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人ad7c-ntp抗原決定簇多肽、抗體及其在診斷試劑盒上的應(yīng)用的制作方法

文檔序號:3537882閱讀:387來源:國知局
專利名稱:人ad7c-ntp抗原決定簇多肽、抗體及其在診斷試劑盒上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及人AD7C-NTP抗原決定簇多肽、相應(yīng)的抗體及其在制 備人AD7C-NTP體外診斷試劑盒上的應(yīng)用。
技術(shù)背景在人口老齡化日益加劇的今天,以神經(jīng)退行性變?yōu)橹饕卣鞯睦?年病的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢。在我國老齡化問題尤為嚴(yán)峻,2006 年2月23日,全國老齡辦在發(fā)布的《中國人口老齡化發(fā)展趨勢預(yù)測 研究報告》中指出,中國已于1999年進入老齡社會。許多發(fā)達(dá)國家 65歲以上人口比重由5%上升到7%—般要經(jīng)歷50-80年,而我國從 1982年的4. 9%上升到2000年的7. 2%只用了 18年,說明我國人口 老齡化速度遠(yuǎn)超過發(fā)達(dá)國家。第五次全國人口普查結(jié)果表明,目前我 國65歲以上人口為8811萬人,占全國總?cè)丝诘?.96%; 60歲以上人 口已經(jīng)達(dá)到1.43億,占總?cè)丝诘?0.97%;在2010年后我國50、 60 年代高生育期出生的人將陸續(xù)進入老年,屆時人口老齡化的發(fā)展更為 迅速,預(yù)計2015年老年人口將達(dá)到2.02億,2027年將超過3億, 從2040年起,中國60歲以上的人口將達(dá)到3.97億,還將有1億80 歲以上的老人,比目前全球80歲以上的老人總數(shù)還多。2044年前后 可能突破4億,老年人的數(shù)量居世界之首。人口老齡化是我國乃至世界各國在二十一世紀(jì)將面臨最大的挑戰(zhàn)。神經(jīng)退行性疾病是由于神經(jīng)元進行性變性、死亡導(dǎo)致的、以中樞 神經(jīng)系統(tǒng)損害為主的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,嚴(yán)重危害人類身體健康,但其病 因不清,發(fā)病機理復(fù)雜,缺乏有效的治療措施。引起神經(jīng)退行性變的 原因很多,如遺傳性疾病、代謝性疾病、血管性疾病及某些原因不明 的疾病,其致命危害就是造成神經(jīng)元的不可逆損傷。除人們熟知的老年性癡呆(Alzheimer' s disease,以下簡稱AD)、帕金森氏病 (Parkinson' s disease,簡稱PD)等,在人群中發(fā)病率日趨增高、 且發(fā)病年齡日趨下降的糖尿病晚期并發(fā)癥,如腎臟微血管病變、視網(wǎng) 膜病變,均以神經(jīng)退行性變?yōu)槭装l(fā)因素。由于神經(jīng)退行性變病的發(fā)病 機理不清,缺乏有效的早期診斷措施,給治療、護理帶來了一系列實 實在在的問題,同時給社會和家庭造成了沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)和精神壓 力。我國65歲以上老人中癡呆患病率為4%-7%,其中2/3為阿爾茨 海默病(Alzheimer' s Disease, AD,即老年性癡呆,又稱早老性癡 呆Alzheimer's dementia),目前約有500萬左右的患者,預(yù)計到2050 年我國老年癡呆患者將達(dá)到2000萬人。如果政府和家庭對每一位AD 病人花費的醫(yī)療費、護理費和家庭成員的誤工費等平均每年1萬元, 那么到2050年我國對老年癡呆患者每年將付出2000億元的費用。如 此之重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)將嚴(yán)重阻礙我國的經(jīng)濟發(fā)展,并可能引發(fā)社會問 題。故研究神經(jīng)退行性變發(fā)病機理和延緩、阻斷其發(fā)展的干預(yù)手段, 有著至關(guān)重要的意義。作為引起老年癡呆最常見的病因,阿爾茨海默病臨床上表現(xiàn)為智力水平的慢性削弱及記憶的慢性丟失。隨著全球人口的老齡化,AD 發(fā)病率也與日俱增,因此,AD的及時診斷與治療必將越來越受到重視。但是,迄今為止,AD的早期診斷十分困難,原因如下l.需做 腦脊液檢査,取材不便;2.