專利名稱：：在線粒體上和線粒體中選擇性定位活性劑的方法以及相應(yīng)的活性劑的制作方法在線粒體上和線粒體中選擇性定位活性劑的方法以及相應(yīng)的活性劑本發(fā)明涉及在活細胞內(nèi)的線粒體上和線粒體中選擇性定位活性劑的新方法以及相應(yīng)的活性劑，所述活性劑在無進一步的佐劑的情況下穿過細胞膜進入細胞并且其既在線粒體上又在線粒體中進行選擇性定位?；钚詣┓謩e在線粒體上或線粒體中的定位在整個申請中是指活性劑分別在線粒體上或線粒體中的累積。分別在線粒體上或線粒體中"定位"這一術(shù)語在整個申請中是指分別在線粒體上或線粒體中"累積"。線粒體是細胞的半自主性細胞器。它們具有自己的基因組(mtDNA)，其在核基因組之外編碼一部分它們的蛋白質(zhì)。由線粒體編碼的蛋白質(zhì)也通過線粒體轉(zhuǎn)錄、翻譯和合成。線粒體中重要的代謝途徑用以產(chǎn)生能量，從而對于細胞的活力是必需的。線粒體病包括，例如，許多遺傳病、癌癥、糖尿病、帕金森病和動脈硬化。其中，線粒體代謝紊亂是造成衰老現(xiàn)象諸如聽覺困難和視覺下降的原因。衰老現(xiàn)象，例如，還分別歸因于線粒體DNA的突變或缺失。("Mitochondriaastargetsfordetectionandtreatmentofcancer",JosephineS.Modica-Napolitano,KeshavK.Singh,z'"Mo/ecw/arMe血/"e，(02)00445-3a.pdf(短代碼txtOOlksb);11April2002,ISSN1462-39942002■CambridgeUniversityPress."Mitochondrialdefectsincancer",JenniferSCarew，PengHuang,Mo/ecw/wC^"cer,2002，I:9.;GA.Cortopassi,AliuWong，丑/o//^w'cafB54^陽5Zoewergertos，1999,1410(2)，183-193.)。構(gòu)成線粒體病的基礎(chǔ)的基因缺陷的范圍為從偶爾發(fā)生且完全母體遺傳的mtDNA點突變和長度突變到突變后在核基因組中的常染色體顯性或隱性遺傳形式。此外，討論了mtDNA突變還在具有復(fù)雜遺傳特性的多基因病中起作用。這些疾病的特征在于它們的臨床現(xiàn)象的多重性、診斷的復(fù)雜性、以及目前為止僅有有限的治療方法可以利用。因此，線粒體的獨特性質(zhì)的研究和診斷，例如線粒體DNA的突變或線粒體代謝紊亂，是開發(fā)針對線粒體病的適當?shù)幕钚詣┑闹匾疤??；钚詣┰诩毎麅?nèi)在線粒體上的選擇性定位也是一個主要的方面，原因在于從而在線粒體上產(chǎn)生高局部濃度的活性劑，這最終導(dǎo)致活性劑輸入線粒體。因此，本發(fā)明的一個目的是提供這樣的方法，由此方法，線粒體活性劑，例如小分子或反義活性劑，可以在細胞內(nèi)選擇性定位于線粒體上和線粒體中。線粒體活性劑是在線粒體上和線粒體中產(chǎn)生有效性的物質(zhì)，例如在線粒體病的治療中的有效性或與在線粒體上和線粒體中的診斷方法相關(guān)的有效性。此外，本發(fā)明的一個目的是提供反義活性劑，其在無進一步的佐劑的情況下穿過細胞膜進入細胞并且其既在線粒體上又在線粒體中進行選擇性定位，以在線粒體中產(chǎn)生反義或反基因組效應(yīng)。這些目的通過通式I化合物加以實現(xiàn)其中n是0至35的整數(shù)，優(yōu)選1至28，更優(yōu)選9至28，最優(yōu)選13至20。基團K、L或R'彼此獨立地用至少一個一羥基一硝基苯基取代，優(yōu)選用4-羥基-3-硝基苯基取代，進一步優(yōu)選用4-羥基-2-硝基苯基取代，進一步優(yōu)選用3-羥基-6-硝基苯基取代，或者用一羥基二硝基苯基取代，優(yōu)選用3,5-二硝基-4-羥基苯基取代，進一步優(yōu)選用2，5-二硝基-4-羥基苯基取代，進一步優(yōu)選用2，4-二硝基-5-羥基苯基取代，其中苯基與基團K、L或W的連接位置被定義為位置l，此外，苯基可用一個或多個氟、氯、溴或碘原子取代，或者用-COOH、-COOR8、-CSOH、-CSOR8、-COSH、-COSR8、-CONH2、-CONHR9、-COR101111、-OH、畫OR8、-SH、-SR8、-NH2、-KHR9、-NR101111、-NR12NOH、-NOR13、膦酸酯官能團或膦酸官能團取代，或者用C,-C6垸基、C2-C6烯基、C2-(V炔基、C,-C6雜烷基、C3-d。環(huán)垸基、Qrdo雜環(huán)垸基、C6-Ch)芳基、Cs-C9雜芳基、(Vd2芳烷基或C2-Cu雜芳垸基取代，其中R8、R9、R10、R11、R^和Rn彼此獨立地表示Q-C6烷基。E彼此獨立地表示氫原子、取代或未取代的苯基、取代或未取代的雜環(huán)基團、任選地由保護基取代的核堿基諸如天然存在或非天然存在的核堿基、或者DNA嵌入劑。優(yōu)選地，各個E彼此獨立地表示腺嘌呤基、胞嘧啶基、假異胞嘧啶基、鳥嘌呤基、胸腺嘧啶基、脲嘧啶基或苯基。每個基團R1彼此獨立地表示氫原子或具有可達20個碳原子的任選地取代的烷基、烯基、烷基芳基、芳基、雜環(huán)或脂環(huán)族基團，其中至少一個基團W不表示氫原子并且用一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能取代。如果基團R1未用一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能取代，它還可以彼此獨立地具有例如一個或多個天然存在或非天然存在的氨基酸側(cè)鏈，以及優(yōu)選地，具有可達20個碳原子的任選地取代的烷基、烯基、烷基芳基、芳基、雜環(huán)或脂環(huán)族基團。優(yōu)選地，每個基團R'彼此獨立地包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或IO個碳原子。每個基團R1可以彼此獨立地是支化或未支化的。術(shù)語"任選地取代的"在整個申請中涉及其中一個或多個氫原子被氟、氯、溴或碘原子置換或者被-COOH、-COOR8、-CSOH、-CSOR8、-COSH、-COSR8、-CONH2、-CONHR9、-COR10R"、-OH、-OR8、=0、-SH、國SR8、=S、-NH2、=NH、-NHR9、-NR1DR"、-NR12NOH、->^01113或->^02基團、膦酸酯官能或膦酸官能置換的基團。而且，該術(shù)語涉及用未取代的d-C6烷基、CVC6烯基、CVC6炔基、Q-C6雜垸基、C3-d。環(huán)烷基、C2-C9雜環(huán)垸基、CVCu)芳基、Cs-C9雜芳基、CVd2芳垸基或C2-Cn雜芳烷基取代的基團，其中基團R8、R9、R1Q、R11、！^和RU彼此獨立地表示d-C6烷基。膦酸酯官能可例如具有式-P(0)(OV)2或-P(O)(OV)(OH)。在這種情況下，每個V彼此獨立地可表示未取代的垸基、烯基、垸基芳基、芳基或脂環(huán)族基團，具有可達20個碳原子，更優(yōu)選具有可達7個碳原子，且最優(yōu)選甲基、乙基、環(huán)己基、或芐基。在本發(fā)明的化合物中，膦酸官能可具有例如式-P(K))(OH)2。最優(yōu)選地，各個基團R1彼此獨立地選自式-(CrC,o)垸基-[P(=O)(0-V)2]，其中各個V彼此獨立地表示氫原子、甲基、乙基、環(huán)己基或芐基。K表示具有式-NR2r3、-^112113114、-NR2(CO)R3或-NR2(CS)R3的基團，其中R2、w和w彼此獨立地表示氫原子、垸基、烷芳基、烯基或炔基、氨基保護基、報道配體、熒光標記、嵌入劑、螯合劑、氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、糖類、脂質(zhì)、類固醇、脂肪酸、寡核苷酸、量子點、FRET猝滅劑(熒光共振能量轉(zhuǎn)移猝滅劑)或在水中可溶或不可溶的聚合物，其中上述基團的每一個可任選地被取代。優(yōu)選地，K表示-NH2官能、"NH(CO)CH3基團、-NH(COHCrdo)烷基官能、-NH(COHd-do)烷芳基官能、-NH(COHC廣do)烯基官能、-NH(CO)-(Crdo)炔基官會巨、具有式-NR2r3或-N^r2r3r4或-NR2(CO)R3的基團，其中r2、w和rm皮此獨立地表示氫原子、天然存在或非天然存在的氨基酸、氮基酸或肽或者各自用或未用膦酸酯官能或膦酸官能取代的垸基、烷芳基、烯基、或炔基，其中上述基團的每一個可任選地被取代。L表示具有式-NR5r6、-NR5(CO)R6、-NR5(CS)R6、-OR7或-SR7的基團，其中w和R6彼此獨立地表示氫原子、垸基、烷芳基、烯基、或炔基、報道配體、熒光標記、嵌入劑、螯合劑、氨基酸、氨基酸酰胺、肽、肽酰胺、蛋白質(zhì)、糖類、脂質(zhì)、類固醇、脂肪酸、寡核苷酸、量子點、FRET猝滅劑(熒光共振能量轉(zhuǎn)移猝滅劑)或在水中可溶或不可溶的聚合物，而w表示氫原子、垸基、報道配體、熒光標記、嵌入劑、螯合劑、氨基酸、氨基酸酰胺、肽、肽酰胺、蛋白質(zhì)、糖類、脂質(zhì)、類固醇、脂肪酸、寡核苷酸、量子點、FRET猝滅劑或在水中可溶或不可溶的聚合物，其中上述基團的每一個可任選地被取代。優(yōu)選地，L表示-OH官能、-NH2官能、-NH-(CrCu))烷基官能、-NH-(C廣do)烷芳基官能、-NH(C廣C,o)烯基官能、-NH-(C廣C,o)炔基官能、天然存在或非天然存在的氨基酸、氨基酸、氨基酸酰胺、肽或肽酰胺單元，所有這些可用或可未用膦酸酯官能或膦酸官能取代，其中上述基團的每一個可任選地被取代。在整個申請中，烷基優(yōu)選可具有l(wèi)-6個碳原子，例如，它們可表示甲基、乙基、丙基或丁基。術(shù)語"芳垸基"、"烷芳基"和"芳基垸基"在整個申請中是指具有脂肪族和芳香族部分的基團。如果R'不表示氫原子，則產(chǎn)生不對稱中心(*)，原因在于基團R'與通式化合物I的骨架在鍵合位置處的結(jié)合。因此，在每個非對稱中心，存在R構(gòu)型或S構(gòu)型。在這種情況下，非對稱中心的構(gòu)型優(yōu)選根據(jù)Cahn-Ingold-Prelog規(guī)則進行限定，此外，條件是配體的優(yōu)先次序總是如下定義非對稱中心的氮原子總是接受優(yōu)先次序1。