專利名稱：IKK-β絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶抑制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及的化合物可用于在體外或體內(nèi)抑制組IKK尤其是IKKβ活性。
含有本發(fā)明化合物以及一種或多種藥學上可接受的載體和賦形劑的藥物組合物也是本發(fā)明的一部分。
在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明的化合物可用于制備組合物以治療腫瘤性/增生性疾病、自身免疫性疾病，尤其是上述那些IKK尤其是IKKβ活性發(fā)揮作用的疾病。
另一方面，本發(fā)明提供了一種治療上述疾病類型的方法，所述方法包括給予患有這種疾病的對象有效量的如上文定義的式(IA)或(IB)的化合物。
術語 文中，術語“(Ca-Cb)烷基”，其中a和b是整數(shù)，表示含有a-b個碳原子的直鏈和支鏈烷基。因此，例如當a是1而b是6時，該術語包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。
文中，術語“二價(Ca-Cb)亞烷基”，其中a和b是整數(shù)，表示含有a-b個碳原子和兩個不飽和化學價的飽和烴鏈。
文中，術語“(Ca-Cb)烯基”，其中a和b是整數(shù)，表示含有a-b個碳原子并具有至少一個合適的E或Z立體化學的雙鍵的直鏈和支鏈烯基部分。該術語包括，例如，乙烯基、烯丙基、1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。
文中，術語″二價(Ca-Cb)亞烯基″表示含有a-b個碳原子、至少一個雙鍵和兩個不飽和化學價的烴鏈。
文中，術語″(Ca-Cb)炔基″，其中a和b是整數(shù)，表示含有a-b個碳原子且還含有一個三鍵的直鏈和支鏈烴基。該術語可包括，例如，乙炔基、1-丙炔基、1-和2-丁炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。
文中，術語″二價(Ca-Cb)亞炔基″，其中a和b是整數(shù)，表示含有a-b個碳原子和至少一個三鍵的二價烴鏈。
文中，術語″碳環(huán)″指含有最多達16個環(huán)原子且所有環(huán)原子均為碳原子的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)基團，并包括芳基和環(huán)烷基。
文中，術語″環(huán)烷基″指含有3-8個碳原子的單環(huán)的飽和碳環(huán)基團，該術語包括，例如，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。
文中，非限制性術語″芳基″指單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)的碳環(huán)芳香基團，并包括含有兩個通過共價鍵直接相連的單環(huán)碳環(huán)芳香環(huán)的基團。這種基團的例子有苯基、聯(lián)苯基和萘基。
文中，非限制性術語″雜芳基″指含有一個或多個選自S、N或O的雜原子的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)芳香基團，并包括含有通過共價鍵直接相連的兩個此類單環(huán)或者一個此類單環(huán)和一個單環(huán)芳基環(huán)的基團。這種基團的例子有噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噻唑基、苯并異噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、異噁唑基、苯并異噁唑基、異噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。
文中，非限制性術語″雜環(huán)基″或″雜環(huán)″包括上面定義的″雜芳基″，其非芳香含義包括含有一個或多個選自S、N或O的雜原子的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)非芳香基團，并包括由含有一個或多個這種雜原子的單環(huán)非芳香基團構成的基團，所述單環(huán)非芳香基團共價連接到另一個此類基團或連接到單環(huán)碳環(huán)基團。這種基團的例子有吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、嗎啉基、哌嗪基、吲哚基、嗎啉基、苯并呋喃基、吡喃基、異噁唑基、苯并咪唑基、亞甲二氧基苯基、亞乙二氧基苯基、馬來酰亞胺基(maleimido)和琥珀酰亞胺基。
“二價亞苯基、亞吡啶基(pyridinylene)、亞嘧啶基(pyrimidinylene)或亞吡嗪基(pyrazinylene)基團”是有兩個不飽和價的苯環(huán)、吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)或吡嗪環(huán)，包括1，3-亞苯基、1，4-亞苯基，和以下這些
除非當其出現(xiàn)時文中另有說明，術語″取代的″用于本文所述的任何部分時表示被最多4個相容的取代基取代，各取代基獨立為，例如，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羥基，羥基(C1-C6)烷基，巰基，巰基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷硫基，苯基，鹵素(包括氟、溴和氯)，三氟甲基，三氟甲氧基，硝基，腈(-CN)，氧代，-COOH，-COORA，-CORA，-SO2RA，-CONH2，-SO2NH2，-CONHRA，-SO2NHRA，-CONRARB，-SO2NRARB，-NH2，-NHRA，-NRARB，-OCONH2，-OCONHRA，-OCONRARB，-NHCORA，-NHCOORA，-NRBCOORA，-NHSO2ORA，-NRBSO2OH，-NRBSO2ORA，-NHCONH2，-NRACONH2，-NHCONHRB，-NRACONHRB，-NHCONRARB或-NRACONRARB，其中，RA和RB獨立為(C1-C6)烷基，(C3-C6)環(huán)烷基，苯基或含有5或6個環(huán)原子的單環(huán)雜芳基，或者當RA和RB連接到相同氮原子時形成環(huán)狀氨基(例如嗎啉代，哌啶基，哌嗪基或四氫吡咯基)。“任選的取代基”可以是上述取代基之一。
文中，術語“鹽”包括堿加成鹽、酸加成鹽和季鹽(quaternary salt)。酸性的本發(fā)明的化合物可與堿、有機堿形成鹽，包括藥學上可接受的鹽，所述堿例如堿金屬的氫氧化物如氫氧化鈉和氫氧化鉀；堿土金屬的氫氧化物如氫氧化鈣、氫氧化鋇和氫氧化鎂；所述有機堿例如N-甲基-D-葡糖胺、膽堿三(羥甲基)氨基-甲烷、L-精氨酸、L-賴氨酸、N-乙基哌啶、二芐基胺等。那些堿性的化合物(IA)和(IB)可與無機酸和有機酸形成鹽，包括藥學上可接受的鹽，所述無機酸例如氫鹵酸如鹽酸或氫溴酸、硫酸、硝酸或磷酸等，所述有機酸例如乙酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、蘋果酸、水楊酸、檸檬酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、苯甲酸、苯磺酸、谷氨酸、乳酸和扁桃酸等。
預計本發(fā)明化合物可以水合物或溶劑合物形式回收。術語‘溶劑合物’在文中用來描述包含本發(fā)明化合物和化學計量量的一種或多種藥學上可接受的溶劑分子如乙醇的分子復合物。當所述溶劑是水時采用術語‘水合物’。
由于存在不對稱碳原子，含有一個或多個實際的或潛在的手性中心的本發(fā)明的化合物可作為許多在各手性中心上具有R或S立體化學的非對映異構體存在。本發(fā)明包括所有這些非對映異構體和它們的混合物。
術語“酯”或“酯基”或“酯化的羧基”與上述取代基R1相連表示基團RxO(C＝O)-，其中R9是從理論上說衍生自醇RxOH的酯的特征性基團。
現(xiàn)在將更加詳細地討論本發(fā)明化合物中的可變?nèi)〈突鶊F 取代基R7 R7是H或任選取代的(C1-C6)烷基，如甲基、乙基或者正丙基和異丙基。目前優(yōu)選R7是氫。
環(huán)A 環(huán)A是任選取代的有5-13個原子的二價芳基或雜芳基環(huán)，如單環(huán)5-或6-元環(huán)或者二環(huán)5，6-、6，6-或5，5-環(huán)系統(tǒng)。例子包括二價亞苯基、亞吡啶基、亞嘧啶基和亞吡嗪基。目前優(yōu)選1，4-亞苯基或1，3-亞苯基。環(huán)A中的任選取代基可選自，例如，氟、氯、甲基、三氟甲基等。
式-(CH2)z-X1-L1-Y-NHCHR1R2的基團Z Z中的基團R1 R1是羧酸基，或可被一種或多種胞內(nèi)羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基。能夠?qū)⒈景l(fā)明化合物的酯基水解成相應的酸的細胞內(nèi)羧酸酯酶包括三種已知的人類的酶的同種型hCE-1、hCE-2和hCE-3。盡管這些酶被認為是主要的酶，但其它的酶如聯(lián)苯基水解酶(BPH)也具有水解酯的作用。通常，如果羧酸酯酶將游離的氨基酸酯水解成母體酸，則當共價結合到IKK抑制劑時羧酸酯酶也會水解酯基序(ester motif)。因此，本文所述的破細胞測定法(broken cell assay)提供了一種直接、快速且簡便的首次篩選具有所需水解曲線的酯的方法。當將用這種方法選出的酯基序通過選擇性結合化學結合到調(diào)節(jié)劑時可采用相同的羧酸酯酶測定法再次測定，以證實它仍舊是該背景下的羧酸酯酶底物。
