專利名稱：玫瑰紅景天中活性成份rosavin的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種玫瑰紅景天活性成分的合成方法，具體地說是P-(E)-肉桂 醇基-0-[6， -O-a-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷(Rosavin)的合成方法。 其結構如下所示
玫瑰紅景天(Rhodiola rosea L.)，亦稱"薔薇紅景天"，景天科 (Crassulaceae)紅景天屬(Rhodiola L.)，多年生草本或亞灌木植物。約70cm 高，花呈黃色，藥用其根及根莖。主要生長在歐洲和亞洲的海拔約1000-5000米 的干旱沙地和高海拔山區(qū)，因其新切割的根莖會散發(fā)出類似于玫瑰的芳香而得 名。玫瑰紅景天以其具有消除疲勞、抗缺氧、抗憂郁、抗微波輻射和延緩衰老等 功效而聞名，是一種傳統(tǒng)草藥，素有"高原人參"之稱。藥理實驗研究證實，玫 瑰紅景天的主要活性成分為紅景天苷(salidroside)和三種它特有的肉桂醇苷 rosavins (rosavin， rosin和rosarin)。國外現(xiàn)將玫瑰紅景天的提取物作為一 種精神刺激劑(psychostimulant)及保健品，主要用于抗疲勞、抗缺氧、緩解 壓力、提高工作效率和治療神經(jīng)系統(tǒng)的功能型疾病，如抑郁癥(d印ression)。
目前市場上的rosavin產品均為天然植物的提取物，多為混合物，很難得 到純度高的rosavin，目前尚未見有關rosavin的化學合成報道。已有文獻報道 由植物細胞培養(yǎng)獲取rosavin，但成本較高，不適于大批量生產。由于研究的需 要，我們對它們進行了化學合成的嘗試。
背景技術：
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種(3-(E)-肉桂醇基-0-[6' -O-oc-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷(Rosavin)的化學合成方法，該方法得到的產物純度高，反應條件溫和，操作簡便。
本發(fā)明的方法可以用下述的反應式表示
為此，本發(fā)明的目的在于提供Rosavin，即(3-(E)-肉桂醇基-0-[6'-0-a-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷的合成方法。 該合成路線共有l(wèi)l步。以D-葡萄糖計算得到二糖，合成步驟為七步，總收率為11.4%， 二糖給體與肉桂醇的糖苷化反應及最終的脫保護基反應總收率為13%.
本發(fā)明的合成方法中，采用肉桂醇(化合物(D))為原料，與由葡萄糖和L-阿拉伯糖經(jīng)過反應合成的糖基配體，即2，3，4-三-0-苯甲?；?[6- 0-(2， ，3， ，4，-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亞胺酯(化合物(C2))進行糖苷化反應，得到化合物(F)，再脫去保護基，即可得到Rosavin。本發(fā)明的合成方法包括如下步驟
RO
1.選擇性保護D-葡萄糖得到產物(A1)，得到結構式為 QRl 的產品，
R為Tr、 H取代基，Rl為保護集團，C2-C6的烷基取代?；?、苯甲?；蚱S基。
在反應中，化合物(A1)中剩余-0H進行全保護(A2)，將6位的-OH釋放出HO、
來，得到結構為 (A3)的產品。化合物(A1)和含保護基團反應
物的摩爾比是l :3.0-5.0,反應溫度是-10—8(TC，反應時間是1.5-12小時，反應有機溶劑是C2-C4的氯代垸烴、吡啶、DMAP或一種以上的混合物，用量是lmol化合物(Al)用6.5-10升有機溶劑,反應收率為40-50%。
R為Tr、 H取代基，Rl為保護集團，C2-C6的烷基取代酰基、苯甲酰基或芐
HO、
ooR^^ORl 、o。
2.結構式為 QRl 的化合物(A3)、結構式為2 的
L-阿拉伯糖給體[化合物(Bl)]、路易斯酸催化劑和分子篩在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行糖苷化反應生成結構式為
QRl的[化合物(Cl)]，在糖苷化反應中，化合物(A3)、化合物(B1)和路易斯酸催化劑的摩爾比是1 : 0.8-5.0 : 0.01-1.0,化合物(A3)和分子篩的重量比為1 : 0-7.0，反應溫度是-20—40r，反應時間是0.5-4.5小時，反應溶劑用量是lmol化合物(A3)用4-12升有機溶劑，反應結束時加入淬滅劑淬滅反應，產物用柱層析或重結晶純化，
結構式中R2為-OH保護集團，R2包括C2-C6的烷基取代?；?、苯甲?；?br> 芐基；X為OC(NH)CCl3或SEt;HO、
3.在惰性氣體保護下，結構式為^ w化合物(D)、結構式為
OR2
9R2
OR，
的葡萄糖基給體(化合物C2)、路易斯酸催化劑和分子篩，在有機溶劑中進行糖
OR2.
