專利名稱：一種具有抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物藥用成分和抗腫瘤化合物領(lǐng)域，特別涉及的是從蒙藥苦馬豆(Sphaerophysa salsula(Pall.)DC.)提取的具有明顯預(yù)防和治療腫瘤作用的有效成分及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前全世界每年有600多萬人死于癌癥，新發(fā)病例800萬，這數(shù)字還在逐年增加。我國13億人口中每年有百萬新發(fā)癌癥病人，待治療病人約200萬，死亡約130萬。估計到2006年，我國將有170萬人死于癌癥，癌癥已成為第一位死因。
目前，對于癌癥的治療仍以化療及放療為首選，兩者雖對腫瘤的治療取得了相當(dāng)?shù)寞熜?，但由于缺乏對腫瘤細(xì)胞的特異性因而具有較大的毒副作用以及某些腫瘤細(xì)胞對化療和放療處理的不敏感，因此在很大程度上限制了它們在臨床中的應(yīng)用。近年來，為了開發(fā)出能特異性地殺傷癌細(xì)胞而對正常細(xì)胞無毒負(fù)作用的藥物，人們對癌癥的發(fā)病機制從細(xì)胞，分子水平上的研究予以高度重視和巨額投資。因此，研究制備抗腫瘤藥物成為生物醫(yī)藥領(lǐng)域的熱點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具用抗腫瘤活性的化合物。
本發(fā)明的另一個目的在于提供上述二苯乙烯類化合物的制備方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供上述二苯乙烯類化合物在抗腫瘤方面的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了一種具用抗腫瘤活性的化合物，即一種二苯乙烯類化合物，該化合物的結(jié)構(gòu)式如下所示 ，其中，R、R’分別可以為-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH＝C(CH3)2、-OH、-OCH3、-NH2、O＝CCH＝CH(CH3)2等中的任一種。上述二苯乙烯類化合物在本發(fā)明中簡稱為化合物B。
另一方面，本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法。
本發(fā)明的二苯乙烯類化合物可以從植物中提取，也可以是通過合成或半合成得到。如由化合物A和化合物D經(jīng)魏悌錫反應(yīng)和脫保護基反應(yīng)得到化合物B 魏悌錫試劑是由親核性的三苯基磷(C6H5)3P與鹵代烷進行親核取代反應(yīng)制得的磷鹽，再用強堿例如苯基鋰處理除去α-氫而制得。醛、酮與魏悌錫試劑作用脫去一分子氧化三苯基磷生成烯烴，稱為魏悌錫反應(yīng)。將3，5-取代的苯甲醛和酚羥基被保護的魏悌錫試劑溶于四氫呋喃，在丁基鋰存在的條件下，常溫下反應(yīng)16-30小時，得到化合物B；其中魏悌錫試劑的酚羥基保護基為芐基(Bn)。
脫保護基反應(yīng)在常溫下，將帶保護基芐基(Bn)的化合物和N，N-二甲基丙烯酰胺溶于二氯甲烷，反應(yīng)1.5-3小時，得到化合物B。
其中，化合物D可以由化合物C合成 保護基反應(yīng)將化合物C、芐基溴和碳酸鉀溶于丙酮，回流4小時，得到化合物D。
本發(fā)明的化合物B可用于制備抗腫瘤藥物。所述的腫瘤是腦瘤、肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、宮頸癌、胃癌、食道癌或者白血病，等等。
以MTT法進行抗腫瘤作用的篩選，結(jié)果顯示，本發(fā)明的二苯乙烯類化合物處理的腫瘤細(xì)胞系如人髓白血病細(xì)胞(HL60)、腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U87)、乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、肺癌細(xì)胞(H460)、人肝癌細(xì)胞(HepG2)、人前列腺細(xì)胞(PC3)、人結(jié)腸癌細(xì)胞(SW480)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)隨著用藥濃度增高與相應(yīng)不加藥對照組相比細(xì)胞增殖活性分別下降了，說明化合物呈濃度依賴性抑制腫瘤細(xì)胞增殖。而正常人肝細(xì)胞(Lo2)及人胚腎細(xì)胞(HBK293)上細(xì)胞增殖活性未有統(tǒng)計學(xué)意義上變化，顯示出該化合物對正常細(xì)胞很少有毒性。上述細(xì)胞株均購自中科院上海細(xì)胞生物研究所。
本發(fā)明的化合物B可與市售或者常用的載體結(jié)合，用于預(yù)防或者治療腫瘤和癌癥。所述的藥物可以為片劑或者針劑。
利用本發(fā)明化合物B，通過各種常規(guī)篩選方法，可篩選出與二苯乙烯類化合物發(fā)生相互作用的物質(zhì)，如受體、抑制劑或拮抗劑等。