非對稱中心的羧基的碳原子總是接受優(yōu)先次序2。非對稱中心的基團R1的碳原子總是接受優(yōu)先次序3。非對稱中心的氫原子總是接受優(yōu)先次序4。根據(jù)本發(fā)明，通式I化合物具有至少一個非對稱中心，其中至少一個基團W用一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能取代。根據(jù)本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方式，各第二基團R'彼此獨立地對應(yīng)于天然存在或非天然存在的氨基酸的側(cè)鏈，優(yōu)選地對應(yīng)于具有可達20個碳原子的任選地取代的烷基、烯基、烷基芳基、芳基、雜環(huán)或脂環(huán)族基團，并且至少一個基團R'表示具有可達20個碳原子的任選地取代的垸基、烯基、垸基芳基、芳基或脂環(huán)族基團，其用一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能取代，其中其余的基團W表示氫原子。根據(jù)本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方式，各第三基團W彼此獨立地對應(yīng)于天然存在或非天然存在的氨基酸的側(cè)鏈，優(yōu)選地對應(yīng)于具有可達20個碳原子的任選地取代的垸基、烯基、垸基芳基、芳基、雜環(huán)或脂環(huán)族基團，并且至少一個基團W表示具有可達20個碳原子的任選地取代的烷基、烯基、烷基芳基、芳基或脂環(huán)族基團，其用一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能取代，其中其余的基團Ri表示氫原子。根據(jù)本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方式，兩個、三個或更多個相鄰的基團RJ彼此獨立地對應(yīng)于天然存在或非天然存在的氨基酸的側(cè)鏈，優(yōu)選地對應(yīng)于具有可達20個碳原子的任選地取代的垸基、烯基、垸基芳基、芳基、雜環(huán)或脂環(huán)族基團，并且至少一個基團R'表示具有可達20個碳原子的任選地取代的烷基、烯基、烷基芳基、芳基或脂環(huán)族基團，其用一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能取代，其中其余的基團R1表示氫原子。根據(jù)本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方式，各基團R1彼此獨立地對應(yīng)于天然存在或非天然存在的氨基酸的側(cè)鏈，優(yōu)選地對應(yīng)于具有可達20個碳原子的任選地取代的烷基、烯基、垸基芳基、芳基、雜環(huán)或脂環(huán)族基團，并且至少一個基團W表示具有可達20個碳原子的任選地取代的烷基、烯基、烷基芳基、芳基或脂環(huán)族基團，其用一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能取代。根據(jù)本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方式，一個或多個基團R1彼此獨立地具有至少一個膦酸酯官能或膦酸官能。根據(jù)本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方式，下列適用如果一個以上的非對稱中心和一個以上的具有一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能的任選地取代的基團W存在于通式I化合物中，則具有含一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能的基團的非對稱中心數(shù)目的至少50%表現(xiàn)為R構(gòu)型，優(yōu)選66%，更優(yōu)選70%，更優(yōu)選75%，更優(yōu)選80%，更優(yōu)選85%，更優(yōu)選90%，更優(yōu)選95%，以及最更優(yōu)選100%。根據(jù)本發(fā)明的可選的優(yōu)選實施方式，下列適用如果一個以上的非對稱中心和一個以上的具有一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能的任選地取代的基團R1存在于通式I化合物中，則具有含一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能的基團的非對稱中心數(shù)目的至少50%表現(xiàn)為S構(gòu)型，優(yōu)選66%,更優(yōu)選70%，更優(yōu)選75%，更優(yōu)選80%，更優(yōu)選85°/0，更優(yōu)選90%，更優(yōu)選95%，以及最更優(yōu)選100%。在進一步的實施方式中，基團W數(shù)的最多80%被膦酸酯官能或膦酸官能取代，而其余的基團W表示氫原子。在進一步的實施方式中，基團Ri數(shù)的最多60%被膦酸酯官能或膦酸官能取代，而其余的基團W表示氫原子。在進一步的實施方式中，基團R'數(shù)的最多50%被膦酸酯官能或膦酸官能取代，而其余的基團R'表示氫原子。在進一步的實施方式中，基團W數(shù)的最多40%被膦酸酯官能或膦酸官能取代，而其余的基團W表示氫原子。在進一步的實施方式中，基團RJ數(shù)的最多30%被膦酸酯官能或膦酸官能取代，而其余的基團R'表示氫原子。在進一步的實施方式中，基團R1數(shù)的最多20%被膦酸酯官能或膦酸官能取代，而其余的基團W表示氫原子。在進一步的實施方式中，基團R'數(shù)的最多10%被膦酸酯官能或膦酸官能取代，而其余的基團R'表示氫原子。在進一步的實施方式中，基團W數(shù)的最多4%被膦酸酯官能或膦酸官能取代，而其余的基團R'表示氫原子。在本發(fā)明的進一步優(yōu)選實施方式中，通式化合物I的所有非對稱中心(*)表現(xiàn)出相同的構(gòu)型。在本發(fā)明的進一步優(yōu)選實施方式中，通式化合物I的所有非對稱中心(*)表現(xiàn)出S構(gòu)型。在本發(fā)明的進一步優(yōu)選實施方式中，通式化合物I的所有非對稱中心("表現(xiàn)出R構(gòu)型。而且，公開了根據(jù)本發(fā)明的組合物，其含有任選地與常見佐劑組合的一種或多種本發(fā)明的化合物。根據(jù)通式I的化合物的合成優(yōu)選通過對映體純的單體進行。在通式I化合物的合成期間，化學(xué)合成條件可導(dǎo)致小比例的各非對稱中心改變它們先前確定的構(gòu)型。然而，在該合成期間形成的通式I化合物的最大百分比是立體異構(gòu)純的。所有這些組合物能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明的目的。通式I化合物可通過基團K和L作為連接體與第二通式I化合物連接，其中所述基團如上定義。第一通式I化合物的非對稱中心的構(gòu)型獨立于通過連接體連接的第二通式I化合物的非對稱中心的構(gòu)型。因此，例如，第一通式I化合物的所有非對稱中心可以表現(xiàn)為R構(gòu)型，而第二連接的通式I化合物的所有非對稱中心可以表現(xiàn)為S構(gòu)型。例如，同樣，第一通式I化合物的所有非對稱中心可以表現(xiàn)為R構(gòu)型，而第二連接的通式I化合物的所有非對稱中心可以表現(xiàn)為R構(gòu)型。連接體特別用于以這樣的方式調(diào)節(jié)兩個通式I化合物之間的距離，使得分別在具有連接體的兩個通式I化合物和單鏈RNA或DNA、或者雙鏈DNA之間，可經(jīng)由各自的核堿基發(fā)生相互作用。作為連接體，用于該目的或可用于該目的的所有已知的連接體和所有連接體分子都是合適的。例如，這類連接體可表示任選地取代的垸基鏈、肽、寡核苷酸或由至少三個8-氨基-3,6-二氧雜辛酸單元(egl單元)組成的寡聚體。用膦酸酯官能或膦酸官能取代的基團R1的數(shù)目和順序可分別根據(jù)本發(fā)明進行自由選擇。因此，各基團R1、各第二基團R1、各第三基團R1、各第四基團R1、各第五基團R1、各第六基團R、各第七基團R1、各第八基團R1、各第九基團R1、或各第十基團W例如可分別用膦酸酯官能或膦酸官能取代。用膦酸酯官能或膦酸官能取代可以是有規(guī)律的或者存在于任何位置。此外，幾個基團R還可以分別以順序的方式(相鄰排列)用膦酸酯官能或膦酸官能取代。在此情況下，在通式I化合物中，更多的這些相鄰排列也可以包含在內(nèi)。然而，例如，僅個別基團W可以分別在任何位置用膦酸酯官能或膦酸官能取代。其中各連續(xù)基團R'分別用膦酸酯官能或膦酸官能取代的位置可以是任意的。在EP1157031中，描述了用膦酸酯官能或膦酸官能取代的化合物，從而表現(xiàn)出良好的細胞滲透性。相比于EP1157031中描述的化合物，目前描述的本發(fā)明化合物另外用至少一個一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基取代。在這些本發(fā)明的化合物的情況下，發(fā)明人評價到了在活細胞的線粒體上和線粒體中的令人驚訝的選擇性定位。在它們選擇性定位于線粒體上和線粒體中后，根據(jù)本發(fā)明的化合物可通過在線粒體內(nèi)的令人驚訝的強反義或反基因組效應(yīng)來展示它們的有效性。為了評價在線粒體上和線粒體中的定位，由于細胞內(nèi)的綠色熒光，用熒光染料生物素標記根據(jù)本發(fā)明的化合物，以在細胞滲透性實驗中用共焦顯微鏡檢測這些化合物。對于線粒體染色，使用市售"MitoTracker"，而通過它的應(yīng)用，由于紅色熒光，可通過共焦顯微鏡識別線粒體。同時，由于其藍色熒光，通過"DAPI"染色鑒別細胞核。細胞與10pM生物素標記的本發(fā)明化合物溶液溫育24小時，之后通過共焦顯微鏡分析。在此情況下，測量經(jīng)細胞的不同線掃描。在圖1-4中經(jīng)HeLa細胞或親代細胞143B的線掃描分析分別展示出通式I化合物、線粒體、和細胞核的信號強度。利用分別具有一羥基一硝基苯基(圖1-2)或一羥基二硝基苯基(圖3-4)的本發(fā)明的通式I化合物和線粒體的平行信號強度，通式I化合物在線粒體上和線粒體內(nèi)的選擇性定位可得到清楚識別。