專利名稱：二谷氨酸酯衍生物及其在培美曲塞制備中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有新穎結(jié)構(gòu)的二谷氨酸酯衍生物及其在培美曲塞即N-〔4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?；?L-谷氨酸制備中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
培美曲塞，結(jié)構(gòu)如式I，化學(xué)名稱為N-〔4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?；?L-谷氨酸，
其中*表示的碳的構(gòu)型為L(zhǎng)構(gòu)型。
培美曲塞是多靶點(diǎn)作用于葉酸依賴途徑的抗腫瘤藥物，屬細(xì)胞周期特異性抗代謝類藥物，其主要的作用靶點(diǎn)是胸苷酸合成酶(TS)、二氫葉酸還原酶(DHFR)、甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)甲酰酶(GARFT)，通過對(duì)這些關(guān)鍵酶的抑制影響嘌呤和嘧啶的合成，進(jìn)而抑制DNA合成。臨床研究證明其單藥對(duì)多種腫瘤有效，包括非小細(xì)胞肺癌、惡性胸膜間皮瘤、頭頸部腫瘤、胃癌、膀胱癌、宮頸癌以及胰腺癌。培美曲塞抗瘤譜廣，對(duì)許多實(shí)體瘤療效確切，且其副作用可預(yù)防或治療。
Taylor等在US6066732中公開了一種路線1所示合成培美曲塞有用中間體A的方法
路線1 D.P·謝爾在CN1271338中給出了關(guān)鍵中間體A的合成方法
路線2 Taylor等在US6066732以及D.P·謝爾等在CN1038415C和CN1271338中給出培美曲塞(式I)的制備方法均是使用式A化合物4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酸經(jīng)過活化得到式B活性酯，式B活性酯再與谷氨酸酯在非水溶劑中進(jìn)行反應(yīng)，得到式C化合物N-〔4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酰基〕-L-谷氨酸二乙酯，化合物C經(jīng)柱層析純化、濃縮、水解得到式I培美曲塞，具體如路線3所示
路線3 其中*表示的碳的構(gòu)型為L(zhǎng)構(gòu)型。
在這些方法中，式C化合物的制備需在無(wú)水條件下進(jìn)行，產(chǎn)物需經(jīng)柱層析純化并使用二氯甲烷等有毒溶劑，均存在操作周期長(zhǎng)、工藝復(fù)雜、不適合工業(yè)化生產(chǎn)的缺陷。
蘇為科等在CN1821219A和CN1821220A中公開了如下兩種結(jié)構(gòu)的中間體D、E用于合成培美曲塞，
此路線反應(yīng)條件較溫和，收率高，但工藝路線中仍存在由N-(對(duì)溴苯甲酰基)-L-谷氨酸二乙酯與3-丁烯-1-醇的偶聯(lián)反應(yīng)不易進(jìn)行，反應(yīng)副產(chǎn)物多，以及溴代試劑尤其是溴素?fù)]發(fā)性強(qiáng)，毒性大的缺陷，影響了工業(yè)化生產(chǎn)中使用。
因此上述路線中存在無(wú)水反應(yīng)要求高、反應(yīng)步驟長(zhǎng)或工業(yè)化生產(chǎn)受限制的問題，需要更適合工業(yè)化生產(chǎn)的培美曲塞制備方法。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人對(duì)培美曲塞合成工藝進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，發(fā)現(xiàn)二谷氨酸酯衍生物可以作為培美曲塞合成的關(guān)鍵中間體，反應(yīng)條件溫和，中間體容易提純，產(chǎn)品純度更高，可滿足藥用產(chǎn)品的質(zhì)量要求。
本發(fā)明一方面公開了用于培美曲塞合成的關(guān)鍵中間體及中間體的制備方法，一方面公開了通過關(guān)鍵中間體制備培美曲塞的方法。
培美曲塞合成如路線4所示

路線4 其中R為C1～C4烷基，R′、R′′、R′′′為氫、C1～C4烷基，X代表氯、溴，n為0～8的整數(shù)。
其中*表示的碳的構(gòu)型為L(zhǎng)構(gòu)型。
本發(fā)明的反應(yīng)路線涉及到的通式中，常用的化學(xué)術(shù)語(yǔ)具有通常的含義，例如，“烷基”是指飽和的直鏈或支鏈、具有所指碳原子數(shù)目的單價(jià)烴基部分，包括但不限于，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基，也包括更高的同系物和其異構(gòu)體。
本發(fā)明一方面公開了用于培美曲塞合成的關(guān)鍵中間體及中間體的制備方法，一方面公開了通過關(guān)鍵中間體制備培美曲塞的方法。
本發(fā)明反應(yīng)路線中化合物XI、IX、VIII、VI化合物均未見報(bào)道。
