專利名稱：從蘿卜籽中分離4-甲基亞磺?；?3-丁烯基硫代葡萄糖苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域，涉及蘿卜籽深加工技術(shù)，特別是從蘿卜籽中分離制備 4-甲基亞磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法。
背景技術(shù)：
蘿卜是我國的傳統(tǒng)的食用蔬菜，具有很高的營養(yǎng)保健價值，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和活性 物質(zhì)，硫代葡萄糖苷類化合物是其中主要的一類活性成分。蘿卜籽中的硫代葡萄糖苷主要成 分為4-甲基亞磺?；?3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)。國內(nèi)外研究表明GRE的降解產(chǎn)物具有抗 過敏、抗癌、抗菌等生物活性。
現(xiàn)有關(guān)于硫代葡萄糖苷的分離主要采用制備型高效液相色譜，其局限性是分離量少。其
次，高效液相色譜柱價格昂貴、再生使用相對困難，分離得到硫代葡萄糖苷成本較高，難以
發(fā)展成為制備量大的分離技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種成本較低、經(jīng)濟適用的從蘿卜籽中分離制備4-甲基亞磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明釆用以下技術(shù)方案采用沸騰甲醇浸提蘿卜籽中的硫代葡萄糖 苷；以逆流色譜儀為分離設(shè)備分離純化蘿卜籽粗提物中的GRE，其溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處 于液態(tài)的正丁醇、乙腈、5%硫酸銨溶液組成，正丁醇、乙腈、5%硫酸銨溶液的比例為10: 3~6: 5。上相做流動相，下相做固定相。
以上方案按步驟敘述如下
1、 采用沸騰甲醇浸提蘿卜籽中的GRE， GRE提取液真空濃縮至含固形物80n/。左右；
2、 在上述濃縮液中加入適量的水，用乙酸乙酯萃取兩次脫脂；
3、 將脫脂后的溶液真空干燥，獲蘿卜籽GRE粗提物；
4、 采用逆流色譜方法分離純化GRE粗提物；
5、 收集逆流色譜分離的GRE組分進行真空濃縮至干，得到含硫酸銨的GRE分離物；
6、 用無水甲醇提取上述GRE分離物，并將甲醇提取物真空濃縮至干，即得到脫鹽的GRE
口
步驟(l )、步驟(3)、步驟(5)和步驟(6)所述真空濃縮和真空干燥的真空度低于0.09Mpa， 溫度為35~40°C。
3
步驟(4)所述逆流色譜方法為采用逆流色譜儀為分離設(shè)備，溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處 于液態(tài)的正丁醇、乙腈、5°/。硫酸銨溶液組成，正丁醇、乙腈、5。/。硫酸銨溶液的體積比為10 20 : 5~10 : 1~5，上相做流動相，下相做固定相；用泵將上述溶劑系統(tǒng)的下相注入逆流色譜 儀的色譜柱，并取上述溶劑系統(tǒng)的部分上相溶解蘿卜籽粗提物制備逆流色譜樣品溶液；開啟
逆流色譜儀和流動相輸液泵，將樣品溶液和流動相輸入逆流色譜分離柱；用紫外-可見檢測器
檢測逆流色譜流出液，根據(jù)所得的色譜圖收集GRE組分。
步驟(5)所述逆流色譜方法中的逆流色譜儀為高速逆流色譜儀(HSCCC)或低速逆流 色譜儀(SRCCC)。


圖l為本發(fā)明的工藝流程圖。
圖2為實施例1的HSCCC分離圖譜。
圖3為實施例1分離所得的GRE的HPLC圖譜。
圖4為實施例2的SRCCC分離圖譜。
圖5為實施例3的SRCCC分離圖譜。
具體實施例方式
實施例1
本實施例的溶劑系統(tǒng)采用正丁醇一乙腈一5%硫酸銨溶液(10: 5: 4);逆流色譜儀為
HSCCC-D1000高速逆流色譜儀(柱容量1L)， GRE粗提物中GRE約占15°/。。
