專利名稱：高純度米格列醇的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及米格列醇的生產(chǎn)方法，更具體地說，本發(fā)明涉及一種 高純度米格列醇的生產(chǎn)方法，該方法能在穩(wěn)定的條件下實施整個生產(chǎn) 過程，且經(jīng)濟實用，安全的高純度米格列醇生產(chǎn)方法。本發(fā)明可以提 供高效地提純生產(chǎn)米格列醇的方法，采用了陶瓷膜微濾、超濾及離子 交換、結(jié)晶等新技術(shù)，最大限度地提高米格列醇地生產(chǎn)效率，從而實 現(xiàn)高純度米格列醇的產(chǎn)業(yè)化。
背景技術(shù)：
眾所周知，米格列醇是一種a-葡糖苷酶抑制劑，主要用于治療II 型糖尿病(即非胰島素依賴型NIDDM)，其功能主要是降低患者餐后 血糖水平，減少糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生。它是由德國拜耳制藥公司研制 開發(fā)的，并由賽諾菲生產(chǎn)上市。
米格列醇的發(fā)現(xiàn)過程，首先是于1970年發(fā)現(xiàn)原來作為抗沙門菌 篩選獲得的野尻霉素(1966年)具有淀粉酶抑制作用，隨后又發(fā)現(xiàn) 微生物產(chǎn)生的1-脫氧野尻霉素具有更強的(i-葡糖苷酶抑制作用。從 而開始對這類化合物的研究開發(fā)，最終發(fā)現(xiàn)了米格列醇。
根據(jù)文獻(xiàn)資料，米格列醇的合成方法有三種根據(jù)文獻(xiàn)資料，米 格列醇的合成方法有三種 一是化學(xué)全合成；二是先發(fā)酵得到1-脫氧 野尻霉素再進行半合成；三是先用生物轉(zhuǎn)化方法得到米格列醇重要中 間體，再半合成。下面簡單介紹這三種合成方法。
1、化學(xué)全合成法(參見式l):1-脫氧野尻霉素
米格列醇
式l:米格列醇化學(xué)全合成路線 從以上路線看來米格列醇的化學(xué)全合成非常困難，它不僅需要
大量的基團保護步驟，而且涉及到立體構(gòu)型的控制與選擇，分離提純 工作非常艱巨，工業(yè)化幾乎不可能實現(xiàn)。
2、用發(fā)酵方法先得到1-脫氧野尻霉素再進行半合成方法(見式2):
式2:米格列醇先發(fā)酵得到1-脫氧野尻霉素再進行半合成路線
用發(fā)酵法制備野尻霉素或1-脫氧野尻霉素，技術(shù)難度大，成本非 常高。而后用化學(xué)半合成方法制備米格列醇的步驟長，要產(chǎn)業(yè)化比較 困難。
化學(xué)合成
CH2CH2OH
米格列醇
發(fā)酵法
1-脫氧野尻霉素3、化學(xué)合成--生物轉(zhuǎn)化---化學(xué)合成方法
目前，正在研究首先應(yīng)用生物轉(zhuǎn)化的方法來制備米格列醇的重要 中間體，然后再進行化學(xué)合成獲得米格列醇。 一種路線是氨基葡萄糖
生物轉(zhuǎn)化得到6-脫氧-6-氨基-山梨呋喃糖，再進行化學(xué)合成；另一種
路線是生物轉(zhuǎn)化得到6-脫氧-6-(2-羥乙基-氨基)-山梨呋喃糖的中間 體，再進行一步合成，轉(zhuǎn)化為米格列醇。
3.1路線一
該路線實際上是應(yīng)用氧化葡萄糖酸菌進行微生物轉(zhuǎn)化，得到6-脫氧-6-氨基-山梨呋喃糖，再合成1-脫氧野尻霉素，從而進一步合成 米格列醇；或者6-脫氧-6-氨基-山梨呋喃糖上羥乙基后再還原重排為 米格列醇。(見式3):
米格列醇
式3:路線一
