專利名稱：：葛根素的氨基酸酯衍生物及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的葛根素的氨基酸酯的衍生物，及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，這些衍生物具有較好的水溶性和較高的口服生物利用度。葛根素(Puerarin,商品名普樂林、普樂寧)是從豆科植物野葛中提取的黃酮類物質(zhì)，化學(xué)名為4',7-二羥基-8-(3-D-葡萄吡喃糖-異黃酮。結(jié)構(gòu)式J(口下戶斤示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>葛根素具有較為廣泛的藥理作用，實(shí)驗(yàn)證明葛根素對冠狀動脈有擴(kuò)張作用，能保護(hù)全心缺血心肌和心肌缺血再灌注損傷，減少急性心梗面積，降低心肌耗氧量，防止血小板黏附、聚集和血栓形成，葛根素對急性腦缺血有明顯的保護(hù)作用，對P-腎上腺素能受體有阻斷作用。在臨床上，葛根素主要用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞、心律失常、缺血性腦血管病、高血壓、突發(fā)性耳聾、視網(wǎng)膜動、靜脈阻塞等癥的治療。但是，葛根素脂溶性和水溶性均較差，口服生物利用度低。靜注注射用葛根素的制劑中需添加助溶劑如聚乙烯吡咯烷酮PVP等，易引起發(fā)熱、皮疹、過敏性哞喘、過敏性休克等不良反應(yīng)。
背景技術(shù)：
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發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供式I所代表的葛根素的氨基酸酯的衍生物:其中，R為氫、曱基、異丙基、異丁基、2-曱基丙基或苯曱基等L-氨基酸的側(cè)《連。本發(fā)明還提供式I所示的葛根素的氨基酸酯的衍生物的非毒性藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明還提供含有式I所示的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物。本發(fā)明還提供式I所示的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，以及包含式I所示的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物用于治療心腦血管疾病的用途。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的化合物可以按照如下合成路線制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>葛根素與N-千氧羰基氨基酸在二環(huán)己基碳二亞胺作用下縮合，得到2"-O-(N-千氧羰基氨基酰)-葛根素，催化氬化脫保護(hù)，得到目標(biāo)化合物。結(jié)構(gòu)式中R為氫、曱基、異丙基、異丁基、2-甲基丙基或苯甲基等氨基酸側(cè)鏈。下面的實(shí)施例可以對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，然而，這些實(shí)施例不應(yīng)作為對本發(fā)明的范圍的限制。實(shí)施例12"-0-(甘氨酰)-葛根素(U的制備將4.16g(10.0mmol)葛根素、2.09g(lO.Ommol)N-千氧羰基甘氨酸用25ml二曱基曱酰胺溶解，然后加入O.lml二曱氨基吡咬，2.5g(12mmol)二環(huán)己基碳二亞胺，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過夜，過濾，將濾液減壓蒸干。將殘留物用硅膠柱層析分離，用二氯曱烷/甲醇/乙酸(9:1:O.Ol)混合溶劑洗脫，收集所需組分，減壓蒸干，得2"-0-(N-千氧羰基甘氨酰)-葛根素2.8克。將2"-0-(N-芐氧羰基甘氨酰)-葛根素用25ml毫升二氧六環(huán)溶解，加入0.1克5%的鈀炭，在1個(gè)大氣壓的氫氣下攪拌4小時(shí)后，濾去催化劑。將濾液減壓濃縮，然后以硅膠柱層析分離，用二氯曱烷/甲醇(5:l)混合溶劑洗脫，收集所需組分，減壓蒸干，得I!1.7克。核磁共振氫譜5(卯m，腿SO-dJ:5(ppm,DMSO-d6):9.475(s，1H);8.320(s，1H);8.274(brs，2H);7.929(d，1H，J=8.9Hz),7.416(d,2H，J=8.4Hz);7.077(d，1H,J=8.7Hz);6.842(d，2H，J=8.2Hz);5.702(t,1H);5.049(d,1H);3.758(m,1H);3.671(m,1H);3.624(t,1H);3.517(dd,1H);3.425(m,1H);3.346(m,1H);3.325(m，1H)。實(shí)施例22"-O-(L-丙氨酰)-葛根素(12)的制備按照實(shí)施例1的方法，用N-節(jié)氧羰基-L-丙氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二環(huán)己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-0-(N-千氧羰基一L-丙氨酰)-葛根素。用2"-0-(N-千氧羰基一L-丙氨酰)-葛根素代替2"-O-(N-千氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氫化脫保護(hù)，得到12。核磁共振氫譜5(ppm，DMSO-d6):5(ppm,DMSO-d6):9.470(s,1H);8.327(s，1H);8.271(brs，2H);7.922(d,1H，J=8.9Hz),7.419(d,2H,J=8.4Hz);7.074(d,IH,J=8.7Hz);6.846(d，2H,J=8.2Hz);5.707(t，IH);5.043(d,IH);3.755(m，IH);3.627(t,IH);3.540(q,lH);3.518(dd,IH);3.422(m，IH);3.344(m,IH);1.261(d,3H)。