專利名稱：：神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子衍生的肽序列的制作方法神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子衍生的肽序列發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及能夠刺激神經(jīng)元細(xì)胞分化、神經(jīng)細(xì)胞存活、以及與記憶和學(xué)習(xí)有關(guān)的神經(jīng)元可塑性的肽序列。本發(fā)明的肽序列衍生自屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的蛋白質(zhì)，諸如NGF、NT3、NT4/5和BDNF。本發(fā)明還涉及包含所述肽片段的藥物組合物及其治療如下疾病或疾患的用途，其中刺激神經(jīng)元細(xì)胞分化、神經(jīng)元細(xì)胞存活、以及與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的神經(jīng)可塑性的效應(yīng)對(duì)治療有益。
背景技術(shù)：
：神經(jīng)元的生長(zhǎng)、維持和再生至少部分受到稱為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(neurotrophin,NT)的某些多肽生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)，所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子結(jié)合并活化Trk家族的細(xì)胞表面受體，所述Trk家族的細(xì)胞表面受體具有固有的酪氨酸激酶活性。一旦神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子結(jié)合，相信這些受體將在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基上變成自我磷酸化的，并且隨之與對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)說(shuō)重要的胞內(nèi)分子相結(jié)合(綜述參見(jiàn)Ulrich和Schlessinger，Cell1990,61:203-212;Chao,Neuron1992,9:583-593)。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是小的(約13kDa)強(qiáng)堿性的二聚體蛋白，其深刻地影響所有脊推動(dòng)物物種中神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)是最先且最好地被表征的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族成員。它作為同二聚體存在于CNS中，其基因位于第l條染色體上(p21-p22.1區(qū))。已顯示NGF促進(jìn)基底前腦的膽堿能神經(jīng)元和交感神經(jīng)元、及初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元(primarysensoryneurons)的存活。也已證明NGF是針對(duì)軸索顯微外科術(shù)(axotomy)誘導(dǎo)的神經(jīng)變性和年齡相關(guān)的萎縮的保護(hù)因子。已經(jīng)提出NGF在神經(jīng)變性病癥諸如阿爾茨海默氏病的病理生理學(xué)和藥物療法中起作用。此外，已顯示其在暴露于毒性濃度谷氨酸的海馬神經(jīng)元中顯著減弱神經(jīng)變性并維持細(xì)胞形態(tài)(綜述見(jiàn)Salehi等，2004;TuszynskiMH等，NatMed.2005Jun;11(6):551-5;Jakubowska-DogmE,GumusbasUNeurosciLett.2005Jul1;382(1-2):45-50;WalzR等，NeurochemRes.2005Feb;30(2):185-90;HuZ等，NeurobiolDis.2005Feb;18(1):184-92)。腦衍生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)是另一種很好表征的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族成員。BDNF基因位于第11條染色體，pl3條帶。BDNF蛋白的結(jié)構(gòu)與NGF的結(jié)構(gòu)類似。BDNF在CNS中比NGF分布更廣。像NGF—樣，BDNF富集于海馬中，海馬是在成人腦中保持高度神經(jīng)可塑性的腦區(qū)，其基本上與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)。值得注意的是海馬內(nèi)NGF和BDNF表達(dá)的調(diào)節(jié)都至少部分受到膽堿能和谷氨酸能系統(tǒng)的控制。已顯示海馬損傷導(dǎo)致BDNF表達(dá)的上調(diào)。此外，與NGF類似，BDNF作為基底前腦初級(jí)感覺(jué)和膽堿能神經(jīng)元的存活因子發(fā)揮作用。另外，發(fā)現(xiàn)BDNF促進(jìn)多種其它神經(jīng)元細(xì)胞類型例如黑質(zhì)(substanianigra)的多巴胺能神經(jīng)元、小腦顆粒神經(jīng)元、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元、藍(lán)斑(locuscemleus)神經(jīng)元和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活，在這些神經(jīng)元細(xì)胞類型中NGF看起來(lái)未扮演重要角色。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(NT-3)具有與NGF和BDNF都高度相似的結(jié)構(gòu)，然而該生長(zhǎng)因子在神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)多少與NGF或BDNF有所不同。與NGF和BDNF相反，NT-3在CNS中的水平在胎兒發(fā)育期間和新生兒腦中是高的，在成人腦中降低。新生動(dòng)物海馬中NT-3的水平顯著高于其它神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的水平。根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)，提出NT-3在早期神經(jīng)元發(fā)育中扮演重要角色，腦發(fā)育期間該神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的機(jī)能障礙可能導(dǎo)致海馬病理學(xué)諸如精神分裂癥。像NGF和BDNF—樣，NT-3延長(zhǎng)初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元特別是神經(jīng)嵴細(xì)胞的存活，并且提高多巴胺能神經(jīng)元存活(綜述參見(jiàn)Shoval和Weizman，2005)。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子生長(zhǎng)因子家族第四個(gè)有記載的成員是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4/5(NT-4/5)。同所有其它神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子一樣，NT-4/5是有效的神經(jīng)元細(xì)胞存活因子，特別是已顯示它促進(jìn)神經(jīng)嵴和基板(placodes)的感覺(jué)神經(jīng)元、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元、基底前腦和藍(lán)斑的神經(jīng)元的存活。它還充當(dāng)基底前腦神經(jīng)元和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的分化因子。它與促進(jìn)神經(jīng)再生和海馬神經(jīng)元的突觸活性有關(guān)(綜述參見(jiàn)Shoval和Weizman,2005)。神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體(NGFR)是所有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的普遍存在的受體，根據(jù)它的分子量也將其稱為p75NTR。NGFR在被發(fā)現(xiàn)時(shí)被認(rèn)為是獨(dú)特的蛋白質(zhì)類型。然而，后來(lái)發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子受體的大型超家族共享NGFR的整體結(jié)構(gòu)(4個(gè)胞外配體結(jié)合的、富含半胱氨酸的重復(fù)，或者稱為CR,通過(guò)與胞質(zhì)相互作用物結(jié)合或者解離而發(fā)出信號(hào))。對(duì)該超家族的鑒定幫助闡明了NGFR的一些生物學(xué)功能，包括其在核因子K-B和凋亡途徑中的最終介入。NGFR/p75NTR主要與細(xì)胞死亡有關(guān)。NGFR作為單體以低親和力結(jié)合所有NT。NT的更高親和力結(jié)合通過(guò)該因子與原肌球蛋白受體激酶家族(TRK家族)的更高分子量受體TRKA(NTRK1)、TRK衛(wèi)(NTRK2)和TRKC(NTRK3)的結(jié)合而獲得。TRKA、TRKB和TRKC分別特異于NGF、NT-4/5和BDNF、以及NT-3。NT-3也結(jié)合TRKA和TRKB，但親和力明顯較低(有關(guān)NT及其受體的綜述參見(jiàn)Bothwell,Science272:506-507，1996;Carter和Lewin,Neuron18:187-190，1997;Bibel和Barde，GenesDev.14:2919-2937,2000)。NT與其受體的結(jié)合以及對(duì)該結(jié)合的調(diào)節(jié)是非常復(fù)雜的，在發(fā)育期間和成人中受到強(qiáng)烈調(diào)節(jié)。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其受體既涉及神經(jīng)系統(tǒng)正常功能的調(diào)節(jié)也涉及病理學(xué)。早已明了開發(fā)能夠增強(qiáng)和/或抑制神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的功能和/或其受體的活性的新化合物對(duì)于開發(fā)用于治療多種神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病的新藥來(lái)說(shuō)將會(huì)是有益的。然而，盡管早已認(rèn)識(shí)到該需求，但這樣的化合物一直是非常難以捉摸的。作為大分子，治療性遞送有效水平的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子本身存在相當(dāng)大的可能難以逾越的挑戰(zhàn)。另外，天然神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子可能與神經(jīng)元中的其它受體諸如p75受體相互作用，該受體與神經(jīng)元凋亡和生長(zhǎng)錐塌陷(collapse)有關(guān)。然而，先前設(shè)計(jì)Trk受體的肽模擬物激動(dòng)劑和/或拮抗劑的努力也沒(méi)有成功。例如，已報(bào)導(dǎo)衍生自神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子NGF的第1個(gè)環(huán)的環(huán)肽適度地模擬NGF的存活活性。然而，這些肽看起來(lái)以p75而非Trk受體依賴性的方式起作用(Long等，J.Neurosci.Res.1997,48:1-17)。據(jù)說(shuō)NGF第4個(gè)環(huán)的一些環(huán)肽顯示NGF樣存活活性，該活性受到Trk拮抗劑的阻斷。然而，據(jù)報(bào)導(dǎo)，由那些肽誘導(dǎo)的最大存活應(yīng)答僅僅為NGF神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子自身引起的最大應(yīng)答的10-15%(Xie等，J.Biol.Chem.2000,275:29868-29874;Maliartchouk等，J.Biol.Chem.2000，275:9946-9956)。已顯示BDNF第2個(gè)環(huán)的肽的二環(huán)和三環(huán)二聚體型具有BDNF樣活性。然而，再次報(bào)導(dǎo)它們所誘導(dǎo)的最大存活應(yīng)答僅僅為天然神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子引起的最大應(yīng)答的30%(O'Leary等，J.Biol.Chem.2003,278:25738-25744)。因此，仍然存在早已認(rèn)知到的對(duì)能夠調(diào)控(即增強(qiáng)或抑制)神經(jīng)元生長(zhǎng)和恢復(fù)的組合物的需求。也存在對(duì)能夠有效調(diào)控神經(jīng)元生長(zhǎng)和恢復(fù)的程序和方法(包括治療性方法)的需求。參考文獻(xiàn)BibelM,BardeYA.GenesDev.14:2919-2937，2000.BothwellM.Science272:506-507,1996,Chao.Neuron9:583-593，1992.CarterBD，LewinGR.Neuron18:187-190,1997.D'MelloSR，GalliC,CiottiTandCalissanoP.Proc.NatlAcad.Sci.USA90:10989-10993,1993.Jakubowska-DogruE，GumusbasU.NeurosciLett382(1-2):45-50,2005Jul1.HuZetal.NeurobiolDis.18(1):184-92,2005Feb.Leeetal.Curr.Opin.Neurobiol.11:281-286，2001.Longetal.J.Neurosci.Res.48:1-17,1997.Maliartchouketal.J.Biol.Chem.275:9946-9956,2000.O'Learyetal.J.Biol.Chem.278:25738-25744，2003.PenkowaM,GiraltM,LagoN,CamatsJ，CarrascoJ,HernandezJ，MolineroA,CampbellIL,Hidalgo.J.ExpNeurol.181:1301-48,2003.R0nnLC，RaletsI,HartzBP,BechM,BerezinA,BerezinV,MollerA,BockE.J.Neurosci.Methods100:25-32,2000.SalehiA，DelcroixJD,SwaabDRJNeuralTransm.Ill:323-45，2004.ShovalGandWeizmanA.Eur.Neuropsychopharm.15:319-329，2005.ThomasKandDaviesA.Curr.Biol.15:R262-R264,2005.Tuszynski固etal.NatMed.11(6):551-5,2005Jun.Ulrich&Schlessinger.Cell61:203-212，1990.WalzRetal.NeurochemRes.30(2):185-90，2005Feb.Xieetal.J.Biol.Chem.275:29868-29874,2000.發(fā)明概述本發(fā)明涉及衍生自神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的短肽序列，其在刺激由神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體介導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞分化、神經(jīng)元細(xì)胞存活、以及與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的神經(jīng)可塑性方面非常有效。根據(jù)本發(fā)明，所述肽序列包含一個(gè)或多個(gè)相同的氨基酸基序，該相同氨基酸基序?qū)τ谒鲭牡纳飳W(xué)活性來(lái)說(shuō)是重要的如此，在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包含5-25個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的分離的肽序列，所述肽序列包含氨基酸基序x^D/E-T-,-C(基序I),其中x^為疏水性氨基酸殘基，并且x"為K、R、S或A。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，包含基序(I)的肽序列可以進(jìn)一步包含基序(II)xP2-(xa)廣(xa)2-x仏畫x"-G或/和基序(m)R/K-A/G-L/V/I-T/D-x"-x仏，其中x^為疏水性或堿性氨基酸殘基，oo為任何氨基酸殘基或鍵，x+z-為帶電荷的氨基酸殘基，并且x"為任何氨基酸殘基。本發(fā)明公開了衍生自NGF、NT3、NT4/5和BDNF的特定肽序列，其包含上述至少一種基序，并且能夠刺激神經(jīng)元細(xì)胞分化、神經(jīng)元細(xì)胞存活、和/或與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的神經(jīng)可塑性。進(jìn)一步，本發(fā)明涉及含有包含上述至少一種基序的肽序列的復(fù)合物，特別是包含衍生自NGF、NT3、NT4/5或BDNF的序列的復(fù)合物。本發(fā)明還涉及所述肽序列和包含所述肽序列的復(fù)合物用于生產(chǎn)藥劑和/或用于制備抗體的用途。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的肽、復(fù)合物和/或抗體的藥物組合物。利用本發(fā)明的肽、復(fù)合物、抗體和/或藥物組合物刺激神經(jīng)突細(xì)胞分化、神經(jīng)元細(xì)胞存活、和/或與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的神經(jīng)元可塑性的方法也在保護(hù)范圍內(nèi)，以及包括為有需要的個(gè)體施用有效量的本發(fā)明的肽、復(fù)合物、抗體或藥物組合物的治療方法。附圖簡(jiǎn)述圖1顯示NGF衍生肽NGF-C2、NGF-D和NGF-E對(duì)小腦顆粒神經(jīng)元(CGN)的神經(jīng)突長(zhǎng)出的影響。圖2顯示NGF衍生肽NGF-C1和NGF-EE對(duì)CGN的神經(jīng)突長(zhǎng)出的影響。圖3顯示NGF衍生肽NGF-E、NGF-EE和NGF-N對(duì)CGN存活的影響。圖4顯示BDNF衍生肽BDNF-E對(duì)CGN的神經(jīng)突長(zhǎng)出的影響。