專利名稱：一種阿德福韋單酯的制備方法及其含量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種醫(yī)藥原料中間體的制備方法，以及它的質(zhì)量控質(zhì)方法，具體是指阿德福韋單酯的制備方法及其含量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
阿德福韋酯是一種新型口服廣譜抗病毒藥，通過(guò)抑制病毒DNA聚合酶和冷子管轉(zhuǎn)錄酶，抑制病毒的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制，對(duì)乙型肝炎病毒和艾滋病病毒等有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)拉米夫定和泛昔洛韋耐藥的乙型肝炎病毒也有較強(qiáng)的抑制作用，為開環(huán)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，是阿德福韋(PMEA)與特戊酰氧基甲醇的雙酯化物形式的前體藥物，生物利用度較阿德福韋大。阿德福韋酯由于其理化性穩(wěn)定性差，易于脫掉一個(gè)酯化基團(tuán)而形成阿德福韋的單酯化合物(結(jié)構(gòu)式如下式I)，在阿德福韋酯的藥物應(yīng)用中，為了確保產(chǎn)品質(zhì)量，通常需要對(duì)阿德福韋酯的藥物制劑或其原料藥中的阿德福韋單酯進(jìn)行含量監(jiān)控，因此，往往需純度較高的阿德福韋單酯化合物作為含量監(jiān)控檢測(cè)時(shí)的對(duì)照品物質(zhì)，而且，阿德福韋單酯也有一定的藥理活性作用。
(式I)。
通常的，阿德福韋單酯是通過(guò)阿德福韋與特戊酰氧基甲醇等摩爾酯化反應(yīng)得到，但這種制備法得到的阿德福韋單酯的純度不夠理想，且反應(yīng)收率較低，制備過(guò)程繁索且操作控制難度較大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種制備簡(jiǎn)單易于操作、收率高、純度高的阿德福韋單酯的制備方法，以及它的含量檢測(cè)方法。
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，阿德福韋酯易于水解，將阿德福韋酯在含水介質(zhì)中進(jìn)行水解反應(yīng)，控制其水解反應(yīng)的環(huán)境與條件，可使阿德福韋酯脫除一個(gè)酯基而得到阿德福韋單酯，其反應(yīng)原理如下 應(yīng)當(dāng)理解的是，其水解反應(yīng)的環(huán)境與條件的選擇是很重要的且要求重現(xiàn)性良好，因?yàn)楫?dāng)水解反應(yīng)的環(huán)境與條件不適合時(shí)，很容易導(dǎo)致兩個(gè)酯基都脫除的情況發(fā)生，即會(huì)發(fā)生完全水解。
本發(fā)明提供一種阿德福韋單酯的制備方法，它采用阿德福韋酯在乙腈和水的混合介質(zhì)進(jìn)行水解反應(yīng)，視需要對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行攪拌和加熱，優(yōu)選在30℃至加熱回流溫度下，進(jìn)一步對(duì)水解后的固體產(chǎn)物進(jìn)行洗滌和干燥。優(yōu)選采用二氯甲烷對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗滌。
具體的，一種阿德福韋單酯的制備方法，它包括以下在乙腈和水的混合液中加入阿德福韋酯，攪拌并于30℃至加熱回流溫度下，使阿德福韋酯部分水解，減壓濃縮，加入二氯甲烷，抽濾，二氯甲烷洗滌，干燥即得，視需要可用乙腈與水的混合液對(duì)所得產(chǎn)物重結(jié)晶二次得阿德福韋單酯白色結(jié)晶。
上述制備中，用于水解阿德福韋酯的乙腈和水的混合液，其中乙腈與水的體積比為1∶0.5～5，即1體積的乙腈與0.5～5體積的水混合液作為水解阿德福韋酯的反應(yīng)液，優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶0.7～3；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～2；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～1.5；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～1.2；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～1.15。
上述制備中，用于重結(jié)晶的乙腈和水的混合液，其中乙腈與水的體積比為1∶0.5～3，即1體積的乙腈與0.5～3體積的水混合液作為水解阿德福韋酯的反應(yīng)液，優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶0.7～2；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～1.5；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1。
用本發(fā)明的制備方法得到的阿德福韋單酯呈白色固體粉末或結(jié)晶性粉末，含量大于99％，完全可作為標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌酚糜跇?biāo)定藥品中阿德福韋單酯含量。
另一方面，本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)阿德福韋單酯含量的方法，用于阿德福韋單酯的質(zhì)量控質(zhì)監(jiān)測(cè)。
本發(fā)明提供了用高效液相法來(lái)檢測(cè)阿德福韋單酯含量的方法，其特征在于用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)255～265nm，其中流動(dòng)相中0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈的體積配比為(30∶70)～(70∶30)，優(yōu)選為體積配比為60∶40或50∶50；測(cè)試時(shí)的流速和進(jìn)樣量依照高效液相色譜儀的型號(hào)來(lái)選定，例如通常可采用1.0ml/min的流速，20μl的進(jìn)樣量。
阿德福韋單酯在上述檢測(cè)方法中，可以觀察到在260nm和210nm附近出現(xiàn)兩個(gè)較大的吸收峰，但變換系統(tǒng)適用性條件時(shí)，只有260nm附近的吸收峰可以穩(wěn)定存在，故優(yōu)選260nm附近的吸收峰作為本方法檢測(cè)時(shí)的特定的檢測(cè)波長(zhǎng)。
用本發(fā)明方法制備的阿德福韋單酯和其含量的檢測(cè)方法，制備簡(jiǎn)單易于操作，產(chǎn)品成本低，制量控制能夠得到保證。