然而，在細胞核中，未能識別到本發(fā)明的化合物。這里，本發(fā)明的化合物在定位于線粒體上和線粒體中方面展現(xiàn)出與市售線粒體染色試劑"MitoTracker"相當?shù)倪x擇性。本發(fā)明的化合物還展示出在線粒體內(nèi)的令人驚訝的強反義和反基因組效應(yīng)。相比于未處理的HeLa細胞，涉及線粒體蛋白C0X1表達的本發(fā)明化合物，在10pM濃度下，在3天后將HeLa細胞中的COXl的蛋白質(zhì)水平降低至71%，而在9天后降低至20%。除了時間依賴性效應(yīng)外，還可觀察到濃度依賴性效應(yīng)。因此，例如，在9天的溫育后，在2.5piM的濃度下將COX1的蛋白質(zhì)水平降低至55%，而甚至在500nM的濃度下也降低至80%。通過本發(fā)明的化合物處理(用反義COXl序列處理)，也以時間和濃度依賴方式降低HeLa細胞中線粒體DNA的拷貝數(shù)。盡管在10nM的濃度下，在3天后仍無效應(yīng)可以評價，但是在6天后可以觀察到mtDNA下降至81%，而在9天后下降至62%。這些值應(yīng)該分別與未處理的HeLa細胞比較，或與用本發(fā)明的化合物處理但無mtDNA的互補序列的HeLa細胞(陰性對照)進行比較。對于以不同濃度的本發(fā)明化合物處理(以反義COXl序列處理)的HeLa細胞，例如，在10下，mtDNA拷貝數(shù)在9天后下降至62%;在2.5pM下，下降至82%;而在500nM下，下降至83%。因此，本發(fā)明化合物明顯優(yōu)于已知的與三苯鱗基團偶聯(lián)的肽核酸(A.Muratovska，R.N.Lightowlers,R.W.Taylor,D.M.Turnbull,R.A.J.Smith,J.A.Wilce,S,W.Martin,M.P.Murphy,M/c/e/c/^e"喊2001，Vol.29,No.9，1852-1863)。在該出版物中描述的分子僅在無細胞系統(tǒng)中表現(xiàn)出與線粒體DNA的結(jié)合。此外，這些分子確實能夠滲透細胞的外部細胞膜，并連接線粒體，然而，它們在細胞內(nèi)的線粒體中沒有表現(xiàn)出有效性，例如反義或反基因組效應(yīng)。在取代基K、L或R1處不具有一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基的通式I化合物或者平均分布于細胞內(nèi)，或者它們連接于不同于線粒體的其它細胞小室。令人驚訝地，用一羥基一硝基苯基或用一羥基二硝基苯基取代通式I化合物導(dǎo)致這些線粒體活性劑在線粒體上和線粒體中的選擇性定位。因此，本發(fā)明還提供這樣的方法，通過該方法，化合物，例如可在胞外濃度小于50pM的轉(zhuǎn)染試劑的幫助下或不在其幫助下滲透穿過外部細胞膜進入細胞內(nèi)部的化合物，通過與一羥基一硝基苯基或與一羥基二硝基苯基的共價偶聯(lián)，可選擇性定位于細胞內(nèi)線粒體上和線粒體內(nèi)，以便隨后能夠發(fā)展出它們在線粒^^上或線粒體內(nèi)的有效性。例如，所述方法還包括共價偶聯(lián)一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基(任選地通過連接體LinkerM)與能夠氧化或還原的活性劑，例如抗氧化劑，以獲得選擇性針對線粒體病的活性劑?；谶@些方法，本發(fā)明提供通式V化合物Z-M-PV其中z表示能夠氧化或還原的官能團，M表示連接基團，和P表示一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基。優(yōu)選地，z表示具有通式vi、vn、vni或ix的基團，OHOVIVII<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>其中m和m'表示從0至3的整數(shù)。各Y和Y'彼此獨立地表示烷氧基、硫代烷基、鹵代垸基、鹵素、氨基、硝基或任選地取代的烷基或芳基，或者，如果m等于2或3，則兩個基團Y可一起形成一個或兩個或三個脂族環(huán)、雜環(huán)(雜原子是O、S或N)或芳族環(huán)，它們與芳環(huán)稠合。優(yōu)選地，各Y和Y，彼此獨立地表示甲基或甲氧基。優(yōu)選地，M表示支化或非支化的、任選地取代的烷基、烯基、炔基或垸基芳基鏈，還任選地具有羧酸酯、醚、胺或羧酸酰胺官能作為這些鏈的組成，其中M總共具有可達30個碳原子，更優(yōu)選地，M表示-(CH2)p-，其中p表示l至20的整數(shù)，最優(yōu)選地，M表示乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基或癸基鏈。最優(yōu)選地，Z表示具有下式的基團或具有下式的基團:或具有下式的基團:OH本發(fā)明的化合物和本發(fā)明的方法因此適合于線粒體病的治療以及適合于與線粒體有關(guān)的診斷目的。這些包括例如遺傳性疾病、癌癥、帕金森病或糖尿病。本發(fā)明的化合物也可用作抗衰老劑。本發(fā)明的化合物在制備預(yù)防和/或治療疾病的藥物中的用途也是本發(fā)明的主題。通常，使用己知的和可接受的方式，或單獨地或與任何其它治療劑聯(lián)合施用本發(fā)明的化合物。例如，所述施用可以通過下列途徑之一進行經(jīng)口，例如以錠劑、糖衣片劑、丸劑、半固體、軟膠囊和硬膠囊、溶液、乳液或懸浮液施用；腸胃外，例如以可注射溶液施用；以栓劑經(jīng)直腸施用；通過吸入，例如以粉末制劑或噴霧劑施用；經(jīng)皮施用或鼻內(nèi)施用。對于這樣的片劑、丸劑、半固體、糖衣片劑、錠劑和硬膠囊的生產(chǎn)，治療上可用的產(chǎn)品可與藥學(xué)上惰性的無機或有機藥物載體物質(zhì)混合，例如與乳糖、蔗糖、葡萄糖、明膠、麥芽、硅膠、淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽、和脫脂奶粉等等。對于軟膠囊的生產(chǎn)，可以使用藥物載體物質(zhì)，例如植物油、石油、動物油或合成油、蠟、脂肪、多元醇。對于液體溶液和糖漿的生產(chǎn)，可以使用藥物載體物質(zhì)，例如水、醇類、含水鹽溶液、含水葡萄糖、多元醇、丙三醇、植物油、石油、動物油或合成油。對于栓劑，可以使用藥物載體物質(zhì)，例如植物油、石油、動物油或合成油、蠟、脂肪和多元醇。對于氣霧劑，可以使用適于該目的壓縮氣體例如氧氣、氮氣、含氯氟烴、含氟烴、含氯烴和二氧化碳。藥學(xué)上可用劑還可包含用于保存、穩(wěn)定化的添加劑、乳化劑、增甜劑、香料、用于改變滲透壓的鹽、緩沖物質(zhì)、用于涂布的添加劑和抗氧化劑。例如，可通過通式n化合物以本身已知的方式進行反應(yīng)，通過文獻中描述的方法，制備本發(fā)明的通式I化合物(例如L.Christensen,R.Fitzpatrick，B.Gildea,K.H.Petersen,H.F.Hansen,T.Koch,M.Egholm,O.Buchardt，P.E.Nielsen,J,Coull,R.H.Berg，J尸取5W.3,1995，175-183.T.Koch,H.F.Hansen,P.Andersen,T.Larsen,H.G.Batz,K.Otteson，H.Orum,■/尸取.ifes.49，"97,80-88.F.Bergmann,W.Ba皿warth,S.Tam，！Te/raW，丄e".36，1995,6823-6826)。例如，可通過將通式III或IV的化合物偶聯(lián)到基團K、L或R'中的胺官能，將一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基作為取代基引入本發(fā)明的化合物。在下文，通式III化合物縮寫為MNPA("—硝基-羥基-苯基-乙酸酯(Acetat)")，而通式IV化合物縮寫為DNPA("二硝基-羥基-苯基-乙酸酯")。在通式II化合物中，基團R"表示例如氫原子或烯丙基、芐基、乙基、或甲基，或者可溶或不可溶的聚合物。Pr表示氫原子或可切割胺保護基。胺保護基在核堿基保護基存在下必須是可選擇性切割的。優(yōu)選地，Pr表示氫原子、氧代氨基甲酸酯或硫代氨基甲酸酯保護基，最優(yōu)選地，Pr表示氫原子或Fmoc、Boc、Cbz、Mmt或Bhoc保護基。E和基團R1如上定義?；鶊FR1結(jié)合的非對稱中心(*)可具有R或S構(gòu)型。例如，通式n化合物可根據(jù)下列方法產(chǎn)生。在非對稱中心具有R構(gòu)型的通式II化合物的產(chǎn)生:反應(yīng)歩驟l:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>從吡嗪離析物的S構(gòu)型開始，可例如如文獻(U.Sch611kopf，U.Busse，R.Lonsky，R.Hinrichs,LiebigsAnn.Chem.1986，2150-2163;A.Schick,T.Kolter，A.Giannis,K.Sandhoff，TetrahedronH，1995，11207-11218)中所述進行該步驟。反應(yīng)步驟2:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>例如，可如文獻(U.Sch6llkopf，U.Busse，R.Lonsky，R.Hinrichs，LiebigsAnn.Chem.1986,2150-2163)中所述進行該步驟。反應(yīng)步驟3:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>在通過堿(例如NaHC03、NH3)從它們的鹽酸鹽釋放胺之后，反應(yīng)步驟2的產(chǎn)物的混合物可用于其后的反應(yīng)中。該反應(yīng)，一種還原性胺化，可如文獻所述進行(G.Haaima,A.Lohse，O.Buchardt，P.E.Nielsen,CTze/w./"f.35，1996，No17,1939-1942)。代替氰基硼氫化鈉，其它還原劑例如氫和催化劑(例如Pd/C)也可以被使用。反應(yīng)產(chǎn)物通過色譜法進行分離。