(kuò)增標(biāo)記物(例如，bcl-2以及Ki67)，細(xì)胞因子潛在標(biāo)記物(例如，粒酶以及穿孔素)，和細(xì)月包因子受體標(biāo)記物(CD122以及CD127)。在趨化因子IP-10的預(yù)治療水平與聚乙二醇干擾素-y/病毒唑的應(yīng)答之間存在有趣的相關(guān)性。測(cè)定IP-10的水平，以研究在陰性調(diào)控途徑或者C型肝炎病毒特異性T細(xì)胞應(yīng)答與IP-10水平之間存在的潛在相關(guān)性。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)來(lái)完成抑制性受體和配體在外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)上的表達(dá)。實(shí)施例8:在反應(yīng)性淋巴組織中的程序性死亡多肽-1的免疫染色材料依照制度政策，病例材并+(casematerial)來(lái)自于Brigham&Women'sHosptial,Boston,MA(Brigham女子醫(yī)院，波士頓，摩洛哥)。所有診斷都是依據(jù)世界衛(wèi)生組織淋巴瘤分類(lèi)系統(tǒng)(JaffeES等人于2001年)中描述的組織學(xué)特征核免疫表型特;f正來(lái)進(jìn)4亍的，在所有的病例中，用于i貪斷的材津+都經(jīng)過(guò)血、液病理學(xué)家的復(fù)查。免疫染色根據(jù)先前的描述(JonesD等人于1999年發(fā)表的文章；DorfmanDM等人于2003年發(fā)表的文章)，使用標(biāo)準(zhǔn)的間4妄親合素-生物素辣根過(guò)氧化物酶法以及二氨基聯(lián)苯胺顯色反應(yīng)進(jìn)行程序性死亡多肽-1的免疫染色，該反應(yīng)是在用福爾馬林固定的、石蠟包埋的組織切片中進(jìn)^f亍的，在染色反應(yīng)之前，先在10mMPH6.0的檸檬酸鹽IC沖液中Y吏用先前描述的抗人類(lèi)程序性死亡多肽_1單克隆抗體(2H7;5)進(jìn)行微波抗原修復(fù)。如果有至少25%的胂瘤細(xì)胞表現(xiàn)出陽(yáng)性染色，則認(rèn)為該病例對(duì)程序性死亡多肽-l是具有免疫反應(yīng)性的。在對(duì)所有病例的研究中，將程序性死亡多肽-1的染色與鼠類(lèi)IgG(免疫球蛋白G)同形對(duì)照抗體的染色進(jìn)行比對(duì)，以證實(shí)染色特異性，其中對(duì)照抗體是經(jīng)過(guò)稀釋的，其具有與程序性死亡多肽-1相同的蛋白濃度。4十對(duì)禾呈序性死亡多肽-1的單克隆抗體2H7凈皮用來(lái)對(duì)下列經(jīng)福爾馬林固定的、石蠟包埋的樣本進(jìn)行染色反應(yīng)性淋巴組織沖羊本、胸腺樣本、以及一系列患有B細(xì)胞和T細(xì)胞淋巴擴(kuò)增疾病的病例樣本。在扁桃腺樣本中表現(xiàn)出反應(yīng)性變化，包括濾泡增生，次級(jí)淋巴小結(jié)中的主要小淋巴細(xì)胞子集表現(xiàn)出程序性死亡多肽-1的細(xì)月包質(zhì)染色，在濾泡內(nèi)T細(xì)胞區(qū)域中》見(jiàn)察到稀少的禾呈序性死亡多肽-1陽(yáng)性細(xì)胞。在次級(jí)淋巴小結(jié)中的程序性死亡多肽-1的染色式樣實(shí)際上與^f吏用針對(duì)CD3的抗體、泛T細(xì)胞標(biāo)記物的染色式樣是相同的，而針對(duì)CD20的抗體、泛B細(xì)胞標(biāo)記物則將次級(jí)淋巴小結(jié)B細(xì)胞的絕大部分進(jìn)行了染色。在反應(yīng)性淋巴結(jié)和脾臟的組織切片中也，見(jiàn)察到相似的結(jié)果。在成熟胸腺中沒(méi)有》見(jiàn)察到禾呈序性死亡多肽-1的染色。實(shí)施例9:石蠟包J^里的B細(xì)J包和T細(xì)月包、淋巴擴(kuò)增病變《且織+刀片中的考呈序性死亡多肽-1的免疫染色對(duì)一系列B細(xì)胞和T細(xì)胞淋巴擴(kuò)增病變中的程序性死亡多肽-1表達(dá)進(jìn)行了研究；研究結(jié)果概括在表1中。檢測(cè)了42例B細(xì)胞淋巴擴(kuò)增病變中的程序性死亡多肽-1的表達(dá)，包括前體B淋巴細(xì)胞性白血病/淋巴細(xì)胞性淋巴瘤的典型病例，以及一系列成熟B細(xì)月包的、淋巴擴(kuò)增病變，包括^午多起源于濾泡的B細(xì)月包非霍奇金淋巴瘤，包括6個(gè)濾泡性淋巴瘤以及7個(gè)伯基特氏淋巴瘤。這些B細(xì)胞淋巴擴(kuò)增病變中沒(méi)有一個(gè)顯示出程序性死亡多肽-1的染色。在某些病例中，出現(xiàn)非腫瘤反應(yīng)性淋巴組織，并且表現(xiàn)出與在扁桃腺及前述提及的其他反應(yīng)性淋巴組織中觀察到的相同的程序性死亡多肽-1染色式樣。類(lèi)似的，在25例霍奇金淋巴瘤中，包括ll例經(jīng)典霍奇金淋巴瘤和14例'淋巴細(xì)力包為主型的霍奇金、淋巴瘤，腫瘤細(xì)力包中沒(méi)有表現(xiàn)出程序性死亡多肽-1的染色。有趣的是，在全部14例淋巴細(xì)月包為主型的霍奇金'淋巴瘤中，T細(xì)月包周?chē)瘟鯟D20-陽(yáng)性L&H細(xì)月包對(duì)程序性死亡多肽-1是具有免疫反應(yīng)性的，與'淋巴細(xì)l包為主型的霍奇金淋巴瘤中的CD57+T細(xì)胞得到的染色式樣相似。這些程序性死亡多肽-1陽(yáng)性細(xì)胞是全部存在的CD3+T細(xì)胞群的子集。對(duì)一系列T細(xì)胞淋巴擴(kuò)增病變中的程序性死亡多肽-1表達(dá)進(jìn)行研究；研究結(jié)果概括在表l中。