圖5顯示BDNF衍生肽BDNF-EE對(duì)CGN的神經(jīng)突長(zhǎng)出的影響。發(fā)明詳述I.肽序列本發(fā)明的一個(gè)方面涉及包含5-25個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的肽序列，所述肽序列包含氨基酸基序(基序I)xpl-D/E-T-xal-C，其中x^為疏水性氨基酸殘基，并且x"為K、R、S或A。根據(jù)本發(fā)明的基序(I)的xP'殘基可以為任何疏水性殘基，然而在優(yōu)選實(shí)施方案中x^選自Y、F或I。如此，在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中它可以是Y,在另一優(yōu)選實(shí)施方案中是F,在又一優(yōu)選實(shí)施方案中它可以是I。包含上述基序的本發(fā)明的肽序列可以進(jìn)一步包含另一個(gè)氨基酸基序<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>(基序II)，其中;X^為疏水性或堿性氨基酸殘基，00為任何氨基酸殘基或鍵，X仏為帶電荷的氨基酸殘基，并且X"為任何氨基酸殘基。如此，本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及同時(shí)包含基序(I)和基序(II)的下式的肽序列X廣xP!隱D/E-T-X《C-(xVxP2-(xa)-(Xa)-X仏-X"畫G-(X)n,其中X,為任何氨基酸殘基，(x)n為鍵或任何氨基酸殘基序列，其中n為l到5的整數(shù)，并且xpl、xp2、xal、x32、(xa)、x仏如權(quán)利要求l-9中所定義的。根據(jù)本發(fā)明，基序(II)的x^可以為任何疏水性氨基酸殘基，然而優(yōu)選x152選自A、L、P或Y。在另一個(gè)實(shí)施方案中x^可以為帶電荷的氨基酸殘基，在優(yōu)選實(shí)施方案中為帶正電荷的殘基例如K、R或H。根據(jù)本發(fā)明最優(yōu)選的帶正電荷的殘基為K。才艮據(jù)本發(fā)明，基序(II)中(xa)位點(diǎn)的殘基為任何氨基酸殘基，然而在該位點(diǎn)一些氨基酸殘基可能是優(yōu)選的，這樣的優(yōu)選氨基酸殘基可以選自A、E、F、I、L、R、S、T或V。在一些實(shí)施方案中，(xa)位點(diǎn)的至少一個(gè)氨基酸殘基可以不存在，這樣根據(jù)本發(fā)明的基序(II)可以包含5個(gè)或4個(gè)氨基酸殘基。在這樣的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種包含基序xP、(xa)-x+〃-^-G的氨基酸序列，即其中一個(gè)(x"位點(diǎn)為肽鍵，或者本發(fā)明涉及一種包含基序xP、x+、x、G的氨基酸序列，即其中兩個(gè)(Xa)位點(diǎn)均為肽鍵。在一些實(shí)施方案中，其中一個(gè)(X,殘基不存在可能是優(yōu)選的，在其他實(shí)施方案中，兩個(gè)(x"均為肽鍵取代可能是優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明，x"可以選自氨基酸殘基A、E、G、I、N、R、S或T,并且x仏可以選自D、E、K、R或H。另外，根據(jù)本發(fā)明的上述氨基酸序列可以進(jìn)一步包含氨基酸基序R/K-A/G畫L/V/I-T/D國(guó)x"畫x仏(基序III),其中x"為任何氨基酸殘基，并且X仏為帶電荷的氨基酸殘基。在基序(III)中，x"殘基可以選自A、D、M、R或S，并且x仏選自D、E、K、R或H。相應(yīng)地，本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及包含上述全部三種基序的至少15個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的肽序列。根據(jù)本發(fā)明，這樣的氨基酸序列可以由下式定義x1-xpl-D/E-T-xal-C-(x)n-xp2-(xa)I-(xa)2-x+/--xa2-G-(x)n-R/K-A/G-L/V/I-T/D-xa3-x+/--(x)n,其中Xl、XP1、XP2、X"、X"、X33、(Xa)、X"和(X)n如上文所討論的，或者為包含至少5個(gè)氨基酸殘基的所述序列的片段，所述片段包含下述基序之一xpl-D/E-T-xal-C(基序I)，X^(xa)廣(xa)2-X+、X:G(基序II)或R/K-A/G-L/V/I-T/D-x、x仏(基序III)，其中x151、xp2、xal、x32、x33、(xa)、x+〃如上文所討論的。上述肽序列可以例如包含選自以下序列的序列或其片段、變體或同源物YETKCRDPNPVDSG(SEQIDNO:1)、FETRCKEARPVKNG(SEQIDNO:2)、YETRCKADNAEEGGPGAG(SEQIDNO:3)、FETKCNPMGYTKEG(SEQIDNO:4)、RIDTACV(SEQIDNO:5)、RIDTSCV(SEQIDNO:6)、CVLSRKAVRRA(SEQIDNO:7)、CALSRKIGRT(SEQIDNO:8)、VCTLLSRTGRA(SEQIDNO:9)、VCTLT皿GR(SEQIDNO:10)、SSHPIFHRGEFS(SEQIDNO:11)、YAEHKSHRGEYS(SEQIDNO:12)、SETAPASRRGELA(SEQIDNO:13)、HSDPARRGELS(SEQIDNO:14)、TFVKALTMDGKQAAWR(SEQIDNO:15)、TYVRALTSENNKLVGWR(SEQIDNO:16)、SYVRALTADAQGRVGWR(SEQIDNO:17)、SYVRALT函SKKRIG豐(SEQIDNO:18)、RGIDSKH麗SY(SEQIDNO:19)、RGIDDKH麗SQCKTSQ(SEQIDNO:20)、RGVDRRHWVSE(SEQIDNO:21)、RGIDKRHWNSQ(SEQIDNO:22)、RIDTACVCVLSRKAVRRA(SEQIDNO:23)、RIDTSCVCALSRKIGRT(SEQIDNO:24)、腦TACVCTLLSRTGRA(SEQIDNO:25)、RIDTSCVCTLTIKRGR(SEQIDNO:26)。應(yīng)當(dāng)理解，上述序列SEQIDNO:l-26都包含基序(I)、(II)或(III)中的至少一種。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽序列可以包含選自序列SEQIDNO:5-22的序列，諸如SEQIDNO:5或6,或者例如包含選自序列SEQIDNO:7-1O的序列，或者包含選自序列SEQIDNO:11-14或SEQIDNO:15-22例如選自序列SEQIDNO:15-18或SEQIDNO:19-22的序列。所述肽序列也可以包含序列SEQIDNO:5-22之外的序列。這種肽序列可以是例如選自序列SEQIDNO:l-4的序列，或者是選自序列SEQIDNO:23-26的序列。根據(jù)本發(fā)明，所述肽序列優(yōu)選包含5-25個(gè)氨基酸殘基。如此，在一個(gè)實(shí)施方案中，優(yōu)選的狀序列可以具有5-10個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度，諸如6-9個(gè)氨基酸殘基，例如7個(gè)或8個(gè)氨基酸殘基，或者所述肽序列的長(zhǎng)度可以為11-15個(gè)氨基酸殘基，諸如例如12-14個(gè)氨基酸殘基，例如13個(gè)氨基酸殘基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，優(yōu)選的肽序列的長(zhǎng)度可以為16-25個(gè)氨基酸殘基，例如17-24個(gè)氨基酸殘基，諸如18-23個(gè)，例如19-22個(gè)，它也可以為20個(gè)或21個(gè)氨基酸殘基。然而在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽序列的長(zhǎng)度可以比上述長(zhǎng)度更長(zhǎng)，例如它可以有26-50個(gè)氨基酸殘基。如以上所提到的，本發(fā)明涉及上述肽序列的片段、變體和同源物，其定義如下1)片段指如下序列，該序列的序列長(zhǎng)度的至少40%、更優(yōu)選至少50%、更優(yōu)選至少60%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%對(duì)應(yīng)于包含本發(fā)明基序的序列，特別是選自序列SEQIDNO:l-26的序列。優(yōu)選所述片段包含本發(fā)明的基序；2)變體指如下氨基酸序列，該氨基酸序列與包含本發(fā)明基序的序列，特別是與選自序列SEQIDNO:1-26的序列具有至少60%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選95%的同源性，或者指如下氨基酸序列，該氨基酸序列與包含本發(fā)明基序的序列，特別是與序列SEQIDNO:1-26相比有至少60%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選95%的正的氨基酸匹酉己。本文中正的氨基酸匹配定義為在兩個(gè)進(jìn)行比較的序列中具有相同位置的氨基酸的物理和/或化學(xué)特性所限定的同一性或相似性。本發(fā)明優(yōu)選的正的氨基酸匹配為K與R、E與D、L與M、Q與E、I與V、I與L、A與S、Y與W、K與Q、S與T、N與S及Q與R。一條氨基酸序列與另一條氨基酸序列的同源性定義為兩條進(jìn)行對(duì)比的序列中相同氨基酸的百分比。序列同源性可以利用公知的算法諸如BLOSUM30、BLOSUM40、BLOSUM45、BLOSUM50、BLOSUM55、BLOS麗60、BLOSUM62、BLOSUM65、BLOSUM70、BLOSUM75、BLOSUM80、BLOSUM85、或BLOSUM90來(lái)計(jì)算。優(yōu)選所述變體包含本發(fā)明的基序；3)同源物指如下氨基酸序列，該氨基酸序列與包含本發(fā)明基序的序歹'J，特別是與序列SEQIDNO:1-22具有小于60%但大于30%，諸如50-59%,例如55%，諸如40-49%，例如45%，諸如30-39%,例如35%的同源性。優(yōu)選所述同源物包含本發(fā)明的基序。推測(cè)如上定義的片段、變體和同源物保持了原始序列的至少一些生物學(xué)活性，諸如例如序列SEQIDNO:l-26的生物學(xué)活性，例如刺激與與神經(jīng)細(xì)胞分化有關(guān)的和/或與記憶和學(xué)習(xí)有關(guān)的神經(jīng)可塑性的能力、剌激細(xì)胞存活的能力，例如抑制凋亡的能力或者活化Trk家族的受體的能力。以上描述的所有序列均為根據(jù)本發(fā)明的分離的肽序列。術(shù)語(yǔ)"分離的肽序列"指所述肽序列為個(gè)體化學(xué)實(shí)體。分離的肽序列可以是天然的、合成的或者重組的肽序列或者是通過(guò)酶學(xué)/化學(xué)裂解更大的多肽/蛋白質(zhì)而制備的序列。術(shù)語(yǔ)"天然的"指所述肽序列是機(jī)體代謝系統(tǒng)的一部分并且在體內(nèi)生成。術(shù)語(yǔ)"重組的，，指所述肽序列是通過(guò)重組技術(shù)的方法生產(chǎn)的。這種序列既可以在體內(nèi)生產(chǎn)也可以在體外生產(chǎn)。術(shù)語(yǔ)"合成的"指所述肽序列是以化學(xué)合成手段生產(chǎn)的。根據(jù)本發(fā)明，分離的肽序列可以衍生自蛋白質(zhì)序列。術(shù)語(yǔ)"衍生的，，指所述分離的肽序列具有與蛋白質(zhì)氨基酸序列的內(nèi)部片段相同的氨基酸序列，所述蛋白質(zhì)用作利用任何本領(lǐng)域已知的技術(shù)例如重組生產(chǎn)或者化學(xué)合成技術(shù)生成所述分離的肽序列的原型。如此，本發(fā)明的肽序列可以包含衍生自蛋白質(zhì)序列的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述序列可以衍生自神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF),例如衍生自編號(hào)為SwissProtAcc.No:NP—02497的NGF多肽的序列；在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述序列可以書f生自神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(NT-3)，例如衍生自編號(hào)為SwissProtAcc.No:NP—002518的NT-3多肽的序列；在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述序列可以衍生自神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-4/5(NT-4/5)，例如衍生自編號(hào)為SwissProtAcc.No:AAAV38176的NT-4/5多肽的序列；或者所述序列可以衍生自腦衍生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)，例如衍生自編號(hào)為SwissProtAcc.No:NP—733928的BDNF多肽的序列。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及^f汙生自NGF的序列，其可以選自編號(hào)為SEQIDNO:l、5、7、11、15、19或23的序列。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及^f汙生自NT3的序列，所述序列選自序列SEQIDNO:2、6、8、12、16、20或24。在又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及衍生自NT-4/5的序列。這樣的序列可以選自編號(hào)為SEQIDNO:3、5、9、13、17、21或25的序列。還有，在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及衍生自BDNF序列的序歹寸。后者的序列可以選自編號(hào)為SEQIDNO:4、6、10、14、18、22或26的序列。在本申請(qǐng)中，既使用氨基酸殘基的標(biāo)準(zhǔn)單字母代碼也使用標(biāo)準(zhǔn)三字母代碼。氨基酸的縮寫按照生物化學(xué)命名IUPAC-IUB聯(lián)合委員會(huì)的建議(Eur.J.Biochem，1984,vol.184,pp9-37)。整個(gè)說(shuō)明書和權(quán)利要求書中對(duì)于天然氨基酸使用三字母代碼或者單字母代碼。沒(méi)有指定L或D構(gòu)型時(shí)，所討論的氨基酸理解為具有天然L構(gòu)型，參見(jiàn)Pure&Appl.Chem.Vol.(56(5)pp595-624(1984)或D構(gòu)型，因而所形成的肽可以由氨基酸的L構(gòu)型、D構(gòu)型、或者L構(gòu)型和D構(gòu)型的混合序列構(gòu)成。未指定時(shí)，本發(fā)明肽的C-末端氨基酸理解為以游離羧酸形態(tài)存在，這也可以表示為"-OH"。然而，本發(fā)明復(fù)合物的C-末端氨基酸可以是酰胺化衍生物，其表示為"-NH2"。未作其他陳述時(shí)，多肽的N-末端氨基酸包含游離氨基，這也可以表示為"H-"。未作其它指定時(shí)，氨基酸可以選自任何氨基酸，無(wú)論是天然發(fā)生的或非天然發(fā)生的，諸如a氨基酸、p氨基酸、和/或Y氨基酸。相應(yīng)地，該組包括但不限于Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe、Trp、Met、Gly、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Gln、Asp、Glu、Lys、Arg、His、Aib、Nal、Sar、Orn、賴氨酸類似物、DAP、DAPA和4Hyp。還有，根據(jù)本發(fā)明，可以對(duì)所述復(fù)合物/肽進(jìn)行修飾，諸如例如氨基酸的糖基化和/或乙?；８鶕?jù)本發(fā)明，氨基酸殘基Arg、Lys和His代表堿性氨基酸殘基，氨基酸殘基Glu和Asp代表酸性氨基酸殘基。堿性和酸性氨基酸殘基構(gòu)成帶電荷氨基酸殘基組。氨基酸殘基Leu、Ile、Val、Phe、Trp、Tyr和Met代表疏水性氨基酸殘基組。在一個(gè)實(shí)施方案中，變體可以理解為隨插入、刪除和取代(包括保守性取代)的數(shù)目和范圍增加而顯示出逐漸不同于優(yōu)選的預(yù)定序列的氨基酸序列。此差異以預(yù)定序列與所述變體之間同源性的減小來(lái)測(cè)量。一個(gè)方面，術(shù)語(yǔ)"肽序列變體，，指所述肽可以被修飾，例如取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。L-氨基酸和D-氨基酸均可使用。其它修飾可以包括衍生物，諸如酯、糖等等。例子為曱基和乙?；?。另一方面，根據(jù)本發(fā)明的肽片段的變體可以在同一變體或其片段內(nèi)或者在不同變體或其片段之間包含至少一個(gè)取代，諸如彼此獨(dú)立引入的許多取代。如此，所述復(fù)合體的變體或其片段可以包含彼此獨(dú)立的保守性取代，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)甘氨酸(Gly)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Ala、Val、Leu和Ile;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)丙氨酸(Ala)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Gly、Val、Leu和Ile;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)纈氨酸(Val)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Gly、Ala、Leu和Ile;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)亮氨酸(Leu)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Gly、Ala、Val和Ile;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)異亮氨酸(Ile)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Gly、Ala、Val和Leu;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)天冬氨酸(Asp)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Glu、Asn和Gln;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)天冬酰胺(Asn)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Asp、Glu和Gln;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)谷氨酰胺(Gln)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Asp、Glu和Asn;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)苯丙氨酸(Phe)被選自下組氨基酸Tyr、Trp、His、Pro，優(yōu)選選自下組氨基酸Tyr和Trp的氨基酸所取代；及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)酪氨酸(Tyr)被選自下組氨基酸的氨基酸Phe、Trp、His、Pro,優(yōu)選選自下組氨基酸的氨基酸Phe和Trp所取代；及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)精氨酸(Arg)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Lys和His;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)賴氨酸(Lys)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Arg和His;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)脯氨酸(Pro)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Phe、Tyr、Trp和His;及與此獨(dú)立的，變體或其片段，其中所述變體或其片段的至少一個(gè)半胱氨酸(Cys)被選自下組氨基酸的氨基酸所取代Asp、Glu、Lys、Arg、His、Asn、Gln、Ser、Thr和Tyr。