專利名稱：：一種從魚露中分離提取β-3激動劑章魚胺的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從魚露中分離提取富含3—3激動劑章魚胺的制備方法，具體地說是運(yùn)用大孔吸附樹脂法工業(yè)化地從魚露中吸附章魚胺，并用洗脫劑洗分離富含章魚胺的魚露提取物。技術(shù)背景章魚胺是一種重要的生物胺和神經(jīng)介質(zhì)。起廣泛的生理作用，有調(diào)節(jié)代謝與能量平衡的功效，是目前唯一商品化的防治肥胖癥與糖尿病的P3_腎上腺素能受體激動劑。有增加代謝、產(chǎn)生熱量、調(diào)節(jié)血糖、減少體脂、抑制食欲、提高注意力等多種作用。而枳實(shí)和魚露是天然章魚胺的主要來源。在已有技術(shù)中，曾有關(guān)于從枳實(shí)中提取章魚胺的報道。但枳實(shí)中章魚胺含量僅為0.010.03%。而魚露中相對豐富的章魚胺含量約O.1%。使從魚露中提取章魚胺開發(fā)健康產(chǎn)品成為可能。魚露在中國的東南沿海乃至整個東南亞是水產(chǎn)加工鏈上重要的一環(huán)，由于極高的含鹽量使進(jìn)一步的利用十分困難。近年來，食品安全性被高度重視，由于天然產(chǎn)生的章魚胺的生物活性是化學(xué)合成章魚胺的3倍，因?yàn)?，從魚露中提取的章魚胺較之化學(xué)合成的章魚胺服用量少，也更安全。由于魚露中含有20%以上的氯化鈉，在此條件下，要分離提取含量為0.1%的章魚胺是極為困難的，要保持魚露原有的風(fēng)味更是困難。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，從而提供一種從魚露中分離提取0—3激動劑章魚胺的制備方法，利用大孔吸附樹脂法，有效吸附魚露中的章魚胺；保持或提高了經(jīng)樹脂吸附后魚露的風(fēng)味，從而使魚露資源得到有效利用，并能提高魚露產(chǎn)品附加值。本發(fā)明的主要解決方案是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明一種從魚露中分離提取e—3激動劑章魚胺的制備方法采用以下工藝步驟1、過濾發(fā)酵熟成的粗魚露，經(jīng)離心機(jī)過濾成澄清的魚露，目數(shù)為100_120目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1000—1200轉(zhuǎn)/分；2、大孔吸附樹脂吸附工藝將上述過濾后的魚露，于H103大孔吸附柱上柱吸附，以柱中H103大孔吸附樹脂的體積為1BV，上柱的魚露量為2BV一4BV，魚露上柱的流速為1BV—3BV.h—、收集過柱后流出的魚露，供配置調(diào)味品用；3、大孔吸附樹脂的洗脫工藝對上述吸附章魚胺后的樹脂，從樹脂柱底部抽真空5—10分鐘，抽去樹脂間殘存的魚露，用乙醇水溶液洗脫H103大孔吸附樹脂吸附的章魚胺，乙醇洗脫液的乙醇濃度為10%—90%(V/V)，洗脫液的上柱速度為lBV*h—、乙醇洗脫液的用量為0.4BV—1BV;4、真空濃縮干燥收集上述乙醇洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對真空度為0.03MPa—0.05MPa，溫度為50°C—60QC，回收的乙醇洗脫液，供循環(huán)上柱洗脫用，洗脫液呈濃漿后取出，烘干為干燥提取物，絕對中空度為-0.03MPa—0.05MPa，溫度60°C—80°C，時間為12h—14h;5、將干燥的提取物粉碎，篩取80目一120目粉末，得富含章魚胺的黃色提取物干粉。本發(fā)明所述的乙醇洗脫液的乙醇濃度以30%為佳。本發(fā)明所述的上柱的魚露量以3BV為佳，魚露上柱的流速以1BVh—t為佳。本發(fā)明所述的乙醇洗脫液的用量以0.6BV為佳。