前體T細(xì)胞淋巴細(xì)胞性白血病/、淋巴細(xì)J包性、淋巴瘤、未成熟T細(xì)胞』中瘤病例中的禾呈序'1"生死亡多肽-l是陰性的，它們是外周胸腺后T細(xì)胞腫瘤，包括T細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞性白血病，非特異性外周T細(xì)胞淋巴瘤，間變性大細(xì)月包、淋巴瘤，以及成熟T細(xì)萬(wàn)包白血病A淋巴瘤。相反，全部19例含有禾呈序'性死亡多肽-1P日4生細(xì)l包焦點(diǎn)(foci)的血管、淋巴瘤病例也對(duì)泛T細(xì)胞標(biāo)記物例如CD3產(chǎn)生免疫反應(yīng)性。在擴(kuò)張的CD21+濾泡性樹(shù)突狀細(xì)胞(FDC)網(wǎng)格結(jié)構(gòu)的焦點(diǎn)(foci)處一向存在程序性死亡多肽-1陽(yáng)性細(xì)胞，這是血管淋巴瘤的一項(xiàng)重要特征。表l:淋巴擴(kuò)增病變中的程序性死亡多肽-1免疫染色<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>縮寫(xiě)B(tài)-LL/LL-前體B細(xì)胞淋巴細(xì)胞性淋巴瘤/淋巴細(xì)胞性白血??；CLL-慢性淋巴細(xì)胞性白血??；MCL-套細(xì)胞淋巴瘤；FL-濾泡性淋巴瘤；MZL-邊^(qū)彖區(qū)、淋巴瘤；HCL-毛細(xì)胞白血?。籇LBCL-彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤；BL-伯基特氏淋巴瘤；LPL-淋巴漿細(xì)胞樣淋巴瘤；MM-多發(fā)性骨髓瘤；T-LL/LL-前體T淋巴細(xì)胞性白血病/'淋巴細(xì)胞性淋巴瘤；T-PLL-T細(xì)胞幼、淋巴細(xì)胞性白血??；AIL-血管淋巴瘤；PTCL-非特異性的外周T細(xì)胞淋巴瘤；ALCL-間變性大細(xì)胞淋巴瘤；ATLL-成熟T細(xì)胞白血病/淋巴瘤。*免疫反應(yīng)性病例的數(shù)量/病例總數(shù)量**在全部14個(gè)病例中腫瘤L&H細(xì)胞共晶組織(rosettes)中的程序性死亡多肽-1陽(yáng)性細(xì)胞^實(shí)施例10:程序性死亡多肽-1在HIV-特異性人類(lèi)CD8T細(xì)月包中的表達(dá)的一般研究方法使用下述方法完成實(shí)施例11—14中的試驗(yàn)。研究主體參與研究的f曼性C亞型HIV-1感染型宿主由McCordHospital,Durban,SouthAfrica門(mén)i貪(McCord醫(yī)院，德H南非)，以及St.Mary，sHospital,Mariannhill,SouthAfrica門(mén)i貪(圣瑪麗醫(yī)院，Mariannhill,南非)提供。從患有該種感染的65個(gè)宿主中提取外周血，它們?cè)诒环治鰰r(shí)是具有抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療天性的(antiretroviraltherapynai've)。宿主4艮才居它們戶(hù)斤表達(dá)的、與#勾建的10個(gè)I級(jí)四聚體相匹配的HLA(人類(lèi)白細(xì)胞抗原)等位基因(見(jiàn)下)來(lái)選擇內(nèi)舍物。該組中的病毒載量中間值為42800HIV-1RNA拷貝數(shù)/毫升血漿(163-750000范圍)，絕對(duì)CD4計(jì)數(shù)的中間值是362(129-1179范圍)。不能獲得有關(guān)感染過(guò)程中的信息。全部宿主都簽定了關(guān)于此項(xiàng)研究的書(shū)面知情后同意，并#皮當(dāng)；也制度評(píng)論委員會(huì)認(rèn)可。程序性死亡多肽-1抗體及考呈序性死亡多肽-1配體抗體的構(gòu)建使用先前描述的方法制備單克隆抗體，該抗體能作用于人類(lèi)程序性死亡多肽-1配體(29E.2A3，鼠類(lèi)IgG2b)以及程序性死亡多肽-l(EH12，鼠類(lèi)IgGl)，并且顯示出能夠阻斷考呈序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體間的相互作用。MHC(主要組織相容性復(fù)合體)I級(jí)四聚體釆用如前所述的方法(AltmanJD等人于1996年發(fā)表的文章)合成的10個(gè)HIVMHC(人類(lèi)免疫缺陷型病毒主要組織相容性復(fù)合體)I級(jí)四聚體被用于進(jìn)行該項(xiàng)研究A*0205GL9(p24，GAFDLSFFL;序列1)，A*3002KIY9(整合酶，KIQNFRVYY;序列2),B*0801DI8(p24，DIYKRWII;序列3),B*0801FL8(Nef,FLKEKGGL;序列4),B*4201RM9(Nef，RPQVPLRPM;序歹'J5),B*4201TL9(p24，TPQDLNTML;序歹'J6)，B*4201TL10(Nef,TPGPGVRYPL;序列7)，B*4201YL9(》文射性同4立素指示劑，YPGIKVKQL;序列8),B*8101TL9(p24,TPQDLNTML;序列9)，以及Cw0304YL9(p24，YVDRFFKTL;序列10)。用于表達(dá)A*0205，A*3002以及Cw*0304所構(gòu)建的質(zhì)沖立由Drs.EugeneRavkovandJohnAltman，NIHTetramerCoreFacility,Atlanta,Georgia(EugeneRavkov博士和JohnAltman博士,美國(guó)全國(guó)衛(wèi)生研究所四聚體核心研究所，亞特蘭大，喬治亞州)友情提供。HLA(人類(lèi)白細(xì)胞抗原)I級(jí)四聚體染色以及表型分析在37。C時(shí)，4吏用四聚體對(duì)新鮮分離的外周血單個(gè)核細(xì)月包(PBMC,五十萬(wàn)個(gè))進(jìn)4亍染色反應(yīng)20分4中。