本發(fā)明公開中間體化合物XI，它是一種合成培美曲塞的關(guān)鍵中間體，結(jié)構(gòu)式如式XI所示
其中*、R、R′、R″、R′′′、n的定義同上； 本發(fā)明公開一種化合物IX，它是用于制備中間體化合物XI的原料中間體，結(jié)構(gòu)式如式IX所示
其中*、R、R′、R″、R″′、n、X的定義同上； 本發(fā)明公開一種化合物VIII，它是用于制備化合物IX的原料中間體，結(jié)構(gòu)式如式VIII所示
其中*、R、R′、R″、R″′、n的定義同上； 本發(fā)明公開一種化合物VI，它是用于制備化合物VIII的原料中間體，結(jié)構(gòu)式如式VI所示
其中*、R、R′、R″、R″′、n的定義同上。
本發(fā)明另外公開了VI、VIII、IX、XI類型化合物在培美曲塞制備中的應(yīng)用。
在本發(fā)明的反應(yīng)路線中，N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-酯IV的制備可用常規(guī)方法由對(duì)碘苯甲酰氯II與L-谷氨酸-γ-酯III(或其鹽)反應(yīng)制得，優(yōu)選將對(duì)碘苯甲酰氯II與L-谷氨酸-γ-酯III于水中在堿存在下進(jìn)行?；磻?yīng)制備，可用的堿有碳酸氫鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、氫氧化鉀等。
本發(fā)明的反應(yīng)路線中，N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-酯也可以通過使用對(duì)碘苯甲酸的羧基活化形式與L-谷氨酸-γ-酯反應(yīng)制備。
本發(fā)明中化合物VI可以由化合物IV與適量的化合物V反應(yīng)直接得到，也可以由化合物IV與過量化合物V反應(yīng)得到N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-酯IV的溴代烷基酯VI′，然后與N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-酯反應(yīng)得到，反應(yīng)式如路線5所示
路線5 其中*、R、R′、R″、R″′、n的定義同上。
因此按照本發(fā)明，制備培美曲塞的方法包含以下步驟 (a)將化合物N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-酯IV與二溴代烷化合物V在堿存在下進(jìn)行反應(yīng)制得二取代谷氨酸酯化合物VI；或者N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-酯IV先和過量的二溴代烷反應(yīng)形成溴代烷基酯化合物VI′，再和N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-酯IV反應(yīng)生成二取代谷氨酸酯化合物VI。
(b)將二取代谷氨酸酯化合物VI與3-丁烯-1-醇VII在鈀催化劑存在下進(jìn)行反應(yīng)制得化合物VIII； (c)將化合物VIII經(jīng)鹵代反應(yīng)得到鹵代醛化合物IX； (d)將鹵代醛化合物IX與2，4-二氨基-6-羥基嘧啶X反應(yīng)得到化合物XI； (e)將化合物XI經(jīng)水解反應(yīng)得到培美曲塞I。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(a)將化合物N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-酯IV與二溴代烷化合物V在堿存在下進(jìn)行反應(yīng)制得二取代谷氨酸酯化合物VI，反應(yīng)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；反應(yīng)須在堿存在下進(jìn)行，適當(dāng)?shù)膲A有碳酸鈉、碳酸鉀等，其中優(yōu)選碳酸鉀；加入相轉(zhuǎn)移催化劑可以加快反應(yīng)速度，可用的相轉(zhuǎn)移催化劑有四丁基溴化銨、四丁基氯化銨、芐基三乙基溴化銨、芐基三乙基氯化銨，其中優(yōu)選四丁基溴化銨。反應(yīng)溫度20℃～120℃，其中優(yōu)選30～110℃，反應(yīng)時(shí)間1小時(shí)至20小時(shí)，其中優(yōu)選3～10小時(shí)?；衔颪-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-酯IV與二溴代烷化合物V的摩爾比為2～51，其中優(yōu)選2.0～2.51。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)過柱層析或重結(jié)晶提純可以得到純度較高的化合物VI。