專利名稱：：前列腺素d2受體拮抗劑的磷酸二氫鹽的制作方法前列腺素D2受體拮抗劑的磷酸二氫鹽發(fā)明領(lǐng)域藥物組合物的大規(guī)^莫生產(chǎn)可對(duì)化學(xué)家和化學(xué)工程師構(gòu)成許多挑戰(zhàn)。雖然這些挑戰(zhàn)中有許多涉及對(duì)大量試劑的處理和對(duì)大規(guī)模反應(yīng)的控制，但是對(duì)最終產(chǎn)品的處理提出了與最終活性產(chǎn)品本身的性質(zhì)相關(guān)的特殊挑戰(zhàn)。這類產(chǎn)品不但必須產(chǎn)率高、必須是穩(wěn)定的且容易分離，而且它必須具有適于最終有可能采用的醫(yī)藥制劑類型的性質(zhì)。在生產(chǎn)過程的每個(gè)步驟(包括合成、分離、批量?jī)?chǔ)存、藥物配制和長(zhǎng)期配制)中，都必須考慮到醫(yī)藥制劑的活性成分的穩(wěn)定性。這些步驟的每一步都可能受到各種環(huán)境條件如溫度和濕度的影響。用于制備藥物組合物的藥學(xué)活性物質(zhì)應(yīng)當(dāng)盡可能得純，而且它在各種環(huán)境條件下長(zhǎng)期儲(chǔ)存時(shí)的化學(xué)穩(wěn)定性必須得到保證。這對(duì)于防止在藥物組合物中出現(xiàn)不希望的降解產(chǎn)物而言是絕對(duì)必要的。這些降解產(chǎn)物可能具有潛在的毒性，或者僅僅是導(dǎo)致組合物的功效下降。大規(guī)模生產(chǎn)醫(yī)藥化合物方面令人關(guān)注的主要事情是活性物質(zhì)在其處理過程中應(yīng)保持多晶型穩(wěn)定性，以確保加工參數(shù)和醫(yī)藥質(zhì)量的一致性。根據(jù)醫(yī)藥化合物的穩(wěn)定特性，它在生產(chǎn)和/或儲(chǔ)存期間可能會(huì)出現(xiàn)變化，從而可能導(dǎo)致質(zhì)量控制問題以及配制問題。這樣的變化可影響生產(chǎn)過程的重現(xiàn)性，因而使得最終制劑可能不符合管理當(dāng)局對(duì)藥物組合物的配制所規(guī)定的高質(zhì)量和嚴(yán)格要求?；谏鲜鰞?nèi)容，通常應(yīng)當(dāng)牢記在心的是，至少對(duì)已經(jīng)具有改善的物理穩(wěn)定特定的醫(yī)藥化合物的選擇相對(duì)于相同化合物的較不穩(wěn)定形式而言可提供顯著的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明涉及具有藥理學(xué)活性的前列腺素D2受體拮抗劑的磷酸二氫鹽，它具有十分優(yōu)選的物理性質(zhì)。該化合物可作為DP拮抗劑用于治療患有或易患有由PGD2介導(dǎo)的病理(疾病)病癥的患者，所述病癥包括但不限于變應(yīng)性疾病(如變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、支氣管哮喘和食物過敏)、全身性肥大細(xì)胞病、伴有全身性肥大細(xì)胞激活的紊亂、過敏性休克、支氣管縮窄、支氣管炎、蕁麻疹、濕疹、伴有瘙癢的疾病(如特應(yīng)性皮炎和蕁麻滲)、由于與瘙癢相關(guān)的行為(例如搔抓和打)繼發(fā)產(chǎn)生的疾病(如白內(nèi)障、視網(wǎng)膜脫離、炎癥、感染和睡眠障礙)、炎癥、慢性阻塞性肺病、缺血再灌注損傷、腦血管意外、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胸膜炎、潰瘍性結(jié)腸炎等。已經(jīng)顯示，對(duì)變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、變應(yīng)性結(jié)膜炎和特應(yīng)性皮炎患者進(jìn)行的局部變應(yīng)原攻擊導(dǎo)致鼻和支氣管灌洗液、淚液和皮膚腔液中的前列腺素D2(PGD2)水平迅速升高。PGD2具有多種炎性作用，例如增加結(jié)膜和皮膚的血管滲透性、增加鼻氣道阻力、氣道收縮以及嗜酸性細(xì)胞對(duì)結(jié)膜和氣管的浸潤(rùn)。PGD2是在免疫激發(fā)下從肥大細(xì)胞產(chǎn)生的花生四烯酸的主要環(huán)加氧酶產(chǎn)物[Lewis,RA，SoterNA，DiamondPT，AustenKF，OatesJA，RobertsLJII，"ProstaglandinD2generationafteractivationofratandhumanmastcellswithanti-IgE"(用抗-IgE激活大鼠和人肥大細(xì)胞后的前列腺素D2生成)，丄/附/w朋o/129，1627-1631，1982。激活的肥大細(xì)胞是PGD2的主要來源，是在諸如哮喘、變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、變應(yīng)性皮炎和其它疾病的病癥中驅(qū)動(dòng)變應(yīng)性應(yīng)答的關(guān)鍵因素之一[BrightlingCE，BraddingP，PavordID，WardlawAJ，"NewInsightsintotheroleofthemastcellinasthma"(肥大細(xì)胞在哮喘中作用之新解)，C7,Vi^Ex:/;33，550_556，2003。PGD2的許多作用是通過其對(duì)D型前列腺素(DP)受體的作用介導(dǎo)的，D型前列腺素受體是在上皮組織和平滑肌上表達(dá)的G蛋白偶聯(lián)受體。長(zhǎng)期以來，在哞喘方面，呼吸上皮被認(rèn)為是推動(dòng)疾病發(fā)展的炎性細(xì)胞因子和趨化因子的關(guān)鍵來源[HolgateS，LackieP，WilsonS，RocheW，DaviesD，"BronchialEpitheliumasafeyRegulatorofAirwayAllergenSensitizationandRemodelinginAsthma"(作為哮喘中的氣道變應(yīng)原致敏和重塑的關(guān)鍵
背景技術(shù)：
：調(diào)節(jié)劑的支氣管上皮)，J附/及"/;/r0^aw^AfM.162,113-117,2000。在哮喘實(shí)驗(yàn)小鼠模型中，受到抗原攻擊后，DP受體在氣道上皮中大幅上調(diào)[MatsuokaT，HirataM，TanakaH，TakahashiY,MurataT，KabashimaK，SugimotoY，KobayashiT，UshikubiF,AzeY，EguchiN，UradeY，YoshidaN，KimuraK,MizoguchiA，HondaY，NagaiH，NarumiyaS，"prostaglandinD2asamediatorofallergicAsthma，，(前歹'J腺素D2作為變應(yīng)性哮喘的介質(zhì))，287，2013-2017，2000。在缺少DP受體的敲除小鼠中，氣道高反應(yīng)性和慢性炎癥顯著減少，這二者是人類哮喘的主要特征[MatsuokaT，HirataM，TanakaH，TakahashiY，MurataT，KabashimaK，SugimotoY，KobayashiT,UshikubiF,AzeY，EguchiN，UradeY，YoshidaN，KimuraK，MizoguchiA,HondaY，NagaiH，NarumiyaS，"ProstaglandinD2asamediatorofallergicAsthma"(前列腺素D2作為變應(yīng)性哮喘的介質(zhì))，Sc/e/i"287，2013-2017，2000]。DP受體還被認(rèn)為參與人類的變應(yīng)性鼻炎，變應(yīng)性鼻炎是常見的變應(yīng)性疾病，以打噴噢、瘙癢、鼻漏和鼻充血(nasalcongestion)癥狀為特征。