專利名稱：：作為p38激酶抑制劑的吡唑異喹啉脲衍生物的制作方法作為P38激酶抑制劑的吡唑異會啉脲衍生物
背景技術：
：p38激酶是屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶超家族的有絲分裂原活化的蛋白(MAP)激酶。這種激酶被細胞外應激如熱、UV光和滲透應激以及炎性刺激如脂多糖所活化。當被活化時，p38激酶磷酸化調節(jié)促炎細胞因子腫瘤壞死因子a(TNFa)和白介素-ip(IL-ll3)生物合成的細胞內蛋白底物。這些細胞因子參與眾多慢性炎性障礙(Lee等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.,696，149-170(1993);Muller畫Ladner，Curr.Opin,Rheumatol.,8，210-220(1996》、心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙(Salituro等人，CurrentMedicinalChemistry,6，807-823(1999))以及自身免疫障礙(Pargellis等人，NatureStructuralBiology,9(4),268-272(2002、)的病理學。此外，有絲分裂原活化的蛋白激酶-蛋白激酶2(或pMAPKAPK2)的磷酸化形式也是p38MAPK途徑中的激酶并且可以凈皮p38MAPK直接活化。MAPKAPK2的小鼠剔除研究表現(xiàn)出細胞因子產(chǎn)生減少，表明MAPKAPK2可能是炎性響應的關鍵調節(jié)劑并且也可能是抗炎治療的潛在靶標(WO2005120509)。眾多脲化合物(例如WO9923091、WO01012188、WO04004720、WO04037789、WO99/32111、US2004/0058961、EP1609789、WO03072569和WO0043384)已經(jīng)被鑒定為p38激酶抑制劑或細胞因子抑制劑。P38激酶抑制劑或細胞因子抑制劑可能制備成本高，并且可能具有限制其體內作用和治療應用的生物利用度和吸收問題。因此，需要新的小分子細胞因子抑制藥，即能夠抑制p38激酶并具有改善的效力和更高的生物利用度的化合物。本發(fā)明提供可用于治療由過量細胞因子產(chǎn)生導致的病癥的新p38激酶抑制劑。發(fā)明概述本發(fā)明提供式I化合物或其可藥用的鹽:其中:X選自yr和Ri是C,-C4烷基、任選被一個或兩個選自C廣C4烷氧基、曱基和三氟曱基的取代基取代的C3-C4環(huán)烷基；或CVC4卣代烷基；R2是任選被CrC4烷基取代的苯基或任選被d-Ct烷基取代的吡咬基；R'是氨基、d-C4烷基、d-C4烷氧基、Q-C4卣代烷基、任選被選自曱基、三氟曱基或卣素的取代基取代的CVC4環(huán)烷基；苯基和噻吩基，其各自任選被選自卣素、d-C4烷基和C,-C4烷氧基的第一取代基取代，且任選被選自卣素的第二取代基進一步取代。本發(fā)明還提供抑制哺乳動物p38激酶的方法，其包括給需要該類治療的哺乳動物施用有效量的式I化合物或其可藥用的鹽。本發(fā)明還提供抑制哺乳動物腫瘤壞死因子a(TNFa)產(chǎn)生的方法，其包括給需要該類治療的哺乳動物施用有效量的式I化合物或其可藥用的鹽。本發(fā)明還提供抑制哺乳動物白介素-ip(IL-l|3)產(chǎn)生的方法，其包括給需要該類治療的哺乳動物施用有效量的式I化合物或其可藥用的鹽。本發(fā)明進一步提供治療哺乳動物由過量細胞因子產(chǎn)生導致病癥的方法，其包括給需要該類治療的哺乳動物施用細胞因子抑制量的式I化合物或其可藥用的鹽。本發(fā)明還提供抑制哺乳動物易感腫瘤(neoplasm)生長的方法，其包括給需要該類治療的哺乳動物施用p38抑制量的式I化合物或其可藥用的鹽。本發(fā)明還提供在哺乳動物中抑制轉移的方法，其包括給需要該類治療的哺乳動物施用p38抑制量的式I化合物或其可藥用的鹽。本發(fā)明還提供治療哺乳動物類風濕性關節(jié)炎的方法，其包括給需要該類治療的哺乳動物施用p38抑制量的式I化合物或其可藥用的鹽。本發(fā)明還提供藥物制劑，其包含式I化合物或其可藥用的鹽和可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑。本發(fā)明還提供式I化合物或其可藥用鹽在制備用于抑制p38激酶的藥物中的用途。此外，本發(fā)明還提供用于抑制哺乳動物p38激酶的式I化合物或其可藥用的。此外，本發(fā)明還提供適用于抑制p38激酶的藥物組合物，其包含式I化合物或其可藥用鹽和一種或多種可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑。本發(fā)明還提供式I化合物或其可藥用鹽在制備用于抑制腫瘤壞死因子a(TNFa)產(chǎn)生的藥物中的用途。此外，本發(fā)明提供用于抑制哺乳動物腫瘤壞死因子a(TNFa)產(chǎn)生的式I化合物或其可藥用的鹽。此外，本發(fā)明提供適用于抑制腫瘤壞死因子a(TNFa)產(chǎn)生的藥物組合物，其包含式I化合物或其可藥用鹽和一種或多種可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑。本發(fā)明還提供式I化合物或其可藥用鹽在制備用于抑制白介素-l卩(IL-ip)產(chǎn)生的藥物中的用途。此外，本發(fā)明提供用于抑制哺乳動物白介素-lj3(IL-ip)產(chǎn)生的式I化合物或其可藥用的鹽。此外，本發(fā)明提供適于抑制白介素-1P(IL-1|3)產(chǎn)生的藥物組合物，其包含式I化合物或其可藥用鹽和一種或多種可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑。本發(fā)明還提供式I化合物或其可藥用鹽在制備用于治療由過量細胞因子產(chǎn)生導致的病癥的藥物中的用途。此外，本發(fā)明提供用于治療哺乳動物由過量細胞因子產(chǎn)生導致的病癥的式I化合物或其可藥用的鹽。此外，本發(fā)明提供適用于治療由過量細胞因子產(chǎn)生導致的病癥的藥物組合物，其包含式I化合物或其可藥用鹽和一種或多種可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑。本發(fā)明還提供式I化合物或其可藥用鹽在制備用于抑制易感腫瘤生長的藥物中的用途。此外，本發(fā)明提供用于抑制哺乳動物易感肺瘤生長的式I化合物或其可藥用的鹽。此外，本發(fā)明提供適用于抑制易感腫瘤生長的藥物組合物，其包含式I化合物或其可藥用鹽和一種或多種可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑。本發(fā)明還提供式I化合物或其可藥用鹽在制備用于抑制轉移的藥物中的用途。此外，本發(fā)明提供用于抑制哺乳動物的轉移的式I化合物或其可藥用的鹽。此外，本發(fā)明提供適用于抑制轉移的藥物組合物，其包含式I化合物或其可藥用鹽和一種或多種可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑。本發(fā)明還提供式I化合物或其可藥用鹽在制備用于治療類風濕性關節(jié)炎的藥物中的用途。此外，本發(fā)明提供用于治療哺乳動物類風濕性關節(jié)炎的式I化合物或其可藥用的鹽。此外，本發(fā)明提供適用于治療類風濕性關節(jié)炎的藥物組合物，其包含式I化合物或其可藥用鹽和一種或多種可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑。發(fā)明詳述術語"p38激酶"是指p38ot和/或p38I3激酶同工型。術語"抑制TNFa(IL-l|3、細胞因子)產(chǎn)生"是指將哺乳動物中過量的TNFa、IL-ip或另外的細胞因子的體內水平降低至正?；蛘Ｒ韵滤健＿@可以如下實現(xiàn)抑制體內所有細胞釋放TNFa、IL-1|3或另外的細胞因子，包括巨噬細胞；通過在基因組水平將哺乳動物中過量的TNFa、IL-lj3或另外的細胞因子的體內水平下調至正?；蛘Ｒ韵滤?；抑制作為翻譯后事件的TNFa、IL-ip或另外的細胞因子的合成；或者在翻譯水平下調TNFa、IL-lj3或另外的細胞因子。本領域技術人員應當理解本發(fā)明化合物能形成酸加成鹽。在所有情況中，在化合物命名中包括所有化合物的可藥用的鹽。本發(fā)明的化合物是胺類化合物，因此可以與多種無機酸和有機酸中的任一種反應，形成可藥用的酸加成鹽。這里所用的術語"可藥用的鹽"指的是對活體基本無毒的式I化合物的鹽。典型的可藥用鹽包括那些通過使本發(fā)明化合物與可藥用的有機酸或無機酸反應制得的鹽。該類鹽包括JournalofPharmaceuticalScience,66，2-19(1977)中所列的可藥用鹽，其對于本領域4支術人員而言是已知的。最優(yōu)選式I化合物的曱磺酸鹽。式I化合物是p38激酶的抑制劑。因此，本發(fā)明還提供抑制哺乳動物p38激酶的方法，其包括給需要該類治療的哺乳動物施用p38激酶抑制量的式I化合物。優(yōu)選施用式I化合物所治療的哺乳動物是人。作為p38激酶的抑制劑，本發(fā)明的化合物可用于抑制促炎細胞因子肺瘤壞死因子a(TNFa)和白介素-l(3(IL-lP)的產(chǎn)生，因此可用于治療由過量細胞因子產(chǎn)生導致的障礙。因此，認為本發(fā)明的化合物可用于治療炎性障礙，包括濕滲、特應性皮炎、類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、炎性腸病和中毒性休克綜合征。還認為本發(fā)明的化合物可用于治療心血管障礙，如急性心肌梗死、慢性心衰、動脈粥樣硬化、病毒性心肌炎、心臟同種異體移植物排斥和與膿毒癥有關的心臟機能障礙。此外，還認為本發(fā)明的化合物可用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙，如腦膜炎球菌性腦膜炎、阿耳茨海默病、帕金森病和多發(fā)性硬化。WO99/32111、WO9923091、WO04004720、WO03072569。大部分實體腫瘤通過惡性細胞和基質細胞、包括內皮細胞的增殖而增加質量。腫瘤為了在直徑上長大2-3毫米，其必需形成脈管系統(tǒng)，這是一種被稱為血管生成的過程。已經(jīng)報道了通過用制管張素(angiostatin)和內皮他汀(endostatin)抑制腫瘤誘導的血管生成而產(chǎn)生抗腫瘤活性(O，Reilly等人，Cell,88,277-285(1997))。選擇性p38激酶抑制劑SB22025已經(jīng)顯示抑制血管生成(J.R.Jackson等人，J.Pharmacol.Exp.Therapeutics,284，687(1998))。因為血管生成是大部分實體腫瘤質量擴張的關鍵組件，因此研制抑制這一過程的新p38激酶抑制劑代表了一種有前景的抗腫瘤療法。這種抗腫瘤療法可能缺乏常規(guī)化療的毒副作用或藥物耐受性誘導特性(JudahFolkman，血管生成的內源性抑制劑，TheHarveyLectures,Series92，第65-82頁，Wiley國LissInc.，(1998))。因此，作為p38激酶的抑制劑，本發(fā)明的化合物還可以用來抑制易感腫瘤的生長。Schultz,R.M.p38MAP激酶抑制劑在癌癥治療中的潛能.In:E.Jucker編輯，ProgressinDrugResearch,60，59-92，(2003)。易感腫瘤被定義為其存活、生長或轉移依賴于p38激酶的腫瘤。易感腫瘤包括腦、泌尿生殖道、淋巴系統(tǒng)、胃、喉和肺的肺瘤(US專利號5，717，100)。優(yōu)選地，本申請中所用的術語"易感腫瘤"包括人類癌癥，包括非小細胞肺癌(A.Greenberg等人，Am.J.Resi)ir.CellMol.Biol"26，558(2002))、乳腺癌(J.Chen等人，J.Biol.Chem.,276，47卯1(2001);B.Salh等人，Int.J.Cancer,98,148(2002);和S.Xiong等人，CancerRes.,61,1727(2001、)、胃癌(Y.D.Jung等人，Proc.Am.Assoc.CancerRes.,43，9(2002))、結腸直腸癌(S.Xiong等人，CancerRes.,61，1727(2001))和惡性黑素瘤(C.Denkert等人，Clin.Exp.Metastasis,19，79(2002))。通過抑制TNFa來抑制血管生成也已被教導可用于抑制或預防轉移(US專利號6，414，150;US專利號6,335,336)。此外，還表明抑制TNFa可用于治療和預防惡病質，一種約半數(shù)癌癥患者所經(jīng)歷的消耗綜合征(T.Yoneda等人，J.Clin.Invest.,87，977(1991))。