專利名稱：：具有抗腫瘤活性的喜樹(shù)堿衍生物的制作方法具有抗腫瘤活性的喜樹(shù)堿衍生物本發(fā)明涉及具有抗腫瘤活性的新的喜樹(shù)堿衍生物、它們的制備方法、其作為抗胂瘤藥物的用途以及包含它們的藥物組合物。
背景技術(shù)：
：喜樹(shù)械是從喜樹(shù)(Camptothecaacuminata)(Nyssaceae)提取的生物堿，首先由Wall和Wani在1966年描述(J.Am.Chem.Soc.1966，88,3888-3890)。喜樹(shù)堿盡管具有廣鐠抗肺瘤活性，特別是抗結(jié)腸肺瘤及其他實(shí)體腫瘤和白血病的活性，但由于其特別地表現(xiàn)為出血性膀胱炎、胃腸道毒性和骨髓抑制的高毒性而未用于治療中。已合成了許多喜樹(shù)堿類似物以獲得具有低毒性和高溶解度的化合物。目前，有兩種藥物用于臨床實(shí)踐，即CPT-ll和托泊替康。其他衍生物，諸如貝洛替康、盧比替康、依沙替康、吉馬替康、培加替康、勒托替康、karenitecin、阿非替康、高喜樹(shù)堿、二氟替康及許多其他的衍生物，正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)。化合物CPT-ll是10-羥基-7-乙基喜樹(shù)堿(常稱作SN-38)的高度易溶的前藥，被批準(zhǔn)用于多種實(shí)體腫瘤和腹水(結(jié)直腸、皮膚、胃、肺、宮頸、卵巢、非霍奇金淋巴瘤)的治療。托泊替康是可溶于生理溶液的化合物，對(duì)肺、胃、肝、卵巢、乳腺、前列腺、食管、直腸、軟組織肉瘤、頭和頸、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、慢性和急性髓性白血病這些腫瘤是有活性的。但是托泊替康顯示重要的副作用諸如嗜中性白血球減少癥和血小板減少癥。勒托替康是更易溶的衍生物，對(duì)頸、卵巢、乳腺、結(jié)直腸和肺部微細(xì)胞瘤這些腫瘤具有活性。但是，勒托替康亦具有血液毒性。盧比替康是口服使用的有效對(duì)抗胰、卵巢和乳腺腫瘤的前藥。喜樹(shù)堿及其類似物，作為完全拓樸異構(gòu)酶I抑制劑，對(duì)常規(guī)藥物、包括拓樸異構(gòu)酶n抑制劑有耐藥性的腫瘤有效；在整個(gè)細(xì)胞周期期間保持高的拓樸異構(gòu)酶水平；未誘導(dǎo)多藥耐藥性(Pgo或MRP)或由酶介導(dǎo)的脫毒代謝。目前，研究集中于具有比目前使用的藥物更低毒性的拓樸異構(gòu)酶I的新抑制劑。開(kāi)環(huán)喜樹(shù)堿衍生物顯示出高的蛋白結(jié)合(特別是與白蛋白)和低的腫瘤組織中的分布。結(jié)果，產(chǎn)物在身體中蓄積，對(duì)腫瘤的作用不佳。相反地，內(nèi)酯形式的高親脂性促進(jìn)喜樹(shù)堿衍生物與細(xì)胞膜的吸附，特別是紅細(xì)胞，影響了組織/血漿分布比。因此，目前研究集中于兩種可選擇的方法a)設(shè)計(jì)仍具有好的溶解度的低蛋白結(jié)合產(chǎn)品；b)設(shè)計(jì)在極低劑量下具有治療作用的高效產(chǎn)品。在7、9、10和11位的修飾通常證實(shí)可^皮良好耐受，同時(shí)不影響DNA-拓樸異構(gòu)酶I-喜樹(shù)堿三元復(fù)合物的穩(wěn)定性，其形成產(chǎn)生所述化合物的抗腫瘤活性。具有20R構(gòu)象的產(chǎn)物據(jù)證實(shí)與具有20S構(gòu)象-與天然構(gòu)象一致的產(chǎn)物相比無(wú)活性或活性很低。通常，認(rèn)為5位的修飾不利于三元復(fù)合物的生成，但是，已經(jīng)報(bào)道吡啶酮環(huán)D和E的修飾對(duì)產(chǎn)物的活性不利。
發(fā)明內(nèi)容在第一方面，本發(fā)明涉及通式I的喜樹(shù)堿衍生物、其可藥用鹽、異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映異構(gòu)體和相應(yīng)的混合物(I)其中.-R為F、CI、Br、I、-N3、NH2、-NR，R"、-COOR，、-CONR'R"、-NHR"'誦NR，R'，，其中R，、R"和R"，可為H、烷基、芳基、芳基烷基、酰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基；Rl為烷基、氨基烷基、羥基烷基、腈、烷氧基亞氨基(alkoxymino)、芳氧基亞氨基(aryloxymino)、甲硅烷基烷基；R2為氫、羥基、烷氧基、氨基烷基；R3為氫，任選保護(hù)的羥基、烷氧基、氨基烷基；其中直鏈或支鏈的烷基、酰基、烷氧基、氨基烷基或烷氧基亞氨基基團(tuán)可包舍1至8個(gè)，優(yōu)選1至4個(gè)碳原子，且芳基和芳氧基基團(tuán)可包含5至10個(gè)碳原子。本發(fā)明的化合物顯示低蛋白結(jié)合并具有良好的溶解度和在非常低的劑量下的高的藥效。用于制備本發(fā)明的化合物的優(yōu)選的合成途徑示于方案中并包含以下步驟a)前體羥基基團(tuán)的保護(hù)；b)通過(guò)碳負(fù)離子生成并與親電試劑反應(yīng)在5位衍生化；c)羥基基團(tuán)的脫保護(hù)；在方案中，R、Rl、R2和R3具有上文所述的含義，且PG為羥基保護(hù)基團(tuán)。前體可以是可商購(gòu)的或如文獻(xiàn)所述地得到。5位的碳負(fù)離子可通過(guò)用強(qiáng)有機(jī)堿、優(yōu)選LiHMDS處理前體獲得。碳負(fù)離子原位與親電試劑反應(yīng)，親電試劑諸如來(lái)源于鹵素或氮雜二甲酸酯、異氰酸酯、氯羰基衍生物、甲M?；B氮化物。甲硅烷基和氨基甲酸酯或其組合優(yōu)選為羥基保護(hù)性基團(tuán)。對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行廣譜腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性測(cè)定。以實(shí)施例的方式，報(bào)道了涉及兩個(gè)式(I)化合物對(duì)NCI-H460細(xì)胞系(NSCL癌)的細(xì)胞毒性數(shù)據(jù)，使用喜樹(shù)堿及藥物托泊替康和SN-M作為參比標(biāo)準(zhǔn)名稱結(jié)構(gòu)式NCI-H460IC50(|ig/mL)細(xì)胞計(jì)數(shù)喜樹(shù)堿C20H16N2O40.115±0.0174托泊替康MW=421H0^^(0C23H2膽05^0.63±0.44s廳隨=392.42H^3^c22h20n2o500.0865±0.00495-F-喜樹(shù)堿MW=366-/oC20H15FN2O4異構(gòu)體l:20.6士6.8異構(gòu)體2:20±5.1(繼續(xù))5-N3-喜樹(shù)堿"3mw=389ho"^"~~<Pc20h15n5o4_/》異構(gòu)體1:4.18士1.2異構(gòu)體2:2，59士0.75-二-叔-丁氧基皿-肼基喜樹(shù)堿,=578.63HO"^^C30H34N4O8~7^異構(gòu)體1:50±16異構(gòu)體2:>100<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>在DNA裂解測(cè)定中測(cè)定活性濃度和損傷持續(xù)性評(píng)價(jià)最有活性的化合物(見(jiàn)"實(shí)施例，，節(jié))。