專(zhuān)利名稱：一種制備富含多不飽和脂肪酸磷脂的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備富含多不飽和脂肪酸磷脂的工藝。
背景技術(shù)：
磷脂(PL)是細(xì)胞膜的重要組成成分，作為脂質(zhì)體、乳化劑等在醫(yī)藥、化 妝品、食品工業(yè)中廣泛應(yīng)用。磷脂的生理活性與其脂肪酸的組成和極性末端 密切相關(guān)， 一些具有特定結(jié)構(gòu)的磷脂有很高的藥用價(jià)值。這些特殊結(jié)構(gòu)的磷 脂在自然界中含量極少，也難以用化學(xué)方法合成，但容易用酶改性法獲得。 魚(yú)油中的n-3多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA)，尤其是二十碳五烯酸(EPA)和 二十二碳六烯酸(DHA)，具有預(yù)防和治療心血管疾病、抗炎抗癌、增強(qiáng)免疫 力、有助于大腦發(fā)育和保護(hù)視力等生理活性。近年來(lái)，利用酶催化改性，從 原料易得的磷脂制備具有特殊活性或穩(wěn)定性的磷脂，已有文獻(xiàn)報(bào)道。大豆磷 脂的脂肪酸組成中幾乎不含EPA和DHA，以其為原料，通過(guò)酶促反應(yīng)制備的高 n-3多不飽和脂肪酸磷脂，可兼具n-3多不飽和脂肪酸和磷脂的生物學(xué)功能， 實(shí)現(xiàn)了高值化利用。以往的酶催化反應(yīng)主要是在無(wú)溶劑條件下進(jìn)行，由于傳 滯阻力的限制，反應(yīng)速度較低，反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)(24 — 72小時(shí))，產(chǎn)品收率低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種在亞臨界R134a體系中制備富含多不飽和脂肪 酸磷脂的工藝，它能克服現(xiàn)有工藝的上述缺點(diǎn)。
一種制備富含多不飽和脂肪酸磷脂的工藝，其特征是先將反應(yīng)釜加熱至 30°C-60°C，向反應(yīng)釜中加入大豆卵磷脂和富含EPA和DHA的游離脂肪酸，兩 者的質(zhì)量比為1: 1-5，并加入占反應(yīng)底物總重量5-10%的酶，之后密閉反應(yīng) 釜，泵入R134a氣體使反應(yīng)釜壓力達(dá)到4-6MPa，攪拌反應(yīng)1-8小時(shí)后，減壓， 使反應(yīng)混合物進(jìn)入與反應(yīng)釜連通的溫度為30-6(TC的分離釜，回收R134a，再 從分離釜的接樣口收集反應(yīng)混合物，最后用丙酮洗滌反應(yīng)混合物，離心5-10 分鐘分出固相，再進(jìn)行純化。
本發(fā)明利用亞臨界R134a作為酶催化反應(yīng)的介質(zhì)，制備富含多不飽和脂 肪酸磷脂，工藝簡(jiǎn)單，設(shè)備投入低，反應(yīng)速度快，時(shí)間短，制得產(chǎn)品中的不 飽和脂肪酸的含量高，產(chǎn)品得率高，且反應(yīng)無(wú)需有機(jī)溶劑，在反應(yīng)結(jié)束后R134a 可完全回收，利于產(chǎn)物的分離和酶的重復(fù)利用，實(shí)現(xiàn)綠色的反應(yīng)過(guò)程。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一
將反應(yīng)釜加熱至4(TC，稱取大豆卵磷脂75mg，置于反應(yīng)釜中；稱取EPA 和DHA的含量分別為25. 13%和47. 77%的游離脂肪酸0. 25g，加入反應(yīng)釜中；精 密稱取磷脂酶A2 30mg，加入反應(yīng)釜中；體系密閉后，打開(kāi)R134a儲(chǔ)罐，使R134a氣體經(jīng)冷凝器液化后由柱塞泵加壓進(jìn)入反應(yīng)釜。反應(yīng)釜壓力達(dá)到6MPa后， R134a達(dá)到亞臨界狀態(tài)。停止柱塞泵，關(guān)閉儲(chǔ)罐，攪拌反應(yīng)。反應(yīng)2.5小時(shí)后， 打開(kāi)截流閥減壓，使反應(yīng)混合物進(jìn)入與反應(yīng)釜連通的溫度為4(TC的分離釜。 打開(kāi)壓縮機(jī)從分離釜回收R134a;回收完成后，從分離釜的接樣口收集反應(yīng)混 合物。用10ml丙酮洗滌反應(yīng)混合物，離心5分鐘，分出固相，除盡丙酮即得 富含多不飽和脂肪酸磷脂66mg， EPA、 DHA的含量分別為11.62%、 29.79%。