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(a)將化合物N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-酯IV與過量二溴代烷化合物V在堿存在下進(jìn)行反應(yīng)制得單取代谷氨酸酯化合物VI′，反應(yīng)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；反應(yīng)須在堿存在下進(jìn)行，適當(dāng)?shù)膲A有碳酸鈉、碳酸鉀等，其中優(yōu)選碳酸鉀；反應(yīng)溫度-10℃～80℃，其中優(yōu)選15～80℃，反應(yīng)時(shí)間1小時(shí)至20小時(shí)，其中優(yōu)選3～10小時(shí)。經(jīng)提純后與N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-酯IV反應(yīng)得到二取代谷氨酸酯化合物VI，反應(yīng)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；反應(yīng)須在堿存在下進(jìn)行，適當(dāng)?shù)膲A有碳酸鈉、碳酸鉀等，其中優(yōu)選碳酸鉀；加入相轉(zhuǎn)移催化劑可以加快反應(yīng)速度，可用的相轉(zhuǎn)移催化劑有四丁基溴化銨、四丁基氯化銨、芐基三乙基溴化銨、芐基三乙基氯化銨，其中優(yōu)選四丁基溴化銨。反應(yīng)溫度20℃～120℃，其中優(yōu)選70～110℃，反應(yīng)時(shí)間1小時(shí)至20小時(shí)，其中優(yōu)選3～10小時(shí)。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(b)將化合物VI與3-丁烯-1-醇VII在鈀催化劑存在下進(jìn)行反應(yīng)制得化合物VIII，適當(dāng)?shù)拇呋瘎┯幸宜徕Z、氯化鈀，反應(yīng)溶劑為DMF，反應(yīng)須在堿存在下進(jìn)行，適當(dāng)?shù)膲A有碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鋰、碳酸氫鋰、乙酸鋰、等，其中優(yōu)選碳酸氫鈉、乙酸鋰；反應(yīng)在季銨鹽存在下可取得較好的偶合效果，適當(dāng)?shù)募句@鹽有四丁基溴化銨、四丁基氯化銨、芐基三乙基溴化銨、芐基三乙基氯化銨，其中優(yōu)選四丁基溴化銨；反應(yīng)溫度-10℃～100℃，其中優(yōu)選20～80℃，反應(yīng)時(shí)間1小時(shí)至20小時(shí)，其中優(yōu)選3～10小時(shí)。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)過柱層析或重結(jié)晶提純可以得到純度較高的化合物VIII。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(c)將化合物VIII經(jīng)鹵代反應(yīng)得到鹵代醛化合物IX，溶劑可為二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃等或其中的混合溶劑，其中優(yōu)選二氯甲烷。鹵化劑可以為溴素、N-溴代丁二酰亞胺(NBS)、N-氯代丁二酰亞胺(NCS)、硫酰氯等，其中優(yōu)選溴素、硫酰氯、N-氯代丁二酰亞胺(NCS)；反應(yīng)溫度0℃～50℃，其中優(yōu)選10～30℃，反應(yīng)時(shí)間0.5小時(shí)至20小時(shí)，其中優(yōu)選2～10小時(shí)。反應(yīng)中鹵化劑與化合物VIII按摩爾比計(jì)為2～51，其中優(yōu)選2.3～31。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(d)將鹵代醛化合物IX與2，4-二氨基-6-羥基嘧啶X反應(yīng)得到化合物XI。溶劑可為水、二氯甲烷、氯仿、乙腈、冰乙酸、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲醇、乙醇等或其中的混合溶劑，其中優(yōu)選乙酸乙酯和水的混合溶劑或四氫呋喃與水的混合溶劑。反應(yīng)溫度10℃～80℃，其中優(yōu)選30～70℃，反應(yīng)時(shí)間0.5小時(shí)～10小時(shí)，其中優(yōu)選2～6小時(shí)。反應(yīng)中2，4-二氨基-6-羥基嘧啶與化合物XI按摩爾比計(jì)為2～51，其中優(yōu)選2.2～3.01。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(e)將化合物XI經(jīng)水解反應(yīng)得到培美曲塞I，溶劑為水、甲醇、乙醇、四氫呋喃等或其中兩種溶劑的混合溶劑，其中優(yōu)選水為溶劑。堿可選用氫氧化鈉、氫氧化鉀等，其中優(yōu)選氫氧化鈉，堿水解溫度0℃～50℃，其中優(yōu)選10～30℃，反應(yīng)時(shí)間0.5小時(shí)至10小時(shí)，其中優(yōu)選1～3小時(shí)。反應(yīng)中堿量與化合物XI的比例按摩爾比計(jì)為2～201，優(yōu)選5～101。堿水解完畢加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至3～4得到培美曲塞I。