將PGD2局部施用于鼻可引起鼻充血呈劑量依賴性地增加[DoyleWJ，BoehmS，SkonerDP,"Physiologicresponsestointranasaldose-responsechallengeswithhistamine,methacholine，bradykinin，andprostaglandininadultvolunteerswithandwithoutnasalallergy"(在患有和不患有鼻變態(tài)反應(yīng)的成人志愿者中對(duì)組胺、乙酰甲膽堿、緩激肽和前列腺素鼻內(nèi)劑量-反應(yīng)攻擊的生理反應(yīng))，/j//^^);C7//附mwm/.86(6Pt1)，924-35，1990!。在豚鼠實(shí)驗(yàn)哮喘模型中已經(jīng)證明，DP受體拮抗劑可減少氣道炎癥[ArimuraA，YasuiK，KishinoJ，AsanumaF，HasegawaH，KakudoS，OhtaniM,AritaH，"Preventionofallergicinflammationbyanovelprostaglandinreceptorantagonist,S-5751"(用新的前列腺素受體拮抗劑S-5751預(yù)防變應(yīng)性炎癥)，/五w298(2)，411-9，2001。因此，PGD2顯示作用于DP受體，并在誘發(fā)變應(yīng)性哮喘的某些關(guān)鍵特征中起重要作用。在多種種屬中已經(jīng)顯示，DP拮抗劑在緩解變應(yīng)性鼻炎癥狀方面是有效的，更具體而言，能夠抑制抗原誘導(dǎo)的鼻充血，鼻充血是變應(yīng)性鼻炎最明顯的癥狀[Jones，T.R.，Savoie，C.，Robichaud,A.，Sturino，C.，Scheigetz,J.，Lachance,N.，Roy,B.，Boyd，M.，Abraham,W,，"StudieswithaDPreceptorantagonistinsheepandguineapigmodelsofallergicrhinitis"(DP受體拮抗劑在變應(yīng)性鼻炎的綿羊a鼠模型中的研究)，爿附./i^;.O扠Ca"臉d.167，A218,2003;和ArimuraA，YasuiK，KishinoJ，AsanumaF，HasegawaH，KakudoS，OhtaniM，AritaH，"Preventionofallergicinflammationbyanovelprostaglandinreceptorantagonist,S-5751'，(用新的前列腺素受體拮抗劑S-5751預(yù)防變應(yīng)性炎癥)，//%"/7waco/E矽77^a298(2)，411-9，2001]。DP拮抗劑在變應(yīng)性結(jié)膜炎和變應(yīng)性皮炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭幸彩怯行У膌ArimuraA，YasuiK,KishinoJ，AsanumaF，HasegawaH，KakudoS,OhtaniM，AritaH,"Preventionofallergicinflammationbyanovelprostaglandinrec印torantagonist,S-5751"(用新的前列腺素受體拮抗劑S-5751預(yù)防變應(yīng)性炎癥)，/尸/^r附"o/五jc/77^r.298(2)，411-9，2001;和TorisuK,KobayashiK，IwahashiM,NakaiY，OnodaT，NagaseT,SugimotoI，OkadaY,Mats腿otoR，NanbuF，OhuchidaS，NakaiH，TodaM，"Discoveryofanewclassofpotent,selective,andorallyactiveprostaglandinD2receptorantagonist"(新的一類強(qiáng)效、選擇性且口月良有效的前列腺素D2受體拮抗劑的發(fā)現(xiàn))，J5/owg.在CT^w.12，5361-5378，2004。專利申請(qǐng)WO2006044732(下文稱為'732公開文本，其引入本文作為參考)公開了具有有價(jià)值的藥學(xué)性質(zhì)的嘧啶類，所述藥學(xué)性質(zhì)特別包括與DP受體結(jié)合和調(diào)節(jié)其的能力。'732公開文本公開了式(I)的嘧啶類，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>它們的制備方法、含有這些化合物的藥物組合物以及它們?cè)谥委熌軌蛲ㄟ^抑制前列腺素D2受體來調(diào)節(jié)的疾病狀態(tài)中的醫(yī)藥用途。而且，'732公開文本特別公開并要求保護(hù)了2-(3-{6-[2-(2，4-二氯苯基)乙基氨基j-2-甲氧基嘧啶-4-基}苯基)-2-甲基丙酸(下文稱為"游離形式")。'732公開文本還提供鹽酸鹽和鈉鹽的各種實(shí)施例。更具體而言，公開了2-(3-{6-[2-(2，4-二氯苯基)乙基氨基-2-甲氧基嘧啶-4-基}苯基)-2-甲基丙酸的鹽酸鹽和鈉鹽。然而，'732公開文本沒有特別公開2-(3-{6-[2-(2，4-二氯苯基)乙基氨基-2-甲氧基嘧啶-4-基}苯基)-2-甲基丙酸的磷酸二氫鹽。發(fā)明概述本發(fā)明涉及式(III)的2-(3-{6-[2-(2，4-二氯苯基)乙基氨基-2-曱氧基嘧咬-4-基}苯基)-2-甲基丙酸的磷酸二氫鹽(下文稱為"磷酸二氫鹽")，+H2P04-(III)本發(fā)明的另一方面是包含藥物有效量的磷酸二氫鹽的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是通過給患者施用藥物有效量的2-(3-{6-[2-(2,4-二氯苯基)乙基氨基-2-甲氧基嘧啶-4-基}苯基)-2-曱基丙酸的磷酸二氫鹽來治療患有由PGD2介導(dǎo)的紊^的患者的方法，所述紊亂包括但不限于變應(yīng)性疾病(如變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、支氣管哞喘和食物過敏)、全身性肥大細(xì)胞病、伴有全身性肥大細(xì)胞激活的紊亂、過敏性休克、支氣管縮窄、支氣管炎、蕁麻疹、濕疹、伴有瘙癢的疾病(如特應(yīng)性皮炎和蕁麻滲)、由于與瘙癢相關(guān)的行為(例如搔抓和打)繼發(fā)產(chǎn)生的疾病(如白內(nèi)障、視網(wǎng)膜脫離、炎癥、感染和睡眠障礙)、炎癥、慢性阻塞性肺疾病、缺血再灌注損傷、腦血管意外、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胸膜炎、潰瘍性結(jié)腸炎等。下文借助隨后的附圖和詳細(xì)說明來更充分地論述本發(fā)明。附圖簡(jiǎn)述圖1是磷酸二氫鹽的X-射線粉末衍射圖(XRPD)。圖2是與圖1的磷酸二氫鹽的X-射線粉末衍射圖相應(yīng)的XRPDd-間Jf巨和相對(duì)強(qiáng)度表。圖3是磷酸二氫鹽的差示掃描量熱計(jì)-熱重分析儀(DSC-TGA)熱分析圖。TGA數(shù)據(jù)顯示從室溫至175°C的總失重約為0.4%。DSC僅包括結(jié)晶相的熔化。分子分解于熔化溫度開始。圖4是磷酸二氫鹽的DSC熱分析圖。熔化是熱分析圖中在219°C初始溫度(onset)所觀察到的唯一熱學(xué)事件。圖5顯示了磷酸二氫鹽的動(dòng)態(tài)蒸氣吸附分析儀(DVS)吸濕等溫線和對(duì)應(yīng)的吸水?dāng)?shù)據(jù)表。數(shù)據(jù)顯示，在94。/o相對(duì)濕度(RH)吸附增重約為0.9%且滯后甚小，說明表面水吸附結(jié)合較弱。圖6顯示了DVS前后磷酸二氫鹽的XRPD圖。制備樣品，在DVS中于0%RH下放置約12小時(shí)，在從DVS取出后兩分鐘內(nèi)開始分析。數(shù)據(jù)顯示，作為DVS實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，強(qiáng)度和d-間距的變化很小，表明晶體結(jié)構(gòu)未發(fā)生可察覺的變化。圖7顯示了磷酸二氬鹽的顯微照片。