此外，抑制p38激酶可有效治療某些病毒性病癥，如流感(K.Kujime，等人，J.Immunology.,164,3222-3228(2000、、、鼻病毒(S.Griego等人，丄Immunology,165，5211-5220(2000))和HIV(L.Shapiro等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95,7422-7426(1998))。這里所用的術語"d-C4烷基"指的是1至4個碳原子的直鏈或支鏈單價飽和脂族鏈，并且包括但不限于曱基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基和我-丁基。這里所用的術語"CVC4烷氧基"指的是具有1至4個碳原子、連接于氧原子的直鏈或支鏈烷基鏈。典型的CVC4烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、叔-丁氧基等。術語"d-C4烷氧基，，在其定義內包括術語"C,-C3烷氧基"。除非特別指出，否則這里所用的術語"囟素"指的是氯、溴、碘或氟原子。這里所用的術語"d-C4卣代烷基"指的是被至多5個卣素原子取代的d-C4烷基。典型的d-C4卣代烷基包括卣代甲基、三氟甲基、卣代乙基、二氟曱基乙基、卣代丙基、卣代異丙基、卣代丁基、卣代叔-丁基等。術語"d-C4卣代烷基"在其定義內包括術語"d-C3卣代烷基"。這里所用的術語"c3-c4環(huán)烷基"是指包含碳和氫原子的非芳族環(huán)，并且包括環(huán)丙基和環(huán)丁基。這里所用的術語"l-曱基-l-環(huán)丙基"指的是以下殘基某些類式I化合物是優(yōu)選的p38激酶抑制劑。以下段落描述這類優(yōu)選類別b)R'是任選被選自曱基、三氟曱基或卣素的取代基取代的CVC4環(huán)烷基；c)W是l-曱基-l-環(huán)丙基；d)R1是2-氟-1,1-二甲基-乙基；e)R1是2-氟-l-氟甲基-l-曱基-乙基；f)R2是任選被曱基取代的苯基或任選被甲基取代的吡咬基；g)R2是4-甲苯基；h)Rs是任選被d-C4烷基取代的CVC4環(huán)烷基；或任選被甲基取代的瘞吩基；或任選被選自卣素、d-C4烷基或d-C4烷氧基的第一取代基取代、任選進一步被囟素取代基取代的苯基；i)式I化合物是游離堿；j)式I化合物是鹽；k)式I化合物是甲磺酸鹽。本發(fā)明優(yōu)選的實施方案包括第a)-k)段的所有組合。其它優(yōu)選的式I化合物是那些化合物，其中x是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>R1如c)段所述；且R2如g)段所述,還優(yōu)選X是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>W如c)段所述；且RZ如g)段所述；且RS如h)段所述。特別優(yōu)選X是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>W是在4-位被C廠C4烷基取代的苯基。最優(yōu)選X是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>還最尤其優(yōu)選以下化合物1-{1-[1-(1-曱基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基卜異壹啉-4-基}-3-[5-(1-甲基-環(huán)丙基)-2-對甲苯基-2H-吡唑-3-基I-脲本發(fā)明的化合物可以通過各種方法制備，其中的一些在以下流程中闡釋。本領域技術人員應當意識到，為了提供式I化合物，以下流程中的各步驟可以變化。制備式I化合物所需步驟的特定順序取決于所合成的特定化合物、起始化合物和被取代部分的相對不穩(wěn)定性。為了清楚，以下流程中剔除了一些取代基，其并不是要以任何方式限制該流程的教導。式I化合物及其中間體可以如以下流程圖中所述制備，其中R1、R2和X如前所定義a式I使胺(a)與適合的異氰酸酯或氨基甲酸酯如氨基曱酸吡唑基-2，2，2-三氯乙基酯反應，得到式I化合物。例如，將胺(l當量)、氨基曱酸三氯乙基酯(1當量)和適合的堿如二異丙基乙基胺(2當量)或碳酸鉀在適合的溶劑如乙腈或二甲基亞砜(DMSO)中的溶液加熱。然后，分離所需化合物，并且如果需要和希望的話，用現(xiàn)有技術中眾所周知的技術如色譜法純化，得到式1化合物。必需的胺如下流程2所述制備，其中X如前定義流程2將硝基部分(b)在標準還原條件下、例如用氫在鈀催化劑存在下、在適合的溶劑如低級鏈烷醇或乙酸乙酯中還原，得到相應的胺(a)。該類還原步驟在現(xiàn)有技術中是眾所周知和可領會的。見Larock，R.，ComPrehensiveOrganicTransformations,412,VCH出版^^司，紐約，1989。必需的硝基化合物如下流程3中所述制備，其中RS如前所定義，且X，是C(0)R"或適合的保護基團PG:流程3b(ii)使l-氯-4-硝基-異喹啉(e)在適合的有機溶劑如THF中與N-保護的(PG)羥基哌啶和氫化鈉反應，得到相應的取代的哌啶b(i)。如果需要或希望的話，可以利用適合的氨基保護基團"Pg，，，如叔-丁氧基羰基(BOC)部分。引入這些基團的技術對于本領域技術人員而言是眾所周知的。本領域技術人員將意識到可以在本發(fā)明化合物合成中任何方便的階段除去氮-保護基團。除去氨基-保護基團的方法在現(xiàn)有技術中是眾所周知的(例如參見T.W.Greene,ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,JohnWiley和Sons,紐約，N.Y.，1999)。作為替代選擇，使l-氯-4-硝基-異喹啉(e)與N-BOC保護的旅，秦和碳酸鉀在極性溶劑如乙腈中反應，得到相應的取代的哌溱b(ii)。所需的氨基甲酸吡唑基酯可如以下流程所示制備，其中！^和RZ如前所定義流程4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>3-氨基吡唑(m)通過現(xiàn)有技術中眾所周知的條件形成；Larock，R.，"ComprehensiveOrganicTransformations,"79，VCH出版7>司，紐約，1989。例如，使oc-氰基酮(j)和適合的肼或肼鹽(k)在適合的有機溶劑如乙醇中在升高的溫度反應，并且可以用標準技術如珪膠柱色譜純化。使氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(n)與適合取代的3-氨基吡唑(m)和堿、例如碳酸鈉在適合的溶劑、例如THF中反應，得到相應的氨基曱酸2，2，2-三氯乙基酯(o)。本領域技術人員將意識到相應的氨基曱酸酯可以通過使3-氨基吡唑與其它活性碳酸酯反應來制備。式l(i)化合物可以如以下流程5所示制備，其中R1、R2、W和PG如前所定義流程5脫保護(f)(g)式I(o在現(xiàn)有技術中眾所周知的條件下將式(f)化合物脫保護。例如，當保護基團是叔-丁氧基羰基時，將式(f)化合物溶解于適合的有機溶劑或溶劑混合物如二氯甲烷中，用酸如含鹽酸的二惡烷或三氟乙酸處理。將N-保護的-哌啶取代的脲(f)脫保護，得到取代的哌啶(g)，使其與取代的羧酸在有機酸和有機胺的標準偶聯(lián)條件下、在偶聯(lián)劑如N-(3-二曱基氨基丙基)-N，-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)、催化量4-二曱基氨基吡啶(DMAP)和1-羥基苯并三唑(HOBt)存在下反應，得到式I(i)。本領域技術人員將意識到式I(i)的實例可以通過用其它^皮保護的哌咬(包括不同的N-保護基團，如甲酰基)開始來制備，其可能需要其它脫保護操作來形成中間體(g)。本領域技術人員還將意識到不是式I化合物中所有取代基都能耐受合成該化合物所用的某些反應條件?？梢栽诤铣芍蟹奖愕碾A段引入這些部分，或者如果需要或希望的話，可以對這些部分進行保護，然后脫保護。本領域技術人員將意識到可以在本發(fā)明化合物合成中任何方便的階段除去保護基團。引入和除去氮和氧保護基團的方法在現(xiàn)有技術中是眾所周知的；參見例如Greene和Wuts，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,JohnWiley和Sons,紐約(1999)。此外，本領域技術人員還將意識到，在許多情況下，這些部分被引入的順序并不關鍵。制備式I化合物所需步驟的特定順序取決于所合成的特定化合物、起始化合物以及被取代部分的相對不穩(wěn)定性。在實施例和試驗中所用的縮寫、符號和術語具有以下含義。AcOH-乙酸，DCC^二環(huán)己基碳二亞胺，DIEA-N，N-二-異丙基乙基胺，DMSO-二甲基亞砜，DMF-N，N-二曱基甲酰胺，h-小時，HOB瀘l-幾基苯并三唑，LDA:二異丙基氨化鋰，EDCI4-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，EtOAc-乙酸乙酯，EtOH-乙醇，MeOH-甲醇，NaBH(OAc)f三乙酰氧基硼氫化鈉，TBAF-氟化四丁基銨，Tf2CN三氟甲磺酸酐，THF二四氫吹喃。向l-三氟甲基環(huán)丙烷-l-曱酸(3.65g，23.7mmo1)在甲醇-己烷(2.5mL-22.5mL)中的溶液加入2M重氮曱烷的己烷溶液(14.2mL，28.45mmo1)。在減壓下除去溶劑，對殘余物進行蒸餾，得到黃色油狀物(2.93g，收率為73%)。將2MLDA在THF中的溶液(29.1mL，58.3mmol)加入到干冰-丙酮冷卻的l-甲氧基-環(huán)丙烷曱酸曱酯(WO2005/014577)(3.45g,26.5mmol)和乙腈(2.17gmL，53.0mmol)在THF(30mL)中的溶液中。將該反應混合物在-78。C攪拌1小時，然后在22。C攪拌0.5小時。蒸發(fā)溶劑，得到褐色固體。過濾，用己烷洗滌。加入2N鹽酸，用乙醚萃取3次(每次50mL)。用硫酸鈉千燥合并的有機相。除去溶劑，得到紅色油狀物(3.55g，收率為96%，ES+(//t/z)制備l-三氟曱基-環(huán)丙烷曱酸曱酉i制備23-(1-曱氧基-環(huán)丙基)-3-氧代-丙腈140.1[M+H)。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。制備化合物制備34，4，5，5，5-五氟-3-氧代-戊腈制備43-氧代-3-(1-三氟曱基-環(huán)丙基)-丙腈制備53-羥基-2-羥基曱基-2-甲基-丙酸曱酯HO將H2S04(4.5g)加入到3-羥基-2-羥基曱基-2-甲基-丙酸(100g)在MeOH(lL,HPLC級溶劑)中的混懸液中，在室溫攪拌約70小時。除去溶劑，使殘余物在EtOAc(lL)和H2O(100mL)之間分配。將水層用EtOAc再提取，用MgS04干燥合并的有機級分。過濾，在減壓下濃縮。粗混合物可以未經(jīng)進一步純化即使用。'HNMR(CDC13，300MHz):5ppm3.9(d，2H，J=ll.lHz)，3.76(s，3H)，3'71(d，2H，J=ll.lHz)，2.8(bs，2H)，l.l(s，3H)。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。制備化合物制備63，3-二-羥基甲基-戊酸乙酯制備73-羥基-2,2-二甲基-丙酸芐酯將氫氧化鉀(486.7mmo1，32.1g)加入到2,3-二羥基-2-曱基-丙酸(423.2mmo1，50g)在300mLDMF中的溶液中。在IOO'C攪拌1小時。然后，加入千基溴(584.04mmo1，69.46mL)并攪拌過夜。冷卻該混合物，用乙酸乙酯稀釋。用水洗滌有機層。用乙酸乙酯洗滌水層若干次。合并有機層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。，HNMR(CDC13，300MHz):5ppm:7.36-7.32(m，5H)，5.1(s，2H)，3.5(s，2H)，1.21(s,6H)。制備8-五氟乙基-2-對-曱苯基-2仏吡唑-3基胺將4，4，5，5，5-五氟-3-氧代-戊腈(4g，21.4mmol)和對-曱苯基-肼(10g，64.1mmol)在乙醇(20mL)中的混合物在密封管裝置中加熱至95。C達15小時。冷卻至室溫后，在減壓下除去溶劑，得到褐色殘余物。對殘余物進行硅膠色譜，用乙酸乙酯和己烷洗脫，得到標題化合物(3.24g，收率為52%，ES+(一292.1[M+H)。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。