然后4吏用石粦酸鹽纟爰沖液(PBS)洗滌細(xì)胞一次，制粒，并直接使用結(jié)合了異石危氰酸熒光素(FITC)的抗CD8抗體(BectonDickinson)、結(jié)合了藻紅蛋白的抗程序性死亡多肽-1抗體(克隆型EH12)、以及ViaProbe(BectonDickinson)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。在室溫下將細(xì)胞培育20分鐘后，-使用石粦酸鹽纟爰沖液(PBS)洗滌細(xì)月包一次，并且4吏細(xì)胞*重新懸浮在含有1%多聚曱醛的200孩t升磷酸鹽緩沖液(PBS)中，在熒光激活細(xì)月包分選葉義(FACSCalibur,BectonDickinson)上獲得細(xì)胞。在熒光激活細(xì)胞分選儀(FACSCalibur)上最少獲《尋100000個(gè)細(xì)胞。CFSE(羧基熒光素雙乙酸鹽琥珀酸酯)擴(kuò)增檢測(cè)使用磷酸鹽緩沖液(PBS)對(duì)一百萬(wàn)個(gè)新鮮分離的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)進(jìn)4亍洗滌兩次，制粒，并且在37。C時(shí)將其重新懸浮在1毫升0.5uM羧基熒光素雙乙酸鹽，琥珀酸酯(CFSE,MolecularProbes)中保持7分鐘。使用磷酸鹽緩沖液(PBS)將細(xì)月包洗滌兩次后，將細(xì)J包重新懸浮在1毫升R10培養(yǎng)液(補(bǔ)充了谷胱甘肽、盤(pán)尼西林、鏈霉素、以及10。/。胎牛血清[FCS]的RPMI1640)中，并且置于24孔培養(yǎng)^反的一個(gè)孔中。初步研究表明，最終濃度為0.2微克/毫升的肽產(chǎn)生了最佳的擴(kuò)增應(yīng)答，因此在每個(gè)檢測(cè)中孔中的最終肽濃度為上述值。陰性對(duì)照孔中只含有存在于培養(yǎng)液中的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),或者該培養(yǎng)液中還含有純化的抗-PD-Ll(10孩t克/毫升)，而陽(yáng)性對(duì)照孔則4吏用10微:克/毫升的才直物血細(xì)l包凝集素(PHA)進(jìn)4于刺激。將細(xì)月包置于37。C孵化器中培育6天之后，使用2毫升的磷酸鹽緩沖液(PBS)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌，并且使用結(jié)合了PE的主要組織相容性復(fù)合體(MHC)I級(jí)四聚體、ViaProbe(BectonDickinson)以及抗CD8-APC抗體對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。在熒光激活細(xì)胞分選儀(FACSCalibur)上收集細(xì)月包，并且^f吏用CellQuestR軟件(BectonDickinson)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分析。ViaProbe—CD8陽(yáng)性、淋巴細(xì)月包對(duì)細(xì)胞具有選通(gate)作用。用肽刺激作用缺失時(shí)的CD8陽(yáng)性四聚體陽(yáng)性細(xì)月包(CD8+tetramer+cells)的百分含量除以肽刺、激作用存在時(shí)的CD8陽(yáng)性四聚體陽(yáng)性細(xì)胞的百分含量，得到四聚體陽(yáng)性細(xì)胞的增加倍數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分才斤4吏用GraphPadPrism專(zhuān)欠4牛4.0版本進(jìn)4亍Spearman相關(guān)性(斯皮爾曼相關(guān)性)分析、Mann-Whitney檢驗(yàn)分析、以及配對(duì)t檢-瞼分析。所有檢驗(yàn)精確到小數(shù)點(diǎn)后兩位，pO.05被認(rèn)為是顯著的。實(shí)施例11:HIV-特異性CD8T細(xì)胞上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)根據(jù)普遍的人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)等位基因，和Gag、Nef、整合酶以及放射性同位素指示劑中被頻繁作用的抗原決定基(KiepielaP等人于2004年發(fā)表的文章)，合成10個(gè)主要組織相容性復(fù)合體(MHC)I級(jí)四聚體，這類(lèi)四聚體對(duì)顯性C亞型人類(lèi)免疫缺陷型病毒-1(HIV-1)CD8T細(xì)力包抗原決定基具有特異性，并且在這些細(xì)胞中能夠直接觀察到程序性死亡多肽-1的表面表達(dá)。對(duì)該組中的全部個(gè)體進(jìn)行高溶解度人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)分型，根據(jù)相關(guān)人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)等位基因的表達(dá)，從中選擇出65個(gè)具有抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療天性的個(gè)體。對(duì)總數(shù)為120個(gè)不同的抗原決定基進(jìn)行檢測(cè)，代表性的人類(lèi)免疫缺陷型病毒(HIV)四聚體陽(yáng)性細(xì)胞上的程序性死亡多肽-1的體外染色在附圖5中表示。程序性死亡多肽-1的表達(dá)容易的顯現(xiàn)在這些四聚體陽(yáng)性細(xì)胞上，并且這種表達(dá)顯著的高于在來(lái)自于相同個(gè)體的全部CD8T細(xì)胞群中的表達(dá)(pO.OOOl);因此，在四聚體陽(yáng)性CD8T細(xì)胞以及全部CD8T細(xì)胞群中的程序性死亡多肽-1的表達(dá)也顯著的高于在人類(lèi)免疫缺陷型病毒-血清反應(yīng)陰性對(duì)照組中的表達(dá)(附圖5B)。