式(I)的衍生物在阻斷DNA復(fù)制中與參比標(biāo)準(zhǔn)(特別地為托泊替康和喜樹(shù)堿)相比令人驚異地顯示較高的持續(xù)性，同時(shí)保持有效的細(xì)胞毒活性。另一方面，本發(fā)明涉及包含式(I)化合物連同藥物可接受的載體與賦形劑的藥物組合物。適合口服或腸胃外施用的式(I)化合物的藥物形式可以是固體，優(yōu)選為膠嚢、片劑和顆粒，或液體，優(yōu)選為可注射的或輸液溶液。適合配成制劑的本發(fā)明的化合物可用于實(shí)體瘤和白血病的治療，特別是肺、卵巢、乳腺、胃、肝、前列腺、軟組織肉瘤、頭和頸、食管、胰、結(jié)腸、直腸、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、慢性和急性髓細(xì)胞白血病的腫瘤。實(shí)施例實(shí)施例I-20-OTES-喜樹(shù)堿將喜樹(shù)堿(0.100g,0.287mmol)在惰性氣氛下混懸于無(wú)水二甲基甲酰胺(3mL)中，得到的混懸液加以咪唑(0.980g，1.44mmo1)。將混合物攪拌10分鐘，接著向其中滴入氯化三乙基甲硅烷(TES-Cl)(0.1MmL，1.15mmo1),接著加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.040g，0.287mmo1)。46h后，真空蒸發(fā)反應(yīng)混合物，(TLC控制試劑的完全消失，展開(kāi)劑為CH2Cl2/MeOH=30/1)。隨后將固體再溶于CH2C12中并用H20和飽和NH4C1洗滌。水相用CH2Cl2(2xlOmL)萃取。合并有機(jī)相并用Na2S04干燥，過(guò)濾并真空濃縮，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.133g，0.287mmol)。NMR(CDC13，400MHz)S8.37(s，1H，Ar，H國(guó)7)，8.25(d，1H，/=8.4Hz,Ar)，7.92(d，1H，/=8.0Hz，Ar)，7.82(t，1H，/=8.0Hz，Ar)，7.65(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.57(s，1H，H-14),5.67(d，1H，/=16.4Hz,H-17),5.29(s,2H，H-5)，5.25(d，1H，/=16.4Hz，H-17)，2.00-1.84(m，2H，H-19)，1.03-0.93(m，12H)，0.80-0.71(m,6H)。13CNMR(CDC13，100MHz)3171.7，157.6，152,5，151.5，149.0，145.9，130.9，130.4，130.0，128.4，128.1，128.0，127.9，118.9，94.4，75.3，66.0,50.0，33.2，7.9，7.2，6.4。實(shí)施例II-20-OTESSN-38將SN-38(0.100g,0.255mmol)在惰性氣氛下混懸于無(wú)水二甲基甲酰胺(5mL)中，得到的混懸液加以咪唑(0.08^，l.28mmol)。將混合物攪拌10分鐘，接著向其中滴入氯化三乙基甲硅烷(TES-Cl)(0.r71mL,1.02mmol)，接著加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.031g,0.255mmol)。52h后，真空蒸發(fā)反應(yīng)混合物，用TLC監(jiān)控(CH2Cl2/MeOH-10/l)試劑的完全消失。隨后將固體再溶于CH2C12中并用H20和飽和NH4C1洗滌。水相用CH2Cl2(2xl0mL)萃取。合并有機(jī)相并用Na:jS04干燥，過(guò)濾并真空濃縮，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.121g,0.240mmo1，94%)。&匪R(CDC13，400MHz)69.26(brs,IH，OH)，8.14(d，1H,/=9.2Hz，Ar，H畫(huà)12)，7.58(s，1H，H-14)，7.49(dd，1H，^=9.2Hz/2=2.2Hz，H-ll)，7.46(d，1H,/=2.2Hz，H-9)，5.70(d，1H，/=16.5Hz,H-17),5.28(d，1H，/=16.5Hz，H畫(huà)17)，5.23(s,2H，H攀5)，3.05(q，2H，/=7.5Hz),1.97-1.81(m，2H，H-19),1.32(t，3H，/=7.5Hz，Me)，0.98-0.88(m，12H)，0.77-0.68(m，6H)。13CNMR(CDC13，100MHz)&172.1，157.9，10156.6，152.1，149.0，146.7，144.6，143.6，131.9，128.7，126.9，122.8，117.9,105.5，98.5，75.4，65.9，49.5，32.9，23.2，13.5，7.8，7.2，6.4。實(shí)施例III-10-OTBDMS畫(huà)20畫(huà)OTESSN-38將20-OTESSN-38(0.121g，0.240mmol)在惰性氣氛下溶解于CH2Ch/THF二l:l(8mL)的無(wú)水混合物中。接著向其中加入咪唑(0.081g，1.20mmo1)，10分鐘后加入叔丁基二甲基氯化甲硅烷(TBDMS-Cl)(0.144mg,0.957mmo1)，然后加入4-二甲基氨基處咬(DMAP)(0.029g，0.240mmo1)。18h后，真空蒸發(fā)反應(yīng)混合物，TLC監(jiān)控(己烷/AcOEt-l/l)試劑的消失。然后將固體再溶于CH2C12中并用H20和飽和NH4C1洗滌。水相用CH2Cl2(2xl0mL)萃取，合并有機(jī)相，用Na2S04干燥，過(guò)濾并真空濃縮。殘留物用閃式色譜(SiO;j,己烷/AcOEt=1/1)純化，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.127g，0.205mmo1，85%)。&匪R(CDC13，400MHz)68.14(d，1H，/=8.8Hz，Ar,H國(guó)12)，7.49(s，1H，H-14),7.40(d，1H,/=2.2Hz，H-9)，7.38(dd，1H，=8.8Hz/2=2.5Hz，H-ll)，5.67(d，1H，/=16.5Hz，H陽(yáng)17)，5.25(d，1H，/=16.5Hz，H-17),5.23(s，2H，H-5)，3.11(q，2H，/=7.6Hz)，1.99-1.82(m，2H，H-19)，1.38(t,3H，/=7.6Hz，Me)，1.04(s，9H)，1.00-0.92(m，12H)，0.78-0.69(m，6H)，0.30(s，6H)。13CNMR(CDC13，100MHz)S171.9157.7，155.1，151.5，150.1，146.8，145.6，143.5，132.2，128.2，126.9，125.9,118.0，110.5，97.7，75.4，66.0，49.3，33.2，25.6，23.1，18.3，13.7，7.9，7.2，6.44.3。實(shí)施例IV國(guó)20-OTES托泊替康將托泊替康(0.100g，0.238mmol)在惰性氣氛下混懸于無(wú)水二甲基甲酰胺(5mL)中，得到的混懸液加以咪唑(0.081g,1.19mmol)。將混合物攪拌10分鐘，接著向其中滴入氯化三乙基甲硅烷(TES-a)(0.160mL，ii0.952mmol)，接著加入4-二曱基氨基吡啶(DMAP)(0.029g,0.238mmol)。52h后，真空蒸發(fā)反應(yīng)混合物，用TLC監(jiān)控(CH2Cl2/MeOH-10/l)試劑的完全消失。