以上路線一雖然用生物轉(zhuǎn)化法可以方便地得到6-脫氧-6-氨基-山 梨呋喃糖，但是要合成1-脫氧野尻霉素再引入羥乙基合成米格列醇， 或者先引入羥乙基，再合成1-脫氧野尻霉素N取代衍生物，進而還 原為米格列醇，合成步驟比較煩瑣，不利于工業(yè)化。3.2路線二生物轉(zhuǎn)化得到6-脫氧-6-(2-羥乙基-氮基)-山梨呋喃 糖的中間體，再進行一步合成，得到米格列醇。
Kinast等人在1981年利用微生物轉(zhuǎn)化的方法，成功地獲得了 1-脫氧野尻霉素衍生物。但是在進行生物轉(zhuǎn)化前需要引入保護劑，而且 氫化時需要大量的催化劑，這些大大地增加了工藝的成本和難度。后 來，Kinast等在原有基礎(chǔ)上進行了改進(見圖4)，但是合成中仍然需 要添加保護劑。
p
P
葡萄糖
HO一
-NH—R -OH
-OH -OH —OH
l~N—R -OH
微生物氧1^ ho~h
-OH -OH 一OH
式4:N-取代-l-脫氧野尻霉素的合成方法一 (R-取代基，P-保護基)
Grabner等發(fā)明了另一種更為簡便的生物合成方法(見圖5)。
葡萄糖
式5: N-取代-l-脫氧野尻霉素的合成方法二
該方法具有很多優(yōu)點1)轉(zhuǎn)化液經(jīng)離心去除菌體后，即可直接 用于下一步合成，無需分離純化出中間體；2)無需基團保護，成本 大大降低，且避免因去除保護劑而造成的回收率下降；3)中間體6-(取 代氨基)-6-脫氧-a-L-山梨呋喃糖具有較高的溶解度和穩(wěn)定性，不易被 降解。
已經(jīng)用于該生物轉(zhuǎn)化的氧化菌株有多種多樣，主要包括細(xì)菌和真菌。除葡萄糖酸菌屬的G ox>vi<ms 5""6oxy^ms、 G oJC>^ms swZw/ .
附e/a"oge"as 等以夕卜；棒狀細(xì)菌禾斗(CoA7"咖r附)棒狀桿菌屬 (Co ywe6"cfer/wm)的C. acetog/wfam/cww、 C v7Yarwmew等以及真菌 M^sc/w汰cnWa;w/c/^A77'w/a等都具有同樣的生物轉(zhuǎn)化功能。
但是該方法菌體培養(yǎng)成本及生物轉(zhuǎn)化成本較高，用離心方法收集 菌體，菌體損失大，無法適應(yīng)工業(yè)化大生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明正是為了解決米格列醇的生產(chǎn)方法上存在的上述問題而 發(fā)明的，其目的是提供高純度米格列醇的生產(chǎn)方法，能在穩(wěn)定的條件 下實施整個生產(chǎn)過程，且經(jīng)濟實用，安全的高純度米格列醇生產(chǎn)方法。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種高純度米格列醇的制備方 法，所述方法包括如下階段階段a:通過由D-山梨醇、酵母抽提物和KH2P04組成的培養(yǎng)基 培養(yǎng)、再進行微濾分離而得到米格列醇生產(chǎn)菌株；
階段b:用所述米格列醇生產(chǎn)菌株對底物進行生物轉(zhuǎn)化、微濾、 超濾、納濾、活性炭脫色得到米格列醇的中間體；
階段C:將階段b得到的米格列醇中間體進行氫化反應(yīng)，離子分
離、活性炭脫色、解吸、濃縮、結(jié)晶得到高純度米格列醇。 根據(jù)本發(fā)明，所述米格列醇生產(chǎn)菌株為葡萄糖氧化桿菌
HCCB-001;所述底物為胺化的葡萄糖，其中，所述胺化的葡萄糖為 N-(2-羥乙基)-葡糖胺。
其中，所述葡萄糖氧化桿菌HCCB-001通過陶瓷微濾膜在溫度 0 55。C下而分離提純。所述葡萄糖氧化桿菌HCCB-001通過選自陶 瓷、聚醚砜或者再生纖維素材質(zhì)的、孔徑為0.2~0.5pm的微濾膜在溫 度0 55'C下而分離提純。