在參加試驗(yàn)的IO個(gè)四聚體中，有8個(gè)能夠?qū)е轮辽僖粋€(gè)人的考呈序性死亡多肽-1在抗原特異性CD8細(xì)胞上的表達(dá)水平為100。/。(附圖5C)。在每個(gè)人類(lèi)免疫缺陷型病毒四聚體應(yīng)答中，有3個(gè)到25個(gè)不同的外周血單個(gè)核細(xì)胞^(PBMC):帔染色，有68%到94%的四聚體陽(yáng)性細(xì)胞具有中間水平的程序性死亡多肽-1表達(dá)(附圖5C)。通過(guò)對(duì)四聚體陽(yáng)性細(xì)胞以及全部CD8T細(xì)胞群上的程序性死亡多肽-1的平均熒光強(qiáng)度(MFI)的分析(附圖5B，C)，可以進(jìn)一步證實(shí)上述發(fā)現(xiàn)。然后，利用多種可探測(cè)的應(yīng)答進(jìn)行沖企測(cè)，來(lái)判斷人體內(nèi)的程序性死亡多肽-1的表達(dá)水平是否存在抗原決定基特異性差別。在凈皮檢測(cè)的65個(gè)人當(dāng)中，有16個(gè)個(gè)體分別產(chǎn)生3到5個(gè)四聚體陽(yáng)性應(yīng)答。對(duì)這3個(gè)宿主的每種應(yīng)答進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)程序性死亡多肽-l的表達(dá)幾乎相同，并且都4妻近100%;然而，其4也13個(gè)多肽-1的表達(dá)(附圖5D)。這些凄t據(jù)表明，在同一個(gè)人中，在同時(shí)期抗原決定基特異性008丁細(xì)胞上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)水平可以是不同的，這也許與近來(lái)研究得到的表明抗病毒有效性中存在的抗原決定基特異性差別的凄t據(jù)相一致(TsomidesTJ等人于1994年發(fā)表的文章；YangO等人于1996年發(fā)表的文章；LoffredoJT等人于2005年發(fā)表的文章)。實(shí)施例12:程序性死亡多肽-1的表達(dá)與人類(lèi)免疫缺陷型病毒疾病進(jìn)展之間的關(guān)系測(cè)定在人類(lèi)免疫缺陷型病毒特異性CD8T細(xì)胞上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)與血漿病毒載量和CD4計(jì)數(shù)之間的關(guān)系，兩者都是對(duì)人類(lèi)免疫缺陷型病毒疾病進(jìn)展的預(yù)示。與先前的研究相符合，四聚體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與病毒栽量或者CD4計(jì)數(shù)不能表現(xiàn)出任何明顯的相關(guān)性(附圖6A，B)。相反，病毒載量與人類(lèi)免疫缺陷型病毒四聚體陽(yáng)性細(xì)胞上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)百分?jǐn)?shù)、病毒載量與人類(lèi)免疫缺陷型病毒四聚體陽(yáng)性細(xì)胞上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度(MFI)呈現(xiàn)出顯著的正相關(guān)(分另'J是p:0.0013以及p〈0.0001;附圖6A)。CD4計(jì)凄丈與人類(lèi)免疫缺陷型病毒四聚體陽(yáng)性細(xì)胞上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)百分?jǐn)?shù)、CD4計(jì)數(shù)與人類(lèi)免疫缺陷型病毒四聚體陽(yáng)性細(xì)胞上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度(MFI)也呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)(分別是p-0.0046以及p-0.0150;附圖6B)。由于參與試驗(yàn)的四聚體大部分代表的只是宿主體內(nèi)的人類(lèi)免疫缺陷型特異性CD8T細(xì)胞群的一部分，因而也需要檢測(cè)程序性死亡多肽-1在全部CD8細(xì)月包上的表達(dá)與這些參凄t之間的關(guān)系。病毒載量與全部CD8細(xì)胞群上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)百分?jǐn)?shù)、病毒載量與全部CD8細(xì)胞群上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度(MFI)呈現(xiàn)出顯著的正相關(guān)(分別是p=0.0021以及p〈0.0001;附圖6C),CD4計(jì)數(shù)與全部CD8細(xì)胞群上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)百分?jǐn)?shù)、CD4計(jì)數(shù)與全部CD8細(xì)胞群上的程序性死亡多肽-1的表達(dá)的平均焚光強(qiáng)度(MFI)也呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)(分另"是p-0.0049以及p-0.0006;附圖6D)。