為被細胞內(nèi)羧酸酯酶水解，特定的酯基R1的例子包括式-(C＝O)OR14的基團，其中，R14是R8R9R10C-，其中 (i)R8是氫或任選取代的(C1-C3)烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-或(C2-C3)烯基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b獨立為0或1，Z1是-O-、-S-或-NR11-，其中R11是氫或(C1-C3)烷基；且R9和R10獨立為氫或(C1-C3)烷基-； (ii)R8是氫或任選取代的R12R13N-(C1-C3)烷基-，其中R12是氫或(C1-C3)烷基和R13是氫或(C1-C3)烷基；或R12和R13與它們所結合的氮一起形成任選取代的5-或6-個環(huán)原子的單環(huán)雜環(huán)或8-10個環(huán)原子的二環(huán)雜環(huán)系統(tǒng)，且R9和R10獨立為氫或(C1-C3)烷基-；或 (iii)R8和R9與它們所結合的碳一起形成任選取代的3-7個環(huán)原子的單環(huán)碳環(huán)或8-10個環(huán)原子的二環(huán)碳環(huán)系統(tǒng)，且R10是氫。
這些類別中，R10通常是氫。R14的具體例子包括甲基，乙基，正或異丙基，正、仲或叔丁基，環(huán)己基，烯丙基，苯基，芐基，2-、3-或4-吡啶基甲基，N-甲基哌啶-4-基，四氫呋喃-3-基，甲氧基乙基，茚滿基，降冰片基，二甲基氨基乙基，或嗎啉代乙基。目前優(yōu)選R14是環(huán)戊基或叔丁基。
已知巨噬細胞通過釋放細胞因子，尤其是TNFα和IL-1而在炎性疾病中發(fā)揮關鍵作用(范落恩(van Roon)等，Arthritis and Rheumatism，2003，1229-1238)。在類風濕性關節(jié)炎中，它們是維持關節(jié)炎癥和關節(jié)破壞的主要貢獻者。巨噬細胞也參與腫瘤的生長和發(fā)展(那第你(Naldini)和卡落卡(Carraro)，Curr DrugTargets Inflamm Allergy，2005，3-8)。因此，選擇性靶向巨噬細胞增殖的試劑對于治療癌癥和自身免疫性疾病很有價值。預計靶向特定細胞類型能降低副作用。發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了將抑制劑靶向表達hCE-1的細胞尤其是巨噬細胞以及其他衍生自骨髓-單核細胞譜系的細胞如單核細胞、破骨細胞和樹突細胞的方法。該方法基于以下發(fā)現(xiàn)，即酯酶基序連接抑制劑的方式?jīng)Q定了它是否被所有三種人羧酸酯酶水解或僅被hCE-1水解，因此是否在不同細胞類型中累積。具體地說，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)巨噬細胞以及其他衍生自骨髓-單核細胞譜系的細胞，所述細胞可以是正?；虬┬缘?，含有人羧酸酯酶hCE-1而其它細胞類型不含有。在通式(IA)和(IB)中，當酯酶基序R1CH(R2)NH-的氮不直接連接到羰基(-C(＝O)-)時，即當Y不是-C(＝O)、-C(＝O)O-或-C(＝O)NR3-基團時，該酯將僅被hCE-1水解，因此該抑制劑選擇性累積于與巨噬細胞相關的細胞內(nèi)。
Z中的氨基酸側鏈R2 因為需要使酯基R1被細胞內(nèi)羧酸酯酶水解，側鏈基團R2的種類對于非巨噬細胞選擇性化合物并不關鍵。對于巨噬細胞選擇性化合物，優(yōu)選的側鏈是纈氨酸、環(huán)己基甘氨酸、叔丁基絲氨酸、叔丁基半胱氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和苯基甘氨酸。
氨基酸側鏈的例子包括(C1-C6)烷基，苯基，2-、3-或4-羥基苯基，2-、3-或4-甲氧基苯基，2-、3-或4-吡啶基甲基，芐基，苯乙基，2-、3-或4-羥基芐基，2-、3-或4-芐氧基芐基，2-、3-或4-(C1-C6)烷氧基芐基，以及芐氧基(C1-C6烷基)-基團； 天然α氨基酸的特征性基團，其中的任何官能團可被保護； 基團-[Alk]nR16，其中，Alk是任選被一個或多個-O-或-S-原子或-N(R17)-基團[其中，R17是氫原子或(C1-C6)烷基]打斷的(C1-C6)烷基或(C2-C6)烯基或，n是0或1，R16是任選取代的環(huán)烷基或環(huán)烯基； 在苯環(huán)中被式-OCH2COR18的基團取代的芐基，其中R18是羥基、氨基、(C1-C6)烷氧基、苯基(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基氨基、二((C1-C6)烷基)氨基、苯基(C1-C6)烷基氨基、氨基酸或?；u的殘基、酯或其酰胺衍生物，所述殘基通過酰胺鍵連接，所述氨基酸選自甘氨酸、α或β丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、組氨酸、精氨酸、谷氨酸或天冬氨酸； 在雜環(huán)中未被取代或被以下基團單-或二-取代的雜環(huán)(C1-C6)烷基鹵素、硝基、羧基、(C1-C6)烷氧基、氰基、(C1-C6)烷?；?、三氟甲基(C1-C6)烷基、羥基、甲?；被?、(C1-C6)烷基氨基、二-(C1-C6)烷基氨基、巰基、(C1-C6)烷硫基、羥基(C1-C6)烷基、巰基(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基苯基甲基；和 基團-CRaRbRc，其中 Ra、Rb和Rc各自獨立為氫、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基；或 Rc是氫，Ra和Rb獨立為苯基或雜芳基，如吡啶基；或 Rc是氫、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(C1-C6)烷基或(C3-C8)環(huán)烷基，Ra和Rb與它們所結合的碳原子一起形成3-8元環(huán)烷基或5-6元雜環(huán)；或 Ra、Rb和Rc與它們所結合的碳原子一起形成三環(huán)(例如金剛烷基)；或 Ra和Rb各自獨立為(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(C1-C6)烷基、或是除氫之外的如下文對Rc定義的基團，或者Ra和Rb與它們所結合的碳原子一起形成環(huán)烷基或雜環(huán)，且Rc是氫、-OH、-SH、鹵素、-CN、-CO2H、(C1-C4)全氟烷基、-CH2OH、-CO2(C1-C6)烷基、-O(C1-C6)烷基、-O(C2-C6)烯基、-S(C1-C6)烷基、-SO(C1-C6)烷基、-SO2(C1-C6)烷基、-S(C2-C6)烯基、-SO(C2-C6)烯基、-SO2(C2-C6)烯基或基團-Q-W，其中，Q代表鍵或-O-、-S-、-SO-或-SO2-，W代表苯基、苯基烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基烷基、(C4-C8)環(huán)烯基、(C4-C8)環(huán)烯基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，基團W可任選被一個或多個獨立選自下組的取代基取代羥基、鹵素、-CN、-CO2H、-CO2(C1-C6)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基、-CONH(C1-C6烷基)2、-CHO、-CH2OH、(C1-C4)全氟烷基、-O(C1-C6)烷基、-S(C1-C6)烷基、-SO(C1-C6)烷基、-SO2(C1-C6)烷基、-NO2、-NH2、-NH(C1-C6)烷基、-N((C1-C6)烷基)2、-NHCO(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C4-C8)環(huán)烯基、苯基或芐基。
具體的R2基團的例子包括氫(甘氨酸“側鏈”)、芐基、苯基、環(huán)己基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、叔丁氧基甲基、異丁基、仲丁基、叔丁基、1-芐硫基-1-甲基乙基、1-甲硫基-1-甲基乙基、1-巰基-1-甲基乙基和苯乙基。目前優(yōu)選的R2基團包括苯基、芐基以及異丁基、環(huán)己基和叔丁氧基甲基。
對于要全身給予的本發(fā)明的化合物，優(yōu)選被羧酸酯酶斷裂的速率慢的酯，因為這種酯不易于被系統(tǒng)前代謝。因此它們完整到達其靶組織的能力增強了，且所述酯可在靶組織的細胞內(nèi)被轉(zhuǎn)化成酸產(chǎn)物。然而，對于局部給藥而言，此時酯被直接施加于靶組織或通過例如吸入直接到達靶組織，通常需要這種酯被酯酶快速斷裂，以使全身暴露和隨后不希望的副作用最小。在本發(fā)明的化合物中，如果鄰近α氨基酸酯α碳原子的碳原子被單取代，即R2是CH2Rz(Rz為單取代基)，則與上述碳原子如果被二取代或三取代(例如R2是苯基或環(huán)己基的情況)相比，這種酯趨于更快被斷裂。