根據(jù)本發(fā)明，在階段b中所述生物轉(zhuǎn)化通過加入所述米格列醇生 產(chǎn)菌株和MgS047H20將所述底物進行氧化，生物轉(zhuǎn)化的溫度為
80~55°C，得到轉(zhuǎn)化液，優(yōu)選地，生物轉(zhuǎn)化的溫度為10 25°C。
其中，所述轉(zhuǎn)化液為6- (2-羥乙基)-氨基-6-脫氧-01丄-山梨呋喃糖。
根據(jù)本發(fā)明，在階段b中所述微濾通過采用選自陶瓷、聚醚砜或 者再生纖維素材質(zhì)的、孔徑為0.2 0.5nm的微濾膜在溫度0 55'C下 微濾去除菌體，得到微濾液。
根據(jù)本發(fā)明，在階段b中所述超濾通過采用選自陶瓷、聚醚砜或 者再生纖維素材質(zhì)的、孔徑為0.2~0.5pm的超濾膜在溫度0 55'C下 超濾所述微濾液，得到超濾液。
根據(jù)本發(fā)明，在階段b中所述納濾通過采用選自聚醚砜或者再生 纖維素材質(zhì)的、截留分子量為100Da-150Da的納濾膜在溫度0~55°C 下濃縮超濾液，得到納濾液。
根據(jù)本發(fā)明，在階段c中所述氫化反應(yīng)的催化劑為鈀炭、活性鎳。
根據(jù)本發(fā)明，在階段c中所述離子分離采用離子交換樹脂進行分離。
其中，所述陽離子交換樹脂包括強酸性陽離子交換樹脂DOOl、 強酸性陽離子交換樹脂HD-8、強酸性陽離子交換樹脂JK006、強酸 性陽離子交換樹脂JK001、強酸性陽離子交換樹脂DOWEX50x8-100、 陽離子交換樹脂CG50;強酸性陽離子交換樹脂HZ002、強酸性陽離 子交換樹脂HZ016、強酸性陽離子交換樹脂C145、強酸性陽離子交 換樹脂C150、強酸性陽離子交換樹脂C160。
根據(jù)本發(fā)明，在階段c中所述解吸通過加入氨水而進行解吸。
根據(jù)本發(fā)明，在階段c中所述濃縮通過薄膜蒸餾、逆流滲透裝置 或減壓濃縮裝置進行濃縮，得到含有米格列醇的糖漿狀物質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明，在階段c中所述結(jié)晶通過向所述含有米格列醇的糖 漿狀物質(zhì)中加入醇或酮，通過結(jié)晶、過濾、重結(jié)晶、活性炭脫色、再 過濾而得到高純的米格列醇。
其中，所述醇為Cl-C6的一元醇、二元醇或三元醇；其中一元醇為甲醇、乙醇、丙醇或異丙醇、正丁醇或異丁醇；二元醇為乙二醇、 丙二醇；三元醇為丙三醇。所述酮為C3-C6的酮；其中包括丙酮、丁 酮或環(huán)己酮。
下面簡單闡述本發(fā)明的階段a、階段b、和階段c的生產(chǎn)方法。 階段a:
上述米格列醇生產(chǎn)方法中，將葡萄糖氧化桿菌HCCB-001作為米 格列醇的工程菌株。
將由D-山梨醇、酵母抽提物和KH2P04制成的培養(yǎng)基，并在一 定通氣量、攪拌轉(zhuǎn)速、溫度條件下，實施發(fā)酵培養(yǎng)。其中，酵母提取 物是通過將酵母細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解成氨基酸和多肽，核酸降解成核苷 酸，并將它們和其它有效成分，如B族維生素、谷肌甘肽、微量元素 等一起從酵母細(xì)胞中抽提出來，所制得的人體可直接吸收利用、可溶 性營養(yǎng)及風(fēng)味物質(zhì)的濃縮物。本發(fā)明所采用的酵母提取物是一種常用 的并可通過采購得到的酵母提取物。利用上述方法培養(yǎng)得到大量菌株 后，在溫度為0 55t:，優(yōu)選10 25。C、流入壓為0 4.0bar和流出壓為 0 3.5bar的條件下，在保持菌株活性的情況下能夠有效去除雜質(zhì)，得 到高活性比較純的菌絲體。
