專利名稱：阿德福韋酯膽酸類衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
:
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，確切地說它是阿德福韋酯膽酸類衍生物及其制備方法和用途。
背景技術：
阿德福韋酯(Adefovirdipivoxil)化學名:9-[2-[雙(新戊酰氧基甲氧基)磷酰甲氧 基]乙基]腺嘌呤，CA登錄號為[142340-99-6]，分子式C2。H32N508P，其結構式如式1:
阿德福韋酯為阿德福韋的前體藥物，為嘌呤類衍生物，可以口服，口服后水解為阿德福 韋，不需要磷酸化即有抗病毒作用。本品能抑制HBV DNA多聚酶的活性，并能滲入到乙肝病 毒的DNA中，抑制病毒的復制，對拉米夫定和泛昔洛韋耐藥的HBV病毒株，均有很強的抑制
作用，臨床用于肝炎的治療。
阿德福韋最早申請的化合物專利為捷克斯洛伐克專利CS 263951 ，優(yōu)先權日為1985.04. 25 ，同等專利有EP 206459, US 4808716。其它專利包括US 4724233、 WO 9904774、 WO 003 5460等。阿德福韋的磷酸酯基帶負電荷，口服后在腸內吸收不佳，因此生物利用度很低，為 此美國Gilead Sciences公司開發(fā)了阿德福韋酯，它在口服后可迅速被酯酶水解，釋放出游 離的阿德福韋進入門脈循環(huán)和體循環(huán)中，且具有較高的生物利用度，最終阿德福韋經(jīng)腎排出 體外。2002年9月，阿德福韋酯首次在美國上市，用于治療成人伴有病毒復制活躍和血清轉 氨酶顯著增高，或肝組織學為活動性病變的慢性乙肝感染。由于阿德福韋酯具有一定的腎毒 性，因此限制了其最優(yōu)化劑量的使用，使其不能用抗乙肝病毒最大給藥劑量進行治療。有研 究文章報道阿德福韋酯大鼠灌胃后的腎臟中'藥物量是肝臟的十余倍(孟志云，竇桂芳，孫文 種，朱曉霞，張亮，湯仲明。阿德福韋二吡呋酯在獼猴體內的藥代動力學及在大鼠體內的組 織分布《中國藥理學與毒理學雜志》2003年12月，17(6) :447 450)，長期用藥需注意腎臟 毒性。
研制阿德福韋酯的Gilead Sciences公司在中國申請了該藥的有關專利專利公開號CN 1251592A (核苷酸類似物組合物)，提供了阿德福韋酯的四種晶型狀態(tài)，并且提供了部分的阿 德福韋酯結晶鹽包括如半硫酸、氫溴酸等無機酸鹽和甲磺酸、乙磺酸等有機酸鹽。專利公開 號CN 1569861A (阿德福韋酯的藥用酸加成鹽及其在藥物上的應用)，提供了門冬氨酸阿德福
韋酯鹽、?；撬岚⒌赂ｍf酯鹽、葡萄糖酸阿德福韋酯鹽、果糖阿德福韋酯鹽。專利公開號CN 1603331A (9- {2-[雙(特戊酰氧基甲氧基)磷酰甲氧基]乙基}腺嘌呤葡萄糖醛酸鹽及其 制備方法)，提供了葡萄糖醛酸阿德福韋酯鹽。專利公開號CN 1528766A (草酸阿地福韋酯及 其晶型和制備方法及用途)，提供了草酸阿地福韋酯鹽。上述幾篇專利均未涉及阿德福韋酯膽 酸類衍生物，也沒有涉及阿德福韋酯膽酸類衍生物具有肝靶向的特點。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了阿德福韋酯膽酸類衍生物及其制備方法和用途。
阿德福韋酯膽酸類衍生物，包括阿德福韋酯膽酸類偶合物和阿德福韋酯膽酸類鹽以及它 們的晶體形式、多晶體形式、非晶體形式、'溶劑合物、立體異構體和互變異構體，本發(fā)明所 述溶劑合物包括阿德福韋酯膽酸類衍生物的含水形式，如含水晶體。阿德福韋酯膽酸類偶合 物是阿德福韋酯以酰胺鍵與膽酸或膽酸衍生物偶合所得的化合物，其結構式特征見式2;阿 德福韋酯膽酸類鹽是阿德福韋酯與膽酸或膽酸衍生物反應所得的鹽，其結構式特征見式3。 式2:
<formula>formula see original document page 5</formula>
(2)
其中C代表膽酸、膽酸衍生物與阿德福韋酯發(fā)生酰胺反應后所剩余的結構或基團,
式3: <formula>formula see original document page 5</formula>