檢-驗(yàn)上述纟且中5個(gè)宿主的程序性死亡多肽-1在CMV-特異性CD8T細(xì)月包上的表達(dá)，與人類(lèi)免疫缺陷型病毒特異性CD8T細(xì)J包相比，程序性死亡多肽-1在這類(lèi)細(xì)月包上的表達(dá)明顯的減少(CMV陽(yáng)性四聚體陽(yáng)性程序性死亡多肽-1的中間值為23%,p=0.0036，凄史才居未顯示)，并且其與該宿主中的大糸bCD8T細(xì)月包不同，這表明考呈序性死亡多肽-1的高度表達(dá)并不是所有的病毒特異性CD8T細(xì)《包的一致特征。這些數(shù)據(jù)表明，在慢性人類(lèi)免疫缺陷型病毒感染中，增加抗原的劑量會(huì)導(dǎo)致禾呈序性死亡多肽-1在CD8T細(xì)力包上增加的表達(dá)，這一結(jié)論與從慢性淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)感染型鼠科動(dòng)物中得到的數(shù)據(jù)相符合，在后者中程序性死亡多肽-1的表達(dá)與CD8T細(xì)胞的功能性衰竭有關(guān)(BarberDL等人于2005年發(fā)表的文章)。而且，它們?cè)诮?jīng)過(guò)大量的研究包括對(duì)多個(gè)抗原決定基進(jìn)行了分析之后，得出了關(guān)于人類(lèi)免疫缺陷型特異性CD8T細(xì)月包與病毒載量或者CD4計(jì)凄t之間的第一個(gè)明確的相關(guān)性。實(shí)施例13:程序性死亡多肽-1的表達(dá)與CD8T細(xì)胞記憶性及功能間的相互關(guān)系接下來(lái)，通過(guò)許多額外添加的表型標(biāo)記物來(lái)分4斤程序性死亡多肽-1的表達(dá)，這些標(biāo)記物與CD8T細(xì)胞的記憶性和功能相關(guān)，包括CD27,CD28，CD45RA，CD57，CD62L,CD127，CCR7，穿孔素，粒酶B,以及Ki67(附圖7)。附圖7A表示的是在一個(gè)個(gè)體的B*4201TL9四聚體陽(yáng)性細(xì)胞(tetramer+ce11)上上述標(biāo)記物的典型染色情況，附圖7B表示的是來(lái)自于13個(gè)宿主的總計(jì)數(shù)據(jù)。這些研究限于那些具有高于95%的程序性死亡多肽-1陽(yáng)性的四聚體應(yīng)答，因?yàn)镵waZuluNatal不能進(jìn)4亍多于4種顏色的多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)。人類(lèi)免疫缺陷型病毒陽(yáng)性四聚體程序性死亡多肽-1卩日性細(xì)月包(HIVtetramer+PD-1+cells)表達(dá)高水平的CD27和粒酶B,非常低水平的CD28、CCR7、以及細(xì)胞內(nèi)Ki67,低水平的CD45RA和穿3L素，以及中間7jc平的CD57和CD62L(附圖7B)。這些數(shù)據(jù)表明，人類(lèi)免疫缺陷型病毒特異性程序性死亡多肽-1陽(yáng)性T細(xì)胞顯示效應(yīng)/效應(yīng)記憶性表型，這與前面才艮導(dǎo)的人類(lèi)免疫缺陷型病毒特異性CD8T細(xì)月包的不同步成熟理i侖相符合(ChampagneP等人于2001年發(fā)表的文章；AppayV等人于2002年發(fā)表的文章；HessC等人于2004年發(fā)表的文章)。除此之外，通過(guò)進(jìn)行病毒測(cè)序來(lái)確定這些細(xì)胞是否驅(qū)動(dòng)免疫逃避反應(yīng)(BrownJA等人于2003年發(fā)表的文章)。對(duì)45個(gè)這樣的四聚體陽(yáng)性應(yīng)答進(jìn)行評(píng)價(jià)，只有5個(gè)具有不同于南非C亞型保守序列的抗原決定基(數(shù)據(jù)未顯示)，這表明這些細(xì)胞在體內(nèi)幾乎不產(chǎn)生選擇壓力。先前針對(duì)、淋巴細(xì)力包脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)感染型小鼠模型進(jìn)行的試驗(yàn)表明，通過(guò)導(dǎo)入抗程序性死亡多肽-1配體封閉抗體，在體內(nèi)阻止程序性死亡多肽-1/程序性死亡多肽-1配體間的相互作用，從而導(dǎo)致淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)特異性CD8T細(xì)月包的功能的增強(qiáng)，該功能表現(xiàn)為細(xì)月包因子的生成，殺傷能力，擴(kuò)增能力，以及最顯著的，病毒載量的降低(BarberDL等人于2005年發(fā)表的文章)。實(shí)施例14:程序性死亡多肽-1/程序性死亡多肽-1配體途徑的阻滯對(duì)人類(lèi)免疫缺陷型病毒特異性CD8T細(xì)萬(wàn)包的擴(kuò)增的影響由于人類(lèi)免疫缺陷型特異性CD8T細(xì)胞也表現(xiàn)出^皮削弱的擴(kuò)增能力(MiguelesSA等人于2002年發(fā)表的文章；LichterfeldM等人于2004年發(fā)表的文章)，需要在體外測(cè)定對(duì)程序性死亡多肽-l/程序性死亡多肽-1配體的阻滯能否導(dǎo)致該項(xiàng)功能的增強(qiáng)。附圖8A表示的是來(lái)自于B*4201陽(yáng)性個(gè)體的代表數(shù)據(jù)。僅使用培養(yǎng)液對(duì)新鮮分離的、CFSE標(biāo)記的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)進(jìn);f于培養(yǎng)，或者^(guò)f吏用含有抗程序性死亡多肽-1配體抗體的i咅養(yǎng)液對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)6天之后仍然能得到保留了CFSEhi標(biāo)記的B*4201-TL9特異性CD8T細(xì)胞群(1.2%的CD8T細(xì)胞)。