苷化反應生成結構式為 。Rl 的化合物(F)。在糖苷化
反應中，化合物(D)、化合物(C2)和路易斯酸催化劑的摩爾比是1:0.8-5.0:
0.0l-i.o。較好的是i: 1.05-1.8 : 0.01-0.2。路易斯酸催化劑是<:3-(:9的碘代酰胺、
CrC6的氟代烴基磺酸、C2-C8的硅基氟代烴基磺酸酯、d-C6的氟代烴基磺酸銀、三氟化硼-乙醚絡合物或它們的混合物，例如N-碘代丁二酰亞胺(NIS)、 N-碘代丁二酰亞胺(NIS)-三氟甲磺酸銀(AgOTf)混合物、N-碘代丁二酰亞胺(NIS)-三氟甲磺酸(TfOH)混合物、三氟甲磺酸銀(AgOTf)、三氟甲磺酸三甲基硅基酯(TMSOTf)等，較好的是三氟甲磺酸銀(AgOTf)、三氟甲磺酸三甲基硅基酯(TMSOTf)和三氟化硼-乙醚絡合物?；衔?D)和分子篩的重量比為1 : 1.0-7.0，分子篩較好的是4A、 5A球形分子篩的粉末。反應溶劑是Cw的氯代垸烴、二氧六環(huán)或甲苯，較好的是二氯甲烷或三氯甲烷，溶劑用量是lmol化合物(V)用10-40升溶劑。反應溫度是-78—4(TC，較好的是-35-25。C。反應時間是0.2—4小時，較好的是1.0-2.0小時。反應溫度是-35—25。C，反應時間是0.5-4.5小時。惰性保護氣體是氮氣、氬氣或氦氣。反應結束時加入弱堿淬滅反應，弱堿是三甲胺、
三乙胺，促進劑與弱堿的摩爾比是i : l-3，較好的是i : 1-1.2。
產物用柱層析純化，柱層析用的填充劑是硅膠，氧化鋁或大孔樹脂等，較佳是硅
膠，硅膠與產物的重量比為20-10 : 1，硅膠的粒度較好的是300-400目，洗脫用
的溶劑是石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲垸、甲醇或環(huán)己烷中一種或一種
以上的混合物。反應的收率為70-80%。
結構式中Ri和R2為-OH保護集團，包括C2-C6的垸基取代?；?、苯甲?；蚱S基；X為0C(NH)CC13或SEt;
4.上面得到的化合物(F)和一價堿金屬化物的水溶液在極性溶劑中進行脫保護一價堿金屬化物是氫氧化鈉、甲醇鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰，化合物(F)和一價堿金屬化物的摩爾比是l :4-10。極性溶劑是四氫呋喃、二氯甲烷、甲醇、乙醇、石油醚的混合物，溶劑用量是lmol化合物(F)用10-30升溶劑。反應溫度是40-10(TC。反應時間是10-18小時。反應產物經(jīng)重結晶，可得到高純度的(G)，重結晶純化所用的溶劑是三氯甲垸、CrC4的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚的混合物。反應的收率為50-70%。
通以下述實施例將有助于理解本發(fā)明，但不限制本發(fā)明的內容。實施例l 6-0-三苯基甲基-葡萄糖(Al)的合成