實(shí)施例32"-0-(L-纈氨酰)-葛根素(I3)的制備按照實(shí)施例1的方法，用N-節(jié)氧羰基-L-纈氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二環(huán)己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-O-(N-節(jié)氧羰基一L-纈氨酰)-葛根素。用2"-0-(N-卡氧羰基一L-纈氨酰)-葛根素代替2"-0-(N-芐氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氫化脫保護(hù)，得到13。核磁共振氫譜S(卯m,DMSO-d6):S(ppm,DMSO-d6):9.472(s,IH);8.324(s，IH);8.276(brs，2H);7.930(d,1H，J=8.9Hz),7.415(d，2H,J=8.4Hz);7.074(d,IH,J=8.7Hz);6.841(d,2H，J=8.2Hz);5.705(t,IH);5.053(d,IH);3.761(m，IH);3.683(m，lH);3.625(t，IH);3.516(dd，IH);3.422(m，IH);3,347(m,IH);1.610(m，1H);0.621(d，3H);0.569(d，3H)。實(shí)施例42"-O-(L-亮氨酰)-葛根素(I4)的制備按照實(shí)施例1的方法，用N-千氧羰基-L-亮氨酸代替N-節(jié)氧羰基甘氨酸，在二環(huán)己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-O-(N-千氧羰基一L-亮氨酰)-葛根素。用2"-0-(N-千氧羰基一L-亮氨酰)-葛根素代替2"-O-(N-芐氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氫化脫保護(hù)，得到I"核磁共振氫譜5(卯m,DMSO-d6):S(ppm,DMSO-d6):9.474(s,IH);8.321(s,IH);8.276(brs,2H);7.925(d,IH,J=8.9Hz),7.415(d,2H,J=8.4Hz);7.073(d，IH,J=8.7Hz);6駕(d,2H，J=8.2Hz);5.709(t,IH);5.043(d，IH);3.752(m,IH);3.624(t,IH);3.537(q，lH);3.516(dd,IH);3.425(m，IH);3.340(m,IH);1.426(m，IH);1.312(m,1H);0.562(d，3H);0.526(d，3H)。實(shí)施例52"-0-(L-異亮丙氨酰)-葛根素(I5)的制備按照實(shí)施例1的方法，用N-千氧羰基-L-異亮氨酸代替N-節(jié)氧羰基甘氨酸，在二環(huán)己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-0-(N-芐氧羰基一L-異亮氨酰)-葛根素。用2"-0-(1^芐氧羰基一1^異亮氨酰)-葛根素代替2"-0-(N-芐氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氫化脫保護(hù)，得到15。核磁共振氫譜5(卯m,DMSO-d6):S(ppm,DMSO-d6):9.477(s，IH);8.320(s,IH);8.275(brs,2H);7.924(d，1H，J=8.9Hz),7.416(d，2H,J=8.4Hz);7'073(d,1H，J=8.7Hz);6.848(d，2H,J=8.2Hz);5.702(t,IH);5.047(d,IH);3.751(m,IH);3.629(t，IH);3.543(q，lH);3.518(dd，IH);3.425(m，IH);3.340(m，IH);1.364(m,lH);0.662(m，2H);0.517(t，3H)。實(shí)施例62"-0-(L-脯氨酰)-葛根素(I6)的制備按照實(shí)施例1的方法，用N-爺氧羰基-L-脯氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二環(huán)己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-0-(N-千氧羰基一L-脯氨酰)-葛根素。用2"-0-(]^-,氧羰基一卜脯氨酰)-葛根素代替2，，-O-(N-千氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氫化脫保護(hù)，得到13。核磁共振氫譜S(卯m,DMSO-d6):5(ppm，DMSO-d6):9.791(brs，IH);9.473(s,IH);8.326(s，IH);7.930(d,IH,J=8.9Hz),7.415(d,2H，J=8.4Hz);7.074(d，IH,J=8.7Hz);6.842(d,2H,J=8.2Hz);5.707(t，IH);5.041(d,IH);4.072(brs,lH);3.758(m,IH);3.624(t,IH);3.521(dd，IH);3.417(m,IH);3.124(m,2H);2.129(m，IH);1.760(m，IH);1.647(m，2H)。實(shí)施例72"-O-(L-苯丙氨酰)-葛根素(I7)的制備按照實(shí)施例1的方法，用N-千氧羰基-L-苯丙氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二環(huán)己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-O-(N-節(jié)氧羰基一L-苯丙氨酰)-葛根素。用2"-O-(N-芐氧羰基一L-苯丙氨酰)-葛根素代替2"-0-(N-芐氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氫化脫保護(hù)，得到I7。