(3)
其中steroid cholic acid代表膽酸、膽酸衍生物，a、 b為l。<formula>formula see original document page 5</formula>本發(fā)明的阿德福韋酯膽酸類衍生物可以為晶體形式、非晶體形式或多晶體形式，優(yōu)選晶體 形式；阿德福韋酯膽酸類衍生物可以為溶劑合物、非溶劑合物、含結晶水、不含結晶水，優(yōu) 選含結晶水或不含結晶水。阿德福韋酯膽酸.類衍生物的立體異構體和互變異構體也在本專利 的保護范圍之內。
本發(fā)明的阿德福韋酯膽酸類偶合物，其結構中阿德福韋酯與膽酸或膽酸衍生物的摩爾比 為l:l。
本發(fā)明的阿德福韋酯膽酸類鹽，其結構中阿德福韋酯與膽酸或膽酸衍生物的摩爾比為1:
lo
本發(fā)明所述阿德福韋酯原料可以為晶體、多晶體、無定形固體、油狀物及上述兩種或多 種原料形式混合使用。
本發(fā)明所述膽酸類，包括膽酸和膽酸衍生物。本發(fā)明膽酸的化學式為3a ，7a ， 12a -三 羥基膽甾垸-24-酸，同時也稱為膽酸、膽烷酸、co]alin 、 cholalic acid等。膽酸衍生物， 包括去氧膽酸、去氫膽酸、鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸、豬去氧膽酸、石膽酸、甘氨膽酸、牛 磺膽酸、甘氨鵝脫氧膽酸、?；蛆Z脫氧膽酸、甘氨去氧膽酸、牛磺i氧膽酸、甘氨豬去氧膽 酸、牛磺豬去氧膽酸、甘氨熊去氧膽酸、?；切苋パ跄懰?、甘氨石膽酸、牛磺石膽酸等所有 含有甾體結構的酸，本發(fā)明所述的甾體結構如式4所示。 式4:
(4)
膽酸及其衍生物以甾體結構作為共同的母核，可以從人或動物的膽汁中提取或人工合成， 屬于含有羧基或其它酸性集團的甾體酸類，包括如式5 、式6、式7、或式8所示的膽酸或
膽酸衍生物結構 式5:<formula>formula see original document page 7</formula>其中R,、 R2,&和R4分別為氫原子或羥基；而X為-0H 、 -NH-(CH2) S03H 、-麗-(CH2) - C02H 、 (其中n為1-10的整數(shù))或各種氨基酸與上述膽酸或膽酸衍生物發(fā)生酰胺反應后的剩余結 構或基團。 式6:200710190834.3
說明書第5/13頁
其中X同式5中的定義相同。
膽酸是膽固醇代謝終產(chǎn)物，是膽汁的主要成分，在消化脂肪和脂溶性維生素的吸收方面 起著重要的作用。肝臟分泌膽酸至膽汁，從膽囊排至腸腔，隨之在回腸末端被重吸收;在肝臟 重新被肝細胞攝取并再次被分泌到膽汁中。這個高效的保存人的膽酸總量的機制被稱作腸肝 循環(huán)。小腸和肝重吸收的高效，加上此系統(tǒng)中膽酸轉運體的高容量，使這個系統(tǒng)對于藥物傳 遞的發(fā)展有很大前景。膽酸轉運體包括位于人體小腸細胞的人小腸細胞鈉依賴性膽酸轉運體 與肝臟細胞膜表面的鈉離子-?；悄懰徂D運多肽，它們能特異性地與膽酸及其一系列衍生物 結合，從而將其吸收進入細胞內部，因此以膽酸或膽酸衍生物為靶向載體能夠提高藥物在肝 中的濃度，同時使身體其他部位的毒性反應最小化。作為內源性的天然配基，膽酸或膽酸衍 生物具有良好的生物兼容性，因而適合于作為肝靶向藥物的載體。阿德福韋酯膽酸類衍生物 是阿德福韋的肝靶向前體藥物，與阿德福韋酯相比口服后能夠提高阿德福韋在肝中的濃度， 更好的抑制乙肝病毒的的復制。
本發(fā)明的阿德福韋酯膽酸類偶合物可由以下方法制備
(1) 采用混合酸酐法活化膽酸或膽酸衍生物中的羧基等酸性基團，將阿德福韋酯與活化 的膽酸或膽酸衍生物以一定摩爾比接觸或加熱來制備，制備過程中，活化的膽酸或膽酸衍生 物與阿德福韋酯的摩爾比為0.01 : 1 100 : 1 ，優(yōu)選為0.5 :1 2 : 1，活化膽酸或膽酸衍生 物的試劑包括氯甲酸乙酯、氯甲酸異丙酯、氯甲酸異丁酯等氯甲酸酯。
