專利名稱：氘化的丙型肝炎蛋白酶抑制劑的制作方法
氖化的丙型肝炎蛋白酶抑制劑 交叉參照
本申請要求2006年3月16日提交的美國臨時申請序列第 60/782,778號，2006年3月16日提交的美國臨時申請序列第60/782,976 號和2006年9月15日提交的美國臨時申請序列第60/844,771號的權益。
背景技術：
丙型肝炎病毒("HCV，，)感染是一個亟需解決的人類醫(yī)學問題。HCV ^皮公認為是大多數(shù)非甲非乙型肝炎的原因，據(jù)估計全球人口的血清流行 率為3 % [A. Alberti等人，"Natural History of Hepatitis C, ，， J. Hepatology, 31., (Suppl. 1),第17-24頁(1999)]。 僅在美國，近四百萬 人可能已一皮感染[MJ. Alter, "The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States, Gastroenterol. Clin. North Am., 23,第437-455頁(1994); M J. Alter "Hepatitis C Virus Infection in the United States," J. Hepatology, 31.， (Suppl. 1)，第88-91頁(1999)〗。
當首次暴露于HCV,僅有約20%的被感染個體發(fā)展為急性臨床肝 炎，而其他人的感染似乎自發(fā)地消散。不過，在幾乎70%的情形中， 病毒建立起慢性感染，持續(xù)數(shù)十年[S. Iwarson,"The Natural Course of Chronic Hepatitis,"FEMS Microbiology Reviews, 14,第201-204頁(1994); D. Lavanchy，"Global Surveillance and Control of Hepatitis C," J. Viral Hepatitis, 6,第35-47頁(1999)]。這通常導致復發(fā)性和進行性惡化性肝 臟炎癥，經(jīng)常引起更為嚴重的疾病狀態(tài)，例如肝硬4t和肝細^9包癌[M.C. Kew, "Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma" , FEMS Microbiology Reviews, 14，第211-220頁(1994); I.Saito等人，"Hepatitis C Vims Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma," Proc. Natl. Acad. Sd. USA, 87,第6547-6549頁(1990)]。 不幸的是，沒有普遍有效的治療可以削弱慢性HCV的進展。
HCV基因組編碼3010-3033個氨基酸的多蛋白[Q丄.Choo等， "Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Vims." Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, pp. 2451-2455 (1991); N. Kato等，"Molecular
13Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A, Non-B Hepatitis," Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 9524-9528 (1990); A. Takamizawa等，"Structure and Organization of the
1 lOSl 1 13(1991)]。 HCV非結構性(NS)蛋白被假定為病毒復制提供必 需的催化手段。NS蛋白起源于多蛋白的蛋白水解性裂解[R. Bartenschlager等,"Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Vims Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions," J. Virol., 67, pp. 3835-3844 (1993); A. Grakoui等， "Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites," J. Virol., 67, pp. 2832-2843 (1993); A. Grakoui等，"Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products," J. Virol.: 67, pp. 1385- 1395 (1993); L. Tomei等,"NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein", J. Virol., 67, pp. 4017-4026
(1993) ]。
HCVNS蛋白3(NS3)含有絲氨酸蛋白酶活性，這有助于加工大多數(shù) 病毒酶，因而祐j見為病毒復制和感染性所必需的。已知黃熱病病毒NS3 蛋白酶的突變降低病毒的感染性[Chambers, TJ等人，"Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Vims is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein", Proc. Natl. Acad. Sd. USA, 87, pp. 8898陽8卯2 (1990)〗。已經(jīng) 顯示NS3的前181個氨基酸(病毒多蛋白的第1027-1207個殘基)含有加 工HCV多蛋白的全部四個下游位點的NS3絲氨酸蛋白酶結構域[C. Lin 等人,"Hepatitis C Vims NS3 Serine Proteinase: Trans- Cleavage Requirements and Processing Kinetics", J. Virol" 68, pp. 8147-8157
(1994) ]。
HCVNS3絲氨酸蛋白酶及其有關輔因子NS4A有助于加工全部病 毒酶，因而被視為病毒復制所必需的。這種加工似乎類似于由人免疫缺 陷病毒天冬氨酰蛋白酶所進行的加工，該蛋白酶也參與病毒酶加工。HIV 蛋白酶抑制病毒蛋白的加工，其是有力的人用抗病毒劑，表明干擾這 一階段的病毒生命周期可以獲得治療活性劑。所以，HCVNS3絲氨酸蛋白酶是一個有吸引力的藥物發(fā)現(xiàn)目標。
目前還沒有任何令人滿意的抗-HCV劑或治療。直到最近，唯一既 定的HCV疾病療法是干擾素治療。不過，干擾素具有顯著的副作用[M. A. Wlaker等,"Hepatitis C Vims: An Overview of Current Approaches and Progress," DDT, 4, pp. 518-29 (1999); D. Moradpour等,"Current and Evolving Therapies for Hepatitis C," Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 11, pp. 1 199-1202 (1999); H. L. A. Janssen等,"Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis," J. Hepatol., 21, pp. 241-243 (1994); P.F. Renault等，"Side Effects of Alpha Interferon," Seminars in Liver Disease, 9, pp. 273-277. (1989)],僅在一部分(約25 %) 病例中i秀導長期的緩解作用[O. Weiland, "Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection", FEMS Microbiol. Rev., 14, pp. 279-288 (1994)]。最近關于干擾素的PEG化形式(PEG-INTRON⑧和PEGASYS㊣) 與病毒唑和PEG化共軛素(REBETROL⑧)的聯(lián)合治療的介紹，僅僅在緩 解率方面產(chǎn)生少量的改進、并且在副作用方面僅僅產(chǎn)生部分降低。而且， 有效抗-HCV疫苗的前景仍然是不確定的。
因而，存在對更有效的抗-HCV療法的需求。這類抑制劑作為蛋白 酶抑制劑將具有治療潛力，尤其作為絲氨酸蛋白酶抑制劑，更尤其作為 HCV NS 3蛋白酶抑制劑。具體而言，這類化合物可以用作抗病毒劑， 特別是用作抗-HCV劑。
最近發(fā)現(xiàn)在化合物中引入氘將會由于氘的同位素效應而降低差向 異構化速率，由此相對于其未氘化的類似物提高活性異構體的體內濃 度。
發(fā)明概述
本發(fā)明涉及氘化的式(I)的化合物
\R5
15及其藥學可接受的鹽、前藥以及溶劑化合物。在(I)中D代表氘原子。
涉及式(I)時，
D代表氘原子；
W是R21Z^^(,其中^^^〈是任選取代的單環(huán)氮雜 雜環(huán)基或任選取代的多環(huán)氮雜雜環(huán)基，或任選取代的多環(huán)氮雜雜環(huán)烯 基，其中不飽和是在遠離帶有 r21部分的環(huán)并與 -C(0)-N(R2)-CDR3-C(0)-C(0)-NR4R5部分連接的環(huán)中；
r21是Q3-W3-Q2-W2-q、其中\(zhòng)￥2和W3各自獨立地是鍵，-co-, -cs-, -c(0)n(q4)-, -c02-，畫o-, -n(q4)-c(0)-n(q4)-， -n(q4)-c(s)-n(q4)-, —oc(0)nq4—, —s—， -so—, -s02—,國n(q4)—, -n(q4)s02-， —n(04)so2n(04)—， 以及當wz和WM壬何一個為末端基團時，其為氫；
(^,(^和(^各自獨立地是鍵，任選取代的脂族基，任選取代的雜脂 族基，任選取代的環(huán)脂族基，任選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任 選取代的芳烷基，或任選取代的雜芳烷基；或當Q3, Q 或QM壬何一個 為末端基團時，其為氫，條件是當w3和w"都存在時(^不是鍵；和
R氣R 和I^各自獨立地是H或Cw烷基；和
RS是H,烷基，環(huán)烷基，任選被l-4個烷基取代的芳基，烷基芳基、 芳基，任選被1或2個烷基取代的氨基；和
r21是q3-w3-q2-w、q、其中w2和w3各自獨立地是鍵,-co-, -cs-, -c(0)n(q4)-， -c02-， -o-, -n(q4)-c(0)-n(q4),-n(q4)-c(s)-n(q4)-, 隱oc(0)NQ4誦，-s-, -so-, -s02-， -n(q4)-, -n(q4)sor, -n(q4)s02n(q4)-^。當 w2和w3任何一個為末端基團時，其為氫；(^,(^和QS各自獨立地是鍵， 任選取代的脂族基，任選取代的雜脂族基，任選取代的環(huán)脂族基，任選 取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳 烷基；或當(^,Q 或QW壬何一個為末端基團時,其為氬，條件是當w3和 \￥2都存在時(52不是鍵。<formula>formula see original document page 17</formula>
在一些實施方案中，W是 R9 O
<formula>formula see original document page 17</formula>