Z中的基團-(CH2)z-X1-L1-Y- 該基團(或鍵)來自于選擇用來連接氨基酸酯基序R1CH(R2)NH-與分子其余部分。顯然，用于該偶聯(lián)的化學方法可以非常多，因此z、L1、X1和Y可以有許多組合。構成氨基酸酯基序與分子其余部分之間的連接化學的變量的精確組合將通常與作為一個整體的化合物的結合模式無關。另一方面，在一些情況下，連接化學選擇與酶采取其它結合相互作用，從而增強了結合。
還應當注意，當氨基酸酯基序與分子其余部分之間的鍵不是細胞內(nèi)肽酶活性(這種活性可導致從分子中切割下氨基酸)的底物時，上述氨基酸酯基序的益處(易于進入細胞、在細胞內(nèi)被羧酸酯酶水解、以及在細胞內(nèi)累積活性羧酸水解產(chǎn)物)最大。當然，也可將該化合物與破裂的細胞內(nèi)容物一起孵育并分析任何此類切割來方便地測量對細胞內(nèi)肽酶的穩(wěn)定性。
當頭腦中有了上述一般概念時，接下來就可以考慮構成基團-(CH2)z-X1-L1-Y-的各種變量 z可以是0或1； 在基團L1中，當Alk1和Alk2基團存在時，其例子包括-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-CH＝CHCH2-、-CH2CH＝CH-、CH2CH＝CHCH2-、-C≡C-、-C≡CCH2-、CH2C≡C-和CH2C≡CCH2。Alk1和Alk2的其它例子包括-CH2W-、-CH2CH2W-、-CH2CH2WCH2-、-CH2CH2WCH(CH3)-、-CH2WCH2CH2-、-CH2WCH2CH2WCH2-和-WCH2CH2-，其中W是-O-、-S-、-NH-、-N(CH3)-或-CH2CH2N(CH2CH2OH)CH2-。Alk1和Alk2進一步的例子包括二價環(huán)丙基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
Alk1和Alk2當存在時可以是支鏈烷基，如-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、或者任何取向的-CH2CH(CH3)-、-CH2C(CH3)2-。
在L1中，當n是0且m和p中至少一個是1時，所述基團是烴鏈(任選被取代，且可能含有醚、硫醚或氨基連接)。目前優(yōu)選L1中沒有任選的取代基。當m和p都是0時，L1是含有5-13個環(huán)原子的二價單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)基團(任選被取代，但目前優(yōu)選是未取代的，并可能通過醚鍵、硫醚鍵或氨基鍵連接相鄰原子(注意此時Q是-Q2-X2-，如果可用于本申請)。當n是1且m和p中至少有一個是1時，L1是包含一條或多條烴鏈(任選被取代并可能具有醚鍵、硫醚鍵或氨基鍵)以及含有5-13個環(huán)原子的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)基團(任選被取代，但目前優(yōu)選是未取代的，并可能通過醚鍵、硫醚鍵或氨基鍵連接相鄰原子)的二價基團。
當Q存在時它可以是，例如，二價苯基、萘基、環(huán)丙基、環(huán)戊基或環(huán)己基，或是含有5-13個環(huán)成員的單環(huán)或二環(huán)雜環(huán)基團，如哌啶基、哌嗪基、吲哚基、吡啶基、噻吩基或吡咯基。
在本發(fā)明的一些實施方案中，L1、m和p可以是0而n為1。在其它實施方案中，n和p可以是0而m為1。在其它實施方案中，m、n和p可以都是0。再在其它實施方案中，m可以是0，n可以是1，而Q為單環(huán)雜環(huán)基團，且p可以是0或1。具體地說，Alk1和Alk2當存在時可以選自-CH2-、-CH2CH2-和-CH2CH2CH2-，而Q當存在時可以選自
其中E和G獨立為CH或N。
X1代表鍵、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-NR4C(＝O)-、-C(＝O)NR4-、-NR4C(＝O)NR5-、-NR4S(＝O)2-或-S(＝O)2NR4-，其中R4和R5獨立為氫或任選取代的C1-C6烷基如甲基或乙基。
Y是鍵、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氫或任選取代的C1-C6烷基如甲基和乙基； 通常z將是0，而X1和Y將各自簡單地是鍵，因此氨基酸酯基序R1R2CHNH-通過如上文定義和討論的基團L1連接于含有X的環(huán)。
在本發(fā)明化合物的具體例子中，基團R1R2CHNH-Y-L1X1-(CH2)z-選自R1R2CHNH-(CH2)a-、R1R2CHNH-(CH2)aO-或R1R2CHNH-CH2CH＝CHCH2-，其中a是1、2、3、4或5。
在其他本發(fā)明化合物中，R1R2CHNH-Y-L1X1-(CH2)z-選自R1R2CHNHSO2-、R1R2CHNHCO-、
具體的本發(fā)明的化合物包括這里例舉的那些，它們的鹽、N-氧化物、水合物和溶劑合物。
如上所述，本發(fā)明所涉及的化合物是IKK、尤其是IKKβ激酶活性抑制劑，因此可用于治療受IKK活性和NF-kB級聯(lián)調(diào)節(jié)的疾病。這種疾病包括腫瘤性/增生性疾病、免疫疾病和炎性疾病。具體地說，所述化合物的用途包括治療癌癥如肝細胞癌或黑色素瘤，但也包括腸癌、卵巢癌、頭頸癌和宮頸鱗狀細胞癌、胃癌或肺癌、間變性少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性成膠質(zhì)細胞瘤或髓母細胞瘤；以及治療類風濕性關節(jié)炎、硬皮病、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、慢性阻塞性肺病、哮喘、多發(fā)性硬化、糖尿病、特應性皮炎、移植物抗宿主病、或系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
本發(fā)明涉及的化合物可被制成通過任何與其藥代動力學特性一致的任何途徑給予?？煽诜o予的組合物的形式可以是片劑，膠囊，粉末，顆粒，錠劑，液體或凝膠制品如口服、局部或無菌腸胃外溶液或懸浮液。供口服給藥的片劑或膠囊可采用單位劑型，并可含有常規(guī)賦形劑，如粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、黃蓍膠或聚乙烯吡咯烷酮；填料，例如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨糖醇或甘氨酸；壓片潤滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解劑，例如馬鈴薯淀粉，或可接受的潤濕劑如月桂基硫酸鈉?？砂凑粘Ｒ?guī)制藥實踐中熟知的方法將片劑包衣。口服液體制劑的形式可以是，例如，水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑，或者可呈現(xiàn)為在使用前用水或其它合適載體重建的干燥產(chǎn)品。這種液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，如懸浮劑，例如山梨糖醇、糖漿、甲基纖維素、葡萄糖漿、明膠、氫化食用脂肪；乳化劑，例如卵磷脂、去水山梨糖醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(可包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，需要的話還可含有常規(guī)的調(diào)味劑或著色劑。
當局部施用于皮膚時，可將藥物制成霜劑、洗劑或軟膏劑?？捎糜谒幬锏乃獎┗蜍浉鄤┡浞绞潜绢I域熟知的常規(guī)配方，例如標準藥物教科書如《英國藥典》(British Pharmacopoeia)中描述的配方。
本發(fā)明的化合物可采取吸入形式給予。產(chǎn)生氣溶膠時可采用(例如)壓力驅(qū)動的噴射霧化器或超聲霧化器，優(yōu)選采用推進劑驅(qū)動的計量式氣霧劑或者不采用推進劑，從例如吸入膠囊或其它“干粉”遞送系統(tǒng)給予微粉化活性化合物。
可根據(jù)采用的吸入器系統(tǒng)按照上面的描述給予活性化合物。除了活性化合物，給藥形式中可任選包含賦形劑，例如推進劑(例如，在計量式氣霧劑中為Frigen)、表面活性物質(zhì)、乳化劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、調(diào)味劑和填料(例如，在干粉吸入器中為乳糖)，或者，如果合適的話，其他活性化合物。
為了吸入，大量系統(tǒng)都是適用的，這些裝置能產(chǎn)生最佳粒度的氣溶膠并采用適合患者的吸入技術給予。除了采用適配器(間隔物(spacer)、擴展器)和梨形容器(例如

)以及發(fā)射吹入噴霧的自動裝置

為給予經(jīng)過計量的氣溶膠，尤其是采用干粉吸入器時，許多技術方案是適用的(例如，

或者例EP-A-0505321中描述的吸入器)。