反應(yīng)步驟4:OH可如文獻所述進行該步驟(GHaaima，A.Lohse，O.Buchardt，RE.Nielsen,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.35，1996，No17,1939-1942)。在此情況下，也可使用其它偶聯(lián)試劑，代替DCC/DHBT?？扇缥墨I所述進行化合物E-CH2-COOH(例如C(PG)-CH2-COOH、A(PG)-CHrCOOH、G(PG)-CH2-COOH或T-CH2-COOH、J(PG)-CH2-COOH，其中A=腺嘌呤基，C=胞嘧啶基，G=鳥嘌呤基，T=胸腺嘧啶基，J=假異胞嘧啶基，PG=保護基，例如芐氧羰基(Z)、芐基(Bzl)、乙?；?Ac)或茴香酰(An))的產(chǎn)生(S.A.Thomson,J.A.Josey,R.Cadilla,M.D.Gaul,F,C.Hassmann，M丄Lazzio,A丄Pipe,K丄.Reed,D丄Ricca,R.W.Wiether，S.A.Noble,7^ra/zWraw51，1995,6179-6194)。此外的可能保護基也描述于文獻(GBreitpohl,D.W.Will,A.Peymann，E.Uhlmann,Tetrahedron53,1997,14671-14686;T.Kofoed，H.F.Hansen,H.Orum，T.Koch,/5W.，7，2001,402-412)。反應(yīng)步驟5:可如文獻所述進行該步驟(G.Haaima，A.Lohse,O.Buchardt,P.E.Nielsen,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.35，1996，No17，1939-1942)。為了更簡單地描述作為反應(yīng)步驟5的產(chǎn)物產(chǎn)生的通式II化合物，使用下列縮寫如果例如A(PG)-CH2-COOH被用于反應(yīng)步驟5,則獲得相應(yīng)的具有非對稱中心的通式II化合物。該化合物在此一般縮寫為AR(PG)。在本文中，縮寫A在具有非對稱中心的通式II化合物中是指核堿基，上標R是指化合物的R構(gòu)型，而縮寫PG是指在核堿基上的保護基。如果例如苯乙酸被用于反應(yīng)步驟5，則獲得具有非對稱中心的通式II化合物，其縮寫為P11。相應(yīng)的不具有非對稱中心的通式II化合物(R1=H)類似于具有非對稱中心的通式II化合物進行縮寫，差別在于使用各自的小寫字母a代替表示核堿基的大寫字母和表示構(gòu)型的上標字母(例如A"。例如，具有PG保護的C作為核堿基的無非對稱中心的通式II化合物縮寫為c(PG)。為了產(chǎn)生在非對稱中心具有S構(gòu)型的通式II化合物，在反應(yīng)步驟1中使用具有R構(gòu)型的吡嗪離析物，并類似地進行反應(yīng)步驟1至5。然后，例如，獲得縮寫為as(pg)的通式ii化合物。例如，通過以本身已知的方式反應(yīng)通式II化合物，經(jīng)由固相合成，可產(chǎn)生本發(fā)明的化合物。根據(jù)該固相合成，切割核堿基上的保護基，以便獲得通式II化合物，其縮寫如下例如，本發(fā)明的化合物縮寫為MNPA-ARCRGRGRTRCRGRGRCRGRARARCRARTR-NH2，其全部從具有R構(gòu)型非對稱中心的通式II化合物產(chǎn)生，并且在最后的步驟中與MNPA-OH偶聯(lián)，之后從該樹脂切割為伯胺。例如，本發(fā)明的化合物縮寫為MNPA-ARCGRgTRCGRgCRgARaCRaTR-NH2，其從具有R構(gòu)型非對稱中心的通式II化合物和不具有非對稱中心的通式II化合物產(chǎn)生，并且在最后的步驟中與MNPA-OH偶聯(lián)，之后從該樹脂切割為伯胺。例如，本發(fā)明的化合物縮寫為DNPA-ASCSGSGSTSCSGSGSCSGSASASCSASTS-NH2，其全部從具有S構(gòu)型非對稱中心的通式II化合物產(chǎn)生，并且在最后的步驟中與DNPA-OH偶聯(lián)，之后從該樹脂切割為伯胺。例如，本發(fā)明的化合物縮寫為DNPA-AscGsgTscGsgCsgAsaCsaTs-NH2，其全部從具有S構(gòu)型非對稱中心的通式II化合物和不具有非對稱中心的通式II化合物產(chǎn)生，并且在最后的步驟中與DNPA偶聯(lián)，之后從該樹脂切割為伯胺。例如，本發(fā)明的化合物縮寫為DNPA,tG、C、A、gactcKcARgCR-Gly-NH2，其全部從具有R構(gòu)型非對稱中心的通式II化合物和不具有非對稱中心的通式II化合物在Boc-Gly-PAM-MBHA樹脂上產(chǎn)生，并且在最后的步驟中與DNPA偶聯(lián)，之后從該樹脂切割為伯胺。例如，本發(fā)明的化合物縮寫為DNPA-(DEPABS)2-Gly-tGRcCRtARggactcRcARgCR-Gly-NH2，其全部從具有R構(gòu)型非對稱中心的通式II化合物和不具有非對稱中心的通式II化合物、從甘氨酸、從兩種氨基酸例如4-(二乙氧基-磷酰基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(Boc-DEPABS)，在Boc-Gly-PAM-MBHA樹脂上產(chǎn)生，并且在最后的步驟中與DNPA偶聯(lián)，之后從該樹脂切割為伯胺。例如，本發(fā)明的化合物縮寫為DNPA-DOTA-gGRcTRcGRaARtARaGRgARgGR-Gly-NH2，其從具有R構(gòu)型非對稱中心的通式II化合物、從不具有非對稱中心的通式II化合物、和從螯合劑1,4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4,7,10-四乙酸三叔丁酯(DOTA)，在Boc-Gly-PAM-MBHA樹脂上產(chǎn)生，并且在最后的步驟中與DNPA偶聯(lián)，之后從該樹脂切割為伯胺。實施例實施例1:(2R，SS)-2-(2-(二乙氧基-磷酰基)乙基)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-5-異丙基吡嗪的制備0.52mol(S)-2，5-二氫-3,6-二甲氧基-2-異丙基吡嗪在氬下溶解于400ml無水THF，并冷卻至-78'C。攪拌下，逐滴緩慢加入200ml的2.7M丁基鋰溶液(在庚垸中)(0.54mol)。隨后，在攪拌下，將0.S2mo1二乙基-(2-溴乙基)膦酸酯在300ml無水THF中的溶液逐滴緩慢加入，并將該混合物在-78。C進一步攪拌3h。然后，緩慢加入11.7ml(約0.2mol)無水乙酸。使2反應(yīng)混合物緩慢升溫至室溫。除去溶劑，并將殘留物溶解于600ml乙醚，并用200ml水洗滌。水相仍用各100ml乙醚萃取三次。合并的醚相經(jīng)MgS04干燥，過濾，并在真空中除去溶劑。殘留物溶解于乙醚和己垸(1:IO)的混合物，并經(jīng)硅膠床過濾。之后，用乙醚和己烷(l:5)洗脫未反應(yīng)的離析物。最后，用乙酸乙酯洗脫產(chǎn)物。收率約70%的黃色液體'H-醒R(CDCl3):0.71，1.04(d，6H，CH(C//3)2),1.33(t，6H，P(0)(OCH2C//3)2),1.68-2.25(m，4H，CHC//2C//2P)，3.65，3.67(s，6H，OC//3)，4.02(m，1H),4,10-4.20(m,4H，P(0)(OCi/2CH3)2).實施例2:(2R，5S)-2-(8-(二芐氧基-磷酰基)辛基)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-5-異丙基吡嗪的制備類似于實施例1的制備方法，從(S)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基吡嗪和二芐基-(8-溴辛基)膦酸酯開始，制備(2R,5S)-2-(8-二芐氧基磷?；?辛基)-2,5-二氫-3,6-二甲氧基-5-異丙基吡嗪。實施例3:(2S，5R)-2-(4-(二環(huán)己氧基-磷?；?丁-2-烯基)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-5-異丙基吡嗪的制備類似于實施例1的制備方法，從(R)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基吡嗪和二環(huán)己基-(4-溴-丁-2-烯基)膦酸酯開始，制備(2S，5R)-2-(4-(二環(huán)己氧基-磷酰基)丁-2-烯基)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-5-異丙基吡嗪。實施例4:(2R)-2-2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基-氨基-4-(Zl乙氧基-磷酰基)丁酸甲酯的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>0.38mol(2R,5S)-2-(2-(二乙氧基-磷?；?乙基)-2,5-二氫-3,6-二甲氧基巧-異丙基吡嗪溶于400ml乙醚。向該溶液加入1150ml的1N鹽酸水溶液。在60min之后，反應(yīng)完成，并除去乙醚。如果產(chǎn)物將進行儲存，則還在真空下完全除去水。如果產(chǎn)物將立即進一步反應(yīng)，則通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去大約一半的水，然后通過氨溶液將反應(yīng)混合物的pH值調(diào)節(jié)到8-9。該堿性溶液用二氯甲烷萃取六次，其中每次控制pH值并任選地加以校正。合并二氯甲烷相，經(jīng)MgS04干燥，并在真空中除去溶劑。所得到的黃色油立即在隨后的反應(yīng)——還原性胺化中使用。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>將該黃色油(假設(shè)完全反應(yīng))溶解于600ml甲醇，并冷卻至0'C。隨后，加入0.76molN-Boc-氨基乙醛。在0。C攪拌30min后，首先加入0.90mol無水乙酸，然后加入0.40mo1氰基硼氫化鈉。反應(yīng)混合物在0。C攪拌，直到氣體產(chǎn)生完成，然后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑。將殘留物溶解于乙酸乙酯(約600ml)，并進一步用飽和碳酸氫鈉溶液(約200ml)洗滌一次，以及用飽和氯化鈉溶液(約100ml)洗滌一次。有機相經(jīng)MgS04干燥，并過濾。隨后，真空下除去溶劑。經(jīng)硅膠填充的玻璃料，通過SPE，進行進一步純化。首先用己垸和乙酸乙酯(1:l)的混合物洗脫雜質(zhì)和不需要的產(chǎn)物，然后用純乙酸乙酯洗脫。通過用在二氯甲烷中的10%甲醇萃取，最終獲得期望的產(chǎn)物。在除去溶劑后，獲得約75%的產(chǎn)物，為黃色粘性油。力-醒R(CDCl3):1.35(t，6H,P(0)(OCH2OT3)2)，1.47(s,9H,C(C//3)3);1.8-2.0(m，4H，CHCi/2C//2P，)，2.5-2.6,2.75—2.85,3.0-3.4(m,4H,NC//2C//2N):3.75(s，3H,00/3),4.0-4.2(m，4H,P(0)(OC//2CH3)2).實施例5:(2R)-2-2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基-氨基-10-(二芐氧基-磷?；?癸酸甲酯的制備類似于實施例4的制備方法，從(2R，5S)-2-(8-(二芐氧基-磷酰基)辛基)-2,5-二氫-3，6-二甲氧基-5-異丙基吡嗪開始，制備(2R)-2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]-氨基-lO-(二芐氧基-磷酰基)-癸酸甲酯。實施例6:(2S)-2-I2-(叔丁氧基羰基氨基)乙萄-氨基-6-(Zl環(huán)己氧基-磷?；?己-4-酸甲酯的制備類似于實施例4的產(chǎn)生方法，從(2S，5R)-2-(4-(二環(huán)己氧基-磷?；?-丁-2-烯基)-2,5-二氫-3,6-二甲氧基-5-異丙基吡嗪開始，制備(2S)-2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]-氨基-6-(二環(huán)己氧基-磷?；?-己-4-酸甲酯。實施例7.*(R卜2-(2-(N4-芐氧羰基胞嘧啶-l-基L乙?；?[2-叔丁氧基羰基氨基乙萄-氨萄-4-(二乙氧基-磷?；?丁酸甲酯的制備向30.96mmol4-N-(節(jié)氧羰基)-胞嘧啶-l-基-乙酸和30.96mmol3,4-二氫-3-羥基-4-氧代-l,2,3-苯并三嗪(DHBT-OH)在100ml無水DMF的攪拌溶液中，加入32.51mmol二環(huán)己基碳二亞胺，并在40'C攪拌該溶液1h。隨后，加入23.84mmol(2R)-2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]-氨基-4-(二乙氧基-磷酰基)丁酸甲酯，并在4(TC攪拌。通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)，并且該反應(yīng)在3天后完成。通過過濾將溶液與不可溶部分分離，且在真空中除去溶劑。將殘留物溶解于二氯甲烷，并在冷凍機中儲存過夜。在該過程中，.二環(huán)己基脲進一步沉淀，其通過過濾分離。濾液用稀釋的碳酸氫鈉溶液(1/3飽和碳酸氫鈉溶液，2/3水)洗滌兩次或三次，用稀釋的硫酸氫鈉溶液(1/3飽和硫酸氫鈉溶液，2/3水)洗滌一次或兩次，經(jīng)MgS04干燥，并利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。通過溶解于乙酸乙酯并在冷凍機中儲存過夜，進行進一步純化，由此，進一步任選地沉淀的二環(huán)己基脲通過過濾加以分離，且再次除去溶劑。然后，將粗產(chǎn)物溶解于二氯甲烷(對于每3g粗產(chǎn)物5ml二氯甲垸)，并再次用乙醚(對于每3g粗產(chǎn)物25ml乙醚)和己垸(對于每3g粗產(chǎn)物5ml己垸)加以沉淀。除去含雜質(zhì)的溶劑，并在真空中干燥產(chǎn)物。收率約65%的亮黃色固體iH-NMR(CDC3):1.32(t，6H，P(0)(OCH2C7f3)2);1.44(s，9H，C(C//3)3);1.75-2.45(m，4H，CHC7/2C//2P);3.2-3.85(m，4H,NCi/2C7/2N);3.73(s，3H，0073);4.07(m,4H，P(0)(00/2CH3)2);4.28(m，1H,NOTC(O));4.42/4.99(2d，2H,NC//2C(0));5.22(s，2H，OC//2Ph);5.56(t，br,1H,C(0)N//CH2);7.25(d,1H,C07=CHN);7.38(s，5H，尸/);7.55(d，1H，CCH=C//N).實施例8:(R卜2-(2-(N4-節(jié)氧羰基氨基-胞嘧啶-l-基^乙?；鵋2-叔丁氧基羰基氨基-乙萄氨基)-4-(二乙氧基-磷?；?丁酸的制備將19.1mmol(R)"2-([2-(N4-芐氧羰基胞嘧啶-l-基)-乙酰基]-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙基]-氨基M-(二乙氧基-磷酰基)丁酸甲酯溶解于80ml的THF和水(2:3)，并冷卻至0°C。向該溶液逐滴加入48ml的1M氫氧化鋰溶液(pH9)。借助DC監(jiān)測反應(yīng)進程(在二氯甲烷中的10%甲醇)。反應(yīng)完成后，用130ml水和氯化鈉溶液稀釋反應(yīng)溶液，并用二氯甲烷(200ml)萃取一次。用2M硫酸氫鉀溶液將水相調(diào)節(jié)至pH值2-3，并用二氯甲垸萃取若干次。由此，pH值得到控制，并任選地反復(fù)進行校正。合并的有機相經(jīng)MgS04干燥，并在真空下除去溶劑。如果必要，用乙醚從二氯甲垸再沉淀該粗產(chǎn)物。最后通過低壓升華干燥機(lyophylisator)干燥產(chǎn)物。收率約80%的黃白色固體^-NMR(DMS0-d6):1.21(t，6H，P(0)(OCH2C//3)2);1.39(s,9H，C(C//3)3);1.70-2.30(m，4H,CHC/f2Ci/2P);2.90-3.60(m，4H，NC//2C/72N);3.93-4.02(m，4H,P(0)(OC//2CH3)2);4.25(m，1H，NC/ZC(0));4.50-4.83(m,2H,NC//2C(0》；5,19(s，2H，OOT2Ph);6.88(m,br，1H，C(0)Ni/CH2);7.02(d，1H，CC//-CHN);7.31-7,41(m,5H,戶外7.97(d，1H，CCHK:夠.實施例9:進一步的通式II化合物的制備進一步的本發(fā)明通式II化合物通過如實施例7和8所描述的類似合成而制備，其中盡管C(Z)-CH2-COOH分別進一步進行Z保護、芐基保護(Bzl)、茴香酰保護(An)或乙?；Ｗo(Ac)，但分別使用了未保護的核堿基乙酸組分，例如A(Z)-CH2-COOH、A(An)-CH2-COOH、A(Bzl)-CH2-COOH、G(Z)-CH2-COOH、G(Ac)-CHrCOOH、C(An)-CH2-COOH、C(Bzl)-CH2-COOH、J(Z)-CH2-COOH、J(Bzl)-CH2-COOH、J(An)-CH2-COOH或T-CH2-COOH(A=腺嘌呤基，C=胞嘧啶基，G=鳥嘌呤基，T=胸腺嘧啶基；J=假異胞嘧啶基)以及苯基乙酸。AR(Z):^醒R(CH30H-d4):1,20(t，6H,P(0)(OCH2C//3)2);1.34(s，9H，C(C//3)3);1.70-2.30(m,4H,CHC//2C//2P);3.00-3.80(m，4H,NC//2C//2N);3.93-4.02(m，4H，P(0)(OC//2CH3)2);4.10(m，1H，NC//C(0》；5.18(s，2H，OC//2Ph);5.20-5.40(m,2H，NC//2C(0》；7.15-7.40(m，5H，P/z);8.14(s,1H，N=C7/N);8.46(s，1H,N=CWN).AR(Bzl):、NMR(DMSO-d6):1.21(t，6H，P(0)(OCH2C//3)2)，1.40(s，9H，C(CZ/3)3);1.70-2.20(m,4H,CHC//2C//2P，)，2.卯畫3.75(m，4H,NC//2C//2N);3.90-4.10(m，4H，P(0)(OC//2CH3)2);4.22(m，1H，NC7/C(0));5.25-5.45(m，2H,NC恥(O));6.96(m，br,1H，C(0)NM:H2);7.50-8.10(m，5H，8.42(s，1H，N=C//N);8.69(s,1H，N=Cf/N).AR(An):!H-NMR(DMSO-d6):1.21(t，6H,P(0)(OCH2C^3)2);1.41(s，9H，C(C//3)3);1.70-2.20(m,4H，CHCi/2CH2P);2.卯-3.750(m,4H,NC//2C//2N);3.86(s，3H，OC//3);3.90-4,10(m，4H,P(0)(OC//2CH3)2);4.22(m，1H，NC7/C(0));5.25-5.45(m,2H，NG2C(0));6.96(m，br，1H，C(0,CH2);7.08(d,2H，8,05(d,2H,尸/;);8.42(s,1H，N=C//N);8.69(s，1H，N-C夠，JR(Z):^-醒R(DMSO-d6):1.32(t，6H，P(0)(OCH2C//3)2),1.42(s，9H，C(Ci/3)3);1.60-2.50(m，4H,CHO/2Ci/2P,)，3,10-3.55(m，4H，NC//2C//2N);3.65-3.90(m，2H,N0/2C(0));4.00-4.15(m，4H，P(0)(OC/f2CH3)2);4.20(m，1H，NC/C(0》；5.24(s,2H，OC//2Ph);6.80(m，br，1H，C(0)N77CH2);7.27(d，1H，C-C夠；7.30-7.50(m,5H，jR(An):'H-NMR(DMSO-d6):1.22(t，6H,P(0)(OCH2Ci/3)2);1.38(s，9H，C(C//3)3);1.65-2.25(m,4H,CHC/f2C//2P);2.80-3.70(m,4H，NC//2C/f2N);2.80-3.70(m，2H，CC//2C(0》；3.84(s,3H，OC//3);3.