RS和RS各自獨立地是 鍵；或
任選取代的(l,l-或1,2-)環(huán)亞烷基；或 任選取代的(l,l-或1,2-)雜環(huán)亞烷基(heterocyclylene );或 亞曱基或亞乙基，可被一個選自由以下基團組成的組的取代基取 代，所述取代基為任選取代的脂族基團，任選取代的環(huán)狀基團以及任選 取代的芳族基團，其中亞曱基或亞乙基進一步任選被脂族基團取代基取 代；
R7, R9和R11各自獨立地是氪或任選取代的脂肪族基團； R1G是任選取代的脂族基團，任選取代的環(huán)狀基團或任選取代的芳 族基團；
L是畫C(O)-, -OC(O)-, -NRHC(0)隱，鄰)2國，-NRHS(0)2-，或鍵； n是O或1。
在一些實施方案中，n是l。
在一些實施方案中，116是被一個選自由以下基團組成的組的取代基 取代的亞甲基，所述取代基為任選取代的脂族基團，任選取代的環(huán)狀基 團，任選取代的芳族基團。
在一些實施方案中，RS是被異丁基取代的亞甲基。
在一些實施方案中，R"是氫。
在一些實施方案中，R8是被一個選自由以下基團組成的組的取代基 取代的亞曱基，所述取代基選自任選取代的脂族基團，任選取代的環(huán)狀 基團，任選取代的芳族基團。在一些另外的實施方案中，RS是被任選取 代的環(huán)狀基團取代的亞曱基。還是在一些另外的實施方案中，RS是被環(huán) 己基取代的亞甲基。
在一些實施方案中，W是氫。
在一些實施方案中，L是-CO-。在一些實施方案中，R^是任選被取代的芳族基團。
在一些實施方案中，R"選自以下基團
在一些實施方案中，R"是任選取代的吡嗪基(例如2-吡嗪基)。
在一些實施方案中，、^-^^是取代的單環(huán)氮雜雜環(huán)基。
在一些實施方案中，氣^^々是3-碳原子被雜芳氧基取代的吡 咯烷基，其中雜芳基進一步任選被l-4個卣素基團取代。在一些實施方案中，^
在一些實施方案中，、
是任選取代的多環(huán)氮雜雜環(huán)基c
在一些實施方案中，
。在一些實施方案中，
是
或
，
在一些實施方案中，W是氫，W和RS各自獨立地是氫或環(huán)丙基。 在另一個實施方案中，R"是丙基。在另一個實施方案中，n是0。在另 一個實施方案中，L是-NR"C(0)-, R"是氫。在另一個實施方案中，R10 是任選取代的脂族基團。在另一個實施方案中，R^是叔丁基。在另一
<formula>formula see original document page 19</formula>
個實施方案中，該化合物是
<formula>formula see original document page 19</formula>或
在一些實施方案中，W是 R
其中A是-(CHX、-; B是-(CHXV; a是0至3;
b是0至3，條件是a + b是2或3;
X^口 乂2各自獨立選自氫，任選取代的d-4脂族基，任選取代的芳
基；
y4口 ys各自獨立地是氫，任選取代的脂族基，任選取代的芳基， 氨基或-oq4;其中q"各自獨立地是氳或任選取代的脂族基；
R22是任選取代的脂族基，任選取代的環(huán)脂族基，任選取代的雜環(huán) 脂族基，任選取代的芳基，或任選取代的雜芳基。在一些實施方案中， R21是任選取代的烷基羰基。
20乂 A部分包括其全部立體特異性的對映異構體，例如
(當A和B都是CH2時，yi和y2都是H)。
在一些實施方案中，R"是氨基烷基羰基，卣代烷基羰基，芳基烷
基羰基，芳基烷基羰基，脂環(huán)族烷基羰基，或雜脂環(huán)族烷基羰基，其各
自任選被l-3個取代基取代。在一些實施方案中，R"是雜環(huán)烷基-氧基 羰基氨基-烷基羰基，雜芳基-羰基氨基-烷基-羰基氨基-烷基-羰基，雙環(huán) 芳基-磺酰氨基-烷基羰基，芳基-烷氧基-羰基氨基-烷基-羰基，烷基-羰基 氨基-烷基-羰基，脂族基-氧基羰基氨基-烷基-羰基，脂環(huán)族基-烷基-氨基 羰基氨基-烷基-羰基，雜芳基-羰基氨基-烷基-羰基氨基-烷基-羰基，烷基 -氨基羰基氨基-烷基-羰基，或雙環(huán)芳基-氨基羰基氨基-烷基-羰基，各自 任選被1-3個取代基取代。在一些實施方案中，R"是任選取代的脂族基， 任選取代的雜脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的雜脂環(huán)族基，任 選取代的芳基或任選取代的雜芳基。在一些實施方案中，R"是任選取 代的苯基，任選取代的萘基，任選取代的蒽基，任選取代的萘或任選取 代的蒽。在一些實施方案中，X\X2, 丫]和Y"分別是氫，a和b分別是 1。
在一些實施方案中，R"是任選取代的烷基羰基。
在一些實施方案中，R"是氨基烷基羰基，卣代烷基羰基，芳烷基 羰基，芳烷基羰基，脂環(huán)烷基羰基或雜脂環(huán)烷基羰基，其各自任選被l-3 個取代基取代。
在一些實施方案中，R"是雜環(huán)烷基-氧基羰基氨基-烷基羰基，雜芳 基-羰基氨基-烷基-羰基氨基-烷基-羰基，雙環(huán)芳基-磺酰氨基-烷基羰基， 芳基-烷氧基-羰基氨基-烷基-羰基，烷基-羰基氨基-烷基-羰基，脂族基-族基-烷基-氨基羰基氨基-烷基-羰基，脂 環(huán)族基-烷基-羰基氨基-烷基-羰基，雜芳基-羰基氨基-烷基-羰基氨基-烷 基-羰基，烷基-氨基羰基氨基-烷基-羰基，或雙環(huán)芳基-氨基羰基氨基-烷 基-羰基，各自任選被1-3個取代基取代。
在一些實施方案中，R22是任選取代的脂族基，任選取代的雜脂族 基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的雜脂環(huán)族基，任選取代的芳基或 任選取代的雜芳基。
在一些實施方案中，R"是任選取代的苯基，任選取代的萘基，任 選取代的蒽基，任選取代的萘或任選取代的蒽。
在一些實施方案中，X^X2, Yi和Y 分別是氫，a和b分別是l。 在一些實施方案中，R22是任選取代的脂族基，任選取代的雜脂族
基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的雜脂環(huán)族基，任選取代的芳基或
任選取代的雜芳基。
在一個實施方案中，化合物是 / 。
本發(fā)明的氘化化合物的差向異構化比其未氘化的對應物要慢。如以 下所示，氘化的化合物1非常緩慢的轉化為未氘化的中間體，然后轉化 為差向異構體2和3。然后差向異構體2和3保持平衡，這種平衡進一 步延緩了氘化化合物1的差向異構化。
22H N
》
》
由于其差向異構化緩慢，本發(fā)明的氘化化合物相對于其未氘化的類 似物能夠提高活性異構體的體內濃度。
在一些實施方案中，本發(fā)明化合物中氘富集量為至少50%。在一些 實施方案中，本發(fā)明化合物中氘富集量為至少80 % 。在一些實施方案中， 本發(fā)明化合物中氘富集量為至少90%。在一些實施方案中，本發(fā)明化合 物中氘富集量為至少99%。
本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包括藥學上可接受的栽體和式(I) 的化合物或以上所述任一 實施方案的化合物。
本發(fā)明還涉及增加藥劑活性異構體體內濃度的方法，包括給需要的 患者施用足以產(chǎn)生藥物作用的量的該藥劑的氘化異構體。
本發(fā)明還涉及增加化合物生物利用度的方法，包括用氘原子替換化 合物中與立體碳原子鍵合的氬原子。在一個實施方案中，氘化的化合物 為式(I)或以上所述任一實施方案的化合物。
本發(fā)明還涉及抑制HCV蛋白酶的方法，包括用氘化的式(I)或以 上所任一述實施方案的化合物接觸HCV蛋白酶。
本發(fā)明還涉及治療患有HCV感染或HCV蛋白酶介導的病癥的患者 的方法，包括給患者施用藥學有效量的氘化的式(I)或以上所述任一實 施方案的化合物。
制備光學富集的式l化合物的方法也在本發(fā)明的范圍內，其中oc和p羧基的碳原子為立構中心；
Ri獨立地是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取 代的芳脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基； R、是氘；
R'2是-NHR2或-OE;
R2是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的芳 脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基；和 E是d-6烷基或苯曱基； 該方法包括步驟
a) 形成式l化合物的鹽，和
b) 結晶所述鹽得到對映體過量55 %以上的化合物。
在一些實施方案中，R^是d—6烷基，R'2是-NHR2，其中R2是d-6 烷基或d—6環(huán)烷基。在一些實施方案中，Ri是丙基并且R2是環(huán)丙基。
在一些實施方案中，該方法進一步包括用胺化試劑將式ii化合物
<formula>formula see original document page 24</formula>
胺化以得到式iii的化合物
<formula>formula see original document page 24</formula>
還是在一些實施方案中，胺化試劑是疊氮化物鹽，通過氫化使中間 體疊氮化合物還原。
在一些實施方案中，該方法進一步包括用氧化試劑氧化不飽和的式 i化合物，其中R'2是-NHR2或-OE,其中E是d—5烷基或任選取代的苯 甲基，
<formula>formula see original document page 24</formula>以得到式ii的化合物。
在一些進一步的實施方案中，氧化試劑包括叔丁基過氧化氫。在一 些進一步的實施方案中，氧化試劑進一步包括手性試劑。在一些進一步 的實施方案中，氧化試劑是異丙氧化釤(III),三苯胂化氧，S-(-)l,l'-雙-2-萘酚和4A分子篩的混合物。在一些進一步的實施方案中，氧化試 劑包括在三氟乙酸酐存在的情況下的脲過氧化氫。
在一些實施方案中，該方法進一步包括水解式ii的化合物以得到酸， 然后將酸轉化為式ii的酰胺化合物，其中R'2是-NHR2 。
制備式1化合物的方法也在本發(fā)明的范圍內，
其中
Ri是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的芳 脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基； R'i是氘；
R2是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的芳 脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基；和 式I化合物對映體過量55 %以上。 該方法包括步驟 a)氧化不飽和的式i的化合物
以得到式ii的化合物；
25b)式ii的化合物以胺化試劑反應
得到式iii的化合物；
c) 形成式iii化合物與光學活性有機酸的鹽；
d) 結晶所述的鹽，得到對映體過量為55%以上的化合物。 在一些實施方案中，式1的化合物是(2S,3S)-3-氨基-3-氘-N-環(huán)丙基
-2-羥基己酰胺。在一些實施方案中，有才幾酸是L-酒石酸或脫氧膽酸。 制備光學富集的式1化合物的方法也在本發(fā)明的范圍內，
#巾
a和P羧基的碳原子為立構中心；
Ri獨立地是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取 代的芳脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基； R'i是氘，氘富集量為至少50%; R'2是-NHR2或-OE;