為局部施用于眼睛，可用合適的水性或非水性無菌載體將藥物制成溶液或懸浮液。也可含有添加劑，例如，緩沖劑，如偏亞硫酸氫鈉或依地酸二鈉；防腐劑，包括殺菌劑和殺真菌劑如醋酸苯汞或硝酸苯汞、苯扎氯銨或氯己定；以及增稠劑，如羥丙甲纖維素。
也可采用無菌介質(zhì)腸胃外給予活性成分。根據(jù)所用載體和濃度，藥物可懸浮于或溶于載體中。有利的是，佐劑如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑也可溶解于載體中。
本發(fā)明的化合物可與許多抑制藥物活性物質(zhì)結合使用。例如，本發(fā)明的化合物可與細胞毒素、HDAC抑制劑、激酶抑制劑、氨基肽酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、bcl-2拮抗劑、mTor抑制劑和單克隆抗體(例如定位于生長因子受體的那些)一起使用。優(yōu)選的細胞毒劑包括，例如，紫杉烷類、鉑類、抗代謝物如5-氟尿嘧啶、拓撲異構酶抑制劑等。本發(fā)明的藥物包含式(IA)或(IB)的氨基酸衍生物、其互變異構體或其藥學上可接受的鹽、N-氧化物、水合物或溶劑合物，因此通常還包含細胞毒素、HDAC抑制劑、激酶抑制劑、氨基肽酶抑制劑和/或單克隆抗體。
此外，本發(fā)明提供了含有以下組分的藥物組合物 (a)式(IA)或(IB)的氨基酸衍生物或其藥學上可接受的鹽、N-氧化物，水合物或溶劑合物 (b)細胞毒劑、HDAC抑制劑、激酶抑制劑、氨基肽酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、bcl-2拮抗劑、mTor抑制劑和/或單克隆抗體；和 (c)藥學上可接受的載體或稀釋劑。
還提供了包含以下組分的產(chǎn)品 (a)式(IA)或(IB)的氨基酸衍生物或其藥學上可接受的鹽、N-氧化物，水合物或溶劑合物和 (b)細胞毒劑、HDAC抑制劑、激酶抑制劑、氨基肽酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、bcl-2拮抗劑、mTor抑制劑和/或單克隆抗體， 這兩種組分可單獨、同時或依次用于人體或動物體的治療。
合成 有多種合成策略可用來合成本發(fā)明所涉及的化合物，但它們都依賴于已知的化學方法并為合成有機化學家所知曉。因此可按照標準文獻中描述的并為精通本領域的技術人員熟知方法合成式(I)的化合物。典型的文獻來源有“高級有機化學(Advanced organic chemistry)”，第四版(威利出版社(Wiley))，J March，“綜合有機轉(zhuǎn)化(Comprehensive Organic Transformation)”，第二版(威利出版社)，R.C.拉洛克(R.C.Larock)，“雜環(huán)化學手冊(Handbook of HeterocyclicChemistry)”，第二版(帕加蒙出版社(Pergamon))，A.R.卡提示基(A.R.Katritzky))，例如在“Synthesis”、“Acc.Chem.Res.”、“Chem.Rev”中找到的綜述文章，或者通過標準在線文獻檢索找到的第一文獻來源或來自諸如“ChemicalAbstracts”或“Beilstein”等第二文獻來源中找到的論文。
本發(fā)明的化合物可通過許多方法來制備，所述方法在下文中一般描述并在下文的實施例中更加具體描述。在下面描述的反應中，可能需要保護最終產(chǎn)物中所需的反應性官能團，例如羥基、氨基和羧基，以避免它們參與不必要的反應[參見，例如，格林，T.W.(Greene，T.W.)，“有機合成保護基(Protecting Groupsin Organic Synthesis)”，約翰威利父子公司(John Wiley and Sons)，1999]。常規(guī)保護基可與標準方法結合使用。一些情況下，去保護可能是合成通式(IA)或(IB)的化合物的最終步驟，下文描述的本發(fā)明的方法應理解為延伸至去除保護基。
如上所述，本發(fā)明所涉及的化合物是IkB家族抑制劑，名為IKK-α和IKK-β，因此可用于治療人類或其他動物的細胞增殖疾病如癌癥，以及用于治療炎癥。
縮寫 MeOH＝甲醇 EtOH＝乙醇 EtOAc＝乙酸乙酯 DCM＝二氯甲烷 DIBAL＝二異丁基氫化銨 DMF＝二甲基甲酰胺 DME＝甲醚 DMSO＝二甲亞砜 DMAP＝二甲基氨基吡啶 TFA＝三氟乙酸 THF＝四氫呋喃 Na2CO3＝碳酸鈉 HCl＝鹽酸 DIPEA＝二異丙基乙胺 LiHMDS＝二(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰 MP-CNBH3＝大孔三乙基甲基聚苯乙烯氰基硼氫化銨 NaH＝氫化鈉 NaOH＝氫氧化鈉 NaHCO3＝碳酸氫鈉 HCl＝鹽酸 Pd/C＝碳載鈀 PdCl2(dppf)＝[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)。
EDC＝1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺 KOAc＝乙酸鉀 TBAI＝四丁基碘化銨 ml＝毫升 g＝克 mg＝毫克 mol＝摩爾 mmol＝毫摩爾 Sat＝飽和的 LCMS＝高效液相色譜/質(zhì)譜 NMR＝核磁共振 市售試劑和溶劑(HPLC級)無需進一步純化即可使用。用Buchi旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀除去溶劑。微波照射用設定在300W的Discover型CEM進行。用獲自Fluorochem的粒度為40-63μ μm(230-400目)的硅膠通過快速層析柱純化化合物。用制備型HPLC純化化合物是在Agilent prep系統(tǒng)上進行的，采用反相Agilent prep-C18柱(5μm，50×21.2 mm)，10分鐘0-100％B梯度(A＝水/0.1％氨水或0.1％甲酸，B＝乙腈/0.1％氨水或0.1％甲酸)，流速＝28毫升/分鐘，在254nm UV檢測。
在氘化溶劑中用Bruker 400或300MHz AV光譜儀記錄1H NMR譜?；瘜W位移(δ)用用百萬分之一份表示。用Kieselgel 60 F254(Merck)板進行薄層層析(TLC)分析并用UV光顯色。
分析型HPLC/MS方法如下Agilent Prep-C18柱，5μm(4.6×50mm，流速為2.5毫升/分鐘)，用7分鐘H2O-MeCN(含0.1％v/v甲酸)梯度洗脫，在254nm UV檢測。梯度信息0.0-0.5分鐘95％H2O-5％MeCN；0.5-5.0分鐘從95％H2O-5％MeCN到5％H2O-95％MeCN；5.0-5.5分鐘維持5％H2O-95％MeCN；5.5-5.6分鐘維持5％H2O-95％MeCN，流速升至3.5毫升/分鐘；5.6-6.6分鐘維持5％H2O-95％MeCN，流速為3.5毫升/分鐘；6.6-6.75分鐘返回95％H2O-5％MeCN，流速為3.5毫升/分鐘；6.75-6.9分鐘維持95％H2O-5％MeCN，流速為3.5毫升/分鐘；6.9-7.0分鐘維持95％H2O-5％MeCN，流速降至2.5毫升/分鐘。質(zhì)譜采用Agilent多模式源以正(APCI+ESI+)或負(APCI+ESI-)模式獲得。
可用于合成本發(fā)明的通式(IA)和(IB)的化合物的這種方法的例子列在下面方案1-9所示的反應中，但不限于此。
方案1列舉了制備下述例子的常規(guī)合成途徑，它采用常規(guī)Suzuki化學方法將有關硼酸酯(或酸)中間體(4-11)與中間的噻吩核心(中間體1)偶聯(lián)起來。

方案1 方案2例舉了合成這些苯基取代的噻吩類似物替代方法。

方案2 方案3例舉了合成取代的苯基連接基噻吩類似物的方法。

方案3 方案4例舉了合成延長的連接基噻吩類似物的方法。

方案4 方案5和6例舉了合成延長的氧連接的噻吩類似物的方法。

方案5
方案6 方案7例舉了合成另一種烯基連接基噻吩類似物的方法。

方案7 方案8例舉了合成烯基連接基噻吩類似物的替代方法。

方案8 方案9例舉了合成苯基取代的延伸連接基噻吩類似物的方法。

方案9 中間體 中間體1 5-溴-2-(氨甲酰氨基)噻吩-3-羧酰胺
用方案1中階段1-4表示的中間體1的合成詳細描述于WO03104218。
中間體2 2-(氨甲?；被?-5-(4-甲?；交?噻吩-3-羧酰胺
在DME(50ml)中5-溴-2-(氨甲?；被?噻吩-3-羧酰胺(1.0g，3.79mmol)、4-甲?；交鹚?0.625g，4.17mmol)和四(三苯基膦)Pd催化劑(0.438g，0.379mmol)的混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)。反應容器用氮氣吹掃并在90℃加熱過夜。LCMS顯示原料被完全消耗。用旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀濃縮反應混合物。將所得深棕色殘余物溶于DCM(17ml)并與2M氫氧化鈉水溶液(8.5ml)一起攪拌20分鐘。加入二乙醚(20ml)并將混合物再攪拌30分鐘。所得懸浮液超聲2分鐘。過濾得到沉淀，沉淀用熱的二乙醚以得到有色固體(440mg)。
LCMSm/z 288[M-H]+；m/z 290[M+H]+。
中間體3a-3i制備氨基酸酯 途徑I.