以上討論了肽序列變體的其它標(biāo)準(zhǔn)。如此，從上文得出肽片段的同一功能性等效物或者所述功能性等效物的片段可以包含一個(gè)以上的保守性氨基酸取代，所述保守性氨基酸取代來(lái)自上文限定的一個(gè)以上的保守性氨基酸組。本文所用術(shù)語(yǔ)"保守性氨基酸取代"與術(shù)語(yǔ)"同源性氨基酸取代"同義。保守性氨基酸組如下P、A、G(中性的、弱疏水性的)；S、T(中性的、親水性的)；Q、N(親水性的、酸胺(acidamine));E、D(親水性的、酸性的)；H、K、R(親水性的、石咸性的)；A、L、I、V、M、F、Y、W(疏水性的、芳香族的)；C(形成交聯(lián)的)。而，也可能需要引入非保守性取代，特別是但不限于在任何一個(gè)或多個(gè)位置引入非保守性取代。例如，導(dǎo)致形成本發(fā)明肽的功能上等同的片段的非保守性取代i)在極性上有顯著不同，例如具有非極性側(cè)鏈的殘基(Ala、Leu、Pro、Trp、Val、Ile、Leu、Phe或Met)取代具有極性側(cè)鏈的殘基(諸如Gly、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn或Gln)或帶電荷的氨基酸(諸如Asp、Glu、Arg或Lys),或者帶電荷的或極性的殘基取代非極性的殘基；和/或ii)在其對(duì)肽骨架取向的影響上顯著不同，諸如用Pro或Gly取代另一種殘基或者Pro或Gly被另一種殘基取代；和/或iii)在電荷上顯著不同，例如帶負(fù)電荷的殘基(諸如Glu或Asp)取代帶正電荷的殘基(諸如Lys、His或Arg)，反之亦然；和/或iv)在空間體積上顯著不同，例如大型殘基(諸如His、Trp、Phe或Tyr)取代具有較小側(cè)鏈的殘基(例如Ala、Gly或Ser),反之亦然。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以基于氨基酸側(cè)鏈取代基的疏水性和親水性值以及相對(duì)相似性包括電荷、大小等等來(lái)實(shí)施氨基酸取代?？紤]前述各種特征的示例性氨基酸取代是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，包括精氨酸和賴氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；絲氨酸和蘇氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；以及纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸。根據(jù)本發(fā)明，可以將上述分離的肽序列配制為復(fù)合物(compound)。復(fù)合物可以包含單一拷貝的選自上述任一種的個(gè)體(individual)氨基酸序列，或者可以包含兩個(gè)或多個(gè)拷貝的此種氨基酸序列。這意味著本發(fā)明的復(fù)合物可以配制為肽序列單體，諸如包含單個(gè)個(gè)體肽序列，或者可以配制為肽序列多聚體，即包含兩個(gè)或多個(gè)個(gè)體肽序列，其中所述個(gè)體肽序列可以呈現(xiàn)聚體也可以包含全長(zhǎng)序列與所述序列的一種或多種片段的組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，復(fù)合物可以包含兩條氨基酸序列，這樣的復(fù)合物此處定義為二聚體，在另一個(gè)實(shí)施方案中，復(fù)合物可以包含兩條以上的氨基S吏序列，例如三條、四條或更多條序列。本發(fā)明優(yōu)選涉及包含兩條或四條本發(fā)明的肽序列的復(fù)合物。然而，包含3、5、6、7、8或更多條序列的復(fù)合物也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。配制為二聚體或多聚體的肽片段可以具有相同的氨基S交序列，或者可以具有不同的氨基酸序列。這種復(fù)合物的一個(gè)例子可以是包含SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的復(fù)合物。另一個(gè)例子可以是包含SEQIDNO:3和SEQIDNO:4的復(fù)合物。也可以獲得本發(fā)明序列的任意其它組合。復(fù)合物中的序列可以借助于肽鍵相互連接，或者通過(guò)接頭分子或基團(tuán)(grouping)相互連接。本發(fā)明的復(fù)合物可以包含相同序列的兩個(gè)或多個(gè)相同拷貝，例如兩個(gè)拷貝的選自SEQIDNO:l-26的序列，其中這些序列借助于接頭分子或基團(tuán)相連接。優(yōu)選其中所述序列借助于接頭基團(tuán)相連的復(fù)合物。這種連接基團(tuán)的一個(gè)例子可以是非手性的二、三或四羧酸。合適的非手性二、三或四羧酸和制備這種復(fù)合物的方法(酉己體呈遞裝酉己法(aligandpresentationassembly.method,LPA))描述于WO0018791和WO2005014623。另一種可能的接頭的例子可以是賴氨酸。個(gè)體肽序列可以附著于核心分子例如賴氨酸，從而形成個(gè)體肽序列的樹枝狀多聚體(樹狀聚體)。樹狀聚體的生產(chǎn)也是本領(lǐng)域公知的(PCT/US90/02039;Lu等(1991)MolImmunol.28:623-630;Defoort等(1992)IntJPeptProtRes.40:214-221;Drijfhout等(1991)IntJPeptProtRes.37:27-32),目前樹狀聚體廣泛用于研究和醫(yī)學(xué)應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案是提供包含四條附著于賴氨酸核心分子的個(gè)體氨基酸序列的樹狀聚體復(fù)合物。也優(yōu)選所述四個(gè)個(gè)體氨基酸序列中的至少一個(gè)包含上述通式的氨基酸序列。甚至更加優(yōu)選樹狀聚體復(fù)合物的所有四個(gè)個(gè)體氨基酸序列分別包含上述通式的氨基酸序列。本發(fā)明的多聚體復(fù)合物優(yōu)選配制為L(zhǎng)PA-二聚體或溶素-樹狀聚體。.然而，取決于實(shí)施方案，包含兩個(gè)或多個(gè)本發(fā)明個(gè)體序列的其它類型的多聚體復(fù)合物可能是優(yōu)選的。II.生物學(xué)活性本發(fā)明的肽序列和包含本發(fā)明序列的復(fù)合物擁有生物學(xué)活性。本發(fā)明優(yōu)選涉及選自下述能力的生物學(xué)活性-刺激與神經(jīng)細(xì)胞分化例如神經(jīng)細(xì)胞前體的神經(jīng)突長(zhǎng)出或分化有關(guān)的神經(jīng)可塑性，-刺激與記憶和學(xué)習(xí)有關(guān)的神經(jīng)可塑性，例如形態(tài)學(xué)可塑性和/或突觸功效，-刺激細(xì)胞存活，例如抑制凋亡，和-調(diào)控神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體例如TRK受體或p75(NTR)的活性。如此，在一個(gè)實(shí)施方案中，上述分離的肽序列能夠結(jié)合神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體，所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體是選自TRKA、TRKB和TRKC的TRK受體。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述受體可以是TRKA;在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述受體可以是TRKB;在又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述受體可以是TRKC。本發(fā)明的作者已經(jīng)鑒定了存在于所有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NGF、NT-3、NT-4/5、BDNF)中的氨基酸基序，并且將本發(fā)明的肽片段的生物學(xué)活性與這些基序在其序列中的存在關(guān)聯(lián)起來(lái)。根據(jù)本發(fā)明的基序是本發(fā)明的肽序列結(jié)合TRK受體即TRKA、B或C所必不可少的。TRK受體是神經(jīng)系統(tǒng)中驅(qū)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞分化的主要受體。TRK受體即TRKA、B或C對(duì)促進(jìn)神經(jīng)元存活來(lái)說(shuō)也是很重要的，其涉及與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的神經(jīng)可塑性。如上文所討論的，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體在神經(jīng)系統(tǒng)的正常機(jī)能中扮演重要角色，然而，這些受體也與病理學(xué)相關(guān)。如此，已經(jīng)證明了TRKB的有力致癌效應(yīng)并揭示了特異性促存活(prosurvival)功能，TRKB抑制失巢凋亡(anoikis)(由細(xì)胞-基質(zhì)相互作用喪失引起的凋亡)的能力可能對(duì)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力作出貢獻(xiàn)，為過(guò)表達(dá)TRKB的人類腫瘤的攻擊性本質(zhì)提供了可能的解釋(Douma，S.;vanLaar,T.;Zevenhoven,J,;Meuwissen，R.;vanGarderen,E.;Peeper,D.S.:SuppressionofanoikisandinductionofmetastasisbytheneurotrophicreceptorTrkB.Nature430:1034-1040,2004);已經(jīng)將某些神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(例如BDNF)水平的升高與醫(yī)學(xué)疾患諸如癲癇關(guān)聯(lián)起來(lái)(Binder等，TrendsNeurosci.2001，24:47-53)。如此，本發(fā)明的肽序列結(jié)合神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體和調(diào)控這些受體的活性的能力在正常狀態(tài)和病理學(xué)中均用于調(diào)控依賴于這些受體活性的任何生物學(xué)應(yīng)答。相應(yīng)地，本發(fā)明提供了調(diào)控神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體諸如TRK家族的活性的方法，包括使用本發(fā)明的分離的肽序列或包含所述序列的復(fù)合物。短語(yǔ)"調(diào)節(jié)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體的活性"既涉及活化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體的活性也涉及抑制其活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及活化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體的方法，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及抑制神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體可以是TRKA，在另一個(gè)實(shí)施方案中可以為TRKB,在又一個(gè)實(shí)施方案中可以為TRKC,在一些實(shí)施方案中所迷受體可以是p75(NTR)。本發(fā)明的分離的肽序列能夠刺激神經(jīng)元細(xì)胞分化。術(shù)語(yǔ)"神經(jīng)元分化"既理解為神經(jīng)前體細(xì)胞或神經(jīng)干細(xì)胞的分化，也理解為神經(jīng)元的分化，諸如已分化神經(jīng)元的成熟。這種分化的例子可以是來(lái)自不成熟神經(jīng)元的神經(jīng)突長(zhǎng)出、神經(jīng)突分支、神經(jīng)元再生。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明可以涉及刺激神經(jīng)前體/干細(xì)胞或不成熟神經(jīng)元的分化，在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明可以涉及刺激來(lái)自成熟神經(jīng)元的神經(jīng)突長(zhǎng)出，例如經(jīng)歷損傷但存活下來(lái)的神經(jīng)元。如此，本發(fā)明還涉及刺激神經(jīng)元細(xì)胞分化的方法，包括使用本發(fā)明的肽序列或包含所述序列的復(fù)合物。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及所述肽序列與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的活性。特別地，在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及所述肽序列刺激神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)可塑性例如脊柱形成的能力，在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及所述序列促進(jìn)突觸功效的能力。如此，本發(fā)明進(jìn)一步涉及刺激記憶和/或?qū)W習(xí)的方法，包括使用本發(fā)明的肽序列和/或包含所述序列的復(fù)合物。本發(fā)明既涉及短期記憶又涉及長(zhǎng)期記憶。本發(fā)明的肽序列還能夠刺激神經(jīng)元細(xì)胞存活。本發(fā)明涉及起因于外傷和起因于變性疾病而刺激神經(jīng)元細(xì)胞存活的能力。相應(yīng)地，本發(fā)明進(jìn)一步涉及利用本發(fā)明的肽序列和/或包含所述序列的復(fù)合物刺激細(xì)胞存活，優(yōu)選刺激神經(jīng)元細(xì)力包存活的方法。本發(fā)明的肽序列和包含所述序列的復(fù)合物作為細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基的可溶性/流動(dòng)性物質(zhì)以及作為細(xì)胞生長(zhǎng)底物的固定性物質(zhì)來(lái)說(shuō)都具有生物學(xué)活性。在一些實(shí)施方案中，使用肽或包含該肽的復(fù)合物作為細(xì)胞底物可能是優(yōu)選的。然而，最優(yōu)選可溶性肽序列或包含所述肽序列的復(fù)合物。本申請(qǐng)中描述了本發(fā)明的肽序列和包含所述肽序列的復(fù)合物的生物學(xué)活性的非限制性例子(參見(jiàn)下文的本發(fā)明的說(shuō)明書和實(shí)施例)。神經(jīng)突長(zhǎng)出的刺激具有促進(jìn)神經(jīng)突長(zhǎng)出以及刺激神經(jīng)元細(xì)胞再生和/或分化潛力的物質(zhì)諸如某些內(nèi)源營(yíng)養(yǎng)因子是尋找促進(jìn)例如神經(jīng)元再生和其它形式神經(jīng)可塑性的復(fù)合物時(shí)的首要靶物。為了評(píng)估本發(fā)明復(fù)合物的潛力，可以調(diào)查其刺激神經(jīng)突長(zhǎng)出相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)、干擾細(xì)胞粘附、刺激神經(jīng)突長(zhǎng)出、神經(jīng)再生的能力。已表明本發(fā)明的復(fù)合物促進(jìn)神經(jīng)突長(zhǎng)出，因此認(rèn)為其為神經(jīng)元連接再生以及由此發(fā)生的損傷后機(jī)能恢復(fù)的優(yōu)等促進(jìn)劑，也是需要這種療效的其它疾患中神經(jīng)元機(jī)能的促進(jìn)劑。上下文中"分化"與神經(jīng)元的成熟和神經(jīng)突的伸長(zhǎng)過(guò)程有關(guān)，其發(fā)生于所述神經(jīng)元最后的細(xì)胞分裂之后。本發(fā)明的復(fù)合物可能能夠終止神經(jīng)細(xì)胞分裂并啟動(dòng)所述細(xì)胞的成熟，諸如啟動(dòng)神經(jīng)突的伸長(zhǎng)。另外，"分化"與神經(jīng)元祖細(xì)胞、未成熟神經(jīng)細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞的遺傳學(xué)、生物化學(xué)、形態(tài)學(xué)和生理學(xué)轉(zhuǎn)化進(jìn)程的起始有關(guān)，所述進(jìn)程導(dǎo)致具有正常神經(jīng)元細(xì)胞的功能特征的細(xì)胞的形成，所述特征在本領(lǐng)域中是明確的。本發(fā)明中將"未成熟神經(jīng)細(xì)胞"定義為具有神經(jīng)細(xì)胞的至少一種如下特征的細(xì)胞，所述特征在本領(lǐng)域被公認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞特征性的特征。根據(jù)本發(fā)明，包含至少一種上述肽序列的復(fù)合物能夠刺激神經(jīng)突長(zhǎng)出。本發(fā)明涉及神經(jīng)突長(zhǎng)出的增強(qiáng)/刺激，諸如高于對(duì)照/未刺激細(xì)胞神經(jīng)突長(zhǎng)出值的約50%或75°/。的增強(qiáng)/刺激或更強(qiáng)的刺激，諸如100°/。-150°/。