R2是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的芳 脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基；和 E是d-6烷基或苯甲基。
該方法包括步驟a)形成式I化合物的鹽，和b)結晶所述鹽得到對 映體過量55%以上的化合物。
在一些實施方案中，R!是C!-6烷基，R'2是-NHR2，其中R2是d-6烷基或d-6環(huán)烷基。在一些實施方案中，R4是丙基并且R2是環(huán)丙基。 在一些實施方案中，該方法進一步包括用胺化試劑將式ii化合物
r、-xSar.2
ii
胺化以得到式iii的化合物的步驟
iii
在一些實施方案中，胺化試劑是疊氮化物鹽，通過氫化使中間體疊 氮化合物還原。
在一些實施方案中，該方法進一步包括用氧化試劑氧化不飽和的式
i化合物，其中R'2是-NHR2或-OE,其中E是Cw烷基或任選取代的苯 曱基，
以得到式ii的化合物。
ii
在一些進一步的實施方案中，氧化試劑包括，僅丁基過氧化氫。在一 些進一步的實施方案中，氧化試劑進一步包括手性試劑。在一些進一步 的實施方案中，氧化試劑是異丙氧化釤(III),三苯胂化氧，S-(-)l,l '-雙_2-萘酚和4 A分子篩的混合物。在一些進一步的實施方案中，氧化試 劑包括在三氟乙酸酐存在的情況下的脲過氧化氫。
在一些實施方案中，R'2是-OE。在一些實施方案中，R'2是-NHR2。
27在一些實施方案中，該方法進一步包括水解式il的化合物以得到酸,
然后將酸轉化為式ii的酰胺化合物，其中R 2是-NHR2 。
在一些實施方案中，該方法進一步包括氧化式iv的化合物
以得到式ii的化合物。在一些情況中，氧化通過使用二氧化錳進行。 在一些實施方案中，該方法進一步包括還原式V的化合物
以得到式iv的化合物。在一些情況中，用Red-A產(chǎn)還原化合物，然 后用氧化氘淬滅。如本領域已知，"Red-Al "指化合物 [(CH3OCH2OCH2)2AlH2]Na,其可商購獲得，通常為曱苯溶液(例如，70 %W/W)。對于Red-A產(chǎn)的更多信息，可參見例如Bates R.W等人， Tetrahedron, 1990, 46, 4063。
制備式I化合物的方法也在本發(fā)明的范圍內，
其中
R4是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的芳 脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基； Ri是氖；
R2是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的芳 脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基；和 式I化合物對映體過量為55%以上。該方法包括步驟
a) 氧化不飽和的式I的化合物
Rt O
i
以得到式ii的化合物；
ii
b) 將式ii的化合物以胺化試劑反應
iii
以得到式iii的化合物；
c) 形成式iii化合物與光學活性有機酸的鹽；
d) 結晶所述的鹽，得到對映體過量為55%以上的化合物。 在一些實施方案中，式I的化合物是(2S,3S)-3-氨基-3-氘-N-環(huán)丙基
-2-羥基己酰胺。在一些實施方案中，有機酸是L-酒石酸或脫氧膽酸。
發(fā)明詳述
I.定義
A.術語
如本文所用，術語"脂族基"包括烷基、烯基和炔基。 如本文所用，術語"烷基"基團指含有1-8個(例如1-6或1-4個) 碳原子的飽和脂肪族烴基。烷基基團可以是直鏈或支鏈的。烷基基團的 實例包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、 叔丁基、正戊基、正己基以及2-乙基己基。烷基基團可任選被一個或多 個取代基取代，所述取代基為例如烷氧基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、氨基、硝基、羧基、氰基、
卣代、羥基、硫代、巰基、烷基硫烷基(alkylsulfanyl)、烷基亞磺?；?(alkylsulfinyl)、烷基磺酰基、氨基羰基、烷基羰基氨基、環(huán)烷基羰基 氨基、環(huán)烷基烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜環(huán)烷 基-羰基氨基、雜環(huán)烷基-烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基或雜芳烷基羰 基氨基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺、烷氧基糖基或烷基羰基氧基。
如本文所用，"烯基"基團指含有2-8個(例如，2-6或2-4個)碳 原子和至少一個雙鍵的脂族碳基團。與烷基基團相似，烯基基團可以為 直鏈或支鏈。烯基基團的實例包括但不限于烯丙基、異戊二烯基、2-丁 烯基和2-己烯基。烯基基團可任選被一個或多個取代基取代，所述取代 基為例如烷氧基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧 基、雜芳烷氧基、氨基、硝基、羧基、氰基、卣代、羥基、硫代、巰基、 烷基硫烷基、烷基亞磺?；⑼榛酋；?、氨基羰基、烷基羰基氨基、 環(huán)烷基羰基氨基、環(huán)烷基-烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨 基、雜環(huán)烷基-羰基氨基、雜環(huán)烷基-烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、 雜芳烷基羰基氨基、脲、硫脲、氨磺?；?、磺酰胺、烷氧基糖基或烷基 羰基氧基。
如本文所用，"炔基"基團指含有2-8個(例如，2-6或2-4個)碳 原子和至少一個三鍵的脂族碳基團。炔基基團可以為直鏈或支鏈。炔基 基團的實例包括但不限于炔丙基、丁炔基。炔基基團可任選被一個或多 個取代基取代，所述取代基為例如烷氧基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、芳 氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、氨基、硝基、羧基、氰基、 卣代、羥基、硫代、巰基、烷基硫烷基、烷基亞石黃?；⑼榛酋；?br> 氨基羰基、烷基羰基氨基、環(huán)烷基羰基氨基、環(huán)烷基-烷基羰基氨基、芳 基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜環(huán)烷基-羰基氨基、雜環(huán)烷基-烷基羰 基氨基、雜芳基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、脲、硫脲、氨磺酰基、 磺酰胺、烷氧基糖基或烷基羰基氧基。
如本文所用，"氨基"基団指-NRXrY,其中每個rx和ry獨立地 是氫、烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)烷基、(雜 環(huán)烷基)烷基、雜芳基或雜芳烷基。當術語"氨基"不是末端基團(例 如烷基羰基氨基)時，其由-NRX-表示。RX含義與以上定義相同。
如本文所用，"芳基"基團指苯基、萘基或具有2至3個環(huán)的苯并稠合基團。例如苯并稠合基團包括與一個或兩個C4-8脂環(huán)部分稠合的苯， 例如1,2,3,4-四氫萘基、茚滿基、二氫茚滿基或芴基。芳基可任選被一個 或多個取代基取代，所述取代基為例如烷基(包括羧基烷基、羥基烷基 以及囟代烷基，例如三氟甲基)、烯基、炔基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷 基、雜環(huán)烷基、(雜環(huán)烷基)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環(huán)烷氧基、 雜環(huán)烷基氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷基氧基、雜芳基烷基氧基、芳 酰基、雜芳?；?、氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、氨 基羰基、烷基羰基氨基、環(huán)烷基羰基氨基、(環(huán)烷基)烷基羰基氨基、 芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(雜環(huán)烷基)羰基氨基、(雜環(huán)烷基) 烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、氰基、卣代、羥 基、?；€基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺、 氧代或氨基曱?；?br> 如本文所用，"芳烷基"基團指被芳基基團取代的烷基基團(例如 d-4烷基基團)。"烷基"和"芳基"如本文定義。芳烷基基團的實例 是苯曱基。
如本文所用，脂環(huán)基包括環(huán)烷基、環(huán)烯基和環(huán)炔基。
如本文所用，"環(huán)烷基"基團指具有3-10 (例如4-8個碳原子)脂 族碳環(huán)。環(huán)烷基基團的實例包括環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、金 剛烷基、降水片烯基(norbomyl)、立方烷基(cubyl)、八氬茚基、十氫 萘基、雙環(huán)[3.2.1]辛基、雙環(huán)[2.2.2]辛基、雙環(huán)[3.3.1]壬基以及雙環(huán)[3.3.2.] 壬基。如本文所用，"環(huán)烯基，，基團指具有一個或多個雙鍵的具有3-10 (例如4-8 )個碳原子的非芳香族碳環(huán)。環(huán)烯基基團的實例包括環(huán)戊烯 基、1,4-環(huán)己二-烯-基、環(huán)庚烯基、環(huán)辛烯基、六氫茚基、八氬萘基、雙 環(huán)[2.2.2]辛烯基和雙環(huán)[3.3.1]壬烯基。環(huán)烷基或環(huán)烯基基團可任選被一 個或多個取代基取代，所述取代基為例如烷基(包括羧基烷基、羥基烷 基以及鹵代烷基，例如三氟甲基)、烯基、炔基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基) 烷基、雜環(huán)烷基、(雜環(huán)烷基)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環(huán)烷氧 基、雜環(huán)烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、芳?；?雜芳?；被?、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、氨基羰基、 烷基羰基氨基、環(huán)烷基羰基氨基、(環(huán)烷基)烷基羰基氨基、芳基羰基 氨基、芳烷基羰基氨基、(雜環(huán)烷基)羰基氨基、(雜環(huán)烷基)烷基羰 基氨基、雜芳基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、氰基、鹵代、羥基、?；?、巰基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺、氧代 或氨基曱?；?br> 如本文所用，雜脂環(huán)基指雜環(huán)烷基、雜環(huán)烯基以及雜環(huán)炔基。如本