隨后將固體再溶于CHC13、H20和飽和NH4C1中，水相用CHCl3(2xl5mL)萃取。合并有機(jī)相并用Na2S04干燥，過(guò)濾并真空濃縮，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.120g，0.224mmo1，94%)。&匪R(CDC13，400MHz)59.65(brs,1H)，8.26(s，1H，Ar，H-7)，8.14(d，1H，/=8.8Hz，Ar，H-12),7.80(d，1H，/=8.8Hz，Ar，H-ll)，7.58(s，1H，H-14)，5.67(d，1H，/=16.5Hz，H國(guó)17)，5.25(d，1H，《/=16.5Hz，H-17),5.20(s，2H，H-5)，4.71(s，2H)，2.81(s，6H，2Me)，1.97-1.81(m，2H，H-19),0.98-0.88(m,12H)，0.77-0.68(m，6H)。13C醒R(CDC13，100MHz)S172.1，157.9，156,6，152.1，150.8，146.8，144.3，134.3，131.2，129.9，127.9，123.0.118,9，110.1，98.5，75.4，65.9，51.1,50.0.43.1，32.9，7.8，7.2，6.4。實(shí)施例V-10-OTBDMS20-OTES托泊替康將20-OTES托泊替康(0.120g，0.224mmol)在惰性氣氛下溶解于CH2C12/THF=1:1無(wú)水混合物(8mL)中。接著加入咪唑(0.076g，l，12mmol)，10分鐘后，加入叔丁基二甲基氯化曱硅烷(TBDMS-Cl)(0.135mg,0.896mmol)，接著加入4-二曱基氨基吡啶(DMAP)(0.027g，0.224mmol)。21h后，真空蒸發(fā)反應(yīng)混合物，用TLC(己烷/AcOEt-l/l)監(jiān)控試劑的消失。然后將固體再溶于CHC13、H20和飽和NH4C1中，水相用CHCl3(2xl5mL)萃取。合并有機(jī)相并用Na2S04干燥，過(guò)濾并真空濃縮。殘留物用閃式色譜(SiO"己烷/AcOEt-l/l)純化，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.116g，0.179mmo1，80%)。&匪R(CDC13，400MHz)S8.26(s，1H，Ar，H-7),8.14(d，1H，/=8.8Hz，Ar，H-12),7.81(d，1H，/=8.8Hz，Ar，H-ll),7.59(s，1H，H-14)，5.64(d，1H，/=16.5Hz，H-17)，5.22(d，1H，/=16.5Hz，H國(guó)17)，5.19(s，2H，H-5)，4.71(s，2H)，2.81(s,6H，2Me)，1.97-1.81(m，2H,H-19),1.04(s，9H)，0.98-0.88(m，12H)，0.77-0.68(m，6H)，0.30(s，6H)。13C醒R(CDCI3，100MHz)S171.7，157.7，155.1，151.5，150.0.146.8，144.3，134.3，131.2129.9，127.9，123.0，118.9，110.1，98.5，75.4，65.9，51.1，50.0.43.9，32.9，25.6，18.3，7.8，7.2，6.4，-4.3。實(shí)施例VI-20-OTES10-羥基喜樹(shù)堿的制備將10-羥基喜樹(shù)堿(0.100g，0.275mmol)在惰性氣氛下混懸于無(wú)水二甲基甲酰胺(5mL)中，得到的混懸液中加入咪唑(0.225g，3.31mmo1)。將混合物攪拌10分鐘，接著向其中滴入三乙基氯化曱硅烷(TES-Cl)(0.460mL，2.75mmo1)，接著加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.068g，0.550mmol)。24h后，真空蒸發(fā)反應(yīng)混合物，用TLC(CH2Cl2/MeOH-20/l)監(jiān)控試劑的完全消失。隨后將固體再溶于CH2Cl2+，并用H20和飽和NH4C1洗滌。水相用CH2Cl2(2xl0mL)萃取。合并有機(jī)相并用Na2S04干燥，過(guò)濾并真空濃縮，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.124g，0.259mmo1,94%)。ifl[NMR(CDC13+5%CD3OD，400MHz)38.10(s，1H,Ar，H-7)，8.05(d，1H，/=9.2Hz，Ar)，7.50(s，1H，H-14),7.39(dd，1H，^=9.2Hz/2=2.4Hz，H畫(huà)ll)，7.11(d，1H，/=2.2Hz，H-9)，5.60(d，1H，/=16.4Hz，H誦17)，5.21(d，1H，/=16.4Hz，H-17)，5.15(s，2H，H-5),1.97-1.81(m，2H，H-19)，0.98-0.88(m，12H)，0.76-0.68(m,6H)。13CNMR(CDC13+5%CD3OD，100MHz)5172.2，157.8，156.7，151.8，149.2，146.1,144.1，130.9，129.8,129.0，128.6,123.2,117.8，108.8，98.1，75.4,65.8,50.0，32.9，7.7，7.1，6.3。實(shí)施例VII-10-OTBDMS-20-OTES喜樹(shù)堿將10-羥基-20-OTES-喜樹(shù)堿(0.105g，0.219mmol)在惰性氣氛下溶解于CH2C12/THF=1:1無(wú)水混合物(4mL)中。接著加入咪唑(0.097g，1.42mmol)，10分鐘后，加入叔丁基二甲基氯化甲硅烷(TBDMS誦Cl)(0.164mg，l.lOmmol)，接著加入4-二甲基氨基p比咬(DMAP)(0.040g，0.329mmo1)。18h后，真空蒸發(fā)反應(yīng)混合物，用TLC監(jiān)控(環(huán)己烷/AcOEt二l/3)試劑的完全消失。隨后將固體再溶于CH2C12中，并用H20和飽和NH4C1洗滌。水相用CH2Cl2(2xl0mL)萃取。合并有機(jī)相并用Na2S04千燥，過(guò)濾并真空濃縮。殘留物用閃式色鐠(SK)2，環(huán)己烷/AcOEt-l/3)純化，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.117g，0.197mmo1，90%)。1HNMR(CDC13，400MHz)68.22(s，1H，Ar，H畫(huà)7)，8.13(d，1H，/=9.2Hz，Ar，H-12),7.51(s，1H，H畫(huà)14)，7.39(dd，1H，力=9.2Hz/2=2.8Hz，H-ll)，7.22(d，1H，/=2.8Hz，H-9)，5.66(d，1H，/=16.5Hz，H-17),5.25(s，2H，H-5)，5.24(d，1H，/=16.5Hz，H-17),1.99-1.82(m，2H，H國(guó)19)，1.03(s，9H)，1.00-0.92(m，12H)，0.78-0.69(m，6H)，0.29(s，6H)。13CNMR(CDC13，100MHz)6172.0，157.7，155.1，151.5，150.6，146.1，145.1，131.4，129.4，129.3，128.7，126.7，118.3，114.5,97.7，75.3，66.0，49.9，33.1，25.6，18.3，7.9，7.2，6.4，-4.3。