該物質(zhì)主要由長(zhǎng)度達(dá)約30微米的柱狀和針狀顆粒組成。圖8顯示了磷酸二氫鹽研磨前后的顯微照片和定量粒度分布，顯示出良好的粒度減小且理化性質(zhì)沒有變化。磷酸二氫鹽研磨后的顯微照片顯示出良好微粉化的結(jié)晶物質(zhì)，在100倍放大率下搜索~30個(gè)視野期間沒有長(zhǎng)度大于10微米的顆粒。微粉化磷酸二氫鹽的粒度分布被確定為單模曲線(singlemodecurve)。中間值[x(50)l是2.0微米，90%的顆粒是4.7微米或以下。微粉化過程同時(shí)降低了中間值(以前為5.8微米)和x(90)粒度(以前為約16微米)二者。磷酸二氬鹽微粉化前后的XRPD(即峰強(qiáng)度、位置(d-間距)和分辨率)是相同的。圖9是磷酸二氫鹽微粉化后的DVS吸濕等溫線，顯示未發(fā)生無定形化。圖10顯示了磷酸二氫鹽的傅立葉變換紅外(FT-IR)譜和相應(yīng)的FT-IR峰的表格。圖11顯示了鈉鹽的兩批單獨(dú)制備物(笫1批和第2批)的XRPD圖的覆蓋(overlay)。第1批鈉鹽從乙醇乙酸乙酯中重結(jié)晶。第2批鈉鹽從曱醇:乙酸乙酯中重結(jié)晶。圖12顯示了鹽酸鹽從丙酮中重結(jié)晶的兩批單獨(dú)制備物(第1批和第2批)的XRPD圖的覆蓋(overlay)。發(fā)明詳述定義和縮寫如上文以及本發(fā)明的全文中所用的以下縮寫應(yīng)當(dāng)理解為具有下列含意，另有指示除外DMSO二曱基亞砜cAMP環(huán)腺苷酸IBMX3-異丁基-l-曱基黃嘌呤SPA親近閃爍分析法ATTC美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心MEM最低必需培養(yǎng)基FBS胎牛血清CPM每分鐘計(jì)數(shù)意，另有指示除外"治療"指預(yù)防、部分緩解或治愈疾病。通過給患者施用藥物有效量的式(III)化合物，本發(fā)明的化合物和組合物可用于治療由PGD2介導(dǎo)的紊亂，包括但不限于變應(yīng)性疾病(如變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、支氣管哞喘和食物過敏)、全身性肥大細(xì)胞病、伴有全身性肥大細(xì)胞激活的紊亂、過敏性休克、支氣管縮窄、支氣管炎、蕁麻瘆、濕滲、伴有瘙癢的疾病(如特應(yīng)性皮炎和蕁麻滲)、由于與癢癢相關(guān)的行為(例如搔抓和打)繼發(fā)產(chǎn)生的疾病(如白內(nèi)障、視網(wǎng)膜脫離、炎癥、感染和睡眠障礙)、炎癥、慢性阻塞性肺疾病、缺血再灌注損傷、腦血管意外、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胸膜炎、潰瘍性結(jié)腸炎等。"患者"包括人類和其它哺乳動(dòng)物。"藥物有效量"旨在描述化合物、組合物、藥劑或其它活性成分在產(chǎn)生所需治療效果方面有效的量。本發(fā)明的特定實(shí)施方案本發(fā)明的一項(xiàng)特定實(shí)施方案是結(jié)晶形式的式(III)化合物。本發(fā)明的化合物顯示出前列腺素D2受體拮抗劑活性，并且是有用的藥理活性劑。因此，它被納入藥物組合物中并用于治療患有某些醫(yī)學(xué)紊亂的患者。根據(jù)文獻(xiàn)和下文藥理學(xué)試驗(yàn)部分所述的試驗(yàn)，本發(fā)明的化合物是前列腺素D2受體的拮抗劑，這些試驗(yàn)結(jié)果據(jù)信與在人類和其它哺乳動(dòng)物中的藥理學(xué)活性相關(guān)。因此，在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物和含有本發(fā)明的化合物的藥物組合物，它們用于治療患有或易患有可通過施用PGD2拮抗劑得以改善的病癥的患者。例如，本發(fā)明的化合物因此可用于治療各種由PGD2介導(dǎo)的疾病，包括但不限于變應(yīng)性疾病(如變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、支氣管哮喘和食物過敏)、全身性肥大細(xì)胞病、伴有全身性肥大細(xì)胞激活的紊亂、過敏性休克、支氣管縮窄、支氣管炎、蕁麻滲、濕疹、伴有瘙癢的疾病(如特應(yīng)性皮炎和蕁麻瘆)、由于與瘙癢相關(guān)的行為(例如搔抓和打)繼發(fā)產(chǎn)生的疾病(如白內(nèi)障、視網(wǎng)膜脫離、炎癥、感染和睡眠障礙)、炎癥、慢性阻塞性肺疾病、缺血再灌注損傷、腦血管意外、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胸膜炎、潰瘍性結(jié)腸炎等。本發(fā)明的治療方法的一項(xiàng)特定實(shí)施方案是治療變應(yīng)性鼻炎。本發(fā)明的治療方法的另一項(xiàng)特定實(shí)施方案是治療支氣管孝喘。本發(fā)明的治療方法的另一項(xiàng)特定實(shí)施方案是治療COPD。本發(fā)明的治療方法的另一項(xiàng)特定實(shí)施方案是治療變應(yīng)性結(jié)膜炎。本發(fā)明的治療方法的另一項(xiàng)特定實(shí)施方案是治療變應(yīng)性皮炎。本文對(duì)治療的稱謂應(yīng)理解為包括預(yù)防性療法和對(duì)確診癥狀的治療。本發(fā)明的化合物還可用于涉及與下述物質(zhì)中至少一種的聯(lián)合療法的治療(i)抗組胺藥，例如非索非那定、地氯雷他定、氯雷他定和西替利溱(citirizine)，用于治療變應(yīng)性鼻炎；(ii)白三烯拮抗劑，例如孟魯司特和扎魯司特(zafirulast),用于治療變應(yīng)性鼻炎、COPD、變應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎等。具體請(qǐng)參考WO01/78697A2的權(quán)利要求書；(iii)P激動(dòng)劑，例如阿布+又醇、沙丁胺醇(salbuterol)和特布他林，用于治療哮喘、COPD、變應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎等；(iv)抗組胺藥，例如非索非那定、氯雷他定和西替利溱(citirizine)，用于治療哮喘、COPD、變應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎等；(v)PDE4(磷酸二酯酶4)抑制劑，例如羅氟司特和西洛司特，用于治療哞喘、COPD、變應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎等；或者(vi)TP(血栓烷A2受體)或CrTh2(在Th2細(xì)胞上表達(dá)的化學(xué)引誘物受體-同源分子)拮抗劑，例如雷馬曲班(Ramatrobran)(BAY-u3405),用于治療COPD、變應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎等。本發(fā)明在其范圍內(nèi)還包括包含與可藥用載體混合的藥物有效量的本發(fā)明的化合物的藥物組合物。實(shí)際上，本發(fā)明的化合物可以以可藥用劑型通過局部性或全身性施用方式施用于人和其它動(dòng)物，所述施用方式包括口服、吸入、直腸、經(jīng)鼻、口腔、舌下、陰道、結(jié)腸、胃腸道外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外)、腦池內(nèi)以及腹膜內(nèi)施用方式。應(yīng)當(dāng)理解，具體的途徑可隨例如受藥者的身體狀況而變化。"可藥用劑型"指本發(fā)明的化合物的劑型，包括例如片劑、糖錠劑、粉末劑、酏劑、糖漿、包括混懸劑在內(nèi)的液體制劑、噴霧劑、吸入片劑、錠劑、乳劑、溶液劑、顆粒劑、膠嚢劑和栓劑，以及用于注射的液體制劑，包括脂質(zhì)體制劑。其技術(shù)和配制通?？