僅使用TL9肽對(duì)經(jīng)過(guò)CFSE標(biāo)記的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)進(jìn)行刺激，保持6天，得到擴(kuò)張4.8倍的CFSElc)B*4201TL9四聚體陽(yáng)性細(xì)胞，當(dāng)抗程序性死亡多肽-1配體封閉抗體存在時(shí)，用TL9肽對(duì)經(jīng)過(guò)CFSE標(biāo)記的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)進(jìn)行刺激，會(huì)進(jìn)一步加強(qiáng)TL9特異性細(xì)胞的擴(kuò)增，從而導(dǎo)致四聚體陽(yáng)性細(xì)胞增加了10.3倍。在28個(gè)樣品中進(jìn)行CFSE擴(kuò)增檢測(cè)，使用或者不使用純化的抗人類(lèi)程序性死亡多肽-1配體封閉抗體。與僅使用肽刺激所產(chǎn)生的擴(kuò)增的量相比，在肽和抗程序性死亡多肽-1配體封閉抗體同時(shí)存在時(shí)，人類(lèi)免疫缺陷型病毒特異性CD8卩曰性T細(xì)胞的擴(kuò)增發(fā)生了顯著的增加(附圖8B;p=0.0006,配對(duì)t檢-驗(yàn))。使用抗程序性死亡多肽-1配體封閉抗體導(dǎo)致的四聚體陽(yáng)性細(xì)胞的增加倍數(shù)因?yàn)閭€(gè)體的不同以及相同個(gè)體中的抗原決定基的不同而發(fā)生變化(附圖8C),這又一次證明了在這些應(yīng)答的功能性衰竭程度上存在抗原決定基特異性差別。其他實(shí)施方式盡管本發(fā)明結(jié)合了具體的實(shí)施方式進(jìn)行描述，前述的具體內(nèi)容意在描述本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍由隨后的權(quán)利要求的范圍來(lái)定義。其他方面的特征、優(yōu)點(diǎn)以及修飾都落入隨后的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種緩解或者預(yù)防持續(xù)性感染或者腫瘤的癥狀的方法，包括向需要進(jìn)行治療的宿主施用化合物，所述化合物能夠降低宿主體內(nèi)的程序性死亡多肽-1(PD-1)的活性或者表達(dá)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的持續(xù)性感染是病毒感染，細(xì)菌感染，真菌感染，支原體感染，或者寄生蟲(chóng)感染。3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述的病毒感染是肝炎病毒、人類(lèi)免疫缺陷型病毒(HIV)、人類(lèi)T、淋巴細(xì)萬(wàn)包白血病病毒(HTLV)，皰滲病毒，Epstein-Barr病毒，或者人浮L頭瘤病毒引起的感染。4.才艮據(jù)4又利要求2的方法，其中所述的寄生蟲(chóng)感染是瘧疾。5.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述的細(xì)菌感染是肺結(jié)核。6.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述的腫瘤是血管淋巴瘤或者結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞為主型的霍奇金淋巴瘤。7.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述的化合物降低程序性死亡多肽-1配體(PD-L1)或者程序性死亡多肽-1商己體2(PD-L2)的表達(dá)或者活性。8.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述的化合物降低程序性死亡多肽-1與禾呈序性死亡多肽-1配體間的相互作用，或者降低程序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體2間的相互作用。9.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述的化合物增加宿主的細(xì)胞毒性T細(xì)J!包活性。10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述的細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性是細(xì)胞因子的生成，T細(xì)胞的擴(kuò)增，或者感染性制劑的清除。11.#4居權(quán)利要求10的方法，其中所述的感染性制劑是病毒，細(xì)菌，真菌，支原體，或者寄生蟲(chóng)。12.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述的T細(xì)胞是肺瘤特異性T細(xì)胞。13.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述的細(xì)胞因子是干擾素oc，月中瘤壞死因子a,或者白細(xì)月包介素-2。14.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的化合物是抗程序性死亡多肽-1抗體，抗程序性死亡多肽-1配體抗體，抗程序性死亡多肽-l配體2抗體，抗程序性死亡多肽-1RNAi,抗程序性死亡多肽-1配體RNAi,抗程序性死亡多肽-1配體2RNAi,抗^呈序性死亡多肽-1反義RNA,拔4呈序性死亡多肽-1配體反義RNA,抗程序性死亡多肽-1配體2反義RNA,顯性負(fù)性程序性死亡多肽-1蛋白，顯性負(fù)性程序性死亡多肽-1配體蛋白，或者顯性負(fù)性程序性死亡多肽-1配體2蛋白。15.