實(shí)施例VIII-5-F-20-OTES-喜樹(shù)堿將喜樹(shù)堿20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(6mL)中，然后冷卻至-78。C，并向其中滴入1.0MLiHMDS在THF(0.260mL，0.260mmol)中的溶液。20分鐘后，加入無(wú)水THF(2mL)中的NFSI(0.089g，0.281mmo1)。國(guó)78。C2h后，使溫度升高至25。C，并通過(guò)TLC(己烷/AcOEt-l/2)監(jiān)控試劑的消失。觀察到兩種非對(duì)映異構(gòu)體的生成。室溫下3h后，加入飽和NH4C1終止反應(yīng)。水相用CH2Cl2(3xl5mL)萃取，并合并有機(jī)相，用Na:tS04干燥，過(guò)濾并真空濃縮。殘留物用閃式色譜,純化(Si02,環(huán)己烷/AcOEt^/l,然后2/1，最終1/1)，由此得到淡黃色固體狀的兩種異構(gòu)體的混合物(0.101g，0.210mmo1，97%)(異構(gòu)體比例為1:1)。通過(guò)進(jìn)一步的色譜處理分離兩種異構(gòu)體。洗脫順序如下14第一種非對(duì)映異構(gòu)體^匪R(CDC13，400MHz)88.52(s，1H，Ar，H-7)，8.25(d,1H，/=8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.87(t，1H，/=8.4Hz，Ar)57,69(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.47(d，1H，=61.2Hz，H-5)，7.45(s，1H,H誦14)，5.62(d，1H，/=16.8Hz，H隱17)，5.22(d，1H，/=16.8Hz，H畫(huà)17)，2.02-1.84(m，2H，H-19)，1.03-0.93(m,12H)，0.80-0.71(m，6H)。13C匪R(CDC13，100MHz)d171.4，157.5，152.3，151，1，150.2(d，/=1.5Hz)，150.3(d，/=1.5Hz)，143.6(d，/=5.3Hz)，133.7，131.7,130.2，128，9，128.4，127.9(d，/=15.0Hz)，126.3(d，15.0Hz)，121.8,98.9，93.8(d，=213.2Hz，C-5)，75.1，65.7，33.1，7.8，7.2，6.4。第二種非對(duì)映異構(gòu)體:1H醒R(CDC13，400MHz)68.51(s，1H，Ar，H國(guó)7)，8.25(d，1H,/=8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.87(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.68(t，1H，/=8.4Hz,Ar)，7.51(d，1H，Vhf=60.8Hz，H-5)，7.42(s，1H,H-14)，5.62(d，1H，/=17.2Hz,H-17)，5.20(d，1H，/=17.2Hz，H-17),2.02-1.82(m，2H，H-19),1.04-0.93(m，12H),0.80-0.71(m，6H)。13C匪R(CDC13，100MHz)3171.2，157.8，152.5，151.2，150.3，143.7，133.7(d，/=2.4Hz)，131.7，130.2，128.9，128.3，127.9(d，/=2.3Hz)，126.3(d，/=16.7Hz),121.8(d，/=1.5Hz)，99.0，93.8(d，1/CF=214.8Hz,C-5)，75.0，65.8，33.3，7.9，7.1，6.4。實(shí)施例IX-5-F-喜樹(shù)堿第一種非對(duì)映異構(gòu)體的制備將5-F-20-OTES-喜樹(shù)堿的第一種非對(duì)映異構(gòu)體(0.025g，0.052mmo1)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(5mL)中。接著向其中滴入Et3NOHF(0.060mL，0.368mmo1)。將反應(yīng)混合物室溫下反應(yīng)28h,用TLC監(jiān)控試劑的消失(己烷/AcOEt-l/2)。真空下?lián)]干溶劑，殘留物進(jìn)行色鐠處理(Si02，己烷/AcOEt-l/l)，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.019g，0.051mmo1,98%)。匪R(CDC13，400MHz)&8.52(s，1H，Ar，H畫(huà)7)，8.25(d，1H，J=8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.87(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.69(t，1H，/=8.4Hz,Ar)，7.59(s，1H，H-14)，7.46(d，1H，V附=61.2Hz，H誦5)，5.69(d，1H，/=16.8Hz，H-17)，5.26(d，1H，/=16.8Hz,H-17)，3.87(brs，1H，OH)，2.01-1.81(m，2H，H-19)，1.05(t，3H，/=7.6Hz,Me)。13C匪R(CDC13，100MHz)3173.5，157.6，151.1，151.0.150.2，144.1，133.9，131.9，130.0，129.0，128.5，127.8，126.4，121.7，98.8，93.8(d，Vcf=214.0Hz，C-5)，72.5，66.0，31.5，7.8。實(shí)施例X-5-F-喜樹(shù)堿第二種非對(duì)映異構(gòu)體的制備將5-F-20-OTES-喜樹(shù)堿的第二種非對(duì)映異構(gòu)體(0.025g，0.052mmo1)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(5mL)中，接著向其中滴入Et3N'3HF(0.060mL，0.368mmo1)。將反應(yīng)混合物室溫下反應(yīng)28h，用TLC監(jiān)控試劑的消失(己烷/AcOEt-l/2)。真空下?lián)]干溶劑，殘留物進(jìn)行色i普處理(Si02,己烷/AcOEt-l/l)，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.018g，0.050mmo1，97%)。^NMR(CDC13，400MHz)38.52(s，1H，Ar，H國(guó)7)，8.24(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.88(t，1H，/=8.4Hz,Ar)，7.69(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.56(s，1H，H-14)，7.51(d，1H，Vhf=60.4Hz，H-5)，5.69(d，1H，/=16.4Hz，H-17),5.25(d，1H，/=16.4Hz，H-17),3.87(brs,1H，OH)，1.98-1.78(m，2H，H-19),1.04(t，3H，/=7.6Hz，Me)。13CNMR(CDC13，100MHz)3173.3，157.7，151.2，151.2,150.2，144.2，133.8，131.9，130.0，129.0，128.5,127.8，126.4，121.6，98.9，93.7(d，Vcf=214.0Hz，C-5)，72.5，66.1，31.6，7.8。