稍凇独资纤幬锟茖W(xué)》("Remington'sPharmaceuticalSciences",馬克(Mack)出版乂A司，伊士頓，PA,最新版本)中找到。本發(fā)明的一個(gè)特定方,:提供了用于以藥物組合物形式施用的本發(fā)明的化合物?？伤幱幂d體包括至少一種選自下組的組分可藥用的載體、稀釋劑、包衣物質(zhì)、佐劑、賦形劑或溶媒，例如防腐劑、填充劑、崩解劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、乳劑穩(wěn)定劑、助懸劑、等張劑、甜味劑、矯味劑、芳香劑、著色劑、抗菌劑、抗真菌劑、其它治療物質(zhì)、潤(rùn)滑劑、吸收延遲或促進(jìn)劑以及分散劑，這取決于施用模式和劑型的性質(zhì)。示例性的助懸劑包括乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯和失水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氬氧化鋁(aluminummetahydroxide)、膨脹土、瓊脂和西黃蓍膠或這些物質(zhì)的混合物。示例性的用于防止微生物作用的抗菌劑和抗真菌劑包括尼泊金酯類、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等。示例性的等張劑包括糖、氯化鈉等。示例性的用于延緩吸收的吸收延遲劑包括單硬脂酸鋁和明膠。示例性的用于增強(qiáng)吸收的吸收促進(jìn)劑包括二甲基亞砜和相關(guān)類似物。示例性的稀釋劑、溶劑、載體、增溶劑、乳化劑和乳劑穩(wěn)定劑包括水、氯仿、蔗糖、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、四氫呋喃曱醇、苯甲酸苯甲酯、多元醇、丙二醇、1，3-丁二醇、甘油、聚乙二醇、二曱基甲酰胺、吐溫⑧60、司盤⑧60、十八醇/十六醇混合物、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯和月桂烷基石克醆鈉、失水山梨醇脂肪酸酯、植物油(如棉籽油、花生油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)以及可注射的有機(jī)酯如油酸乙酯等，或者這些物質(zhì)的適宜混合物。示例性的賦形劑包括乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鉤和磷酸氫鈣。示例性的崩解劑包括淀粉、海藻酸和某些絡(luò)合硅酸鹽類。示例性的潤(rùn)滑劑包括硬脂酸鎂、月桂硫酸鈉、滑石粉以及高分子量聚乙二醇。對(duì)可藥用載體的選擇通常取決于活性化合物的化學(xué)性質(zhì)(如可溶性)、具體的施用方式和藥物實(shí)踐中所應(yīng)遵守的規(guī)定。適于口服施用的本發(fā)明的藥物組合物可以作為分離的單位呈現(xiàn)，例如固體劑型，如各自含有預(yù)定量活性成分的膠嚢劑、扁嚢劑或片劑，或者粉末或顆粒；液體劑型，如在水性或非水性液體中的溶液劑或混懸劑，或者水包油液體乳劑或油包水液體乳劑?；钚猿煞诌€可以以大丸劑、藥糖劑或糊劑的形式呈現(xiàn)。"固體劑型"指本發(fā)明化合物的劑型是固體形式，例如膠嚢劑、片劑、丸劑、粉末劑、糖錠劑或顆粒劑。在這類固體劑型中，本發(fā)明的化合物與下述物質(zhì)混合至少一種常規(guī)的惰性賦形劑(或載體)如檸檬酸鈉或磷酸氫鉤或(a)填充劑或增量劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，(b)粘合劑，例如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠，(c)保濕劑，例如甘油，(d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鉀、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、某些絡(luò)合硅酸鹽和碳酸鈉，(e)溶解阻滯劑，例如石蠟，(0吸收促進(jìn)劑，例如季銨化合物，(g)潤(rùn)濕劑，例如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯，(h)吸收劑，例如高嶺土和膨脹土，(i)潤(rùn)滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂硫酸鈉，(j)遮光劑，(k)緩沖劑，以及在腸道某一部分以緩釋方式釋放本發(fā)明的化合物的物質(zhì)。片劑可以任選采用一種或多種輔助成分通過壓制或模制方式來制備。壓制片可通過將任選與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合的流動(dòng)形式(如粉末或顆粒)的活性成分在適宜機(jī)器中壓制來制備?？梢允褂弥T如乳糖、杼檬酸鈉、碳酸釣、磷酸氫釣、崩解劑如淀粉、海藻酸和某些復(fù)合硅酸鹽聯(lián)合潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、月桂硫酸鈉及滑石粉的賦形劑。用惰性液體稀釋劑潤(rùn)濕的粉末狀化合物的混合物可在適宜的機(jī)器中模制而制成模制片。片劑可任選地被包衣或刻劃痕，并且可以配制成使其中的活性成分緩慢或控制釋放的形式。采用諸如乳糖以及高分子量聚乙二醇等的賦形劑，固體組合物也可用作軟和硬填充明膠膠嚢的填充物質(zhì)。如果希望的話，并且為了更有效的分布，化合物可微嚢化于或附著于緩釋或靶向給藥系統(tǒng)如生物相容的、可生物降解的聚合物基質(zhì)(如聚d，l-丙交酯共乙交酯)、脂質(zhì)體和孩i球中，通過稱為皮下或肌內(nèi)貯庫的技術(shù)經(jīng)皮下或肌內(nèi)注射，以使得化合物持續(xù)緩慢釋放達(dá)兩周或更長(zhǎng)時(shí)間。化合物可以^L滅菌，例如，經(jīng)除菌濾器過濾或者將滅菌劑添加入可以在臨用前溶于無菌水或一些其它無菌注射介質(zhì)中的無菌固體組合物形式。"液體劑型"指欲施用于患者的活性化合物的劑量是液體形式，例如可藥用的乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑。除活性化合物外，液體劑型還可含有本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑，例如溶劑、增溶劑和乳化劑。當(dāng)使用水性混懸劑時(shí)，它們可含有乳化劑或有助于懸浮的物質(zhì)。適于局部施用的藥物組合物指為適于局部施用于患者的形式的制劑。該制劑可以作為局部用軟膏、油膏、粉末劑、噴霧劑和吸入劑、凝膠劑(水基或醇基)、乳膏劑呈現(xiàn)，如本領(lǐng)域眾所周知的那樣；或者，加入應(yīng)用于貼劑的基質(zhì)中，其將使得化合物經(jīng)由皮膚障礙控制釋放。當(dāng)配制成軟膏時(shí)，活性成分可以與石蠟族的或水混溶性的軟膏基質(zhì)一起應(yīng)用?；蛘撸钚猿煞挚梢杂盟腿楦嗷|(zhì)配制成乳膏劑。適于局部施用于眼的制劑包括滴眼劑，其中活性成分溶于或混懸于對(duì)活性成分而言適宜的載體、尤其是水性溶劑中。適于局部施用于口的制劑包括錠劑，其包含在矯味基質(zhì)、通常是蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠中的活性成分；軟錠劑，其包含在惰性基質(zhì)如明膠和甘油或者蔗糖和阿拉伯膠中的活性成分；以及漱口劑，其包含在適宜液體載體中的活性成分。乳劑藥物組合物的油相可以通過已知方式由已知的成分組成。雖然該相可以僅包含乳化劑(還稱為emulgent(利泄劑))，但是期望其包含至少一種乳化劑與脂肪或油或者與脂肪和油兩者的混合物。在特定的實(shí)施方案中，親水乳化劑與作為穩(wěn)定劑起作用的親脂乳化劑一起被包括在內(nèi)。乳化劑與或不與穩(wěn)定劑一起構(gòu)成乳化蠟，與油和脂肪一起構(gòu)成乳化軟骨基質(zhì)，其形成乳膏劑的油性分散相。