雖然腦脊液中磷酸化的Tau蛋白和其它骨 架蛋白增加,但并無特異性,在其它神經(jīng)系統(tǒng)疾病中也有變化;而 Ae42在AD早期無變化,隨病情加重而減少,不便于測定;3.其它 各種蛋白質(zhì)包括酶的測定對診斷無指導(dǎo)意義。故有關(guān)AD早期診斷方 面雖有百余篇報道,但只限于描述性研究,由于缺乏有效的生化指標(biāo), 并無實用價值。1992年,麻省總醫(yī)院的Suzanne de la Monte和Jack Wands博 士首先在AD腦中發(fā)現(xiàn)大量的神經(jīng)絲蛋白(neural thread protein, NTP)與神經(jīng)元纖維纏結(jié)(neuronal fibril tangle, NFT)有關(guān),表明 其在AD的病理改變過程中可能發(fā)揮一定作用;1996年,同一研究小 組成功克隆出一種41KDa的、與AD相關(guān)的NTP,命名為AD7C-NTP。AD7C-NTP由375個氨基酸組成,分子量41, 718Da,等電點9. 89, 富含絲氨酸(ll. 7%)和脯氨酸(8. 8%),包括15個氨基酸的信號肽和7 個可能的跨膜區(qū)。AD7C-NTP存在于神經(jīng)細(xì)胞發(fā)出的軸突中;并且大 量存在于AD患者腦中的神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles, NFT)中。AD7C-NTP參與腦神經(jīng)元的修補與再生,AD患者腦中AD7C-NTP 基因表達(dá)水平異常增高。AD7C-NTP現(xiàn)已被確定為診斷AD的生化指標(biāo), 在AD患者的腦組織和腦脊液中都選擇性升高。最新的研究發(fā)現(xiàn),AD患者尿樣或血清中AD7C-NTP水平的檢測與CSF(腦脊液)中AD7C-NTP 的檢測具有同樣的意義。這一無創(chuàng)性的檢查更易被病人接受,也易于 在臨床上推廣。因此,監(jiān)測腦脊液和尿液、血清中AD7C-NTP水平可作為早期AD 的初篩試驗,協(xié)助AD或有記憶障礙癥狀及體征患者的早期臨床診斷。而監(jiān)測AD7C-NTP最理想的方法即是免疫測定,但前提是必須制 備針對AD7C-NTP的特異性抗體,因此尋找合適的具有免疫原性的 AD7C-NTP多肽片段,就成了研究的重點。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一個目的在于針對AD診斷和治療的現(xiàn)狀,提供具有 免疫原性的AD7C-NTP多肽片段,即提供人AD7C-NTP抗原決定簇多肽。本發(fā)明的第二個目的在于利用本發(fā)明的人AD7C-NTP抗原決定簇 多肽制備抗體,提供能與人AD7C-NTP抗原決定簇多肽特異性結(jié)合的 抗體。本發(fā)明的第三個目的在于將本發(fā)明的人AD7C-NTP抗體應(yīng)用于制 備人AD7C-NTP體外診斷試劑盒。本發(fā)明的人AD7C-NTP抗原決定簇多肽,為如下多肽片段之一(1) Asn-Pro-Gly-Ser-Ser-Asp-Ser-Pro-Ala—Ser-Ala-Ser-Pro, 即序列表中SEQ ID NO. 1所述的氨基酸序列;(2) Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn, 即序列表中SEQ ID NO. 2所述的氨基酸序列;本發(fā)明的多肽片段(1)是人AD7C-NTP蛋白N端的一段13個氨基酸的殘基,在該肽段的N端、C端分別加上Tyr則組成多肽片段(3)、 多肽片段(4),如下(3) Tyr-Asn-Pro-Gly-Ser-Ser-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro,即序列表中SEQ ID NO. 3所述的氨基酸序列;(4) Asn-Pro-Gly-Ser-Ser-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Tyr,即序列表中SEQ ID NO. 4所述的氨基酸序列。多肽片段(1)在N端或C端加Tyr是為了通過BDB (雙偶氮聯(lián) 苯胺二氯化物Bis-diazotizedbenzidine dichloride)交聯(lián)到血蘭 蛋白(KLH)上作為抗原制備抗體,Tyr加在N端產(chǎn)生抗多肽C端抗 體,Tyr加在C端,產(chǎn)生抗多肽N端抗體。