之間，例如約125%,諸如150%-200%之間，例如約175%,諸如250%-300%之間，例如約275%，諸如300%-350%之間，例如約325%,諸如350%-400%之間，例如約375%,諸如400%-450%之間，例如約425°/。，諸如450%-500%之間，500%-600%或超過(guò)600%?？梢酝ㄟ^(guò)采用評(píng)估神經(jīng)突長(zhǎng)出的任何已知的方法或測(cè)試來(lái)進(jìn)行候選復(fù)合物刺激神經(jīng)突長(zhǎng)出能力的評(píng)估，諸如例如本申請(qǐng)實(shí)施例1中所描述的方法或測(cè)試。根據(jù)本發(fā)明，復(fù)合物作為細(xì)胞生長(zhǎng)底物的不溶性固定性組分和細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基的可溶性組分都具有神經(jīng)突發(fā)生活性。本文中"固定性"指所述復(fù)合物結(jié)合/附著于不溶于水或水溶液的物質(zhì)，并因此變得在這種溶液中同樣不能溶解。對(duì)于醫(yī)學(xué)應(yīng)用來(lái)說(shuō)，不溶性和可溶性復(fù)合物都可以考慮，但可溶性復(fù)合物是優(yōu)選的。"可溶性復(fù)合物"理解為可溶于水或水溶液的復(fù)合物。神經(jīng)元存活的刺激具有因損傷增強(qiáng)神經(jīng)元細(xì)胞存活以及抑制創(chuàng)傷和疾病中神經(jīng)元細(xì)胞變性和/或凋亡潛力的物質(zhì)是尋找候選復(fù)合物的首要靶物，所述候選復(fù)合物用于治療神經(jīng)變性疾病諸如例如阿爾茨海默氏病或帕金森氏病的新藥。為了評(píng)估本發(fā)明肽的潛力，可以調(diào)查其刺激存活相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)、干擾細(xì)胞反應(yīng)相關(guān)凋亡、刺激神經(jīng)再生的能力。已表明本發(fā)明的復(fù)合物促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞存活并減少細(xì)胞損失，因此認(rèn)為其為促進(jìn)腦和/或周圍神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)連接再生，以及由此發(fā)生的因創(chuàng)傷或疾病而促進(jìn)損傷后機(jī)能恢復(fù)的優(yōu)等候選物，也是任何需要此種效應(yīng)的其它疾患中神經(jīng)元功能的促進(jìn)劑。上下文中"存活"與涉及細(xì)胞損傷后細(xì)胞功能的維持和/或恢復(fù)的進(jìn)程有關(guān)。本發(fā)明的復(fù)合物可能能夠終止或減弱致使細(xì)胞死亡的進(jìn)程，諸如抑制由起因于創(chuàng)傷或疾病的細(xì)胞損傷所啟動(dòng)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。其它方面，"存活"與抑制涉及導(dǎo)致細(xì)胞死亡的細(xì)胞損傷的進(jìn)程有關(guān)，并且與啟動(dòng)細(xì)胞的遺傳學(xué)、生物化學(xué)、形態(tài)學(xué)和生理學(xué)轉(zhuǎn)化或重建進(jìn)程有關(guān)，特別是神經(jīng)元細(xì)胞，諸如祖細(xì)胞、不成熟神經(jīng)細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞或者具有本領(lǐng)域定義的正常功能特征的成熟神經(jīng)細(xì)胞。本發(fā)明中將"不成熟神經(jīng)細(xì)胞"定義為具有神經(jīng)細(xì)胞的至少一種如下特征的細(xì)胞，所述特征在本領(lǐng)域被公認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞特征性的特征。根據(jù)本發(fā)明，包含至少一種上述肽序列的復(fù)合物能夠刺激神經(jīng)細(xì)胞存活。本發(fā)明涉及神經(jīng)細(xì)胞存活刺激，諸如高于對(duì)照/未刺激細(xì)胞存活值的大約75%的刺激,例如50%，諸如大約150%,例如100°/。，諸如大約250%,例如200%，諸如大約350%，例如300%，諸如大約450%,例如400%，諸如大約500%。可以通過(guò)釆用評(píng)估細(xì)胞存活的任何已知的方法或測(cè)試來(lái)進(jìn)行候選復(fù)合物刺激神經(jīng)細(xì)胞存活能力的評(píng)估，諸如例如本申請(qǐng)實(shí)施例2中所描述的方法或測(cè)試。根據(jù)本發(fā)明，復(fù)合物作為不溶性和可溶性復(fù)合物均具有存活促進(jìn)活性。本文中"不溶性"指所述復(fù)合物結(jié)合/附著于不溶于水或水溶液的物質(zhì)，并因此所述復(fù)合物變得在這種溶液中同樣不能溶解。對(duì)于醫(yī)學(xué)應(yīng)用來(lái)說(shuō)，不溶性和可溶性復(fù)合物都可以考慮，但可溶性復(fù)合物是優(yōu)選的。"可溶性復(fù)合物"理解為可溶于水或水溶液的復(fù)合物。III.個(gè)體肽序列的生產(chǎn)本發(fā)明的肽序列可以通過(guò)任何常規(guī)的合成方法、重組DNA技術(shù)、衍生所述肽序列的全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的酶學(xué)裂解、或上述方法的組合來(lái)制備。重組制備如此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽利用重組DNA技術(shù)來(lái)生產(chǎn)。編碼肽或衍生所述肽的相應(yīng)全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的DNA序列可以通過(guò)合成途徑來(lái)制備，其中使用已制定的標(biāo)準(zhǔn)方法，例如Beaucage和Caruthers，1981，TetrahedronLett.22:1859-1869描述的磷酰脒(phosphoamidine)法、或者M(jìn)atthes等，1984,EMBOJ.3:801-805描述的方法。根據(jù)^疇酰脒法，寡核香酸例如在自動(dòng)DNA合成儀中合成、純化、退火，在合適的載體中連接和克隆。也可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案，利用DNA酶I將編碼衍生肽的相應(yīng)全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的DNA序列片段化來(lái)制備編碼肽的DNA序列(Sambrook等，Molecularcloning:ALaboratorymanual.第二版，CSHLPress,ColdSpringHarbor,NY，1989)。本發(fā)明涉及選自以上鑒定的蛋白質(zhì)的全長(zhǎng)蛋白質(zhì)。或者可以利用特異性限制性內(nèi)切核酸酶將編碼本發(fā)明全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的DNA片段化。利用Sambrook等，Molecularcloning:ALaboratorymanual.第二版,CSHLPress,ColdSpringHarbor,NY，1989中描述的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程進(jìn)一步純化所述DNA片段。編碼全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的DNA序列也可以是基因組或cDNA來(lái)源的，例如通過(guò)制備基因組或cDNA文庫(kù)并篩選編碼全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的全部或一部分的DNA序列而獲得，所述篩選依照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)利用合成寡核苷酸探針雜交進(jìn)行(參考Sambrook等,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第二版,ColdSpringHarbor,1989)。也可以利用特異性引物通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來(lái)制備所述DNA序列，例如如US4，683,202或Saiki等，1988,Science239:487-491中所述。然后將所述DNA序列插入到重組表達(dá)載體中，所述重組表達(dá)載體可以是能夠方便地實(shí)施重組DNA規(guī)程的任何載體。載體的選擇通常取決于其所要導(dǎo)入的宿主細(xì)胞。如此，所述載體可以是自主復(fù)制載體，即作為染色體外實(shí)體存在的載體，其復(fù)制獨(dú)立于染色體復(fù)制，例如質(zhì)粒?；蛘?，所述載體可以是當(dāng)導(dǎo)入到宿主細(xì)胞中時(shí)，整合到宿主細(xì)胞基因組中并與其已經(jīng)整合到其中的染色體一起復(fù)制的載體。編碼肽或全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的DNA序列在載體中應(yīng)當(dāng)可操作地連接到合適的DNA序列，可以衍生自編碼與所述宿主細(xì)胞同源或異源的蛋白質(zhì)的基因。指(Subramani等，1981,Mol.CellBiol.1:854-864)、MT-1(金屬硫蛋白基因)啟動(dòng)子(Palmiter等，1983,Science222:809-814)或腺病毒2主要晚期啟動(dòng)子。用于昆蟲細(xì)胞的合適啟動(dòng)子是多角體蛋白啟動(dòng)子(Vasuvedan等，1992,FEBSLett.311:7-11)。用于酵母宿主細(xì)胞的合適啟動(dòng)子包括來(lái)自酵母糖酵解基因(Hitzeman等，1980,J.Biol.Chem.255:12073-12080;Alber和Kawasaki,1982,J.Mol.Appl.Gen.1:419-434)或醇脫氫酶基因(Young等，1982,于GeneticEngineeringofMicroorganismsforChemicals,Hollaender等編,PlenumPress,NewYork)的啟動(dòng)子，或者TPIl(US4,599,311)或ADH2-4c(Russell等，1983，Nature304:652-654)啟動(dòng)子。用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的合適啟動(dòng)子為例如ADH3啟動(dòng)子(McKnight等，1985，EMBOJ.4:2093-2099)或tpiA啟動(dòng)子。所述編碼DNA序列也可以可操作地連接到合適的終止子，諸如人生長(zhǎng)激素終止子(Palmiter等，前面引用的)或(用于真菌宿主)TPIl(Alber和Kawasaki，前面引用的)或ADH3(McKnight等，前面引用的)啟動(dòng)子。所述載體可以進(jìn)一步包含其他成分，諸如多聚腺苷酸化信號(hào)(例如來(lái)自SV40或腺病毒5Elb區(qū))、轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子序列(例如SV40增強(qiáng)子)和翻譯增強(qiáng)子序列(例如編碼腺病毒VARNA的那些)。所述重組表達(dá)載體可以進(jìn)一步包含能夠使所述載體在所述宿主細(xì)胞中復(fù)制的DNA序列。這種序列的例子(宿主細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí))是SV40復(fù)制起點(diǎn)。所述載體還可以包含可選4奪標(biāo)記，例如其產(chǎn)物彌補(bǔ)宿主細(xì)胞的缺陷的基因，諸如編碼二氫葉酸還原酶(DHFR)的基因或賦予藥物抗性例如新霉素、潮霉素或曱氨蝶呤抗性的基因。用于分別連接編碼肽或全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的DNA序列、啟動(dòng)子和終止子并將它們插入到包含復(fù)制所必需的信息的適當(dāng)載體中的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的(參見(jiàn)例如Sambrook等，前面引用的)。為了獲得本發(fā)明的重組肽，有益地可以將編碼DNA序列與第二個(gè)肽編碼序列和蛋白酶裂解位點(diǎn)編碼序列融合在一起，提供編碼融合蛋白的DNA構(gòu)建體，其中蛋白酶裂解位點(diǎn)編碼序列位于HBP片段和第二個(gè)肽編碼DNA之間，DNA構(gòu)建體凈皮插入到重組表達(dá)載體中，并在重組宿主細(xì)胞中表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二個(gè)肽選自但不限于包含谷胱甘肽-S-還原酶、小牛胸腺素、細(xì)菌硫氧還蛋白或人泛素天然或合成變體、或其肽在內(nèi)的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，肽序列所包含的蛋白酶裂解位點(diǎn)可以是具有氨基S踏列/五Gi的因子X(jué)a裂解位點(diǎn)、具有氨基酸序列DDDZ^:的腸激酶裂解位點(diǎn)、具有氨基酸序列丄K尸^/GS的凝血酶裂解位點(diǎn)、或具有氨基酸序列ZKZ的水解無(wú)色桿菌表達(dá)載體導(dǎo)入到其中的宿主細(xì)胞可以是能夠表達(dá)所述肽或全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的任何細(xì)胞，優(yōu)選真核細(xì)胞，諸如無(wú)脊推動(dòng)物(昆蟲)細(xì)胞或脊推動(dòng)物細(xì)胞，例如爪蟾(Xem^us/aev/"卵母細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞，特別是昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。合適的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的例子是HEK293(ATCCCRL-1573)、COS(ATCCCRL-1650)、BHK(ATCCCRL-1632、ATCCCCL畫10)或CHO(ATCC方法描述于例如Kaufman和Sharp,J.Mol.Biol.159,1982,pp.601-621;Southern和Berg，1982,J.Mol.Appl.Genet.1:327-341;Loyter等，1982，Proc,Natl.Acad.Sci.USA79:422-426;Wigler等，1978,Cell14:725;Corsaro和Pearson,1981,于SomaticCellGenetics7,p.603;Graham和vanderEb，1973,Virol.52:456;以及Neumann等，1982,EMBOJ.1:841-845?；蛘?，真菌細(xì)胞(包括酵母細(xì)胞)可以用作宿主細(xì)胞。合適的酵母細(xì)胞的例子包括糖酵母(/Sacc/^ramyc&ss//7.)或裂殖糖酵母(iSc/n'zcwflcc/zGra，cas^p,)纟田月包，特別是釀酒糖酵母CSacc/zara^yc^cerevWae)菌才朱。其它真菌細(xì)胞的例子是絲狀真菌，例如曲霉(A;erg/〃ww/7.)或脈孢霉(A^wmy;ora^/.)，特別是米曲霉(Js/erg7'〃usOAyz"e)或黑曲霉(^4^erg/〃asw'ger)的菌才朱。曲霉用于表達(dá)蛋白質(zhì)的用途描述于例如EP238023。用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基可以是適合于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的任何常規(guī)培養(yǎng)基，諸如含血清的或無(wú)血清的、含有合適添加物的培養(yǎng)基，或者用于培養(yǎng)昆蟲、酵母或真菌細(xì)胞的合適培養(yǎng)基?？蓮墓?yīng)商那里獲得合適的培養(yǎng)基，或者也可以按照公開的配方(例如美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)的目錄中的)制備合適的培養(yǎng)基。然后，可以通過(guò)常規(guī)規(guī)程從培養(yǎng)液回收由細(xì)胞重組生產(chǎn)的肽或全長(zhǎng)蛋白質(zhì)，所述常規(guī)規(guī)程包括通過(guò)離心或過(guò)濾從培養(yǎng)液分離宿主細(xì)胞，以鹽例如石克酸銨的手段沉淀上清液或?yàn)V出液的蛋白質(zhì)組分，通過(guò)各種層析規(guī)程例如HPLC、離子交換層析、親和層析等等的純化。合成制備合成生產(chǎn)肽的方法是本領(lǐng)域公知的。生產(chǎn)合成肽的詳細(xì)說(shuō)明和實(shí)踐建議可以在SyntheticPeptides:AUser'sGuide(AdvancesinMolecularBiology),GrantG.A,編，OxfordUniversityPress,2002或者PharmaceuticalFormulation:DevelopmentofPeptidesandProteins,Frokjaer和Hovgaard編，Taylor和Francis,1999中找到。例如，可以利用Fmoc化學(xué)和Acm保護(hù)的半胱氨酸來(lái)合成肽。用反相HPLC純化后，可以進(jìn)一步處理肽以獲得例如環(huán)狀或C-或N-末端修飾的同等型(isoform)。環(huán)化和末端修飾的方法是本領(lǐng)域公知的，詳細(xì)描述于上文引用的手冊(cè)中。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽序列以合成途徑生產(chǎn)，特別是使用序列輔助的肽合成(S叫uenceAssistedP印tideSynthesis,SAPS)法。通過(guò)SAPS，肽可以在配備有過(guò)濾用的聚丙烯濾器的聚乙烯容器中分批合成，或者使用用作N-a-氨基保護(hù)基團(tuán)的9-芴曱氧羰基(Fmoc)或叔丁氧羰基流動(dòng)型聚酰胺固相法(Dryland,A.和Sheppard,R.C.(1986)J.Chem.Soc.PerkinTrans.I,125-137)合成。然后可以在合成后利用本領(lǐng)域公知的技術(shù)將個(gè)體肽序列配制為多聚體，例如所述序列的二聚體可以通過(guò)WO00/18791中描述的LPA法來(lái)獲得，樹枝狀聚合物可以通過(guò)PCT/US90/02039描述的MAP合成法來(lái)獲得。IV.抗體本發(fā)明的一個(gè)目的是提供能夠識(shí)別并選擇性結(jié)合NGF、NT-3、NT-4/5、BDNF上的表位的抗體、其抗原結(jié)合片段或重組蛋白，所述表位包含本發(fā)明的基序或選自SEQIDNO:l-26的序列或所述序列的片段。術(shù)語(yǔ)"表位"指受到(抗原的)抗體識(shí)別(由此引起免疫應(yīng)答)的(抗原分子上的)特定原子群。術(shù)語(yǔ)"表位，，與術(shù)語(yǔ)"抗原決定簇，，等同。