本發(fā)明的化合物B及其抑制劑、拮抗劑等，當(dāng)在治療上進行施用(給藥)時，可提供不同的效果。通常，可將這些物質(zhì)配制于無毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中pH通常約為5-8，較佳地pH約為6-8，盡管pH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變化。配制好的藥物組合物可以通過常規(guī)途徑進行給藥，其中包括(但并不限于)肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或局部給藥。
以本發(fā)明的化合物B為例，可以將其與合適的藥學(xué)上可接受的載體聯(lián)用。這類藥物組合物含有治療有效量的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明的化合物B可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規(guī)方法進行制備。諸如片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過常規(guī)方法進行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無菌條件下制造。活性成分的給藥量是治療有效量，例如每天1μg/kg體重-約2000mg/kg體重。此外，本發(fā)明的化合物B還可與其他治療劑一起使用。
本發(fā)明的化合物B在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用中，可以是針劑或者片劑。
當(dāng)本發(fā)明的化合物B被用作藥物時，可將治療有效劑量的該多肽施用于哺乳動物，其中該治療有效劑量通常至少約10微克/千克體重，而且在大多數(shù)情況下不超過約8毫克/千克體重，較佳地該劑量是約10微克/千克體重-約1毫克/千克體重。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。
本發(fā)明的優(yōu)點經(jīng)實驗證明，本發(fā)明的二苯乙烯類化合物為有效的抗腫瘤劑。本發(fā)明的制備方法簡單可靠，成本低，效率高，可進行工業(yè)化大生產(chǎn)，有利于推廣應(yīng)用。


圖1為化合物Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的體外抗腫瘤試驗結(jié)果數(shù)據(jù)圖。
圖2為化合物Trans-4-[2-(3，5-二異戊烯基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的體外抗腫瘤試驗結(jié)果數(shù)據(jù)圖。
具體實施例方式
以下通過具體的實施方式的實施例對本發(fā)明的內(nèi)容作進一步詳細(xì)的說明。但不應(yīng)將實施例理解為對本發(fā)明的限制。在不脫離本發(fā)明上述思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和常規(guī)手段作出的各種替換手段或變更，均包含在本發(fā)明之內(nèi)。
實施例1 Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇(R＝R’＝H)進行核磁共振分析，結(jié)果如下表1 Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的核磁共振(1HNMR 500MHz，13CNMR 500MHz在CDCl3中)數(shù)據(jù)

從而確定了得到的化合物為Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇。
實施例2 Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的體外抗腫瘤作用取對數(shù)期的腫瘤細(xì)胞，每孔3×104接種于96孔板上，12h后，棄上清，按一下分組給藥正常對照組和加藥組(濃度0-100μM)，每組設(shè)6個復(fù)孔，培養(yǎng)24h，棄上清，加入帶MTT的培養(yǎng)液50μl培養(yǎng)4h(0.5mg/mL)，加入100μl DMSO，振蕩1h，于酶標(biāo)儀上570nm處測OD值。
結(jié)果顯示，加藥后，腫瘤細(xì)胞活性明顯下降，而且腫瘤細(xì)胞活性隨著藥物濃度的增加而降低。而正常人細(xì)胞系的細(xì)胞增殖活性未有統(tǒng)計學(xué)意義上變化，顯示出該化合物對正常細(xì)胞很少有毒性。圖1所示細(xì)胞為MCF-7(乳腺癌細(xì)胞)、U87(腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞)、H460(腫癌細(xì)胞)、PC3(人前列腺細(xì)胞)和HEK293(正常人胚腎細(xì)胞系)。