按照新方法制備培美曲塞總收率高，可達(dá)34％以上，而現(xiàn)有技術(shù)中制備培美曲塞的總收率約為25％，且新方法的反應(yīng)條件溫和、得到的中間體更易于提純，因而使產(chǎn)品純度高，易于工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實(shí)施例方式 以下實(shí)施例將進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不限制本發(fā)明。
實(shí)施例1 N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯(IV)的制備
方法一 將100g(0.403mol)對(duì)碘苯甲酸溶解到500ml的DMF中，室溫下攪拌，加入N-甲基嗎啉61g(0.604mol)、2，4-二甲氧基-6-氯-1，3，5-均三嗪105.7g(0.604mol)，室溫下攪拌1h，TLC分析原料消失，1000ml乙酸乙酯和1000ml水萃取分液，硫酸鈉干燥，抽濾除去硫酸鈉，減壓除去乙酸乙酯，直接進(jìn)行下一步。
將90gL-谷氨酸溶解到600ml甲醇中，加入60g濃硫酸，全溶，再補(bǔ)加濃硫酸3ml室溫下攪拌過夜，TLC分析原料消失，使用1N氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH＝7，抽濾除去產(chǎn)生的鹽，直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
將上述制備的活性酯和L-谷氨酸-γ-甲酯室溫下混合，劇烈攪拌過夜，使用1N氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH＝9，1200ml乙酸乙酯和1200ml水萃取分液，水相減蒸除去甲醇，2N鹽酸調(diào)節(jié)pH＝2左右，有大量白色固體析出，室溫下晾干，得到138g產(chǎn)品，收率87.6％。
方法二 將100g(0.403mol)對(duì)碘苯甲酸加到500ml的二氯甲烷中，加入2mlDMF，滴加氯化亞砜81g(0.806mol)，滴加完畢后，加熱回流3h。減壓蒸餾除去未反應(yīng)的二氯亞砜和二氯甲烷得到的淺黃色固體直接下一步。
將90gL-谷氨酸溶解到600ml甲醇中，加入60g濃硫酸，全溶，再補(bǔ)加濃硫酸3ml室溫下攪拌過夜，TLC分析原料消失，使用1N氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH＝9，抽濾除去產(chǎn)生的鹽。濾液降溫到0℃，把上述得到的酰氯溶解到400ml二氧六環(huán)中，緩慢滴加到上述溶液中，滴加過程中用1N氫氧化鈉調(diào)節(jié)維持pH＝9～10，滴加完畢后室溫下攪拌過夜，使用1200ml乙酸乙酯和1200ml水萃取分液，水相使用2N鹽酸調(diào)節(jié)pH＝2，得到白色固體，晾干得到124g產(chǎn)品，收率78.7％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ8.6(d，1H)，7.866(d，2H)，7.652(d，2H)，4.400(m，1H)，3.576(s，3H)，2.434(t，2H)，2.03(m，2H)。
實(shí)施例2 N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯-α-(4-溴丁酯)(VI′)的制備
20g(51.2mmol)N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯溶解到200mlDMF中，室溫下攪拌全溶；加入1，4-二溴丁烷110g(509mmol)、碳酸鈉22g(205mmol)四丁基溴化銨20g，室溫下劇烈攪拌4h，TLC分析原料消失。400ml乙酸乙酯和400ml水萃取分液，水層使用乙酸乙酯萃??；合并有機(jī)相，水洗滌；無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾除去無(wú)水硫酸鈉，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析分離，得到26.2g白色固體，收率97.2％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ8.835(s，1H)，7.885(d，2H)，7.647(d，2H)，4.420(m，1H)，4.083(t，2H)，3.583(s，3H)，3.531(t，2H)，2.457(t，2H)，2.037(m，2H)，1.837(s，2H)，1.686(s，2H)。
實(shí)施例3 二〔N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯(VI)的制備