表位可以包含非常接近的(諸如位于連續(xù)氨基酸序列中的，或者位于抗原氨基酸序列的遠(yuǎn)離部分但由于蛋白質(zhì)折疊已經(jīng)相互靠近的)3個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基，諸如例如4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)氨基酸殘基。抗體分子屬于稱為免疫球蛋白的血漿蛋白質(zhì)家族，免疫球蛋白的基本構(gòu)件即免疫球蛋白折疊或結(jié)構(gòu)域以多種形式用于免疫系統(tǒng)及其它生物識(shí)別系統(tǒng)的許多分子中。典型的免疫球蛋白具有四條多肽鏈，包含稱為可變區(qū)的抗原結(jié)合區(qū)和稱為恒定區(qū)的不變區(qū)。天然抗體和免疫球蛋白通常為約15O，OOO道爾頓的異四聚體糖蛋白，由兩條相同的輕(L)鏈和兩條相同的重(H)鏈構(gòu)成。每條輕鏈由一個(gè)共價(jià)二硫鍵連接于重鏈，然而二硫鍵的數(shù)目在不同免疫球蛋白同種型重鏈之間有變化。每條重鏈和輕鏈還具有規(guī)則間隔的鏈內(nèi)二硫鍵。每條重鏈一端具有一個(gè)可變域(VH),接下來(lái)是多個(gè)恒定域。每條輕鏈在一端具有一個(gè)可變域(VL),在其另一端具有一個(gè)恒定域。輕鏈的恒定域與重鏈的第一個(gè)恒定域排列在一起，輕鏈可變域與重鏈可變域排列在一起。據(jù)信特定氨基酸殘基形成輕鏈和重鏈可變區(qū)之間的界面(NovotnyJ&HaberE.ProcNatlAcadSciUSA82(14):4592-6，1985)。依據(jù)其重鏈恒定域的氨基酸序列，可以將免疫球蛋白指定為不同的類。至少有五(5)大類免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中幾種可以進(jìn)一步分為亞類(同種型)，例如IgG-l、IgG-2、IgG-3和IgG-4;IgA-l和IgA-2。對(duì)應(yīng)于不同免疫球蛋白類的重鏈恒定域分別稱為alpha(a)、delta(S)、epsilon(s)、gamma(y)和muO)?？贵w的輕鏈可以基于其恒定域的氨基酸序列指定為稱為kappa(K)和lambda(X)的兩種截然不同的型之一。不同類免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)造是公知的。在抗體可變域的上下文中術(shù)語(yǔ)"可變"指抗體當(dāng)中可變域的某些部分在序列上差異非常大的事實(shí)?？勺冇蛴糜诮Y(jié)合并決定每種特定抗體對(duì)其特定抗原的特異性。然而，可變性在整個(gè)抗體可變域中不是均勻分布的。在輕鏈和重鏈可變域中，可變性都集中于稱為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)也稱為高變區(qū)的三個(gè)區(qū)段?？勺冇蚋痈叨缺Ｊ氐牟糠址Q為框架區(qū)(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個(gè)大量采用P-片層構(gòu)象的FR區(qū)，其通過(guò)三個(gè)CDR相連，這三個(gè)CDR形成連接(3-片層結(jié)構(gòu)的環(huán)，在一些情況下構(gòu)成P-片層結(jié)構(gòu)的一部分。每條鏈中的CDR通過(guò)FR非常緊密地保持在一起，與另一條鏈中的CDR—起對(duì)抗體的抗原結(jié)合部位的形成作出貢獻(xiàn)。恒定域不直接涉及抗體與抗原的結(jié)合，但展現(xiàn)多種效應(yīng)器功能，諸如抗體參與抗體依賴性細(xì)胞毒性。如此，設(shè)想用于本發(fā)明的抗體可以具有多種形式中的任何一種，包括完整免疫球蛋白，抗體片段諸如Fv、Fab、以及類似片段，包括可變域互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的單鏈抗體等等形式，所有這些都落在本文所用廣義術(shù)語(yǔ)"抗體"的范圍內(nèi)。本發(fā)明設(shè)想了具有任何特異性的抗體的應(yīng)用，多克隆的或單克隆的，不限于識(shí)別并與特定抗原發(fā)生反應(yīng)的抗體。在優(yōu)選實(shí)施方案中，在下述的抗體或其片段。術(shù)語(yǔ)"抗體片段"指全長(zhǎng)抗體的一部分，通常指抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)?？贵w片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab'》和Fv片段。抗體的木瓜蛋白酶消化產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段，稱為Fab片段，每個(gè)都具有單一的抗原結(jié)合位點(diǎn)，和剩余的"Fc"片段，由于其易于結(jié)晶的能力而稱為"Fc"片段。胃蛋白酶處理產(chǎn)生具有能夠交聯(lián)抗原的兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的F(ab')2片段，和剩余的其它片段(稱為pFc')。其他片段可包括雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子、以及由抗體片段形成的多特異性抗體。本文所用抗體的"功能性片段"指Fv、F(ab)和F(ab')2片段。本文術(shù)語(yǔ)"抗體片段"可與術(shù)語(yǔ)"抗原結(jié)合片段"互換使用。抗體片段可以短至約4個(gè)氨基酸、5個(gè)氨基酸、6個(gè)氨基酸、7個(gè)氨基酸、9個(gè)氨基酸、約12個(gè)氨基酸、約15個(gè)氨基酸、約17個(gè)氨基酸、約18個(gè)氨基酸、約20個(gè)氨基酸、約25個(gè)氨基酸、約30個(gè)氨基酸或更多個(gè)氨基酸。通常本發(fā)明的抗體片段可以具有任何尺寸上限，只要其相對(duì)于特異性結(jié)合如下表位的抗體來(lái)說(shuō)具有類似的或免疫學(xué)的特性，所述表位包含選自本文編號(hào)為SEQIDNO:l-22的任一序列或所述序列的片段的肽序列。如此，本發(fā)明的上下文中術(shù)語(yǔ)"抗體片段"等同于術(shù)語(yǔ)"抗原結(jié)合片段"?？贵w片段保留了一些與其抗原或受體選擇性結(jié)合的能力。一些抗體片段類型如下定義(1)Fab指包含抗體分子的單價(jià)抗原結(jié)合片段的片段。Fab片段可以用木瓜蛋白酶消化完整抗體產(chǎn)生完整輕鏈和一條重鏈的一部分而制備。(2)Fab，指可以用胃蛋白酶處理完整抗體，之后還原以產(chǎn)生完整輕鏈和重鏈的一部分而獲得的抗體分子的片段。每個(gè)抗體分子獲得兩個(gè)Fab，片段。(3)Fab'片段與Fab片段的不同在于重鏈CHl結(jié)構(gòu)域的羧基末端添加了幾個(gè)殘基，包括一個(gè)或多個(gè)來(lái)自抗體絞鏈區(qū)的半胱氨酸。(4)(Fab，)2指可以用胃蛋白酶處理完整抗體隨后不經(jīng)還原而獲得的抗體片段。F(ab，)2指通過(guò)兩個(gè)二硫鍵保持在一起的兩個(gè)Fab，片段的二聚體。(5)Fv是包含完整抗原識(shí)別與結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。該區(qū)域由緊密、非共價(jià)結(jié)合的一個(gè)重鏈可變域和一個(gè)輕鏈可變域的二聚體(VH-VL二聚體)構(gòu)成。正是在這種構(gòu)象中，每個(gè)可變域的三個(gè)CDR相互作用而在VH-VL二聚體表面上確定了抗原結(jié)合位點(diǎn)。六個(gè)CDR共同賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即便是單一的可變域(或者是只包含三個(gè)抗原特異性CDR的半個(gè)Fv)也具有識(shí)別并結(jié)合抗原的能力，雖然其親和力低于完整的結(jié)合位點(diǎn)。(6)單鏈抗體("SCA")定義為包含通過(guò)適當(dāng)?shù)亩嚯慕宇^連接的輕鏈可變區(qū)、重鏈可變區(qū)的遺傳工程化分子，其為遺傳工程手段融合的單鏈分子。這樣的單鏈抗體也稱為"單鏈Fv，，或"sFv"抗體片段。通常，F(xiàn)v多肽在VH和VL結(jié)構(gòu)域之間進(jìn)一步包含多肽接頭，其使sFv能夠形成所需的用于抗原結(jié)合的結(jié)構(gòu)。有關(guān)sFv的綜述參見(jiàn)Pluckthun,于ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies113:269-315,Rosenburg和Moore編，Springer陽(yáng)Verlag,NY,1994。(7)術(shù)語(yǔ)"雙抗體(diabodies)"指具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小抗體片段，所述片段包含同一多肽鏈中相連的重鏈可變域(VH)的輕鏈可變域(VL)(VH-VL)。通過(guò)使用太短而不允許同一條鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域配對(duì)的接頭，迫使所述結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)，產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。例如EP404,097;WO93/11161;以及Hollinger等，Prob.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)中更為詳細(xì)地描述了雙抗體。本發(fā)明既設(shè)想了能夠結(jié)合本發(fā)明表位的多克隆抗體和單克隆抗體，也設(shè)想了其能夠結(jié)合本發(fā)明表位的抗原結(jié)合片段和重組蛋白。多克隆抗體的制備是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。參見(jiàn)例如Green等，1992,ProductionofPolyclonalAntisera,于ImmunochemicalProtocols(Manson編)，1-5頁(yè)(HumanaPress);Coligan等,ProductionofPolyclonalAntiserainRabbits,Rats,MiceandHamsters,于CurrentProtocolsinImmunology,第2,4.1節(jié)，這些文獻(xiàn)加入本文作為參考文獻(xiàn)。單克隆抗體的制備同樣是常規(guī)的。參見(jiàn)例如Kohler和Milstein,Nature,256:495-7(1975);Coligan等，第2.5.1-2.6.7節(jié)；以及Harlow等，Antibodies:ALaboratoryManual,726頁(yè)，ColdSpringHarborPub.(1988)。單克隆抗體可以通過(guò)多種成熟的技術(shù)從雜交瘤培養(yǎng)物分離和純化。這些分離技術(shù)包括使用蛋白A-Sepharose的親和層析、大小排阻層析、和離子交換層析。參見(jiàn)例如Coligan等，第2.7.1-2.7.12節(jié)和第2.9.1-2.9.3節(jié);Barnes等,PurificationofImmunoglobulinG(IgG).于MethodsinMolecularBiology,1992,10:79-104，HumanaPress,NY。體外和體內(nèi)操作單克隆抗體的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。例如，根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可以通過(guò)雜交瘤法制備，所述雜交瘤法由Kohler和Milstein，1975,Nature256,495-7首次描述，或者可以通過(guò)重組法制備，其描述于例如US4,816,567。供本發(fā)明使用的單克隆抗體也可以利用Clackson等，1991，Nature352:624-628以及Marks等，1991，JMolBiol222:581-597中描述的技術(shù)從噬菌體抗體文庫(kù)分離。另一種方法涉及將單克隆抗體人源化，所述人源化通過(guò)重組手段制備包含人特定的和可識(shí)別的序列的抗體而實(shí)施。綜述參見(jiàn)Holmes等，1997,JImmunol158:2192-220l和Vaswani等，1998，AnnalsAllergy,Asthma&Immunol81:105-115。本文所用術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"指由基本上同質(zhì)的抗體群體獲得的抗體，即除了可能少量存在的天然發(fā)生的突變之外，構(gòu)成所述群體的個(gè)體抗體是相同的。單克隆抗體是高度特異性的，針對(duì)單個(gè)抗原位點(diǎn)。另外，與典型地包括針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的常規(guī)多克隆抗體制品相反，每種單克隆抗體針對(duì)抗原上的單個(gè)決定簇。在其特異性之外，單克隆抗體由于是通過(guò)雜交瘤培養(yǎng)物合成的，不受其它免疫球蛋白的污染而具有優(yōu)勢(shì)。所述修飾語(yǔ)"單克隆，，指從基本上同質(zhì)的抗體群體獲得的抗體的特征，不能理解為需要以任何特定方法生產(chǎn)所述抗體。本文中單克隆抗體特別包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與源于特定物種或?qū)儆谔囟贵w類或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的其余部分與源于另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及這些抗體的片段，只要它們顯示所需的生物學(xué)活性(US4,816,567;和Morrison等，1984，ProcNatlAcadSci,81:6851-6855)。制備抗體片段的方法也是本領(lǐng)域已知的(參見(jiàn)例如，Harlow和Lane,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,NY，1988，力口入本文作為參考文獻(xiàn))。本發(fā)明的抗體片段可以通過(guò)抗體的蛋白水解或者通過(guò)在大腸桿菌中表達(dá)編碼所述片段的DNA而制備?？贵w片段可以通過(guò)完整抗體的胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化的常規(guī)方法獲得。例如，可以用胃蛋白酶酶學(xué)裂解抗體，提供稱為F(ab，)2的5S片段而制備抗體片段?？梢岳昧虼歼€原劑進(jìn)一步裂解該片段，以及任選用到由二硫鍵裂解而來(lái)的巰基的封閉基團(tuán)，以制備3.5SFab，單價(jià)片段?；蛘哂梦傅鞍酌该笇W(xué)裂解直接制備兩個(gè)單價(jià)Fab，片段和一個(gè)Fc片段。這些方法描述于例如US4,036,945和US4,331，647以及包含于其中的參考文獻(xiàn)。此處將這些專利文獻(xiàn)整體加入作為參考文獻(xiàn)。也可以使用其它裂解抗體的方法，諸如分離重鏈形成單價(jià)輕鏈-重鏈片段，進(jìn)一步裂解片段，或者其它酶學(xué)、化學(xué)、或遺傳技術(shù)，只要所述片段結(jié)合由所述完整抗體識(shí)別的抗原。例如，F(xiàn)v片段包含VH與VL鏈的結(jié)合。這種結(jié)合可以是非共價(jià)的，或者可變鏈可以由分子間二好J定連接或者由化學(xué)藥品諸如戊二醛交聯(lián)。優(yōu)選Fv片段包含由肽接頭連接的VH和VL鏈。這些單鏈抗原結(jié)合蛋白(sFv)通過(guò)構(gòu)建如下結(jié)構(gòu)基因而制備，所述結(jié)構(gòu)基因包含由寡核苷酸連接的編碼VH和VL結(jié)構(gòu)域的DNA序列。將所述結(jié)構(gòu)基因插入到表達(dá)載體中，隨后將表達(dá)載體導(dǎo)入到宿主細(xì)胞諸如大腸桿菌中。重組宿主細(xì)胞合成由接頭肽橋接兩個(gè)V結(jié)構(gòu)域的單個(gè)多肽鏈。例如，Whitlow等，1991,于Methods:ACompaniontoMethodsinEnzymology,2:97;Bird等，1988，Science242:423-426;US4,946,778;和Pack等，1993,BioTechnology11:1271-77描述了制備sFv的方法。另一種形式的抗體片段是編碼單一互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的肽。CDR肽("最小識(shí)別單元，，)通常涉及抗原識(shí)別和結(jié)合。CDR肽可以通過(guò)克隆或構(gòu)建編碼感興趣抗體的CDR的基因而獲得。例如，利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)制備這些基因，由生產(chǎn)抗體的細(xì)胞自RNA合成可變區(qū)。參見(jiàn)例如Larrick等，Methods:aCompaniontoMethodsinEnzymology,Vol.2，p.106(1991)。本發(fā)明設(shè)想了人和人源化形式的非人(例如鼠)抗體。這些人源化抗體是包含衍生自非人免疫球蛋白的最小序列諸如表位識(shí)別序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(諸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗體的其它抗原結(jié)合子序列)。很大程度上，人源化抗體指其中來(lái)自受體互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的殘基被具有所需特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)CDR的殘基所置換的人免疫球蛋白(受體抗體)，所述非人物種為諸如小鼠、大鼠或兔。包含本發(fā)明抗體最小序列諸如識(shí)別本文所述表位的序列的人源化抗體是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案之一。一些情況下，人免疫球蛋白的Fv框架殘基由相應(yīng)的非人殘基所置換。此夕卜，人源化抗體可以包含在受體抗體和引入的CDR或框架序列中都未發(fā)現(xiàn)的殘基。構(gòu)建了這些修飾以進(jìn)一步改進(jìn)和優(yōu)化抗體性能?？偟膩?lái)說(shuō)，人源化抗體基本上會(huì)包含至少一個(gè)、和典型地兩個(gè)整個(gè)這樣的可變區(qū)，其中所有的或者基本上所有的CDR區(qū)對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白的那些CDR區(qū)，并且所有的或者基本上所有的FR區(qū)均為人免疫球蛋白共有序列的FR區(qū)。最佳地，人源化抗體還將包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)典型地人免疫球蛋白恒定區(qū)的至少一部分。