附圖1阿德福韋單酯的高效液相色譜圖(純度檢查圖)；附圖2阿德福韋單酯的紅外吸收光譜圖；附圖3阿德福韋單酯的紫外吸收光譜圖(在乙醇中)；附圖4阿德福韋單酯的核磁共振譜圖(1HNMR)；附圖5阿德福韋單酯的核磁共振譜圖(1HNMR+D2O)；附圖6阿德福韋單酯的質(zhì)譜圖。
具體實(shí)施例方式
通過(guò)下面的實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步具體說(shuō)明，但并不表示實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1.阿德福韋單酯的制備在一個(gè)250ml茄形瓶?jī)?nèi)，加入阿德福韋酯10.0g，乙腈48.0ml，水55.0ml，攪拌，加熱回流8h，減壓濃縮，加入二氯甲烷100.0ml，45℃攪拌2h，抽濾，二氯甲烷洗滌，干燥得3.6g類白色固體，乙腈/水(1∶1)重結(jié)晶二次得阿德福韋單酯白色結(jié)晶2.5g，收率32.0％，mp228～230℃(分解)。
上述的制備方法，所用阿德福韋酯、乙腈、水、二氯甲烷的用量可按比例放大或縮小。
另外，對(duì)上述制備的阿德福韋單酯進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，以確認(rèn)其為阿德福韋單酯的結(jié)構(gòu)1.紅外吸收光譜檢測(cè)1.1儀器型號(hào)Nicolet Nexus 670型FT-IR紅外吸收光譜儀。按中國(guó)藥典2005年版二部附錄IVC有關(guān)規(guī)定進(jìn)行校正和檢定。
1.2樣品的制備固體KBr壓片1.3紅外吸收光譜圖見(jiàn)附圖21.4紅外吸收光譜測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表1表1樣品紅外吸收光譜數(shù)據(jù)及解析


1.5解析(1)3500～3200cm-1為嘌呤環(huán)上的6位氨基的N-H伸縮振動(dòng)；1697cm-1為6位-NH2的彎曲振動(dòng)；1282cm-1為6氨基嘌呤環(huán)的C-N伸縮振動(dòng)，證明分子結(jié)構(gòu)中有與嘌呤環(huán)相連的伯胺結(jié)構(gòu)。
(2)3062cm-1為嘌呤環(huán)的＝C-H伸縮振動(dòng)；1590cm-1，1514cm-1，1480cm-1為嘌呤環(huán)骨架碳碳雙鍵、碳氮雙鍵伸縮振動(dòng)；878cm-1，801cm-1為嘌呤環(huán)的C-H面外彎曲振動(dòng)，因此，證明分子中有嘌呤環(huán)存在。
(3)2975cm-1甲基、亞甲基C-H伸縮振動(dòng)；1417cm-1，1393cm-1，1366cm-1，1355cm-1為甲基、亞甲基的C-H面外彎曲振動(dòng)，證明分子中有甲基、亞甲基結(jié)構(gòu)存在。
(4)1743cm-1為特戊酸酯的羰基伸縮振動(dòng)；1147cm-1為特戊酸酯的C-O伸縮振動(dòng)，與分子中存在特戊酸酯結(jié)構(gòu)相符。
(5)3500～3200cm-1為