(R為Tr R1為H)
取D-葡萄糖(180. 16g， l.Omol)溶解于吡啶(1800ml)中，加入TrCl(362g , L3mo1)和D區(qū)P(1.833g ， 0.015mol)， 80。C攪拌過夜，TLC(乙酸乙酯甲醇=8: 1)檢測反應完全，直接用于下步反應。
實施例2 1， 2， 3， 4-四-0-苯甲?；?6 -0-三苯基甲基-D-吡喃葡萄糖(A2)的合成
化合物Al溶液在冰水浴下，滴加苯甲酰氯(521ml),室溫攪拌過夜，TLC(石油醚乙酸乙酯=4: 1)檢測反應完全，滴加甲醇(140.86ml)淬滅反應，用乙酸乙酯(4000ml)稀釋，依次用3WHC1溶液(1500ml*4)、飽和NaHC03溶液
(1500ml*l)、飽和食鹽水(1500ml*2)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得褐色糖漿狀產物約900g。。
實施例3 1, 2， 3， 4-四-0-苯甲?；?D-吡喃葡萄糖(A3)的合成取A2 (900g)溶于二氯甲烷(2000ml)，加入甲醇(1000ml)，加對甲苯磺酸調節(jié)反應液pH至2，室溫攪拌過夜，TLC (石油醚乙酸乙酯=4: 1)檢測反應
完全，加入三乙胺調節(jié)反應液pH至7，濃縮，柱層析(洗脫劑石油醚乙酸
乙酯=4: 1)得淡黃色固體381.8g , HPLC:87.73% 。
實施例4 1， 2， 3， 4-三-0-乙?；?L-呋喃阿拉伯糖三氯乙酰亞胺酯(Bl)的合成a )四-O-乙酰基-L-呋喃阿拉伯糖 取L-阿拉伯糖(100g , 0. 6mo1)溶于醋酸酐(400ml)，加入醋酸鈉(52g) ， 160 度油浴回流。沸騰五分鐘后傾入2L冰水中。TLC (石油醚乙酸乙酯=3: 1)檢 測反應完全。油層用300mL無水乙醇稀釋，用活性碳脫色。水相用二氯甲烷萃取， 旋干。得油狀物258g，產率約90% 。 b ) 2， 3， 4-三-O-乙酰基-L-呋喃阿拉伯糖
取上步反應產物(128g ,le)溶于DMF(177mL)/乙酸乙酯(327mL)攪拌， 冰水浴下，滴加醋酸/水合肼溶液[冰醋酸51.2mL (2.2e)/水合肼 43.5mL( 1.8e)/DMF(150mL)]，室溫攪拌4h， TLC (石油醚:乙酸乙酯=2 : 1) 檢測反應完全。將反應液倒入冰稀鹽酸中，用乙酸乙酯萃取，合并有機相，依次 用飽和NaHC03溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得淡黃色 油狀物。柱層析將其溶于二氯甲烷，加入一倍量100-200目硅膠拌為干樣；硅
膠量(3 0 0 — 4 0 0目)為上樣量三倍量；洗脫劑石油醚乙酸乙酯=2: 1 (出 原料)/石油醚乙酸乙酯=1: 1 (出產物)。得油狀產物4 5g。收率6 4 %.