本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明解決了從高鹽的魚露中利用H103大孔吸附樹脂吸附分離章魚胺的技術(shù)，利用章魚胺含量相對豐富的魚露作為原料，具有章魚胺分離提取率高，生產(chǎn)工藝簡便快捷，成本低的特點(diǎn)；并使上柱后的魚露保持或改善了原有的風(fēng)味，為魚露資源的綜合利用，建立了新的技術(shù)途徑，從而使魚露資源得到有效利用，提高了魚露產(chǎn)業(yè)的附加值；章魚胺的含量為0.71%—2.62%。本發(fā)明首次報告了用H103大孔吸附樹脂處理魚露，提取了活性成分章魚胺，并使處理過的魚露有望成為適合更廣大人群的新的調(diào)味料。提取的洗脫液干燥后的干粉中，除章魚胺外，還含有多種營養(yǎng)成分，有廣泛而重要的生理作用，可作為健康食品用于運(yùn)動人群、減控體重人群、心血管疾病及糖尿病人群。圖1為本發(fā)明工藝流程圖。具體實(shí)施方式下面本發(fā)明將結(jié)合附圖中的實(shí)施例作進(jìn)一步描述實(shí)施例一本發(fā)明一種從魚露中分離提取P—3激動劑章魚胺的制備方法采用以下工藝步驟取市售發(fā)酵熟成的粗魚露，經(jīng)三足式離心機(jī)過濾成基本澄清的魚露，過濾介質(zhì)為細(xì)密的尼龍布，目數(shù)100目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/分。預(yù)處理過的H103大孔吸附樹脂濕法裝入離子交換柱，體積10cmX96cm，約7.5L。將上述過濾后的螺魚魚露30L(章魚胺含量0.909mg/ml，含鹽量276.12g/L—1，氨基氮6.12g/L—')于H103大孔吸附柱上柱吸附，以柱中H103大孔吸附樹脂的體積為1BV，上柱的魚露量為4BV。魚露上柱的流速為1BV"h一1。經(jīng)吸附，章魚胺吸附在樹脂上，收集上柱后魚露，每5L最后部分取樣，HPLC作章魚胺含量分析。過柱后流出的魚露收集供配制調(diào)味品用。表l:H103樹脂對魚露中章魚胺動態(tài)吸附的數(shù)值表上柱體積(5L吸附前濃度吸附后濃度累計吸附量<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>當(dāng)H103大孔吸附樹脂處理的魚露為樹脂本身的2BV時，對章魚胺的吸附率達(dá)到86.84%，為3.3BV時，達(dá)64.74%。吸附完成后，將上述吸附章魚胺后的樹脂從柱底部真空抽IO分鐘，抽去樹脂間殘存的魚露。以不同濃度乙醇水溶液(V/V)對飽和吸附的H103大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附率見表2。以30%的乙醇水溶液為最佳。表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>以30%乙醇溶液作為洗脫劑，流速控制在1BV*h—、每0.5L收集洗脫液，測定各收集管洗脫液中章魚胺的濃度，測定數(shù)據(jù)詳見表3?？梢钥闯?，洗脫液體積達(dá)3.5L時，洗脫液中章魚胺含量達(dá)到最高值，到4.5L時吸附于樹脂上的章魚胺基本上被洗脫下來。由此得到魚露上柱體積為3.3BV時，每0.5L洗脫液中章魚胺濃度的數(shù)值及在HPLC分析中章魚胺峰面積與總的峰面積的百分面積比。見表3。表3:動態(tài)的洗脫液中章魚胺濃度及在HPLC中峰的百分面積比<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>說明30%的乙醇洗脫液用量為0.46BV時，流出液中章魚胺含量達(dá)到最大濃度，并快速下降。平衡章魚胺濃度與峰面積比，洗脫液的用量以0.6BV為佳。以0.93BV洗脫液處理章魚胺的回收率為74y。左右。HPLC分析結(jié)果指出，經(jīng)百分面積歸一法計算，章魚胺在流出液中的相對濃度，隨洗脫液體積的增加而降低，即其它物質(zhì)的濃度不斷增加，章魚胺純度降低正收集上述乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對真空度為0.03MPa，溫度為50flC?；厥盏囊掖枷疵撘?