26.5g(50.4mmol)N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯-(4-溴丁酯)、N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯23.7g(60.5mmol)、碳酸鈉25.7g(242mmol)、16.2g(50.4mmol)四丁基溴化銨溶解到100ml的DMF中，100℃加熱反應(yīng)3h，TLC分析原料消失。用300ml乙酸乙酯和300ml水萃取，水層用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，除去無(wú)水硫酸鈉，減壓除去溶劑，乙酸乙酯重結(jié)晶，得到白色固體33.6g產(chǎn)品，收率80.1％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ8.827(d，2H)，7.860(d，4H)，7.643(d，4H)，4.410(m，2H)，4.062(m，4H)，3.578(s，6H)，2.453(t，4H)，2.074(m，4H)，1.068(m，4H)。
實(shí)施例4 二〔N-(4-(4-氧丁基)苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯(VIII)的制備
33.6g(40.2mmol)二〔N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯、100mlDMF、6.8g(80.4mmol)碳酸氫鈉、26g(80.4g)四丁基溴化銨，室溫下攪拌。通氮?dú)猓尤肼然Z0.4g、3-丁烯-1-醇7g(96.5mmol)。70℃反應(yīng)2h，TLC分析原料消失，加入300ml乙酸乙酯和300ml水萃取，水層用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾除去無(wú)水硫酸鈉，減壓除去溶劑，柱層析分離，得到淺黃色固體24.3g，收率83.5％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ9.661(s，2H)，8.685(d，2H)，7.807(d，4H)，7.309(d，4H)，4.424(d，2H)，4.064(s，4H)，3.579(s，6H)，2.634(t，4H)，2.443(m，8H)，2.093(dm，4H)，1.838(m，4H)，1.617(s，4H)。
實(shí)施例5 二〔N-(4-(4-氧-3-氯丁基)苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯(IX)的制備
24.3g(33.6mmol)二〔N-(4-(4-氧丁基)苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯溶解到200ml二氯甲烷中，室溫下攪拌成均相。加入NCS11g(80.5mmol)和L-脯氨酸2g。室溫下攪拌6h，TLC分析原料消失，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，水層用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，水洗。無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓蒸餾除去溶劑，直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
實(shí)施例6二〔N-〔4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?；?L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯(XI)的制備
將實(shí)施例5制備的二〔N-(4-(4-氧-3-氯丁基)苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯溶解到200ml乙酸乙酯中，加入200ml水，加入2，4-二氨基-6-羥基嘧啶10.2g(80.6mmol)，三水合乙酸鈉32.89g(241.8mmol)，60℃加熱反應(yīng)2h，加入石油醚使產(chǎn)物沉淀，晾干得到淺黃色固體18.4g，兩步收率合計(jì)為58.4％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ10.614(s，2H)，10.178(s，2H)，8.652(d，2H)，7.767(d，4H)，7.282(d，4H)，6.305(s，2H)，6.036(s，4H)，4.417(s，2H)，4.070(s，4H)，3.577(s，6H)，2.961(d，4H)，2.850(d，4H)，2.456(s，4H)，2.087(dd，4H)，1.623(s，4H) 實(shí)施例7 培美曲塞(I)的制備