將反應(yīng)釜與分離釜加熱至4(TC，稱取大豆卵磷脂300mg，置于反應(yīng)釜中； 稱取富含EPA和DHA的游離脂肪酸1. 5g，加入反應(yīng)釜中；精密稱取固定化脂肪 酶LipozymeTL IM 90mg ,加入反應(yīng)釜中；體系密閉后，打開(kāi)R134a儲(chǔ)罐，使 R134a氣體經(jīng)冷凝器液化后由柱塞泵加壓進(jìn)入反應(yīng)釜。反應(yīng)釜壓力達(dá)到6MPa 后，停止柱塞泵，關(guān)閉儲(chǔ)罐，攪拌反應(yīng)。反應(yīng)3.5小時(shí)后，打開(kāi)截流閥減壓， 使反應(yīng)混合物進(jìn)入與反應(yīng)釜連通的溫度為4(TC的分離釜。打開(kāi)壓縮機(jī)從分離 釜回收R134a;回收完成后，從分離釜的接樣口收集反應(yīng)混合物。用50ml丙 酮洗滌反應(yīng)混合物，離心5分鐘，分出固相，除去丙酮即得富含多不飽和脂 肪酸磷脂260mg， EPA、 DHA的含量分別為11. 99%、 28.63%。
本發(fā)明所述的大豆卵磷脂與富含EPA和DHA的游離脂肪酸的質(zhì)量比為1: l-5，每克反應(yīng)底物加入酶的量為50-IOO毫克，反應(yīng)溫度為30-60°C，反應(yīng)壓 力為4-6MPa，反應(yīng)時(shí)間為1-8小時(shí)。所述的亞臨界是指流體的壓力、溫度這 兩項(xiàng)決定性工藝參數(shù)之一處于臨界點(diǎn)之上，而另一參數(shù)處于臨界點(diǎn)之下的狀 態(tài)。R134a是一種對(duì)大氣臭氧層無(wú)害的新型制冷劑，其臨界溫度為101.rC; 其臨界壓力低于C02的臨界壓力，而亞臨界R134a的溶解能力高于超臨界C02， 可以保證對(duì)溶質(zhì)的足夠溶解能力，又可以大大降低一次性設(shè)備投入及運(yùn)行費(fèi) 用。亞臨界R134a的粘度系數(shù)小于其超臨界狀態(tài)，擴(kuò)散系數(shù)大于其超臨界狀 態(tài)，可以更加有利于降低酶催化反應(yīng)中底物與酶接觸的擴(kuò)散限制，改善酶促 動(dòng)力學(xué)，提高反應(yīng)速率。
權(quán)利要求
1一種制備富含多不飽和脂肪酸磷脂的工藝，其特征是先將反應(yīng)釜加熱至30℃-60℃，向反應(yīng)釜中加入大豆卵磷脂和富含EPA和DHA的游離脂肪酸，兩者的質(zhì)量比為1∶1-5，并加入占反應(yīng)底物總重量5-10％的酶，之后密閉反應(yīng)釜，泵入R134a氣體使反應(yīng)釜壓力達(dá)到4-6MPa，攪拌反應(yīng)1-8小時(shí)后，減壓，使反應(yīng)混合物進(jìn)入與反應(yīng)釜連通的溫度為30-60℃的分離釜，回收R134a，再?gòu)姆蛛x釜的接樣口收集反應(yīng)混合物，最后用丙酮洗滌反應(yīng)混合物，離心5-10分鐘分出固相，再進(jìn)行純化。
全文摘要
一種制備富含多不飽和脂肪酸磷脂的工藝，其特征是先將反應(yīng)釜加熱至30℃-60℃，向反應(yīng)釜中加入大豆卵磷脂和富含EPA和DHA的游離脂肪酸，兩者的質(zhì)量比為1∶1-5，并加入占反應(yīng)底物總重量5-10％的酶，之后密閉反應(yīng)釜，泵入R134a氣體使反應(yīng)釜壓力達(dá)到4-6MPa，攪拌反應(yīng)1-8小時(shí)后，減壓，使反應(yīng)混合物進(jìn)入與反應(yīng)釜連通的溫度為30-60℃的分離釜，回收R134a，再?gòu)姆蛛x釜的接樣口收集反應(yīng)混合物，最后用丙酮洗滌反應(yīng)混合物，離心5-10分鐘分出固相，再進(jìn)行純化。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，設(shè)備投入低，反應(yīng)時(shí)間短，制得產(chǎn)品中的不飽和脂肪酸含量高，產(chǎn)品得率高，且反應(yīng)無(wú)需有機(jī)溶劑，利于產(chǎn)物的分離和酶的重復(fù)利用。
文檔編號(hào)C07F9/113GK101195637SQ20071011393
公開(kāi)日2008年6月11日 申請(qǐng)日期2007年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月17日
發(fā)明者剛 于, 唐慶娟, 孫兆敏, 偉 徐, 李兆杰, 王玉明, 勇 薛, 薛長(zhǎng)湖 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)