本發(fā)明的多肽片段(2)是人AD7C-NTP蛋白C端的一段8個氨基 酸殘基,在該肽段的N端、C端分別加上Tyr則組成多肽片段(5)、 多肽片段(6),如下(5) Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn, 即序列表中SEQ ID NO. 5所述的氨基酸序列;(6) Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Tyr, 即序列表中SEQ ID NO. 6所述的氨基酸序列。多肽片段(2)在N端或C端加Tyr是為了通過BDB (Bis-diazotizedbenzidine dichloride)交聯(lián)到血蘭蛋白(KLH) 上作為抗原制備抗體,Tyr加在N端產(chǎn)生抗多肽C端抗體,Tyr加在 C端,產(chǎn)生抗多肽N端抗體。上述兩種AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段--一多肽片段(1)和多肽片段(2)是按以下原則篩選出來的1、 親水;2、 抗原性強;3、 易于合成。迄今為止經(jīng)研究我們發(fā)現(xiàn)上述兩種多肽片段具有如下功能1、 具有免疫原性2、 與載體蛋白連接后作為抗原可刺激動物產(chǎn)生特異性的抗體。3、 用這兩種多肽片段制備的抗體可特異性的與人AD7C-NTP結(jié)合o本發(fā)明的上述AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段的制備方法可用化 學(xué)合成法利用美國ABI431A型多肽自動合成儀,通過固相法合成抗 原決定簇多肽。多肽的純度用薄層色譜和高效液相色譜進行評定,并 測定抗原多肽的濃度。將本發(fā)明的任意一種AD7C-NTP抗原決定簇多肽與載體蛋白連接 后作為抗原免疫動物即可制備本發(fā)明的特異性的多克隆抗體或單克 隆抗體。制備方法采用現(xiàn)有成熟技術(shù),參見實施例二。如前所述依次制得AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段和其特異性抗 體后,即可將該抗體用于制備人AD7C-NTP體外診斷試劑盒。將采用本發(fā)明的抗體制備的人AD7C-NTP體外診斷試劑盒進行臨 床研究,在223例AD病人中,206例尿AD7C-NTP超過2.5ng/ml,而 非AD對照平均值為0. 8ng/ml, 二者比較p〈0. 001。若以1. 5ng/ml為 劃定標(biāo)準(zhǔn),尿AD7C-NTP診斷早期AD的特異性為91%,靈敏度為 85%-92%,說明AD7C-NTP作為一種診斷AD的生化標(biāo)記物是切實可行 性的,同時說明本發(fā)明的多肽片段抗原性強,制備的抗體特異性強。
具體實施例方式
實施例一兩種AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段的制備。實施例采用的兩種AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段為本發(fā)明的多 肽片段(3)和多肽片段(5),即:Tyr-Asn-Pro-Gly-Ser-Ser-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro, Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn。 制備方法采用化學(xué)合成法利用美國ABI431A型多肽自動合成 儀,通過固相法合成抗原決定簇多肽。多肽的純度用薄層色譜和高效 液相色譜進行評定,并測定抗原多肽的濃度。該兩種多肽片段采用固相法合成。固相肽合成的主要思想是先 將所要合成肽鏈的羧基末端氨基酸的羧基以共價鍵形式同一個不溶 性的高分子化合物(樹脂)相連接,然后以此結(jié)合在固相載體上的氨基 酸作為氨基組份,經(jīng)過脫去氨基保護基并同過量的活化羧基組份反 應(yīng),接長肽鏈。這樣的步驟可以反復(fù)地多次進行下去,最后達(dá)到所需 要合成的肽鏈的長度。下圖表示了這個合成過程。<formula>formula see original document page 10</formula>上述兩種AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段的制備如下 1.所用原料HMP resin(P-羥甲基苯氧甲基多聚乙烯樹脂) Fmoc-AA (9-芴基甲氧羰?;Wo的氨基酸)麗P (氮甲基吡咯烷酮) DCM (二氯甲烷) MeoH (甲醇) Piperidine (哌啶) DMAP (二甲基氨基吡啶)H0BT (羥基苯并三唑)DCC (二環(huán)己基碳二亞胺)TFA (三氟乙酸)EDT (1, 2-乙二硫醇)硫代苯甲醚結(jié)晶苯酚乙腈2. 