(2) 或者采用活潑酯法活化膽酸或膽酸衍生物中的羧基等酸性集團，將阿德福韋酯與活 化的膽酸或膽酸衍生物以一定摩爾比接觸或加熱來制備，制備過程中，活化的膽酸或膽酸衍 生物與阿德福韋酯的摩爾比為0.01 : 1 100:1 ，優(yōu)選為0.5 : 1 2:1，活化的膽酸或膽酸 衍生物包括膽酸或膽酸衍生物的甲酯、乙酯、對硝基苯船酯、五氟苯酯、五氯苯酯、N-羥基 琥珀酰亞胺酯、N-羥基鄰苯二甲酰亞胺酯、l-羥基苯并三氮唑酯等；反應可以加入二環(huán)己基 碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺為添加劑，這樣不僅可以減少副反應，還可以提高產(chǎn)率。
(3)或者采用縮合劑法使阿德福韋酯與膽酸或膽酸衍生物、縮合劑以一定摩爾比接觸或 加熱來制備，制備過程中，膽酸或膽酸衍生物與阿德福韋酯的摩爾比為0.01 : 1 100:1 ， 優(yōu)選為0.5:1 2:1;反應采用二環(huán)己基碳二亞胺或二異丙基碳二亞胺為縮合劑，可以加入 N-羥基琥珀酰亞胺酯、N-羥基鄰苯二甲酰亞胺酯、l-羥基苯并三氮唑酯等作為添加劑，這樣 不僅可以減少副反應，還可以提高產(chǎn)率。
根據(jù)上述的制備方法，用于溶解阿德福韋酯、活化的膽酸或膽酸衍生物、膽酸或膽酸衍 生物、縮合劑的溶劑并無特殊限制，只要有適當?shù)娜芙舛燃纯伞＿m合的溶劑實例包括甲醇、 無水乙醇、含一定量水的乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、二甲基亞砜、N， N —二甲基甲酰胺、N , N —二甲基乙酰胺、乙酸甲酯、乙酸乙酯、醋酸異丙酯、丙酮、甲 基乙基酮、甲基異丁基酮、甲苯、四氫呋喃、1 , 4 一二氧六環(huán)、二甲氧基乙垸、二氯甲烷、 二氯乙烷、三氯甲垸、四氯甲烷、乙醚等。這些溶劑可能單獨使用或兩種或多種溶劑聯(lián)合使 用，優(yōu)選甲醇、無水乙醇、含一定量水的乙醇、N , N —二甲基甲酰胺、N ， N —二甲基乙 酰胺。
根據(jù)上述的制備方法，用于精制阿德福韋酯膽酸類偶合物的溶劑并無特殊限制，只要它 們能夠適當溶解阿德福韋酯膽酸類偶合物即可。適合的溶劑的實例包括甲醇、無水乙醇、含 一定量水的乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、二甲基亞砜、N ， N —二甲 基甲酰胺、N， N —二甲基乙酰胺、乙酸甲酯、乙酸乙酯、醋酸異丙酯、丙酮、甲基乙基酮、 甲基異丁基酮、甲苯、四氫呋喃、1, 4一二氧六環(huán)、二甲氧基乙垸、二氯甲垸、二氯乙烷、 三氯甲垸、四氯甲烷、乙醚等。這些溶劑可能單獨使用或兩種或多種溶劑聯(lián)合使用。優(yōu)選采 用乙醇或乙酸乙醋。所用溶劑可通過常規(guī)的方法去除，如減壓或真空干燥、揮發(fā)、噴霧干燥、 冷凍干燥、冷卻過濾或其組合，以制備固態(tài)晶體形式、非晶體形式和多晶體形式的阿德福韋 酯膽酸類偶合物。優(yōu)選采用減壓或真空干燥.、揮發(fā)和冷卻過濾以制備晶體形式的阿德福韋酯 膽酸類偶合物，減壓或真空干燥溫度為0 8(TC，優(yōu)選溫度為20 60。C。同時，優(yōu)選采用噴 霧干燥和冷凍干燥制備非晶體形式的阿德福韋酯膽酸類偶合物。也可以將阿德福韋酯膽酸類 偶合物粗品溶于阿德福韋酯、膽酸、催化劑、副產(chǎn)物等雜質的不良溶劑中，沉淀除去雜質， 得到精制的阿德福韋酯膽酸類偶合物。
為在溶劑的存在下制備固態(tài)的偶合物，其重結晶方法包括首先，將阿德福韋酯膽酸類 偶合物溶于一種溶劑或混合溶劑中。其后，將獲得的溶液在一定溫度下(一60 60。C)靜置， 使析出沉淀，優(yōu)選的靜置溫度為一20 3(TC;或將適當?shù)某恋砣軇┡c該溶液混合以沉淀出阿 德福韋酯膽酸類偶合物，沉淀時溫度為一60 60。C，優(yōu)選的沉淀溫度為一20 3(TC;過濾沉
淀物，用適當?shù)南礈烊軇┫礈觳⑶腋稍?，洗滌時溫度為一20 60 'C，優(yōu)選的洗滌溫度為一10 3(TC;得到最終的阿德福韋酯膽酸類偶合物。
本方法中的沉淀溶劑或洗滌溶劑并無特殊限制，只要阿德福韋酯膽酸類偶合物在其中的 溶解度較小即可。適合的溶劑的實例包括水、有機溶劑如冷甲醇、二氯甲垸、二氯乙垸、三 氯甲烷、四氯甲烷、乙醚、石油醚等。這些溶劑可能單獨使用或兩種或多種溶劑聯(lián)合使用。