上述米格列醇生產(chǎn)方法中，該工程菌株分離采用的微濾膜為陶 瓷、聚醚砜或者再生纖維素材質(zhì)，孔徑為0.2~0.5pm的微濾膜，可以 使用以下微濾膜中的任意一種密理博公司(Millipore Co.)的Pellicon module Biomax、 Ultracel微濾膜、Prostak module的PT、 PL微濾膜、 Spiral Wound Ultrafiltration module的PT、 PL、 Helicon微濾膜、德國 賽多利斯股份公司(SartoriusAG)的SatroconUltrasart微濾膜、頗爾 公司(Pall Co.)的OMEGATM、 ALPHAtm、 REGENtm、 SUPORTm微 濾膜、陶氏化學(xué)公司(Dow Chemical Co.)的Filmtec 微濾膜、安法 瑪西亞公司(Amersham Pharmacia)的Kvick 微濾膜。始終維持 0 55°C，優(yōu)選10 25。C溫度條件和0~4.0bar的流入壓及0~3.5bar的流 出壓。階段b:
上述米格列醇生產(chǎn)方法中，用葡萄糖氧化桿菌HCCB-001對底物 進行生物轉(zhuǎn)化得到米格列醇的中間體。所述底物為葡糖胺。
上述米格列醇生產(chǎn)方法中，微濾階段所采用的微濾膜為陶瓷、聚 醚砜或者再生纖維素材質(zhì)，孔徑為0.2~0.5pm的微濾膜，可以使用以 下微濾膜中的任意一種密理博公司(Millipore Co.)的Pelliconmodule Biomax、 Ultmcel微濾膜、Prostak module的PT、 PL微濾膜、Spiral Wound Ultrafiltration module的PT、 PL、 Helicon微濾膜、德國賽多利 斯股份公司(Sartorius AG)的Satrocon Ultrasart微濾膜、頗爾公司(Pall Co.)的OMEGATM、 ALPHATM、 REGENTM、 SUPOR 微濾膜、陶 氏化學(xué)公司(Dow Chemical Co.)的FilmteJM微濾膜、安法瑪西亞公 司(AmershamPharmacia)的KvickTM微濾膜。始終維持0 55。C，優(yōu) 選10 25。C溫度條件和0~4.0bar的流入壓及0~3.5bar的流出壓。
上述米格列醇生產(chǎn)方法中，超濾階段所采用的超濾膜為陶瓷、聚 醚砜或者再生纖維素材質(zhì)的分子量cut-off大小為3,000Da~ 300，000Da的超濾膜；本項發(fā)明中建議使用的超濾膜分子量cut-off大 小為5,000Da 50,000Da，可以使用以下超濾膜中的任意一種密理博 公司(Millipore Co.)的Pellicon module Biomax、 Ultracel超濾膜、 Prostak module的PT、 PL超濾膜、Spiral Wound Ultrafiltration module 的PT、 PL、 Helicon超濾膜、德國賽多利斯股份公司(Sartorius AG) 的Satrocon Ultrasart超濾膜、頗爾公司(Pall Co.)的OMEGATM、 ALPHA 、 REGENTM、 SUPOR 超濾膜、陶氏化學(xué)公司(Dow Chemical Co.)的Filmtec 超濾膜、安法瑪西亞公司(Amersham Pharmacia)的KvickTM超濾膜。始終維持0 55。C，優(yōu)選10 25。C溫度 條件和0 4.0bar的流入壓及0~3.5bar的流出壓。
上述米格列醇生產(chǎn)方法中，納濾階段所采用的納濾膜為聚醚砜或 者再生纖維素材質(zhì)的分子量cut-off大小為100~1000Da，本項發(fā)明中 建議使用的納濾膜分子量cut-off大小為100-150 Da,可以使用美國OSMONICS的納濾膜，始終維持0 55"C,優(yōu)選10 25"C溫度條件和 0~2.0Mpa的流入壓及0 1.8Mpa的回流壓。