更多詳情參見(jiàn)Jones等，1986,Nature321,522-525;Reichmann等,1988,Nature332,323-329;Presta，1992，CurrOpStructBiol2:593-596;Holmes等，1997,JImmunol158:2192-220l和Vaswani等，1998,AnnalsAllergy,Asthma&Immunol81:105-115?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域用于制備多克隆和單克隆抗體的任何標(biāo)準(zhǔn)方法生產(chǎn)抗體，利用人NGF、NT-3、NT-4/5、BDNF的天然或重組片^殳作為抗原，所述片段包含選自SEQIDNO:l-26的序列。也可以利用肽序列SEQIDNO:l-26的變體、同源物或片段制備這些抗體，所述變體、同源物和片段是滿足下述標(biāo)準(zhǔn)的免疫原性肽序列(i)為至少5個(gè)氨基酸的連續(xù)氨基酸序列；(ii)包含本發(fā)明的基序。也可以例如將根據(jù)本發(fā)明的免疫原性片段施用于個(gè)體，由待治療的個(gè)體在體內(nèi)產(chǎn)生抗體。相應(yīng)地，本發(fā)明進(jìn)一步涉及包含上述免疫原性片段的疫苗。本申請(qǐng)還涉及生產(chǎn)本發(fā)明的抗體的方法，所述方法包括提供上述免疫原性片段的步驟。本發(fā)明既涉及能夠調(diào)控諸如增強(qiáng)或減弱NGF、NT-3、NT-4/5、BDNF的生物學(xué)功能，特別是涉及神經(jīng)細(xì)胞分化、存活和/或可塑性的功能的抗體，又涉及能夠識(shí)別和特異性結(jié)合后者所述蛋白質(zhì)但不調(diào)控其生物學(xué)活性的抗體。本發(fā)明涉及上述抗體用于1)調(diào)控人NGF、NT-3、NT-4/5、BDNF的活性對(duì)治療有益時(shí)的治療性應(yīng)用，2)診斷目的的體外和/或體內(nèi)檢測(cè)和/或監(jiān)測(cè)后者所述蛋白，3)研究目的的用途。V.藥物組合物本發(fā)明還涉及包含如上定義的一種或多種復(fù)合物的藥物組合物，其中所述復(fù)合物能夠刺激神經(jīng)突長(zhǎng)出和/或神經(jīng)細(xì)胞分化、神經(jīng)細(xì)胞存活和/或?qū)W習(xí)和/或記憶。如此，本發(fā)明涉及能夠刺激神經(jīng)元細(xì)胞分化和/或刺激神經(jīng)元細(xì)胞再生、和/或剌激與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的神經(jīng)元可塑性、和/或刺激神經(jīng)細(xì)胞存活的藥物組合物。上下文中所用術(shù)語(yǔ)"藥物組合物"與術(shù)語(yǔ)"藥劑(medicament)"同義。在組合物中，肽序列可以配制為包含上述分離的個(gè)體肽片段或其多聚體或二聚體。所述藥物組合物在體外或體內(nèi)可以具有針對(duì)細(xì)胞的上述效應(yīng)，其中將所述組合物施用于受試者。本發(fā)明的藥劑包含有效量的一種或多種上述定義的復(fù)合物，或者包含如上定義的組合物與藥學(xué)上可接受的添加劑的組合?？梢赃m當(dāng)?shù)嘏渲七@種藥劑以用于口服、經(jīng)皮、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、顱內(nèi)、鞘內(nèi)、腦室內(nèi)、鼻內(nèi)或肺部給藥?；诒景l(fā)明復(fù)合物的藥劑和組合物的劑型開發(fā)策略通常與基于任何其它蛋白質(zhì)的藥物產(chǎn)品的劑型策略一致。幾本教科書中討論了潛在的問(wèn)題以及克月良這些問(wèn)題所需的教導(dǎo)，例如"TherapeuticPeptidesandProteinFormulation-ProcessingandDeliverySystems",A.K.Banga編,TechnomicPublishingAG,Basel,1995?？勺⑸涞闹苿┩ǔＶ苽錇橐簯B(tài)溶液或懸浮液、適于在注射之前溶解于或懸浮于液體中的固體形式。也可以乳化所述制品。通常將活性成分與藥學(xué)上可接受的且與所述活性成分相容的賦形劑混合。合適的賦形劑為例如水、鹽水、右旋糖、甘油、乙醇等等及其組合。此外，需要的話，所述制品可以含有少量輔助物質(zhì)，諸如潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖劑、或提高制劑的效果或方便其運(yùn)輸?shù)妮o助物質(zhì)。本發(fā)明復(fù)合物的制劑可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)來(lái)制備。所述制劑可以含有藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑，包括微球體、脂質(zhì)體、微膠嚢、納米顆粒等等?？梢赃m當(dāng)?shù)赝ㄟ^(guò)注射施用所述制品，任選在活性成分要發(fā)揮其效應(yīng)的部位注射。適合于其它給藥方式的其他制劑包括栓劑、鼻腔的、肺部的以及一些情況中口服的劑型。對(duì)于栓劑，傳統(tǒng)的粘合劑和載體包括聚亞烷基二醇或甘油三酯。這些栓劑可以由含有0.5%到10%，優(yōu)選1-2%的活性成分的混合物構(gòu)成?？诜苿┌ㄕＧ闆r下使用的賦形劑，諸如例如藥用級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等等。這些組合物為溶液、懸浮液、藥片、藥丸、膠嚢、持續(xù)釋放制劑或粉末的形式，通常含有10-95%的活性成分，優(yōu)選25-70%。其它制劑為適于鼻腔和肺部給藥的制劑，諸如例如吸入劑和氣霧劑。活性復(fù)合物可以配制為中性或鹽的形式。藥學(xué)上可接受的鹽包括酸加成鹽(與肽復(fù)合物的游離氨基一起形成)，其由無(wú)機(jī)酸諸如例如鹽酸或磷酸或有機(jī)酸諸如醋酸、草酸、酒石酸、苦杏仁酸等等形成。由游離羧基形成的鹽也可以衍生自無(wú)機(jī)堿諸如例如氬氧化鈉、鉀、銨、鈣、或鐵，以及有機(jī)堿諸如異丙胺、三曱胺、2-乙胺基乙醇(ethylaminoethano1)、組氨酸、普魯卡因等等。所述制品以與劑量制劑相容的方式施用，這樣的量將是治療上有效的。所要施用的量取決于所要治療的受試者，包括例如受試者的體重和年齡、所要治療的疾病以及疾病的發(fā)展階段。合適的劑量范圍在正常情況下為每次給藥每公斤體重幾百嗎數(shù)量級(jí)的活性成分，優(yōu)選范圍為每公斤體重約0.1嗎至5000嗎。使用單體形式的復(fù)合物時(shí)，合適的劑量通常為每公斤體重0.1嗎至5000嗎的范圍，諸如每公斤體重約0.1iig至3000jxg的范圍，尤其是每公斤體重約0.1嗎到1000iiig的范圍。使用多聚體形式的復(fù)合物時(shí)，合適的劑量通常為每公斤體重0.1]Lig至1000iig的范圍，諸如每公斤體重約0.1嗎至750嗎的范圍，尤其是每公斤體重約0.1fig到500嗎的范圍，諸如每公斤體重約0.1嗎到250(ig的范圍。特別是鼻腔給藥時(shí)，使用比其它途徑給藥更小的劑量。可以一次給藥或者后續(xù)給藥。劑量也將取決于給藥途徑，并且會(huì)隨著所治療的受試者的年齡和體重而變化。多聚體形式的優(yōu)選劑量介于每70kg體重lmg至70mg。對(duì)于一些適應(yīng)征，優(yōu)選局部或基本上局部用藥。本發(fā)明的一些復(fù)合物活性是足夠的，但是對(duì)于其它一些復(fù)合物，如果所述制品進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的添加劑和/或載體則將增強(qiáng)其效力。這些添加劑和載體將是本領(lǐng)域已知的。在一些例子中，包括促進(jìn)活性物質(zhì)向其目標(biāo)遞送的化合物將是有益的。許多情況下，多次施用所述制劑是必要的?？梢赃B續(xù)輸注給藥，諸如心室內(nèi)輸注，或者施用多劑，諸如一天多次、每天一次、一周多次、每周一次等等。優(yōu)選在個(gè)體已經(jīng)遭受可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡的因素之前或者之后不久開始施用所述藥劑。優(yōu)選在所述因素出現(xiàn)8小時(shí)內(nèi)施用所述藥劑，諸如在所述因素出現(xiàn)5小時(shí)內(nèi)。許多復(fù)合物具有長(zhǎng)期效應(yīng)，由此可以以較長(zhǎng)時(shí)間間隔施用所述復(fù)合物，諸如1周或2周。與神經(jīng)導(dǎo)管(nerveguide)的應(yīng)用有關(guān)，可以基于活性復(fù)合物的受控釋放連續(xù)或分為小份施用。此外，可以使用前體來(lái)控制釋放速率和/或釋放部位。類似地，其他類型的植入物以及口服給藥可以基于受控釋放和/或前體的應(yīng)用。如以上所討論的，本發(fā)明涉及治療個(gè)體以在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化、刺激其再生、可塑性和存活，所述治療涉及施用有效量的上述一種或多種復(fù)合物。另一種給藥策略是植入或注射能夠表達(dá)和分泌所述復(fù)合物的細(xì)胞。由此可以在其要發(fā)揮作用的部位產(chǎn)生所述復(fù)合物。VI.治療又一方面，本發(fā)明涉及所述肽、或其片段、變體誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化和/或刺激其再生、可塑性和/或存活的用途。所述用途是治療、預(yù)防中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)、以及肌肉或多種器官的疾病和疾患。在一個(gè)實(shí)施方案中，利用根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合物/組合物進(jìn)行治療可用于誘導(dǎo)植入或移植細(xì)胞的分化、調(diào)控其增殖、刺激其再生、神經(jīng)元可塑性和存活。這在使用具有長(zhǎng)期效應(yīng)的復(fù)合物時(shí)特別有用。如此，所述治療包括與中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)疾病或疾患有關(guān)的細(xì)胞死亡的治療和/或預(yù)防，所述疾病或疾患為諸如手術(shù)后神經(jīng)損傷(postoperativenervedamage)、夕卜傷'f生4申纟至損、傷(traumaticnervedamage)例長(zhǎng)口由脊ft^員傷(spinalcordinjury)引起的、神經(jīng)纖維骨i鞘形成減弱(impairedmyelinationofnervefiber)、缺血后損傷(postischaemicdamage)例如由中風(fēng)(stroke)引起的、多梗塞性癡呆(multiinfarctdementia)、多發(fā)性硬化(multiplesclerosis)、與糖尿病有關(guān)的神經(jīng)變性(nervedegenerationassociatedwithdiabetesmellitus)、神經(jīng)-肌肉變性(neuro-musculardegeneration)、精神分裂癥(schizophrenia)、阿耳茨海默氏病(Alzheimer'sdisease)、帕金森氏病(Parkinson，sdisease)、或亨廷頓氏病(Huntington'sdisease)。同樣，與肌肉有關(guān)的疾病或疾患，包括神經(jīng)-肌肉連接機(jī)能減弱的疾患，t者^(guò)口遺傳'l"生或夕卜傷'性萎縮'l"生肌肉病癥(geneticortraumaticatrophicmuscledisorder);或者對(duì)于多種器官的疾病或疾患，諸如生殖腺、胰腺(諸如I型和II型糖尿病)、腎臟(諸如腎病)的變性疾患(degenerativecondition)的治療來(lái)說(shuō)，根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合物可用于誘導(dǎo)分化、調(diào)控增殖、刺激再生、神經(jīng)元可塑性和存活，即刺激存活。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述復(fù)合物和/或藥物組合物的用途是用于刺激學(xué)習(xí)和/或短期和/或長(zhǎng)期記憶的能力。具體而言，本發(fā)明的復(fù)合物和/或藥物組合物可用于治療臨床疾患，諸如精神病(psychoses),諸如老年性和早老性器質(zhì)性精神疾患(senileandpresenileorganicpsychoticconditions)、酒精中毒性精神病(alcoholicpsychoses)、藥物性神經(jīng)病(drugpsychoses)、瞬時(shí)性器質(zhì)性4青4申疾患(transientorganicpsychoticcondition),阿耳茨海默氏病、腦脂質(zhì)沉積(cerebrallipidoses),癲癇(epilepsy)、全身性輕癱(generalparesis)[梅毒(syphilis)]、肝豆?fàn)詈俗冃?hepatolenticulardegeneration)、亨廷頓氏舞蹈癥(Huntington'schorea)、雅誦克二氏病(Jakob-Creutzfeldtdisease),多發(fā)性硬化、月鹵的皮克氏病(Pick'sdiseaseofthebrain)、梅毒(syphilis)、精神分裂性障礙(Schizophrenicdisorder)、情感性精神病(affectivepsychoses)、神經(jīng)癥性障礙(neuroticdisorder),人格障礙(personalitydisorder)包括性格神經(jīng)癥(characterneurosis)、與器質(zhì)性腦病綜合征(organicbrainsyndrome)有關(guān)的非精神病人格障礙(nonpsychoticpersonalitydisorder)、偏執(zhí)型人格障礙(paranoidpersonalitydisorder)、狂信型人格(fanaticpersonality)、類偏執(zhí)性人格(障礙)(paranoidpersonality(disorder))、偏執(zhí)狂才羊特性(paranoidtraits)、性偏離和紊舌L(sexualdeviationsanddisorders)、4青神發(fā)育遲緩(mentalretardation)、神經(jīng)系統(tǒng)和感覺(jué)器官的疾病、認(rèn)知異常(cognitiveanomalies)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎性疾病諸如腦膜炎(meningitis)、月a炎(encephalitis);腦變性(Cerebraldegeneration)i者如阿耳茨海默氏病、皮克氏病、腦的老年性變性(seniledegenerationofbrain)、交通性腦積水(communicatinghydrocephalus)、阻塞性腦積水(obstructivehydrocephalus)、巾白金森氏病包括其它錐體夕卜束病(extrapyramidaldisease)和異常運(yùn)動(dòng)障礙(abnormalmovementdisorders)、脊fi小腦疾病(spinocerebellardisease)、小腦性共濟(jì)失調(diào)(cerebellarataxia)、馬里氏病(Marie's)、桑格-布朗二氏病(Sanger-Brown)、肌陣攣性小腦協(xié)同失調(diào)(Dyssynergiacerebellarismyoclonica)、原發(fā)'l"生小月畝變'l"生(primarycerebellardegeneration)i者長(zhǎng)口脊骨it'l"生月幾萎縮(spinalmuscularatrophy)、家族性(familial)、幼年型(juvenile)、成人型(adult)脊髓性月幾萎縮、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病(motorneurondisease),肌萎縮性側(cè)索硬化(amyotrophiclateralsclerosis)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病(motorneurondisease)、進(jìn)4亍性延髓性麻痹(progressivebulbarpalsy)、邗支性延髄性麻痹(pseudobulbarpalsy)、原發(fā)性側(cè)索硬化(primarylateralsclerosis)、其它前角細(xì)月包疾病(otheranteriorhorncelldiseases)、未定性的(unspecified)前角細(xì)胞疾病、其它脊髓疾病、脊骨A空；同癥(syringomyelia)禾口延ft空洞癥(syringobulbia)、血管'f生脊骨it病(vascularmyelopathies)、急性脊髓梗塞(acuteinfarctionofspinalcord)(才全塞性(embolic))(非栓塞性(nonembolic))、脊髓動(dòng)脈血檢形成(arterialthrombosisofspinalcord)、脊髓水胂(edemaofspinalcord)、亞急性壞死性脊髓病(subacutenecroticmyelopathy),疾病分類中其它地方的亞急性脊髓混合變性(subacutecombineddegenerationofspinalcord)、脊ft病(myelopathy)、藥物i秀發(fā)的(drug-induced)、輻射謙發(fā)的(radiation-induced)脊髓炎(myelitis)、自主神經(jīng)系統(tǒng)障礙(disordersoftheautonomicnervoussystem)、夕卜周自主(peripheralautonomic)、交感(sympathetic)、副交感(parasympathetic)或才直4勿(vegetative)系統(tǒng)障礙、家族性缺陷自主癥(familialdysautonomia)[賴?yán)?