專利名稱：：亮菌乙素及其提取分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種具有防治膽囊炎的化合物，具體地說是亮菌乙素及其提取分離方法和在制藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：亮菌(^環(huán)/〃腦W/ato6&scms)屬口蘑禾斗(Tricholomataceae)真菌，子實(shí)體常數(shù)十至百余個(gè)呈叢生長，叢徑可達(dá)20-30厘米。菌蓋呈扁半球形，菌蓋干，不粘，蜜黃色。蓋緣有不明顯條紋。菌肉白色或帶乳黃色。菌柄細(xì)圓柱形，扭曲，長7-12厘米，粗0.3-0.5厘米。因菌絲在暗處能發(fā)出淺藍(lán)色熒光，故稱為亮菌。民間用亮菌治療膽囊炎和傳染性肝炎有效。我國70年代成立了"亮菌"科研協(xié)作組對假蜜環(huán)菌進(jìn)行了較深入的研究。該研究涉及到菌種的分離、鑒定和菌絲體的培養(yǎng)，化學(xué)成分的分離與測定等內(nèi)容。從假蜜環(huán)菌培養(yǎng)物的乙醇提取物中分離得到兩個(gè)成分，分別命名為亮菌甲素(armillarisinA)和亮菌乙素(armillarisinB)。亮菌甲素為一香豆素化合物，化學(xué)結(jié)構(gòu)為3-乙酰基-5-羥甲基-7-羥基-香豆素。該化合物已作為新藥上市，有利膽、解痙、止痛、消炎等作用。該藥可單獨(dú)用于治療非嚴(yán)重梗阻型急性膽囊感染，其特點(diǎn)是起效快、活性高、劑量小。而關(guān)于另一個(gè)活性化合物亮菌乙素的化學(xué)結(jié)構(gòu)確定至今尚未見后續(xù)明確的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，尋找到有明確防治膽囊炎作用的藥物，最終確定亮菌乙素的化學(xué)名稱及其化學(xué)結(jié)構(gòu)式。本發(fā)明的另一目的在于提供一種從亮菌子實(shí)體中提取分離亮菌乙素的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案如下亮菌乙素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>化學(xué)名稱為2-羥基-2-苯基-丙二酰胺。一種亮菌乙素的提取分離方法，該方法按以下步驟進(jìn)行:(1)以亮菌子實(shí)體為原料，將干燥的亮菌子實(shí)體經(jīng)粉碎后用甲醇室溫浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏。(2)將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用石油醚-丙酮系統(tǒng)洗脫除去雜質(zhì)，然后用氯仿-甲醇系統(tǒng)洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)溶劑揮發(fā)析出結(jié)晶，該晶體經(jīng)重結(jié)晶得到化合物亮菌乙素純品。本發(fā)明方法在步驟l中，干燥的亮菌子實(shí)體經(jīng)粉碎后用甲醇室溫浸泡提取時(shí)間為2448小時(shí)。在步驟2中，將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，先用體積比為9:1石油醚-丙酮系統(tǒng)洗脫除去雜質(zhì)，然后用8:2的石油醚-丙酮系統(tǒng)洗脫除去雜質(zhì)，最后用體積比為95:585:15的氯仿-甲醇系統(tǒng)洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)溶劑揮發(fā)析出結(jié)晶，該晶體經(jīng)洗脫液溶解后重結(jié)晶得到化合物亮菌乙素純品。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于首次確定了亮菌乙素的結(jié)構(gòu)，亮菌乙素具有良好的開發(fā)、利用和發(fā)展前景，同時(shí)也為研究開發(fā)治療膽囊炎的藥物開辟了一個(gè)新途徑。本發(fā)明提供的亮菌乙素的提取分離方法，方法簡便可行，在分離過程中并未使用價(jià)格昂貴的分離設(shè)備，而是采甩混合有機(jī)溶劑進(jìn)行柱分離，降低了提取分離方法的成本及操作難度。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一歩說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實(shí)施例1將200g干燥的亮菌子實(shí)體經(jīng)粉碎后用甲醇室溫24小時(shí)浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏15g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1，V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質(zhì)，然后用V(氯仿)V(甲醇)=95:5的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)溶劑揮發(fā)析出結(jié)晶，該晶體經(jīng)重結(jié)晶得到化合物亮菌乙素純品48mg。將400g干燥的亮菌子實(shí)體經(jīng)粉碎后用甲醇室溫32小時(shí)浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏30g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1,V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質(zhì)，然后用V(氯仿)V(甲醇)=92:8的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)溶劑揮發(fā)析出結(jié)晶，該晶體經(jīng)重結(jié)晶得到化合物亮菌乙素純品90mg。實(shí)施例3將800g干燥的亮菌子實(shí)體經(jīng)粉碎后用甲醇室溫36小時(shí)浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏65g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1，V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質(zhì)，然后用V(氯仿)V(甲醇)=90:10的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)溶劑揮發(fā)析出結(jié)晶，該晶體經(jīng)重結(jié)晶得到化合物亮菌乙素純品185mg。