上述米格列醇生產(chǎn)方法中，脫色階段中所采用的活性炭型號米德 維實偉克公司(MeadWestvaco Co.)的AQUANUCHAR、 NUCHAR SA、 NUCHAR SA-20、 NUCHAR SA-30、 NUCHAR SN、 NUCHAR SN-20、荷蘭諾瑞特公司(NORIT NederlandB.V.)的NORIT A SUPRA EUR、 NORIT B SUPRA EUR、 NORIT C EXTRA USP、 NORIT CN 1 、 NORITCN3、 DARCOG60、 DARCOKB、 DARCOKB-B、 NORITE SUPRA USA、 NORIT GBG、 NORITPN2、 NORITROX 0.8、 NORIT SX 1、 NORIT SX 1G、 NORIT SX 2、 NORIT SX PLUS、 NORIT SX SUPRAE153、 NORIT SX ULTRA、卡爾岡炭素公司(Calgon Carbon Co.)的CAL 12X40、 GW12X40之一。脫色溫度為0 55°C，優(yōu)選 20 25°C，脫色時間0.5~1小時。
階段c:
上述米格列醇生產(chǎn)方法中，將階段b得到的米格列醇中間體濃縮 液進行氫化反應(yīng)，其中所述氫化反應(yīng)所需加入的催化劑可以為5%的 鈀炭、10%的鈀炭、活性鎳，然后過濾，濾液上離交柱分離，再濃縮
得到含有米格列醇的糖漿狀物質(zhì)。本發(fā)明采用向含有米格列醇的糖漿 物中加入C1-C5的醇，C3-C5的酮，攪拌至有大量白色固體析出，回 收固體，使溶于甲醇中，加干燥劑千燥后，再加活性炭脫色，減壓蒸 干，即得米格列醇晶體。用HPLC法檢測，純度達(dá)99.0%以上。
上述米格列醇的生產(chǎn)方法中，離子分離階段采用陽離子離子交 換樹脂進行離子交換柱分離，所述離子交換樹脂可以為上海華震 的HZ001、 D001、 JK006、 JK001、 HD-8、 HZ201;飄萊特的CT151、 CG50;陶氏的DOWEX50x8-100之一；用氨水進行洗脫。
上述米格列醇的生產(chǎn)方法中，脫色階段中所采用的活性炭型號 米德維實偉克公司(MeadWestvaco Co.)的AQUA NUCHAR、 NUCHAR SA、 NUCHAR SA-20、 NUCHAR SA-30、 NUCHAR SN、NUCHAR SN-20、荷蘭諾瑞特公司(NORIT Nederland B.V.)的NORIT A SUPRA EUR、 NORIT B SUPRA EUR、 NORIT C EXTRA USP、 NORIT CN 1、 NORIT CN3、 DARCO G60、 DARCO KB、 DARCO KB-B、 NORIT E SUPRA USA、 NORIT GBG、 NORIT PN 2、 NORIT ROX 0.8、 NORIT SX 1、 NORIT SX 1G、 NORIT SX 2、 NORIT SX PLUS、 NORIT SX SUPRA E 153、 NORIT SX ULTRA、卡爾岡炭素 公司(Calgon Carbon Co.)的CAL 12X40、 GW12X40之一。脫色溫 度為0 55。C，優(yōu)選40 50。C，脫色時間0.5 1小時。
上述米格列醇的生產(chǎn)方法中，利用薄膜蒸餾、逆流滲透裝置或 減壓濃縮裝置進行濃縮，得到含有米格列醇的糖漿狀物質(zhì)。本發(fā)明 采用向含有米格列醇的糖漿物中加入C1-C5的醇，C3-C5的酮，攪 拌至有大量白色固體析出，回收固體，使溶于甲醇中，加干燥劑干 燥后，再加活性炭脫色，減壓蒸干，即得米格列醇晶體。用HPLC 法檢測，純度達(dá)99.0%以上。