使用儀器 多肽自動合成儀 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 高效液相色譜儀 冷凍干燥機3. 合成方法和過程稱取HMP樹脂100mg,取代當(dāng)量是l.Omeq,即0. l醒ol于美國 ABI431A型多肽自動合成儀的反應(yīng)腔內(nèi),由合成儀自動將特定的M 按不同的順序聯(lián)接起來,偶聯(lián)率達(dá)99%。反應(yīng)如下(1)氨基酸的活化(H0Bt/DCC法)<formula>formula see original document page 11</formula>
Fmoc保護的氨基酸
<formula>formula see original document page 11</formula>(2)聯(lián)接氨基酸到樹脂上
<formula>formula see original document page 12</formula>
(3)脫去氨基酸的Fm0C保護基
0<formula>formula see original document page 12</formula>
(4)氨基酸的活化(HOBt/DCC法) HOBtfDCC<formula>formula see original document page 12</formula>
(5)偶聯(lián)<formula>formula see original document page 12</formula>新的偶聯(lián)的肽一樹脂(6) 重復(fù)3-5直至合成結(jié)束,得到AD7C-NTP多肽的肽樹脂260mg。(7) 裂解肽樹脂用TFA(三氟乙酸)切割肽鏈,用EDT,硫代苯甲醚,H20作清除劑, 在室溫下反應(yīng)3. 0小時,除去切割試劑,再用乙醚萃取,得到AD7C-NTP 多肽的粗品。多肽的純化采用高效液相色譜分離純化條件色譜柱 C8 lOXlOOmm色譜儀 Waters 600美國Waters公司 流動相 A-O. 1%TFA (三氟乙酸)H20B -O. 1% TFA (三氟乙酸)于60%乙腈 檢測波長214nm 流速 4ml/分鐘 洗脫梯度20-60%B于30分鐘 HPLC (高效液相色譜)分析色譜柱 C184.6X150mm流動相A-0. 1%TFA (三氟乙酸)H20B-0.1%TFA (三氟乙酸)于乙腈 檢測波長214nm 流速 lML/min 洗脫梯度0-60% B于30分鐘 兩種多肽片段分析結(jié)果顯示純度95%以上。 實施例二將實施例一所得的AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段與載體 蛋白連接后作為抗原免疫動物制備特異性的多克隆抗體。(一)AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段(3)多克隆抗體制備1. 抗原的制備用碳二亞胺法將AD7C-NTP多肽片段(3)與載 體蛋白血蘭蛋白(KLH)聯(lián)接制備成抗原。2. 動物制備抗血清取抗原與lml弗氏完全佐劑(基礎(chǔ)免疫)或 弗氏不完全佐劑(加強免疫)充分乳化后免疫Balb/c小鼠,腹腔注 射,每次劑量為50-200 ug/ml,分20點皮內(nèi)注射,共免疫7-8次, 末次免疫后的第十天取耳血測定抗體效價。3. 測定抗體效價用ELISA法測定抗體效價,結(jié)果顯示抗體效價 達(dá)到1: 32000以上。4. 接種H22肝癌細(xì)胞于腹腔內(nèi)。5. 取腹水及分離上清。6. 分離純化抗體硫酸銨沉淀后,再經(jīng)Protein G親和純化。7. 抗體分裝后凍干,低溫保存。(二) AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段(5)多克隆抗體制備1. 抗原的制備用碳二亞胺法將AD7C-NTP多肽片段(5)與載體 蛋白KLH聯(lián)接制備成抗原。2. 免疫動物制備抗血清取抗原與lml弗氏完全佐劑(基礎(chǔ)免疫) 或弗氏完不全佐劑(加強免疫)充分乳化后免疫新西蘭大白兔背部, 每次劑量為50-200 ug/ml,分20點皮內(nèi)注射,共免疫7-8次,末次免疫后的第十天取耳血測定抗體效價。3. 測定抗體效價用ELISA法測定抗體效價,結(jié)果顯示抗體效價 達(dá)到1: 32000以上。4. 取血及分離血清頸動脈插管取血,分離血清。