的羥基伸縮振動(dòng)；1230cm-1為

的P＝O伸縮振動(dòng)；1028cm-1為

的P-O-C伸縮振動(dòng)；721cm-1為

的P-C伸縮振動(dòng)，與分子結(jié)構(gòu)存在

結(jié)構(gòu)相符。
(6)1059cm-1為醚(C-O-C)的C-O伸縮振動(dòng)，與分子中存在-CH2CH2O-CH2-結(jié)構(gòu)相符。
(7)972cm-1為亞甲二氧基(O-CH2-O-)的C-O伸縮振動(dòng)，與分子中存在

結(jié)構(gòu)相符。
1.6.結(jié)論從紅外光譜得知，分子結(jié)構(gòu)中含有伯胺基、嘌呤環(huán)、酯、醚、

亞甲二氧基、甲基、亞甲基等官能團(tuán)，與分子結(jié)構(gòu)相符。
2.紫外吸收光譜檢測(cè)2.1儀器型號(hào)PERKIN-ELMER LAMBDA 17 UV/VIS型紫外可見(jiàn)光光譜儀2.2溶劑乙醇2.3紫外吸收光譜圖見(jiàn)附圖32.4紫外吸收光譜測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表2表2樣品紫外吸收光譜數(shù)據(jù)

2.5解析樣品在乙醇中在λmax(nm)209，λmax(nm)261處有最大吸收，為母環(huán)腺嘌呤環(huán)的E帶和B帶吸收，說(shuō)明樣品分子中含有腺嘌呤母環(huán)，與化合物結(jié)構(gòu)相符。
3.核磁共振氫譜檢測(cè)3.1儀器型號(hào)Bruker ACF-300型超導(dǎo)核磁共振儀3.2測(cè)定條件溶劑DMSO-d6，內(nèi)標(biāo)TMS3.3核磁共振氫譜圖1HNMR(附圖4)，1HNMR+D2O(附圖5)

3.41HNMR測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表3表3樣品核磁共振氫譜數(shù)據(jù)