為在溶劑的存在下制備固態(tài)的阿德福韋酯膽酸類偶合物，也可以將制備的阿德福韋酯膽 酸類偶合物粗品用適當?shù)纳V柱進行分離純化，得到精制的阿德福韋酯膽酸類偶合物。
如上制備的阿德福韋酯膽酸類偶合物可為無水物的形式或水合物的形式。如果獲得的阿 德福韋酯膽酸類偶合物為溶劑合物的形式，可以干燥去除分子間的溶劑或通過溶劑置換去除。
為提高阿德福韋酯膽酸類偶合物產(chǎn)率的目的，可通過加熱提高溶液中阿德福韋酯膽酸類 偶合物的濃度?；蛘?，將阿德福韋酯膽酸類偶合物溶于適宜的溶劑中，然后可通過真空干燥 或揮發(fā)去除部分溶劑。同樣，可添加晶種以促進阿德福韋酯膽酸類偶合物的沉淀。
本發(fā)明的阿德福韋酯膽酸類鹽可由以下方法制備。阿德福韋酯膽酸類鹽可通過簡單地將 阿德福韋酯與膽酸或其衍生物以一定摩爾比接觸或加熱來制備，這時，阿德福韋酯優(yōu)選存在 于溶液相。更優(yōu)選地，阿德福韋酯和膽酸或其衍生物都存在于溶液相中。具體而言，可通過
如下方法制備阿德福韋酯膽酸類鹽將阿德福韋酯溶解于適當?shù)娜軇┲?，然后將膽酸或其?生物溶解于該溶劑中；或者將膽酸或其衍生物單獨溶解于適當?shù)娜軇┲校缓笤賹⒌玫降娜?br> 液與事先溶解了的阿德福韋酯的溶液混合，反應溫度在一20 80 i:下進行，優(yōu)選的反應溫度 為0 60 。C。
在阿德福韋酯膽酸類鹽的制備過程中，膽酸或膽酸衍生物與阿德福韋酯的摩爾比為O.Ol : 1 100 : 1 ，優(yōu)選為0.5 : 1 2 : 1。
用于制備阿德福韋酯膽酸類鹽的適合的溶劑并無特殊限制，只要它們能夠溶解阿德福韋 酯即可。該溶劑還可以被用于溶解或混懸膽酸或其衍生物。適合的溶劑的實例包括甲醇、無 水乙醇、含一定量水的乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、二甲基亞砜、N, N —二甲基甲酰胺、N ， N —二甲基乙酰胺、乙酸甲酯、乙酸乙酯、醋酸異丙酯、丙酮、甲 基乙基酮、甲基異丁基酮、甲苯、四氫呋喃、1， 4一二氧六環(huán)、二甲氧基乙烷、二氯甲烷、 二氯乙烷、三氯甲烷、四氯甲垸、乙醚等。這些溶劑可能單獨使用或兩種或多種溶劑聯(lián)合使 用。優(yōu)選采用無水乙醇或95%乙醇。所用溶劑可通過常規(guī)的方法去除，如減壓或真空干燥、 揮發(fā)、噴霧干燥、冷凍干燥、冷卻過濾以及其組合，以制備固態(tài)晶體形式、非晶體形式和多 晶體形式的阿德福韋酯膽酸類鹽。優(yōu)選采用減壓或真空干燥、揮發(fā)和冷卻過濾以制備晶體形 式的阿德福韋酯膽酸類鹽，減壓或真空干燥溫度為0 10(TC，優(yōu)選溫度為20 60。C。同時，
優(yōu)選采用噴霧干燥和冷凍干燥制備非晶體形式的阿德福韋酯膽酸類鹽。也可以將阿德福韋酯 膽酸類鹽粗品溶于阿德福韋酯或膽酸的不良溶劑中，沉淀除去未反應的原料，得到精制的阿 德福韋酯膽酸類鹽。
為在溶劑的存在下制備固態(tài)的鹽，首先，將阿德福韋酯和膽酸或其衍生物溶于一種溶劑 或混合溶劑中。其后，將獲得的溶液在一定溫度下(一60 6(TC)靜置，使析出沉淀，優(yōu)選 的靜置溫度為一20 3(TC;或將適當?shù)某恋砣軇┡c該溶液混合以沉淀出阿德福韋酯膽酸類鹽， 沉淀時溫度為一60 60'C，優(yōu)選的沉淀溫度為一20 30'C;過濾沉淀物，用適當?shù)南礈烊軇?洗滌并且干燥，洗滌時溫度為一20 8(TC，優(yōu)選的洗滌溫度為一10 4(TC;得到最終的阿德 福韋酯膽酸類鹽。
適當?shù)某恋砣軇┗蛳礈烊軇┎o特殊限制，只要阿德福韋酯膽酸類鹽在其中的溶解度較 小即可。適合的溶劑的實例包括水、有機溶劑如二氯甲垸、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯甲烷、 乙醚、石油醚等。這些溶劑可能單獨使用或兩種或多種溶劑聯(lián)合使用。