卯-4.05(m，4H,P(0)(OC//2CH3)2);4.17(m，1H,NCiZC(O));6.81(m，br,1H,C(0)N//CH2);7.05(d，2H，7.70(s，1H,NCi/=C);8.07(d,2H，尸外GR(Z):'H陽謹R(DMSO-d6):1.18(t,6H,P(0)(OCH2C//3)2),1.37(s，9H，C(OT3)3);1.70-2.30(m,4H,CHCi/2Ci/2P，)，2.95-3.70(m，4H，NC//2C//2N);3.90-4.10(m,4H,P(0)(OC//2CH3)2);4.20(m，1H，NC7/C(0));4.85-5.20(m,2H，NC7/2C(0));5.269(s,2H，OC//2Ph);6.95(m，br，1H,C(0)N//CH2);7.30-7.50(m，5H,尸/z);7.85(s,1H，N=C//N).GR(Ac):iH-NMR(DMSO-d6):1,20(t,6H，P(0)(OCH2C//3)2);1.41(s，9H,C(C//3)3);1.70-2.18(m,4H，CHC〃2C//2P);2.20(s，3H,C7/3C(0》；2.90-3.60(m，4H，NC//2Ci/2N);3.90-4.10(m，4H，P(0)(OC//2CH3)2);4.22(m,1H,NCZ/C(0));4.91-5.22(m，2H，NC//2C(0));7.00(m，br,1H，C(0,CH2);7.88(s，1H，N=C//-N);.CR(Bzl):^-NMR(DMSO-d6):1.21(t,6H，P(0)(OCH2C//3)2);1,40(s，9H，C(C//3)3);1.70-2.30(m，4H,CHC//2C//2P);3.20-3.60(m,4H,NC//2CH2N);3.93-4.02(m，4H,P(0)(OC//2CH3)2);4.28(m，1H,NC7/C(0));4.50-4,83(m，2H，NC/f2C(0》；6,90(m，br，1H,C(0)N/7CH2);7.33(d，1H，CCH=CHN);7.50-7.55(m，2H，尸/);7.62(d，1H，CCH=C//N);8.00-8.10(m,3H,CR(An):iH-N腿(DMSO-d6):1.22(t，6H，P(0)(OCH2C//3)2);1.39(s,9H,C(C//3)3);1.65-2.10(m，4H,CHC//2C//2P);3.20-3.60(m，4H,NCi72Ci/2N);3.84(s，3H，OC//3);3.85-4.05(m,4H，P(0)(OCi/2CH3)2);4.25(m，1H,NC7/C(0));4.50-4.95(m，2H,NC//2C(0));6.90(m,br，1H，C(0)N//CH2);7.04(d，2H,尸/z);7.30(d,1H,CC//=CHN);8.00(d，1H,CCH-C//N);8.03(d,2H,夠'，H畫NMR(DMSO-d6):1.22(t，6H，P(0)(OCH2C/73)2);1.39(s,9H,C(Ci/3)3);1.65-2.20(m,4H，CHC//2C//2P);1.75(s，3H,C=CC/73);2.90-3.50(m，4H,NC//2C//2N);3.90-4.10(m,4H,P(0)(OOT2CH3)2);4.18(m,1H,NC7/C(0));4.45-4.65(m，2H，NC//2C(0》；6.86(m，br，1H，C(0)N//CH2);7.37(s，1H,NC//=C).PR:^-NMR(DMSO-d6):1.20(t,6H，P(0)(OCH2C//3)2);1.38(s，9H，C(C//3)3);1.46-2.30(m，4H，CHC//2C//2P);3.00-3.45(m，4H，NC/f2C//2N);3,50-3.75(m，2H，CC772C(0));3.80-4.00(m，4H,P(0)(OC//2CH3)2);4.22(m,1H，NC7/C(0));7.10-7,30(m，5H,尸/).實施例10:進一步的在非對稱中心具有S構(gòu)型的通式ii化合物的制備:具有r構(gòu)型的通式n化合物的制備方法被類似地用于相應(yīng)的具有s構(gòu)型的通式ii化合物。這里，(r)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基吡嗪用作在實施例l描述的合成中的原料，并且如所述類似地進行下列合成。例如產(chǎn)生下列化合物js(z):化畫R(DMSO-d6):1.32(t,6H，P(0)(OCH2C//3)2)，1.42(s,9H，C(C//3)3);1,60-2.50(m，4H,CHC//2C//2P，)，3.10-3.55(m，4H,NC7/2C7/2N);3.65-3.90(m，2H，NC//2C(0》；4.00-4.15(m，4H，P(0)(OC7/2CH3)2);4.20(m，1H，NCi/C(0));5.24(s,2H，OC股h);6.80(m，br，1H,C(0)NM:H2);7.27(d,1H,OC闊；7.30-7.50(m,5H,尸/),實施例lh在基團K處具有MNPA取代基的本發(fā)明化合物的一般合成說明通過順序連接相應(yīng)的具有非對稱中心的通式n化合物和減相應(yīng)的不具有非對稱中心的通式ii化合物和/或氨基酸和/或氨基酸衍生物和/或熒光標記，利用固相肽合成，產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的化合物。在此情況下，采用下列合成方案步驟1:在二氯甲烷中預(yù)膨脹10mg樹脂(Boc-Gly-PAM-MBHA樹月旨，0.54mmol/g)3h。步驟2:開始合成循環(huán)用二氯甲垸洗滌4次。步驟3:通過與TFA和間甲酚(95:5)反應(yīng)而切割Boc基團。反應(yīng)期在每一情況下，2x3min。步驟4:用二氯甲烷洗滌5次。步驟5:用NMP洗滌5次。步驟6:用在NMP和吡啶(2:1)中的3.8當量的HATU和9當量NMM分別預(yù)活化4當量相應(yīng)的保護的通式II化合物或相應(yīng)保護的氨基酸1分鐘。步驟7:使活化的保護的通式II化合物或相應(yīng)保護的氨基酸分別與固相反應(yīng)；(l.偶聯(lián)；時間30分鐘)。步驟8:用NMP洗滌4次。步驟9:用二氯甲烷洗滌l次。步驟10:重復(fù)步驟6至8(2.偶聯(lián))。步驟11:用水合茚三酮檢查偶聯(lián)效率(Kaiser試驗；如果Kaiser試驗顯示出陽性結(jié)果，則步驟6至8必須用相應(yīng)的保護的通式II化合物重復(fù))。步驟12:在陰性Kaiser試驗后，該反應(yīng)序列用Ac20、NMP和吡啶(1:25:25)的溶液封端兩次，每次4分鐘。步驟13:用NMP洗滌5次。步驟14:重復(fù)合成循環(huán)(步驟2至13),直到與最終的相應(yīng)被保護的通式II化合物偶聯(lián)。隨后，任選地重復(fù)合成循環(huán)(步驟2至13),直到與最終的相應(yīng)被保護氨基酸偶聯(lián)。步驟15:用二氯甲烷洗滌4次。步驟16:通過與TFA和間甲酚(95:5)反應(yīng)而切割Boc基團。反應(yīng)期在每一情況下，2x3min。步驟17:用二氯甲烷洗滌5次。步驟18:用NMP洗滌5次。步驟19:用在NMP和吡淀(2:1)中的5.7當量HATU和13當量NMM預(yù)活化6當量MNPA-OH—分鐘。步驟20:使活化的MNPA-OH與固相反應(yīng)(時間30min)。步驟21:用NMP洗滌4次。步驟22:重復(fù)步驟19至21(2.偶聯(lián))。步驟23:用二氯甲烷洗滌5次。步驟24:為了干燥用乙醚洗滌5次。獲得通式I化合物，其在羧酸末端結(jié)合于樹脂。從樹脂切割本發(fā)明化合物-具有本發(fā)明化合物的樹脂在60'C在氨水溶液(在EbO中28-30重量百分比的NH3)中攪拌20h。隨后過濾切割的樹脂，以及在真空中濃縮濾液，并干燥。通過制備型HPLC，經(jīng)RP-C18柱，利用甲醇和水，純化粗產(chǎn)物。獲得本發(fā)明化合物，其為無色固體，收率為約50%。本發(fā)明化合物的分子量由MALDI-TOF表征。實施例12:在基團K處具有DNPA取代基的本發(fā)明化合物的一般合成說明通過順序連接相應(yīng)的具有非對稱中心的通式II化合物和/或相應(yīng)的不具有非對稱中心的通式II化合物和/或氨基酸和/或氨基酸衍生物和/或熒光標記，利用固相肽合成，制備根據(jù)本發(fā)明的化合物。由此，采用下列合成方案步驟1:在二氯甲烷中預(yù)膨脹10mg樹脂(Boc-Gly-PAM-MBHA樹脂，0.54mmol/g)3小時。步驟2:開始合成循環(huán)用二氯甲垸洗滌4次。步驟3:通過與TFA和間甲酚(95:5)反應(yīng)而切割Boc基團。反應(yīng)期在每一情況下，2x3min。步驟4:用二氯甲烷洗滌5次。步驟5:用NMP洗滌5次。步驟6:用在NMP和吡啶(2:1)中的3.8當量的HATU和9當量NMM分別預(yù)活化4當量相應(yīng)的保護的通式II化合物或相應(yīng)保護的氨基酸1分鐘。步驟7:使活化的保護的通式II化合物或相應(yīng)保護的氨基酸分別與固相反應(yīng)；(l.偶聯(lián)；時間30分鐘)。步驟8:用NMP洗滌4次。步驟9:用二氯甲烷洗滌l次。步驟10:重復(fù)步驟6至8(2.偶聯(lián))。步驟11:用水合茚三酮檢查偶聯(lián)效率(Kaiser試驗；如果Kaiser試驗顯示出陽性結(jié)果，則步驟6至8必須用相應(yīng)的保護的通式II化合物重復(fù))。步驟12:在陰性Kaiser試驗后，該反應(yīng)序列用Ac20、NMP和吡啶(1:25:25)的溶液封端兩次，每次4分鐘。步驟13:用NMP洗滌5次。步驟14:重復(fù)合成循環(huán)(步驟2至13)，直到與最終的相應(yīng)的保護通式II化合物偶聯(lián)。之后，任選重復(fù)合成循環(huán)(步驟2至13)，直到與最終的相應(yīng)保護氨基酸偶聯(lián)。步驟15:用二氯甲烷洗滌4次。步驟16:通過與TFA和間甲酚(95:5)反應(yīng)而切割Boc基團。反應(yīng)期在每一'瞎況下，2x3min。步驟17:用二氯甲烷洗滌5次。