如果需要的話，乳膏基質(zhì)的水相可包括例如至少30%w/w多元醇，即含有兩個(gè)或兩個(gè)以上羥基的醇，例如丙二醇、丁烷-l，3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG400)及其混合物。局部用制劑被期望包含促進(jìn)吸收或促進(jìn)活性成分穿過皮膚或其它受影響部位的化合物。對(duì)適于組合物的油或脂肪的選擇是基于能否獲得所需的性質(zhì)。因此，乳膏劑應(yīng)當(dāng)特別是不油膩的、不染色的以及能夠洗去的產(chǎn)品，并具有適宜的稠度以避免從軟管或其它容器中滲漏出來。可以使用直鏈或支鏈的一元或二元烷基酯如肉豆蔻酸二異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸-2-乙基己基酯或者稱為Crodamo1CAP的支鏈酯混合物。根據(jù)所需的性質(zhì)，可以單獨(dú)或組合使用這^物質(zhì)?；蛘?，也可使用高熔點(diǎn)脂質(zhì)如白色軟石蠟和/或液體石瑜或其它礦物油。適于直腸或陰道施用的藥物組合物指為適于經(jīng)由直腸或陰道施用于患者并且含有至少一種本發(fā)明的化合物的制劑。栓劑是這類制劑的特定形式，其可以通過將本發(fā)明的化合物與適宜的無刺激性賦形劑或載體(如可可脂、聚乙二醇或栓劑用蠟)混合來制備，這些載體在常溫下為固體，但在體溫時(shí)為液體，因此在直腸或陰道腔中融化并釋放活性組分。以注射方式施用的藥物組合物可以是經(jīng)肌肉(transmuscular)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和/或皮下注射。本發(fā)明的組合物可配制在液體溶液中，特別是生理上相容的緩沖液如Hank溶液或林格氏(Ringer)溶液中。此外，組合物可配制成固體形式，并在臨用前重新溶解或混懸。冷凍干燥形式也被包括在內(nèi)。制劑是被滅菌的，包括乳劑、混懸液、水性和非水性注射溶液，其可以含有助懸劑和增稠劑以及抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑以及使制劑與預(yù)期受藥者的血液等張并具有適宜調(diào)節(jié)的pH的溶質(zhì)。適于經(jīng)鼻或吸入施用的本發(fā)明的藥物組合物指為適于經(jīng)鼻或吸入施用于患者的形式的組合物。組合物可含有粉末形式的載體，其具有例如1至500微米范圍內(nèi)的粒度(包括20和500微米范圍且以5微米遞增的粒度，例如3(M效米、35微米等)。其中載體為液體的適宜組合物，例如鼻噴霧劑或滴鼻劑，包括活性成分的水性或油性溶液。適于氣霧劑施用的組合物可按照常規(guī)方法來制備，并且可以與其它治療劑一起施用。通過定量吸入器或任意適宜的干粉吸入器如專利申請(qǐng)WO2004/026380和美國(guó)專利5,176,132中所述的Eclipse、Spinhaler⑧或Ultrahaler⑥可以容易地進(jìn)行吸入治療。本發(fā)明的組合物中活性成分的實(shí)際劑量水平可以改變，以便獲得這樣的活性成分的量該量對(duì)于特定組合物和患者的施用模式而言在獲得所需治療響應(yīng)方面是有效的。因此，對(duì)任意特定患者而言所選擇的劑量水平取決于各種因素，包括預(yù)期治療效應(yīng)、施用途徑、預(yù)期治療持續(xù)時(shí)間、疾病的病因和嚴(yán)重性、患者的狀況、體重、性別、飲食和年齡、每種活性成分的類型和效力、吸收速率、代謝速率和/或排泄速率及其它因素。以單次或分次劑量施用于患者的本發(fā)明的化合物的總?cè)談┝靠梢允抢缂s0.001至100mg/kg體重/天、特別是0.01至10mg/kg/天的量。例如，對(duì)成人而言，吸入劑量通常為約0.01至約100mg/kg體重/天、特別是約0.01至約10，mg/kg體重/天；口服施用的劑量通常為約O.Ol至約lOO，mg/kg體重/天、特別是約0.1至70，mg/kg體重/天、尤其是0.5至約10，mg/kg體重/天；靜脈內(nèi)施用的劑量為約0.01至約50mg/kg體重/天、特別是O.Ol至lO，mg/kg體重/天。組合物中活性成分的百分比可以改變，但是它應(yīng)當(dāng)占一定的比例以便獲得適宜的劑量。單位劑量組合物可以含有其約數(shù)的量，以便可以用于構(gòu)成日劑量。顯然，若干個(gè)單位劑量形式可以幾乎同時(shí)施用。為了獲得所需治療作用，可以以所需頻率施用劑量。一些患者可能對(duì)較高或較低的劑量迅速響應(yīng)，并且可能發(fā)現(xiàn)低得多的維持劑量是足夠的。對(duì)于其它患者，根據(jù)每名具體患者的生理要求，可能有必要以每日l至4個(gè)劑量的速率進(jìn)行長(zhǎng)期治療。不言而喻，對(duì)于其它患者，將有必要開出每日不多于1或2個(gè)劑量。制劑可以通過藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的任—種方法制備成單位劑量形式。這類方法包括使藥物活性成分與構(gòu)成一種或多種輔助成分的載體相聯(lián)合的步驟。通常而言，制劑如下制備將活性成分與液體載體或細(xì)分的固體載體或這兩者一起均勻和緊密地結(jié)合，然后酌情地使產(chǎn)品成形。制劑可以在單位劑量或多劑量容器、例如密封安瓿劑和帶膠塞的小瓶中呈現(xiàn)，并且可以以冷凍干燥(凍干)狀態(tài)保存，該狀態(tài)僅需要在臨用前添加無菌液體栽體如注射用水。即用注射溶液和混懸液可以由前面所迷類型的無菌粉末、顆粒和片劑來制備。本發(fā)明的化合物通過下述分析方法進(jìn)行分析。高壓液相色譜法-質(zhì)鐠法(LCMS)采用下述方法進(jìn)行用于測(cè)定保留時(shí)間(Rt)和相關(guān)質(zhì)量離子的LCMS試驗(yàn)。采用MicromassLCT質(zhì)語儀記錄質(zhì)i普(MS)。該方法是正性電噴射離子化，掃描質(zhì)量m/z為100至1000。液相色i普法在HewlettPackard1100系列二元泵及脫氣器(HewlettPackard1100SeriesBinaryPump&Degasser)上進(jìn)行；固定相phenomenexSynergi2jiHydro-RP20x4.0mm柱，流動(dòng)相A-0.:r/。甲酸(FA)水溶液，8=0.1%曱酸的乙腈溶液。進(jìn)樣體積為5pL，用CTCAnalyticalPAL系統(tǒng)注射。流量為lmL/分鐘。梯度為3分鐘內(nèi)從10%B增至卯％B和2分鐘內(nèi)從90%B增至100%B。輔助檢測(cè)器為HewlettPackard1100系列UV檢測(cè)器，波長(zhǎng)=220nm和SedereSEDEX75蒸發(fā)光散射(ELS)檢測(cè)器溫度-46。C，氮壓=4巴。H核磁共振譜(NMR)采用具有ASW5mm探針的VarianMercury(300MHz)型光鐠儀在環(huán)境溫度下記錄300MHzNMR。在NMR中，化學(xué)位移(3)以相對(duì)于四甲基曱硅烷的ppm表示?；瘜W(xué)位移值參照作為內(nèi)標(biāo)的四甲基曱硅烷(TMS)以百萬分率(ppm)表示。X-射線粉末衍射法(XRPD)采用Bragg-Brentano(G-26)型幾何學(xué)(geometry)在西門子-BrukerD5000衍射計(jì)上進(jìn)行XRPD。將磷酸二氫鹽置于單晶硅片上，按照(510)結(jié)晶取向切割。采用由銅對(duì)陰極管(45kV/40mA)發(fā)射的銅K-a射線(1.54056埃)作為X-射線源，并采用反射束單色儀濾去CuK-p射線。使用閃爍計(jì)數(shù)器進(jìn)行檢測(cè)。使用0.6mm發(fā)散狹縫、0.6mm防散射狹縫、O.lmm單色儀狹縫和0.6mm檢測(cè)器狹縫。