，供循環(huán)上柱洗脫用。洗脫液呈濃槳后取出，用遠(yuǎn)紅外真空烘箱中烘干，絕對真空度為0.03MPa，溫度60°C，時間為12h。干燥的提取物粉碎機(jī)粉碎，篩取80目粉末，得富含章魚胺的黃色提取物干粉1.06Kg，HPLC方法分析，含章魚胺0.925%。上柱后的魚露風(fēng)味見表4:表4:魚露經(jīng)H103大孔吸附樹脂吸附后感官評定色澤澄明度氣味口感原魚露棕紅色稍濁強(qiáng)烈魚腥味鮮、口感雜樹脂處理后淺棕黃色微濁微弱魚腥味鮮、口感純實(shí)施例二本發(fā)明一種從魚露中分離提取e—3激動劑章魚胺的制備方法采用以下工藝步驟市售發(fā)酵熟成的粗魚露，經(jīng)三足式離心機(jī)過濾成基本澄清的魚露，過濾介質(zhì)為細(xì)密的尼龍布，目數(shù)120目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/分。預(yù)處理過的H103大孔吸附樹脂濕法裝入離子交換柱(5cmX52cm)，約1L。過濾后的鍉魚魚露3L(章魚胺含量0.909mg/ml，含鹽量276.12g/L—\氨基氮6.12g/L—')于H103大孔吸附柱上柱吸附，以柱中H103大孔吸附樹脂的體積為1BV，上柱的魚露量為3BV。魚露上柱的流速控制在lBV*h—''，章魚胺吸附在樹脂上，收集上柱后魚露，每0.5L最后部分取樣HPLC作章魚胺含量分析。收集過柱后流出的魚露，供配置調(diào)味品用。當(dāng)H103大孔吸附樹脂處理的魚露為樹脂本身的2BV時，對章魚胺的吸附率達(dá)到86.44%，為3BV時，達(dá)63.55%。上述吸附章魚胺后的樹脂，從樹脂柱底部真空抽8分鐘，抽去樹脂間殘存的魚露。以30%乙醇溶液作為洗脫劑，流速控制在1BV'h—1，每0.2L收集洗脫液。說明30%的乙醇洗脫液的上柱速度為1BV、洗脫液用量為0.6BV時，流出液中章魚胺含量達(dá)到最大濃度。以lBV洗脫液處理章魚胺的回收率為75y。左右。收集上述乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對真空度為0.04MPa，溫度為55°C?；厥盏囊掖枷疵撘嚎晒┭h(huán)上柱洗脫用。洗脫液呈濃漿后取出，用遠(yuǎn)紅外真空烘箱中烘干，絕對中空度為0.04MPa，溫度70°C，時間為13h。干燥的提取物粉碎機(jī)粉碎，篩取100目粉末，得富含章魚胺的黃色魚露提取干粉O.042Kg,HPLC分析含章魚胺2.62y。。實(shí)施例三本發(fā)明一種從魚露中分離提取P—3激動劑章魚胺的制備方法采用以下工藝步驟市售發(fā)酵熟成的粗七星魚魚露，經(jīng)三足式離心機(jī)過濾成基本澄清的魚露，過濾介質(zhì)為細(xì)密的尼龍布，目數(shù)120目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速1200轉(zhuǎn)/分。預(yù)處理過的H103大孔吸附樹脂濕法裝入離子交換柱(5cmX52cm)，約1L。過濾后的七星魚魚露3L(章魚胺含量0.658mg/ml,含鹽量279.63g/L—1，氨基氮11.90g/L—0于H103大孔吸附柱上柱吸附，以柱中H103大孔吸附樹脂的體積為1BV,上柱的魚露量為3BV。魚露上柱的流速控制在1BVh—"經(jīng)吸附，章魚胺吸附在樹脂上，收集上柱后魚露每0.2L最后lml取樣HPLC作章魚胺含量分析。收集過柱后流出的魚露，供配置調(diào)味品用。當(dāng)H103大孔吸附樹脂處理的魚露為樹脂本身的2BV時，對章魚胺的吸附率達(dá)到86.21%，為3BV時，達(dá)62.43%。上述吸附章魚胺后的樹脂，從樹脂柱底部真空抽8分鐘，抽去樹脂間殘存的魚露。以30%乙醇溶液作為洗脫劑，流速控制在1BVh—1，每200mL收集洗脫液。說明30%的乙醇洗脫液的上柱速度為1BVh-1，洗脫液用量為0.6BV時，流出液中章魚胺含量達(dá)到最大濃度。以1BV洗脫液處理章魚胺的回收率為73%左右。