制備化合物數(shù)據(jù)MS(ES+):制備92-對-甲苯基-5-(l-三氟甲基-環(huán)丙基)-2//-吡唑-3-基胺282.M+H制備105-(1-氟曱基-環(huán)丙基)-2-對-曱苯基-2//-吡唑-3-基胺將AgF(4.5eq,4.56g)加入到l-氟-環(huán)丁烷甲酸乙酯(1.6g，8mmol)在含22mL乙腈的274mL水中的溶液中。將該混合物在80。C于密封管中在強烈攪拌下加熱20小時。使該混合物冷卻，用硅藻土過濾。在減壓下除去溶劑，得到油狀物形式的l-氟甲基-環(huán)丙烷甲酸乙酯化合物(0.81g,收率為610/。)。ES+一)147.1[M+l。將i-Pr2NH(1.7mL,2.2q,12.1mmol)和n-BuLi(1.6M己烷溶液，7.5mL，2.2eq，12.1mmol)在12mLTHF中、在-78。C、1\2下攪拌30分鐘，然后向該LDA溶液中加入l-氟甲基-環(huán)丙烷曱酸乙酯(0.81g,5.5mmol)在7mLTHF中的溶液。攪拌，使該混合物從-78。C溫至室溫，然后在室溫攪拌5小時。加入10mL飽和NH4C1水溶液。加入AcOEt，分離有機層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用Na2S04干燥并除去溶劑，得到褐色油狀物(0.42g，收率為54°/。)。將該化合物溶解于10mLEtOH，加入對-甲苯基肼(0.47g，l叫，3mmo1)。將該混合物在密封管中在卯。C加熱過夜。然后，使該混合物冷卻，除去溶劑，得到殘余物。用色鐠法純化(己烷/AcOEt，15-80%)，得到油狀物形式的標題化合物((U36g,收率為45%)。ES+(m/z):246.1[M+l。制備115-(1-曱氧基-環(huán)丙基)-2-對-曱苯基-2//-吡唑-3-基胺N(乂將3-(l-曱氧基-環(huán)丙基)-3-氧代-丙腈(制備2,3.55g，25.5mmol)和對-甲苯基肼鹽酸鹽(12.15g，76.5mmol)在乙醇(50mL)中的混合物在90°C于密封管中加熱18小時。除去溶劑后，對殘余物進行硅膠色鐠，用0-5%曱醇的二氯曱烷溶液洗脫，得到黃色固體形式的標題化合物(3.29g,收率為53%，ES+一)244.2[M+HD。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>向冰-鹽冷卻的5-(1-甲氧基-環(huán)丙基)-2-對-甲苯基-2好-吡唑-3-基胺(勉備ll，2.43g,10mmol)和吡咬(0.9mL，llmmol)在THF(30mL)中的溶液中滴加氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(2.12g，lOmmol)在THF(lOmL)中的溶液。在-15°C攪拌0.5小時，然后在22°C攪拌1小時。使該反應混合物在二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)之間分配。分離水相，用二氯甲烷萃取兩次(每次25mL)。用硫酸鈉干燥合并的有機相，濃縮。對殘余物進行硅膠色譜，用己烷和乙酸乙酯洗脫，得到白色固體(3.73g，收率為89%,ES+一)418.1[M+HI)。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>l-(5-叔-丁基-2-對-甲苯基-2好-吡唑-3-基)-氨基曱酸2,2，2-三氯-乙基酯向5-叔-丁基-2-對-甲苯基-2iy-吡唑-3-基胺(Regan等人，J.Med.Chem.2002，45，2994-3008，400g，1.74mol)在THF(8L)中的溶液中加入飽和碳酸鈉溶液(2.4L)，將混合物冷卻至0。C。然后，滴加氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(406.77g，1.92mol)，在0。C攪拌2小時。用乙酸乙酯萃取反應混合物(3x6.5L),用無水硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。將固體溶解于最少量乙酸乙酯中，加入過量己烷，以使固體沉淀。過濾收集固體，干燥，得到米色固體形式的標題化合物(586g，收率為83%)。(ES+):"i/z406.1(M+H)。『5畫(1-曱基-環(huán)丙基)-2-對-曱苯基-2樂吡唑-3-基l-M曱酸2,2，2-三氯畫乙基酯在室溫將乙腈(87mL，1.6moI)加入到氫化鈉(66g，1.6mol)在THF(700mL)中的混懸液中，攪拌10分鐘。然后，加入1-甲基-環(huán)丙烷曱酸曱酯(90.0g，0.78mol)，將該白色漿液回流3小時。冷卻混合物，然后加入甲醇(200mL),將該混合物傾至水(500mL)上。分離各相，用l.ONHC1將水相pH降至pH3-4。用乙醚萃取7JC相(2x350mL)，合并有機層，用氯化鈉水溶液洗滌。用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到黃色油狀物形式的3-(l-曱基-環(huán)丙基)-3-氧代-丙腈。&NMR(CDC13):3.59(s，2H),1.37(s，3H)，1.30(q,/=4Hz，2H)，0.86(q，/=4Hz，2H)。作為替代選擇，向配有高架攪拌器、熱電偶、回流冷凝器和加料漏斗的5L三頸圓頂燒瓶中加入含叔-丁醇鉀的THF(3.00L，3.00摩爾)?；旌?-甲基-環(huán)丙烷甲酸乙酯(264.00g，2.06摩爾)與乙腈(123.008，3.00摩爾)，然后歷經(jīng)0.5小時通過加料漏斗加入到丁醇化物溶液中。加熱所得混合物至回流?；亓?小時，然后通過加入曱醇(96.00g,3.00mL)冷卻至〈40。C。攪拌混合物10分鐘，然后將該內含物轉移到12L分液漏斗中，該分液漏斗含有劇烈攪拌著的水(3.96L，219.81摩爾)和MTBE(3.96L，33.32摩爾)的混制備18合物。分離各層，用MTBE(3.96L，33.32摩爾)萃取水層。用5NHCl(610.00mL,3.05摩爾)將水層pH由12.5調至3.5。用MTBE萃取水層(2x1.32L,11.11)。合并有機層，用硫酸鈉干燥(62.00g,436.49摩爾)，過濾，得到3-(l-甲基-環(huán)丙基)-3-氧代-丙腈。將3-(l-曱基-環(huán)丙基)-3-氧代-丙腈(60g,487.2mmol)和對-曱苯基-肼鹽酸鹽(78g，478.2mmol)在乙醇(975mL)中的溶液加熱至回流達4小時。蒸發(fā)溶劑，將剩余的固體溶解于水中。用1.0N氫氧化鈉溶液將該溶液的pH升至8。過濾沉淀，得到白色固體形式的5-(1-曱基-環(huán)丙基)-2-對-甲苯基-2好-吡唑-3畫基胺。力NMR(DMSO):7.39(d，/=8Hz，2H)，7.22(d，/=8Hz，2H)，5.12(s，2H)，2.31(s，3H)，1.30(s，3H)，0.80(q,/=4Hz，2H)，0.61(q，/=4Hz，2H)。在0。C，將氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(3.0mL,23mmol)滴加到5-(l-甲基-環(huán)丙基)-2-對-甲苯基-2^-吡唑-3-基胺(4.75g，21mmol)在四氬呋喃(105mL)和飽和碳酸鈉水溶液(32mL)中的溶液中。在該溫度攪拌2小時。將該混合物傾至水中，分離各相。用乙酸乙酯萃取水層。后處理A:合并有機層，用氯化鈉水溶液洗涂，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到黃色固體。將該固體溶解于最少量乙酸乙酯中，并在攪拌下加入己烷，直至混濁。使標題化合物結晶，過濾，得到白色固體。'HNMR(DMSO):9.89(brs，1H)，7.31(d，/=8Hz,2H)，7.23(d，/=8Hz，2H),6.12(s，1H),4.82(s，2H)，2.31(s，3H)，1.37(s，3H)，0.89(q，/=4Hz，2H)，0.71(q，/=4Hz，2H)。后處理B:將乙酸乙酯溶劑換成異丙醇(91.56摩爾)。將該漿液在O'C攪拌2小時，過濾，用冷異丙醇(13.08摩爾)洗滌，在40。C、減壓下干燥過夜，得到白色結晶固體形式的標題化合物。制備195-(2-氟-l-氟甲基-l-曱基-乙基)-2-對-甲苯基-2J7-吡唑-3-基卜氨基曱酸2,2，2-三氯-乙基酯將Tf2O(80mL)滴加到3-雍基-2-羥基甲基-2-甲基-丙酸曱酯(制備5,32.5g)在二氯曱烷(400mL)和2，6-二曱基吡啶(80mL)中的冷溶液(-78。C)中。使該反應物達到室溫，攪拌約2小時。用二氯曱烷(400mL)稀釋，用HC1(3%水溶液)洗涂。用MgS04千燥有機層，過濾，濃縮。對殘余物進行硅膠色鐠，用己烷/乙酸乙酯5%洗脫，得到無色油狀物形式的2-甲基-2，3-二-三氟甲磺酰氧基畫丙酸甲酯。！HNMR(CDC13，300MHz):5ppm4.7(d，2H，J=10.3Hz)，4.5(d，2H，J=10.3Hz)，3.8(s，3H)，l'4(s，3H)。將TBAF1M(132mmo1，132mL)加入到冷卻至0'C的2-甲基-2，3-二-三氟甲磺酰氧基-丙酸甲酯(65.9mmo1，26.3g)在500mL無水THF中的溶液上。攪拌過夜。減壓濃縮，加入二氯曱烷。用飽和氯化鈉水溶液洗滌有機層。合并有機層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到3-氟-2-氟曱基-2-甲基畫丙酸曱酯。力NMR(CDC13，300MHz):5ppm:4.7-4.4(m，4H)，3.5(s，3H),0.98(t，3H，J=1.7Hz)。將LDA2.0M(62.0mmo1，31mL)、然后將無水乙腈(56.4mmo1，2.9mL)加入到冷卻至-78。C的3-氟-2-氟甲基-2-甲基-丙酸曱酯(28.2mmo1，4.3g)在lOOmL無水THF中的溶液中。在-78。C攪拌2小時，使該溶液溫至室溫過夜。減壓濃縮，加入二氯甲烷。用飽和氯化鈉水溶液和10。/。HC1水溶液洗滌有機層。合并有機層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到殘余物。將對-甲苯基肼鹽酸鹽(15.5mmo1，2.5g)和以上獲得的殘余物(15.5mmol，2.5g)在31mL乙醇中于90。C攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶解于水中。加入10%氫氧化鈉溶液，用乙酸乙酯萃取。合并有機層，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到5-(2-氟-l-氟曱基-l-甲基-乙基)-2-對-甲苯基-2i7-吡唑-3-基胺。對殘余物進行硅膠色語，用己烷/乙酸乙酯(從150/0至50%)作為洗脫劑洗脫。LCMSES+(/m/z)266[M+H)。將氯甲酸2，2,2-三氯乙基酯(8.1mmo1，1.1mL)和碳酸鈉水溶液(4.8mL)加入到5-(2-氟-l-氟甲基-l-甲基-乙基)-2-對-曱苯基-2好-吡唑-3-基胺(7.3mmo1，1.9g)在37mLTHF中的溶液上。攪拌24小時。將該溶液傾至水上，用乙酸乙酯萃取。合并有機層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌。用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到5-(2-氟-l-氟甲基-l-甲基-乙基)-2-對-甲苯基-27/-吡唑-3-基1-氨基曱酸2，2,2-三氯-乙基酯。LCMSES+(m々)440[M+H。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。制備化合物數(shù)據(jù)MS(ES+):一制備20[5-(1，l-二-氟甲基-丙基)-2-《力-甲苯基-2i7-吡唑-3-基卜氨基甲酸2，2，2-三氯-乙基酯454制備21[5-(2-氟-1，1-二曱基-乙基)-2-#-甲苯基-27/-吡唑-3-基-氨基甲酸2，2，2-三氯-乙基酯424制備224-(4-氨基-異會啉-1-基氧基)-哌啶-1-曱酸叔-丁酯用冰/丙酮浴冷卻石充酸(900mL)至5'C，然后歷經(jīng)45分鐘加入1-氨基異喹啉(208.8g,1448mmo1)，保持該混合物的內部溫度〈2(TC。在氮氣下在機械攪拌下冷卻該深色混合物至0。C，然后歷經(jīng)45分鐘分批用KN03(149.4g，1477mmol)處理，4果持該混合物的內部溫度〈10。C。攪拌該混合物2小時，同時溫至15°C。將該混合物傾至水/水(3kg)中，然后用另外的水(6L)稀釋。