Route II.
制備的中間體
中間體3a 中間體3b
中間體3c 中間體3d
中間體3e 中間體3f
中間體3g中間體3h中間體3i 列表1 合成列表1列出的化合物 途徑I(以中間體3e為例) 階段1-酯形成
0℃下在(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-環(huán)己基-丙酸(5g，19.4mmol)的DMF(50mL)溶液中加入環(huán)戊醇(8.8ml，97.15mmol)、EDCI(4.09g，21.37mmol)，最后加入DMAP(237mg，1.94mmol)。反應混合物被升至室溫并攪拌18小時。在真空下除去DMF以得到澄清油狀物。該油狀物在水和EtOAc之間分離。將有機相干燥(MgSO4)并真空濃縮。粗制萃取物通過柱層析純化(25％EtOAC庚烷溶液)以得到所需澄清油狀產(chǎn)物(14.87g，55％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ；7.09(1H，d)，5.08(1H，t)，3.76(1H，t)，1.50-1.85(10H，br m)，1.39(9H，s)，1.00-1.25(9H，br m)。
階段2-(2S)-氨基(環(huán)己基)乙酸環(huán)戊酯鹽酸鹽(中間體3e)
將階段1產(chǎn)物(14.87g，45.69mmol)溶于DCM(100mL)并用4M HCl/二噁烷(22.8mL，91.38mmol)處理，將反應混合物室溫攪拌24小時。粗制混合物被減壓濃縮以得到橙色油狀物。將該油狀物與Et2O一起研磨以得到白色沉淀。所得沉淀進一步用Et2O洗滌以得到所需白色粉末狀產(chǎn)物(7.78 g，65％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ；8.45(3H，br s)，5.22(1H，t)，3.28(1H，d)，1.95-1.50(10H，br m)，1.30-0.90(9H，br m)。
途徑II(以中間體3c為例) 階段1-(1S)-2-(環(huán)戊氧基)-2-氧代-1-苯基乙基銨(phenylethanaminium)甲基苯磺酸酯(中間體3c)
在(S)-苯基甘氨酸(5g，33.1mmol)的環(huán)己烷(150mL)漿液中加入環(huán)戊醇(29.84mL，331mmol)和對甲苯磺酸(6.92g，36.4mmol)。該反應裝有Dean-Stark接收器并加熱至135℃以完全溶解。12小時后，反應物被冷卻至室溫導致有白色固體沉淀。將該固體過濾并用EtOAc洗滌，然后減壓干燥以得到所需白色粉末狀產(chǎn)物(11.01g，85％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ；.8.82(2H，br s)，8.73(1H，br s)，7.47(7H，m)，7.11(2H，d)，5.25(1H，br s)，5.18(1H，m)，2.29(3H，s)，1.87-1.36(8H，m)。
上述中間體的相應的(R)-氨基酸酯可用上述方法的類似方法從相關的市售(R)-氨基酸開始制備。此外，相應的亮氨酸和苯基甘氨酸叔丁酯是市售的并可在適當時直接使用。
中間體4a N-[3-(二羥基硼基)芐基]-L-亮氨酸環(huán)戊酯
按照方案2所示合成途徑合成中間體4a。
向中間體3a(244.6mg，1.227mmol)和(3-甲?；交?硼酸(184mg，1.227mmol)的DCM(10ml)的溶液中用20分鐘分份加入NaBH(OAc)3(780mg，3.68mmol)。將反應物室溫攪拌2小時，之后將反應混合物倒入1M HCl(50ml)并用DCM(50ml)洗滌。水相用NaHCO3中和至pH 7并用DCM(2×50ml)萃取。合并的有機萃取物用硫酸鎂干燥并除去溶劑。分離出的產(chǎn)物(270.3mg，0.811mmol，66.1％產(chǎn)率)為無色泡沫狀固體，可直接使用。
LCMSm/z 334[M+H]+。
中間體4b [3-({[(1S)-2-(環(huán)戊氧基)-2-氧代-1-苯乙基]氨基}甲基)苯基]硼酸
按照與中間體4a類似的合成途徑在方案2中用中間體3c合成中間體4b。
LCMSm/z 354[M+H]+。
中間體4c [3-({[(1S)-1-環(huán)己基-2-(環(huán)戊氧基)-2-氧代乙基]氨基}甲基)苯基]硼酸
按照與中間體4a類似的合成途徑在方案2中用中間體3e合成中間體4c。
LCMSm/z 360[M+H]+。
中間體4d O-叔丁基-N-[3-(二羥基硼烷基)芐基]-L-絲氨酸環(huán)戊酯
按照與中間體4a類似的合成途徑在方案2中用中間體3f合成中間體4d。
LCMSm/z 364[M+H]+。
中間體4e O-叔丁基-N-[3-(二羥基硼烷基)芐基]-L-蘇氨酸環(huán)戊酯
按照與中間體4a類似的合成途徑在方案2中用中間體3g合成中間體4e。
LCMSm/z 322[M+H]+。
中間體4f N-[3-(二羥基硼烷基)芐基]-L-纈氨酸環(huán)戊酯
按照與中間體4a類似的合成途徑在方案2中用中間體3i合成中間體4f。
LCMSm/z 320[M+H]+。
中間體5a N-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷(dioxaborolan)-2-基)芐基]-L-亮氨酸環(huán)戊酯
按照方案3所示合成途徑合成中間體5a。
在裝有(S)-2-(4-溴-3-氯-芐基氨基)-4-甲基-戊酸環(huán)戊酯(715mg，1.775mmol)，雙[頻哪醇合(pinacolato)]二硼(90mg，3.55mmol)，PdCl2(dppf)(130mg，0.178mmol)和乙酸鉀(348mg，3.55mmol)的燒瓶中加入DMSO(10ml，無水)并用氮氣徹底吹掃反應容器。將反應混合物置于預加熱至80℃的油浴中。2小時后分析顯示除了殘余原料有所需產(chǎn)物。將反應物在80℃再放置3小時。將反應混合物冷卻至室溫并倒入水(10ml)中。產(chǎn)物萃取入Et2O，合并的有機萃取物用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并除去溶劑。殘余物通過柱層析純化，用10-20％EtOAc的己烷溶液洗脫以得到150mg無色油狀物。通過在SCX上捕獲和釋放進行進一步的純化得到62mg，0.131mmol，7.4％產(chǎn)率。LCMSm/z 450[M+H]+。
(S)-2-(4-溴-3-氯-芐基氨基)-4-甲基-戊酸環(huán)戊酯按下面的描述制備。
在裝有4-溴-3-氯-苯醛(0.5g，2.278mmol)和中間體3a(0.537g，2.278mmol)的試管中加入DCM(10ml)并室溫攪拌20分鐘，之后一次性加入NaBH(OAc)3(1.45g，6.83mmol)。將反應物室溫攪拌2小時。將反應混合物倒入2M HCl并用DCM萃取。含水層用NaHCO3中和并重萃取入DCM。合并的有機萃取物用水洗滌，用硫酸鎂干燥并真空除去溶劑以得到900mg無色油狀物。LCMS分析顯示除了未反應的中間體3a有所需產(chǎn)物。產(chǎn)物通過柱層析純化，用50-100％DCM的己烷溶液洗脫以得到715mg，1.243mmol，54.5％產(chǎn)率無色油狀物。LCMSm/z401.8/403.8[M+H]+。
4-溴-3-氯-苯醛按下面的描述制備。
在0℃將4-溴-3-氨基-苯醛(1.39g，6.95mmol)溶于濃HCl(15ml)并用硝酸鈉(0.504g，7.30mmol)處理。將反應物攪拌30分鐘，然后用30分鐘升至室溫。將混合物放冷后加入攪拌的處于室溫的氯化銅(0.964g，9.74mmol)的濃HCl(10ml)溶液。綠色溶液在60℃加熱45分鐘，然后冷卻。將反應混合物倒入水并萃取入EtOAc。合并的有機層用水、NaHCO3和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并真空除去溶劑以得到1.2g棕色油狀物。產(chǎn)物通過柱層析純化，用10％EtOAc的己烷溶液洗脫。分離出無色蠟質(zhì)固體狀產(chǎn)物(1.061g，4.50mmol，64.7％產(chǎn)率)。
中間體5b N-[2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)芐基]-L-亮氨酸環(huán)戊酯
在方案3中用4-溴-2-甲基-苯醛通過中間體5a的類似方法合成 LCMSm/z 430[M+H]+。
中間體6a N-{2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
按照方案4所示合成途徑合成中間體6a。
用氮氣吹掃裝有(S)-2-[2-(4-溴-苯基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸環(huán)戊酯(320mg，0.837mmol)、雙[頻哪醇合]二硼(319mg，1.255mmol)、PdCl2(dppf)(30mg，5mol％)和KOAc(123mg，1.255mmol)的試管并加入DMSO(無水，2ml)。反應混合物在80℃攪拌5小時并通過LCMS判斷反應是否完成。將混合物冷卻至室溫，倒入水中并用醚萃取。合并的有機層用水(x 3)和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并真空蒸發(fā)以得到467.2mg深色油狀殘余物。該深色殘余物通過柱層析純化，用10％EtOAc的己烷溶液洗脫以得到223 mg無色油狀產(chǎn)物(62％)。LCMSm/z 430[M+H]+。