文所用，"雜環(huán)烷基"基團是指3至10-元(例如，4至8-元)的飽和環(huán)結 構，其中一個或多個環(huán)原子是諸如N 、 O或S的雜原子。雜環(huán)烷基 的實例是哌啶基、哌嗪基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、二氧戊環(huán)基、喁 唑烷基、異嗜唑烷基、嗎啉基、八氫苯并呋喃基、八氫苯并吡喃基、八 氫苯并噻喃基、八氫吲哚基、八氫氮茚基、十氫喹啉基、八氫苯并[b] 噻吩基、2-氧雜-雙環(huán)[2.2.2]辛基、l-氮雜-雙環(huán)[2.2.2]辛基、3-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛基和2,6-二氧雜-三環(huán)[3.3丄0 3, 7 ]壬基。如本文所用，"雜環(huán) 烯基"基團是指具有一個或多個雙鍵的3至10-元(例如，4至8-元)非芳 環(huán)結構，其中一個或多個環(huán)原子是諸如N 、 O或S的雜原子。雜環(huán) 烷基或雜環(huán)烯基基團可以任選被一個或多個取代基取代，所述取代基為 例如烷基(包括羧基烷基、羥基烷基和卣代烷基，例如三氟甲基)、烯 基、炔基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)烷基、(雜環(huán)烷基)烷基、芳基、 雜芳基、烷氧基、環(huán)烷基氧基、雜環(huán)烷基氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳 烷基氧基、雜芳烷基氧基、芳酰基、雜芳?；?、氨基、硝基、羧基、烷 氧基羰基、烷基羰基氧基、氨基羰基、烷基羰基氨基、環(huán)烷基羰基氨基、 (環(huán)烷基)烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(雜環(huán)烷基) 羰基氨基、(雜環(huán)烷基)烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、雜芳烷基羰基 氨基、氰基、卣素、羥基、?；€基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫 脲、氨磺?；?、磺酰胺基、氧代或氨基甲?；Ｔ谀承┣闆r中，雜環(huán)烷 基或雜環(huán)烯基本身上的取代基可以是環(huán)狀(任選含有一個或多個雜原 子)，以使所得到的取代雜環(huán)烷基或雜環(huán)烯基為螺環(huán)系，例如
32如本文所用，"雜芳基"基團是指具有5-15個環(huán)原子的單環(huán)、二環(huán)或
三環(huán)結構，其中一個或多個環(huán)原子是諸如N、 O、 S或B的雜原子且 其中二環(huán)或三環(huán)結構中的一個或多個環(huán)是芳環(huán)。雜芳基的一些實例是吡 啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、嗜唑基、咪唑基、卩引咮基、 2,3-二氫吲哚基、喹啉基、1,2-二氫喹啉基、1,2,3,4-四氫喹啉基、四 唑基、苯并呋喃基、2,3-二氫苯并呋喃基、苯并p塞唑基、P占p屯、噻噸、 吩噻嗪、二氫吲哚和苯并[l, 3]間二氧雜環(huán)戊烯。雜芳基可以任選被一 個或多個取代基取代，所述取代基為例如烷基(包括羧基烷基、羥基烷基 和卣代烷基，例如三氟曱基)、烯基、炔基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜 環(huán)烷基、(雜環(huán)烷基)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環(huán)烷基氧基、雜環(huán) 烷基氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷基氧基、雜芳烷基氧基、芳?；?、 雜芳?；?、氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、氨基羰基、 烷基羰基氨基、環(huán)烷基羰基氨基、(環(huán)烷基)烷基羰基氨基、芳基羰基氨 基、芳烷基羰基氨基、(雜環(huán)烷基)羰基氨基、(雜環(huán)烷基)烷基羰基氨 基、雜芳基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、氰基、卣素、羥基、?；?、 巰基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺?；?、磺酰胺基、氧代或 氨基曱?；?。
如本文所用，"雜芳烷基"基團是指被雜芳基基團取代的烷基烷基(例 如，CM烷基基團)。"烷基"和"雜芳基"如上定義。
如本文所用，"環(huán)狀部分"包括環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán) 烯基、芳基或雜芳基，各自如先前定義。
如本文所用，"?；?基團是指甲?；蛲榛?C(-O)-,其中"烷 基"如先前定義。?；鶊F的實例是乙酰基和新戊?；?br> 如本文所用，"氨基曱酰基"基團是指具有-0-CO-NRxRY或 -NRx-CO-0-Rz結
構的基團，其中RX和RY如上定義，RZ是烷基、芳基、芳烷基、 雜環(huán)烷基、雜芳基或雜芳烷基。如本文所用，"羧基"和"磺基"基團分別指-COOH和-S03H。 如本文所用，"烷氧基"基團是指烷基-O-基團，其中"烷基"如先 前定義。
如本文所用，"硫氧基"是指-0-SO-Rx或-SO-0-Rx ,其中Rx
如上定義。如本文所用，"硫烷基"指-S-RX,其中RX如上定義。
如本文所用，"亞磺?；?，指-S(O)-RX,其中RX具有上文的定義。 如本文所用，"磺?；?，，指-S(0)2-RX,其中RX具有上文的定義。 如本文所用，"卣素"或"卣代"基團指氟、氯、溴或碘。 如本文所用，"氨磺?；?基團指結構-S(0)2-NRxRy或
-NRx-S(0)2-Rz，其中RX、 Ry和rz如上文定義。
如本文所用，"磺酰胺"基團指結構-NRX-S(0)2-NRXRy,其中rx、
Ry和RZ如上文定義。
如本文所用，"脲"基團指結構-NRX-CO-NRyRZ,"硫脲"基團指
結構-NRX-CS-NRYR2, Rx、 Ry和RZ如上文定義。
如本文所用，"胍基"基團指結構-NK:(NRXRy)N(RXRy),其中rx和
Rz如上定義。
如本文所用，"脒基"基團指結構-C(NRX)N(RXRy),其中Rx和Ry如 上定義。
如本文所用，術語"將基"指結構-C二N-ORX,其中RX如上定義。
如本文所用，有效量定義為在受治療患者中產(chǎn)生治療效果所需的 量，通常根據(jù)患者的年齡、表面積、體重和狀況來確定。動物和人類劑 量之間的相互關系(基于每平方米體表面積的毫克量)已由Freireich等 人，Cancer Chemother. Rep., 50: 219 (1966)進行了描述。體表面積可大致 地根據(jù)患者的身高和體重來確定。參見，例如Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, New York, 537 (1970)。
如本文所用，"患者"指哺乳動物，包括人類。
如本文所用，拮抗劑指與受體結合但是不會活化該受體的分子。其 與內源性配體或底物竟爭受體上的結合位點，由此抑制受體傳導與內源 性配體結合的細胞內信號的能力。
短語"任選取代的"可與短語"取代或未取代的"互換使用。如本 文所述，本發(fā)明的化合物可任選被一個或多個取代基取代，所述取代基 為例如上文所例舉的通常那些，或作為舉例的本發(fā)明的特定類別、亞類以及種類。除非另外指明，式(I)中變量R1, R2, R3, R"和RS的每個具 體基團可任選被一個或多個本文所述的取代基取代。每個具體基團的取
代基進一步任選被一至三個鹵素、氰基、烷氧基、羥基、硝基、鹵代烷 基和烷基取代。例如，烷基可被烷基硫烷基取代，烷基硫烷基任選被一 至三個卣素、氧代、氰基、烷氧基、羥基、硝基、卣代烷基和烷基取代。 作為另外的實施例，烷基可被(環(huán)烷基)羰基氨基取代，(環(huán)烷基)羰 基氨基的環(huán)烷基部分任選被一至三個卣素、氰基、羥基、硝基、鹵代烷 基和烷基取代。
通常，術語"取代的，，，無論其前面是否具有術語"任選地"，在 給定的結構中均指用特定取代基的原子團替換氫原子團。特定取代基如 上文定義和下文對化合物及其實施例的描述。除非另外指明，任選地取 代的基團在該基團的各可取代部分具有取代基，當在任何給定的結構中 一個以上的位置被選自特定基團的一個以上的取代基取代時，各位置的 取代基可以相同或不同。環(huán)取代基，例如雜環(huán)烷基可以與另一個環(huán)，例 如環(huán)烷基鍵合形成螺雙環(huán)系，例如，兩個環(huán)共有一個共同的原子。本領 域技術人員將會認識到，本發(fā)明所預期的取代基的組合是形成穩(wěn)定或化 學可行的化合物的那些組合。
如本文所用，短語"穩(wěn)定或化學可行的"指當經(jīng)歷其生產(chǎn)、檢測的 條件，優(yōu)選經(jīng)歷其回收、純化條件，以及用于本文公開的一個或多個目 的時，基本上不會發(fā)生改變的化合物。在某些實施方案中，穩(wěn)定的化合 物或化學可行的化合物是指在40。C或更低溫度，缺乏水分或其他化學反 應性的條件下保持至少 一周基本上不發(fā)生改變的化合物。
除非另外指明，本文描述的結構還意味著包括該結構的全部同分異
構(例如，對映異構體、非對映異構體以及幾何異構體(或構象異構體)) 形式，例如各不對稱中心的R和S構型，(Z)和(E)雙鍵異構體，以及(Z) 和(E)構象異構體。因此，本發(fā)明化合物的單獨的立體化學異構體以及對 映異構體、非對映異構體和幾何異構體(或構象異構體)的混合物均在
本發(fā)明的范圍內。除非另外指明，本發(fā)明化合物的全部互變異構形式在 本發(fā)明的范圍內。
另外，除非另外指明，本文描述的結構還意味著包括僅在一種或多 種同位素富集原子方面存在差別的化合物。例如，具有本發(fā)明結構的化 合物除用氘或氚取代氫外，用"C或14C富集碳原子取代碳在本發(fā)明的
35范圍內。此類化合物在例如生物測定中是有用的分析工具或探針。
每個式(I)化合物的N-氧化物或藥學上可接受的鹽也在本發(fā)明的 范圍內。例如，咪唑或吡唑中心環(huán)或含有氮的雜環(huán)基取代基的氮環(huán)原子 可在適合的氧化劑，例如間氯過苯曱酸或H2(32存在的情況下形成氧化物。
本質上為酸性的式(I)化合物(具有羧基或酚羥基基團)能夠形成 藥學上可接受的鹽，例如鈉、鉀、鈣或金鹽。與藥學上可接受的胺，例
如氨水、烷基胺、羥烷基胺和N-曱基glycamine形成的鹽也在本發(fā)明的 范圍內。式(I)的化合物可用酸處理形成酸加成鹽。此類酸的實例包括 鹽酸、氬溴酸、氫碘酸、硫酸、甲磺酸、磷酸、對溴苯基磺酸、碳酸、 琥珀酸、檸檬酸、苯曱酸、草酸、丙二酸、水楊酸、蘋果酸、富馬酸、 抗壞血酸、馬來酸、乙酸以及本領域眾所周知的其他無才幾酸和有機酸。 酸加成鹽可通過用足量的酸(例如鹽酸)處理游離堿形式的式(I)化合 物來制備以產(chǎn)生酸加成鹽(例如鹽酸鹽)。通過用適合的稀釋堿水溶液 (例如，氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀或氨水)處理所述鹽可將酸加成 鹽轉化回其游離堿形式。式(I)的化合物還可以是例如為非手性化合物、 外消旋混合物、光學活性化合物，純化的非對映異構體或非對映異構體 化合物的混合物。 B.縮寫
下列縮寫具有以下含義。如果縮寫沒有定義，它具有其通常接受的 含義。