5. 分離純化抗體硫酸銨沉淀后,再經(jīng)Protein G親和純化。6. 抗體分裝后凍干,低溫保存。實施例三AD7C-NTP ELISA試劑盒的制備。將上述制備的AD7C-NTP多抗用于制備尿中AD7C-NTP診斷試劑 盒,本實施例將兩種AD7C-NTP多抗中的多肽片段(3)多克隆抗體作 為試劑盒中的包被抗體,多肽片段(5)多克隆抗體則作為結(jié)合抗體。AD7C-NTP ELISA試劑盒的制備和操作如下1.各種緩沖液及試劑的配制A、 包被緩沖液0.050M, pH9.6的CB (碳酸鹽緩沖液)Na2C03 (匿 105.99) 16. 0克NaHC03 (MW 84.01 ) 29.0克蒸餾水溶至1000ml 。B、 樣品/洗滌緩沖液pH7. 2的PBS—Tween 20Na2HP04. 12H20 58克KH2P04 4克NaCl 100克KC1 4克 蒸餾水溶至1000 ml 力H Tween 20 20 ml 。C、 酶標(biāo)記物稀釋液10 X PBS 10 mlFCS (小牛血清) 20 ml 蒸餾水溶至1000 ml穩(wěn)定劑 1克防腐劑 1 ml 。 D、顯色劑A:檸檬酸 35. 5克過氧化脲 10克蒸餾水溶至1000 ml Tween 20 10ml。E、 顯色劑B:梓檬酸 120克EDTA—2Na 1克 TMB. 2HC1 2克蒸餾水溶至1000 ml。F、 終止液2M H2S04濃硫酸(95—98%) 22.2 ml蒸餾水 177. 3 ml配時將濃硫酸緩慢滴入蒸餾水中,邊加邊搖勻。2. 預(yù)包被板的制備將AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段(3)多克隆抗體溶于P^9.6, 0.05M的碳酸鹽緩沖液中,多抗?jié)舛葹?0ug/ml,制成預(yù)包被液,在 酶標(biāo)板上每孔加入100"1,置4-C放置18-24小時,取出,甩掉包被 液,洗滌,經(jīng)封閉、干燥后裝入鋁鉑袋中抽真空密封,并置于4"C保 存。3. 結(jié)合抗體(即AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段(5)多克隆抗體)和酶標(biāo)二抗?jié)舛却_定結(jié)合抗體和酶標(biāo)二抗?jié)舛扔梅疥嚨味▽嶒灤_定。4. 試劑盒的組成(1) 預(yù)包被板 48/96孔(2) 人AD7C-NTP標(biāo)準(zhǔn)品1—6個 6 X 50 u 1(3) 結(jié)合抗體 lX10ml(4) 酶標(biāo)二抗(HRP-IgG) 1X10ml(5) 濃縮洗滌液(25X)(6) 樣品稀釋液1X20ml1X20ml(7) 顯色劑A(8) 顯色劑B(9) 終止液1X6. OmlIX 6.0mlIX 6. Oml5. 試劑盒的操作步驟在預(yù)包被板的各孔中加入按待檢的尿液標(biāo)本以及標(biāo)準(zhǔn)品100 u 1/ 孔,均為雙孔,同時設(shè)空白孔,37'C孵育60分鐘,洗滌5次,拍干。 在各孔內(nèi)加入結(jié)合抗體(即AD7C-NTP抗原決定簇多肽片段(5)多克 隆抗體)100ul/孔,37-C孵育30分鐘,洗滌5次,拍干。再在各孔 內(nèi)加入標(biāo)記有辣根過氧化酶的抗人IgG抗體100p1/孔,37'C孵育30 分鐘,洗滌5次,拍干。加入顯色劑A、 B液每孔各50y 1,混勻, 37。C孵育15分鐘。加終止液50ul/孔終止反應(yīng),用酶聯(lián)檢測儀測定 各孔的450nm處的吸光度。6. 結(jié)果判定OD比值計算待測標(biāo)本孔的OD值-空白孔的OD值通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算結(jié)果。尿中AD7C-NTP的濃度《1. 5ng/ml,為陰性。尿中AD7C-NTP的濃度〉1.5ng/ml,為陽性。將上述試劑盒應(yīng)用于79例AD病人,其中66例尿AD7C-NTP超過 2.5ng/ml,而非AD對照平均值為0. 8ng/ml, 二者比較p〈0.001。以 1. 5ng/ml為劃定標(biāo)準(zhǔn),尿AD7C-NTP診斷早期AD的特異性為91%, 靈敏度為80%-85% 。序列表〈110〉首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院深圳市安群生物工程有限公司<120〉人AD7C-NTP抗原決定簇多肽、抗體及其在診斷試劑盒上的應(yīng)用〈160〉 6<170> Patentln version. 