(S)-2-[2-(4-溴-苯基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸環(huán)戊酯按下面的描述制備。
在室溫、惰性氣體下用20分鐘在中間體3a(500mg，2.509mmol)和4-溴苯基乙醛(510mg，2.56mmol)的DCM(15ml)溶液中邊攪拌邊加入NaBH(OAc)3(1.595g，7.53mmol)并室溫攪拌30分鐘。在反應混合物中加入2M HCl(50ml)并用DCM(50ml×2)萃取。DCM層用硫酸鎂干燥并除去溶劑以得到994mg油狀無色固體，在SCX上捕獲和釋放得到淡黃色油狀產(chǎn)物(320mg，33％)。LCMSm/z 384[M+H]+。
中間體6b N-{2-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
在方案4中用4-溴-3-氯-苯基乙醛通過中間體6a的類似方法合成。
LCMSm/z 464[M+H]+。
中間體6c N-{2-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
在方案4中用3-溴苯基乙醛通過中間體6a的類似方法合成。
LCMSm/z 430[M+H]+。
中間體6d(2S)-苯基({2-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]乙基}氨基)乙酸環(huán)戊酯
在方案4中用3-溴苯基乙醛和中間體3c通過中間體6a的類似方法合成。
LCMSm/z 450[M+H]+。
中間體6e O-叔丁基-N-{2-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-絲氨酸環(huán)戊酯
在方案4中用3-溴苯基乙醛和中間體3f通過中間體6a的類似方法合成。
LCMSm/z 460[M+H]+。
中間體6f O-叔丁基-N-{2-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-蘇氨酸環(huán)戊酯
在方案4中用3-溴苯基乙醛和中間體3g通過中間體6a的類似方法合成。
LCMSm/z 474[M+H]+。
中間體7a N-{3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯氧基]丙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
中間體7a的合成途徑示于方案5。
在(S)-2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基氨基]-4-甲基-戊酸環(huán)戊酯(0.37g，0.897mmol)、雙[頻哪醇合]二硼(0.684g，2.69mmol)、PdCl2(dppf)(0.066g，0.090mmol)和KOAc(0.264g，2.69mmol)的混合物中加入DMSO(2ml)?；旌衔镉玫獨獯祾卟⒅糜陬A加熱至80℃的油浴中。4小時后通過LC-MS判斷反應是否完成。將混合物冷卻至室溫并倒入醚和水的混合物中。水相用醚萃取，合并的有機物用水(x 4)和鹽水洗滌。干燥和蒸發(fā)之后對殘余物進行柱層析，用5-10％EtOAc的己烷溶液洗脫。產(chǎn)量＝0.2g，0.435mmol，48.5％產(chǎn)率。LCMSm/z 460[M+H]+。
(S)-2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基氨基]-4-甲基-戊酸環(huán)戊酯按下面的描述制備。
向中間體3a(0.365g，1.833mmol)和3-(4-溴-苯氧基)-丙醛(0.6g，1.833mmol)的DCM(15ml)的溶液中加入NaBH(OAc)3(1.166g，5.50mmol)。在室溫攪拌2小時后通過LC-MS判斷反應是否完成。在反應混合物中加入1M HCl(10ml)并快速攪拌10分鐘。將混合物倒入飽和NaHCO3并用DCM萃取。合并的有機層用硫酸鎂干燥、過濾并蒸發(fā)。對殘余物進行柱層析，用10％EtOAc的己烷溶液洗脫。產(chǎn)量＝0.375g，0.818mmol，44.6％產(chǎn)率。
LCMSm/z 412和414[M+H]+。
3-(4-溴-苯氧基)-丙醛按下面的描述制備。
將2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基]-[1，3]二氧戊環(huán)(1.5g，5.49mmol)溶于丙酮(15ml)并用水(10ml)處理。在該溶液中加入HCl(14.98ml，165mmol)。室溫攪拌1小時后通過TLC(20％EtOAc的己烷溶液)判斷反應完全。將混合物倒入水中并用醚萃取。合并的有機層用2M NaOH、水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并真空蒸發(fā)。產(chǎn)量＝0.6g，1.833mmol，33.4％產(chǎn)率。
2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基]-[1，3]二氧戊環(huán)按下面的描述制備。
將DMF(50ml)中的4-溴苯酚(10g，57.8mmol)、TBAI(0.813g，5.78mmol)和K2CO3(7.99g，57.8mmol)的混合物加入2-(3-溴-丙基)-[1，3]二氧戊環(huán)(10.19ml，87mmol)。將混合物在預熱至50℃的油浴中放置3小時。將混合物冷卻至室溫，倒入2MNaOH并用醚萃取。合并的有機層進一步用2MNaOH、1M HCl(x 2)、水(x 2)和鹽水洗滌。用硫酸鎂干燥、過濾并真空蒸發(fā)后將殘余物吸附到二氧化硅上并進行柱層析，用6％EtOAc的己烷溶液洗脫以得到白色固體。產(chǎn)量＝12.5g，43.5mmol，75％產(chǎn)率。
中間體7b N-{3-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯氧基]丙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過中間體7a的類似方法在方案5中用4-溴-3-氯苯酚合成。
LCMSm/z 494[M+H]+。
中間體8a N-{5-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯氧基]戊基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
中間體8a的合成途徑示于方案6。
在(S)-2-[5-(4-溴-苯氧基)-戊基氨基]-4-甲基-戊酸環(huán)戊酯(0.63g，1.430mmol)、雙[頻哪醇合]二硼(0.908g，3.58mmol)、PdCl2(dppf)(0.105g，0.143mmol)和KOAc(0.351g，3.58mmol)的混合物中加入DMSO(5ml)?；旌衔镉玫獨獯祾卟⒅糜陬A熱至80℃的油浴。加熱4小時后通過LC-MS判斷反應完成。將混合物倒入水中并用醚萃取。合并的有機物用水(x 3)和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并減壓蒸發(fā)，對其進行柱層析，用10％EtOAc的己烷溶液洗脫。產(chǎn)量＝0.61g，1.214mmol，85％產(chǎn)率。LCMS純度97％m/z 488[M+H]+。
(S)-2-[5-(4-溴-苯氧基)-戊基氨基]-4-甲基-戊酸環(huán)戊酯按下面的描述制備。
將DIPEA(2.2ml，13.01mmol)加入DMF(5ml)中的中間體3a(2.3g，9.76mmol)和TBAI(0.458g，3.25mmol)的混合物。在上述混合物中加入1-溴-4-(5-氯-戊氧基)-苯(0.903g，3.25mmol)的DMF(2ml)溶液并置于預熱至95℃的油浴。將混合物攪拌過夜。LC-MS顯示約60％轉(zhuǎn)化。將混合物倒入水中并用醚萃取，合并的有機層用飽和NaHCO3、水(x 2)和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)和減壓蒸發(fā)之后對殘余物進行柱層析，用10-15％EtOAc的己烷溶液洗脫。產(chǎn)量＝0.64g，1.381mmol，42.5％產(chǎn)率。
1-溴-4-(5-氯-戊氧基)-苯按照上面已經(jīng)描述過的合成2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基]-[1，3]二氧戊環(huán)的類似過程制備。LCMS純度95％m/z 440和442[M+H]+。
中間體8b N-{5-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯氧基]戊基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過中間體8a的類似方法在方案6中用1-溴-2-氯-4-(5-氯-戊氧基)-苯合成。
LCMS純度98％m/z 522[M+H]+。
中間體9a N-(叔丁氧基羰基)-N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
中間體9a的合成途徑示于方案7。