攪拌該漿液45分鐘，然后過濾。用水洗滌濾餅(6x1.5L)。風干過夜將該金色材料部分干燥，然后置于真空烘箱(50-55。C，約10托，氮氣流，24h)中，得到l-氨基-4-硝基異喹啉H2S04(256.8g，收率為62%)。(ES+):m/z190(M++H)。將l-氨基-4-賄基異會啉H2SO4(120g，418mmol)在HC1水溶液(6N，2L)中的漿液在氮氣、35。C機械攪拌。歷經(jīng)1小時加入NaN02(72.1g，1044mmo1)在水(300mL)中的溶液，同時將該漿液溫至50。C。將該混合物再加熱30分鐘，然后使其冷卻至室溫，攪拌過夜。加熱該混合物至50。C，然后歷經(jīng)30分鐘加入NaN02溶液(36g，于150mL水中)。將該混合物攪拌2小時，然后加熱至60'C,使之歷經(jīng)3小時緩慢冷卻至室溫。過濾所得漿液，用水(3x600mL)洗滌濾餅。部分風干(180g)。在回流下將該濕固體調和到i-PrOH(lL)和EtOH(lL)中，加入THF(350mL)使其完全溶解。向該溶液加入水(400mL)，歷經(jīng)3小時冷卻至10。C。過濾，用EtOH(2x300mL)、然后用乙醚(3x150mL)洗滌。風千過夜，得到淡褐色固體形式的1-羥基-4-硝基異喹啉(62.62g，收率為79%)。(ES+):wi/zl91(M++H)。將l-羥基-4-硝基異奮啉(62.2g，327mmol)在POCl3(180mL)+的漿液在氮氣下機械攪拌并加熱至100-105°C達1小時，得到均勻的深褐色溶液。將冷凝器換成短徑蒸餾頭，在減壓(約10-30托)下除去過量的POCl3，使罐溫為55°C。向該混合物加入l，2-二氯乙烷(150mL)，將該混合物溫至70。C，得到均勻的溶液。冷卻該溶液至15。C,然后歷經(jīng)5分鐘加入i-PrOH(450mL),從而放熱至33°C。在15。C攪拌該漿液3.5小時，然后過濾，用/-PrOH洗滌(3x100mL)。風干所得固體過夜，得到褐色固體形式的1_氯_4-硝基異喹啉(52.08，收率為76%)。(ES+):w/z209/211(M++H)。將NaH(60。/。，于礦物油中，未洗滌；6.23g，156mmol)分批加入到在室溫、氮氣流下攪拌的l-氯-4-硝基異查啉(26.0g，125mmol)和1-我-丁氧基羰基-4-幾基哌啶(27.6g,137mmol)在THF(350mL)中的溶液中。將該深紅色混合物在40。C攪拌1.5小時，然后在55。C攪拌1.5小時。再加入NaH(l,3g)，將所得混合物在55。C攪拌2小時，然后冷卻至室溫過夜。加入己烷(75mL),然后緩慢加入水(600mL)。用HC1水溶液(lN)將該反應混合物的pH調至7,然后分離各層。棄去水層，向有機層中加入己烷(200mL)。在減壓下部分濃縮該混合物至50-100mL的體積。加入乙醚(150mL)和己烷(250mL),然后過濾所得漿液。用乙醚/己烷(l:l)洗滌濾餅，風干，得到褐色固體形式的4-(4-硝基-異會啉-l-基氧基)-哌啶-l-曱酸《又-丁酯(33.84g，收率為73%)。(ES+):/w/z374(M++H)。向4-(4-硝基-異會啉-l-基氧基)-哌咬-l-甲酸叔-丁酯(33.5g，89.7mmo1)在THF(300mL)和乙醇(300mL)中的漿液中加入作為乙醇(25mL)中漿液的10%Pd/C(1.80g，1.69mmol)。將該混合物置于氫氣氛(25-40psi)、室溫的Parr振動器中達8小時。用硅藻土墊過濾該混合物，用乙醇洗滌至濾液無色。減壓濃縮濾液，得到深色油狀物。對殘余物進行硅膠色鐠，用1%、然后用2.5。/。MeOH/二氯甲烷洗滌，得到橙色玻璃狀物形式的標題化合物(30.3g，收率為98%)。(ES+):m/z344(M++H)。制備23『4-(4-氨基-異喹啉-1-基氧基)-哌啶-1-基1-(1-曱基-環(huán)丙基)-曱酮將異查啉(S00.00g，3.75摩爾)和乙酸乙酯(7.601^，71M摩爾)加入到配有高架攪拌器、熱電偶、氮氣入口/出口和加料漏斗的水浴中的22L三頸圓底燒瓶中。攪拌以溶解。在室溫歷經(jīng)0.5小時滴加過乙酸(L25L，5.94摩爾)。在室溫攪拌過夜。將該反應燒瓶在冰-水浴中冷卻，然后歷經(jīng)45分鐘滴加二甲基硫醚(525.00mL，7.14摩爾)淬滅反應。攪拌過夜，同時溫至室溫。檢測該反應混合物的過氧化物。合并兩批反應混合物。將該反應混合物轉移到50L分液漏斗中，加入水(2.00L，111.02摩爾)和二氯曱烷(12.00L，187.21摩爾)。分批加入碳酸鈉(2.071^，19.53摩爾)，然后分離各層。用二氯甲烷(3x4L)萃取水層，合并有機層，用硫酸鈉干燥。過濾，在減壓下除去溶劑，得到深紅色油狀物/液體4且品。向該深紅色油狀物/液體粗品中加入乙酸乙酯(8.00L，81.76摩爾)，然后減壓下攪拌至除去6.8L乙酸乙酯。過濾沉淀出來的固體，用冷乙酸乙酯C750.00mL，7.66摩爾)洗滌，然后用庚烷(S00.00mL，5.46摩爾)洗滌。干燥固體，得到細沙樣固體形式的異喹啉-2-氧化物714.20g(64%)。作為備選的后處理，在用庚烷洗滌前，從濾液中除去1L溶劑。使該濾液靜置過夜。過濾固體，用冷乙酸乙酯(500.00mL,5.11摩爾)、然后用庚垸(500.00mL,3.41摩爾)洗滌。將該固體干燥，得到細沙樣固體形式的異壹啉-2-氧化物110.10g(10。/。)-產(chǎn)物弁2(總收率為74%)。將異奮啉2-氧化物(4.82mol;699.1g)和乙酸酐(73.95mol;6.99L)加入到具有]\2入口、蒸餾頭和熱電偶的22L燒瓶中。將該反應混合物加熱至輕微回流，通過蒸餾除去揮發(fā)性物質。繼續(xù)加熱，收集2小時餾出液(除去總反應體積的約一半)。將該反應混合物冷卻至50'C。滴加甲醇(2L),使反應物溫至70°C。將該反應混合物在室溫攪拌過夜。從溶液中結晶出異喹啉-l-醇,過濾分離，在減壓、5(TC干燥。收率=246.7克(35%)。將異喹啉-1-醇(2.3511101;341.0g)和1705mL1:4的水和乙酸混合物加入到5L燒瓶中。將該反應混合物加熱至60。C。歷經(jīng)3小時滴加硝酸(7.04mol;443.0mL)在1705mL1:4水和乙酸混合物中的溶液。在加入硝酸過程中，維持反應溫度在68-70'C。3小時后，冷卻反應物室溫。向該反應混合物中加入水(5564mL)，然后過濾。用水(1L)洗滌濾餅，在50。C真空下千燥。收率=196.8克(44%)。將l-羥基-4-硝基異壹啉(880,3mmol;167.4克)和POCl3(4.95mol;460mL)加入到具有N2入口、冷凝器和熱電偶的2L燒瓶中。將所得漿液加熱至IO(TC達約1小時。用旋轉蒸發(fā)器將該反應混合物濃縮至干燥。將殘余物調和到1，2-二氯乙烷(402mL)中，冷卻至15°C。滴加i-PrOH(1015mL),同時維持罐溫低于30°C。將該反應混合物在20。C攪拌2小時，在10。C攪拌1小時。過濾該反應混合物，用異丙醇(100mL)清洗濾餅。在50。C、減壓下干燥。收率=118.5克(65%)。將l-曱基-環(huán)丙烷甲酸乙酯(405.0g，3.16摩爾)、5N氫氧化鈉(1.0L，5.00摩爾)和甲醇(400.01111^，9.88摩爾)加入到3L三頸圓底燒瓶中。將該反應混合物在50。C至60。C之間加熱5小時，然后冷卻至環(huán)境溫度過夜。除去有機溶劑，用MTBE(2x500mL)萃取該堿性溶液。用600mL濃HC1將該水溶液的pH調至l，用MTBE(4x500mL)萃取。合并有機層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，在減壓下除去溶劑。使殘余物固化，然后加入100mL庚烷，在0-5X:攪拌所得漿液。過濾漿液，然后將所得固體減壓干燥。濃縮濾液，在冰浴中冷卻，得到另外一些白色固體物質。合并，回收265g(84Q/。)白色固體形式的1-曱基-環(huán)丙烷甲酸。將l隱甲基-環(huán)丙烷甲酸(260.0g，2.60摩爾)、2-丁酮(2.5L，27.92摩爾)和7V-曱基嗎啉(325.0mL，2.95摩爾)加入到配有高架攪拌器的5L三頸圓底燒瓶中。在O'C攪拌該混合物，歷經(jīng)30分鐘分批加入2-氯-4，6-二甲氧基-[1，3，5三噪(510.0經(jīng)，2.86摩爾)。在O'C繼續(xù)攪拌15分鐘，然后在環(huán)境溫度攪拌2小時。過濾所得7V-甲基嗎啉鹽酸鹽，用2x200mL2-丁酮清洗。濃縮濾液，將殘余物溶解于1500mLTHF中，得到溶液A。將含碳酸鉀(550.0g，3.94摩爾)的2L水加入到5L三頸圓底燒瓶中。加入4-羥基旅咬(piperdine)(275.0g,2.66摩爾)，得到溶液B。將溶液B在冰-水浴中冷卻，滴加溶液A。除去冷卻浴，將該反應混合物在室溫攪拌2小時。在減壓下除去有機溶劑。用二氯甲烷萃取剩余的堿性水溶液6x2L。合并有機層，用1.5L飽和氯化鈉水溶液和200mL濃HC1的混合物洗滌。酸性水溶液用3xlL二氯甲烷萃取。合并有機層，用500g硫酸鎂和100g碳酸鉀干燥過夜。濾出干燥劑，除去溶劑直至剩余約500mL溶劑。加入1L庚烷，除去溶劑直至發(fā)生結晶。過濾固體，用庚烷充分洗滌，減壓干燥，得到白色結晶固體形式的(4-羥基-哌啶-l-基)-(l-甲基-環(huán)丙基)-曱酮330g(690/。)。將氫化鈉(38.40g，960.09摩爾)和THF(1.54L，18.92摩爾)加入到配有高架攪拌器、加料漏斗和熱電偶的5LMorton燒瓶中。攪拌數(shù)分鐘，然后加入(4-羥基-哌啶-1-基)-(1-甲基-環(huán)丙基)-甲酮(149.008，813.09摩爾)。攪拌0.5小時歷經(jīng)1小時加入在THF(1.54L，18.92摩爾)中的l-氯-4-硝基-異喹啉(154.00g,738.24摩爾)。將該反應混合物在室溫攪拌2小時，然后在40。C攪拌6小時，然后冷卻至室溫過夜。向該反應混合物中滴加水(500mL，27,78摩爾)。通過傾至劇烈攪拌的水(2.5L，138.89摩爾)和MTBE(3.08L，25.92摩爾)混合物中，將該反應混合物淬滅。分離各層，將有機層用水(3.08L，170.9摩爾)洗滌，用硫酸鈉干燥(142.00g,999/70摩爾)。濾出千燥劑，得到濾液#1。重復以上操作，得到濾液#2。合并濾液#1和#2。在減壓(150mm)下除去溶劑，用20-28。C的蒸汽溫度收集餾出液直至剩余約1.5L。向該蒸餾瓶加入異丙醇(4.62L，60.43摩爾)，在減壓(~120mm)下恢復蒸餾，用35-44'C的蒸汽溫度收集餾出液直至剩余約1L。將剩余的漿液在冰上冷卻過夜。過濾固體，用冷異丙醇(300.00mL，3.92摩爾)、然后用3x100mL庚烷(300.00mL，2.05摩爾)洗滌。在40'C減壓下干燥固體過夜，得到橙色固體形式的(1-甲基-環(huán)丙基)-[4-(4-硝基-異喹啉-1-基氧基)-哌啶-1-基-曱酮368g(72。/。-聯(lián)合收率)。向3加侖的高壓釜中加入(l-甲基-環(huán)丙基)-[4-(4-硝基-異喹啉-l-基氧基)-哌啶-l-基-甲酮(368.0g，1.04摩爾)、THF(4.42L，54.32摩爾)和5%披4巴碳(干燥，40.50g，19.03摩爾)。密封高壓釜并引入氫氣至50psi。將內含物以1000rpm在室溫、50psi氬氣下攪拌4.5小時。過濾，再用一些THF(2.0L,24.58摩爾)清洗。用碳(20-40目，42.00g)處理濾液，加熱至40。C達l小時。再加入一些碳(60目，47.00g)，繼續(xù)加熱l小時。用微纖維濾紙和HyfloS叩erCef床將碳濾出，用最少量THF清洗。除去溶劑，獲得深橙-紅色油狀物/泡沫形式的4-(4-氨基-異喹啉-1-基氧基)-哌啶-1-基1-(1-甲基-環(huán)丙基)-甲酮，348g(103%)。NMR(500MHz，CDC13):50.59(t，/=6.0Hz,2H)，0.96(t，/=6.0Hz，2H)，1.34(s，3H)，1.88-1.94(m，2H),2.06國2.10(m，2H)，3.61國3.70(m,2H)，3.93-4.00(m，2H)，5.48畫5.50(m，1H)，7.52(s,1H)，7.58(t,/=7.0Hz，1H),7.73(t，/=7.0Hz，1H)，7.81(d，/=7.0Hz，1H)，8.27(d,/=8.5Hz，1H)。制備24-(4-氨基-異喹啉-1-基氧基)-哌啶-1-基1-(2-氟-苯基)曱酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>向4-(4-硝基-異奮啉-l-基氧基)-哌咬-l-甲酸叔-丁酯(9.68g，25.9mmoL0。C)在DCM(100mL)中的冷溶液中加入TFA(80mL)。