3.1〈210〉 1〈211> 13<212> PRT〈213> Homo sapiens<400> 1Asn Pro Gly Ser Ser Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ser Pro 1 5 10<210〉 2<211> 8<212〉 PRT<213〉 Homo sapiens〈400〉 2Arg Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn 1 5<210〉 3〈211〉 14<212> PRT〈213〉 Homo sapiens<400〉 3Tyr Asn Pro Gly Ser Ser Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ser Pro 1 5 10〈210〉 4〈211〉 14〈212〉 PRT〈213> Homo sapiens〈400> 4Asn Pro Gly Ser Ser Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ser Pro Tyr 1 5 10〈210〉 5 <211〉 9 〈212〉 PRT〈213〉 Homo sapiens <400> 5Tyr Arg Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn 1 5<210〉 6〈211〉 9〈212〉 PRT〈213> Homo sapiens〈400〉 6Arg Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn Tyr 1 權(quán)利要求
1.一種人AD7C-NTP抗原決定簇多肽,為如下兩種多肽片段之一(1)Asn-Pro-Gly-Ser-Ser-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro;(2)Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn。
2. 如權(quán)利要求1所述的人AD7C-NTP抗原決定簇多肽,其特征 在于在所述多肽片段(l)、多肽片段(2)的N端或C端加有Tyr。
3. —種人AD7C-NTP抗體,由權(quán)利要求1或2所述的任意一種多肽片段制備而成的多克隆抗體或單克隆抗體。
4. 如權(quán)利要求3所述的人AD7C-NTP抗體在制備人AD7C-NTP體外診斷試劑盒上的應(yīng)用。
5. 如權(quán)利要求4所述的人AD7C-NTP抗體在制備人AD7C-NTP體 外診斷試劑盒上的應(yīng)用,其特征在于所述試劑盒采用權(quán)利要求3所 述的任意一種人AD7C-NTP抗體作為包被抗體。
6. 如權(quán)利要求5所述的人AD7C-NTP抗體在制備人AD7C-NTP體 外診斷試劑盒上的應(yīng)用,其特征在于所述制劑盒還包括結(jié)合抗體, 結(jié)合抗體為權(quán)利要求3所述的另一種人AD7C-NTP抗體,與包被抗體 的多肽來源不同。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的人AD7C-NTP抗體在制備人AD7C-NTP 體外診斷試劑盒上的應(yīng)用,其特征在于所述試劑盒還包括酶標(biāo)記的 二抗。
全文摘要
本發(fā)明為一種人AD7C-NTP抗原決定簇多肽、抗體及其在診斷試劑盒上的應(yīng)用。本發(fā)明的AD7C-NTP抗原決定簇多肽,為序列表SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.6所述的多肽片段之一。本發(fā)明的AD7C-NTP抗體,是由本發(fā)明的任一種AD7C-NTP抗原決定簇多肽制備而成。本發(fā)明的AD7C-NTP抗體可應(yīng)用于制備AD7C-NTP體外診斷試劑盒。
文檔編號C07K7/06GK101215323SQ20071012558
公開日2008年7月9日 申請日期2007年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日
發(fā)明者姬志娟, 朱建安, 蓉 王, 盛樹力 申請人:首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院;深圳市安群生物工程有限公司
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