為在溶劑的存在下制備固態(tài)的鹽，也可以將阿德福韋酯和膽酸或其衍生物溶于一種溶劑 或混合溶劑中，用適當?shù)纳V柱進行分離純化，得到最終的阿德福韋酯膽酸類鹽。還可以將 制備的阿德福韋酯膽酸類鹽粗品用適當?shù)纳V柱進行分離純化，得到精制的阿德福韋酯膽酸
如上制備的阿德福韋酯膽酸類鹽可為無水物的形式或水合物的形式。如果獲得的阿德福 韋酯膽酸類鹽為溶劑合物的形式，可以干燥去除分子間的溶劑或通過溶劑置換去除。
為提高阿德福韋酯膽酸類鹽產(chǎn)率的目的，'可通過加熱提高溶液中阿德福韋酯和膽酸或其衍 生物的濃度?；蛘?，將阿德福韋酯和膽酸或其衍生物溶于適宜的溶劑中，然后可通過真空干 燥或揮發(fā)去除部分溶劑。同樣，可添加晶種以促進阿德福韋酯膽酸類鹽的沉淀。
根據(jù)本發(fā)明的阿德福韋酯膽酸類衍生物可作為活性成分在治療病毒性疾病特別是病毒性 肝炎中應用。本發(fā)明也提供含有阿德福韋酯膽酸類衍生物的藥用組合物，該組合物中含有阿 德福韋酯膽酸類衍生物作為活性成分，以及藥學上可以接受的輔料。本發(fā)明的阿德福韋酯膽 酸類衍生物可以與其它活性成分組合使用。
當本發(fā)明應用于臨床時，可將其配制成包括口服使用的片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、
口服液體劑型；注射用的注射液、注射用粉針劑、脂質體、乳劑、納米粒、復合物；外用的
乳劑、軟膏劑；經(jīng)口腔或舍下給藥的口服片劑。
本發(fā)明的優(yōu)點是將阿德福韋酯與膽酸或膽酸衍生物制備成偶合物或鹽，可以得到口服 具有肝靶向作用的阿德福韋前藥，從而提高肝臟中阿德福韋酯母體藥物阿德福韋的濃度，增 強治療效果。
具體實施例方式
將參照以下實施例對本發(fā)明的構成和操作做出更具體的解釋。但是，這些實施例不應被 認為是對本發(fā)明范圍的限制。
實施例1阿德福韋酯膽酸類偶合物的結構式
式9:
<formula>formula see original document page 12</formula>其中R^ R2、R3和R4分別為氫原子或羥基。
實施例2阿德福韋酯膽酸類鹽的結構式 式10:
其中X為-0H 、 -NH-(CH2)nS03H 、、 -NH-(CH2) - C02H (其中n為1-3的整數(shù))。 實施例3阿德福韋酯膽酸類鹽的結構式 式11:(11)
其中R!、 R2.Rjn R4分別為氫原子或羥基；其中X為-0H、 -NH-(CH2) S03H 、、 -NH-(CH2)n - C02H (其中n為l-3的整數(shù))。
實施例4阿德福韋酯膽酸偶合物的制備
將5.0 g膽酸放入20 mL甲醇中，用HC1 、 H3P04或H2S04作催化劑回流2h ， (TC靜置12 小時，析出沉淀,過濾，用5 mL冷甲醇洗滌沉淀，干燥,得到4.56 g膽酸甲酯；將4.23 g膽酸甲酯 與5.01g油狀的阿德福韋酯完全溶于5mL無水乙醇中，回流O.lh， 一20'C靜置12小時，沉 淀出白色固體，過濾，殘渣用5mL乙醚洗滌，然后將殘留物4(TC真空干燥，得到6. 32g白 色粉末狀阿德福韋酯膽酸偶合物固體。
實施例5阿德福韋酯豬去氧膽酸偶合物的制備
將豬去氧膽酸3.93g與三乙胺1.4mL溶于30mL二甲基甲酰胺中，冷卻至一20。C，再 緩慢加入氯甲酸異丁酯1.4mL，反應5分鐘后，加入5.01g晶體狀的阿德福韋酯與三乙胺1.4 mL溶于20mL 二甲基甲酰胺的溶液，在一20'C攪拌反應30分鐘后，室溫放置2小時。將反 應物過濾以除去其中的三乙胺氯化物，再將濾液減壓蒸發(fā)濃縮得到粗化合物l。將產(chǎn)物加入 氯仿20mL中溶解，過濾棄去不容物，濾液用1%鹽酸溶液洗滌兩次后，將氯仿層減壓蒸發(fā) 得到粗化合物2。粗化合物2用乙醇一乙酸乙酯重結晶兩次得到3. 38g白色粉末狀阿德福韋 酯豬去氧膽酸偶合物固體。
實施例6阿德福韋酯去氧膽酸偶合物的制備
將5. Olg油狀的阿德福韋酯與3.93 g去氧膽酸完全溶于8 mL乙醇中，再加入二環(huán)己基 碳二亞胺(DCC) 2.06g，常溫反應5分鐘后，將反應物過濾以除去其中的二環(huán)己基脲，一20 'C靜置12小時，沉淀出白色固體，過濾，殘渣用5mL乙醚洗滌，然后將殘留物4(TC真空干 燥，得到5. 72g白色粉末狀阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽固體。 實施例7阿德福韋酯膽酸鹽的制備