采用以下條件獲得衍射圖2至40度的20角掃描，每步l秒計(jì)數(shù)時(shí)間，步長(zhǎng)0.02度，在壓力、溫度和相對(duì)濕度的環(huán)境條件下。熱重分析確定溶劑化/水合狀態(tài)采用美國(guó)TA儀器公司(TAInstruments)Q-600型同步差示掃描量熱計(jì)/熱重分析儀(DSC/TGA)在干燥氮?dú)夥諊羞M(jìn)行熱分析。采用銦標(biāo)準(zhǔn)來校準(zhǔn)TGA溫度。將磷酸二氫鹽轉(zhuǎn)移至鋁盤(美國(guó)TA儀器公司零件編號(hào)900793.901)中。以每分鐘10。C的線性加熱速率獲得熱分析圖。差示掃描量熱法(DSC)采用裝配有制冷系統(tǒng)的美國(guó)TA儀器公,司Q-1000型DSC在干燥氮?dú)夥諊羞M(jìn)行DSC。采用銦標(biāo)準(zhǔn)來校準(zhǔn)DSC。將磷酸二氫鹽轉(zhuǎn)移至鋁盤中，將具有激光穿孔的蓋子(美國(guó)TA儀器公司零件編號(hào)分別為卯0793.901和900860.卯l)冷焊到鋁盤上。以每分鐘10°C的線性加熱速率獲得DSC熱分析圖。顯微照片顯微照片采用裝配有交叉偏振的奧林巴斯(Olympus)BX-41顯微鏡獲得。樣品通過分散于礦物油中而制得。粒度分布粒度分布采用具有R3測(cè)量透鏡、RODOS干色散器和調(diào)至632.8nm的激光的SympatecHELOS-BF激光衍射粒度分析儀測(cè)定。采用碳化硅標(biāo)準(zhǔn)來校準(zhǔn)系統(tǒng)。采用RODOS干色散附件以3.0巴的基本壓力分散粉末，使壓縮最大化。采用弗勞恩霍夫(Fraunhofer)方法和SympatecWindox(4.0版本)軟件計(jì)算基于體積的粒度分布。動(dòng)態(tài)水蒸氣吸附(DVS)采用SMS儀器公司(SMSInstruments)DVS-1型動(dòng)態(tài)蒸氣吸附分析儀(DVS)或VTI儀器公司(VTIInstruments)SGA-100型動(dòng)態(tài)蒸氣吸附分析儀測(cè)定水吸附曲線。采用標(biāo)準(zhǔn)來校準(zhǔn)RH和重量。在實(shí)驗(yàn)開始前裝上磷酸二氫鹽并于^1。/。RH干燥2.5小時(shí)。RH從約0逐步增至95。/。RH。當(dāng)質(zhì)量變化百分比歷經(jīng)5分鐘間隔小于0.005%且最短絕對(duì)平衡時(shí)間為15分鐘時(shí)，認(rèn)為樣品重量在每步是恒定的。傅立葉變換紅外(FT-IIQ光譜法采用與NicoletNic-PlanFT-IR顯微鏡連接的NicoletMagna-IR分光計(jì)55獲得FT-IR光譜。在KBr盤上分析固體樣品。以4cm"分辨率在4000畫400cm"掃描32次后獲得光"i普。本發(fā)明的化合物的制備和性質(zhì)在下述實(shí)驗(yàn)部分中描述。實(shí)施例2-(3-{6-2-(2,4-二氯苯基)乙基氨基1-2-甲氧基嗜啶-4-基}苯基)-2-曱基丙酸的磷酸二氫鹽步驟1:將4，6-二氯-2-甲氧基嘧啶(0.7g)、2，4-二氯苯乙胺(0.82g)和碳酸氫鈉(0.88g)在乙醇(25mL)中的溶液于80。C加熱3小時(shí)，倒入水(400mL)中。過濾所得固體，空氣干燥，得到(6-氯-2-甲氧基嘧咬-4-基)-『2-(2,4-二氯苯基〗乙基l-胺。步驟2:歷經(jīng)15分鐘，向0。C的二異丙基氨基鋰在四氫呋喃/正庚烷/乙基苯(1.8M，17mL)中的溶液中滴加2-(3-溴-苯基)-丙酸(3g，13.9mmol)在四氫呋喃(5mL)中的溶液。將混合物攪拌l小時(shí)，然后歷經(jīng)10分鐘滴加甲基碘(4.93g，34.8mmol)在四氫呋喃(5mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌15小時(shí)，用2NHC1淬滅反應(yīng)物，真空濃縮，并用乙醚(150mL)稀釋。將乙醚層用2NHC1洗滌，用2NNaOH(50mL)萃取3次。將合并的NaOH層用6NHC1酸化至pH-l，用乙醚(75mL)萃取3次。用鹽水洗滌所合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮，得到2-(3-溴-苯基)-2-甲基丙酸，為固體(3.08g,91。/。)，未經(jīng)進(jìn)一步純化進(jìn)行使用。LC/MS:243(M+H)。步驟3:于-78。C向2-(3-溴-苯基)-2-甲基丙酸(2.18mmol)在無水乙醚(20mL)中的溶液中滴加叔丁基鋰(1.7M戊烷溶液，5.4mL，9.16mmo1),將該混合物在用硼酸三丁酯(2.34mL，8.72mmol)處理下攪拌30分鐘。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪?5小時(shí)，用乙醚稀釋，并用1MH3P04淬滅。攪拌30分鐘后，分離出乙醚層，用2NNaOH(20mL)萃取3次。將合并的NaOH萃取液用6NHCl酸化至pH4，用乙醚(50mL)萃取3次。將所合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉千燥，濃縮，得到3-(l-M-l-曱基-乙基)-苯基硼釐，未經(jīng)進(jìn)一步純化進(jìn)行使用。MS:209(M+H)。步驟4:將(6-氯-2-曱氧基嘧啶-4-基)-[2-(2，4-二氯苯基)乙基卜胺(0.51mmol)和3-(1-叛基-1-甲基-乙基)畫笨基湖酸(0.61mmo1)在乙腈(2.5mL)和碳酸氫鈉水溶液(0.4M，2.5mL)中的溶液用氮?dú)饷摎?分鐘，然后添加四三苯膦把(O)(29.5mg，5mol%)。將反應(yīng)容器密封并在微波中于l:30。C加熱30分鐘。向反應(yīng)混合物中加入2mL水，用2NHCl水溶液將pH值調(diào)節(jié)至約7，用乙酸乙酯(30mL)萃取該混合物3次。用鹽水洗滌合并的萃取液，經(jīng)硫酸鈉干燥，并濃縮。將殘余物進(jìn)行硅膠色鐠法，得到2-(3-{6-2國(guó)(2,4-二氯苯基)乙基氨基1-2-甲氧基嘧啶-4-基}苯基)-2-曱基丙酸，為固體(205mg，75%)。LC/MS:Rr-2.39分鐘，MS:460.2(M+H);NMR[300MHz,(CD3)2SO812.38(1H，s)，7.36-8.00(7H,m)，6.58(1H，s)，3.84(3H，s)，3.58(2H，m)，2.98(2H，m)，1.54(陽，s)。步驟5:將磷酸(3.21mL，1.49N水溶液)加入2-(3-{6-[2-(2，4-二氯苯基)乙基氨基-2-曱氧基嘧啶-4-基)苯基)-2-甲基丙酸(2.1g，4.56mmol)在四氫呋喃(45mL)中的溶液中，將混合物攪拌10分鐘。間隔滴加水直至混合物變?yōu)槌吻迦芤?，于室溫繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)。在真空中濃縮混合物，將殘余物在丙酮中重結(jié)晶，得到2-(346-2-(2，4-二氯苯基)乙基氨基1-2-甲氧基嗜咬-4-基}苯基)-2-曱基丙酸的磷酸二氫鹽,為粉末(2.4g，94。/。)。LCMS:RT=2.41分鐘；MS:462(M+H);!H匪R[300MHz,(CD3SO)2SO:87.95(IH，b),7.8(IH，b),7.6(2H，b)，7.45(2H，d，J=2Hz)，7.35(2H，s)，6.55(IH，s)，3.85(3H，s),3.55(2H，b),2.95(2H，t，J=2Hz),1.5(6H，s)。藥理學(xué)試驗(yàn)在人DP功能分析中評(píng)估了本發(fā)明的化合物的抑制作用。釆用表達(dá)內(nèi)源性DP受體的人細(xì)胞系LS174T進(jìn)行cAMP分析。該方案與以前所述的方案類似WrightDH，F(xiàn)ord-HutchinsonAW，ChadeeK，MettersKM,"ThehumanprostanoidDPreceptorstimulatesmucinsecretioninLS174Tcells"(人前列腺素DP受體在LS174T細(xì)胞中刺激粘蛋白分泌)，丑r//^畫"co/.131(8):1537-45(2000)1。