在22°C攪拌2小時,然后在減壓下除去溶劑。將殘余物溶解于DCM中，用liV氫氧化鈉處理至pH14。分離水相，用DCM萃取兩次。合并有機相，用無水硫酸鈉干燥。除去溶劑，得到(4-硝基-異喹啉-l-基氧基)-哌啶(7.06g，99%收率，ES+(m/z)274.3[M+H)。將4-(4-硝基-異奮啉-l-基氧基)-哌啶(4.0g,14.6mmo1)、2-氟苯曱酸(2.45g,17.5mmo1)、DCC(3.6g,17.5mmol)和HOBt(2.37g，17.5mmoI)在THF(100mL)中的反應混合物在22。C攪拌過夜。過濾，然后濃縮。對殘余物進行硅膠色譜，用己烷和乙酸乙酯洗脫，得到黃色固體形式的(2-氟-苯基)-[4-(4-硝基-異喹啉-l-基氧基)-哌啶-l-基I-曱酮(6.82g，收率為92%,ES+一)396.3[M+H)。將(2-氟-苯基)-[4-(4-硝基-異喹啉-1-基氧基)-哌啶-1-基-曱酮(5.85g，14.8mmol)和披鈀碳(10%，2.9g)在曱醇(250mL)中的混懸液在氬氣下攪拌過夜。過濾除去催化劑。濃縮濾液，得到淡黃色固體(4.7g，收率為87%,ES+一)366.3[M+H])。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>制備264-硝基-l-艱喚-l-基-異壹啉將l-氯-4-硝基-異會啉(2.5g,12mmol)在乙腈(100mL)中的漿液用固體哌溱(5.2g，60mmol)處理。將所得黃色混合物在60。C加熱過夜。冷卻至環(huán)境溫度后，使該反應混合物在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉水溶液之間分配。加入MeOH、二氯甲烷和乙酸乙酯，過濾整個混合物，得到亮黃色固體,(2.15g，69%;LCMSES+(m/z)259[M+H)。制備27環(huán)丙基-4-(4-硝基-異會啉-1-基)-哌嗪-1-基1-曱酮將4-硝基-l-哌溱-l-基-異會啉(制備26，517mg，2mmo1)、環(huán)丙烷甲酸(258mg，3mmol)和催化劑DMAP(24mg，0.2mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液或漿液用EDCI(575mg，3mmol)處理。將所得混合物在環(huán)境溫度攪拌過夜，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液洗涂。用硫酸鈉干燥有機層，減壓濃縮。對殘余物進行硅膠色謙，用0-2%2M氨-曱醇的二氯曱烷溶液梯度和0-70%乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，在兩次純化后，得到黃色固體。(513mg，收率為79%，LCMSES+(m/z)327[M+H)。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>4-(4-氨基-異喹啉-l-基)-哌嗪-l-基l-環(huán)丙基-曱酮將環(huán)丙基44-(4-硝基-異喹啉-l-基)-哌溱-l-基l-甲酮(制備27;513mg，1.57mmol)和5q/。披把碳(91mg)在乙酸乙酯(50mL)中的漿液在Pair振動器中、在環(huán)境溫度用60psi的氫氣氣氛處理。8小時后，過濾該反應混合物，減壓濃縮，得到褐色泡沫。(定量的收率；LCMSES+(/m/z)297[M+H])。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>制備34-(4-氨基-異喹啉-l-基)-哌嗪-l-基l-(2-氟-苯基)-曱酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>向派漆-l-甲酸叔-丁酯(10g，53.7mmol)在二氯甲烷(300mL)中的溶液中加入三乙胺(15.1mL，107.4mmol)和2-氟苯甲酰氯(6.4mL，53.7mmo1)。將該混合物在室溫攪拌過夜。然后，加入水(200mL),分離有機層，用硫酸鈉干燥，過濾，在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到17.3g4-(2-氟-苯甲酰基)-哌溱-l-甲酸叔-丁酯。ES+(m/z)309M+H]。向4-(2-氟-苯甲酰基)-哌溱-1-甲酸叔-丁酯(16.:^，53mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入4MHC1在1，4-二噴、烷(40mL，159mmol)中的溶液，將該反應混合物在室溫攪拌過夜。將Et20加入到所得白色混懸液中，在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到12.6g(2-氟-苯基)-哌嗪-l-基-甲酮鹽酸鹽。ES+(/w/z)209[M+H)。將(2-氟-苯基)-哌噪-l-基-曱酮(3.16g,12.9mmol)和K2C03(8.9g，64.5mmol)加入到乙腈(100mL)中的l-氯-4-硝基異奮啉(2.85g,13.7mmo1)中，攪拌24小時。過濾不溶固體，用AcOEt洗滌濾餅。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到殘余物。對殘余物進行硅膠色譜，用己烷:AcOEt20-90%洗脫，得到3.72g固體形式的(2-氟-苯基)-[4-(4-硝基-異喹啉-l-基)-哌嚷-l-基l-曱酮。LCMSES+(m/z)381.2[M+H。將Na2S204(6.87g，39.4mmol)、然后將NH4OH32%(15mL)加入到170mL1:1THF:H20混合物中的(2-氟-苯基)-[4-(4-硝基-異喹啉-l-基)-哌溱-l-基l-曱酮(3g,7.89mmol)中，攪拌90分鐘。用水稀釋，用AcOEt萃取數(shù)次。合并有機物，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用Na2S04干燥，減壓蒸發(fā)，得到1.8g固體形式的標題化合物。LCMSES+(m/z)351.2[M+H。1-5-(1-曱基-環(huán)丙基)-2-對-甲苯基-2if-吡唑-3-基l-3-l-(哌啶-4-基氧基)-異<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>將[5-(1-甲基-環(huán)丙基)-2-#-甲苯基-2/T-吡唑-3-基卜氨基甲酸2，2，2-三氯-乙基酯(制備18，3.20g，7.94mmo1和2.0當量)和4-(4-氨基-異*啉-1-基氧基)-哌啶-1-曱酸叔-丁酯(制備22，1.37g，3.97mmo1，1.0當量)溶解于7mL制備36奮啉-4-基l-脲二鹽酸鹽無水DMSO中，加入二異丙基乙基胺(DIPEA，1.36mL,7.94mmol，2.0當量)在80。C、攪拌下在密封管中加熱20小時。將該溶液傾至l:lv/v的二氯甲烷和水水混合物中。用二氯甲烷(2x50mL)萃取水相，用水(2x50mL)和氯化鈉水溶液(100mL)洗滌合并的有機層。將有才幾溶液用石危酸鈉干燥，減壓蒸發(fā)。對殘余物進行珪膠色譜，用15%至80%EtOAc的己烷溶液梯度洗脫，得到1.40g純泡沫膏狀固體形式的4-(4-{3-5-(1-甲基-環(huán)丙基)-2-^"-曱苯基-2仏吡唑-3-基]-脲基}-異喹啉-1-基氧基)-哌啶-1-曱酸叔-丁酯。收率為59%。ES+(m/z)597.4[M+H。在室溫，將4MHC1的二W悉烷溶液(2.4mL，9.36mmol)加入到二氯曱烷(20mL)中的4-(4-{3-[5-(1-甲基-環(huán)丙基)-2-#-曱苯基-2好-吡唑-3-基-脲基}-異喹啉-l-基氧基)-哌啶-l-曱酸叔-丁酯(1.4g,2.34mmol)中，攪拌過夜。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到白色固體形式的標題化合物(1.3g)(定量)。ES+(附々)497.4(M+H)。制備371_15-(2-氟-1-氟曱基-1-甲基-乙基)-2-#-曱苯基-2好-吡唑-3-基1-3-1-(哌啶-4-基氧基)-異查啉-4-基l-脲鹽酸鹽將[5-(2-氟-l-氟甲基-l-甲基-乙基)-2-#-曱苯基-2樂吡唑-3-基-氨基曱酸2，2，2畫三氯-乙基酯(制備27,2.7mmo1，1.2g)和DIPEA(2.9mmo1，0.5mL)加入到4-(4-氨基-異喹啉-1-基氧基)-哌啶-1-曱酸叔-丁酯(制備22,2.9mmo1，l.Og)在4mLDMSO中的溶液中，在85。C攪拌過夜。冷卻，加入水，用二氯曱烷萃取。合并有機層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌。用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到殘余物。對殘余物進行珪膠色譜，用己烷/乙酸乙酯梯度(從15至70%)洗脫，得到4-(4-{3-5-(2-氟-1-氟甲基-1-甲基-乙基)-2-#-曱苯基-2//-吡唑-3-基1-脲基}-異喹啉-1-基氧基)-哌啶-1-曱酸叔-丁酯。LCMSES+(一635[M+司。在室溫攪拌4-(4-{3-[5-(2-氟-l-氟曱基-l-甲基-乙基)-2-^/"-曱苯基-2#-吡唑-3-基卜脲基》-異喹啉-l-基氧基)-哌啶-l-甲酸叔-丁酯(l.lmmo1，0.6g)并溶解于5mL二氯曱烷和4.0M氯化氫的二嗜、烷溶液(5.3mmo1，1.3mL)中過夜。減壓濃縮。用乙醚研磨形成的白色固體。LCMSES+(附々)535[M+H。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。制備化合物數(shù)據(jù)MS(ES+):w/z[M+H制備381-[5-(1，l-二-氟甲基-丙基)-2-;^-甲苯基-2iZ-吡唑-3-基l-3-[l-(哌咬-4-基氧基)-異查啉-4-基I-脲鹽酸鹽549制備391-[5-(2-氟-l，l-二甲基-乙基)-2-對-甲苯基-2仔-吡唑畫3-基I-3-[l-(哌啶-4國基氧基)畫異奮啉-4-基I-脲鹽酸鹽517制備401_(5-叔-丁基-2-對-曱苯基-2H-吡唑-3基)-3-fl(哌啶-4-基氧基)-異查啉-4-基l-脲將氮氣鼓入1-(5-炎-丁基-2-對-甲苯基-27/-吡唑-3-基)-氨基甲酸2，2，2-三氯-乙基酯(制備17,589mg，1.456mmol)和4-(4-氨基-異查啉-1-基氧基)-旅啶-l-曱酸叔-丁西旨(制備22,500mg，1.456mmol)在DMSO(5mL)中的溶液達5分鐘。然后加入A^V-二異丙基乙基胺(507iaL，2.912mmo1)。在60°C攪拌6小時，然后使其冷卻至室溫過夜。使該反應混合物在200mLCH2C12和lOOmL蒸餾水之間分配。用水(lxl00mL)洗滌，然后合并水層，用CH2Cl2(3x50mL)萃取。合并有機層，用飽和氯化鈉水溶液(2xl00mL)洗滌。將合并的有機相用硫酸鈉干燥，濃縮。對殘余物進行硅膠色譜，用己烷和乙酸乙酯洗脫，得到棕色固體形式的4-{4-[3-(5-農-丁基-2-#-甲苯基-2樂吡唑-3-基)-脲基-異壹啉-1-基氧基}-哌啶-1-曱酸叔-丁酯。LCMSES+(m/z)599.5[M+H。向4-{4-[3-(5-炎-丁基-2-^/"-甲苯基-2樂吡唑-3-基)-脲基-異壹啉-1-基氧基}-哌咬-1-曱酸叔-丁酯(820mg，1.37mmol)在二氟甲烷(50mL)中的冷溶液中加入三氟乙酸(15mL)。將該反應混合物在22。C攪拌1.5小時。除去溶劑后，將殘余物用NaCl(50mL)飽和的1N氬氧化鈉處理，用二氯甲烷萃取5次(每次50mL)。將合并的有才;i4目用硫酸鈉干燥。過濾混合物，對殘余物進行硅膠色譜，用二氯甲烷和曱醇洗脫，得到白色固體(515mg，收率為75%,LCMSES+(m/z)499.M+H)。以基本上類似于上述的操作制備以下化合物。表3制備化合物數(shù)據(jù)MS(ES+):m/z制備41l-(5-五氟乙基-2-《力-甲苯基-2#-吡唑-3-基)-3-[1-(哌咬-4-基氧基)-異會啉-4-基-脲561.M+H1制備42l-l-(哌啶-4-基氧基)-異會啉-4-基-3-2-^^-曱苯基-5-(l-三氟甲基-環(huán)丙基)-2//-吡唑-3-基-脲551.4[M+H實施例11-『1_(4_環(huán)丙烷羰基_哌嗪_1_基)_異喹啉斗基1_3-〖5-(1-曱基-環(huán)丙基)-2-對-曱苯基-2H-吡唑-3-基l-脲將[4_(4-氨基-異喹啉-1-基)-哌嗪-1-基卜環(huán)丙基-甲酮(制備29，214mg，0.722mmo1)、[5-(1-曱基-環(huán)丙基)-2-對-曱苯基-2H-吡唑-3-基-氨基甲酸2，2，2-三氯-乙基酯(制備18，2卯mg，0.722mmo1)和二異丙基乙基胺(0.264mL)在4mLDMSO中的溶液在60。