實施例3 Trans-4-[2-(3，5-二異戊烯基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇(R＝R’＝-CH2CH＝CH(CH3)2)的制備方法 a為芐基溴，K2CO3，丙酮，回流，4h，80％；b為NaBH4，MeOH，常溫，1h，96％；c為PBr3，四氫呋喃-甲苯，常溫，2h，三苯基磷，甲苯，回流，3h，78％；d為正丁基鋰，化合物E，四氫呋喃，常溫，24h，86％；三氯化鋁，N，N-二甲基丙烯酰胺，CH2Cl2，常溫，2h，57％。
制備方法(1)E的制備H(2g)與G(5.0g)的混合液中加入10mL的10％KOH溶液，常溫下反應(yīng)48h，得到E(116mg，4.7％)。
(2)D的制備3(2g)與2(5.2mL)的丙酮混合液中加入9g的碳酸鈉，回流4小時，回收溶劑，得3，4-二芐氧基苯甲醛(3.9g)；將3，4-二芐氧基苯甲醛(3.5g)溶于甲醇，加入四氫硼鈉0.7g，常溫下攪拌1小時，后加入蒸餾水20mL，并用鹽酸酸化，二氯甲烷萃取，萃取液用飽和碳酸鈉溶液洗滌，揮干溶劑得3，4-二芐氧基苯甲醇(3.2g)；3，4-二芐氧基苯甲醇(2.0g)溶于0℃5mL的無水四氫呋喃和15mL無水甲苯，滴加0.7mL的三溴化磷四氫呋喃(1mL)和甲苯(5mL)溶液，反應(yīng)2小時后將反應(yīng)也倒入冰水中，并用乙醚萃取，回收溶劑后得到的固體溶于甲苯并和三苯基磷反應(yīng)，回流3小時過濾得到D(3.6g)。
(3)F的制備D(2g)的四氫呋喃溶液中加入3 mL的丁基鋰溶液，0℃反應(yīng)1小時，加入E(500mg)的四氫呋喃溶液，常溫下反應(yīng)24小時，回收溶劑，產(chǎn)物加入1mL的DMA，0℃下加入三氯化鋁1g，反應(yīng)3小時，加入25mL 1M的鹽酸終止反應(yīng)，用二氯甲烷萃取，洗滌、重結(jié)晶得F(365mg)。
實施例4 Trans-4-[2-(3，5-二異戊烯基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的體外抗腫瘤作用取對數(shù)期的腫瘤細(xì)胞，每孔3×104接種于96孔板上，12h后，棄上清，按以下分組給藥正常對照組和加藥組(濃度0-100μM)，每組設(shè)6個復(fù)孔，培養(yǎng)24h，棄上清，加入帶MTT的培養(yǎng)液50μl培養(yǎng)4h(0.5mg/mL)，加入100μl DMSO，振蕩1h，于酶標(biāo)儀上570nm處測OD值。
結(jié)果顯示，加藥后，腫瘤細(xì)胞活性明顯下降，而且腫瘤細(xì)胞活性隨著藥物濃度的增加而降低。而正常人細(xì)胞系的細(xì)胞增殖活性未有統(tǒng)計學(xué)意義上變化，顯示出該化合物對正常細(xì)胞很少有毒性。圖2所示細(xì)胞為HL60(人髓白血病細(xì)胞)、HepG2(人肝癌細(xì)胞)、Hela(人宮頸癌細(xì)胞)、SW480(人結(jié)腸癌細(xì)胞)和LO2(正常人肝細(xì)胞)。所述細(xì)胞均購自中科院上海細(xì)胞生物研究所。
權(quán)利要求
1.一種具有抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物，其特征在于，該化合物的結(jié)構(gòu)式如下所示 ，其中，R、R’分別為-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH＝C(CH3)2、-OH、-OCH3、-NH2、O＝CCH＝CH(CH3)2中的任一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，其特征在，化合物A和化合物D經(jīng)魏悌錫反應(yīng)和脫保護基反應(yīng)得到化合物B
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于化合物D由化合物C合成
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤是腦瘤、肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、宮頸癌、胃癌、食道癌或者白血病。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物藥用成分和抗腫瘤化合物領(lǐng)域，一種具有抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物及其制備方法。人們常常談癌色變，這是因為癌癥已日趨成為人類的第一位死因，但是到目前為止又缺乏特效藥預(yù)防和治療癌癥或者腫瘤。本發(fā)明公開了一種具有抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物，該化合物的結(jié)構(gòu)式如圖所示，其中，R、R′分別為－H、－CH
文檔編號C07C37/00GK101070274SQ20071004199
公開日2007年11月14日 申請日期2007年6月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月14日
發(fā)明者朱煥章, 馬忠俊 申請人:復(fù)旦大學(xué)