BEMP二2-叔丁基亞胺基-2-二乙基氨基-l,3-二甲基全氬-l,3,2-二氮雜 正膦(phosphorine )
Bob叔丁氧基羰基
BOP二苯并三唑-l-基氧基三(二曱基氨基)六氟磷酸鱗鹽
bd:寬雙峰
b^寬單峰
CDP羰基二咪唑
d:雙峰
dd-雙峰的雙峰
DK^二異丙基碳二亞胺
DMF^二曱基曱酰胺DMAP二二甲基氨基吡啶 DMSO二曱基亞砜
EDCI=乙基-1 -(3 -二甲基氨基丙基)碳二亞胺
EtOAc二乙酸乙酯
g-克
HOBT^l-羥基苯并三唑 DIPEA-Hunig's堿=二異丙基乙胺 L嗜
n^多重峰
]/[=摩爾
max二最大
meq二毫當量
mg:毫克
ml^毫升
mir^毫米
mmo—毫摩爾
MOC二曱氧基氧基羰基
N-正常
N/A4殳有獲得
ng二纟內克
! 11=纟內米
OD^光密度
PEPCH-(3-(l-吡咯烷基)丙基)-3-乙基碳二亞胺 PP-HOBT^底啶-哌啶-l-羥基苯并三唑
psi二磅/平方英寸
Ph《基
q-四重峰
quint,五重峰
卬111=每分鐘轉數(shù) 5=單峰
，三重峰
37TFA二三氟乙酸
TIC^四氬呋喃 tlc，蓴層色譜 M L—敖升 UV-紫外線 II本發(fā)明的化合物
一般地，本發(fā)明的氘化化合物可通過本領域已知的合成它們未氘化 形式的方法來合成，除了在合成過程中使用氘化起始物料或反應試劑。 可應用的方法的實例包括描述于美國專利申請第60/71 1,530號；WO 02/18369; WO 07/022459; Advanced Organic Chemistry,第二版，第204頁, J. March, McGraw Hill, New York, NY, 1997,以及Synthesis of A: Elemes and Ragnarsosson, J. of Chem. Soc, Perkm 1, 1996, 537中的那些。 本文引用的全部出版物將其全部內容通過參考引入。 式I的化合物可使用已知的方法制備，例如在以下流程圖I所舉例 說明的。
流程圖I
涉及流程圖I時，將式L的酸與氘化的式ii的氨醇-酰胺在縮合試劑 存在的情況下反應以提供式iiL的羥基-酰胺，所述縮合試劑為例如EDCI
和HOSu。在一些實施方案中，在》_中顯示的氘(D)富集量百分數(shù)為 10%以上。在其他實施方案中，富集量為10%至99.95%, 40%至99.95%, 50%至99.95%， 60%至99.95%, 80%至99.95%, 90%至99.95%, 93% 至99.95%, 97%至99.95%或99至99.95%,或99.95%或更高。用適合 的氧化劑氧化l以提供式I的化合物。適合的氧化試劑包括，例如 Dess-Martin全碘烷(periodinane )或TEMPO以及次氯酸鈉。
在流程圖I中顯示的式iL氖化氨基-醇-酰胺可通過使用已知的方法 制備，例如，以下流程圖II所舉例說明的。
38流程圖II
涉及流程圖II時，將式i^的甘氨酸亞胺(imimc)酯轉化為式Yii 的氖化石黃內酰胺可根據(jù)以前所述方法進行(Y. Elemes和U. Ragnarsson, J. Chem. Soc， Perkin I, 1996, 6, p.537.如先前所述(L. Lankiewicz等人,J. Chem. Soc, Perkin I, 1994, 17,第2503頁)，用酸和堿連續(xù)處理式vii的化 合物，隨后用苯甲氧基碳酰氯處理中間體氨基酸(未顯示)提供被保護 的氘化氨基酸Ylii。在縮合試劑CDI存在的情況下，viii與曱氧基曱胺的 反應提供了式i2L的Weinreb酰胺。用例如二異丁基氪化鋁或氬化鋁鋰還 原i提供了酪2￡。使用與先前所述那些類似的方法(參見，例如，WO 02/18369),將醛2L轉化為氰醇xi，由此得到被保護的輕基-氨基酸祖。 將酸i轉化為被保護的酰胺2dli,將其脫保護以提供氨基-酰胺ii。
替代性地，可制備在流程圖I中描述的氘化氨基-酰胺ii,其中R2 是H,例如，如流程圖III所舉例說明的。流程圖III
1. Red-AI
2. D20
NT
犯
R4
UHP TFAA
P"TsOH CH2C，2
NaN3 MgS04 MeOH
涉及到流程圖III時，用雙(2-曱氧基乙氧基)氫化鋁鈉還原炔丙醇 愈，隨后用氧化氘使反應混合物淬滅以提供氘化的烯丙醇M。用二氧 化錳氧化^提供醛^Yi,在磷酸鈉和2-甲基-2-丁烯存在的情況下，用亞 氯酸鈉(NaC102)將其進一步氧化成酸Mii。酸xvii與異丁基氯甲酸西旨 (ICBF)在N-曱基嗎啉存在的情況下進行反應，隨后中間體混合酐與胺 HNR4R5的反應提供酰胺^Y111。在三氟乙酸和對曱苯石黃酸存在的情況下 用脲過氧化氫(UHP)環(huán)氧化xviii的以提供環(huán)氣化物^。 xix與疊氮化鈉 的反應提供了中間體疊氮化合物m,其隨后在碳載鈀存在的情況下通過 催化氫化纟皮還原為外消旋氨醇Mi。外消旋氨醇xxi可通過使用已知的方
后由有機溶劑結晶來拆分。適合于制備i的光學活性^機酸包括，例如
L-酒石酸、L-蘋果酸、(S)-扁桃酸、(lS)-(+)-10-樟腦磺酸、(-)2,2:4,6-二-0-異丙基二烯-2-酮-L-古洛糖酸水合物、N-乙?；?L-亮氨酸、脫氧膽酸、 (十)-O,O'-二苯甲?；?D-酒石酸、0,0'-二-(4-曱苯?；?-D-酒石酸，S-(十)l,l-二萘基-2-2-磷酸、L-乳酸、D-葡糖酸、乳糖醛酸、雙特戊?；?L-酒石酸、 S-(十)-O-乙?；馓宜嵋约癝-(-)2-(苯基氨甲酰氧基)丙酸。用于重結晶的
、、
N H
舊CF NMM* CH2Cl2
手性拆分
^Y1
NaC,02
NaH2P04 2H20
2-甲基-2-丁烯 叔-BuOH
xvii
W多
外消旋
H2 <3 atm)， Pd/(^適合有機溶劑的實例包括二曱基乙酰胺、乙酸乙酯和丙酮。
可通過常規(guī)的分析方法，例如NMR和質譜儀來對由此獲得的氘化
化合物進行鑒別。可以使用NMR確定化合物的結構，而質i普儀可用于 通過將化合物與其未氖化形式比較來確定化合物中氘原子的量。
本發(fā)明的氘化化合物通常比其未氘化的類似物更穩(wěn)定，差異化傾向 更小。因此，它們可用于需要本發(fā)明化合物特定立體構型的應用。例如， 式(I)的氖化化合物可用于治療或防止HCV感染或其他HCV蛋白酶 介導的病癥，因為它們能夠抑制HCV蛋白酶?？赏ㄟ^常規(guī)的酶抑制試 驗測量它們的抑制活性，其中的一些描述于以上引用的出版物。參見， 例如Pemi, R.B.等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2006 (march), 50 (3): 899-909。
另外，式(I)的氘化化合物可用作生物學工具研究其未氘化形式的 藥理學特性。因此，這些用途也在本發(fā)明的范圍內。
實施例I.制備(IS, 3a凡6aS)-2-((5)-2-((S)-2-環(huán)己基-2-(吡。秦-2-羧酰氨 基)乙酰氨基)-3,3-二曱基丁?；?-AK(S)-l-(環(huán)丙基氨基)-1,2-二氧代-3-氘-己-3-基)八氬環(huán)戊[c]吡咯-l-羧酰胺
步驟a:制備 \
通過已4口方'法，例長口4笛述于Y. Elemes禾口 U. Ragnarsson, J. of Chem. Soc, Perkin 1, 1996, 6, 537; W.Oppolzer等人，Helv. Chim. Acta., 1994, 25: 2363的那些方法，使用相應的未取代的磺內酰胺和丙基碘來制備氖化的 磺內酰胺(即在以下流程圖中顯示的化合物Yi)。
41步驟b:制備(S)-2-(苯曱氧基羰基氨基)-2-含氘戊酸，viii 將步驟a的化合物Yii (15.39 g, 32.1 mmol)裝入THF (100 mL)和IN HCl(50mL)中。在室溫攪拌所得乳液過夜，然后真空濃縮以提供粘稠的 油。然后將油溶解于THF(IOO mL)中，向溶液中加入水(25 mL)和LiOH (3.08 g, 128mmol)。將該溶液在室溫再次攪拌過夜，然后濃縮除去THF。 剩余混濁的淺黃色溶液。將其用水(25 mL)稀釋，并用CH2C12萃取(三次， 每次50 mL )。將水相用THF (200 mL)稀釋并冷卻到0°C ,同時快速攪拌， 在15分鐘內逐滴加入CBZ-C1 (7.6 mL, 54 mmol)。在0。C攪拌1小時后， 真空除去THF溶劑，殘留物通過加入1NHCl(50mL)酸4匕。將該溶液用 EtOAc萃取(3次，每次100 mL),將有機相在Na2S04上干燥并濃縮得 到油。將殘留物溶于EtOAc (25 mL)和庚烷(150mL)中，加入晶種，并 在室溫攪拌過夜。在玻璃料(frit)上收集固體，用庚烷(30mL)淋洗，風
O Na2C03 9
iv v
然后將17.32 g的化合物yi_(45.8 mmol)和229 mL THF裝入配備有 ;茲力攪拌棒和N2進氣口的500 mL圓底燒并瓦中。將所得溶液冷卻到-78 °C,在1小時內用注射泵加入n-BuLi (31.5 mL,在己烷中的1.6M溶液， 50.3 mmol)。在加入HPMA (56 mL)溶液以前，將所得黃色溶液熟化30 分鐘，在30分鐘內將n-Prl (13.4 mL, 137 mmol)加入其中。在8小時內 將混合物加熱至室溫，然后在向混合物中加入020 (50 mL)以前，將混 合物冷卻到-20。C。然后用EtOAc(400 mL)萃取反應混合物，將有機層在 MgS04上干燥，濃縮得到61.3 g粗制油。在500g珪膠上進行層析，用 2:1庚烷/EtOAc洗脫，隨后濃縮富集的切割帶(rich cut)得到20.35 g 白色固體。然后將白色固體從EtOH (210 mL)重結晶，得到為白色晶體 固體的15.39g化合物xii。通過^NMR測定摻入的氘為93%。干得到5.65 g (70%)在以上流程圖中所示的化合物亟。通過& NMR 測定摻入的氘為93%。
步驟c:制備(S)-苯曱基l-(甲氧基(曱基)氨基)-l-氧代-2-氘戊-2-基氨
基曱酸酯
向保持在0。C的含有在20 mL二氯曱烷中的1.0g (S)-2-(苯甲氧基羰 基氨基)-2-含氖戊酸(3.97 mmol)的燒瓶中加入3.0 eq的N-曱基嗎啉(700 HL), 1.5 eqiV"-二曱基鹽酸羥胺(581 mg)和1.5 eq EDCI (U4 g)。將反應 混合物從0。C至室溫攪拌過夜。然后用二氯曱烷稀釋反應混合物，用HC1 (1 N)和鹽水洗滌。將有機層在MgS04上干燥。粗制混合物通過快速層 析(在己烷中的15-75%的乙酸乙酯)純化得到814mg純化的酰胺(標 題化合物)。ES+ = 296.1, ES- = 295.2。用}H NMR i普確i^其結構。
步驟d:制備(S)-苯曱基l-氧代-2-氘戊-2-基氨基曱酸酯
<formula>formula see original document page 43</formula>
使用在WO 02/18369中描述的方法，將步驟c中Cbz-保護的氨基酸 轉化為標題化合物。具體地。向保持在O'C (水浴中)的含有在10 mL 無水THF中的1.0 eq(S)-苯曱基l-(曱氧基(甲基)氨基)-l-氧代-2-氘戊-2-基氨基甲酸酯(810 mg, 2.75 mmol)的燒瓶中緩慢加入1.7 eq的硼氫化鋰 溶液(1.0M) (4.67 mL)。攪拌大約IO分鐘后，移去水浴，繼續(xù)反應1小 時。在0。C通過加入5mLKHSO4(10。/。)溶液使反應淬滅。然后通過加入 10 mL HC1 (1 N)來稀釋溶液。將混合物攪拌30分鐘，然后用二氯曱烷 萃取3次。將有機相合并，并用HC1(1N)溶液、水和鹽水洗滌。然后將有機相在MgS04上干燥，蒸發(fā)揮發(fā)物。在下個步驟中使用該醛。ES+ = 237.1, ES- = 235.2。