C加熱5小時。將所得混合物冷卻至環(huán)境溫度，加入水。濾出沉淀，用水然后用戊垸清洗，在60。C真空烘箱中干燥。對殘佘物進行硅膠色譜，用2M氨-甲醇的二氯甲烷溶液(O至2%)梯度洗脫，得到206mg產(chǎn)物(LCMS表明其純度為93%)。將其溶解于少量二氯甲烷和MeOH中，用1當量2M甲磺酸的二氯甲垸溶液處理，在氮氣流下濃縮。將所得固體用幾mLDMSO/MeOH/7JC研磨，過濾，得到145mg游離堿(LCMSES+(m/z)550[M+H)。使用10mM碳酸氫銨水溶液/乙腈梯度、通過Xterra30x75mm5jimMSC18反相柱進一步純化后，以與上述操作基本類似的方式制備以下化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>實施例31-{1-4-(2,6-二氟-苯曱?；?-哌嗪-1-基1-異奮啉-4-基}-3-5-(1-曱基-環(huán)丙基)_2-考-甲苯基-2K-吡唑-3-基l-脲將[4-(4-氨基-異喹啉-l-基)-哌嗪-l-基-(2，6-二氟-苯基)-曱酮(制備32，約0.88mmol)、[5-(l-甲基-環(huán)丙基)-2-^"-甲苯基-2/f-吡唑-3-基卜氨基曱酸2，2，2-三氯-乙基酯(制備18，362mg，0.9mmol)和二異丙基乙基胺(0.314mL)在5mLDMSO中的溶液在60。C攪拌過夜。將所得混合物冷卻至環(huán)境溫度，使用飽和氯化鈉水溶液幫助相分離，使其在水和乙酸乙酯之間分配。用乙酸乙酯萃取水層，將合并的有機層用硫酸鈉干燥。減壓濃縮。對殘余物進行硅膠色譜，用2M氨-曱醇的二氯曱烷溶液(O至2%)梯度洗脫。將其溶解于少量二氯甲烷和MeOH中，用1當量2M甲磺酸的二氯甲烷溶液處理，在氮氣流下濃縮。使用10mM碳酸氬銨水溶液/乙腈梯度、通過Xterra30x75mm5fimMSC18反相柱進一步純化后，得到73mg游離堿。LCMSES+(一62M+H)?；旧项愃朴谝陨喜僮髦苽湟韵禄衔锏挠坞x堿。然后將0.13g溶解于lmLDCM中，加入曱磺酸1N在DCM中的溶液(l當量)。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到0.15g下述化合物。_實施例化合物數(shù)據(jù)MS(ES+):m/z[M+H1實施例41-{1-[4-(2-氟-苯甲酰基)-哌*-1-基-異喹啉-4-基}-3-[5-(1-甲基-環(huán)丙基)-2-對-甲苯基-2好-吡唑-3-基I-脲甲磺酸鹽604實施例5l-(5-在-丁基-2-^/"-甲苯基-2好-吡唑-3-基)-3-U-l-a-曱基-環(huán)丙烷羰基V哌咬-4-基氧基1-異會啉-4-基}-脲將氮氣鼓入l-(5-炎-丁基-2-對-曱苯基-2〃-吡唑-3-基)-氨基甲酸2，2，2-三氯-乙基酯(制備17,203mg，0.5mmol)和[4-(4-氨基-異喹啉-l-基氧基)-哌啶-l-基]-(l-曱基-環(huán)丙基)甲酮(163mg，0.5mmol)在DMSO(2mL)中的溶液中達5分鐘。然后加入AyV-二異丙基乙基胺(200iaL，l.lmmol)。在60°C攪拌過夜后，使該反應混合物在二氯曱烷(15mL)和飽和碳酸氫鈉(50mL)之間分配。分離水相，用二氯甲烷萃取兩次(每次15mL)。將合并有機相用硫酸鈉干燥并濃縮。將殘余物用硅膠色鐠純化，用己烷和乙酸乙酯洗脫，得到白色固體(226mg，收率為78%，ES+(m/z)581.3[M+Hj)。以基本上類似于上述操作的方式制備以下化合物的游離堿。然后將其溶解于lmLDCM中，加入曱磺酸1N在DCM中的溶液(l當量)。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到下述化合物。實施例化合物MS(ES+):M+H實施例61-{1-[4-(2，2-二曱基-丙?；?-哌嗪-1-基-異喹啉_4-基}-3-[5-(1-甲基-環(huán)丙基)-2-^/"-曱苯基-2^-吡唑-3-基1-脲甲磺酸鹽566實施例71_[5-炎-丁基-2-(6-甲基-吡咬-3-基)-2/7-吡唑-3-基-{1-1-(1-曱基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基-異喹啉-4-基}-脲甲磺酸鹽582.3實施例81-{1-1-(2-氟-苯甲?；?-哌咬-4-基氧基]-異喹啉-4-基}-3-[5-(1-曱氧基-環(huán)丙基)-2-對-甲苯基-2H-吡唑-3-基]-脲甲磺酸鹽635.0實施例91一[5-(1-曱氧基-環(huán)丙基)-2-對-曱苯基-27/-吡唑-3-基-3-{1-[1-(1-甲基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基-異喹啉-4-基}-脲甲磺酸鹽595.3實施例101-[2-(6-曱基-吡咬-3-基)-5-(l-三氟甲基-環(huán)丙基)-211-吡唑-3-基-3-{1-[1-(3-甲基-噻吩-2-羰基)-哌啶-4-基氧基卜異喹啉-4-基}-脲甲磺酸鹽634.0實施例11l-(5-我-丁基-2-^/"-甲苯基-2樂吡唑-3-基)-3-U-4-(2,2-二曱基-丙酰基)-哌噢-1-基1-異喹啉-4-基}-脲甲磺酸鹽攪拌溶解于18mL乙腈中的1-[4-(4-氨基-異奮啉-1-基)-哌嚷-1-基-2，2-二甲基-丙-1-酮(制備3,0.9mmol，0.3g)。加入碳酸鉀(0.99mmo1，O.lg)和l-(5曙在-丁基-2-#-甲苯基-2/7-吡唑-3-基)-氨基甲酸2，2，2-三氯-乙基酯(制備17,0.9mmo1,0.4g)，在室溫攪拌過夜。然后，加入lmLDMF，在60。C攪拌24小時。冷卻，加入水，用二氯甲烷萃取。合并有機層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，得到殘余物。對殘余物進行硅膠色譜，用己烷/乙酸乙酯(5°/。至20%)梯度洗脫。向所得油狀物添加二氯甲烷，過濾所形成的沉淀，獲得1-(5-森-丁基-2-對-甲苯基-277-吡唑-3-基)_3-{1-4-(2，2-二甲基-丙?；?-哌嗪-1-基-異喹啉-4-基}-脲。ES+(/m/z)568[M+H)。在室溫攪拌1-(5-炎-丁基-2-對-曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{1-[4-(2，2-二甲基-丙?；?-哌溱-1-基卜異喹啉-4-基}-脲。加入1N曱磺酸的二氯甲烷溶液，形成標題化合物。LCMSES+(m/z)568[M+H。實施例12Kl-l-a-曱基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基l-異查啉-4-基V3-5-a-曱基-環(huán)丙基)-2-#-甲苯基-2仏吡唑-3-基l-脲甲磺酸鹽將EDCI(0.147g，0.77mmo1)、HOBt(0.10g,0.77mmo1)、l-[5-(l-甲基-環(huán)丙基)-2-考-曱苯基-2^/-吡唑-3-基-3-[1-(哌啶-4-基氧基)-異喹啉-4-基1-脲二鹽酸鹽(制備3，0.16g，0.64mmol)和l-甲基-l-環(huán)丙基甲酸(l.l當量)置于Nz下的燒瓶中。加入二氯曱烷(5mL)，然后加入DIPEA(0.22mL,1.28mmo1)，在室溫攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑，得到殘余物。對殘余物進行硅膠色語，用己烷:AcOEt50-100%梯度洗脫，得到游離堿形式的曱基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基1-異喹啉-4-基}-3-[5-(1-甲基-環(huán)丙基)-2-^一曱苯基-2/f-吡唑-3-基-脲。ES+(m/z)579.3(M+H)。將0.3g1-{1-[1-(1-甲基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基]異喹啉-4-基}-3-[5-(1-甲基-環(huán)丙基)-2-J六甲苯基-2W-吡唑-3-基-脲溶解于二氯曱烷lmL中，加入321juL甲磺酸1N在二氯曱烷中的溶液。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到0.357g白色固體形式的標題化合物(定量)。ES+(/fj/z)579.3(M+H)。以基本上類似于上述制備的方式制備以下化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>將氮氣鼓入1-(5-炎-丁基-2-#-甲苯基-2H-吡唑-3-基)-3-[1(哌"定-4-基氧基)_異會啉_4-基-脲(制備39，100mg，0.2mmol)和氨基曱酸苯基酯(32.9mg，0.24mmol)在DMSO(lmL)中的溶液中達5分鐘。然后加入A^V-二異丙基乙基胺(200iaL，l.lmmo1)。在85。C攪拌過夜后，使該反應混合物在乙酸乙酯(15mL)和飽和碳酸氫鈉(50mL)之間分配。分離水相，用乙酸乙酯萃取兩次(每次15mL)。將合并的有機相用硫酸鈉千燥并濃縮。對殘余物進行硅膠色語，用己烷和乙酸乙酯洗脫，得到白色固體(40mg，收率為37%,ES+(m/z)542.3[M+H)。實施例241-(5-炎-丁基-2-^/"-曱苯基-2好-吡唑-3-基)-3-{1-1-(2-氟-苯曱?；?-哌啶-4-基氧基l-異會啉-4-基卜脲甲磺酸鹽將l-(5-炎-丁基-2-對-曱苯基-2仏吡唑-;3yl)-3-[l(哌啶-4-基氧基)-異喹啉-4-基1-脲(制備39,110mg，0.221mmo1)、2畫氟苯曱酸(37.1mg，0.265mmo1)、HOBt(35.8mg，0.265mmol)和DCC(54.6mg，0.265mmol)在THF(3mL)中的反應混合物在22。C攪拌18小時。將該混合物過濾，將濾液傾至含有CH2Cl2(100mL)的分液漏斗中。用1NNaOH洗涂(2x20mL)，合并水層，用CH2Cl2(2x50mL)萃取，然后將合并的有機層用飽和氯化鈉水溶液洗滌(lx50mL)。將合并的有機相用硫酸鈉干燥，過濾該混合物，對殘余物進行硅膠色譜，用二氯甲烷和甲醇洗脫，得到白色固體(109.8mg，收率為80%，ES+(m/z)621.5[M+H])。將0.107g1-(5-炎-丁基-2-#-甲苯基-2好-吡唑-3-基)-3-{3-氯-1-(2-氟-苯甲?；?-哌啶-4-基氧基卜異喹啉-4-基)}-脲溶解于二氯甲烷(2mL)和甲醇(2mL)中，加入甲磺酸(16.56mg，0.1723mmo1)。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到白色固體形式的標題化合物(119.7mg，97%，ES+(m/z)621.5[M+H-MsOH。以基本上類似于上述操作的方式制備以下化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>將1畫[5-(2-氟-1-氟曱基-1-甲基-乙基)-2-對-甲苯基-2if-吡唑-3-基]-3-[l-(哌咬-4-基氧基)-異喹啉-4-基-脲鹽酸鹽CM;ii^2，0.6mmol，0.3g)、2，6-二氟苯曱酰氯(0.6mmo1,0.07mL)和三乙胺(1.7mmo1，0.2mL)在5mL二氯曱烷中、在室溫攪拌過夜。加入一些水，用二氯曱烷萃取。將有機層用飽和氯化鈉水溶液洗滌。用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮。對殘余物進行硅膠色譜，用己烷/乙酸乙酯作為洗脫劑(30%-70%)洗脫。LCMSES+(m々)675[M+H。以基本上類似于上述操作的方式制備以下化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>實施例45l-U-l-(2,6-二氟-苯甲?；?-哌啶-4-基氧基l-異查啉-4-基V3-[5-(2-氟-l-氟甲基-l-甲基-乙基〗-2-對-甲苯基-2好-吡唑-3-基l-脲曱磺酸鹽將0.13g(0.19mmol)l-U-[l-(2，6-二氟-苯甲?；?-哌啶-4-基氧基I-異唾啉-4-基}-3-[5-(2-氟-l-氟曱基-l-甲基-乙基)-2-對-甲苯基-2H-吡唑-3-基卜脲溶解于二氯甲烷(2mL)中，加入0.19mL甲磺酸1N在二氯曱烷中的溶液。