實(shí)施例XI-5-N3-20-OTES-喜樹(shù)堿的制備將喜樹(shù)堿20-OTES(0.100g,0.216mmol)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(6mL)中，然后冷卻至-78。C，并向其中滴入1.0MLiHMDS在THF(0.260mL，0.260mmol)中的溶液。20分鐘后，加入無(wú)水THF(2mL)中的甲^t?；B氮化物(TsN3)(0.055g，0.281mmol)。在-78。C下2h后，寸吏溫度升高至25°C，并通過(guò)TLC監(jiān)控試劑的消失(己烷/AcOEt-2/1)。，見(jiàn)察到兩種非對(duì)映異構(gòu)體的生成。室溫下2h30min后，加入飽和NH4C1終止反應(yīng)。水相用CH2Cl2(3xl5mL)萃取，并合并有機(jī)相，用Na2S04干燥，過(guò)濾并真空濃縮。由兩種非對(duì)映異構(gòu)體組成的殘留物用閃式色鐠(Si02，環(huán)己烷/AcOEt二3/1，然后2/1，最終1/1)純化，由此得到淡黃色固體狀的兩種異構(gòu)體的混合物(0.106g，0.210mmo1，97%)(異構(gòu)體比例為1:1)。通過(guò)進(jìn)一步的色i普處理分離兩種異構(gòu)體。洗脫順序如下第一種非對(duì)映異構(gòu)體^匪R(CDC13，400MHz)68.45(s，1H，Ar，H-7)，8.25(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.95(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.86(t,1H，/=8.4Hz,Ar)，7.68(t，1H,/=8.4Hz，Ar)，7.49(s，1H，H-14),6.97(s，1H，H-5)，5.65(d，1H，/=16.8Hz，H畫(huà)17)，5.26(d，1H，/=16.8Hz，H-17),2.01-1.84(m，2H，H-19)，1.03-0.94(m，12H)，0.80-0.71(m，6H)。13C匪R(CDC13，100MHz)S171.6,158.3，152.2,150.8，150.0，144.0，132.9，131.4，130.1，128.6，128.3，128.2，128.1，120.8，98.7,75.4，75.2，65.7，33.1，7.9，7.2，6.4。第二種非對(duì)映異構(gòu)體NMR(CDCb，400MHz)38.45(s，1H，Ar，H-7)，8.24(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.95(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.86(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.68(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.46(s，1H，H-14)，6.99(s，1H，H-5)，5.66(d，1H，/=16.8Hz，H畫(huà)17)，5.22(d，1H，/=16.8Hz，H-17),2.02-1.84(m，2H，H-19),1.03-0.94(m，12H)，0.80-0.71(m，6H)。13CNMR(CDC13，100MHz)8171.4，158.4，152.3，150.9，150.0，144.0，132.9，131.4，130.1，128.6，128.3，128.2,128.1，120.8，98.7，75.3，75.1,65.8，33.3，7.9，7.2，6.4。實(shí)施例XII-5-N3-喜樹(shù)堿第一種非對(duì)映異構(gòu)體的制備將5-N3-20-OTES-喜樹(shù)堿的非對(duì)映異構(gòu)體l(0.070g，0.139mmol)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(6mL)中，接著向其中滴入Et3N'3HF(0.170mL，1.016mmol)。將反應(yīng)混合物室溫下反應(yīng)26h，用TLC(己烷/AcOEt-l/l)監(jiān)控試劑的消失。真空下?lián)]干溶劑，殘留物用閃式色i普(Si02,己烷/AcOEt-l/l)純化，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.053g，0.136mmo1,98%)。HNMR(CDC13，400MHz)68.44(s，1H，Ar，H-7)，8.24(d，1H，/=8.4Hz，Ar),7.93(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.85(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.67(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.63(s，1H，H-14),6.97(s，1H，H-5)，5.70(d，1H，/=16.8Hz，H-17),5.29(d，1H，/=16,8Hz,H-17),3.99(brs，1H，OH)，2.00-1.84(m，2H，H-19),1.04(t，3H,/=7.6Hz，Me)。13CNMR(CDC13，100MHz)S173.6，158.3，150.8，150,7，149.8，144.4，133.1，131.5，129.9,128.6,128.3，128.3，128.1，120.6，98，6，75.4，72.7，66.0，31.5，7.8。實(shí)施例XIII-5-N3-喜樹(shù)堿第二種非對(duì)映異構(gòu)體的制備5-N3-20-OTES-喜樹(shù)堿的非對(duì)映異構(gòu)體2(0.055g，0.109mmol)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(6mL)中，接著向其中滴入Et3N.3HF(0.135mL，0.820mmol)。反應(yīng)混合物室溫下反應(yīng)26h，用TLC監(jiān)控起始試劑的消失(己烷/AcOEt4/1)。真空下?lián)]干溶劑，殘留物通過(guò)閃式色鐠(SK)2，己烷/AcOEt^/l)純化，由此得到淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物(0.042g,0.107mmol,98%)。NMR(CDC13，400MHz)38.45(s，1H，Ar，H-7)，8.23(d，1H，/=8.4Hz，Ar),7.95(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.85(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.68(t，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.60(s，1H，H-14)，7.00(s，1H，H畫(huà)5)，5.74(d，1H，/=16.8Hz，H-17),5.28(d，1H，/=16.8Hz,H-17),3.86(brs，1H,OH)，1.98-1.82(m，2H，H-19),1.04(t，3H，/=7.6Hz，Me)。