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述的抗體是單克隆抗體，人源化抗體，去免疫化抗體，或者Ig融合蛋白。16.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述的化合物是小分子。17.4艮據(jù)岸又利要求1的方法，進(jìn)一步包4舌向所述宿主施用疫苗。18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述的疫苗包括佐劑和灌泵升壓注射器。19.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，進(jìn)一步包括向所述宿主使用另外一種化合物。20.#^居^=又利要求19的方法，其中所述的另外一種化合物是抗病毒化合物，抗細(xì)菌化合物，抗真菌化合物，抗寄生蟲(chóng)化合物，抗炎癥化合物，抗腫瘤化合物或者止痛劑。21.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述的另外一種化合物降低細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4(CTLA-4)或者B、T淋巴細(xì)胞衰減因子(BTLA)的表達(dá)或者活性。22.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述的另外一種化合物降低腫瘤細(xì)"包的量。23.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述的另外一種化合物是抗細(xì)胞毒性T'淋巴細(xì)月包抗原-4抗體，抗B、T、淋巴細(xì)月包衰減因子抗體，抗CD28抗體，抗可i秀導(dǎo)共刺激分子抗體，抗可誘導(dǎo)共刺激分子配體抗體，抗B7-1抗體，抗B7-2抗體，抗B7-H3抗體，或者抗B7-H4抗體。24.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述宿主是人類(lèi)。25.—種緩解或者預(yù)防持續(xù)性感染或者腫瘤的癥狀的方法，包括向需要進(jìn)行治療的宿主施用一種化合物，所述化合物能夠降4氐CD28類(lèi)家力美成員的活性或者表達(dá)，其中所述CD28類(lèi)家族成員是選自程序性死亡多肽-1,細(xì)月包毒性T、淋巴細(xì)月包抗原-4,B、T淋巴細(xì)胞衰減因子，以及它們的功能性片段或者變體。26.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所述的持續(xù)性感染是病毒感染。27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述的病毒感染是肝炎病毒、人類(lèi)免疫缺陷型病毒(HIV)、人類(lèi)T淋巴細(xì)胞白血病病毒(HTLV)，皰滲病毒，Epstein-Barr病毒，或者人乳頭瘤病毒引起的感染。28.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所述的化合物增加宿主體內(nèi)的細(xì)J包毒性T細(xì)J包的活性。29.才艮據(jù)4又利要求28的方法，其中所述的細(xì)月包毒性T細(xì)l包活性是細(xì)月包因子的生成，T細(xì)J包的擴(kuò)增，或者感染性制劑的清除。30.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所述的化合物是抗程序性死亡多肽-1抗體，抗考呈序性死亡多肽-1配體抗體，抗禾呈序性死亡多肽-1配體2抗體，抗細(xì)胞毒性T、淋巴細(xì)胞抗原-4抗體，抗B、T'淋巴細(xì)月包衰減因子抗體，抗CD28抗體，抗可i秀導(dǎo)共刺激分子抗體，抗可誘導(dǎo)共刺激分子配體抗體，抗B7-l抗體，抗B7-2抗體，抗B7-H3抗體，或者抗B7-H4抗體。31.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，進(jìn)一步包括向所述宿主施用疫苗。32.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，進(jìn)一步包括向所述宿主施用另外一種4&合物。33.—種緩解或者預(yù)防存在于宿主中的持續(xù)性感染或者腫瘤的癥狀的方法，包:fe向所述宿主施用一種抗原特異性T細(xì)月包，所述抗原特異性T細(xì)胞與一種化合物相4妻觸，該化合物能夠降低所述細(xì)胞中的程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性。34.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中進(jìn)一步向該宿主施用一種抗原特異性B細(xì)胞，所述抗原特異性B細(xì)力包與一種化合物相才妄觸，該化合物能夠降{氐所述細(xì)胞中的程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性。35.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中所述的T細(xì)胞是自身來(lái)源的。36.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中所述的T細(xì)胞來(lái)自于與宿主屬于相同種類(lèi)的另外一個(gè)宿主中。37.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中所述的T細(xì)胞來(lái)自于與接受治療的宿主屬于不同種類(lèi)的宿主中。38.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中所述的抗原特異性T細(xì)胞對(duì)病毒抗原、細(xì)菌抗原、真菌抗原、或者寄生蟲(chóng)抗原或者腫瘤抗原具有特異性。