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到0.09g白色固體形式的標題化合物。ES+(m/z)675(M+H)。以基本上類似于上述操作的方式制備以下化合物。實施例化合物數(shù)據(jù)MS(ES+):一[M+H1實施例461-[5-(1，1-二-氟甲基-丙基)-2-^/"-甲苯基-2好-吡唑-3-基]-3-{1-[1-(2，6-二氟-苯曱酰基)-哌啶-4-基氧基-異喹啉-4-基}-脲甲磺酸鹽689實施例471-{1-[1-(2，6-二氟-苯甲酰基)-哌啶-4-基氧基卜異奮啉-4-基}誦3-[5-(2-氟隱1，1-二甲基-乙基)-2-#-曱苯基-2仏吡唑-3-基-脲甲磺酸鹽657實施例48141-1-(1-曱基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基1-異喹啉-4-基}-3-5-(1-曱基-環(huán)丙基)-2-對-甲苯基-2好-吡唑-3-基卜脲曱磺酸鹽將[4-(4-氨基-異喹啉-l-基氧基)-哌啶-l-基卜(l-甲基-環(huán)丙基)-甲酮(flJ:^，331.00g，1.02摩爾)、THF(3.97L，48.79摩爾)5-(l-甲基-環(huán)丙基)-2曙對畫甲苯基曙2H-吡唑-3-基-氨基甲酸2,2，2-三氯-乙基酯(制備18，410.00g，1.(^摩爾)和DIPE(l外.00g,1.22摩爾)加入到配有高架攪拌器、熱電偶和回流冷凝器的12LMorton燒瓶中。將該混合物回流22小時。冷卻反應物至〈50。C，用碳(DarcoG-60;33.00g，2.75摩爾)處理。將該漿液在43-50。C攪拌30分鐘，然后用微纖維濾紙和HyfloSuperCef(27.00g)過濾。將濾液接種，在沉淀期間使其在環(huán)境溫度冷卻。將所得漿液置于水中并攪拌過夜。將固體濾出，用THF(300.00mL，3.69摩爾)洗滌，在40。C減壓下干燥。對殘余物進4亍硅膠色鐠，用1:3丙酮/DCM、然后用30%丙酮的DCM溶液洗脫，獲得401g(680/。)白色固體形式的1-{1-[1-(1-甲基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基1-異喹啉-4-基}-3-[5-(1-曱基-環(huán)丙基)-2-對-曱苯基-2壓吡唑-3-基1-脲。NMR(300MHz，DMSO-d6):50.56(t，/=6.0Hz，2H)，0.73(t，/=6.0Hz，2H)，0.84(t，/=6.0Hz,2H)，0.92(t,/=6.0Hz，2H)，1.27(s，3H)，1.41(s，3H)，1.73-1.81(m，2H)，1.99-2.08(m，2H)，2.41(s，3H)，3.52譯3.65(m，2H)，3.83-3.96(m，2H)，5.47-5.58(m，1H)，6.22(s，1H)，7.37(d，/=8.1Hz,2H)，7.44(d，/=8.1Hz，2H)，7.65畫7.71(m，1H)，7.78-7.83(m，2H)，8.12(s，1H)，8.27(d，/=8.4Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.69(s，1H)。將該游離堿(400.0(^，6"1摩爾)和二氯曱烷P.00L，46.80摩爾)加入到配有高架攪拌器的5L燒瓶中。在室溫滴加曱磺酸(72.00g,7.49摩爾)。將該反應物攪拌l小時。過濾，在減壓下除去溶劑。加入乙醚(4L)，攪拌過夜。過濾，減壓干燥，獲得標題化合物，467.8g。NMR(DMSO-d6):50.52(t，/=2.5Hz，2H)，0.70(t，/=2.5Hz，2H)，0.80(t，/=2.5Hz，2H)，O.卯(t，/=2.5Hz，2H)，1.24(s，3H)，1.38(s，3H)，1.76(br，2H)，2.02(br，2H)，2.38(s，3H)，2.40(s，3H)，3.55(br,2H)，3.85(br，2H)，5.49(m，1H)，6.20(s，1H)，7.34(d，/=8.5Hz，2H)，7.42(d，/=8.5Hz，2H)，7.64(dd，/=8.5Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.79(s，1H)，8.08(s，1H)，8.24(d，/=8.5Hz，1H)，8.62(s，1H)，8.72(s，1H)。實施例49i-5-a-氟曱基-環(huán)丙基)-2-對-曱苯基-2/r-吡唑-3-基i-3-u-i-a-曱基-環(huán)丙烷將溶解于lmLDCM的5-(1-氟甲基-環(huán)丙基)-2-對-甲苯基-2〃-吡唑-3-基胺(160.00mg;652.26^imoles)緩慢加入到1，1'-羰基二咪唑(158.65mg，978.39jLimoles)在DCM中的溶液中。將該混合物在40。C攪拌7小時。然后，加入[4-(4-氨基-異喹啉-l-基氧基)-哌啶-l-基Hl-甲基-環(huán)丙基)-曱酮(Ml:經(jīng)，212.25mg，652.26jLtmoles，1.00當量)在lmLDCM中的溶液。將該混合羰基)-哌啶-4-基氧基卜異喹啉-4-基}-脲曱磺酸鹽物攪拌過夜。在N2氣下蒸發(fā)溶劑。首先用HLB柱(6g)、用NH4CO3/MeOH(100:0至0:100)洗脫純化，然后通過HPLC(KromasilC18柱(IOOx21.2mm，5Mm(Hi-Chrom)純化。流動相是水(溶劑A)和乙腈(溶劑B)，二者都包含0.05。/。三氟乙酸(TFA)。梯度方式2分鐘40。/。B，在6分鐘內40至60。/。的B。最后，2分鐘95%8。流速:25mL/min),得到固體形式的1-[5-(1-氟曱基-環(huán)丙基)-2-考-甲苯基-2仏吡唑-3-基卜3-{1-[1-(1-曱基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶4-基氧基-異喹啉一基)-脲(19mg，收率為5%)。ES+(一597[M+1。將甲磺酸lM(30.17jimoles;30.17jiL)加入到1-[5-(1-氟曱基-環(huán)丙基)曙2-對-曱苯基-277-吡唑-3-基-3-{1-[1-(1-曱基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基l-異壹啉-4-基)-脲(18.00mg，30.17pmoles)在0.5mL二氯曱烷中的溶液中。將該混合物在室溫攪拌l小時。在氮氣下蒸發(fā)溶劑，得到固體形式的標題化合物(20mg,96%收率)。ES+0m/z):597.4.[M+1。p38激酶的抑制標準溶液制備激酶緩沖溶液是通過將2.5mL1MTris-HCl(pH7.5)、O.lmL1M二硫蘇糖醇、l.OmL1M氯化鎂和300nL1%TritonX-100合并并用水稀釋至100mL而制備。將84mL該激酶緩沖溶液與16mLDMSO合并，制得16%DMSO溶液。200jiMATP溶液是通過在5mL激酶緩沖溶液中加入102.6|aL10mMATP水溶液、25|iL33P-ATP和163.5|uL4mM表皮生長因子肽661-681水溶液(Biomol，Catalog^P-121)而制備。p38激酶溶液是通過將9.5|aL濃縮酶溶液(250ngp38酶/inL激酶緩沖溶液)溶解于1536]LiL激酶緩沖溶液中而制備。樣品制備80nM各試驗化合物和對照化合物的溶液是通過在Costar96-孔微量滴定板中將2|uL10mM各化合物在二甲基亞砜中的儲備液溶解于248fxL16。/。DMSO溶液中而制備。將該板置于TecanGenesis自動液體處理器中進行1:3系列稀釋。試驗用BeckmanMultimek96-孔自動液體處理器將10|iL系列稀釋的化合物置于試驗板中。用TitertekMultidrop8-通道液體處理器加入20|uL200pMATP溶液。用Multimek將10nLp38激酶溶液轉移到該試驗板中。使該混合物在30。C反應40分鐘，然后通過用Multidrop加入60|uL新制備的5%水AcOH來終止反應。用Multimek將80pL該溶液轉移到"MAPH，，板中。使該板在室溫擱置30分鐘，然后在TitertekMAP提取器上用新制備的5%水AcOH(lx300pL,2x200pL)洗滌/抽吸。對板進行印記并用Multidrop力口入100|iLMicroScint-20閃爍液(PackardBioscience)。將該板放置30分鐘，在PE/WallacMicrobetaTrilux閃爍計數(shù)器上對其"P-同位素進行計數(shù)。最初以10種濃度(20inM-lnM，采用1:3系列稀釋)測定實施例12所例舉的化合物。對ICso值低于25nM的化合物以2|^M至0.1nM(l:3系列稀釋)的起始濃度重新測定。用非線性回歸計算各化合物的ICs。值(IDBSActivityBase軟件)?；救缟纤鰧嵤├?2進行測定，發(fā)現(xiàn)其抑制p38用加有10。/。胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培養(yǎng)基將RAW264.7細胞(鼠科單核細胞/巨噬細胞系ATCC)以50,000個細胞/孔的密度接種到96-孔板中，使其在孔底沉積和粘附48小時。在達到融合后，用不同化合物的10種系列稀釋物將細胞處理2小時。總是包括對照化合物。2小時后，加入茴香霉素(100ug/ml)，將細胞在37。C、5。/。C02氣氛下孵育30分鐘。然后，將細胞固定并用過氧化氫處理以除去內源性過氧化物酶。最后，將這些板用FBS阻斷，洗滌，使用抗磷酸-MAPKAPK2(Thr334，CellSignalling,Ca悄3041)抗體和ahP-綴合的次級抗體進行ELISA試驗。使用p-MAPKAPK2的體外抑制FEMTO(Pierce)檢測反應，其中FEMTO是增強的化學發(fā)光底物ahP,該物質導致快速動態(tài)的光輸出和高信號密度?；救缟纤鰷y定了實施例12所例舉的化合物，發(fā)現(xiàn)其以7nM的IQ。抑制pMAPKAPK2酶產(chǎn)生?；救缟纤鲈囼炈e的化合物，發(fā)現(xiàn)其具有低于或等于200nM的ICso值?；救缟纤鲈囼灹艘韵禄衔?，發(fā)現(xiàn)其具有以下活性實施例IC50(nM)144325910123125TNFa的體外抑制小鼠腹膜巨噬細胞將lmL巰基乙酸培養(yǎng)基(5.0g酵母提取物、15.0g酪胨或胰蛋白酶解酪蛋白、5.0g葡萄糖、2.5g氯化鈉、0.75gL-胱氨酸、0.5g巰基乙酸鈉、l.Omg刃天青和0.75g瓊脂在l.OL蒸餾水中)注射到Balb/C雌性小鼠的腹膜腔中。在注射后第4或5天，將小鼠處死，然后用4mLRPMI-1640培養(yǎng)基(BioWhittaker)腹膜內注射，用注射器抽取腹腔巨噬細胞。細胞因子產(chǎn)生用血細胞計數(shù)器對小鼠腹腔巨噬細胞進行計數(shù)，并在96-孔板中用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基將其調節(jié)至5x105個細胞/孔。將200liL/孔接種于96-孔板中，使細胞沉積和粘附到孔底達至少3小時。用8種濃度的系列將試驗化合物或標準p38激酶抑制劑在37°C預處理1小時(20iliL/孔)。將細胞用50ng/mL脂多糖(LPS)和10U/mL干擾素-y的混合物在37。C處理18小時(20pL/孔)。收獲該條件培養(yǎng)基，用Luminex檢測方法分析TNFa的產(chǎn)生。TNFoc/Luminex檢測試驗(Bio-RadBio-PlexKit-Catalog#171-G12221、將凍干、預混的TNFa標準品(l標準管/兩個96-孔板)用50pL無菌水復原(500,000pg/mL)。將樣品渦旋5秒，在冰上孵育30分鐘，在使用前渦S走5秒。用針-弁12對一套12個1.5mL管標記，然后向適合的管中加入下示一定量的細胞培養(yǎng)基(標準濃度如下5t)，000;25,000;12,500;6,250;3，125;1,562.5;781.3;3卯.6;195.3;97.7;48.8和24.4pg/mL)。將預混的抗-細胞因子綴合的珠粒劇烈渦旋(25X)30秒。用IXBio-Plex試驗緩沖液將該抗-細胞因子綴合的珠粒稀釋至1X濃度。對于各板而言，向5760jliLBio-Plex試驗緩沖液中加入240)iL所述預混的珠粒。將微孔96-孔濾板用100jaL/孔的阻斷緩沖液阻斷。使用微孔過濾系統(tǒng)過濾阻斷緩沖液，然后將其吸干。在濾板上用100)al/孔的Bio-Plex試-驗緩沖液洗滌2次并吸干。將該IX抗-細胞因子綴合的珠粒渦旋15秒并向各孔加入50|aL。將其過濾，吸干。用100jil/孔的Bio-Plex洗滌緩沖液在板上洗滌2次。再將其過濾，吸干。向各樣品孔中加入50|liL樣品或標準品。