人LS174T細(xì)胞中SPAcAMP分析方案材料PGD2(開曼化學(xué)公司(CaymanChemical)目錄號(hào)12010)IBMX(西格瑪(Sigma)公司目錄號(hào)5879)cAMPSPA直接篩選分析系統(tǒng)(安瑪西亞(Amersham)公司代碼RPA559)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(華萊士(Wallac)公司目錄號(hào)"50-516)Wallac1450微量板Trilux閃爍計(jì)數(shù)器(珀金埃爾默(PerkinElmer)公司)培養(yǎng)板密封器Eppendorf管Dulbecco，s磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)(英杰(Invitrogen)公司目錄號(hào)14040-133)蒸餾水渦流器磁性攪拌器和攪拌棒試劑制備所有試劑在重構(gòu)前均應(yīng)當(dāng)與室溫平衡。1X分析緩沖液通過反復(fù)用蒸餾水洗滌，將瓶的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至500mL量筒。用蒸餾水將最終體積調(diào)節(jié)至500mL并充分混合。溶解試劑1與2將溶解試劑1和2各自分別溶于200mL分析緩沖液中。在室溫下放置20分鐘使其溶解。SPA抗兔小珠將30mL溶解緩沖液2加入瓶中。輕微振搖瓶子5分鐘?？寡逶诿總€(gè)小瓶中加入15mL溶解緩沖液2，輕微混合直至內(nèi)容物完全溶示蹤劑(1125-cAMP)在每個(gè)小瓶中加入14mL溶解緩沖液2，輕微混合直至內(nèi)容物完全溶免疫試劑的制備1)在瓶?jī)?nèi)加入等體積的示蹤劑、抗血清和SPA抗兔試劑，確保制備了對(duì)所需數(shù)目的培養(yǎng)孔而言足夠體積的該混合物(150jiL/孔)。2)充分混合。3)該免疫試劑溶液應(yīng)在每次分析前制備，并且不重復(fù)使用。標(biāo)準(zhǔn)1)加入lmL溶解緩沖液l,并輕微混合直至內(nèi)容物完全溶解。2)最終溶液中cAMP的濃度為512pmol/mL。3)取7支聚丙烯或聚苯乙烯管標(biāo)以0.2pmol、0.4pmol、0.8pmo1、1.6pmol、3.2pmol、6.4pmol和12.8pmol。4)吸取500jiL溶解緩沖液1移入所有管。5)吸取500nL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(512pmol/mL)移入12.8pmol管并充分混合。從12.8pmol管轉(zhuǎn)移500nL至6.4pmol管并充分混合。使用剩余管依次重復(fù)該雙倍稀釋操作。6)從各系列稀釋液一式兩份取50nL等分試樣和標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液將產(chǎn)生0.2-25.6pmol標(biāo)準(zhǔn)的8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)濃度的cAMP?；衔锵♂尵彌_液將50jiLImMIBMX加入100mLPBS中使最終濃度為IOOjiM，于30。C以聲波處理20分鐘。PGD2制備將lmgPGD2(FW，352.5)溶于284^iLDMSO以制備10mM儲(chǔ)備液，于20。C儲(chǔ)存。每次分析前應(yīng)當(dāng)新鮮制備。將3fiLlOmM儲(chǔ)備液加入20mLDMSO中，充分混合，取10mL轉(zhuǎn)移至40mLPBS中?；衔锏南♂屧?6孔培養(yǎng)板上試驗(yàn)數(shù)批本發(fā)明的化合物。每批化合物占據(jù)96孔培養(yǎng)板的一行。采用方法1—cAMPDP11點(diǎn)在Biomex2000(貝克曼(Beckman))上進(jìn)行化合物的稀釋。將來自10mM儲(chǔ)備化合物培養(yǎng)板的5nL各化合物如下所述分別轉(zhuǎn)移至96孔培養(yǎng)板的各孔內(nèi)。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>除了第7列填充28jiLDMSO外，用45jiLDMSO填充培養(yǎng)板。完全吸盡第1列，平行轉(zhuǎn)移12nL至第7列。通過轉(zhuǎn)移5jiL至45pLDMSO中從第1列至第6列和從第7列至第11列進(jìn)行1:10系列稀釋，制得下述濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>將247.5jiL化合物稀釋緩沖液填充入新的96孔培養(yǎng)板。從上述培養(yǎng)板轉(zhuǎn)移2.5jiL系列稀釋的化合物至所述新的培養(yǎng)板(1:100稀釋)，如下所示<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>1.LS174T總是在MEM(ATCC目錄號(hào)30-2003)、10%FBS(ATCC目錄號(hào)30-2020)和另外的2mML-谷氨酰胺中于37。C和5%C02中生長(zhǎng)。2.在37。C水浴中溫?zé)?.05%胰蛋白酶和Versine(英杰公司目錄號(hào)25300-054)。3.除去細(xì)胞的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。將T165燒瓶中的細(xì)胞用4mL胰蛋白酶洗滌兩次，然后在37。C和5。/。C02下培養(yǎng)3分鐘。4.加入10mL培養(yǎng)基并完全吸盡以分離細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。5.在分析前一天，使細(xì)胞密度為2.25xl()5個(gè)細(xì)胞/mL并在96孔培養(yǎng)板上接種200nL細(xì)胞/孔(45，000個(gè)細(xì)胞/孔)。分析步驟第l天在96孔培養(yǎng)板上于200nL培養(yǎng)基內(nèi)接種45,000個(gè)細(xì)胞/孔。將細(xì)胞培養(yǎng)板在37°C、5%C02和95。/。濕度下培養(yǎng)過夜。第2天1.進(jìn)行化合物稀釋。2.制備分析緩沖液、溶解緩沖液1和2、PGD2和標(biāo)準(zhǔn)。3.采用ZymarkSciclpne-ALH/FD方案cAMPDP，從細(xì)胞中吸取培養(yǎng)基并加入IOOjiL化合物溶液。4.在37°C、5%C02和95%濕度下培養(yǎng)細(xì)胞15分鐘。5.采用Zymark方案cAMPDPPGD2，在每孔內(nèi)加入5nL300nMPGD2(20X15nM最終濃度)，將細(xì)胞在37。C、5%032和95%濕度另外培養(yǎng)15分鐘。6.采用Zymark方案cAMPDP溶解，從細(xì)胞中吸取培養(yǎng)基并加入50nL溶解緩沖液l，振搖下于室溫培養(yǎng)鄧分鐘。7.在所有孔內(nèi)加入150(iL免疫試劑(總體積為200jiL/孔)。8.將培養(yǎng)板密封并振搖2分鐘，在Wallac微量滴定板ji閃爍計(jì)數(shù)器的室內(nèi)放置16小時(shí)。第3天在1450Trilux閃爍計(jì)數(shù)器中對(duì)1251cAMP的量計(jì)數(shù)2分鐘。數(shù)據(jù)處理建立cAMP相對(duì)于CPM的標(biāo)準(zhǔn)曲線表l.對(duì)標(biāo)準(zhǔn)而言的典型分析數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>由cAMP相對(duì)于CPM的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算未知樣品的cAMP濃度(pmol/mL)。