實(shí)施例4將1000g干燥的亮菌子實(shí)體經(jīng)粉碎后用甲醇室溫24小時(shí)浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏70g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1，V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質(zhì)，然后用V(氯仿)V(甲醇)=88:12的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)溶劑揮發(fā)析出結(jié)晶，該晶體經(jīng)重結(jié)晶得到化合物亮菌乙素純品210mg。實(shí)施例5將2000g干燥的亮菌子實(shí)體經(jīng)粉碎后用甲醇室溫24小時(shí)浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏150g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1，V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質(zhì)，然后用V(氯仿)V(甲醇)=85:15的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)溶劑揮發(fā)析出結(jié)晶，該晶體經(jīng)重結(jié)晶得到化合物亮菌乙素純品430mg。實(shí)施例1-5所得化合物亮菌乙素純品利用現(xiàn)代波譜技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析如下亮菌乙素，UVmax(loge)250.5(2.35),256.5(2.43),263(2.38)。從紫外光譜分析本化合物骨架為單取代苯環(huán)。紅外光譜表明有胺基(3436)、羥基(3352)、酰胺(1680)、叔醇(1127)、苯環(huán)(1580，1452)、苯環(huán)單取代(763，692)。FAB:MS測定其分子量為194，高分辨質(zhì)譜HR-FAB:MSm/z(%):217.0605(M++Na)(計(jì)算值為217.0589)給出分子式為C9H1()N203。氫譜(CsD5N,400MHz)給出一組單取代苯信號8.22(2H,dd,J=1.4，7.2Hz,H-2，，6，)，7.35(2H，m,H-3，，5，)，7.25(1H,m,H-4，)。氫譜還給出兩個(gè)酰胺信號9.03(br.s)。碳譜(C5DsN,100MHz)給出9個(gè)信號(其中6個(gè)為一組苯環(huán)信號)174.2(s)，142.1(s),128.6(d，X2)，128.3(s),126.8(d,X2),80.2(s)。根據(jù)碳譜上174.2季碳信號較強(qiáng)及分子式的組成，推測有兩個(gè)酰胺基團(tuán)。由^」HCOSY，HMQC相關(guān)關(guān)系確定苯環(huán)上6個(gè)碳?xì)湫盘柕臍w屬。在HMBC上可見H-2，，6，與80.2的季碳相關(guān)，同時(shí)氨基上的氫與80.2的季碳也有較弱的相關(guān)，最終確定亮菌乙素的結(jié)構(gòu)為2-羥基-2-苯基-丙二酰胺，碳?xì)湫盘枤w屬見表l。表1.and13CNMR(G5D5N)dataofarmillarsinB<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求1.亮菌乙素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為化學(xué)名稱為2-羥基-2-苯基-丙二酰胺。2.權(quán)利要求1所述的亮菌乙素的提取分離方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行(1)以亮菌子實(shí)體為原料，將千燥的亮菌子實(shí)體經(jīng)粉碎后用甲醇室溫浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏；(2)將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用石油醚-丙酮系統(tǒng)洗脫除去雜質(zhì)，然后用氯仿-甲醇系統(tǒng)洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)溶劑揮發(fā)析出結(jié)晶，該晶體經(jīng)重結(jié)晶得到化合物亮菌乙素純品。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的亮菌乙素的提取分離方法，其特征在于在步驟1中，干燥的亮菌子實(shí)體經(jīng)粉碎后用甲醇室溫浸泡提取時(shí)間為2448小時(shí)。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的亮菌乙素的提取分離方法，其特征在于在步驟2中，將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，先用體積比為9:l石油醚-丙酮系統(tǒng)洗脫除去雜質(zhì)，然后用8:2的石油醚-丙酮系統(tǒng)洗脫除去雜質(zhì)，最后用體積比為95:585:15的氯仿-甲醇系統(tǒng)洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)溶劑揮發(fā)析出結(jié)晶，該晶體經(jīng)重結(jié)晶得到化合物亮菌乙素純品。全文摘要本發(fā)明公開了亮菌乙素及其提取分離方法，亮菌乙素的化學(xué)名稱為2-羥基-2-苯基-丙二酰胺，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為右式，其提取分離方法包括原料粉碎、浸取、萃取和柱層析分離。本發(fā)明首次確定了亮菌乙素的結(jié)構(gòu)，亮菌乙素具有良好的開發(fā)、利用和發(fā)展前景，同時(shí)也為研究開發(fā)治療膽囊炎的藥物開辟了一個(gè)新途徑。本發(fā)明提供的亮菌乙素的提取分離方法，方法簡便可行。文檔編號C07C235/34GK101307008SQ20071018985公開日2008年11月19日申請日期2007年10月26日優(yōu)先權(quán)日2007年10月26日發(fā)明者麻兵繼申請人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)