正如前面所述，本發(fā)明可以提供高效地提純生產(chǎn)米格列醇的方 法，采用了陶瓷膜微濾、超濾及離子交換、結(jié)晶等新技術(shù)，最大限 度地提高米格列醇地生產(chǎn)效率，從而實現(xiàn)高純度米格列醇的產(chǎn)業(yè)化。
具體實施例方式
下面通過實施例詳細(xì)說明本發(fā)明的內(nèi)容，本發(fā)明的實施例的目的 是更加具體地說明本項發(fā)明，而本項發(fā)明的專利范圍并不僅僅局限于 以下實施例。
實施例1
在100L的發(fā)酵罐內(nèi)，按照以下配方D-山梨醇6.0%;酵母抽提 物2.4%; KH2P04 4.8。/。制得成培養(yǎng)基，按體積比10%接種量的培養(yǎng) 基接入米格列醇工程菌株種子，并在通氣量為l:l(vol:vol)，攪拌轉(zhuǎn) 速為300rpm， 28t溫度條件下，實施24-28小時發(fā)酵培養(yǎng)。實施例2-5
利用上述方法培養(yǎng)得到大量菌株后，將上述發(fā)酵液放入微濾循環(huán) 罐，采用陶瓷微濾膜分別在0°C 、 10°C 、25°C 、55°C溫度條件和0 4.0bar 的流入壓及0 3.5bar的流出壓。期間加入純化水頂洗三次，在保持 菌株活性的情況下能夠有效去除雜質(zhì)，得到高活性比較純的菌絲體 1、 2、 3、 4。
實施例6-9
利用本發(fā)明中的上述方法得到大量菌株1、 2、 3、 4后，在100L 轉(zhuǎn)化罐投入溶有N-(2-羥乙基)-葡糖胺的水溶液中進行生物轉(zhuǎn)化，在 pH6.0，通氣量為l:1.5(vol:vo1)，攪拌轉(zhuǎn)速為400rpm，溫度為28"的 條件下，確定了轉(zhuǎn)化配方如下N-(2-羥乙基)-葡糖胺6.0 kg， MgS04.7H20 2.05kg，通過菌體1、 2、 3、 4分別將N-(2-羥乙基)-葡 糖胺氧化為6- (2-羥乙基)-氨基-6-脫氧-01丄-山梨呋喃糖，得到轉(zhuǎn) 化液l、 2、 3、 4。
將上述轉(zhuǎn)化液1 4分別經(jīng)過法國達(dá)美的陶瓷膜微濾去除菌體，微 濾時分別在0。C、 10°C、 25°C、 55。C溫度條件和0 4.0bar的流入壓及 0 3.5bar的流出壓，得到微濾液1、 2、 3、 4。
再將上述含有中間體的微濾液1~4分別通過法國達(dá)美的超濾膜 超濾，超濾時分別在0。C、 10°C、 25°C、 55。C溫度條件和0 4.0bar的 流入壓及0 3.5bar的流出壓，得到超濾液1、 2、 3、 4。
再將上述超濾液1 4分別通過經(jīng)過美國OSMONICS的納濾膜濃 縮，納濾時，分別在0°C、 10°C、 25°C、 55T:溫度條件和0 2.0Mpa 的流入壓及0 1.8Mpa的回流壓，得到納濾液l、 2、 3、 4。
最后，將上述納濾液1~4按1% (w/v)的比例分別投入活性炭脫 色得到高濃度中間體的溶液l、 2、 3、 4。
實施例10-13將上述實施例6-9得到的高濃度中間體的溶液1 4分別加入50L 的氫化反應(yīng)釜中，再分別加入1.0Kg5y。的鈀炭，溶解后吸入反應(yīng)釜， 通入氫氣，保持壓力2.0 3.0Mpa開始反應(yīng)24小時。反應(yīng)結(jié)束后，過 濾，回收鈀炭，得到米格列醇濾液l、 2、 3、 4。
實施例14-17