13CNMR(CDC13，100MHz)S173.4，158.4,150.9,150.7，149.8,144.5，133.0，131.5,129.9，128.6，128.4,128.3,128.1，120.6,98.6，75.3，72.6，66.1，31.6，7.8。實(shí)施例XIV-5-NH2-喜樹(shù)堿的制備18將5-N3-20-OH-喜樹(shù)堿的非對(duì)映異構(gòu)體2(0.050g，0.129minol)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(1.5mL)和無(wú)水MeOH(6mL)的混合物中，接著加入Pd/C(14mg10%)，進(jìn)行兩個(gè)周期的真空/112(112氣球壓力)。將反應(yīng)混合物室溫下反應(yīng)3h,用TLC(己烷/AcOEt-l/3)監(jiān)控試劑的消失，然后通過(guò)硅藻土過(guò)濾并用CH2CI2(2xl5mL)洗滌。真空下?lián)]千溶劑。反應(yīng)粗品的4NMR譜顯示所需產(chǎn)物以C5位上兩種差向異構(gòu)體的1:1混合物存在。閃式色譜(Si02，CH2Cl2/MeOH=35/l然后25/1)可回收兩種非對(duì)映異構(gòu)體的混合物(0.046g，0.126mmo1,98%)。NMR(CDC13，400MHz)S8.48(s，1H，Ar，H-7)，8.228.17(m，1H，Ar)，7.95-7.90(m，1H，Ar)，7.85-7.78(m，1H，Ar)，7.68-7.60(m，1H，Ar)，7.58(s，0.5H，H-14)，7.54(s，0.5H，H-14)6.50(s,0.5H，H-5)，6.47(s,0.5H，H-5)，5.74-5.64(m,1H，H畫(huà)17)，5.28-5.22(m,1H，H畫(huà)17)，4.00-2.40(brs，3H，OH+NH2)，1.98-1.82(m，2H，H-19),1.07-1.01(m，3H，Me)。13C匪R(CDC13，100MHz)3173.8(2C)，158.5(2C),151.2(2C)，150.4(2C)，149.7(2C)，144.5(2C)，132.7(2C),131.0(2C)，129.8(2C)，128.5(2C)，128.3(2C)，128.0(2C)，127.8(2C)，120.2(2C)，113.8(2C)，97.7(2C),72.7(2C)，66.3，66.0，31.5(2Q，7.8，7.8。實(shí)施例XV-5-二-叔-丁氧基羰基肼基-20-OTES-喜樹(shù)堿將喜樹(shù)堿20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(6mL)中，然后冷卻至-78。C,并向其中滴入1.0MLiHMDS在THF(0,281mL，0.281mmol)中的溶液。20分鐘后，加入在無(wú)水THF(2mL)中的偶氮二甲酸二叔丁酯(DTBAC)(0.075g,0.324mmol)。-78°C下4h后，用TLC(己烷/AcOEt-3/l)監(jiān)控試劑的消失。觀察到生成了兩種非對(duì)映異構(gòu)體。加入飽和NH4C1終止反應(yīng)。水相用CH2Cl2(3xl5mL)萃取，并合并有機(jī)相，用Na2S04干燥，過(guò)濾并真空濃縮。殘留物用閃式色譜純化(Si02，環(huán)己烷/AcOEt-3/1)，由此得到兩種異構(gòu)體的混合物(0.145g，0.210mmo1，97%)。通過(guò)進(jìn)一步的色i普處理分離兩種異構(gòu)體。洗脫順序如下第一種非對(duì)映異構(gòu)體！HNMR(CDC13，400MHz)38.80(brs，1H，Ar)，8.23(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，8.01(brd，1H，Ar)，7.90-7.71(m，2H，Ar)，7.70-7.45(m，2H,Ar+H-14)，6.52(brs，1H，H-5)，5.61(d，1H，/=16.8Hz，H國(guó)17)，5.23(d，1H，/=16.8Hz，H-17),2.03-1.81(m，2H，H畫(huà)19)，1.79-1.08(brs,18H)，1.06-0.92(m，12H)，0.80-0.70(m，6H)。13CNMR(CDC13，100MHz)S171.7，157.8，155.5，155.5，152.0，152.0，151.2，149.4，145.0，132.1,130.6，130.0，128.7，128.4，127.9，119.9，98.2，82.7，81.5，79.7，75.2，65.7,33.2，28.3,27.6，7.7，7.2，6.4。第二種非對(duì)映異構(gòu)體，HNMR(CDC13，400MHz)38.79(brs，lH，Ar)，8.23(d，1H，/=8.4Hz，Ar)，8.01(brd，1H，Ar)，7.85-7.76(m，2H，Ar)，7.65(brt，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.52(s，1H，H-14),6.54(brs，1H，H-5)，5.61(d，1H,/=16.8Hz，H-17),5.22(d，1H，/=16.8Hz，H-17),2.03-1.82(m，2H,H-19),1.76-1.08(brs，18H)，1.04-0.92(m，12H),0.80-0.70(m，6H)。13CNMR(CDC13，100MHz)5171.5，157.9，155.5,155.5，152.3，152.0.151.2，149.4，145.1，132.1，130.6，130.0，128.7，128.4，127.9，119.9,98.2，82.9，81.5，79.6，75.2，65.8，33.3，28.3，27.4，7.8，7.2，6.4。實(shí)施例XVI-5-二-叔-丁氧基羰基肼基-喜樹(shù)堿第一種非對(duì)映異構(gòu)體的制備將5-二-^-丁氧基羰基肼基-20-OTES-喜樹(shù)堿(0.050g，0.072mmol)第一種非對(duì)映異構(gòu)體在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF^mL)中，接著向其中滴入Et3N'3HF(0.088mL，0.542mmol)。反應(yīng)混合物室溫下反應(yīng)35h，用TLC監(jiān)控試劑的消失(己烷/AcOEt-3/2)。真空下?lián)]干溶劑，殘留物用閃式色譜(SK)2，己烷/AcOEt-3/2)純化，由此得到淡黃色固體狀的所需化合物(0.041g，0.071mmol，98%)。產(chǎn)物通過(guò)CH2Ch/戊烷-l/50結(jié)晶進(jìn)一步純化。'HNMR(CDC13，400MHz)58.77(brs，1H，Ar)，8.16(brd，1H,/=8.0Hz，Ar)，7.97(brs，1H，Ar)，7.86-7.50(m，4H，Ar)，6.51(brs，1H，H-5)，5.66(d，1H，/=16.4Hz，H-17),5.24(d，1H，/=16.4Hz，H-17)，3.86(brs，1H，OH)，2.00-1.80(m,2H，H-19),1.79-1.13(brs，18H)，1.03(t，3H，/=7.6Hz，Me)。13CNMR(CDC13，100MHz)S173.7，157.9，155.5,155.5，152.1,151.3，150.7，149.6，145.7，132.3，130.7，129.9，128.7，127.9，127.6，120.0，97.9，82.8，81.6,79.7，72.7,66.1，31.8,28.3，27.7，7.7。