c ) . 2 ， 3 ， 4-三-0-乙酰基-L-呋喃阿拉伯糖三氯乙酰亞胺酯
取上步反應產物(63g， 1 e )溶于無水處理的二氯甲烷(315ml)，氬氣保護 下，室溫攪拌，加入三氯乙腈(43. 2ml， 1. 8 e )，再滴加DBU(l. 89ml， 0. 05 e ), 反應1小時，TLC (石油醚乙酸乙酯=2: 1)檢測反應完全，快速短柱柱層析， 用二氯甲垸淋洗，洗脫液直接用于下步反應。
實施例5 1， 2， 3， 4-四-O-苯甲酰基-[6- 0- (2'， 3'， 4'-三-0-乙?；? -L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖的合成1， 2， 3， 4-四-0-苯甲?；?D-吡喃葡萄糖(108.7g ，0.8e)溶于上述亞胺 酯二氯甲垸溶液(約1L)、再加入活化過的4 A分子篩(69g)。氬氣保護下，冰 -鹽浴(一20。C)，慢慢滴加0.05mlTMS0Tf/ml 二氯甲垸溶液(75.6ml)。 TLC (石 油醚乙酸乙酯=2: 1)檢測反應進程，1.0小時后反應完全。過濾，濾液旋蒸 濃縮。加入約十倍量丙酮溶劑，加熱至6(TC全溶，自然冷卻。析出白色晶體， 過濾。母液回收柱層析。收率70% 。 —
實例6 2， 3， 4-三-0-苯甲?；?[6-0- (2'， 3'， 4'-三-(h乙酰基)-L-呋喃 阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖的合成
取上步反應產物(5g ,le )溶于匿F(30ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸 (0.8ml， 2.4e)，冰水浴，滴加85%水合肼(0.7ml， 2e)，室溫攪拌，TLC (石油醚乙酸乙酯=2: 1)檢測反應進程，5小時后反應完全。反應液用乙酸 乙酯稀釋后，依次用飽和NaHC(V溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾， 濃縮.嘗試用乙酸乙酯重結晶，有白色固體析出，但原料點無法結去(粗品、結
晶物均有留樣)。柱層析(洗脫劑石油醚乙酸乙酯=4: 1)。收率73%。
實例7 2， 3， 4-三-0-苯甲酰基-[6- 0- (2'， 3'， 4'-三-0-乙?；?-L-呋 喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亞胺酯(F)的合成
取上步反應產物(llg ,0.015 mol)溶于無水處理的二氯甲垸(50ml)，氬 氣保護下，室溫攪拌，加入三氯乙腈(19.9ml),再滴加DBU(O. 12ml),反應2 小時，TLX (石油醚乙酸乙酯=2: 1)檢測反應完全，快速短柱柱層析，用無水 處理的二氯甲烷淋洗，洗脫液直接用于下步反應。
實例8 2，3，4-三-0-苯甲酰基-[6-0- (2， ，3， ，4，-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿 拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖肉桂醇的合成OAc
將肉桂醇(L 287g ，9.608 mol)溶于上述亞胺酯無水處理的二氯甲烷(約 80ml)溶液，再加入活化過的4A分子篩(6g)。氬氣保護下，室溫攪拌30min后， 冰-鹽浴(一20。C)，慢慢滴加慢慢滴加0.005mlTMS0Tf/ml 二氯甲烷溶液 (1.58ml)。 TLC (石油醚乙酸乙酯=2: 1)檢測反應進程，0. 5小時后反應完全。 過濾，濾液旋蒸濃縮，柱層析得到白色固體6.7g，收率70%。此步后處理嘗試用 乙醇/二氯甲垸重結晶，有白色固體析出，能結去大部分雜點。方法為將粗品溶 于0.5倍量二氯甲烷中至全溶，加入五倍量無水乙醇靜置卜2日。過濾，烘干。 實例9 (3-(E)-肉桂醇基-O-[6'-0-a-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷的合 成
取上步反應產物(5g， 5.875mol)，溶于甲醇和二氯甲垸的混合溶液中 (90ml，V/V=3:l),加入甲醇鈉(0.6g)， TLC (氯仿:甲醇水=8: 1: 1)檢測反 應進程，4小時后反應完全。攪拌下加入酸性樹脂調節(jié)至PH=7,過濾，濾液旋蒸 濃縮，柱層析(洗脫劑氯仿甲醇=4: 1)得白色固體2.1g。產物用乙醇重結 晶，乙醇量為200倍，加熱回流，熱熔冷析，收率60%， HPLC:99% 。 其物化數(shù)據(jù)如下
'HNMR (300MHz， CD30D): S7. 2—7. 5(m， 5H ) ， 6.68 (d， 1H)， 6.4 (tn， 1H), 4.5 (dd， 1H) , 4. 3—4.4( m ， 3H ) ， 4.2 (dd， 1H) ， 3.8—3. 2( m ， 14H )