將5g(5.3mmol)實(shí)施例6制備的化合物加入50ml2N氫氧化鈉中，室溫?cái)嚢?h，使用2N鹽酸調(diào)節(jié)pH＝3，抽濾，晾干，得到淺綠色固體4.5g，收率99％。HPLC分析，粗品純度97.3％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ12.303(bs，2H)，10.537(s，1H)，10.089(s，1H)，8.436(d，1H)，7.787(d，2H)，7.290(d，2H)，6.299(s，1H)，5.946(s，2H)，4.418(m，1H)，2.984(t，2H)，2.869(t，2H)，2.354(t，2H)，1.960(m，2H)。
實(shí)施例8 二〔N-〔4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?；?L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯二對(duì)甲苯磺酸鹽(XI·2Ts0H)的制備
將10g(10.6mmol)二〔N-〔4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?；?L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯加入到50ml無(wú)水乙醇中，加熱回流，溶解，加入4.4g(23.2mmol)對(duì)甲苯磺酸。加熱回流10min，冷卻到室溫。抽濾得到白色固體，少量乙醇洗滌，晾干。得到目標(biāo)產(chǎn)物10.9g，收率80％。
實(shí)施例9 培美曲塞(I)的制備 將5g(3.9mmol)實(shí)施例8制備的化合物加入40ml2N氫氧化鈉中，室溫?cái)嚢?h，使用2N鹽酸調(diào)節(jié)pH＝3～4，抽濾得到的固體，晾干，得到淺綠色固體3.3g，收率99％。HPLC分析，粗品純度為99.3％。
實(shí)施例10 N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-甲酯-(2-溴乙酯)(VI′)的制備
20g(51.2mmol)N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯溶解到200mlDMF中，室溫下攪拌全溶；加入1，2-二溴乙烷96.2g(512mmol)、碳酸鉀28.3g(205mmol)、四丁基溴化銨20g，室溫下劇烈攪拌5h，TLC分析原料消失。400ml乙酸乙酯和400ml水萃取分液，水層用乙酸乙酯萃??；合并有機(jī)相，洗滌；無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾除去無(wú)水硫酸鈉，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析分離，得到25.4g白色固體，收率94.3％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ8.861(s，1H)，7.875(d，2H)，7.656(d，2H)，4.476(m，1H)，4.458(m，2H)，3.678(t，2H)，3.587(s，3H)，2.478(t，2H)，2.041(m，2H)。
實(shí)施例11 二〔N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯(VI)的制備
24.0g(48.2mmol)N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-甲酯-(2-溴乙酯)、N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯23.7g(60.5mmol)、碳酸鈉25.7g(242mmol)、16.2g(50.4mmol)四丁基溴化銨溶解到100ml的DMF中，100℃加熱反應(yīng)3h，TLC分析原料消失。用300ml乙酸乙酯和300ml水萃取，水層用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，除去無(wú)水硫酸鈉，減壓除去溶劑，乙酸乙酯重結(jié)晶，得到白色固體30.1g產(chǎn)品，收率77.3％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ8.821(d，2H)，7.851(d，4H)，7.636(d，4H)，4.443(m，2H)，4.284(qd，4H)，4.258(s，6H)，2.405(q，4H)，2.018(m，4H)。
實(shí)施例12 二〔N-(4-(4-氧丁基)苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯(VIII)的制備