核磁共振氫譜5(卯m，DMSO-d6):5(ppm,DMSO-d6):9.478(s,1H);8'326(s，1H);8.270(brs，2H);7.94(d,lH);7.923(d,1H，J=8.9Hz),7.419(d,2H,J=8.4Hz);7.23(m，5H);7.071(d，1H,J=8.7Hz);6.846(d,2H,J=8.2Hz);5.708(t,1H);5.043(d，1H);3.755(m,1H);3'627(t，1H);3.540(q，lH);3.518(dd，1H);3.422(m,1H);3,359(m,1H);3.15(dd,lH);3.01(dd,lH)。實(shí)施例8抗缺氧活性試—驗(yàn)將質(zhì)量18-20g的昆明小鼠，隨機(jī)分組，每組10只，禁食過夜。將葛根素及待測目標(biāo)化合物懸浮或溶解于1%的羧曱基纖維素鈉的水溶液中，配成5mg/ml的濃度，按100mg/kg的劑量口服給予的葛根素注射液及目標(biāo)化合物。的不同的待測化合物；給藥2h后，將動物置于磨口廣口瓶中，立即用真空脂封口，記錄小鼠存活時(shí)間，計(jì)算平均值。結(jié)果見表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)施例9擴(kuò)血管活性試驗(yàn)將Wistar大鼠斷頭處死，取主動脈制成動脈條，置于血液營養(yǎng)液中，37。C恒溫，固定并與生物傳感器相連。穩(wěn)定lhr后，于浴槽中加入去曱腎上腺素至lxl(Tmol/L的濃度，待血管張力達(dá)到穩(wěn)定的強(qiáng)弱一致的收縮畔值后，加入待測化合物，在不同濃度測定相應(yīng)的張力值，以去曱腎上腺素引起的收縮碎值為100%,計(jì)算收縮抑制率。結(jié)果見表2。表2擴(kuò)血管活性試驗(yàn)結(jié)果化合物收縮抑制率(％)5ug/ml10ug/ml20ug/ml生理鹽水2.50.21.1葛根素5.411.619.7II3.66.911.3l26.48.318.2139.819.426.0l43.98.812.9153.713.921.6工60.73.25.1176.810.513.3實(shí)施例IO口服生物利用度的測定參考文獻(xiàn)(吳燕紅，蘇子仁，賴小平，林吉。愈風(fēng)寧心片中葛根素在Beagle犬體內(nèi)藥代動力學(xué)研究。中成藥。2006;28(2):215-218.)的方法，測定目標(biāo)化合物口服給藥后的不同時(shí)間點(diǎn)葛根素的血藥濃度，與靜脈注射的葛根素比較，計(jì)算生物利用度。采用自身對照設(shè)計(jì)試驗(yàn)法，單劑量一次靜脈注射葛根素注射液或口服相同劑量的目標(biāo)化合物。采用HPLC法測定狗血漿中葛根素的濃度，應(yīng)用PKsolutions2.0程序計(jì)算藥動學(xué)參數(shù)和生物利用度。將3只Beagle犬稱重(空腹重量)、編號；實(shí)驗(yàn)前禁食12h,但不禁水。按單劑量IOmg/kg于左前肢靜脈注射葛根素藥液，并在靜脈注射前和注射后5min,10min,20min,30min,40min，60min,80min，2hr,3hr,4hr，5hr，8hr、12hr和24hr于對側(cè)的右前月支采血0.5mL置于肝素鈉和氟化鈉處理過的離心管中。動物在300min前可以適當(dāng)喂々大水，狗在300min釆血后方可進(jìn)食。每間隔二周，按單劑量IOmg/kg分別喂服葛根素及目標(biāo)化合物的膠嚢，并在服藥前和服藥后15min,35min，60min,90min,120min,150min,3hr,4hr，5hr,8hr,12hr和24hr采血O.5mL置于肝素鈉和氟化鈉處理過的離心管中，動物在300min前可以適當(dāng)喂飲水，狗在300min采血后方可進(jìn)食。將血樣離心IOmm(8000r/min)，取上清200juL置離心管中，再加入200liL的6。/。高氯酸溶液沉淀蛋白質(zhì)，混合2min后，離心(10000r/min)5min，放入水箱中靜置2h，耳又出再離心(10000r/min)5min，取上清液用O.45jum微孔濾膜過濾，取濾液2GiuL進(jìn)樣。色譜條件K腦osilODSKR則一5色譜柱(250mmx4.6mm);Phenoie腦0DS保護(hù)柱(4mmx3.0mm);流動相曱醇-O.2%醋酸(30:70);流速1.0mL/min;;f主溫30°C;4企測波長250nm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3:表3Beagle犬口服生物利用度<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1、式I所代表的葛根素的氨基酸酯的衍生物其中，R為氫、甲基、異丙基、異丁基、2-甲基丙基或苯甲基等L-氨基酸的側(cè)鏈。。2、權(quán)利要求1所述的葛根素的氨基酸酯衍生物的非毒性藥學(xué)上可接受的鹽。3、權(quán)利要求1所述的葛根素的氨基酸酯衍生物的非毒性藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物。4、權(quán)利要求1、2和3所述的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，以及包含式I所示的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物用于治療心腦血管疾病的用途。全文摘要本發(fā)明的目的是提供式I所代表的葛根素的氨基酸酯的衍生物，其中，R為氫、甲基、異丙基、異丁基、2-甲基丙基或苯甲基等L-氨基酸的側(cè)鏈。文檔編號C07D407/00GK101353346SQ200710130138公開日2009年1月28日申請日期2007年7月23日優(yōu)先權(quán)日2007年7月23日發(fā)明者楊振華,王建民申請人:北京美倍他藥物研究有限公司