戴綜合征(Riley-Daysyndrome)]、特發(fā)性周圍自主神經(jīng)病(idiopathicperipheralautonomicneuropathy)、頸動(dòng)脈竇性暈厥或綜合征(carotidsinussyncopeorsyndrome)、頸交感神經(jīng)性營(yíng)養(yǎng)不良或麻瘠(cervicalsympatheticdystrophyorparalysis);疾病分類中其它地方的周圍自主神經(jīng)病(peripheralautonomicneuropathy)、淀4分才羊變(amyloidosis)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)疾病、臂叢病損(brachialplexuslesions)、頸月力綜合征(cervicalribsyndrome)、月力鎖綜合征(costoclavicularsyndrome)、前4斗角月幾綜合征(scalenusanteriorsyndrome)、胸出口綜合4正(thoracicoutletsyndrome)、臂叢神經(jīng)炎(brachialneuritis)或神經(jīng)才艮炎(radiculitis)包4舌新生兒的，炎性和毒性神經(jīng)病(inflammatoryandtoxicneuropathy)包4舌急性傳染性多神經(jīng)炎(acuteinfectivepolyneuritis)、吉蘭-巴雷綜合征(Guillain-Barr6syndrome)、感染后多神經(jīng)炎(Postinfectiouspolyneuritis)、膠原血管病(collagenvasculardisease)中的多神經(jīng)病(polyneuropathy)、4曼襲目艮睛多種結(jié)構(gòu)的病癥、化膿性眼內(nèi)炎(purulentendophthalmitis)、耳和乳突疾病、新生兒器官和軟組織異常包括神經(jīng)系統(tǒng)中的、分娩(laboranddelivery)過(guò)程中施用麻醉劑或其它鎮(zhèn)靜劑的并發(fā)癥、皮膚病包括感染、循環(huán)不充分的問(wèn)題、損傷包括手術(shù)后的、壓碎性損傷(crushinginjury)、燒傷(burns);對(duì)神經(jīng)和脊髓的損傷，包4舌神經(jīng)分開(divisionofnerve)、連續(xù)性病變(lesionincontinuity)(有或沒(méi)有開放性傷口的)、創(chuàng)傷性神經(jīng)瘤(traumaticneuroma)(有或沒(méi)有開放性傷口的)、夕卜傷性瞬時(shí)麻痹(traumatictransientparalysis)(有或沒(méi)有開放性傷口的)、醫(yī)療過(guò)程中意外刺傷(puncture)或撕裂(laceration)、視神經(jīng)和通道損傷、視神經(jīng)即第二腦神經(jīng)損傷、視交叉損傷、視通道損傷、視皮層損傷、未定性的失明、其它腦神經(jīng)損傷、其它的和未定性的神經(jīng)的損傷；藥物、醫(yī)學(xué)和生物學(xué)物質(zhì)中毒，遺傳性或外傷性萎縮性肌肉病癥；或者用于多種器官的疾病或疾患的治療，諸如生殖腺、胰腺(諸如I型和II型糖尿病)、腎臟(諸如腎病)的變性疾患。本發(fā)明的又一方面是生產(chǎn)藥物組合物的方法，包括將有效量的一種或多種本發(fā)明復(fù)合物、或者根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的添加劑或載體混合，為受試者施用有效量的至少一種所述復(fù)合物、或所述藥物組合物。在上述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述復(fù)合物與假體裝置(prostheticdevice)組合使用，其中所述裝置是修復(fù)性神經(jīng)導(dǎo)管(prostheticnerveguide)。如此，另一方面，本發(fā)明涉及修復(fù)性神經(jīng)導(dǎo)管，特征在于其包括一種或多種如上定義的復(fù)合物或藥物組合物。神經(jīng)導(dǎo)管是本領(lǐng)域已知的。本發(fā)明的另一方面涉及如上定義的復(fù)合物的用途。具體而言，根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合物的用途是用于生產(chǎn)藥物組合物。所述藥物組合物優(yōu)選用于治療或預(yù)防以上提到的任一種疾病和疾患。又一方面，本發(fā)明涉及通過(guò)施用本文定義的復(fù)合物以治療上述疾病或疾患的方法。實(shí)施例方法培養(yǎng)物中原代神經(jīng)元的神經(jīng)突長(zhǎng)出解離的小腦神經(jīng)元分離自7日齡的大鼠。在冰冷的改良KrebsRinger溶液中從腦中分離出小腦，去除血管，通過(guò)剁碎粗略地均質(zhì)化，然后胰蛋白酶消化。在DNA酶1和大豆胰蛋白酶抑制劑存在下清洗解離的細(xì)胞。出生后海馬神經(jīng)元或小腦顆粒神經(jīng)元(CGN)在添加有0.4。/。(w/v)牛血清清蛋白(BSA;Sigma-Aldrich)、2%(v/v)B27神經(jīng)基質(zhì)添力口物(Neurobasalsupplement)、1%(v/v)glutamax、100U/ml青霉素、100ng/ml鏈霉素和2。/。1MHEPES(均來(lái)自Gibco，BRL)的神經(jīng)基質(zhì)培養(yǎng)基(Neurobasalmedium)中在未包被的8孔permanoxLab-Tek腔式載玻片上以10,000細(xì)胞/cm2的密度鋪板。24小時(shí)后，神經(jīng)元用4%(v/v)曱醛固定20分鐘，此后用針對(duì)GAP-43的第一兔抗體和AlexaFluor第二山羊抗兔Ig抗體免疫染色。對(duì)于每個(gè)個(gè)體實(shí)驗(yàn)中的每個(gè)組，通過(guò)之前描述的計(jì)算機(jī)輔助的焚光顯樣i術(shù)(R0nn等，2000)系統(tǒng)地獲得至少200個(gè)神經(jīng)元的圖像。簡(jiǎn)言之，用偶聯(lián)到攝像機(jī)(GrundigElectronics,Germany)的帶有NikonPlan20x物鏡的NikonDiaphot倒置顯微鏡(Nikon，Tokyo,Japan)記錄。用ProteinLaboratory(Copenhagen,Denmark)開發(fā)的^^牛包Prima進(jìn)^f亍基于體-見(jiàn)學(xué)的神經(jīng)突長(zhǎng)度測(cè)定(R0nn等，2000)。原代培養(yǎng)物中的神經(jīng)元細(xì)胞存活CGN原代培養(yǎng)物在添加有2。/。(v/v)B27、0.5°/。(v/v)glutamax、100U/ml青霉素、100fig/ml鏈霉素和KCl的神經(jīng)基質(zhì)-A培養(yǎng)基(Gibco，BRL)中在聚-L-賴氨酸包被的8孔permanox載玻片上以100,000細(xì)胞/cm2的密度鋪板，其中KC1在培養(yǎng)基中的終濃度為40mM。鋪板后24小時(shí)，添加胞嘧啶-D-阿拉伯呋喃糖苷(arabinofliranoside)(Ara-C;Sigma-Aldrich)至終濃度10nM，以避免神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增殖，之后讓神經(jīng)元于37。C進(jìn)一步分化6天。通過(guò)清洗兩次并將培養(yǎng)基改為添加有1%(v/v)谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100iLig/mL鏈霉素、3.5gd-葡萄糖/L和1。/。(v/v)丙酮酸鈉(GibcoBRL)以及不同濃度的肽的Eagle氏基本培養(yǎng)基(BME;GibcoBRL),來(lái)誘導(dǎo)凋亡性細(xì)胞死亡。由此，培養(yǎng)物中鉀的濃度降低到5mMKCl。誘導(dǎo)凋亡后兩天，細(xì)胞用4。/。(v/v)曱醛固定并用Hoechst33258染色(D，Merllo等，1993)。外傷性腦損傷模型通過(guò)將一塊干冰(-78。C)直接敷用在小鼠頭骨上30秒，敷用在大鼠頭骨上60秒而造成右側(cè)頂額(fronto-parietal)皮層的病灶性腦損傷，如之前所詳細(xì)描述的(Penkowa等，2003)。組織處理在從取自固定的動(dòng)物的器官切下的切片上實(shí)施組織化學(xué)和免疫組化。大鼠和小鼠用Brietal深度麻醉，并用含肝素(heparine)的鹽水(0.9。/。NaCl、3ml/L5000IU肝素)心臟灌注沖洗2分鐘，之后根據(jù)動(dòng)物的大小用Zamboni氏固定劑(pH7.4)固定4-8分鐘。對(duì)于免疫組化研究，解剖腦并在Zamboni氏固定劑中后固定2-3小時(shí)，繼分級(jí)醇(gradedalcohol)之后在二曱苯中脫水，隨后石蠟包埋，然后貫穿整個(gè)凍傷部分切成3pm額切片(frontalsection)。為了熱誘導(dǎo)的表位恢復(fù)，將所述切片置于檸檬酸鹽緩沖液(pH6或9)中在《敫波爐中煮沸10分鐘，之后于室溫在含10。/。山羊血清(InVitro,Fredensborg,DK)或驢血清(編號(hào)BP005.1;TheBindingSite,Birmingham,UK)的tris緩沖鹽水(TBS)/NonidetP-40(0.01%)中溫育30分鐘。還將用于與單克隆小鼠衍生抗體一起溫育的帶小鼠組織的切片與來(lái)自HistoMouse-SP試劑盒的封閉液A+B—起溫育，以淬滅內(nèi)源性'J、鼠IgG(Zymed,CA,USA)。免疫組化和組織化學(xué)經(jīng)過(guò)上述處理之后，于5。C將切片與下述第一抗體之——起溫育過(guò)夜在山羊血清中l(wèi):100稀釋的單克隆小鼠抗8-羥基脫氧鳥苷(8-OH-dG)(DNA氧化的標(biāo)志物；Chemicon,Temacula，CA,USA);l:250稀釋的多克隆兔抗牛神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)(星形細(xì)胞的標(biāo)志物；DakoCytomation)。用生物素化的第二抗體檢測(cè)第一抗體，即與鏈霉親合素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合體一起溫育30分鐘。生物素化的番茄凝集素(Sigma,Vallensbaek，DK)用作小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬紳胞的標(biāo)志物。凝集素染色如制造商所述用鏈霉親合素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合體(StreptABComplex/HRP;DakoCytomation,Glostrup,DK)進(jìn)一步顯影，于室溫(RT)顯影30分鐘。以DAB為色原體，用含0.015%H202的3，3，-二氨基聯(lián)苯胺/TBS(DAB/TBS)使凝集素反應(yīng)產(chǎn)物顯影。NGF衍生肽NGF-C2CVLSRKAVRRANGF-DETKCRDPNPVDSGNGF-ERGIDSKH顧SYNGF陽(yáng)C1RIDTACVNGF-EETFVKALTMDGKQAAWRNGF-NSSHPIFHRGEFSBDNF衍生肽BDNF-ERGIDKRH畫SQBDNF-EESYVRALTMDSKKRIGWR結(jié)果實(shí)施例l:神經(jīng)突長(zhǎng)出的刺激用不同濃度(3-81jig/ml)的肽NGF-C2、NGF-D、NGF-E、NGF-C1、47SEQIDNO:7SEGIDNO:27(N端截短一個(gè)aa的SEQIDNO:1)SEQIDNO:19SEQIDNO:5SEQIDNO:15SEQIDNO:11SEQIDNO:22SEQIDNO:18NGF-EE、BDNF-E或BDNF-EE處理如上制備的CGN。從圖l、2、4和5可以看到，包含指定結(jié)構(gòu)基序的肽NGF-C2(基序II)、NGF-E(基序m)、NGF-C1(基序I)、NGF-EE(基序III)、BDNF-E(基序III)或BDNF-EE(基序m)均顯著刺激來(lái)自培養(yǎng)物中的原代神經(jīng)元的神經(jīng)突長(zhǎng)出。相比之下，缺少基序I的必需疏水性殘基的肽NGF-D不具有神經(jīng)突發(fā)生活性(圖1)。實(shí)施例2:神經(jīng)元細(xì)胞存活的刺激在體內(nèi)和在體外都4企驗(yàn)不同肽對(duì)神經(jīng)元存活的影響。對(duì)于體外試驗(yàn)，CGR神經(jīng)元的培養(yǎng)物如上制備，并用不同濃度的NGF-E、NGF-EE或NGF-N處理。從圖3可以看到，所有測(cè)試的肽都顯著促進(jìn)培養(yǎng)物中CGN的存活。體內(nèi)試驗(yàn)-通過(guò)將一塊干冰(-78。C)直接敷用在小鼠頭骨上30秒，敷用在大鼠頭骨上60秒而造成右側(cè)頂額皮層的病灶性腦損傷，如之前所詳細(xì)描述的(Penkowa等，2003)。通過(guò)將一塊干冰(-78。C)直接敷用在小鼠頭骨上30秒，敷用在大鼠頭骨上60秒而造成右側(cè)頂額(fronto-parietal)皮層的病灶性腦損傷，如之前所詳細(xì)描述的(Penkowa等，2003)。處理后，如下所述，于5。C將切片與下述第一抗體之——起溫育過(guò)夜在山羊血清中1:100稀釋的單克隆小鼠抗8-羥基脫氧鳥苦(8-OH-dG)(DNA氧化的標(biāo)志物；Chemicon,Temacula，CA，USA);1:2S0稀釋的多克隆兔抗牛神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)(星形細(xì)胞的標(biāo)志物；DakoCytomation)。用生物素化的第二抗體檢測(cè)第一抗體，即與鏈霉親合素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合體一起溫育30分鐘。生物素化的番茄凝集素(Sigma,Vallensbek，DK)用作小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物。凝集素染色如制造商所述用鏈霉親合素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合體(StreptABComplex/HRP;DakoCytomation，Glostrup，DK)進(jìn)一步顯影，于室溫(RT)顯影30分鐘。以DAB為色原體，用含0.015%&02的3,3，-二氨基聯(lián)苯胺/TBS(DAB/TBS)使凝集素反應(yīng)產(chǎn)物顯影。病變(lesion)之后的第(-l)天、第l天和第3天通過(guò)皮下注射肽(1Omg/kg/注射)處理動(dòng)物。用BDNF-EE肽處理病變大鼠導(dǎo)致氧化應(yīng)激的抑制(表現(xiàn)為DNA氧化的標(biāo)志物8-羥基脫氧鳥苷的免疫染色)、小膠質(zhì)細(xì)胞活化的抑制(表現(xiàn)為活化的小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物番茄凝集素的結(jié)合)、和皮層星形細(xì)胞的活化(表現(xiàn)為GFAP的免疫染色)。實(shí)施例3:NGF和BDNF衍生肽與TrkA、TrkB、TrkC和P75的結(jié)合表面等離振子共振(SPR)分析于25。C,采用含有10mMHepes,pH7.4、150mMNaCl、3mMEDTA和0.005%P20的HBS-EP運(yùn)行緩沖液，利用BIAlite儀器(BiacoreAB，Uppsala,瑞典)通過(guò)表面等離振子共振(SPR)分析NGF衍生肽NGF-C2、NGF-E、NGF-EE和NGF以^BDNF衍生肽BDNF-C1、BDNF-C2、BDNF-E、BDNF-EE和BDNF與Trk受體TrkA、TrkB、TrkC和P75受體的結(jié)合。在傳感器芯片CM4上利用胺偶聯(lián)試劑盒如下固定TrkA、TrkB和TrkC受體以及p75^^:用20inl活化液，N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和N-乙基-N，-(3-二乙基氨丙基)-碳二亞胺(EDC)活化芯片，用30pl溶于50nl10mM醋酸鈉緩沖液(pH4.0)中的4pl(0.5ng/ml)蛋白質(zhì)的混合物固定蛋白質(zhì)；并用35pl封閉液(乙醇胺-HCl)封閉芯片。各配體注射之間用15|il2mMNaCl或10mM甘氨酸-HCl，pH2.5使受體表面再生。本試驗(yàn)中使用5fil/min的流速。用相應(yīng)于結(jié)合Trk受體或p75WTR受體和空白芯片之間的差異的曲線進(jìn)行分析。計(jì)算得出的親和常數(shù)(Ko)列于表l。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>權(quán)利要求1.一種分離的肽序列，其包含5-25個(gè)連續(xù)氨基酸殘基，所述序列包含氨基酸基序xp1-D/E-T-xa1-C(基序I)，其中xp1為疏水性氨基酸殘基，并且xa1為K、R、S或A。2.根據(jù)權(quán)利要求l的分離的肽序列，其中x^是Y、F或I。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的分離的肽序列，所述序列包含氨基酸基序xP2-(xa)-(Xa)-X仏-X"畫G(基序II),其中X^為疏水性或堿性氨基酸殘基，(X"為任何氨基酸殘基或鍵，x仏為帶電荷的氨基酸殘基，并且x"為任何氨基酸殘基。其中xP2是A、L、P或Y。其中xP2是K。其中(x"是選自A、E、F、I、L、R、S、其中至少一個(gè)(力是鍵。其中xa2是選自A、E、G、I、N、R、S4.根據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列5.根據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列6.根據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列T或V的氨基酸殘基。沖艮據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列才艮據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列或T的氨基酸殘基。7.根據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列，其中x+〃選自D、E、K、R或H。8.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的分離的肽序列，所述肽序列包含下式的氨基^列或其片段，Xl-Xpl-D/E-T-Xal-C畫(X)n-xP2隱(xa)畫(xa)-X仏-X"-G-(X)n，^申x,為任何氨基酸殘基，(x)n為鍵或任何氨基酸殘基序列，其中n為l到5的整數(shù)，并且xpl、xp2、xal、x"、(xa)、x仏如權(quán)利要求l-9中所定義的。9.根據(jù)權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)的分離的肽序列，所述序列包含氨基酸基序10.11.根據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列根據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列根據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列T或V的氨基酸殘基。沖艮據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列才艮據(jù)權(quán)利要求3的分離的肽序列或T的氨基酸殘基。R7K-A/G-L/V/I-T/D-x"-x+z—(基序III),其中x"為任何氨基酸殘基，并且,為帶電荷的氨基酸殘基。12.根據(jù)權(quán)利要求ll的分離的肽序列，其中x"選自A、D、M、R或S。13.根據(jù)權(quán)利要求11或12的分離的肽序列，其中x仏選自D、E、K、R或H。14.根據(jù)權(quán)利要求11-13任一項(xiàng)的分離的肽序列，所述肽序列包含下式的氨基^列或其片段，x廣xP!-D/E-T-xaJ畫C-(x)n-xP2-(xa)-(xa)畫x仏-x"-G-(x)n陽(yáng)R/K-A/G-L/V/I畫T/D-x33-X仏-(X)n，其中Xl、XP1、XP2、X"、X"、X33、(Xa)、X仏和(X)n如權(quán)利要求l-13中所定義的。15.根據(jù)權(quán)利要求10或14的分離的肽序列，其中所述片段包含以下任何氨基酸基序xpl-D/E-T-xal-C(基序I)，xP2畫(Xa)-(Xa)-X仏-X義G(基序II)或R/K-A/G-L/V/I-T/D-x、x,基序ni)，其中xP1、xp2、xal、x32、xa3、(xa)、xW-如權(quán)利要求l-14中所定義的。