步驟18:用NMP洗滌5次。步驟19:用在NMP和吡啶(2:1)中的5.7當量HATU和13當量NMM預(yù)活化6當量MNPA-OH—分鐘。步驟20:使活化的DNPA-OH與固相反應(yīng)(時間30min)。步驟21:用NMP洗滌4次。步驟22:重復(fù)步驟19至21(2.偶聯(lián))。步驟23:用二氯甲垸洗滌5次。步驟24:為了干燥用乙醚洗滌5次。獲得通式I化合物，其在羧酸末端結(jié)合于樹脂。從樹脂切割本發(fā)明化合物具有本發(fā)明化合物的樹脂在60'C在氨水溶液(在H20中28-30重量百分比的NH3)中攪拌20h。隨后，通過過濾分離切割的樹脂，以及在真空中濃縮濾液，并干燥。通過制備型HPLC，經(jīng)RP-C18柱，利用甲醇和水，純化粗產(chǎn)物。獲得本發(fā)明化合物，其為無色固體，收率為約50%。本發(fā)明化合物的分子量由MALDI-TOF表征。實施例13:具有連接體以及在基團K處分別具有MNPA取代基或DNPA取代基的本發(fā)明化合物的一般合成說明通過順序連接相應(yīng)的具有非對稱中心的通式II化合物和/或相應(yīng)的不具有非對稱中心的通式II化合物和/或氨基酸和/或氨基酸衍生物和/或熒光標記以及合適的連接體單體，利用固相肽合成，制備本發(fā)明的化合物。由此，采用下列合成方案合成方案步驟1:在二氯甲垸中預(yù)膨脹10mg樹脂(Boc-Gly-PAM-MBHA樹脂，0.54mmol/g)3小時。步驟2:開始合成循環(huán)用二氯甲垸洗滌4次。步驟3:通過與TFA和間甲酚(95:5)反應(yīng)而切割Boc基團。反應(yīng)期在每一情況下，2x3min。步驟4:用二氯甲垸洗滌5次。步驟5:.用NMP洗滌5次。步驟6:用在NMP和吡啶(2:1)中的3.8當量的HATU和9當量NMM分別預(yù)活化4當量相應(yīng)的保護的通式II化合物或相應(yīng)保護的氨基酸1分鐘。步驟7:使相應(yīng)的保護的通式II化合物或相應(yīng)保護的氨基酸分別與固相反應(yīng)；(l.偶聯(lián)；時間30分鐘)。步驟8:用NMP洗滌4次。步驟9:用二氯甲烷洗滌l次。步驟10:重復(fù)步驟6至8(2.偶聯(lián))。步驟11:用水合茚三酮檢查偶聯(lián)效率(Kaiser試驗；如果Kaiser試驗顯示出陽性結(jié)果，則步驟6至8必須用相應(yīng)的保護的通式II化合物重復(fù))。步驟12:在陰性Kaiser試驗后，該合成序列用Ac20、NMP和吡啶(1:25:25)的溶液封端兩次，每次4分鐘。步驟13:用NMP洗滌5次。步驟14:重復(fù)合成循環(huán)(步驟2至13)，直到與連接體egl(8-氨基-2，6-二氧雜辛酸)偶聯(lián)。步驟15:偶聯(lián)連接體用二氯甲垸洗滌4次。步驟16:通過與TFA和間甲酚(95:5)反應(yīng)而切割Boc基團。反應(yīng)期在每一情況下，2x3min。步驟17:用二氯甲烷洗滌5次。步驟18:用NMP洗滌5次。步驟19:用在NMP和吡啶(2:l)中的3.8當量HATU和9當量NMM預(yù)活化4當量egl—分鐘。步驟20:使活化的連接體與固相反應(yīng)(1.偶聯(lián)；時間30min)。步驟21:用NMP洗滌4次。步驟22:用二氯甲烷洗滌l次。步驟23:重復(fù)步驟19至21(2.偶聯(lián))。步驟24:用水合茚三酮檢查偶聯(lián)效率(Kaiser試驗；如果Kaiser試驗顯示出陽性結(jié)果，則步驟19至21必須重復(fù)進行)。步驟25:在陰性Kaiser試驗后，該反應(yīng)序列用Ac20、NMP和吡啶(1:25:25)的溶液封端兩次，每次4分鐘。步驟26:用NMP洗滌5次。步驟27:重復(fù)合成步驟(步驟15至26)兩次，得到(egl)3。步驟28:重復(fù)合成循環(huán)的步驟(步驟2至13)，直到與最終的相應(yīng)的保護通式II化合物偶聯(lián)。之后，任選地重復(fù)合成循環(huán)的步驟(步驟2至13)，直到與最終的相應(yīng)保護氨基酸偶聯(lián)。之后，在偶聯(lián)MNPA-OH的情況下，進行實施例11的步驟15至24，或者在偶聯(lián)DNPA-OH的情況下，進行實施例12的步驟15至24。獲得具有連接體的本發(fā)明化合物，其在羧酸末端結(jié)合于樹脂。從樹脂切割具有連接體的本發(fā)明化合物具有含連接體的本發(fā)明化合物的樹脂在6(TC在氨水溶液(在H20中28-30重量百分比的NH3)中攪拌20h。隨后，通過過濾分離切割的樹脂，以及在真空中濃縮濾液，并干燥。通過制備型HPLC，經(jīng)RP-C18柱，禾lj用甲醇和水，純化粗產(chǎn)物。獲得具有連接體的本發(fā)明化合物，其為無色固體，收率為約50%。本發(fā)明化合物的分子量由MALDI-TOF表征。實施例14:序列的進一步實施例按照實施例11或12的一般合成說明，產(chǎn)生進一步的本發(fā)明化合物MNPA-AKcGKgTKcGKgCKgAKaCKaTK-Gly-NH2MNPA-Bio-ARcGRgTRcGRgCRgARaCRaTR-Gly-NH2(Bio=賴氨酸，經(jīng)由賴氨酸側(cè)鏈的氨基官能用生物素進行官能化)DNPA-ARcGRgTRcGRgCRgARaCRaTR-Gly-NH2DNPA-Bio-ARcGRgTRcGRgCRgARaCRaTR-Gly-NH2DNPA畫tGRcCVRgGRaCRtCRcARgCR-Gly-NH2DNPA—Bio-tGRcCWgGRaCWRgCR-Gly-NH2DNPA-tGRcCRtARggactCRcARgCR-Gly-NH2DNPA—Bio-tGRcCWggactCRcARgCR-Gly畫NH2DNPA-cGRaAWaGRgARgGRcTW-Gly掘2DNPA-Bio國cGRaA^RaGRgARgGRcT、AR-Gly-NH2DNPA-cGRaA^^aggagGRcT、AR-Gly-NH2DNPA-Bio-cGRaARtARaggagGRcTRtAR-Gly-NH2DNPA-gGRcTRcGRaAWaGRgARgGR國GIy掘2DNPA-Bio陽gGRcTRcGWRaGRgARgGR-Gly掘2DNPA-gGRcTRcGRaataaGRgARgGR-Gly-NH2DM>A-Bio-gGRcTRcGRaataaGRgARgGR-Gly-NH2DNPA-aCRaARaTRgCRaTRgGRgC、GR-Gly掘2DNPA-Bio-aCRaARaTRgCRaTRgGRgCRtGR-Gly-NH2DNPA-aCRaARaTRgcatgGRgC、GR-Gly-NH2DNPA-Bio-aCRaARaTVatgGRgC、GR-Gly-NH2DNPA-cGRcC、TRaTRcCRgTRaGRcCR-Gly-NH2DNPA-Bio-cGRcC^TVrRcCRgTRaGRcCR-Gly-NH2DNPA-cGWatccgTRaGRcC^Gly-NH2DNPA國Bio-cGRcC、TRatccgTRaGRcCR-Gly-NH2DM>A-tgccTRaGRgactcCRaGRc-Gly-NH2DNPA-Dota-gGRcTRcGRaA、AKaGRgARgGR-Gly-NH2(DOTA-賴氨酸，經(jīng)由賴氨酸側(cè)鏈的氨基官能用DOTA進行官能化)實施例15:具有通式V的本發(fā)明化合物的合成說明將2mlDMF和2ml吡啶放入旋槳杯(screwcup)。攪拌下，加入3S2mg(2.95mmol)DIPEA，隨后加入291mg(1.48mmol)4-羥基-3-硝基-苯基乙酸。隨后加入溶解在2mlDMF中的562mg(1.48mmol)HATU。使反應(yīng)混合物預(yù)活化5分鐘。將該預(yù)活化的溶液逐滴加入500mg(1.48mmol)2-(10-羥癸基)-5,6-二甲氧基-3-甲基環(huán)己-2,5-二烯-l,4-二酮(Idebenone)溶解在10mlDMF中的溶液，并隨后加熱至40'C。在24h的反應(yīng)時間之后，除去溶劑，且殘留物溶解在乙酸乙酯中。用2N硫酸氫鉀溶液洗滌有機相兩次，用飽和氯化鈉溶液洗滌一次，隨后經(jīng)硫酸鎂干燥。通過色譜純化粗產(chǎn)物(硅膠，己烷和乙酸乙酯，1:1，v/v)。oohatu,dmf，d1pea,吡啶，4ox:o實施例16:分別攜帶一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基的通式I化合物的選擇性定位HeLa細胞或143B親代細胞分別與10pM生物素標記的通式I化合物溶液溫育。24h后，加入2jliMMitoTracker溶液，而在又45min后，用乙醇固定細胞。隨后，使熒光素和抗生物素蛋白(5pg/ml)的溶液在室溫作用于所述細胞30min。在洗滌細胞后，使生物素化的抗生物素蛋白溶液(5pg/ml)在室溫作用于所述細胞30min。在進一步洗滌細胞后，再次使熒光素和抗生物素蛋白(5pg/ml)的溶液在室溫作用于所述細胞30min。在進一步洗滌步驟后，通過DAPI對染，標記細胞核。隨后，通過共焦顯微鏡，研究細胞內(nèi)通式I化合物的線粒體以及細胞核的空間分布或分散。實施例17:在通過本發(fā)明的化合物DNPA-tGKcCKtAKggactCKcAKgCK-Gly-NH2處理的HeLa細胞中COX1和mtDNA量的減少HeLa細胞與不同濃度(100nM、250nM、500nM、1)iM、2.5pM、5pM和10nM)的針對編碼線粒體蛋白C0X1的DNPA-tG^C^ARggactC^cARgC、Gly-NH2("有效")溶液溫育不同的時間(3、6、9、11和17天)。在超過3天的實驗的情況下，每3天用具有相同濃度的本發(fā)明化合物DNPA-tGRcCRtA、gactCRcARgCR-Gly-NH2的新鮮培養(yǎng)基替換上清液。相對于作為內(nèi)標的孔蛋白，通過蛋白質(zhì)印跡，進行COXl水平的測定，孔蛋白是一種線粒體跨膜蛋白，其濃度不受本發(fā)明化合物處理的影響。相比于未處理的HeLa細胞，呈現(xiàn)出C0X1減少。在本文中，未處理的HeLa細胞的COX1濃度被定義為100%。在lOpM的本發(fā)明化合物濃度，HeLa細胞中的COX1水平在3天后降至67%，而在9天后降至20%。