將上述實施例10-13得到的米格列醇濾液1 4用泵分別打入裝有 50L的強酸性陽離子交換樹脂DOOl、強酸性陽離子交換樹脂JK006、 強酸性陽離子交換樹脂C145、強酸性陽離子交換樹脂C150的離子交 換器中，用400L進行水洗，控制流速20L/hr;再用0.5N的氨水解吸， 控制解吸速度為10L/hr，得到解吸液l、 2、 3、 4。
實施例18-21
將上述實施例14-17得到的含米格列醇產(chǎn)品的解吸液1 4分別吸 入20L反應(yīng)釜中，在真空度-0.094Mpa下減壓濃縮，待濃縮完成后， 向剩余的糖漿物中加入10L無水乙醇，攪拌2小時，有大量白色固體 析出，濾出，將其溶解在5L無水甲醇中，加入無水硫酸鎂500g，干 燥水分，過濾，母液加入活性炭300g，于5(TC脫色10min，過濾， 濾液減壓濃縮至2L左右體積，冷卻至5'C 10。C結(jié)晶1 4小時，過 濾得白色晶體，50 7(TC干燥15小時，即得到米格列醇晶體l、 2、 3、 4。其中，米格列醇晶體l為1.37Kg，收率67.5%， HPLC法測含量 為99.3%;米格列醇晶體2為1.49Kg，收率73.1 %， HPLC法測含 量為99.9%;米格列醇晶體3為1.48Kg，收率72.9%， HPLC法測 含量為99.6%;米格列醇晶體4為1.02Kg，收率50.2%， HPLC法 測含量為99.0%。
權(quán)利要求
1、一種高純度米格列醇的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下階段階段a通過由D-山梨醇、酵母抽提物和KH2PO4組成的培養(yǎng)基培養(yǎng)、再進行微濾分離而得到米格列醇生產(chǎn)菌株；階段b用所述米格列醇生產(chǎn)菌株對底物進行生物轉(zhuǎn)化、微濾、超濾、納濾、活性炭脫色得到米格列醇的中間體；階段c將階段b得到的米格列醇中間體進行氫化反應(yīng)，離子分離、活性炭脫色、解吸、濃縮、結(jié)晶得到高純度米格列醇。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述米格列醇生 產(chǎn)菌株為葡萄糖氧化桿菌HCCB-001;所述底物為胺化的葡萄糖，其 中，所述胺化的葡萄糖為N-(2-羥乙基)-葡糖胺。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述葡萄糖氧化 桿菌HCCB-001通過選自陶瓷、聚醚砜或者再生纖維素材質(zhì)的、孔徑 為0.2 0.5Mm的微濾膜在溫度0 55。C下而分離提純。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在階段b中所述 生物轉(zhuǎn)化通過加入所述米格列醇生產(chǎn)菌株和MgS04，7H20將所述底 物進行氧化，生物轉(zhuǎn)化的溫度為0 55°C，得到轉(zhuǎn)化液，其中，生物 轉(zhuǎn)化的溫度為10~25°C。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化液為6-(2-羥乙基)-氨基-6-脫氧-01丄-山梨呋喃糖。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在階段b中所述 微濾通過采用選自陶瓷、聚醚砜或者再生纖維素材質(zhì)的、孔徑為 0.2 0.5pm的微濾膜在溫度0 55'C下微濾去除菌體，得到微濾液。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在階段b中所述 超濾通過采用選自陶瓷、聚醚砜或者再生纖維素材質(zhì)的、孔徑為 0.2 0.5pm的超濾膜在溫度0 55t:下超濾所述微濾液，得到超濾液。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在階段b中所述 納濾通過采用選自聚醚砜或者再生纖維素材質(zhì)的、截留分子量為 100Da-150Da的納濾膜在溫度0 55'C下濃縮超濾液，得到納濾液。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在階段c中所述 氫化反應(yīng)的催化劑為鈀炭、活性鎳。