30.0g(37.1mmol)二〔N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯、100mlDMF、6.8g(80.4mmol)碳酸氫鈉、26g(80.4g)四丁基溴化銨，室溫下攪拌，溶解。通氮?dú)?0min，加入乙酸鈀0.4g、3-丁烯-1-醇7g(96.5mmol)。70℃反應(yīng)3h左右，TLC分析原料消失，加入300ml乙酸乙酯和300ml水萃取，水層用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾除去無(wú)水硫酸鈉，減壓除去溶劑，柱層析分離，得到淺黃色固體22.4g，收率86.5％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ9.670(s，2H)，8.685(d，2H)，7.834(d，4H)，7.304(d，4H)，4.470(m，2H)，4.311(t，4H)，3.581(s，6H)，2.638(t，4H)，2.450(m，8H)，2.029(m，4H)，1.177(m，4H)。
實(shí)施例13 二〔N-(4-(4-氧-3-氯丁基)苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯(IX)的制備
22.0g(31.6mmol)二〔N-(4-(4-氧丁基)苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯溶解到200ml二氯甲烷中，室溫下攪拌成均相。加入磺酰氯11g(81.5mmol)。室溫下攪拌4h，TLC分析原料消失，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，水層用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，水洗。無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓蒸餾除去溶劑，直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
實(shí)施例14 二〔N-〔4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?；?L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯(XI)的制備
將實(shí)施例13制備的二〔N-(4-(4-氧-3-氯丁基)苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯溶解到200ml四氫呋喃中，加入200ml水，加入2，4-二氨基-6-羥基嘧啶9.0g(71.1mmol)，65℃加熱反應(yīng)3h后，TLC檢測(cè)反應(yīng)原料消失，加入石油醚使產(chǎn)物沉淀，晾干得到淺黃色固體17.5g，兩步收率合計(jì)為60.9％。
1HNMR(DMSO-6，600M)δ10.618(s，2H)，10.207(s，2H)，8.667(d，2H)，7.783(d，4H)，7.369(d，4H)，6.302(s，2H)，6.071(s，4H)，4.443(q，2H)，4.297(m，4H)，3.569(s，6H)，2.985(t，4H)，2.834(t，4H)，2.445(t，4H)，2.050(m，4H)。
實(shí)施例15 培美曲塞(I)的制備 將5g(5.5mmol)實(shí)施例14制備的化合物加入50ml2N氫氧化鈉中，室溫?cái)嚢?h，使用2N鹽酸調(diào)節(jié)pH＝3，抽濾，晾干，得到淺綠色固體4.6g，收率98.6％。HPLC分析，粗品純度為96.1％。
實(shí)施例16 二〔N-〔4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?；?L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯二對(duì)甲苯磺酸鹽(XI·2TsOH)的制備
將9.6g(10.6mmol)二〔N-〔4-〔2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-3H-吡咯并〔2，3-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?；?L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯加入到50ml無(wú)水甲醇中，加熱回流，溶解，加入4.4g(23.2mmol)對(duì)甲苯磺酸。加熱回流10min，冷卻到室溫。抽濾得到白色固體，少量甲醇洗滌，晾干。得到目標(biāo)產(chǎn)物11.2g，收率84.5％。
實(shí)施例17 培美曲塞(I)的制備 將5g(3.9mmol)實(shí)施例16制備的化合物加入40ml2N氫氧化鈉中，室溫?cái)嚢?h，使用2N鹽酸調(diào)節(jié)pH＝3，抽濾得到的固體，晾干，得到淺綠色固體3.2g，收率94％。HPLC分析，粗品純度為99.5％。
實(shí)施例18 二〔N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，4-丁二酯的制備 20g(51.2mmol)N-(對(duì)碘苯甲酰基)-L-谷氨酸-γ-甲酯、碳酸鉀41.7g(307mmol)、5.5g(25.6mmol)1，4-二溴丁烷溶解于150mlDMF中，60℃加熱反應(yīng)5h，TLC分析原料消失。200ml乙酸乙酯和200ml水萃取，水層用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，除去無(wú)水硫酸鈉，減壓除去溶劑，乙酸乙酯重結(jié)晶，得到白色固體13.3g產(chǎn)品，收率62.1％。