量取正丁醇2000ml、乙腈1000ml、 5%硫酸銨溶液的800 ml，置于5L分液漏斗，充分 搖勻，靜置分層后，將上下兩相分別裝入試劑瓶。將下相以10ml/min的流速注入高速逆流色 譜的色譜柱。稱取GRE粗提物2.0g溶于50 ml上相中制備逆流色譜樣品溶液，開啟逆流色譜 儀至800轉(zhuǎn)/min，然后以1.0 ml/min的流速輸入樣品溶液，待進樣結(jié)束后，再以2.0 ml/min 的流速輸入流動相以洗脫柱內(nèi)的組分，用紫外可見檢測器在235nin下檢測逆流色譜流出液， 根據(jù)檢測器采集的圖譜收集GRE組分。分離得到GRE組分濃縮干燥得到含鹽分離物，含鹽 分離物經(jīng)甲醇提取脫鹽后得到286 mg GRE產(chǎn)品，純度達91%以上。
實施例2
本實施例的溶劑系統(tǒng)采用正丁醇一乙腈一5%硫酸銨溶液(10: 3: 4);逆流色譜儀為
RSCCC-D3500低速逆流色譜儀(柱容量3.5L)， GRE粗提物中GRE約占15%。
量取正丁醇8L、乙腈2.7L、 5。/。硫酸銨溶液的3.2L，置于20L分液瓶中，充分混合，靜 置分層后，將上下兩相分別裝入試劑瓶。將下相以20ml/min的流速注入低速逆流色譜儀的色 譜柱，至色譜柱完全填滿。稱取GRE粗提物30.0g溶于500 ml上相中制備逆流色譜樣品溶液， 開啟逆流色譜儀至50轉(zhuǎn)/min，然后以2.0ml/min的流速輸入樣品溶液，待進樣結(jié)束后，再以 5.0 ml/min的流速輸入流動相以洗脫柱內(nèi)的組分，用紫外可見檢測器在235nm下檢測逆流色 譜流出液，根據(jù)檢測器采集的圖譜收集GRE組分。分離得到GRE組分濃縮干燥得到含鹽分 離物，含鹽分離物經(jīng)甲醇提取脫鹽后得到49gGRE產(chǎn)品，純度達87%以上。
實施例3
本實施例的溶劑系統(tǒng)采用正丁醇一乙腈_5%硫酸銨溶液(10: 6: 4);逆流色譜儀為
RSCCC-D40000低速逆流色譜儀(柱容量40L)， GRE粗提物中GRE約占15%。
量取正丁醇80L、乙腈48L、 5。/。硫酸銨溶液的32L，置于200L分液罐中，充分混合， 靜置分層后，將上下兩相分別裝入試劑瓶。將下相以200ml/min的流速注入低速逆流色譜儀 的色譜柱，至色譜柱完全填滿。稱取GRE粗提物300.0g溶于5000 ml上相中制備逆流色譜樣 品溶液，開啟逆流色譜儀至50轉(zhuǎn)/min，然后以10.0 ml/min的流速輸入樣品溶液，待進樣結(jié) 束后，再以20.0ml/min的流速輸入流動相以洗脫柱內(nèi)的組分，用紫外可見檢測器在235nm下 檢測逆流色譜流出液，根據(jù)檢測器采集的圖譜收集GRE組分。分離得到GRE組分濃縮干燥 得到含鹽分離物，含鹽分離物經(jīng)甲醇提取脫鹽后得到48.5gGRE產(chǎn)品，純度達87%以上。
權(quán)利要求
1、從蘿卜籽中分離4-甲基亞磺?；?3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法，其特征在于以下步驟(1)、采用沸騰甲醇浸提蘿卜籽中的GRE，GRE提取液濃縮至含固形物80％左右；(2)、在上述濃縮液中加入適量的水，用乙酸乙酯萃取兩次脫脂；(3)、將脫脂后的溶液真空干燥，獲蘿卜籽GRE粗提物；(4)、采用逆流色譜方法分離純化GRE粗提物；(5)、收集逆流色譜分離的GRE組分進行真空濃縮至干，得到含硫酸銨的GRE分離物；(6)、用無水甲醇提取上述GRE分離物，并將甲醇提取物真空濃縮至干，即得到脫鹽的GRE產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從蘿卜籽中分離制備4-甲基亞磺?；?3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法。采用沸騰甲醇浸提蘿卜籽中的硫代葡萄糖苷；以逆流色譜儀為分離設(shè)備分離純化蘿卜籽粗提物中的GRE，其溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處于液態(tài)的正丁醇、乙腈、5％硫酸銨溶液組成，正丁醇、乙腈、5％硫酸銨溶液的比例為10∶3～6∶5。本發(fā)明方法經(jīng)濟實用，成本較低，分離所得的GRE純度在87％以上。
文檔編號C07H1/00GK101100476SQ200710069960
公開日2008年1月9日 申請日期2007年7月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月9日
發(fā)明者杜琪珍, 沈蓮清, 科 王 申請人:浙江工商大學(xué)