將N-[(2E)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]-N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯(204mg，0.413mmol)、雙[頻哪醇合]二硼(157mg，0.619mmol)、乙酸鉀(60.7mg，0.619mmol)和PdCl2(dppf)(16.85mg，0.021mmol)的混合物懸浮液DMSO(1.6ml)并用氮氣吹掃。將反應混合物加熱至油浴溫度為50℃并攪拌過夜。將反應混合物在醚和水之間分配。含水層再用一份醚萃取。合并的有機層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并真空濃縮以得到棕色殘余物。殘余物通過柱層析純化，用5％乙酸乙酯的異己烷溶液洗脫。分離出無色澄清油狀的所需產(chǎn)物(102mg，0.188mmol，46％)。LCMS純度100％m/z 542.1[M+H]+。
N-[(2E)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]-N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯按下面的描述制備。
將N-烯丙基-N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯(1g，2.95mmol)、4-溴-碘苯(0.917g，3.24mmol)、乙酸鈀(II)(0.066g，0.295mmol)、TBAI(1.197g，3.24mmol)和碳酸氫鈉(0.742g，8.84mmol)的混合物懸浮于無水乙腈(10ml)?；旌衔镉玫獨獯祾卟⒅糜陬A熱至70℃的油浴中。將反應物攪拌2小時。LCMS證實未反應完全，因此再在反應混合物中加入3mg乙酸鈀(II)。再反應3小時后將反應混合物靜置并冷卻至室溫。粗制反應混合物用乙腈洗脫并吸附到二氧化硅上，之后進行柱層析，用5％乙酸乙酯的異己烷溶液洗脫。分離出無色油狀所需產(chǎn)物(220mg，0.445mmol，15％產(chǎn)率)。LCMS純度100％m/z 494.0，496.0[M+H]+。
N-烯丙基-N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯按下面的描述制備。
將N-烯丙基-L-亮氨酸環(huán)戊酯(2g，8.36mmol)和Boc-酐(1.824g，8.36mmol)一起加入試管然后用隔板蓋住試管。將反應混合物攪拌過夜。將反應混合物在醚和水之間分配。有機相依次用1M HCl、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并真空濃縮以得到無色油狀物(2.66g，7.84mmol，94％)。LCMS純度100％m/z 340.2[M+H]+。
N-烯丙基-L-亮氨酸環(huán)戊酯按下面的描述制備。
將水合氫氧化鋰(2.72g，64.7mmol)和

分子篩粉末(15g)的懸浮液在DMF(150ml)中攪拌20分鐘。加入中間體3a(游離基)(6g，30.1mmol)并繼續(xù)攪拌40分鐘。然后加入烯丙基溴(3.13ml，36.1mmol)并將混合物室溫攪拌過夜。LCMS顯示有產(chǎn)物形成并有少量二烷基化產(chǎn)物。將混合物過濾，倒入水中并醚萃取(x 3)。合并的有機層用水(x 3)和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并真空蒸發(fā)。對殘余物進行柱層析，用5％EtOAc的己烷溶液洗脫。分離出無色油狀產(chǎn)物。產(chǎn)量＝4.34g，18.13mmol，60.2％產(chǎn)率。LCMSm/z 240.1[M+H]+。
中間體9b N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-亮氨酸叔丁酯
中間體9b的合成途徑示于方案8。
將雙頻哪醇合二硼(0.897g，3.53mmol)、PdCl2(dppf)(0.120g，0.165mmol)和KOAc(0.347g，3.53mmol)加入N-[(2E)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸叔丁酯(0.9g，2.354mmol)的DMSO(5ml)溶液，燒瓶用氮氣排空和充填。反應物然后在80℃加熱3小時。將反應物倒入水(50ml)中并用EtOAc(2×50ml)萃取產(chǎn)物。合并的有機物然后用水(2×25ml)和鹽水(25ml)洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮以得到黑色油狀物。粗制材料通過柱層析純化并用10％EtOAc的異己烷溶液洗脫產(chǎn)物以得到黃色油狀物。(0.62g，1.444mmol，61.3％產(chǎn)率)。LCMSm/z 430[M+H]+。
N-[(2E)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸叔丁酯按下面的描述制備。
在(E)-3-(4-溴-苯基)-丙烯醛(0.75g，3.20mmol)和L-亮氨酸叔丁酯(1.073g，4.80mmol)的混合物中加入THF(20ml)，然后加入約5g 4A分子篩粉末。容器用氮氣吹掃并在預熱至60℃的油浴中放置70分鐘，之后反應完全?；旌衔镉帽±鋮s并用一份Na(OAc)3BH(3.39g，15.99mmol)處理。攪拌30分鐘后加入水(1ml)和MeOH(3ml)來幫助溶解。再攪拌40分鐘后通過TLC(20％EtOAc的己烷溶液)判斷反應完全。將1M HCl(50ml)加入混合物，然后將混合物倒入飽和NaHCO3溶液并用醚萃取。合并的有機萃取物用硫酸鎂干燥，過濾并真空蒸發(fā)，之后通過柱層析純化，用10-20％EtOAc的己烷溶液洗脫。產(chǎn)量＝1g，2.354mmol，73.6％產(chǎn)率。LCMSm/z 382[M+H]+。
(E)-3-(4-溴-苯基)-丙烯醛按下面的描述制備。
在(E)-3-(4-溴-苯基)-丙-2-烯-1-醇(1g，4.69mmol)的DME(20ml)溶液中加入二氧化猛(8.16g，94mmol)。室溫攪拌1小時后通過TLC(20％EtOAc的己烷溶液)判斷反應完成?；旌衔锿ㄟ^硅藻土墊過濾，用DME(2×15ml)洗滌。真空蒸發(fā)后獲得無色固體。產(chǎn)量＝0.95g，4.50mmol，96％產(chǎn)率。
(E)-3-(4-溴-苯基)-丙-2-烯-1-醇按下面的描述制備。
在-78℃氮氣下用1小時在(E)-3-(4-溴-苯基)-丙烯酸乙基酯(13.5g，52.9mmol)溶液中逐滴加入DIBAL的甲苯溶液(159ml，159mmol)。加完之后將溶液在相同溫度下再攪拌1小時，然后用5分鐘升至-50℃。在反應混合物升至室溫期間逐滴加入1M HCl(200ml)。之后在室溫迅速攪拌30分鐘，加入EtOAc(500ml)并收集有機層。含水層再用EtOAc萃取。合并的有機相再用1M HCl和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并真空蒸發(fā)。將殘余物與己烷(100ml)一起研磨以得到白色固體，過濾收集該白色固體并用己烷(200ml)洗滌。產(chǎn)量＝9.8g，46.0mmol，87％產(chǎn)率。
中間體9c(2S)-苯基({(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}氨基)乙酸環(huán)戊酯
用中間體9b的類似合成途徑在方案8中用中間體3c合成中間體9c。
LCMSm/z 462[M+H]+。
中間體9d (2S)-環(huán)己基({(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}氨基)乙酸環(huán)戊酯
用中間體9b的類似合成途徑在方案8中用中間體3e合成中間體9d。
LCMSm/z 468[M+H]+。
中間體9e O-叔丁基-N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-絲氨酸環(huán)戊酯
用中間體9b的類似合成途徑在方案8中用中間體3f合成中間體9e。
LCMSm/z 472[M+H]+。
中間體9f N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-D-亮氨酸叔丁酯
用中間體9b的類似合成途徑在方案8中用環(huán)戊基-D-亮氨酸酯合成中間體9f。
LCMSm/z 442[M+H]+。
中間體9g (2S)-環(huán)己基({(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}氨基)乙酸叔丁酯
用中間體9b的類似合成途徑在方案8中用中間體3h合成中間體9g。
LCMSm/z 468[M+H]+。
中間體9h O-叔丁基-N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-蘇氨酸環(huán)戊酯
用中間體9b的類似合成途徑在方案8中用中間體3g合成中間體9g。
LCMSm/z 486[M+H]+。
中間體10N-{(2E)-3-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
用中間體9a的類似合成途徑在方案7中用3-溴-碘苯合成中間體10。
LCMSm/z 442[M+H]+。
中間體11a N-{2-[2-氟-5-(((4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