實(shí)施例XVII-5-二-叔-丁氧基羰基肼基-喜樹(shù)堿第二種非對(duì)映異構(gòu)體的制備5-二-々-丁氧基羰基肼基-20-OTES-喜樹(shù)堿(0.050g，0.072mmol)第二種非對(duì)映異構(gòu)體在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(4.5mL)中，接著向其中滴入Et3N*3HF(0.088mL，0.542mmol)。反應(yīng)混合物室溫下反應(yīng)35h,用TLC監(jiān)控試劑的消失(己烷/AcOEt:3/2)。真空下?lián)]千溶劑，殘留物用閃式色譜(SK)2，己烷/AcOEt-3/2)純化，由此得到淡黃色固體狀的所需化合物(0.040g,0.069mmo1，96°/。)。產(chǎn)物通過(guò)02<:12/戊烷=1/50結(jié)晶進(jìn)一步純化。&醒R(CDC13，400MHz)68.79(brs，1H，Ar)，8.22(brd，1H，/=8.4Hz，Ar)，7.99(brs，1H，Ar)，7.88-7.50(m，4H，Ar)，6.53(brs，1H,H畫(huà)5)，5.65(d，1H，/=16.4Hz，H-17),5.26(d,1H，/=16.4Hz，H-17)，3.80(brs，1H，OH)，2.00-1.80(m，2H，H-19)，1.79-1.13(brs，18H)，1.03(t，3H,/=7.2Hz，Me)。13C醒R(CDC13，100MHz)S173.6，157.9，155.4，155.4,152.1，151.3，150.8，149.5，145.6,132.3，130.8,129.8，128.7，127.9，127.8，119.8，98.0，83.0，81.5，79.7，72.7，66.3，31.8，28.3，27.7，7.8。實(shí)施例XVIII-5-二芐基氧基羰基肼基-20-OTES-喜樹(shù)堿的制備將喜樹(shù)堿20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(6mL)中，然后冷卻至-78。C，并向其中滴入1.0MLiHMDS在THF(0.281mL，0.281mmol)中的溶液。20分鐘后，向其中加入在無(wú)水THF(2mL)中的偶氮二甲酸二節(jié)酯(0.097g，0.324mmol)。-78°C下3h后，使溫度升高至2S。C并用TLC(己烷/AcOEt二3/l)監(jiān)控試劑的消失。觀察到生成了兩種非對(duì)映異構(gòu)體。室溫90分鐘后，加入飽和NBUC1終止反應(yīng)。水相用CH2Cl2(3xl5mL)萃取，并合并有機(jī)相，用Na2S04干燥，過(guò)濾并真空濃縮。殘留物用閃式色鐠(Si02，環(huán)己烷/AcOEt-4/1然后7/2)純化，由此得到淡黃色固體(0.161g，0.212mmo1，98%)。通過(guò)進(jìn)一步的色譜處理分離兩種異構(gòu)體。洗脫順序如下第一種非對(duì)映異構(gòu)體NMR(CDC13，400MHz)S8.70(brs，1H，Ar),8.39(brs1H，Ar)，8.22(brd，1H,/=7.6Hz，Ar)，7.95(brd，1H，/=7.6Hz，Ar)，7.83(brt,1H，/=7.6Hz，Ar)，7.65(brt，1H，/=7.6Hz，Ar)，7.64-7.00(m，11H，Ar+H-14),6.49(brs，1H，H-5)，5.57(d，1H，/=16.4Hz，H-17),5.47-4,44(m，5H),1.98-1.82(m，2H，H-19),1.02-0,89(m，12H)，0.80-0.70(m，6H)。13CNMR(CDC13，100MHz)S171.6,158.0.156.3，156.3，153.0，152.2，151.0,149.6，144.8，135.3，132.1，130.6，130.0，128.6-127.8(11C)，119.9，98.4，79.5，75.2，68.4，67.9,65.6，33.0，7.9，7.2，6.4。第二種非對(duì)映異構(gòu)體NMR(CDC13，400MHz)&8.85(brs，1H，Ar)，8.58(brs1H，Ar)，8.20(brs，1H，Ar)，7.93(brs，Ar)，7.81(brt，1H,/=7.6Hz,Ar)，7.63(brt,1H，/=7.6Hz，Ar)，7.56-6.90(m，11H，Ar+H-14),6.52(brs，1H，H-5)，5.55(d，1H，J=16.8Hz，H-17),5.44-4.71(m,5H)，1.98-1.80(m，2H，H-19)，1.05-0.90(m，12H)，0.81-0.70(m，6H)。13CNMR(CDC13，100MHz)S171,5，157.9，156.4，156.4，152.9，152.4,150.9，149.4，144.8，135.3，132.1，130.6，129.9，128.6-127.8(11C),119,9，98.5,79.3，75.2,68.4，67.8，65.6,32.9,7.8,7.2，6.4。實(shí)施例XIX-5-二千基氧基羰基肼基-喜樹(shù)堿第一種非對(duì)映異構(gòu)體的制備將5-二芐基氧基羰基肼基-20-OTES-喜樹(shù)堿第一種非對(duì)映異構(gòu)體(O.MOg,0.1Mmmol)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(6mL)中，接著向其中滴入Et3N*3HF(0.225mL,1.380mmol)。反應(yīng)混合物室溫下反應(yīng)52h,用TLC監(jiān)控試劑的消失(己烷/AcOEt^1/3)。真空下?lián)]千溶劑，殘留物用閃式色i普(Si02，己烷/AcOEt^/l，然后2/3)純化，由此得到淡黃色固體(0.113g，0.175mmo1，95%)。產(chǎn)物通過(guò)12<:12/戊烷=1/50結(jié)晶進(jìn)一步純化。1HNMR(CDCb，400MHz)88.67(brs，1H，Ar)，8.39(brs1H，Ar)，8.12(brd，1H，/=7.6Hz，Ar)，7.95(brs，1H，Ar)，7.74(brt，1H，/=7.6Hz，Ar)，7.65-6.66(m，12H,Ar+H畫(huà)14)，6.48(brs，1H,H國(guó)5)，5.55(d，1H，/=16.0Hz,H-17)，5.42-4.44(m，5H)，3.86(brs，1H，OH)，1.92-1.72(m，2H，H-19)，0.95(t，3H，/=7.6Hz，Me)。13C匪R(CDC13，100MHz)S173.5,158.0，156.2，156.0，153.0，150.9，150.9，149.5,145.3，135.4，132.2，130.7，129.8,128.7-127.8(11C),119.9，98.2，79.6，72.7，68.5，68.0，65.9,31.6，7.8。實(shí)施例XX-5-二千基氧基羰基肼基-喜樹(shù)堿第二種非對(duì)映異構(gòu)體的制備將5-二千基氧基羰基肼基-20-OTES-喜樹(shù)堿的第二種非對(duì)映異構(gòu)體(0.140g，0.184mmol)在惰性氣氛下攪拌溶解于無(wú)水THF(6mL)中，接著向其中滴入Et3N*3HF(0.150mL，0.921mmol)。