將5.01g油狀的阿德福韋酯與4.09 g膽酸完全溶于5mL無水乙醇中，4(TC減壓除去溶 劑，然后將殘留物4(TC真空干燥，得到8.90g白色粉末狀阿德福韋酯膽酸鹽固體。實施例8阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽的制備
將5.01g阿德福韋酯晶體與3.93g豬去氧膽酸完全溶于5 mL無水乙醇中，一20。C靜置 12小時，沉淀出白色固體，過濾，殘渣用5mL乙醚洗滌，然后將殘留物4(TC真空干燥，得 到6. 16g白色粉末狀阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽固體。
實施例9阿德福韋酯熊去氧膽酸鹽的制備
將5.01g阿德福韋酯無定形固化物與3.93 g熊去氧膽酸完全溶于5 mL叔丁醇中，冷凍
干燥，得到8.73g白色粉末狀阿德福韋酯熊去氧膽酸鹽固體。
實施例10阿德福韋酯去氧膽酸鹽的制備
將5. Olg油狀的阿德福韋酯與7. 86 g去氧膽酸完全溶于10 mL無水乙醇中，噴霧干燥，
然后用IO mL三氯甲烷攪拌溶解，過濾去除不溶物，減壓除去三氯甲烷，然后將殘留物室溫
真空干燥，得到7. 32g白色粉末狀阿德福韋酯去氧膽酸鹽固體。
實施例11阿德福韋酯鵝去氧膽酸鹽的制備
將10. 02 g油狀的阿德福韋酯與3. 93 g去氧膽酸完全溶于10 mL無水乙醇中，用硅膠柱
進行分離純化，得到7. 19g白色粉末狀阿德福韋酯鵝去氧膽酸鹽固體。
實施例12阿德福韋酯去氫膽酸鹽的制備
將5.01g油狀的阿德福韋酯與4.02 g去氫膽酸完全溶于5 mL無水乙醇中，6(TC減壓除
去溶劑，然后將殘留物6(TC真空干燥，得到8.86g阿德福韋酯去氫膽酸鹽粗品，用硅膠柱進
行分離純化，得到7. 53g白色粉末狀阿德福韋酯去氫膽酸鹽固體。
實施例13阿德福韋酯?；悄懰猁}的制備'
將5.01g油狀的阿德福韋酯與5.22 g?；悄懰嵬耆苡? mL無水乙醇中，加入50 mL
乙醚，沉淀出白色固體，過濾，殘渣用5raL乙醚洗滌，然后將殘留物3(TC真空干燥，得到
8. 56g白色粉末狀阿德福韋酯?；悄懰猁}固體。
實施例14阿德福韋酯石膽酸鹽的制備
將5.01g油狀的阿德福韋酯與3.77 g石膽酸完全溶于5 mL無水乙醇中，加入50 mL石
油醚，沉淀出白色固體，過濾，殘渣用5mL石油醚洗滌，然后將殘留物20。C真空干燥，得
到7. 67g白色粉末狀阿德福韋酯石膽酸鹽固體。
實施例15阿德福韋酯甘氨膽酸鹽的制備
將5.01g油狀的阿德福韋酯與4.66 g甘氨膽酸完全溶于5 mL無水乙醇中，添加適量阿
德福韋酯甘氨膽酸鹽晶種，一4(TC靜置12小時，沉淀出白色固體，過濾，殘渣用5mL石油
醚洗滌，然后將殘留物5(TC真空干燥，得到7.43g白色粉末狀阿德福韋酯甘氨膽酸鹽固體。
實施例16阿德福韋酯豬去氧膽酸偶合物藥物組合物的制備
取阿德福韋酯豬去氧膽酸偶合物17. 48 g,與200 g乳糖、50 g微晶纖維素、5 g羧甲 基淀粉鈉在制粒機中充分混合均勻，用乙醇潤濕制成軟材，制粒干燥后加入2.8g硬脂酸鎂， 混勻，壓制成1000片，即得阿德福韋酯豬孝氧膽酸偶合物片，每片含17.48mg阿德福韋酯 豬去氧膽酸偶合物(相當于阿德福韋酯約IO mg/片)。 實施例17阿德福韋酯去氧膽酸偶合物藥物組合物的制備
取阿德福韋酯去氧膽酸偶合物17.48 g，與200 g乳糖、50 g微晶纖維素、5 g羧甲基淀 粉鈉在制粒機中充分混合均勻，用乙醇潤濕制成軟材，制粒干燥后加入2.8 g硬脂酸鎂，混 勻，壓制成1000片，包腸溶衣，即得阿德福韋酯去氧膽酸偶合物腸溶片，每片含17.48mg阿 德福韋酯去氧膽酸偶合物(相當于阿德福韋酯約IO mg/片)。 實施例18阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽藥物組合物的制備
取阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽17. 84 g,與200 g乳糖、50 g微晶纖維素、5 g羧甲基淀 粉鈉在制粒機中充分混合均勻，用乙醇潤濕制成軟材，制粒干燥后加入2. 8 g硬脂酸鎂，混 勻，壓制成1000片，即得阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽片，每片含17.84mg阿德福韋酯豬去氧 膽酸鹽(相當于阿德福韋酯約10 mg/片)。 實施例19阿德福韋酯去氧膽酸鹽藥物組合物的制備
取阿德福韋酯去氧膽酸鹽17.84 g，與200 g乳糖、50 g微晶纖維素、5 g羧甲基淀粉鈉 在制粒機中充分混合均勻，用乙醇潤濕制成軟材，制粒干燥后加入2.8 g硬脂酸鎂，混勻， 壓制成1000片，包腸溶衣，即得阿德福韋酯去氧膽酸鹽腸溶片，每片含17.84 mg阿德福韋 酯去氧膽酸鹽(相當于阿德福韋酯約IO mg/片)。
實施例20阿德福韋酯、阿德福韋酯豬去氧膽酸偶合物、阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽小鼠肝、 腎組織分布的研究
試驗動物昆明種小鼠，體重18 22g'，雌雄各半，由中國藥科大學動物中心提供。合 格證號為SCXK (蘇)2006-2007 。
試驗藥物阿德福韋酯(江蘇省正大天晴藥業(yè)有限公司提供)；阿德福韋酯豬去氧膽酸偶 合物、阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽(中國藥科大學藥劑教研室提供)。
試驗方法選用63只昆明種小鼠，隨機分成3組，禁食12h ，按45mg kg -1阿德福韋
酯、78.6mg*kg -1阿德福韋酯豬去氧膽酸偶合物(78.6mg阿德福韋酯豬去氧膽酸偶合物相
當于45mg阿德福韋酯)、80mg kg _1阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽(80mg阿德福韋酯豬去氧膽
酸鹽相當于45mg阿德福韋酯)分別灌胃給藥，于給藥后0.5、 1、 2、 4、 8、 12、 24h分別放
血活殺一組動物，取肝和腎，組織用生理鹽水沖凈，用分析天平稱濕重,用蒸餾水按l : 3制
成勻漿，加入10X三氯乙酸lmL，渦旋，高速離心3 min ，取上清液,用經(jīng)可靠性確證的高效
液相方法分析組織中阿德福韋酯母體藥物阿德福韋的濃度。
試驗結果 阿德福韋酯組
肝C隨4. 5 ug/g、 T腿2.1 h、 AUC0—2456. 5 (ug/g) h
腎Cmax: 30.6 y g/g、 Tmax: 3.0 h、 AUC。—24402. 0 ( y g/g) h
阿德福韋酯豬去氧膽酸偶合物組
肝C M:8.8yg/g、 TmM:5.2 h、 AUC。-24154. 9 (Pg/g) h
腎Cmax:25. 6 u g/g、 Tmax:4.8 h、 AUC。—24369. 3 (ug/g) h
阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽組
肝C隨8.3ug/g、 Tmax:5.0 h、 AUC0—24129, 6 (ug/g) h
腎Cmax:24. 4 y g/g、 Tmax:4. 9 h、 AUC?！?4363. 6 (yg/g) h
結果詳見附圖

圖l為阿德福韋酯、阿德福韋酯豬去氧膽酸偶合物、阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽小鼠肝組織
中阿德福韋分布的研究結果
圖2為阿德福韋酯、阿德福韋酯豬去氧膽酸偶合物、阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽小鼠腎組織 中阿德福韋分布的研究結果
試驗結論在相同的給藥劑量下，通過肝、腎組織中的阿德福韋C,、 Traax、 AUC?！?4的比較，阿
德福韋酯豬去氧膽酸偶合物、阿德福韋酯豬去氧膽酸鹽小鼠灌胃給藥具有明顯的肝靶向特征。 雖然為了舉例說明的目的而公開了本發(fā)明優(yōu)選的實施方案，但本領域技術人員將理解，