HPLC分析結(jié)果指出，經(jīng)百分面積歸一法計算，章魚胺在流出液中的相對濃度，隨洗脫液體積的增加而降低，即其它物質(zhì)的濃度不斷增加，章魚胺純度降低。收集上述乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對真空度為0.05MPa，溫度為60QC?；厥盏囊掖枷疵撘汗┭h(huán)上柱洗脫用。洗脫液呈濃漿后取出，用遠(yuǎn)紅外真空烘箱烘干，絕對真空度為0.05MPa，溫度80°C，時間為14h。干燥的提取物粉碎機(jī)粉碎，篩取100目粉末，得七星魚魚露提取物干粉0.134Kg,HPLC分析含章魚胺O.71%。權(quán)利要求1、一種從魚露中分離提取β-3激動劑章魚胺的制備方法，其特征是采用以下工藝步驟(1)、過濾取粗魚露，經(jīng)離心機(jī)過濾，目數(shù)為100-120目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1000-1200轉(zhuǎn)/分；(2)、大孔吸附樹脂吸附工藝將上述過濾后的魚露，于大孔吸附柱上柱吸附，以柱中大孔吸附樹脂的體積為1BV，上柱的魚露量為2BV-4BV，魚露上柱的流速為1BV-3BV·h-1；(3)、大孔吸附樹脂的吸附工藝取上述吸附章魚胺后的樹脂，從樹脂柱底部抽真空5-10分鐘，用乙醇水溶液洗脫大孔吸附樹脂吸附的章魚胺，乙醇洗脫液的乙醇濃度為10％-90％，洗脫液的上柱速度為1BV·h-1，乙醇洗脫液的用量為0.4BV-1BV；(4)、真空濃縮干燥收集上述乙醇洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對真空度為0.03MPa-0.05MPa，溫度為50℃-60℃，回收的乙醇洗脫液，供循環(huán)上柱洗脫用，洗脫液呈濃漿后取出，烘干為干燥提取物，絕對中空度為0.03MPa-0.05MPa，溫度60℃-80℃，時間為12h-14h；(5)、將干燥的提取物粉碎，篩取80目-120目粉末，得富含章魚胺的黃色提取物干粉。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從魚露中分離提取P—3激動劑章魚胺的制備方法，其特征在于所述的乙醇洗脫液的乙醇濃度以30%為佳。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從魚露中分離提取P—3激動劑章魚胺的制備方法，其特征在于所述的上柱的魚露量以3BV為佳，魚露上柱的流速以1BVh—'為佳。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從魚露中分離提取P—3激動劑章魚胺的制備方法，其特征在于所述的乙醇洗脫液的用量以0.6BV為佳。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從魚露中分離提取P—3激動劑章魚胺的制備方法，其特征在于所述的上柱后流出的魚露，供配置調(diào)味品用。全文摘要本發(fā)明涉及一種從魚露中分離提取β-3激動劑章魚胺的制備方法，具體地說是運(yùn)用大孔吸附樹脂法工業(yè)化地從魚露中吸附章魚胺，并用洗脫劑洗分離富含章魚胺的魚露提取物。特征是運(yùn)用H103大孔吸附樹脂吸附魚露中的章魚胺，再用30％的乙醇水溶液作洗脫劑，上柱后的洗脫液真空濃縮回收乙醇洗脫液富含章魚胺的濃縮液，經(jīng)真空紅外干燥，得到富含章魚胺的魚露提取物粉末。本發(fā)明可有效吸附魚露中的章魚胺；保持或提高了經(jīng)樹脂吸附后魚露的風(fēng)味，從而使魚露資源得到有效利用，并能提高魚露產(chǎn)品附加值，是一種安全的可長期服用的保健食品原料。文檔編號C07C215/00GK101157621SQ20071013350公開日2008年4月9日申請日期2007年9月30日優(yōu)先權(quán)日2007年9月30日發(fā)明者李毓寧,楊禮明,王建中,范榕斌,董云雄申請人:無錫生命科技發(fā)展股份有限公司