3.5解析(1)δ1.12ppm，單峰，9H，歸為叔丁基的3個(gè)甲基氫H17，H18，H19。
(2)δ3.68ppm，雙重峰，J＝6.0Hz，2H，歸為與磷原子相連亞甲基氫H12′。
(3)δ3.88ppm，多重峰，2H，歸為與氧原子相連亞甲基氫H11′。
(4)δ4.33ppm，多重峰，2H，歸為與氮原子相連亞甲基氫H10′。
(5)δ5.44ppm，多重峰，1H，歸為亞甲二氧基的亞甲基氫H14′。
(6)δ7.62ppm，寬單峰，2H，D2O交換后消失，歸為20位伯氨基氫-NH2。
(7)δ8.16ppm，單峰，2H，歸為嘌呤環(huán)的烯氫H2，H8。
3.6結(jié)論從1HNMR譜得知，樣品相應(yīng)質(zhì)子與分子結(jié)構(gòu)完全相符。
4.質(zhì)譜檢測(cè)4.1儀器型號(hào)Agilent 1100型質(zhì)譜儀4.2條件電噴霧，ESI(-)70V4.3質(zhì)譜圖見(jiàn)附圖64.4解析m/z 386(基峰)為(M-H)-峰，與阿德福韋單酯的分子式C14H22N5O6P相符。
綜上所述，樣品的IR、UV、1HNMR、1HNMR+D2O、MS譜能夠合理對(duì)分子結(jié)構(gòu)作出歸屬，確證制得的產(chǎn)物為阿德福韋單酯。
實(shí)施例2.阿德福韋單酯的制備在一個(gè)250ml茄形瓶?jī)?nèi)，加入阿德福韋酯10.0g，乙腈35ml，水70ml，加熱60℃攪拌12h，減壓濃縮，加入二氯甲烷110ml，45℃攪拌2h，抽濾，二氯甲烷洗滌，干燥得3.1g類白色固體，乙腈/水(1∶1.5)重結(jié)晶二次得阿德福韋單酯白色結(jié)晶。
同樣的，用IR、UV、1HNMR、1HNMR+D2O、MS譜能夠合理對(duì)上述方法制得的樣品的分子結(jié)構(gòu)作出歸屬，確證制得的產(chǎn)物為阿德福韋單酯。
實(shí)施例3.阿德福韋單酯含量的檢測(cè)方法取實(shí)施例1制備的阿德福韋單酯含量，采用高效液相檢測(cè)，方法如下色譜儀LC-10A型高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外檢測(cè)器，N2000色譜工作站，色譜柱Lichrospher-C18，5μ，250×4.6mm，流動(dòng)相0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(60∶40)，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，進(jìn)樣量20μl。
用高效液相色譜法測(cè)得樣品純度為99.8％，見(jiàn)附圖1。
權(quán)利要求
1.一種阿德福韋單酯的制備方法，它采用阿德福韋酯在乙腈和水的混合介質(zhì)進(jìn)行水解反應(yīng)，視需要對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行攪拌和加熱，進(jìn)一步對(duì)水解后的固體產(chǎn)物進(jìn)行洗滌和干燥。
2.權(quán)利要求1所述的制備方法，優(yōu)選在30℃至加熱回流溫度下進(jìn)行攪拌反應(yīng)，優(yōu)選采用入二氯甲烷對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗滌。
3.一種阿德福韋單酯的制備方法，它包括以下在乙腈和水的混合液中加入阿德福韋酯，攪拌并于30℃至加熱回流溫度下，使阿德福韋酯部分水解，減壓濃縮，加入二氯甲烷，抽濾，二氯甲烷洗滌，干燥即得，視需要可用乙腈與水的混合液對(duì)所得產(chǎn)物重結(jié)晶二次得阿德福韋單酯白色結(jié)晶。
4.權(quán)利要求3所述的制備方法，其中用于水解阿德福韋酯的乙腈和水的混合液中，乙腈與水的體積比為1∶0.5～5；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶0.7～3；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～2；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～1.5；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～1.2；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～1.15。
5.權(quán)利要求3所述的制備方法，其中用于重結(jié)晶的乙腈和水的混合液中，乙腈與水的體積比為1∶0.5～3，；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶0.7～2；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1～1.5；優(yōu)選乙腈與水的體積比為1∶1。
6.一種阿德福韋單酯的制備方法，它包括取阿德福韋酯10.0g，加入乙腈48.0ml，水55.0ml，攪拌，加熱回流8h，減壓濃縮，加入二氯甲烷100.0ml，45℃攪拌2h，抽濾，二氯甲烷洗滌，干燥即得。
7.權(quán)利要求6所述的制備方法，所用阿德福韋酯、乙腈、水、二氯甲烷的用量可按比例放大或縮小。
8.一種用高效液相法檢測(cè)阿德福韋單酯含量的方法，其特征在于用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)255～265nm。
9.權(quán)利要求8所述的檢測(cè)方法，其中流動(dòng)相中0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈的體積配比為(30∶70)～(70∶30)，優(yōu)選為體積配比為60∶40或50∶50。
10.權(quán)利要求8所述的檢測(cè)方法，其中檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm。
全文摘要
一種阿德福韋單酯的制備方法，它采用阿德福韋酯在乙腈和水的混合介質(zhì)進(jìn)行水解反應(yīng)，視需要對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行攪拌和加熱，進(jìn)一步對(duì)水解后的固體產(chǎn)物進(jìn)行洗滌和干燥。還提供了一種檢測(cè)阿德福韋單酯含量的方法，用于阿德福韋單酯的質(zhì)量控質(zhì)監(jiān)測(cè)。
文檔編號(hào)C07F9/00GK101085786SQ200710009159
公開日2007年12月12日 申請(qǐng)日期2007年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月28日
發(fā)明者康惠燕, 陳國(guó)華 申請(qǐng)人:福建廣生堂藥業(yè)有限公司