專利名稱：N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛的一種液相合成法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H(PSI)的一種合成法，特別涉及N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛一種液相合成法。

背景技術(shù)：
Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H(PSI)是與人類疾病相關(guān)重要蛋白酶的抑制劑，在治療骨髓性白血病，腫瘤等方面起重要作用(ReflBritish Journal ofHaematology.，2001，113，126.Ref2Arch Biochem Biophys.，1995，317，69.Ref3J.Biol.Chem.，2002，277，2330)。在以往報(bào)道各種肽醛的固相合成方法成本較高，不利于肽醛合成的推廣。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種液相合成Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H的方法，解決目前采用固相合成法成本較高，液相合成法復(fù)雜的技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明的技術(shù)方案為N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛的一種液相合成法，包括以下步驟 a.以Boc-Leu-OH等為原料合成C-端以硫芐酯為保護(hù)基的肽鏈Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzl； b.在上述產(chǎn)物的有機(jī)溶劑中加入10％Pd-C和Et3SiH，在20～35℃反應(yīng)6～9小時(shí)后得到肽醛。有機(jī)溶劑為丙酮或四氫呋喃。
具體的反應(yīng)步驟為 1、Boc-Leu-OH溶解到適量的有機(jī)溶劑中，加入HOBt、NMM或DIEA和芐硫醇，冰浴下攪拌5～15min，加入DCC，20～30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。合成的Boc-Leu-SBzl經(jīng)2mol/L二氧六環(huán)鹽酸氣脫保護(hù)得到H-Leu-SBzl·HCl。有機(jī)溶劑為四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶劑中的一種。
2、Z-Ile-OH和H-Glu(OtBu)-OMe·HCl溶解到適量的有機(jī)溶劑中，加入HOBt和NMM，冰浴下攪拌5～15min，加入DCC，20～30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-OMe。產(chǎn)物經(jīng)甲醇和四氫呋喃的一種或兩種溶解后用飽和氫氧化鋰水溶液水解，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-OH。有機(jī)溶劑為四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶劑中的一種。
3、Z-Ile-Glu(OtBu)-OH和H-Ala-OMe·HCl溶解到適量的有機(jī)溶劑中，加入HOBt和NMM，冰浴下攪拌5～15min，加入DCC，20～30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-OMe。產(chǎn)物經(jīng)甲醇和四氫呋喃的一種或兩種溶解后用飽和氫氧化鋰水溶液水解，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-OH。有機(jī)溶劑為四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶劑中的一種。
4、Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-OH和H-Leu-SBzl·HCl溶解到適量的有機(jī)溶劑中，加入HOBt和NMM，冰浴下攪拌5～15min，加入DCC，20～30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzl。有機(jī)溶劑為四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶劑中的一種。
5、Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzl經(jīng)10％Pd-C和Et3SiH還原得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H。溶劑為丙酮或四氫呋喃。
本發(fā)明中一些常用的縮寫具有以下含義 Boc叔丁氧羰基 DMFN，N-二甲基甲酰胺 HOBt1-羥基苯并三唑 NMMN-甲基嗎啡啉 DIEA二異丙基乙胺 DCC二環(huán)己基碳二亞胺 Et3SiH三乙基硅烷 Boc-Leu-OHN-叔丁氧羰基亮氨酸 Boc-Leu-SBzlN-叔丁氧羰基亮氨酸硫芐酯 H-Leu-SBzl·HCl亮氨酸硫芐酯鹽酸鹽 Z-Ile-OHN-芐氧羰基異亮氨酸 H-Glu(OtBu)-OMe·HClδ-叔丁基谷氨酸甲酯鹽酸鹽 Z-Ile-Glu(OtBu)-OMeN-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酸甲酯 Z-Ile-Glu(OtBu)-OHN-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酸 H-Ala-OMe·HCl丙氨酸甲酯鹽酸鹽 Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-OMeN-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酸甲酯 Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-OHN-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酸 Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzlN-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰- 亮氨酸硫芐酯 Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-HN-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮 氨基醛 合成路線如下
本發(fā)明的有益效果是該方法合成肽醛的原料簡(jiǎn)單易得，經(jīng)過(guò)常用的還原方法就可以得到肽醛，且不影響各基團(tuán)的保護(hù)基，產(chǎn)率較高，成本低，便于大規(guī)模生產(chǎn)。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1，參照合成路線，Boc-Leu-OH 9.97g(40mmol)溶解DMF溶劑中，加入HOBt 5.94g(44mmol)、NMM 11mL(100mmol)，冰浴下攪拌10min，加入DCC9.06g(44mmol)，30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。合成的Boc-Leu-SBzl經(jīng)2mol/L二氧六環(huán)鹽酸氣脫保護(hù)得到H-Leu-SBzl·HCl 8.87g。Z-Ile-OH8.44g(31.8mmol)和H-Glu(OtBu)-OMe·HCl 8.88g(35mmol)溶解到適量的DMF溶液中，加入HOBt4.73g(35mmol)和NMM 7.0mL(64mmol)，冰浴下攪拌10min，加入DCC7.20g(35mmol)，30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。合成的Z-Ile-Glu(OtBu)-OMe溶解在四氫呋喃或甲醇或二者混合液中，加LiOH飽和水溶液水解保持PH值為11，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-OH 12.65g。