16.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的分離的肽序列，其中所述肽序列能夠刺激神經(jīng)突長(zhǎng)出。17.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的分離的肽序列，其中所述肽序列能夠刺激神經(jīng)可塑性，諸如與學(xué)習(xí)和/或記憶有關(guān)的神經(jīng)可塑性。18.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的分離的肽序列，其中所述肽序列能夠刺激細(xì)胞分化，諸如神經(jīng)干細(xì)胞分化或腫瘤細(xì)胞分化。19.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的分離的肽序列，其中所述肽序列能夠調(diào)控神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體的活性。20.根據(jù)權(quán)利要求19的分離的肽序列，其中所述序列能夠活化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體。21.根據(jù)權(quán)利要求19的分離的肽序列，其中所述序列能夠抑制神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體。22.根據(jù)權(quán)利要求19或20的分離的肽序列，其中所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體是TrkA、TrkB或TrkC。23.根據(jù)權(quán)利要求19或21的分離的肽序列，其中所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體是p75Trk。24.根據(jù)前述權(quán)利要求19-22任一項(xiàng)的分離的肽序列，其中所述肽序列能夠刺激細(xì)胞存活。25.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的分離的肽序列，其中所述序列選自下述氨基^列或其片段或變體YETKCRDPNPVDSG(SEQIDNO:1)、FETRCKEARPVKNG(SEQIDNO:2)、YETRCKADNAEEGGPGAG(SEQIDNO:3)、FETKCNPMGYTKEG(SEQIDNO:4)、RIDTACV(SEQIDNO:5)、RIDTSCV(SEQIDNO:6)、CVLSRKAVRRA(SEQIDNO:7)、CALSRKIGRT(SEQIDNO:8)、VCTLLSRTGRA(SEQIDNO:9)、VCTLTIKRGR(SEQIDNO:10)、SSHPIFHRGEFS(SEQIDNO:11)、YAEHKSHRGEYS(SEQIDNO:12)、SETAPASRRGELA(SEQIDNO:13)、HSDPARRGELS(SEQIDNO:14)、TFVKALTMDGKQAA籃(SEQIDNO:15)、TYVRALTSENNKLVGWR(SEQIDNO:16)、SYVRALTADAQGRVGWR(SEQIDNO:17)、SYVRALTMDSKKRIGWR(SEQIDNO:18)、RGIDSKH聰SY(SEQIDNO:19)、RGIDDKH聰SQCKTSQ(SEQIDNO:20)、RGVDRRHWVSE(SEQIDNO:21)、RGIDKRH麗SQ(SEQIDNO:22)、RIDTACVCVLSRKAVRRA(SEQIDNO:23)、RIDTSCVCALSRKIGRT(SEQIDNO:24)、RIDTACVCTLLSRTGRA(SEQIDNO:25)或RIDTSCVCTLTIKRGR(SEQIDNO:26)。26.根據(jù)權(quán)利要求25的分離的肽序列，其中所述片段是包含編號(hào)為SEQIDNO:l-26的任一序列的至少5個(gè)氨基酸殘基的氨基S吏序列。27.根據(jù)權(quán)利要求25的分離的肽序列，其中所述變體是與編號(hào)為SEQIDNO:1-26的任一序列具有至少60°/。同源性的氨基酸序列。28.根據(jù)權(quán)利要求26或27的分離的肽序列，其中所述氨基酉踏列具有選自權(quán)利要求25中所述任一序列的肽序列的至少一種生物學(xué)活性。29.根據(jù)權(quán)利要求28的分離的肽序列，其中所述生物學(xué)活性選自刺激細(xì)胞分化、刺激與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的神經(jīng)可塑性、刺激細(xì)胞存活、調(diào)控神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體的活性的能力。30.根據(jù)前述權(quán)利要求l-29任一項(xiàng)的分離的肽序列，所述序列衍生自神經(jīng)生長(zhǎng)因子CNGF)。31.根據(jù)權(quán)利要求30的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:1、5、7、11、15、19、23的序列。32.根據(jù)前述權(quán)利要求l-29任一項(xiàng)的分離的肽序列，所述序列衍生自神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(NT-3)。33.根據(jù)權(quán)利要求32的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:2、6、8、12、16、20、24的序列。34.根據(jù)前述權(quán)利要求l-29任一項(xiàng)的分離的肽序列，所述序列衍生自神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-4/5(NT-4/5)。35.根據(jù)權(quán)利要求34的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:3、5、9、13、17、21、25的序列。36.根據(jù)前述權(quán)利要求l-29任一項(xiàng)的分離的肽序列，所述序列衍生自腦衍生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)。37.根據(jù)權(quán)利要求36的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:4、6、10、14、18、22、26的序列。38.—種分離的肽序列，其為5-25個(gè)連續(xù)氨基酸殘基，所述序列包含氨基酸基序xP、(xa)-(Xa)-X仏-X、G(基序II)，其中x^為疏水性或堿性氨基酸殘基，(X,為任何氨基酸殘基或鍵，x+z—為帶電荷的氨基酸殘基，并且X"為任何氨基酸殘基。39.根據(jù)權(quán)利要求38的分離的肽序列，40.根據(jù)權(quán)利要求38的分離的肽序列，41.根據(jù)權(quán)利要求38的分離的肽序列，S、T或V的氨基酸殘基。42.根據(jù)權(quán)利要求38的分離的肽序列，43.根據(jù)權(quán)利要求38的分離的肽序列，S或T的氨基酸殘基。44.根據(jù)權(quán)利要求38的分離的肽序列，其中xP2是A、L、P或Y。其中xP2是K。其中(xa)是選自A、E、F、I、L、R、其中至少一個(gè)(x,是鍵。其中x"是選自A、E、G、I、N、R、其中x仏選自D、E、K、R或H。45.根據(jù)前述權(quán)利要求38-43任一項(xiàng)的分離的肽序列，所述序列是選自編號(hào)為SEQIDNO:1-4、7-14或23-26的任一序列的序列。46.根據(jù)權(quán)利要求45的分離的肽序列NO:l-4的任一序列的序列。47.根據(jù)權(quán)利要求45的分離的肽序列NO:7-10的任一序列的序列。48.根據(jù)權(quán)利要求45的分離的肽序列NO:11-14的任一序列的序列。49.根據(jù)權(quán)利要求45的分離的肽序列NO:23-26的任一序列的序列。50.根據(jù)權(quán)利要求45的分離的肽序列NO:l、7、11或23的序列的序列。51.根據(jù)權(quán)利要求45的分離的肽序列,2、8、12或24的序列。52.根據(jù)權(quán)利要求45的分離的肽序列,3、9、13或25的序列。53.根據(jù)權(quán)利要求45的分離的肽序列，其中所述序列是選自編號(hào)為SEQID其中所述序列是選自編號(hào)為SEQID其中所述序列是選自編號(hào)為SEQID其中所述序列是選自編號(hào)為SEQID其中所述序列是選自編號(hào)為SEQID其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:4、10、14或26的序列。54.—種分離的肽序列，其為6-25個(gè)連續(xù)氨基酸殘基，所述序列包含氨基酸基序11^-^0-17￥/1-170《&3^+/-(基序ni),其中X"為任何氨基酸殘基，并且X"為帶電荷的氨基酸殘基。55.根據(jù)權(quán)利要求54的分離的肽序列，其中x"選自A、D、M、R或S。56.根據(jù)權(quán)利要求54或55的分離的肽序列，其中x仏選自D、E、K、R或H。57.根據(jù)前述權(quán)利要求54、55或56的分離的肽序列，所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:15-22的任一序列。58.根據(jù)權(quán)利要求57的分離的肽序列，所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:15-18的任一序列。59.根據(jù)權(quán)利要求57的分離的肽序列，所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:19-22的]壬一序列。60.根據(jù)權(quán)利要求57的分離的肽序列，所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:15或19的序列。61.根據(jù)權(quán)利要求57的分離的肽序列，所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:16或20的序列。62.根據(jù)權(quán)利要求57的分離的肽序列，所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:17或21的序列。63.根據(jù)權(quán)利要求57的分離的肽序列，所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:18或22的序列。64.—種分離的肽序列，其為6-25個(gè)連續(xù)氨基酸殘基，所述序列包含氨基酸基序x"-D/E-T-x"-C(基序I),其中x^為疏水性氨基酸殘基，并且x"為K、R、S或A。65.根據(jù)權(quán)利要求64的分離的肽序列，其中x^是Y、F或I。66.根據(jù)權(quán)利要求65的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:1-6、或23-26的任一序列。67.根據(jù)權(quán)利要求66的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:l-6的任一序列。68.根據(jù)權(quán)利要求66的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:23-26的任一序列。69.根據(jù)權(quán)利要求65的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:1一4的任一序列。70.根據(jù)權(quán)利要求65的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:5或SEQIDNO:6的序列。71.根據(jù)權(quán)利要求65的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:1、5或23的序列。72.根據(jù)權(quán)利要求65的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:2、6或24的序列。73.根據(jù)權(quán)利要求65的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:3、5或25的序列。74.根據(jù)權(quán)利要求65的分離的肽序列，其中所述序列選自編號(hào)為SEQIDNO:4、6或26的序列。75.—種復(fù)合物，其包含前述權(quán)利要求l-74任一項(xiàng)的分離的肽序列。76.根據(jù)權(quán)利要求75的復(fù)合物，其中所述肽序列被配制為由單一拷貝的個(gè)體肽序列構(gòu)成的單體。77.根據(jù)權(quán)利要求75的復(fù)合物，其中所述肽序列被配制為由兩個(gè)或多個(gè)拷貝的個(gè)體肽序列構(gòu)成的多聚體，諸如個(gè)體肽序列的二聚體或四聚體。78.根據(jù)權(quán)利要求77的復(fù)合物，其中所述多聚體是樹狀聚體。79.根據(jù)權(quán)利要求l-74任一項(xiàng)的個(gè)體肽序列或者根據(jù)權(quán)利要求73-77任一項(xiàng)的復(fù)合物用于生產(chǎn)藥劑的用途。80.—種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求l-74任一項(xiàng)的個(gè)體肽序列和/或根據(jù)權(quán)利要求75-78任一項(xiàng)的復(fù)合物。81.刺激神經(jīng)突長(zhǎng)出、神經(jīng)元細(xì)胞存活和/或抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性的方法，包括使用根據(jù)權(quán)利要求l-74任一項(xiàng)的肽、根據(jù)權(quán)利要求75-78任一項(xiàng)的復(fù)合物、或者根據(jù)權(quán)利要求80的藥物組合物。82.根據(jù)權(quán)利要求l-74任一項(xiàng)的個(gè)體肽序列、根據(jù)權(quán)利要求75-78任一項(xiàng)的復(fù)合物、或者根據(jù)權(quán)利要求80的藥物組合物用于刺激細(xì)胞分化、細(xì)胞存活、神經(jīng)細(xì)胞可塑性和/或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的用途。83.根據(jù)權(quán)利要求l-74任一項(xiàng)的個(gè)體肽序列、根據(jù)權(quán)利要求75-78任一項(xiàng)的復(fù)合物、或者根據(jù)權(quán)利要求80的藥物組合物用于治療如下疾患或疾病的用途，其中刺激細(xì)胞分化、細(xì)胞存活、神經(jīng)細(xì)胞可塑性或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡對(duì)治療有益。84.根據(jù)權(quán)利要求83的用途，其中所述疾患或疾病是中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的疾患或疾病。85.根據(jù)權(quán)利要求84的用途，其中所述疾患或疾病選自手術(shù)后神經(jīng)損傷、外傷性神經(jīng)損傷、神經(jīng)纖維髓鞘形成減弱、缺血后損傷諸如中風(fēng)后的缺血后損傷、與糖尿病有關(guān)的神經(jīng)變性、影響生理節(jié)奏鐘或神經(jīng)-肌肉傳遞的病癥0■86.根據(jù)權(quán)利要求83的用途，其中所述疾患或疾病選自肌肉的疾患或疾病，包括神經(jīng)-肌肉連接功能減弱的疾患，諸如器官移植后的神經(jīng)-肌肉連接功能減弱的疾患，或者諸如遺傳性或外傷性萎縮性M^肉病癥。87.根據(jù)權(quán)利要求86的用途，其中所述疾患或疾病是癌癥。88.根據(jù)權(quán)利要求87的用途，其中所述癌癥是涉及血管新生的任何癌癥。89.根據(jù)權(quán)利要求87的用途，其中所述癌癥是神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥。90.根據(jù)權(quán)利要求84的用途，其中所述疾患或疾病是學(xué)習(xí)能力減弱和/或記憶減弱。91.根據(jù)權(quán)利要求90的用途，其中所述疾患或疾病是帕金森氏病、阿耳茨海默氏病、亨廷頓氏病或癡呆諸如多梗塞性癡呆。92.根據(jù)權(quán)利要求84的用途，其中所述疾患或疾病是精神疾病，諸如思維和/或心境障礙、神經(jīng)精神病學(xué)障礙包括雙相的(BPD)、遺傳相關(guān)單相的情感障礙、妄想性障礙、妄想癡呆、偏執(zhí)性精神病、精神分裂癥、分裂型障礙、情感分裂性精神障礙、情感分裂性雙相的和遺傳相關(guān)單相的情感障礙、心因性精神病、緊張癥、周期性雙相的和遺傳相關(guān)單相的情感障礙、環(huán)性精神病、分裂樣人格障礙、偏執(zhí)型人格障礙、雙相的和遺傳相關(guān)單相的情感障礙相關(guān)的情感障礙及單相情感障礙各亞型。93.根據(jù)權(quán)利要求83的用途，其中所述疾患或疾病是起因于酒精消耗的機(jī)體損傷。94.根據(jù)權(quán)利要求83的用途，其中所述疾患或疾病是朊病毒疾病。95.根據(jù)權(quán)利要求l-74任一項(xiàng)的肽序列用于生產(chǎn)抗體的用途。96.—種抗體，其能夠識(shí)別并結(jié)合包含根據(jù)權(quán)利要求l、38、54或64的氨基酸基序的表位。97.根據(jù)權(quán)利要求96的抗體，所述抗體能夠識(shí)別包含編號(hào)為SEQIDNO:1-26的任一序列的表位或者能夠識(shí)別編號(hào)為SEQIDNO:l-26的任一序列所包含的表位。98.治療方法，包括為需要的個(gè)體施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求l-74任一項(xiàng)的肽序列、根據(jù)權(quán)利要求75-78任一項(xiàng)的復(fù)合物、根據(jù)權(quán)利要求80的藥物組合物、和/或才艮據(jù)權(quán)利要求96或97的抗體。全文摘要本發(fā)明涉及能夠刺激神經(jīng)元細(xì)胞分化、神經(jīng)細(xì)胞存活、以及與記憶和學(xué)習(xí)有關(guān)的神經(jīng)元可塑性的肽序列。本發(fā)明的肽序列衍生自屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的蛋白質(zhì)，諸如NGF、NT3、NT4/5和BDNF。本發(fā)明還涉及包含所述肽片段的藥物組合物及其治療如下疾病或疾患的用途，其中刺激神經(jīng)元細(xì)胞分化、神經(jīng)元細(xì)胞存活、以及與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的神經(jīng)可塑性的效應(yīng)對(duì)治療有益。文檔編號(hào)C07K14/435GK101360759SQ200680050596公開日2009年2月4日申請(qǐng)日期2006年11月7日優(yōu)先權(quán)日2005年11月7日發(fā)明者伊麗莎白·博克,弗拉迪米爾·貝里津申請(qǐng)人:哥本哈根大學(xué)