39.才艮據(jù)4又利要求38的方法，其中所述的病毒抗原是肝炎病毒抗原、人類(lèi)免疫缺陷型病毒(HIV)抗原、人類(lèi)T、淋巴細(xì)月包白血病病毒(HTLV)#元原，皰滲病毒4元原，Epstein-Barr病毒纟元原，或者人乳頭瘤病毒4元原。40.—種增加T細(xì)胞的細(xì)胞毒素活性的方法，包括將所述T細(xì)胞與一種化合物進(jìn)行接觸，所述化合物能夠降低程序性死亡多肽-1的活性或者表達(dá)。41.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述生物活性的降低是通過(guò)降《氐程序性死亡多肽-1配體(PD-L1)或者程序性死亡多肽-1配體2(PD-L2)的表達(dá)或者活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。42.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述化合物降低程序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體間的相互作用，或者降低程序性死亡多肽-1與程序性死亡多肽-1配體2間的相互作用。43.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述的細(xì)胞毒素活性是細(xì)胞因子的生成，T細(xì)胞的擴(kuò)增，或者感染性制劑的清除。44.4艮據(jù)4又利要求40的方法，其中所述的化合物是抗程序性死亡多肽-1抗體，抗程序性死亡多肽-1配體抗體，抗程序性死亡多肽-1配體2抗體，抗程序性死亡多肽-1RNAi,抗程序性死亡多肽-1配體RNAi，抗程序性死亡多肽-1配體2RNAi，抗程序性死亡多肽-1反義RNA，抗程序性死亡多肽-1配體反義RNA,抗程序性死亡多肽-1配體2反義RNA,顯性負(fù)性程序性死亡多肽-1蛋白，顯性負(fù)性程序性死亡多肽-1配體蛋白，或者顯性負(fù)性禾呈序性死亡多肽-1配體2蛋白。45.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，進(jìn)一步包括將所述細(xì)胞與下述抗體相接觸抗程序性死亡多肽-1抗體，抗程序性死亡多肽-1配體抗體，抗程序性死亡多肽-1配體2抗體，抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4抗體，抗B、T淋巴細(xì)胞衰減因子抗體，抗CD28抗體，抗可誘導(dǎo)共刺激分子抗體，抗可誘導(dǎo)共剌激分子配體抗體，抗B7-l抗體，抗B7-2抗體，抗B7-H3抗體，或者抗B7-H4抗體。46.—種診斷宿主是否患有持續(xù)性感染或者腫瘤、或者診斷該宿主是否存在患有持續(xù)性感染或者腫瘤的危險(xiǎn)的方法，包括(a)從所述宿主中提取樣品，該樣品包括免疫細(xì)胞；以及(b)測(cè)量該宿主樣品中的程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性，與對(duì)照樣品中的表達(dá)或者活性相比，程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的增加則表明該宿主患有持續(xù)性感染或者腫瘤，或者存在患有持續(xù)性感染或者腫瘤的危險(xiǎn)。47.為患有持續(xù)性感染或者腫瘤的宿主、或者存在患有持續(xù)性感染或者腫瘤的危險(xiǎn)的宿主選擇治療方法的方法，包括下述步驟(a)從所述宿主中提取包括免疫細(xì)胞的樣品；(b)測(cè)定上述免疫細(xì)月包中的禾呈序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性，與對(duì)照樣品中的表達(dá)或者活性相比，程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的增加則表明該宿主患有持續(xù)性感染或者腫瘤，或者存在患有持續(xù)性感染或者腫瘤的危險(xiǎn)；(c)為被診斷為患有持續(xù)性感染或者腫瘤的宿主、或者為纟皮診斷為存在患有持續(xù)性感染或者腫瘤的危險(xiǎn)的宿主選擇一種治療方法，所述治療方法包括一種能夠降低程序性死亡多肽-1的表達(dá)或者活性的化合物。48.根據(jù)權(quán)利要求46或者47的方法，其中所述步驟(b)進(jìn)一步包括鑒定抗原特異性免疫細(xì)胞，其中所述的抗原是病毒抗原，細(xì)菌抗原，寄生蟲(chóng)抗原，或者真菌抗原。49.根據(jù)權(quán)利要求46或者47的方法，其中所述的樣品是血液樣品，活體組織，或者骨髓4羊品。50.根據(jù)權(quán)利要求46或者47的方法，其中所述的對(duì)照細(xì)胞來(lái)自于沒(méi)有患有持續(xù)性感染或者腫瘤的宿主，或者來(lái)自于不存在患有持續(xù)性感染或者腫瘤的危險(xiǎn)的宿主。全文摘要本發(fā)明提供一種用于治療、預(yù)防、或者緩解持續(xù)性感染的方法及組合物，例如慢性感染，潛伏性感染，以及慢感染和腫瘤。本發(fā)明的方法及組合物對(duì)于緩解與上述感染及腫瘤相關(guān)的一種或者多種癥狀同樣是有效的。文檔編號(hào)C07K16/28GK101355965SQ200680027007公開(kāi)日2009年1月28日申請(qǐng)日期2006年6月8日優(yōu)先權(quán)日2005年6月8日發(fā)明者E·約翰·維爾瑞,丹尼爾·巴伯,大衛(wèi)·M·多夫曼,拉菲·阿梅德,阿琳·沙佩,高丹·弗里曼申請(qǐng)人:達(dá)納-法伯癌癥研究院;布賴(lài)漢姆婦女醫(yī)院;埃默里大學(xué);哈佛學(xué)院董事會(huì)