步驟e:制備苯曱基(3S)-l-(環(huán)丙基氨基)-2-羥基-l-氧代-3-氘己-3-基
氨基曱酸酯
OH
CbzHN. 人 jj
環(huán)丙基異腈根據(jù)以下所示流程圖制備。
Bu3N, p-TsCI
Na2C03 h 100C, 20 mmHg
^NH2 9 EtOH,0->rt 乂N^H 在-78C收集 ^
《 ，O人H -^《X -^ >N=C
然后將環(huán)丙基異腈與步驟d的醛產(chǎn)物偶聯(lián)得到標題化合物，如J. E. Semple等人，Org. Lett., 2000, 2(18), p.2769; Lumma W., J. Org. Chem., 1981,46,3668"中所述。ES+ = 322.1。
步驟f:制備(3S)-3-氨基-N-環(huán)丙基-3-氘-2-羥基己酰胺
OH
D 、0
在氫存在的情況下通過使用碳載鈀催化劑將步驟e的Cbz化合物氫 解獲得標題化合物。在以下流程圖中顯示的是步驟c, d, e和f。
44O EDCI,剛M 9 9
e SH h Pd(oh)2/C h吡咯-l-羧酰胺
H H
6 乂 D o
在偶聯(lián)劑，例如EDCI和HOSu存在的情況下由步驟f的羥基氨酰 胺產(chǎn)物與適合的酸縮合來制備標題化合物。具體地，向含有在20 mL DMF中的1.2叫的(1S， 3ai ,6aS)-2-((S)-2-((。-2-環(huán)己基-2-(吡。秦-2-羧酰氨 基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁?；?八氳環(huán)戊[c]吡咯-l-羧酸(1.59g)的燒瓶 中加入2.5 eq的二異丙基胺(980 |uL), 1.2 eq的N-羥基苯并三唑水合物 (411 mg)和1.3 eq的EDCI (558 mg)。在室溫攪拌15分鐘后，向混合物 中加入1.0叫的(3S)-3-氨基-N-環(huán)丙基-3-氖-2-羥基鹽酸己酰胺(500 mg)。另外24小時后，將反應混合物稀釋到400 mL乙酸乙酯中。用HCl(l N)、水、飽和^暖酸氫鈉溶液、鹽水洗滌混合物的有才幾相，然后在MgS04 干燥。在二氧化硅上通過層析(在己烷中的70-100%乙酸乙酯)來純化 粗制產(chǎn)物得到1.31 g為白色固體的標題化合物。ES+ = 683.6, ES-= 682.2。 -使用NMR^H確認其結構。
步驟h:制備(1S, 3a&6aS)-2-((S)-2-((S)-2-環(huán)己基-2-(吡。秦-2-羧酰氨 基)乙酰氨基)-3,3-二曱基丁酰基)-AK(S)-H環(huán)丙基氨基)-1>二氧代-3-氘-己-3-基)八氫環(huán)戊[c]吡咯-l-羧酰胺<formula>formula see original document page 46</formula>標題化合物通過用適當?shù)难趸瘎?，例如Dess Martin全碘烷或 TEMPO以及次氯酸鈉氧化步驟g的產(chǎn)物來制備。具體地，在室溫向含 有在40 mL 二氯曱烷中的1.31g (IS, 3a尺,6aS)-2畫(0S)-2-((5)國2-環(huán)己基 -2-(吡。秦-2-羧酰氨基)乙酰氨基)-3,3-二曱基丁?；?-7V-((3S)-l-(環(huán)丙基氨 基)-3-氖-2-羥基-l-氧代己-3-基)八氬環(huán)戊[c]吡咯-l-羧酰胺的燒瓶中加入 1.06g Dess Martin全碘烷。攪拌2小時后，加入50 mL亞硫酸氬鈉(l N), 將混合物攪拌30分鐘。分離兩相，用水洗滌有機相兩次，再用鹽水洗 滌，在Na2S04上干燥。在二氧化硅上通過層析(在己烷中的20-100% 乙酸乙酯)來純化粗制產(chǎn)物得到1.07g為白色固體的標題化合物。ES+ = 681.5, ES- = 680.0。使用iHNMR譜確認其結構。
通過MS確定一參入的氖為93%。通過手性正相HPLC確定非對映異 構體的比例高于99%d.e.。
以下流程圖顯示步驟g和h的反應。<formula>formula see original document page 46</formula>實施例2:制備(2S,3S)-3-氨基-3-氖-N-環(huán)丙基-2-鞋基鹽酸己酰胺<formula>formula see original document page 47</formula>
以下所示流程圖舉例說明了標題化合物的總體合成。每個步驟如下
詳述,
步驟l:制備3-氖-(E)-己-2-烯-l-醇
向配備有機械攪拌器和回流冷凝器的250 mL三頸圓底燒瓶中加入 2-己-1-醇(10 g, 0.1摩爾)和THF(100 mL, 10體積)。將所得混合物冷卻到 0±5°C,然后在氮氣氣氛下在0。C至20。C緩慢加入Red-AI(在甲苯中 65%， 32 mL, 1.6叫)。將所得混合物加溫到25°C,并攪拌5小時。將 反應混合物冷卻至-5 ± 5°C ,在(TC至15。C之間逐滴加入D20 ( 8.2 g, 4 eq )。向所得混合物中裝入IPAC(50 mL, 5體積)和飽和的NH4C1溶液(50 mL, 5體積)。在攪拌混合物10分鐘后，將形成的白色固體濾出。從濾 液分離有機層，水層用IPAC(30mL, 3體積)萃取。有^幾層合并，用水(30 mL, 3體積)洗滌并在MgS04上干燥，濃縮;彈到9.8g為無色的油的產(chǎn)物(化合物2)。粗制產(chǎn)物2沒有做進一步純化而用于下一步驟。
^麗R (500 MHz， CDC13) 5 5.66 (t, 1H, J=5.0 Hz), 4.12 (d, 2H, J =5.0 Hz), 2.04 (t, 2H, J=5.0 Hz), 1.38-1.46 (m, 2H), 0.93 (t, 3H, J=5.0 Hz)。
步驟2:制備3-氖-(E)-己-2-烯醛
在室溫向配備有機械攪拌器的含有在CH2C12(150 mL, 15體積)中 的3-氖-2-己烯醇(10 g, 0.1摩爾)的250 mL三頸圓底燒瓶中裝入活化的 Mn02(87g, 10eq)。在強力攪拌1小時后，加入另外一部分Mn02(16 g, 2 eq),繼續(xù)振蕩4小時。將反應溶液通過硅藻土墊過濾。真空除去溶劑(25 °C, 100 mmHg)得到8.8 g為淡黃色油的粗制醛產(chǎn)物(化合物3 )。該粗 制產(chǎn)物沒有進一步純化而用于下個步驟。
&麗R (500 MHz, CDC13) 5 9.54 (d, 1H, J=IOO Hz), 6.14(s, 1H), 2.34 (m, 2H), 1.55-1.60(m, 2H), 1.00 (t, 3H, J=5.0 Hz)。
步驟3:制備3-氖-(E)-己-2-烯酸
向配備有機才成攪拌器和回流冷凝器的500 mL三頸圓底燒瓶中裝入 3-氖-2-己烯-l-醛(10g, 0.1摩爾)，叔-BuOH (90 mL, 9體積)和2-曱基誦2-丁烯(30 mL, 3體積)。在30分鐘內向所得溶液中加入新鮮制備的在水 (200 mL )中的NaC102(27.4 g, 3 eq)和NaH2P04(62.9 g, 4 eq)的溶液。將 反應混合物在室溫攪拌2小時。將反應溶液冷卻到0。C,并加入飽和的 Na2S03水溶液直到反應顏色變成無色。停止攪拌，分離有才幾層，用 EtOAc(3體積x3)萃取水層。將有機層合并，真空濃縮直到總體積變?yōu)?3體積。用1NNaOH(3體積x3)萃取所得溶液，丟棄剩余的有機層。 用6NHCl將合并的水層酸化至pH變?yōu)?.0。用CH2C12(3體積x 5)萃 取該溶液。將合并的有機層在MgS04上干燥，濃縮得到8.7g為白色固 體的產(chǎn)物(化合物4)。
&麗R (500 MHz, CDC13) 5 5.84 (s, 1H), 2.23 (t, 2H, J=5.0 Hz), 1.51-1.55 (m, 2H), 0.98 (t, 3H, J=5.0 Hz)。
步驟4:制備3-氖-(E)-N-環(huán)丙基己-2-烯酰胺
向配備有機械攪拌器和回流冷凝器的250 mL三頸圓底燒瓶中裝入 在CH2Cl2(100mL， 10體積)中的2-己烯酸-3d(10 g, 0.09摩爾)，IBCF(13g, 1.1 eq)。將所得溶液冷卻至0。C,通過控制溫度在0。C至20。C緩慢加 入NMM (13.2 g, 1.5 eq)。然后，將混合物加溫至室溫并攪4半1小時。向 所得溶液中加入環(huán)丙胺(5.9g, 1.2eq),將該溶液攪拌2小時。用1NNaOH (3體積x2), 1NHC1(3體積x2)和鹽水溶液(3體積)以及水(3體積) 洗滌反應混合物。將有機層在MgS04上干燥，濃縮得到為油的粗制產(chǎn)物。 將粗制產(chǎn)物溶解于庚烷(5體積)中，攪拌的同時冷卻到-78。C。過濾沉淀 的固體，干燥得到8.7g為白色固體的產(chǎn)物(化合物5)。
& NMR (500 MHz， DMSO) 5 7.92 (s, 1H), 5.78 (s, 1H), 2.66-2.68 (m, 1H), 2.08 (t, 2H， J=5.0 Hz), 1.38-1.42 (m, 2H), 0.87 (t, 3H, J=5.0 Hz), 0.63 (t, 2H, J=3.0 Hz), 0.40 (t, 2H， J=3.0 Hz)。
步驟5:制備3-氘-N-環(huán)丙基-3-丙基環(huán)氧乙烷-Z-羧酰胺 在0°C30分鐘內向配備有機械攪拌器的含有在CH2C12(100 mL, 10 體積)中的(E)-N-環(huán)丙基己-2-烯酰胺-3d (即步驟4的產(chǎn)物)(10 g, 0.06摩 爾)，脲過氧化氬(25 g, 4 eq)和對-TsOH(12.3 g, 1 eq)的250 mL三頸圓底 燒瓶中加入在CH2C12(50 mL, 5體積)中的三氟乙酸酐(40.9 g, 3 eq)。將 反應混合物加熱到40±5°C,并攪拌3小時。冷卻至0。C后，通過緩慢 加入6NNaOH(100mL, 10體積)使反應混合物淬滅，攪拌30分鐘。將 有機層分離并用鹽水(5體積)和水(5體積)洗滌。將洗滌的有機層在 MgS04上干燥，蒸發(fā)溶劑得到為淺黃色油的9.7 g環(huán)氧產(chǎn)物(即化合物6)。 該粗制產(chǎn)物沒有進一步純化而用于下個步驟。
工H NMR (500固z, DMSO) 5 8.01 (s, 1H), 3.09 (s, 1H), 2.63-2.65 (m, 1H), 1.39-1.54 (m, 4H), 0.91 (t, 3H, J=5.0 Hz), 0.60 (t， 2H, J=3.0 Hz), 0.45 Ct, 2H, J=3.0Hz)。
步驟6:制備3-疊氮-3-氖-N-環(huán)丙基-2-羥基己酰胺 向配備有機械攪拌器和回流冷凝器的含有在MeOH(lOO mL, 10體 積)中的環(huán)氧化物-3d 6(10 g, 0.06摩爾)和無水硫酸鎂(14.1 g, 2.0叫)的 250 mL三頸圓底燒瓶中加入一份疊氮化鈉(15.3 g, 4.0叫)。將所得混合 物加熱到65土5。C并攪拌5小時。將反應混合物冷卻至室溫并加入 IPAC(100mL, 10體積)，將混合物攪拌另外10分鐘。將混合物通過。61^@ 墊過濾以除去不溶性鹽，將所得澄清溶液濃縮至3體積。向所得溶液中
49加入IPAC(170mL, 17體積)，將混合物攪拌另外10分鐘。再次將溶液 通過0￡1^@墊過濾得到產(chǎn)物，疊氮化物-3(1(化合物7)，為在1 八0:大約200 mL)中的澄清溶液，其沒有進一步純化而用于下個步驟。