在不脫離本發(fā)明如所附權利要求所公開的范圍和精神的前提下，可對本發(fā)明作出不同的修改、 添加和替換。
權利要求
1.阿德福韋酯膽酸類衍生物，包括阿德福韋酯膽酸類偶合物和阿德福韋酯膽酸類鹽以及它們的晶體形式、多晶體形式、非晶體形式、溶劑合物、立體異構體和互變異構體；阿德福韋酯膽酸類偶合物是阿德福韋酯以酰胺鍵與膽酸或膽酸衍生物偶合所得的化合物，其結構式特征見式1；阿德福韋酯膽酸類鹽是阿德福韋酯與膽酸或膽酸衍生物反應所得的鹽，其結構式特征見式2。式1id="icf0001" file="S2007101908343C00011.gif" wi="73" he="65" top="5" left = "5" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中C代表膽酸、膽酸衍生物與阿德福韋酯發(fā)生酰胺反應后所剩余的結構或基團。式2id="icf0002" file="S2007101908343C00012.gif" wi="136" he="48" top="5" left = "5" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中steroid cholic acid代表膽酸、膽酸衍生物，a、b為1。
2. 如權利要求1所述的阿德福韋酯膽酸類衍生物，優(yōu)選阿德福韋酯膽酸類偶合物的晶體形 式。 '
3. 如權利要求1所述的阿德福韋酯膽酸類衍生物，優(yōu)選阿德福韋酯膽酸類鹽的晶體形式。
4. 如權利要求1所述的阿德福韋酯膽酸類衍生物，其中所述膽酸類，即膽酸和膽酸衍生物， 包括膽酸、去氧膽酸、去氫膽酸、鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸、豬去氧膽酸、石膽酸、甘氮膽 酸、?；悄懰帷⒏拾冰Z脫氧膽酸、牛磺鵝脫氧膽酸、甘氨去氧膽酸、?；侨パ跄懰?、甘氨豬 去氧膽酸、?；秦i去氧膽酸、甘氨熊去氧嗎酸、牛磺熊去氧膽酸、甘氨石膽酸、?；鞘懰岬人泻戌摅w結構的酸，本發(fā)明所述的甾體結構如式3所示。式3:(3)
5. 如權利要求1所述的阿德福韋酯膽酸類偶合物的制備方法，其特征在于包括以下主要步驟采用混合酸酐法或活潑酯法活化膽酸或膽酸衍生物中的羧基等酸性集團，將阿德福韋酯與活化的膽酸或膽酸衍生物以一定摩爾比接觸或加熱來制備；或者采用縮合劑法使阿德福韋 酯與膽酸或膽酸衍生物、縮合劑以一定摩爾比接觸或加熱來制備。
6. 如權利要求1所述的阿德福韋酯膽酸類鹽的制備方法，其特征在于包括以下主要步驟將阿德福韋酯與膽酸或膽酸衍生物以一定摩爾比接觸或加熱來制備。
7. 如權利要求1所述的阿德福韋酯膽酸類衍生物，其作為抗病毒藥物的用途。
8. 如權利要求1所述的阿德福韋酯膽酸類衍生物，其作為抗肝炎病毒藥物的用途。
9. 一種藥物組合物，含有權利要求l所述的阿德福韋酯膽酸類衍生物作為活性成分。
10. 根據(jù)權利要求9所述的組合物，其特征在于包括口服使用的片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸 劑、口服液體劑型；注射用的注射液、注射用粉針劑、脂質體、乳劑、納米粒、復合物；外 用的乳劑、軟膏劑；經(jīng)口腔或舍下給藥的口服片劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了阿德福韋酯膽酸類衍生物，還涉及它們的制備方法和在藥物方面的應用。阿德福韋酯膽酸類衍生物是阿德福韋的肝靶向前體藥物，與阿德福韋酯相比口服后能夠提高阿德福韋在肝中的濃度，可作為抗病毒特別是抗肝炎病毒治療的優(yōu)選藥物。
文檔編號C07F9/00GK101182331SQ20071019083
公開日2008年5月21日 申請日期2007年11月30日 優(yōu)先權日2007年11月30日
發(fā)明者呂慧俠, 吳益平, 周建平, 磊 張, 輝 張, 張振海, 李悅恒, 程玉釧, 俊 謝, 偉 郭 申請人:中國藥科大學