將其在室溫、在避光振動器上于標度6孵育60秒，然后在標度3孵育30分鐘，然后置于冰箱過夜。用Bio-Plex洗滌緩沖液洗滌3次。過濾，吸干。對于每一板都制備細胞因子檢測抗體(使用前~10分鐘)，將60jiL預混的細胞因子檢測抗體儲備液力口入到5940|iLBio-Plex檢測抗體稀釋液中。加入50pL細胞因子檢測抗體，在室溫、在避光振動器上于標度6孵育60秒，然后在標度3孵育30分鐘。用Bio-Plex洗滌緩沖液洗滌3次。將其過濾，吸干。對于每一板都制備Strept-PE(使用前~10分鐘)，加入60fiL至5940nLBio-Plex試驗緩沖液中。向各孔中加入50|iL鏈霉抗生物素蛋白-PE并將其在室溫、在避光振動器上于標度6孵育60秒，然后在標度3孵育10分鐘。用Bio-Plex洗滌緩沖液洗滌3次。將其過濾。將珠粒重新混懸于100pL/孔的Bio-Plex試驗緩沖液中。在Luminex機上對標準品和樣品讀數(shù)。然后，使用四參數(shù)對數(shù)回歸法(Bio-PlexManager2.0，Bio-Rad)—式兩份生成12點標準曲線，基于該標準曲線將這些強度讀數(shù)轉化成皮克/毫升單位，并計算ICso?；救缟纤鰷y定實施例12所例舉的化合物，其在體外抑制TNFa，ICso低于9nM。TNFa的體內抑制將化合物經(jīng)口給藥(30、10、3和1mg/kg)于雌性Balb/c小鼠(6只小鼠/每劑)。在4個劑量的化合物給藥后1小時(經(jīng)口，O.lmL/小鼠；基質含1%NaCMC/0.25%吐溫-80的水)；給小鼠以400^ig/kgLPSIP-注射。在LPS激發(fā)后1.5小時，將小鼠用異氟烷麻醉，通過心臟穿刺取血。用得自R&DSystems的ELISA試劑盒測定血漿中的TNFa-水平并測定劑量響應ED50?；救缟纤鰷y定實施例12中所例舉的化合物，其在體內抑制TNFa,TMED50為1.0mg/kg。閾值最小有效劑量(TMED)50是獲得高于或等于50%抑制并且與對照/安慰劑有統(tǒng)計學差異的劑量?？诜┞队肍ischer344大鼠篩選化合物的口服暴露。將動物禁食過夜并給予試驗化合物，所述試驗化合物:帔制成含有吐溫80(0.25y。v/v)和止泡劑(0.1%w/v)的羧甲基纖維素鈉(l。/。w/v)中的混懸液。給藥混懸液被制備為lmg/mL并通過管飼法以lmL/kg給藥。在給藥后0.5小時至7小時之間取血樣，離心制備血漿。用在線固相萃取法和LC/MS/MS分析血漿樣品?；救缟纤鰷y定實施例12中所例舉的化合物，其Cmax為93卯ng/mL,AUC(0-7h)為36800ng.h/mL。對關節(jié)內LPSi秀導的TNFa的影響將LPS關節(jié)內注射到大鼠踝部，誘導TNFa的合成，其可以在滑膜灌洗液中測量。在2小時內可探測到高水平的TNFa。因為關節(jié)是形成關節(jié)炎的部位，因此，這種模型可以迅速地確定口服給藥的化合物是否對滑膜中的炎癥響應有影響。在每個治療組中放置六只雌性Lewis大鼠(150-200g)。口服給予動物基質(l。/。羧甲基纖維素鈉-0.25。/。吐溫80)或試驗化合物(lmg/kg、3mg/kg、10mg/kg和30mg/kg)。一小時后，將10^1LPS(10ing)關節(jié)內給予各大鼠的右踝部，同時左踝接受10nL鹽水。2小時后，用100|iL鹽水對各踝部灌洗。收集灌洗液，儲存在-80。C。#1組基質(lQ/oNaCMC畫0.25。/o吐溫80，lmL,PO)#2組試驗化合物(lmg/kg，lmL,PO)#3組試驗化合物(3mg/kg，lmL，PO)#4組試驗化合物(10mg/kg，lmL,PO)#5組試驗化合物(30mg/kg,lmL，PO)用商購可得的ELISA試劑盒(R&D，RTAOO)測量TNFa。用實施例12中所例舉的化合物處理，產(chǎn)生TNFa合成的劑量響應抑制，入在滑膜灌洗液種所測量，其TMED50=2.54mg/kg。用流式細胞計進行茴香霉素-刺激的小鼠離體磷酸-MAPKAPK2抑制試驗8曙10周齡的雌性Balb/c小鼠購自TaconicInc.,口服給予0.2mL體積的濃度為30、10、3、lmg/kg的化合物。2小時后或在其它所示時間由心臟穿刺獲得血樣，將其收集到含EDTA的試管中。將100nL血在37。C孵育IO分鐘。然后，將全血與FITC-綴合的大鼠抗-小鼠Ly-6GmAb(l:250)和APC-綴合的大鼠抗-小鼠CDllbmAb(l:100)混合，用10(xg/ml茴香霉素刺激。細胞表面抗原染色和茴香霉素刺激均在37。C進行15分鐘，然后用Lyse/Fix緩沖液(BDBiosciences，Cat#558049)在室溫進行10分鐘。將溶解的血樣在室溫以600xg離心8分鐘，用4mLPBS再洗滌一次。將200|iiL用透化培養(yǎng)基B(Caltag，Cat#GAS002S-5)稀釋的抗-磷酸-MAPKAPK-2(Thr334)抗體(l:100稀釋)(CellSignaling,Cat#3041)和小鼠BDFcBlock(l:lOO稀釋)(BDBiosciences,553141)加入到血細胞中，在室溫孵育30分鐘。孵育后，加入3mL染劑/洗滌緩沖液，如上所述將細胞離心，再用3mL染劑/洗滌緩沖液洗滌。然后，用BeckmanCoulterF500對細胞進行流式細胞計量試驗。測量門控CDllb+LySG-細胞上磷酸-MapKap-K2染色的平均熒光。用JMP程序進行數(shù)據(jù)分析。用實施例12中所例舉的化合物進行處理，產(chǎn)生了p-MAPKAPK2合成的劑量響應性抑制，TMED50=2.20mg/kg。大鼠膠原誘導的關節(jié)炎功效模型將雌性Lewis大鼠(sl卯g，CharlesRiverLabs)用使用等體積助劑(氫氧化鋁)乳化的牛II型膠原(2mg/mL)免疫。將約0.3mg乳劑皮內注射到尾底部附近的背部對大鼠進行免疫。根據(jù)相同的方案，7天后對所有動物重新進行免疫。第一次免疫后笫12-14天，大鼠開始形成關節(jié)炎(特征為一個或兩個踝關節(jié)腫脹(swell-ling)和發(fā)紅)。在第一次出現(xiàn)關節(jié)炎跡象時將大鼠等分成5個治療組，開始對各大鼠每日兩次給藥治療，治療14天。治療組第l組基質(l。/Q羧甲基纖維素鈉+0.25Q/。吐溫80)lmL,PO，一日兩次xl4天第2組試驗化合物，5mg/kg，lmL，PO,—日兩次x14第3組試驗化合物，15mg/kg，lmL，PO，一日兩次x14第4組試驗化合物，30mg/kg，lmL，PO,—日兩次xl4第5組潑尼松龍10mg/kg，lmL,PO，每日(qd)x14一周5天用卡鉗測量踝關節(jié)直徑并記錄。將數(shù)據(jù)表示為由復合炎癥得分產(chǎn)生的曲線下面積(AUC)并進行統(tǒng)計分析。本發(fā)明化合物優(yōu)選口服給藥。但是，口服給藥不是唯一途徑或甚至不是唯一優(yōu)選的途徑。例如，對于健忘或難以口服藥物的患者而言，經(jīng)皮給藥可能是十分可取的，并且為方便起見或者為了避免可能與口服給藥有關的并發(fā)癥，可能優(yōu)選靜脈內途徑。在特定情況下，式I化合物還可以通過經(jīng)皮、肌內、鼻內或直腸內途徑給藥。給藥途徑可以以任何方式變化，其受藥物物理性質、患者和護理人員(caregiver)的便利性以及其它相關情況的限制(Remington'sPharmaceuticalSciences,第18版，Mack出版公司(1990))。藥物組合物以藥學領域眾所周知的方式制備。載體或賦形劑可以是可作為活性成分的載體或基質的固體、半固體或液體物質。適合的載體或賦形劑在現(xiàn)有^f支術中是眾所周知的。藥物組合物可適于口服、吸入、胃腸外或局部應用并且可以以片劑、膠嚢、氣霧劑、吸入劑、栓劑、溶液、混懸液等形式給藥于患者。本發(fā)明的化合物可以口服給藥，例如可以以惰性稀釋劑或膠嚢給藥或者壓縮成片劑給藥。對于口服治療給藥的目的而言，可以將化合物與賦形劑混合并以片劑、糖錠劑、膠囊、酏劑、混懸液、糖漿、糯米紙嚢劑、口香糖等形式使用。這些制劑應包含至少4%本發(fā)明的化合物化合物即活性成分，但是，也可以根據(jù)特定形式而變化，并且可以方便地為4%至約70%單元重量。組合物中存在的化合物的量為將獲得適合劑量的量?？梢杂闷瑒?、丸劑、膠嚢、糖錠劑等還可以包含一種或多種以下助劑粘合劑如聚維酮、羥丙基纖維素、微晶纖維素或明膠；賦形劑或稀釋劑如淀粉、乳糖、微晶纖維素或磷酸二鈣；崩解劑如交聯(lián)羧曱基纖維素、交聯(lián)聚維酮、羥乙酸淀粉鈉、玉米淀粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉或氫化植物油；助流劑如膠體二氧化硅；潤濕劑如月桂基硫酸鈉和聚山梨醇酯80;和可以加入甜^^未劑如蔗糖、阿司帕坦或糖精或矯味劑如薄荷、水楊酸曱酯或橙子矯味劑。當該劑量單位形式是膠嚢時，除上述類型的物質外，其還可以包含液體載體如聚乙二醇或脂肪油。其它劑量單位形式可以包含改變劑量單位物理形式的其它各種物質，例如包衣。因此，可以用糖、羥丙基甲基纖維素、聚甲基丙烯酸酯或其它包衣劑對片劑或丸劑進行包衣。除本發(fā)明化合物外，糖漿還可以包含作為甜味劑的蔗糖和某些防腐劑、染料和著色劑以及矯味劑。在制備這些各種組合物中所用的物質應當是藥學純的且在所用量下無毒。一種優(yōu)選的制劑是通過將10D/。N-曱基吡咯烷酮加入到所需劑量的式I化合物中、然后加入由20%羥基丙基-P-環(huán)糊精、5%曱基纖維素、0.5。/。止泡劑和HC10.01N，w/w。/Q組成的溶液來制備。式I化合物通常在寬劑量范圍內有效。例如，每天的劑量通常位于約0.0001至約30mg/kg體重的范圍內。在一些情況下，低于上述范圍下限的劑量水平可能已經(jīng)足夠，而在另一些情況下，可能使用更大的劑量也不會造成任何有害的副作用，因此，上述劑量范圍并不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。應當清楚的是，實際給藥的化合物的量將由主治醫(yī)師根據(jù)相關情況決定，包括被治療的病癥、所選擇的給藥途徑、被給藥的一種或多種實際化合物、個體患者的年齡、體重和響應以及患者癥狀的嚴重程度。權利要求1、式I化合物或其可藥用的鹽id="icf0001"file="S2006800398474C00011.gif"wi="39"he="23"top="60"left="89"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中X選自id="icf0002"file="S2006800398474C00012.gif"wi="69"he="30"top="103"left="73"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>R1是C1-C4烷基、任選被一個或兩個選自C1-C4烷氧基、甲基和三氟甲基的取代基取代的C3-C4環(huán)烷基；或C1-C4鹵代烷基；R2是任選被C1-C4烷基取代的苯基或任選被C1-C4烷基取代的吡啶基；R3是氨基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷基、任選被選自甲基、三氟甲基或鹵素的取代基取代的C3-C4環(huán)烷基；苯基或噻吩基，其各自任選被選自鹵素、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基的第一取代基取代，并且任選進一步被選自鹵素的第二取代基取代。2、權利要求1的化合物，其中X是3、權利要求1或權利要求2的化合物，其中W是4-甲苯基。4、權利要求1至3中任一項的化合物，其中W是l-曱基-l-環(huán)丙基、2-氟-l，l-二甲基-乙基或2-氟-l-氟甲基-l-甲基-乙基。5、權利要求1至4中任一項的化合物，其中R"是l-甲基-l-環(huán)丙基。6、式I化合物1-{1-[1-(1-曱基-環(huán)丙烷羰基)-哌啶-4-基氧基-異喹啉-4-基}-3-[5-(1-甲基-環(huán)丙基)-2-對曱苯基-2H-吡唑-3-基-脲或其可藥用的鹽。7、包含權利要求1至6中任一項的化合物和可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑的藥物制劑。全文摘要本發(fā)明提供式I的激酶抑制劑或其可藥用的鹽其中R¹、R²和X如本文所述。文檔編號C07D403/14GK101296924SQ200680039847公開日2008年10月29日申請日期2006年10月23日優(yōu)先權日2005年10月28日發(fā)明者A·德迪奧斯,B·洛佩斯德烏拉爾德加門迪亞,B·鐘,C·加西亞-帕德雷斯,C·謝,M·A·波班茨,M·M·馬德爾申請人:伊萊利利公司