^ NMR (500 MHz,DMSO) 5 7.91 (s, 1H), 6.00 (d, 1H, J=5.0 Hz), 4.03 (d, 1H, J=5.0 Hz), 2.66-2.67 (m, 1H), 1.30-1.58 (m, 4H), 0.88 (t, 3H, J=5.0 Hz), 0.60 (t, 2H, J=3.0 Hz)， 0.48 (t, 2H, J=3.0 Hz)。
步驟7:制備3-氨基-3-氘-N-環(huán)丙基-2-羥基己酰胺 在氫化反應器中向裝配有機械攪拌器的含有在前一步驟獲得的在 IPAC中的疊氮化物-3d 7(200 mL, 0.05摩爾)的500 mL高壓氫化反應器 中裝入Pd/C (10% Pd,水50%, 0.8g)。向所得溶液充入氮氣(l.O atm), 釋放三次，然后充入氫氣(3.0 atm)并釋放三次。向所得溶液充入氫氣(3 atm)，攪拌5小時。釋放氫氣后，用氮氣凈化溶液5分鐘。向所得溶液 中加入MeOH(30ml， 3體積)，將反應混合物加熱至50 ± 5°C 。通過硅藻 土墊將反應混合物過濾得到澄清溶液。通過在20土5。C濃縮溶液直到剩 余3體積溶液來分離產(chǎn)物。通過過濾收集固體，洗滌(IPAC, 3體積)， 干燥得到7.7 g為白色晶體固體的標題化合物(化合物8). & NMR (500 MHz,DMSO) 5 7.70 (s, 1H), 5.3l(s， 2H), 3.68 (s, 1H), 2.64-2.66 (m, 1H), 1.10-1.50 (m, 4H), 0.82 (t, 3H, J=5.0 Hz), 0.59 (t, 3H, J=3.0 Hz), 0.45 (t， 3H J=3.0Hz)。
步驟8:制備(2S,3S)-3-氨基-3-氘-N-環(huán)丙基-2-羥基脫氧膽酸己酰胺 向配備有機械攪拌器并含有在THF(IOO mL, 10 v))中的步驟7的外 消旋(2S,3S)-3-氨基-3-氘-N-環(huán)丙基-2-羥基己酰胺(10 g, 0.05摩爾)的250 mL三頸圓底燒瓶中裝入脫氧膽酸(15.7 g, 0.75叫)。將反應混合物加熱到 65土5。C并攪拌1小時。在1小時內將所得均勻混合物冷卻至23土2。C, 將其保持在同樣的溫度范圍1小時。通過過濾收集沉淀的固體，用 THF(50 mL, 5體積)洗滌，干燥得到12.4 g為白色固體的鹽化合物(化 合物9 )。產(chǎn)物的對映體比例(ER)= 2:98。
步驟9:制備(2S,3S)-3-氨基-3-氖-N-環(huán)丙基-2-羥基鹽酸己酰胺 向配備有機械攪拌器的250 mL三頸圓底燒瓶中加入脫氧膽酸鹽(來自于步驟8 )和2-丙醇(62 mL, 5體積)。將所得溶液加熱至75 ± 5°C ,緩 慢加入在IPA(12mL, 3eq)中的5至6NHC1，同時強力攪拌。將所得溶 液在相同的溫度攪拌1小時，然后冷卻至23土2。C。將反應混合物在相 同的溫度保持1小時。通過過濾收集沉淀的固體，用2-丙醇洗滌(36mL, 3體積)，干燥得到3.0 g為白色固體的標題化合物(對映體比例(ER)= 0:100)。通過MS和iHNMR確定摻入的氖為99%以上。
力麗R (500 MHz,DMSO) 5 8.07 (s, 1H), 7.97 (s, 3H), 6.25 (d, 1H， J=5.0 Hz), 4.16 Cd, 1H, , J=5.0 Hz), 2.67-2.70 (m, IH), 1.33-1.46(m, 4H), 0.84 (t, 3H, J=5.0 Hz), 0.61 (t, 3H, J=3.0 Hz), 0.53 (t, 3H, J=3.0 Hz)。
實施例3:測量差向異構化速率的試-瞼 氘化的本發(fā)明化合物差向異構化緩慢，如下所示
根據(jù)以下試驗測量差向異構化速率。具體地，將100 nL培養(yǎng)基(緩 沖液，大鼠血漿，狗血漿或人類血漿)加入到96孔深板中。然后向血漿 中加入10 juL含有測試化合物(15",3ai ,6aS)-2-((S)-2-((5)-2-環(huán)己基-2-(吡 溱-2-羧酰氨基)乙酰氨基)-3,3-二曱基丁酰基)-AK(S)-l-(環(huán)丙基氨基)-1,2-二氧代-3-氘-己-3-基)八氫環(huán)戊[c]吡咯-l-羧酰胺(1 juM或10 juM)的乙 腈溶液，同時通過使用TomTec液體操作工作站(Hamden, CT, USA)將 1200 jaL乙酸乙酯加入到96深孔板中(2mL)。然后將培養(yǎng)板緊密遮蓋， 在將其以3000 rpm離心10分鐘前渦旋振蕩20分鐘。離心后，使用 TomTec將900 |u L上清夜轉移到新的V字形96深孔板中，然后在20 。C在氮氣下(流速60 L/min)干燥30分鐘。殘留物用100 juL重建， 將該溶液再次轉移到在96孔板的玻璃插入物中。將20 )uL重建溶液注 射入LC- MS/MS中以確定差向異構體的量。LC -MS/MS譜儀使用ChiralPakAD柱(4.6xl50mm, 10 m m),異丙醇和正庚烷的混合物(10:90 50:50或90:10)為流動相，異丙醇為洗滌溶劑。還在MS譜4義中使用測試 化合物的氘化類似物，所述類似物在環(huán)己基基團含有11個氘原子 (C36H42DnN706, MW 690.47)。
測試化合物的質量(M+H,m/z)為681.36,而其未氘化類似物(在氘化 碳中心具有相同或不同的手性構型)的質量(M+H, m/z)為680.36。它們的 LC-MS/MS譜顯示323.30(具有氖)和322.30(未氖化)的碎片。
以兩種濃度(l juM和IO juM)并且在相同的培養(yǎng)基中(即1￡沖 液，大鼠血漿，狗血漿和人血漿)，測試的氘化的式(I)化合物顯示的 差向異構化速率比其未氘化形式緩沖液、大鼠血漿、狗血漿慢；在人血 漿中差向異構化速率慢的多。例如，在人血漿中并且以1 juM或10 jl1 M,氖化化合物在180分鐘內差向異構化大約30% ,而未氘化形式差向 異構化幾乎40%。另外，在人血漿中，氖化化合物以線性速率差向異構 化180分鐘，而未氘化形式顯示在其水平穩(wěn)定之前的最初60分鐘內差 向異構化呈指數(shù)速率。
實施例4:測定在HCV復制子細胞中IC5。的試驗 在本試驗中使用(IS, 3aW,6aS)-2-((。-2-((5)-2-環(huán)己基-2-(吡。泰-2-羧酰 氨基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-AK(SH-(環(huán)丙基氨基)-l,2-二氧代-3-氘-己-3-基)八氬環(huán)戊[c]吡咯-l-羧酰胺和(5&8S)-3-(5-氯-2,4-二曱氧基苯 基)_7_((^-2-(2-環(huán)己基乙酰氨)-3,3- 二曱基丁?；?-AT-((S)-l-(環(huán)丙基氨 基)-l,2-二氧代-3-氘基-3-基)-l-氧雜-2,7-二氮雜螺[4.4]壬-2-烯-8-羧酰胺， 如Lin, C等人，J. Biol. Chem., 2004, 279: 17508-17514; Lm, K等人， Antimicrob. Agents Chemother., 2004, 48:4784-4792中所述。
將Conl株的攜帶有自主復制、亞基因組HCV復制子的Huh-7細胞 在Dulbecco's改良Eagle's培養(yǎng)基(DMEM), 10%熱失活胎牛血清(FBS), 2 mM L-谷氨酰胺，以及非必須氨基酸(JRH Biosciences, Lenexa, KS),和 0.25 mg/ml G418 (Invitrogen, Carlsbad, CA)中培養(yǎng)。亞基因組HCV復制 子還編碼新霉素磷酸轉移酶，其可使含有HCV復制子的Huh-7細胞相 對于HCV復制子陰性的Huh-7細胞在G418存在的情況下選擇性生長。 使用4參數(shù)曲線擬合(SoftMax Pro)在HCV Conl亞基因組復制子細胞(19) 中測定使復制子細胞中HCVRNA水平減少50%(1(350)或90%(IC90),或細胞存活減少50。/。(CC5G)的測試化合物的濃度。將復制子細胞與用含有
2% FBS和.5% DMSO(沒有G418)DMEM稀釋的測試化合物在37°C —起 培養(yǎng)。使用RNeasy-96試劑盒(QIAGEN, Valencia, CA)提取總的細胞 RNA,以定量、實時、多重逆轉錄-PCR(QRT-PCR,或Taqman)試驗測 定HCVRNA的拷貝數(shù)目。使用基于四唑的細胞存活試驗，在相同的試 驗設定下測量化合物在HCV復制子細胞中的細胞毒性。
結果顯示兩種測試化合物所具有的Ki均小于50 nM, IC5o(超過5 天)小于10.0 jliM.
其他實施方案
應該理解，雖然已結合詳細的說明書對本發(fā)明進行了描述，但是前 文的描述用于解釋，而不是限制由所附權利要求范圍限定的本發(fā)明的范 圍。其他方面、優(yōu)點以及修改均在所附權利要求的范圍內。
5權利要求
1. 下式的氘富集α-酮酰氨化合物 其中D表示氘原子；R1是其中是任選取代的單環(huán)氮雜雜環(huán)基或任選取代的多環(huán)氮雜雜環(huán)基，或任選取代的多環(huán)氮雜雜環(huán)烯基，其中不飽和是在遠離帶有R21部分的環(huán)并與-C(O)-N(R2)-CDR3-C(O)-C(O)-NR4R5部分連接的環(huán)中；R21是Q3-W3-Q2-W2-Q1；其中W2和W3各自獨立地是鍵，-CO-，-CS-，-C(O)N(Q4)-，-CO2-，-O-，-N(Q4)-C(O)-N(Q4)-，-N(Q4)-C(S)-N(Q4)-，-OC(O)NQ4-，-S-，-SO-，-SO2-，-N(Q4)-，-N(Q4)SO2-，-N(Q4)SO2N(Q4)-，以及當W2和W3任何一個為末端基團時，其為氫；Q1，Q2和Q3各自獨立地是鍵，任選取代的脂族基，任選取代的雜脂族基，任選取代的環(huán)脂族基，任選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，或任選取代的雜芳烷基；或當Q3，Q2，或Q1任何一個為末端基團時，其為氫，條件是當W3和W2都存在時Q2不是鍵；和R2，R3和R4各自獨立地是H或C1-6烷基；和R5是H，烷基，環(huán)烷基，任選被1-4個烷基取代的芳基，烷基芳基、芳基，任選被1或2個烷基取代的氨基。
2. 權利要求1的化合物，其中R"是 中116和118各自獨立地是 鍵；或任選取代的(l,l-或1,2-)環(huán)亞烷基；或 任選取代的(l,l-或1,2-)雜環(huán)亞烷基；或亞曱基或亞乙基，被一個選自由以下基團組成的組的取代基取代， 所述取代基為任選取代的脂族基團，任選取代的環(huán)狀基團以及任選取代 的芳族基團，其中亞曱基或亞乙基進一 步任選被脂族基團取代基取代； R7,119和R"各自獨立地是氫或任選取代的脂族基團； R1G是任選取代的脂族基團，任選取代的環(huán)狀基團或任選取代的芳 族基團；L是-C(O)-， -OC(O)畫，陽NR"C(0)-，畫S(0)2-, -NR"S(0)2-,或鍵； n是O或1。
3. 權利要求2的化合物，其中n是l。
4. 權利要求2的化合物，其中W是被一個選自由以下基團組成的 組的取代基取代的亞甲基，所述取代基為任選取代的脂族基團，任選取 代的環(huán)狀基團，任選取代的芳族基團。
5. 權利要求2的化合物，其中RS是被異丁基取代的亞甲基。
6. 權利要求2的化合物，其中R7是氫。
7. 權利要求2的化合物，其中RS是被一個選自由以下基團組成的 組的取代基取代的亞甲基，所述取代基選自任選取代的脂族基團，任選 取代的環(huán)狀基團，任選取代的芳族基團。
8. 權利要求7的化合物，其中RS是被任選取代的環(huán)狀基團取代的 亞曱基。
9. 權利要求8的化合物，其中RS是被環(huán)己基取代的亞曱基。
10. 權利要求2的化合物，其中W是氫。
11. 權利要求2的化合物，其中L是-CO-.