使用下述公式計(jì)算抑制％:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>結(jié)果在SPAcAMP分析中，磷酸二氫鹽在0.3納摩爾濃度時(shí)在人LS174T細(xì)胞中產(chǎn)生了50%抑制。磷酸二氫鹽相對(duì)于游離形式和鹽酸鹽而言其水溶性增加。下表列出了游離形式、鹽酸鹽和磷酸二氫鹽于25。C在磷酸鹽緩沖液(PBSpH7.4，19%O.IM磷酸二氫鈉溶液和81%O.IM磷酸氫二鈉溶液的混合物)中的溶解度以及游離形式和磷酸二氫鹽于37。C在禁食條件下的模擬腸液(FaSSIF)中的溶解度，F(xiàn)aSSIF4安照下列文獻(xiàn)制備DressmanJ.B.，AmidonG丄.，ReppasC.和ShahV.P.，"Dissolutiontestingasaprognostictoolfororaldrugabsorption:immediatereleasedosageforms"(作為口月艮藥凈勿吸4欠預(yù)觀'J工具的溶出試驗(yàn)即釋劑型)，/V^r附ffce"rtca/i"e"rcA:1998，第15巻，第1期，11-22)。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>磷酸二氫鹽還具有對(duì)大規(guī)模生產(chǎn)和藥物配制而言有用的出人意料的性質(zhì)。首先，磷酸二氫鹽具有非常好的結(jié)晶度。圖1所示的磷酸二氫鹽的XRPD包括中等強(qiáng)度和分辨率的峰。在2-e區(qū)域中段沒有暈(halo)說明無定形相很少，如果有無定形相的話。此外，圖8所示的磷酸二氫鹽研磨前后的顯微照片證明粒度有良好的減小且理化性質(zhì)無變化。然而，鈉鹽具有低的結(jié)晶度。如圖11所示，第2批鈉鹽的XRPD包括低強(qiáng)度的寬峰，表明結(jié)晶度低。第l批鈉鹽的XRPD顯示該物質(zhì)主要是無定形的。此外，在兩批鈉鹽的XRPD圖的2-0區(qū)域中段存在暈(halo)說明該物質(zhì)的結(jié)晶度非常差。此外，目前已經(jīng)證明磷酸二氫鹽僅以一種多晶型形式存在。然而，目前已經(jīng)證明鹽酸鹽以3種多晶型形式存在，它們?cè)谀承┣闆r下可能可相互轉(zhuǎn)化。鹽酸鹽的多晶型形式之一，即圖12中的第2批，具有低的結(jié)晶度，因?yàn)槠鋁RPD包括低強(qiáng)度的寬峰。鹽酸鹽的另一種多晶型形式，即圖12中的第1批，具有良好的結(jié)晶度。權(quán)利要求1.式(III)化合物id="icf0001"file="S2006800378860C00011.gif"wi="99"he="45"top="51"left="64"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2.結(jié)晶形式的根據(jù)權(quán)利要求1的化合物。3.藥物組合物，包含與可藥用載體混合的藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。4.在需要其的患者中治療下述疾病的方法變應(yīng)性疾病、全身性肥大細(xì)胞病、伴有全身性肥大細(xì)胞激活的紊亂、過敏性休克、支氣管縮窄、支氣管炎、蕁麻滲、濕滲、伴有瘙癢的疾病、由于與瘙癢相關(guān)的行為繼發(fā)產(chǎn)生的疾病、炎癥、慢性阻塞性肺疾病、缺血再灌注損傷、腦血管意外、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胸膜炎或潰瘍性結(jié)腸炎；該方法包括給患者施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中由于與瘙癢相關(guān)的行為繼發(fā)產(chǎn)生的疾病是白內(nèi)障、視網(wǎng)膜脫離、炎癥、感染或睡眠障礙。6.在需要其的患者中治療下述疾病的方法變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、支氣管哮喘、食物過敏、全身性肥大細(xì)胞病、伴有全身性肥大細(xì)胞激活的紊亂、過敏性休克、支氣管縮窄、支氣管炎、蕁麻疹、濕疹、特應(yīng)性皮炎、蕁麻療、炎癥、慢性阻塞性肺疾病、缺血再灌注損傷、腦血管意外、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胸膜炎或潰瘍性結(jié)腸炎；該方法包括給患者施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。7.在需要其的患者中治療患有變應(yīng)性疾病的患者的方法，該方法包括給患者施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。8.治療患有支氣管哮喘的患者的方法，該方法包括給其施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。9.治療患有變應(yīng)性鼻炎的患者的方法，該方法包括給其施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。10.治療患有變應(yīng)性皮炎的患者的方法，該方法包括給其施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。11.治療患有變應(yīng)性結(jié)膜炎的患者的方法，該方法包括給其施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。12.治療患有慢性阻塞性肺疾病的患者的方法，該方法包括給其施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。13.藥物組合物，包含與可藥用載體混合的藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物和選自抗組胺藥、白三烯拮抗劑、p激動(dòng)劑、PDE4抑制劑、TP拮抗劑和CrTh2拮抗劑的化合物。14.根據(jù)權(quán)利要求13的藥物組合物，其中的抗組胺藥有非索非那定、地氯雷他定、氯雷他定或西替利溱；白三烯拮抗劑有孟魯司特或扎魯司特；P激動(dòng)劑有阿布叔醇、沙丁胺醇或特布他林；PDE4抑制劑有羅氟司特或西洛司特；TP拮抗劑有雷馬曲班；CrTh2拮抗劑有雷馬曲班。全文摘要本發(fā)明涉及式(III)的2-(3-{6-[2-(2，4-二氯苯基)乙基氨基]-2-甲氧基嘧啶-4-基}苯基)-2-甲基丙酸的磷酸二氫鹽、包含藥物有效量的式(III)化合物和可藥用載體的藥物組合物以及通過給患者施用藥物有效量的式(III)化合物來治療患有由PGD2介導(dǎo)的紊亂的患者的方法，所述紊亂包括但不限于變應(yīng)性疾病(如變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、支氣管哮喘和食物過敏)、全身性肥大細(xì)胞病、伴有全身性肥大細(xì)胞激活的紊亂、過敏性休克、支氣管縮窄、支氣管炎、蕁麻疹、濕疹、伴有瘙癢的疾病(如特應(yīng)性皮炎和蕁麻疹)、由于與瘙癢相關(guān)的行為(例如搔抓和打)繼發(fā)產(chǎn)生的疾病(如白內(nèi)障、視網(wǎng)膜脫離、炎癥、感染和睡眠障礙)、炎癥、慢性阻塞性肺疾病、缺血再灌注損傷、腦血管意外、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胸膜炎、潰瘍性結(jié)腸炎等。文檔編號(hào)C07D239/47GK101287714SQ200680037886公開日2008年10月15日申請(qǐng)日期2006年10月12日優(yōu)先權(quán)日2005年10月13日發(fā)明者B·朗之萬,D·謝勒,E·奧頓申請(qǐng)人:安萬特藥物公司