13CNMR (300MHz， CD30D): 137.08， 132.58， 128.41， 127.52， 126.37， 125.58， 103.99， 102.29， 76.80， 75.74， 73.92， 73.03， 71.23， 70.53， 69.74， 68.37， 68.28， 65.49
ESI-MS (m/z): 451.0 (M+Na)。
權利要求
1、玫瑰紅景天中活性成份rosavin的制備方法即一種β-(E)-肉桂醇基-O-[6’-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷(Rosavin)的合成方法，其特征是包括如下步驟(a)由肉桂醇(化合物(D))、2，3，4-三-O-苯甲?；?[6-O-(2’，3’，4’-三-O-乙?；?-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亞胺酯(化合物(C2))、三甲基硅基三氟甲磺酸酯和分子篩在惰性氣體保護下，在溶劑中進行糖苷化反應生成2，3，4-三-O-苯甲酰基-[6-O-(2’，3’，4’-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖肉桂醇(化合物F)，在糖苷化反應中，化合物(D)、化合物(C2)和三甲基硅基三氟甲磺酸酯的摩爾比是1∶1.05-1.8∶0.01-0.2，化合物(D)和分子篩的重量比為1∶2.0-4.0，反應溫度是-35—25℃，反應時間是0.5-4.5小時，反應溶劑用量是1mol化合物(D)用4-12升溶劑，反應結束時加入弱堿淬滅反應，產物(化合物(F))用柱層析或重結晶純化；(b)化合物(F)和一價堿金屬化物在極性溶劑中進行脫保護基反應生成Rosavin(化合物G)，在脫保護基反應中，化合物(F)和一價堿金屬化物的摩爾比是1∶4-10，反應溫度是20-50℃，反應時間是4-10小時，極性溶劑的用量是1mol化合物(F)用10-30升溶劑，生成的產物Rosavin經(jīng)柱層析、重結晶純化。
2、 如權利要求1所述的合成方法，其特征是在所述的糖苷化反應中所述的 惰性保護氣體是氮氣、氬氣或氦氣。
3、 如權利要求1所述的合成方法，其特征是在所述的糖苷化反應中所述的 有機溶劑是C,-C4的氯代垸烴。
4、 如權利要求1所述的合成方法，其特征是在所述糖苷化反應中加入的弱 堿淬滅反應的弱堿是三甲胺或三乙胺。
5、 如權利要求1所述的合成方法，其特征是在所述糖苷化反應中所用的分 子篩是3A-5A型硅鋁酸鹽分子篩或它們的粉末。
6、 如權利要求1所述的合成方法，其特征是在所述糖苷化反應中柱層析所用的填充劑是硅膠、氧化鋁或大孔樹脂。
7、 如權利要求1所述的合成方法，其特征是在所述糖苷化反應中所述柱層 析純化中洗脫用的溶劑是石油醚、二氯甲垸、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇或環(huán)己 垸中一種或一種以上的混合物。
8、 如權利要求1所述的合成方法，其特征是在所述脫保護基反應中所述的 一價堿金屬化物是氫氧化鈉、甲醇鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰。
9、 如權利要求1所述的合成方法，其特征是在所述脫保護基反應中所述的 極性溶劑是四氫呋喃、甲醇、二氯甲垸、乙醇、水中的一種或一種以上的混合物。
10、 如權利要求1所述的合成方法，其特征是在所述的脫保護基反應后重結 晶純化所用的溶劑是三氯甲垸、CrC4的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、水中一種或 一種以上的混合物。
全文摘要
一種β-(E)-肉桂醇基-O-[6′-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷(Rosavin)的合成方法，是由肉桂醇與2，3，4-三-O-苯甲?；?[6-O-(2’，3’，4’-三-O-乙?；?-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亞胺酯進行糖苷化反應，再脫去保護基，即得β-(E)-肉桂醇基-O-[6′-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷。該方法原料便宜易得，反應條件溫和，所得產物純度高，未有文獻報道，因此本發(fā)明合成方法是一個新的人工合成Rosavin的方法。
文檔編號C07H15/18GK101456885SQ20071009445
公開日2009年6月17日 申請日期2007年12月13日 優(yōu)先權日2007年12月13日
發(fā)明者惠永正, 楊志奇, 王愛玲 申請人:上海藥谷藥業(yè)有限公司