12. 權利要求2的化合物，其中R^是任選被取代的芳族基團。
13.權利要求12的化合物，其中R^選自以下基團:-0<formula>formula see original document page 4</formula>
14. 權利要求12的化合物，其中R^是任選取代的吡。秦基.
15. 權利要求14的化合物，其中R"是2-吡。秦基。
16. 權利要求2的化合物，其中、^^^、是取代的單環(huán)氮雜雜環(huán)基。
17. 權利要求16的化合物，其中氣^^^是3-碳原子被雜芳氧 基取代的吡咯烷基，其中雜芳基進一步任選被1-4個卣素基團取代。
18. 權利要求 16 的化合物，其中<formula>formula see original document page 5</formula>是<formula>formula see original document page 5</formula> 或<formula>formula see original document page 5</formula>
19.權利要求2的化合物，其中<formula>formula see original document page 5</formula>是任選取代的多環(huán)氮雜雜環(huán)基。
20.權利要求19的化合物，其中<formula>formula see original document page 5</formula>是<formula>formula see original document page 5</formula>或<formula>formula see original document page 5</formula>.
21.權利要求20的化合物，其中<formula>formula see original document page 5</formula>是<formula>formula see original document page 5</formula>或<formula>formula see original document page 5</formula>.
22. 權利要求2的化合物，其中R"是氫，R"和RS各自獨立地是氬 或環(huán)丙基。
23. 權利要求2的化合物，其中W是丙基。
24. 權利要求2的化合物，其中n是0。
25. 權利要求2的化合物，其中L是-NR"C(0)-, R"是氫。
26. 權利要求2的化合物，其中R"是任選取代的脂族基團。
27. 權利要求26的化合物，其中R"是叔丁基。
28. 權利要求2的化合物，其中該化合物是<formula>formula see original document page 6</formula>
29. 權利要求19的化合物, 其中<formula>formula see original document page 6</formula>是<formula>formula see original document page 6</formula>,其中其中A是-(CHX、-;B是-(CHX2、b-; a是0至3;b是0至3，條件是a + b是2或3;X工和乂2各自獨立選自氫，任選取代的Cw脂族基，任選取代的芳基；丫}和Y"各自獨立地是氬，任選取代的脂族基，任選取代的芳基， 氨基或-OQ4;其中(^4各自獨立地是氬或任選取代的脂族基；R22是任選取代的脂族基，任選取代的環(huán)脂族基，任選取代的雜環(huán) 脂族基，任選取代的芳基，或任選取代的雜芳基。
30. 權利要求29的化合物，其中R"是任選取代的烷基羰基。
31. 權利要求30的化合物，其中R"是氨基烷基羰基，卣代烷基羰基，芳基烷基羰基，芳基烷基羰基，脂環(huán)族烷基羰基，或雜脂環(huán)族烷基 羰基，其各自任選被1-3個取代基取代。
32.權利要求31的化合物，其中R"是雜環(huán)烷基-氧基羰基氨基-烷 基羰基，雜芳基-羰基氨基-烷基-羰基氨基-烷基-羰基，雙環(huán)芳基-磺酰氨 基-烷基羰基，芳基-烷氧基-羰基氨基-烷基-羰基，烷基-羰基氨基-烷基-羰基，脂族基-氧基羰基氨基-烷基-羰基，脂環(huán)族基-烷基-氨基羰基氨基-烷基-羰基，雜芳基-羰基氨基-烷基-羰基氨基-烷基-羰基，烷基-氨基羰基 氨基-烷基-羰基，或雙環(huán)芳基-氨基羰基氨基-烷基-羰基，各自任選被l-3 個取代基取代。
33. 權利要求29的化合物，其中R"是 r9 o , ^巾r6和rS各自獨立地是 鍵；或任選取代的(l,l-或1,2-)環(huán)亞烷基；或 任選取代的(l,l-或1,2-)雜環(huán)亞烷基；或亞甲基或亞乙基，被一個選自由以下基團組成的組的取代基取代， 所述取代基為任選取代的脂族基團，任選取代的環(huán)狀基團以及任選取代 的芳族基團，其中亞甲基或亞乙基進一步任選被脂族基團取代基取代； R7, R9和R11各自獨立地是氬或任選取代的脂族基團； R1G是任選取代的脂族基團，任選取代的環(huán)狀基團或任選取代的芳 族基團；L是-C(O)-, -OC(O)-, -NRUC(0)-, -S(0)2-， -NRuS(0)2-,或鍵； n是O或1。
34. 權利要求29的化合物，其中1122是任選取代的脂族基，任選取 代的雜脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的雜脂環(huán)族基，任選取 代的芳基或任選取代的雜芳基。
35. 權利要求34的化合物，其中R"是任選取代的苯基，任選取代 的萘基，任選取代的蒽基，任選取代的萘或任選取代的蒽。
36. 權利要求29的化合物，其中X1, X2, Y'和Y"分別是氬，a和b分別是1。
37. 權利要求36的化合物，其中1122是任選取代的脂族基，任選取 代的雜脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的雜脂環(huán)族基，任選取 代的芳基或任選取代的雜芳基。
38. 權利要求37的化合物，其中R"是任選取代的苯基，任選取代 的萘基，任選取代的蒽基，任選取代的萘或任選取代的蒽。
39. 權利要求38的化合物，其中R"是雜環(huán)烷基-氧基羰基氨基-烷 基羰基，雜芳基-羰基氨基-烷基-羰基氨基-烷基-羰基，雙環(huán)芳基-磺酰氨 基-烷基羰基，芳基-烷氧基-羰基氨基-烷基-羰基，烷基-羰基氨基-烷基-羰基，脂族基-氧基羰基氨基-烷基-羰基，脂環(huán)族基-烷基-氨基羰基氨基-烷基-羰基，雜芳基-羰基氨基-烷基-羰基氨基-烷基-羰基，烷基-氨基羰基 氨基-烷基-羰基，或雙環(huán)芳基-氨基羰基氨基-烷基-羰基，各自任選被l-3 個取代基取代。
40. 權利要求29的化合物，其中<formula>formula see original document page 8</formula>是<formula>formula see original document page 8</formula>。該化合物的結構是<formula>formula see original document page 8</formula>
41. 權利要求40的化合物，其中
42. 權利要求l的化合物，其中化合物中氖富集量為至少50%。
43. 權利要求42的化合物，其中化合物中氘富集量為至少80%。
44. 權利要求43的化合物，其中化合物中氘富集量為至少90%。
45. 權利要求44的化合物，其中化合物中氘富集量為至少99%。
46. —種藥物組合物，其包括藥學上可接受的載體和權利要求1, 28, 41, 44或45任一項的化合物。
47. —種增加藥劑活性異構體體內濃度的方法，包括給需要的患者 施用足以產(chǎn)生藥物作用的量的該藥劑的氘化異構體。
48. 權利要求47的方法，其中藥劑的氘化異構體是權利要求1, 28, 41, 44或45^壬一項的化合物。
49. 一種增加化合物生物利用度的方法，包括用氖原子替換化合物 中與立體碳原子鍵合的氬原子。
50. 權利要求49的方法，其中由此獲得的氘化化合物是權利要求1, 28, 41, 44或45任一項的4匕合物。
51. —種抑制HCV蛋白酶的方法，包括用權利要求l, 28, 41, 44 或45任一項的化合物接觸HCV蛋白酶。
52. —種治療患有HCV感染或HCV蛋白酶介導的病癥的患者的方 法，包括給患者施用藥學有效量的權利要求1， 28， 41， 44或45任一 項的4t合物。
53. —種制備光學富集的式l化合物的方法，其中oc和P羧基的碳原子為立構中心；Ri獨立地是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取 代的芳脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基； R、是氘以使氘的富集量為至少50%; R'2是-NHR2或-OE;R2是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的芳 脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基；和 E是C^6烷基或苯甲基； 包括步驟a)形成式1化合物的鹽，和b)結晶所述鹽得到對映體過量55%以上的化合物。
54. 權利要求53的方法，其中Ri是d—6烷基，R'2是-NHR2，其中R2是d—6烷基或d-6環(huán)烷基。
55. 權利要求54的方法，其中Ri是丙基并且R2是環(huán)丙基。
56. 權利要求53的方法，其中進一步包括用胺化試劑將式ii化合物Ri o oii胺化以得到式iii的化合物
57. 權利要求56的方法，其中胺化試劑是疊氮化物鹽，通過氳化使 中間體疊氮化合物還原。
58. 權利要求56的方法，其中進一步包括用氧化試劑氧化不飽和的 式i化合物，其中R'2是-NHR2或-OE,其中E是d.5烷基或任選取代的 苯曱基，R, O以得到式ll的化合物ii
59. 權利要求58的方法，其中氧化試劑包括叔丁基過氧化氬。
60. 權利要求59的方法，其中氧化試劑進一步包括手性試劑。
61. 權利要求58的方法，其中氧化試劑是異丙氧化釤(III),三苯胂化氧，S-(-)l,l '-雙-2-萘酚和4 A分子篩的混合物.
62. 權利要求58的方法，其中氧化試劑包括在三氟乙酸酐存在的情 況下的脲過氧化氫。
63. 權利要求62的方法，其中R'2是-OE。
64. 權利要求62的方法，其中R'2是-NHR2。
65. 權利要求58的方法，其中水解式ii的化合物以得到酸，然后將 酸轉化為式ii的酰胺化合物，其中R 2是-NHR2 。
66. 權利要求58的方法，其中進一步包括氧化式iv的化合物以得到式ii的化合物。
67. 權利要求66的方法，其中氧化通過使用二氧化錳進行。
68. 權利要求66的方法，進一步包括還原式V的化合物以得到式iv的化合物。
69. 權利要求68的方法，其中用Red-A產(chǎn)還原化合物，然后用氧化 氘淬滅。
70. 制備式I化合物的方法Ri是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的芳 脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基；其中Ri是氖；R2是H,任選取代的脂族基，任選取代的脂環(huán)族基，任選取代的芳 脂族基，任選取代的雜脂族基或任選取代的雜芳脂族基；和 式I化合物對映體過量為55%以上。 包括步驟a) 氧化不飽和的式i的化合物R, O以得到式ii的化合物；b) 將式ii的化合物以胺化試劑反應 以得到式iii的化合物；c) 形成式iii化合物與光學活性有機酸的鹽；d) 結晶所述的鹽，得到對映體過量為55%以上的化合物。
71. 權利要求70的方法，其中式1的化合物是(23,38)-3-氨基-3-氘-仆 環(huán)丙基-2-羥基己酰胺。
72. 權利要求71的方法，其中有才幾酸是L-酒石酸或脫氧膽酸。
全文摘要
式(I)的氘富集的α-酮酰氨立體特異性化合物，其中D表示在立體特異性碳原子上的氘原子。
文檔編號C07C231/00GK101448781SQ200780017663
公開日2009年6月3日 申請日期2007年3月14日 優(yōu)先權日2006年3月16日
發(fā)明者F·馬爾泰斯, G·J·塔努里, G·奇洛卡尼克, R·B·佩爾尼, R·E·富爾斯隆, Y·本納尼, 鄭榮春, 陳民章 申請人:弗特克斯藥品有限公司