10、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在階段c中所述 離子分離采用離子交換樹脂進行分離，其中，所述離子交換樹脂為陽 離子交換樹脂。
11、 根據(jù)權(quán)利要求IO所述的方法，其特征在于，所述陽離子交 換樹脂包括強酸性陽離子交換樹脂DOOl、強酸性陽離子交換樹脂 HD-8、強酸性陽離子交換樹脂JK006、強酸性陽離子交換樹脂JKOOl、 強酸性陽離子交換樹脂DOWEX50x8-100、陽離子交換樹脂CG50; 強酸性陽離子交換樹脂HZ002、強酸性陽離子交換樹脂HZ016、強酸 性陽離子交換樹脂C145、強酸性陽離子交換樹脂C150、強酸性陽離 子交換樹脂C160。
12、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在階段c中所述 解吸通過加入氨水而進行解吸。
13、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在階段c中所述 濃縮通過薄膜蒸餾、逆流滲透裝置或減壓濃縮裝置進行濃縮，得到含 有米格列醇的糖漿狀物質(zhì)。
14、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在階段c中所述 結(jié)晶通過向所述含有米格列醇的糖漿狀物質(zhì)中加入醇或酮，通過結(jié) 晶、過濾、重結(jié)晶、活性炭脫色、再過濾而得到高純的米格列醇。
15、 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述醇為Cl-C6 的一元醇、二元醇或三元醇；其中一元醇為甲醇、乙醇、丙醇或異丙 醇、正丁醇或異丁醇；二元醇為乙二醇、丙二醇；三元醇為丙三醇。
16、 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述酮為C3-C6 的酮；其中包括丙酮、丁酮或環(huán)己酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高純度米格列醇的生產(chǎn)方法，所述方法包括如下階段階段a通過由D-山梨醇、酵母抽提物和KH₂PO₄組成的培養(yǎng)基培養(yǎng)、再進行微濾分離而得到米格列醇生產(chǎn)菌株；階段b用所述米格列醇生產(chǎn)菌株對底物進行生物轉(zhuǎn)化、微濾、超濾、納濾、活性炭脫色得到米格列醇的中間體；階段c將階段b得到的米格列醇中間體進行氫化反應(yīng)，離子分離、活性炭脫色、解吸、濃縮、結(jié)晶得到高純度米格列醇。采用本發(fā)明所述的方法，可以最大限度地提高米格列醇地生產(chǎn)效率，從而實現(xiàn)高純度米格列醇的產(chǎn)業(yè)化。
文檔編號C07D211/00GK101302549SQ20071010718
公開日2008年11月12日 申請日期2007年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月9日
發(fā)明者苗 周, 孫新強, 胡三明 申請人:浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