實(shí)施例19 二〔N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯〕-1，2-乙二酯的制備 20g(51.2mmol)N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-甲酯、碳酸鈉32g(307mmol)、4.8g(25.6mmol)1，2-二溴乙烷溶解于120mlDMF中，100℃加熱反應(yīng)4h，TLC分析原料消失。200ml乙酸乙酯和200ml水萃取，水層用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，除去無(wú)水硫酸鈉，減壓除去溶劑，乙酸乙酯重結(jié)晶，得到白色固體12.4g產(chǎn)品，收率59.8％。
權(quán)利要求
1、一種二谷氨酸酯衍生物或其鹽，其特征在于
結(jié)構(gòu)式為以式XI表示的化合物或其鹽
其中R為C1～C4烷基，R′、R″、R″′為氫、C1～C4烷基，n為0～8的整數(shù)。
2、如權(quán)利要求1所述二谷氨酸酯衍生物或其鹽，其特征在于*表示的碳的構(gòu)型為L(zhǎng)構(gòu)型。
3、如權(quán)利要求1和2所述二谷氨酸酯衍生物XI或其鹽，其特征在于制備化合物XI或其鹽的原料為鹵代醛化合物IX，
結(jié)構(gòu)式如式IX所示
其中*、R、R′、R″、R″′、n的定義同上；X代表氯、溴。
4、如權(quán)利要求3所述二谷氨酸酯衍生物IX，其特征在于制備所述化合物IX的原料為化合物VIII，
結(jié)構(gòu)式如式VIII所示
其中*、R、R′、R″、R″′、n的定義同上。
5、如權(quán)利要求4所述二谷氨酸酯衍生物VIII，其特征在于制備所述化合物VIII的原料為化合物VI，
結(jié)構(gòu)式如式VI所示
其中，*、R、R′、R″、R″′、n的定義同上。
6、如權(quán)利要求1和2所述二谷氨酸酯衍生物XI或其鹽的制備方法，其特征在于化合物XI由化合物IX與2，4-二氨基-6-羥基嘧啶反應(yīng)得到，任選地將XI成鹽。
7、如權(quán)利要求6所述二谷氨酸酯衍生物XI或其鹽的制備方法，其特征在于溶劑為乙酸乙酯和水的混合溶劑或四氫呋喃與水的混合溶劑。反應(yīng)溫度30～70℃，反應(yīng)時(shí)間2～6小時(shí)。
8、如權(quán)利要求3所述化合物IX的制備方法，其特征在于化合物IX由化合物VIII經(jīng)鹵代反應(yīng)得到。
9、如權(quán)利要求8所述化合物IX的制備方法，其特征在于溶劑為二氯甲烷，鹵化劑為溴素、硫酰氯、N-氯代丁二酰亞胺(NCS)；反應(yīng)溫度10～30℃，反應(yīng)時(shí)間2～10小時(shí)。
10、如權(quán)利要求4所述化合物VIII的制備方法，其特征在于化合物VIII由化合物VI
與3-丁烯-1-醇VII
H2C＝CH—CH2-CH2—OH
VII
反應(yīng)制得。
11、如權(quán)利要求10所述化合物VIII的制備方法，其特征在于催化劑為乙酸鈀或氯化鈀，反應(yīng)溶劑為DMF，堿為碳酸氫鈉、乙酸鋰；季銨鹽為四丁基溴化銨；反應(yīng)溫度20～80℃，反應(yīng)時(shí)間3～10小時(shí)。
12、如權(quán)利要求5所述化合物VI的制備方法，其特征在于化合物VI由化合物N-(對(duì)碘苯甲?；?-L-谷氨酸-γ-酯，如式IV所示
其中*、R的定義同上，
與二溴代烷化合物反應(yīng)得到。
13、如權(quán)利要求12所述化合物VI的制備方法，其特征在于溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；反應(yīng)溫度30～110℃，反應(yīng)時(shí)間3～10小時(shí)。
14、如權(quán)利要求1和2所述二谷氨酸酯衍生物或其鹽在培美曲塞制備中的應(yīng)用，其特征在于將化合物XI或其鹽經(jīng)水解反應(yīng)得到培美曲塞。
全文摘要
本發(fā)明涉及二谷氨酸酯衍生物及其制備方法和在制備培美曲塞中的應(yīng)用，使用二谷氨酸酯衍生物為關(guān)鍵中間體制備培美曲塞，反應(yīng)后處理簡(jiǎn)單，產(chǎn)物純度高，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D487/04GK101423524SQ20071011346
公開日2009年5月6日 申請(qǐng)日期2007年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月30日
發(fā)明者棟 林, 范傳文, 朱屹東, 高永宏, 王麗娟, 冷傳新, 李洪偉, 劉建國(guó), 張明會(huì), 王晶翼 申請(qǐng)人:齊魯制藥有限公司