反應(yīng)混合物室溫下反應(yīng)55h，用TLC(己烷/AcOEt-3/2)監(jiān)控試劑的消失。真空下?lián)]干溶劑，殘留物用閃式色譜(Si02,己烷/AcOEt-l/l)純化，由此得到淡黃色固體狀的所需化合物(0.113g，0.175mmo1，95%)。產(chǎn)物通過(guò)<:112(:12/戊烷=1/50結(jié)晶進(jìn)一步純化。&畫(huà)R(CDC13，400MHz)S8.71(brs，1H，Ar)，8.34(brs1H，Ar)，8.18(brs，1H，Ar)，7.94(brs,1H，Ar)，7.79(brt，1H，/=7.6Hz，Ar)，7.70-6.70(m，12H,Ar+H-14),6.52(brs，1H,H-5)，5.53(d，1H，/=2316.4Hz，H國(guó)17)，5.44-4.48(m，5H)，3.87(brs，1H，OH)，1.90-1.70(m，2H，H-19),0.99(t，3H，/=7.6Hz，Me)。13CNMR(CDC13，100MHz)S173.4，158.0，156.3，156.1,153.0，151.0,150.9，149.6，145.3，135.5，132.3,130.8，129.8，128.7-127.8(11C)，119.8，98.4，79.5，72.7，68.5，67.8，66.0.31.6，7.7。實(shí)施例XXI-細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的測(cè)定源于人體大細(xì)胞肺腫瘤的H460細(xì)胞在含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。細(xì)胞敏感性通過(guò)在1或72hr藥物暴露后的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制測(cè)定進(jìn)行確定。收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞并植入6-孔板中，試驗(yàn)雙份。植板二十四小時(shí)后，將細(xì)胞暴露于藥物，并在暴露于藥物72小時(shí)后用庫(kù)爾特計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)，用于確定ICso。ICso定義為與未處理的對(duì)照生長(zhǎng)比較，細(xì)胞生長(zhǎng)被抑制50%的濃度。實(shí)施例XXII-拓樸異構(gòu)酶-I-依賴的DNA;皮裂測(cè)定DNA破裂使用751-bpBamHI-EcoRIDNASV40純化凝膠進(jìn)行確定(BerettaGL，BinasehiM，ZagniAND,CapuaniL，CapranicoG.TetheringatypeIBtopoisomerasetoaDNAsitebyenzymefusiontoaheterologoussite-selectiveDNA-bindingproteindomain.CancerRes1999;59:3689-97)。DNA碎片僅在3，標(biāo)記。DNA破裂反應(yīng)(20，000cpm/樣本)在20ml的10mMTris畫(huà)HCL(pH7.6)、150mMKCl、5mMMgCl2、15ng/mLBSA、0.1mM硫代蘇糖醇和人重組酶(全長(zhǎng)topl)中37°C下進(jìn)行30min。反應(yīng)使用0.5%SDS和0.3mg/mL蛋白酶K在42。C阻斷45min。DNA損傷持續(xù)性在不同的時(shí)間加入0，6MNaCl與lO^M的所述藥物孵育30分鐘后檢驗(yàn)。沉淀后，DNA重混懸于變性緩沖液(80%甲酰胺，10mMNaOH，0.01MEDTA和Img/mL染料)中，之后植入于變性凝膠(7%聚丙烯酰胺在TBE緩沖液中)。全部DNA的破碎水平用Phospholmager425型(分子動(dòng)力學(xué))進(jìn)行測(cè)定(DallavalleS，F(xiàn)errariA，BiasottiB,等人.Novel7-oxyiminomethylcomptothecinderivativeswithpotentinvitroandinvivoantitumoractivity.JMedChem2001;44:3264-74)。DNA損傷的持續(xù)(。/。)化合物時(shí)間(分鐘)01510托泊替康100652010喜樹(shù)堿100582320s謂1006033285-FCPT異構(gòu)體11001818105-FCPT異構(gòu)體21001010135畫(huà)N3CPT1005030152權(quán)利要求1.通式I的化合物、其可藥用鹽、異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映異構(gòu)體和相應(yīng)的混合物其中R為F、Cl、Br、I、-N3、NH2、-NR′R″、-COOR′、-CONR′R″、-NHR″′-NR′R″，其中R′、R″和R″′可為H、烷基、芳基、芳基烷基、?；?、烷氧基羰基、芳氧基羰基；R1為烷基、氨基烷基、羥基烷基、腈、烷氧基亞氨基、芳氧基亞氨基、甲硅烷基烷基；R2為氫、羥基、烷氧基、氨基烷基；R3為氫，任選保護(hù)的羥基、烷氧基、氨基烷基；其中直鏈或支鏈的烷基、酰基、烷氧基、氨基烷基或烷氧基亞氨基基團(tuán)可包含1至8個(gè)，優(yōu)選1至4個(gè)碳原子，且芳基和芳氧基基團(tuán)可包含5至10個(gè)碳原子。2.如權(quán)利要求1所述的式(I)化合物，其選自a)5-F-喜樹(shù)堿；b)5-N3-喜樹(shù)堿；c)5-NH2-喜樹(shù)堿；d)5-二-叔丁^Jt^肼基喜樹(shù)堿；e)5-二-芐基氧基羰基肼基喜樹(shù)堿。3.制備式(I)化合物的方法，基本上包含下列方案中所示的步驟，其中:a)前體幾基基團(tuán)的保護(hù)；b)通過(guò)碳負(fù)離子生成并與親電試劑反應(yīng)在5位衍生化；c)羥基基團(tuán)的脫保護(hù)；方案<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中R、Rl、R2和R3具有上文所述的含義，且PG為羥基保護(hù)基團(tuán)。4.藥物組合物，其含有式(I)的化合物和可藥用的載體和賦形劑。5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其為適于口服和胃腸外施用的形式。6.如權(quán)利要求1-2所述的化合物或如權(quán)利要求4-5所述的組合物用于制備治療腫瘤的藥物的用途。7.權(quán)利要求6所述的用途，其中所述的藥物用于治療實(shí)體瘤和白血病，特別是肺、卵巢、乳腺、胃、肝、前列腺、軟組織肉瘤、食管、胰、頭和頸、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、慢性和急性髓細(xì)胞白血病的腫瘤。全文摘要具有抗腫瘤活性的5-取代的喜樹(shù)堿衍生物，其制備方法，其作為抗腫瘤藥物的用途和含有它們的藥物組合物。文檔編號(hào)C07D491/22GK101495485SQ200780028197公開(kāi)日2009年7月29日申請(qǐng)日期2007年7月16日優(yōu)先權(quán)日2006年7月26日發(fā)明者A·巴塔哥利亞,C·曼佐蒂,C·薩莫里,E·邦巴爾代利,G·豐塔納申請(qǐng)人:因德納有限公司