下表示出了在9天的處理時間后COX1減少的濃度依賴性:<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>相對于作為內(nèi)標的細胞核DNA——其不受本發(fā)明化合物DNPA-tGKcCV^ggactC、A、CK-Gly-NH2處理的影響，通過實時PCR，進行mtDNA量的測定。相比于未處理的HeLa細胞，呈現(xiàn)出mtDNA的減少。在本文中，未處理的HeLa細胞的mtDNA的量定義為100%。作為進一步的比較，使用無mtDNA/mtRNA的互補序列的本發(fā)明化合物("陰性對照")。在10的本發(fā)明化合物DNPA-tGKcC、A、gactCKcA、C、Gly-NH2濃度下，在3天后仍未評估到效應(yīng)。分別相比于未處理的HeLa細胞或用陰性對照處理的HeLa細胞，在6天后，可以觀察到mtDNA降至81%，而在9天后降至62%。之后，減少的mtDNA的量的值在11天(64%)和17天(61°/。)后也保持不變。下表示出了相比于陰性對照在用有效的本發(fā)明化合物處理9天后mtDNA減少的濃度依賴性:<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>權(quán)利要求1.式I化合物，其中n表示0至35的整數(shù)，各個E彼此獨立地表示氫原子、取代或未取代的苯基、取代或未取代的雜環(huán)、任選地由保護基取代的核堿基、或DNA嵌入劑，各個R1彼此獨立地表示氫原子或天然存在或非天然存在的氨基酸的側(cè)鏈，或者任選地取代的具有可達20個碳原子的烷基、烯基、烷基芳基、芳基、雜環(huán)基或脂環(huán)族基團，其中所述任選地取代的具有可達20個碳原子的烷基、烯基、烷基芳基、芳基、雜環(huán)基或脂環(huán)族基團中的至少一個被一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能取代，K表示具有式-NR2R3、R2R3R4、-NR2(CO)R3或-NR2(CS)R3的基團，其中R2、R3和R4彼此獨立地表示氫原子、烷基、烷芳基、烯基、或炔基、氨基保護基、報道配體、熒光標記、嵌入劑、螯合劑、氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、糖類、脂質(zhì)、類固醇、脂肪酸、寡核苷酸、量子點、FRET猝滅劑(熒光共振能量轉(zhuǎn)移猝滅劑)或在水中可溶或不可溶的聚合物，其中上述基團的每一個可任選地被取代，L表示具有式-NR5R6、-NR5(CO)R6、-NR5(CS)R6、-OR7或-SR7的基團，其中R5和R6彼此獨立地表示氫原子、烷基、烷芳基、烯基、或炔基、報道配體、熒光標記、嵌入劑、螯合劑、氨基酸、氨基酸酰胺、肽、肽酰胺、蛋白質(zhì)、糖類、脂質(zhì)、類固醇、脂肪酸、寡核苷酸、量子點、FRET猝滅劑(熒光共振能量轉(zhuǎn)移猝滅劑)或在水中可溶或不可溶的聚合物，并且其中R7表示氫原子、烷基、報道配體、熒光標記、嵌入劑、螯合劑、氨基酸、氨基酸酰胺、肽、肽酰胺、蛋白質(zhì)、糖類、脂質(zhì)、類固醇、脂肪酸、寡核苷酸、量子點、FRET猝滅劑或在水中可溶或不可溶的聚合物，其中上述基團的每一個可任選地被取代，其中基團K、L或R1彼此獨立地用至少一個一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基取代。2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物具有至少一個非對稱中心。3.前述權(quán)利要求之一所述的化合物，其中至少一個基團R"不表示氫原子，并且所述式I化合物具有至少一個非對稱中心。4.前述權(quán)利要求之一所述的化合物，其中各第二個基團R1彼此獨立地表示任選地取代的具有可達20個碳原子的烷基、烯基、烷基芳基、芳基、雜環(huán)或脂環(huán)族基團，且其余的基團R1表示氫原子。5.權(quán)利要求1至3之一所述的化合物，其中各第三個基團R1彼此獨立地表示任選地取代的具有可達20個碳原子的烷基、烯基、烷基芳基、芳基-、雜環(huán)或脂環(huán)族基團，且其余的基團R'表示氫原子。6.前述權(quán)利要求之一所述的化合物，其中兩個、三個或更多個相鄰的基團R1彼此獨立地表示任選地取代的具有可達20個碳原子的烷基、烯基、烷基芳基、芳基、雜環(huán)或脂環(huán)族基團，且其余的基團W表示氫原子。7.權(quán)利要求1至3之一所述的化合物，其中各W彼此獨立地表示任選地取代的具有可達20個碳原子的院基、烯基、垸基芳基、芳基、雜環(huán)或脂環(huán)族基團。8.前述權(quán)利要求之一所述的化合物，其中一個或多個基團R'彼此獨立地表示膦酸酯官能或膦酸官能。9.前述權(quán)利要求之一所述的化合物，其中所有非對稱中心具有相同構(gòu)型。10.前述權(quán)利要求之一所述的化合物，其中所有非對稱中心具有(S)構(gòu)型。11.權(quán)利要求1至9之一所述的化合物，其中所有非對稱中心具有(R)構(gòu)型。12.前述權(quán)利要求之一所述的化合物，其中各R1彼此獨立地具有一個或多個膦酸酯官能或膦酸官能，其中所述膦酸酯官能具有式-P(O)(0V)2或-P(-O)(OV)(OH)，其中各V彼此獨立地表示未取代的具有可達20個碳原子的烷基、烯基、垸基芳基、芳基或脂環(huán)族基團。13.權(quán)利要求12所述的化合物，其中各V彼此獨立地表示甲基、乙基、環(huán)己基或芐基。14.化合物，其含有經(jīng)連接體彼此連接的至少兩種權(quán)利要求1至13之一所述的化合物。15.權(quán)利要求14所述的化合物，其中所述連接體表示垸基鏈、肽、寡核苷酸或由至少三個8-氨基-3，6-二氧雜辛酸單元組成的寡聚體。16.組合物，其含有至少一種前述權(quán)利要求之一所述的化合物。17.藥物組合物，其含有至少一種權(quán)利要求1至16之一所述的化合物或組合物，任選地與至少一種載體、溶劑或其它藥物佐劑組合。18.權(quán)利要求1至16之一的化合物或組合物或權(quán)利要求17的藥物組合物在制備治療或預(yù)防線粒體病的藥物中的用途。19.權(quán)利要求1至16之一的化合物或組合物在線粒體性質(zhì)或線粒體病的診斷中的用途。20.權(quán)利要求1至16之一的化合物或組合物或權(quán)利要求17的藥物組合物在治療或預(yù)防線粒體病中的用途。21.權(quán)利要求18至20之一所述的用途，其中所述線粒體病表示遺傳病。22.權(quán)利要求18至21之一所述的用途，用于癌癥的治療或預(yù)防。23.權(quán)利要求18至21之一所述的用途，用于糖尿病的治療或預(yù)防。24.權(quán)利要求18至21之一所述的用途，用于帕金森病的治療或預(yù)防。25.權(quán)利要求18至21之一所述的用途，用于衰老現(xiàn)象的治療或預(yù)防。26.權(quán)利要求18至21之一所述的用途，用于動脈硬化的治療或預(yù)防。27.權(quán)利要求1至16之一的化合物或組合物或權(quán)利要求17的藥物組合物在制備防止細胞或活體生物中mtDNA轉(zhuǎn)錄的藥物中的用途。28.權(quán)利要求1至16之一的化合物或組合物或權(quán)利要求17的藥物組合物在制備防止細胞或活體生物中mtRNA翻譯的藥物中的用途。29.式V化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中z表示能夠氧化或還原的官能團，M表示連接基團，和P表示一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基。30.在線粒體上和線粒體中選擇性定位化合物的方法，其特征在于所述化合物用至少一個一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基取代。31.權(quán)利要求30所述的方法，其中所述化合物包含能夠氧化或還原的官能團。32.權(quán)利要求30所述的方法，其中所述化合物包含抗氧化劑。33.權(quán)利要求30、31或32之一所述的方法，其中所述化合物是權(quán)利要求29所述的式V化合物。34.組合物，其含有至少一種權(quán)利要求29所述的化合物。35.藥物組合物，其含有至少一種權(quán)利要求29所述的化合物或權(quán)利要求34所述的組合物，任選地與至少一種載體、溶劑或其它藥物佐劑組合。36.權(quán)利要求29所述的化合物或權(quán)利要求34的組合物或權(quán)利要求35的藥物組合物在制備治療或預(yù)防線粒體病的藥物中的用途。37.權(quán)利要求29所述的化合物或權(quán)利要求34的組合物或權(quán)利要求35的藥物組合物在線粒體性質(zhì)或線粒體病的診斷中的用途。38.權(quán)利要求29所述的化合物或權(quán)利要求34的組合物或權(quán)利要求35的藥物組合物在治療或預(yù)防線粒體病中的用途。39.權(quán)利要求36至38之一所述的用途，其中所述線粒體病是遺傳病。40.權(quán)利要求36至39之一所述的用途，用于癌癥的治療或預(yù)防。41.權(quán)利要求36至39之一所述的用途，用于糖尿病的治療或預(yù)防。42.權(quán)利要求36至39之一所述的用途，用于帕金森病的治療或預(yù)防。43.權(quán)利要求36至39之一所述的用途，用于衰老現(xiàn)象的治療或預(yù)防。44.權(quán)利要求36至39之一所述的用途，用于動脈硬化的治療或預(yù)防。全文摘要本發(fā)明涉及在活細胞內(nèi)在線粒體上和線粒體中選擇性定位活性劑的新方法，以及在無進一步的佐劑下滲透穿過細胞膜進入細胞且在那里可定位于線粒體上和線粒體中的相應(yīng)活性劑。這些活性劑用至少一個一羥基一硝基苯基或一羥基二硝基苯基取代。文檔編號C07K14/00GK101547934SQ200780039740公開日2009年9月30日申請日期2007年10月23日優(yōu)先權(quán)日2006年10月24日發(fā)明者B·沃納,S·皮珀,T·林霍斯特申請人:Ugichem有機化學(xué)學(xué)會有限公司