產(chǎn)物和H-Ala-OMe·HCl 4.32g(31mmol)溶解到DMF中，加入HOBt 4.19g(31mmol)和NMM 6.2mL(56mmol)，冰浴下攪拌10min，加入DCC 6.39g(31mmol)，30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。產(chǎn)物溶解在四氫呋喃或甲醇或二者混合液中經(jīng)LiOH水解得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-OH 8.87g。水解產(chǎn)物和H-Leu-SBzl·HCl 4.43g(18.7mmol)溶解到DMF中，加入HOBt 2.53g(18.7mmol)和NMM 3.7mL(34mmol)，冰浴下攪拌10min，加入DCC 3.85g(18.7mmol)，30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzl 11.56g。Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzl 1.50g(2.0mmol)溶解在60mLTHF中，氮?dú)饣驓鍤獗Ｗo(hù)下常溫反應(yīng)，加10％Pd-C0.38g，Et3SiH 2.35g(20mmol)還原得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H 0.18g。
實(shí)施例2，Boc-Leu-OH溶解到適量的有機(jī)溶劑四氫呋喃中，第一次冰浴攪拌時(shí)間為5min，加入DCC后20min撤掉冰浴，第二次冰浴攪拌時(shí)間為5min，加入DCC后20min撤掉冰浴，第三次冰浴攪拌時(shí)間為5min，加入DCC后20min撤掉冰浴，第四次冰浴攪拌時(shí)間為5min，加入DCC后20min撤掉冰浴，其余與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例3，Boc-Leu-OH溶解到適量的有機(jī)溶劑N，N-二甲基乙酰胺中，第一次冰浴攪拌時(shí)間為15min，加入DCC后25min撤掉冰浴，第二次冰浴攪拌時(shí)間為15min，加入DCC后25min撤掉冰浴，第三次冰浴攪拌時(shí)間為15min，加入DCC后25min撤掉冰浴，第四次冰浴攪拌時(shí)間為15min，加入DCC后25min撤掉冰浴，其余與實(shí)施例1相同。
權(quán)利要求
1. N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛的一種液相合成法，主要包括以下步驟
a.以N-叔丁氧羰基亮氨酸為原料在有機(jī)溶劑中合成C-端以硫芐酯為保護(hù)基的肽鏈N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨酸硫芐酯；
b.在上述產(chǎn)物的有機(jī)溶劑中加入10％鈀碳和三乙基硅烷，在20～35℃反應(yīng)6～9小時(shí)后得到最終產(chǎn)品N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛一種液相合成法，其特征是步驟a中有機(jī)溶劑為二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺中的一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛的一種液相合成法，其特征是步驟b中有機(jī)溶劑為四氫呋喃和丙酮中的一種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛的一種液相合成法，其特征是包括以下具體步驟
a、將N-叔丁氧羰基亮氨酸溶解到有機(jī)溶劑中，加入1-羥基苯并三唑、N-甲基嗎啡啉、二異丙基乙胺和芐硫醇，冰浴下攪拌5～15min，加入二環(huán)己基碳二亞胺，20～30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，合成的N-叔丁氧羰基亮氨酸硫芐酯經(jīng)2mol/L二氧六環(huán)鹽酸氣脫保護(hù)得到亮氨酸硫芐酯鹽酸鹽，有機(jī)溶劑為四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺中的一種；
b、將N-芐氧羰基異亮氨酸和δ-叔丁基谷氨酸甲酯鹽酸鹽溶解到有機(jī)溶劑中，加入1-羥基苯并三唑和N-甲基嗎啡啉，冰浴下攪拌5～15min，加入二環(huán)己基碳二亞胺，20～30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，得到N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酸甲酯，該產(chǎn)物經(jīng)甲醇和四氫呋喃的一種或兩種溶解后用飽和氫氧化鋰水溶液水解，得到N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酸，有機(jī)溶劑為四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶劑中的一種；
c、N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酸和丙氨酸甲酯鹽酸鹽溶解到有機(jī)溶劑中，加入1-羥基苯并三唑和N-甲基嗎啡啉，冰浴下攪拌5～15min，加入二環(huán)己基碳二亞胺，20～30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，得到N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酸甲酯，產(chǎn)物經(jīng)甲醇和四氫呋喃的一種或兩種溶解后用飽和氫氧化鋰水溶液水解，得到N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酸，有機(jī)溶劑為四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶劑中的一種；
d、將N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酸和亮氨酸硫芐酯鹽酸鹽溶解到有機(jī)溶劑中，加入1-羥基苯并三唑和N-甲基嗎啡啉，冰浴下攪拌5～15min，加入二環(huán)己基碳二亞胺，20～30min后撤掉冰浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，得到N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨酸硫芐酯，有機(jī)溶劑為四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶劑中的一種；
e、N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨酸硫芐酯經(jīng)10％鈀碳和三乙基硅烷還原得到N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛，溶劑為丙酮或四氫呋喃。
全文摘要
本發(fā)明涉及N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛的一種合成方法。解決目前采用固相合成法成本較高，液相合成法產(chǎn)率較低的技術(shù)問(wèn)題。主要合成步驟a.以Boc-Leu-OH為原料合成C-端以硫芐酯為保護(hù)基的肽鏈Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzl；b.在上述產(chǎn)物的有機(jī)溶劑中加入10％Pd-C和Et3SiH，在20～35℃反應(yīng)7～9小時(shí)后得到N-芐氧羰基異亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛，有機(jī)溶劑為丙酮或四氫呋喃；本發(fā)明主要用于合成活性肽醛Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H。
文檔編號(hào)C07K5/00GK101245096SQ20071003755
公開(kāi)日2008年8月20日 申請(qǐng)日期2007年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月14日
發(fā)明者徐紅巖, 劉洪英 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所, 吉爾生化(上海)有限公司