中間體11a的合成途徑示于方案9。
將N-{2-[2-氟-5-溴苯基]乙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯(450mg，1.124mmol)、雙-頻哪醇合二硼(428mg，1.686mmol)、PdCl2(dppf)(92mg，0.112mmol)和乙酸鉀(276mg，2.81mmol)在干燥容器內(nèi)合并并用氮氣吹掃。加入DMSO(3ml)并將混合物在80℃加熱18小時以使反應完全。將混合物在Et2O(50ml)和水(100ml)之間分配并分離各相。水相用Et2O(2×25ml)萃取，合并的有機相用鹽水(3×100ml)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)以得到粗制黃色油狀產(chǎn)物。該物質(zhì)通過柱層析純化(5-10％EtOAc/異己烷)得到淡黃色油狀產(chǎn)物(286mg，0.511mmol，45.5％產(chǎn)率)。m/z 448[M+H]+。
N-{2-[2-氟-5-溴苯基]乙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯按下面的描述制備。
將(5-溴-2-氟苯基)乙醛(0.336g，1.548mmol)溶于DCM(12ml)并用中間體3a(0.719g，1.935mmol)處理。所得溶液室溫攪拌20分鐘，然后用三乙氧基硼氫化鈉(1.641g，7.74mmol)分多次處理。將混合物室溫攪拌2小時以使反應完全。混合物用1M HCl猝滅，然后用NaHCO3溶液中和?；旌衔镉肈CM(75ml)稀釋并分離各相。水相用DCM(25ml)萃取，合并的有機相用NaHCO3溶液(100ml)和鹽水(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)以得到粗制黃色油狀產(chǎn)物。該物質(zhì)通過柱層析純化(5％EtOAc/異己烷)得到淡黃色油狀產(chǎn)物(450mg，0.877mmol，56.6％產(chǎn)率)。m/z 400[M+H]+。
(5-溴-2-氟苯基)乙醛按下面的描述制備。
在0℃用30分鐘將4-溴-2-乙烯基-1-氟苯(1.3g，3.23mmol)的DCM(10ml)溶液逐滴加入四乙酸鉛(1.434g，3.23mmol)的TFA(5ml)溶液。使混合物升至室溫并攪拌1.5小時。TLC分析提示未反應完全，因此將混合物室溫攪拌18小時。將混合物倒入水(50ml)中并攪拌10分鐘，然后用DCM(50ml)萃取。有機相用NaHCO3溶液(100ml)和鹽水(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)以得到粗制黃色油狀產(chǎn)物。通過柱層析純化(0-5％EtOAc/異己烷)得到淡黃色油狀產(chǎn)物(336mg，1.548mmol，47.9％產(chǎn)率)。
4-溴-2-乙烯基-1-氟苯按下面的描述制備。
在-10℃用1M LiHMDS(18.47ml，18.47mmol)逐滴處理甲基三苯基鏻溴化物(6.60g，18.47mmol)的THF(40ml)溶液并在此溫度下將所得溶液攪拌30分鐘，然后冷卻至-78℃。然后逐滴加入5-溴-2-氟苯醛(2.5g，12.31mmol)的THF(10ml)溶液。將混合物在-78℃攪拌10分鐘，然后升至室溫并再攪拌3小時。將混合物倒入水(200ml)中并萃取入異己烷(2×200ml)。合并的有機相用鹽水洗滌(200ml)，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)以得到粗制產(chǎn)物。通過柱層析純化得到澄清無色油狀產(chǎn)物(1.34g，3.33mmol，27.1％產(chǎn)率)。
中間體11b N-{2-[2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
中間體11b類似于中間體11a在方案9中用5-溴-2-甲基苯醛合成。LCMSm/z 444[M+H]+。
中間體11c N-{2-[2-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
中間體11c類似于中間體11a在方案9中用5-溴-2-氯苯醛合成。LCMSm/z464[M+H]+。
實施例 以下實施例列舉了本發(fā)明具體化合物的制備以及其IKK抑制特性 實施例1(2S)-({4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}氨基)(苯基)乙酸環(huán)戊酯
LC/MS純度95％，m/z 493[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.8(1H，s)，7.72(2H，br s)，7.6(2H，d，J＝8.8Hz)，7.46(2H，d，J＝8.3Hz)，7.5-7.3(5H，m)，7.0(2H，s)，5.1(1H，m)，4.2(1H，s)，3.6(2H，s)，3.0(1H，s)，1.9-1.4(8H，m)。
氮氣下在5-(4-甲?；?苯基)-2-脲基-噻吩-3-羧酸酰胺(中間體2)(0.15g，0.518mmol)和中間體3c(0.227g，1.037mmol)的四氫呋喃(4.5ml)溶液中加入DIPEA(0.181ml，1.037mmol)并將反應物攪拌5分鐘然后加入乙酸(1.5ml)。再攪拌10分鐘后加入MP-CNBH3(0.665g，1.556mmol)并將反應物室溫攪拌1.5小時，然后過夜。MP-CNBH3用二氯甲烷洗滌，將合并的洗液和濾液真空濃縮。將殘余物溶于小量甲醇并通過5g SCX柱，產(chǎn)物用1％氨的甲醇溶液洗脫。粗產(chǎn)物通過柱層析純化，用3∶2乙酸乙酯∶異己烷洗脫(75mg，49％)。
以下實施例按照實施例1的類似方法制備。
實施例2N-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
從中間體2和中間體3a制備。
LC/MS純度99％，m/z 473[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.7(1H，s)，7.62(2H，br s)，7.46(2H，d，J＝8.3Hz)，7.25(2H，d，J＝8.3Hz)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.72(1H，d，J＝13.7Hz)，3.53(1H，d，J＝12.9Hz)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，1.80-1.71(3H，m)，1.68-1.33(8H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(3H，d，J＝8.8Hz)。
實施例3 N-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]芐基}-L-苯丙氨酸環(huán)戊酯
從中間體2和中間體3d制備。
LC/MS純度98％，m/z 507[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.7(1H，s)，7.62(2H，br s)，7.46(2H，d，J＝8.3Hz)，7.25(2H，d，J＝8.3Hz)，7.21(5H，m)，7.0(2H，br s)，5.0(1H，m)，3.72(1H，d，J＝13.7Hz)，3.58(1H，d，J＝12.9Hz)，3.35(1H，m)，2.90(1H，dd，J＝7.3Hz)，2.79(1H，dd，J＝8.1Hz)，1.80-1.71(2H，m)，1.68-1.33(6H，m)。
實施例4(2R)-({4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]芐基}氨基)(苯基)乙酸環(huán)戊酯
從中間體2和中間體3c(R)異構體制備。
LC/MS純度95％，m/z 493[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.8(2H，d，J＝8.4Hz)，7.62(2H，br s)，7.4(2H，d，J＝8.7Hz)，7.5-7.3(7H，m)，7.0(2H，br s)，5.15(1H，m)，4.43(1H，s)，3.7(2H，s)，3.1(1H，s)，1.9-1.4(8H，m)。
實施例5(2S)-({4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}氨基)(2-萘基)乙酸環(huán)戊酯
從中間體2和中間體3b制備。
LC/MS純度93％，m/z 543[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.8(4H，m)，7.69(1H，s)，7.65(2H，br s)，7.55-7.43(5H，m)，7.3(2H，d，J＝13.4Hz)，7.26(1H，br s)，6.9(2H，br s)，5.15(1H，m)，4.43(1H，s)，3.7(2H，s)，3.1(1H，s)，1.9-1.4(8H，m)。
實施例6 N-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]-3-氯芐基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
在氮氣下在裝有中間體5a(62mg，0.138mmol)、中間體1(33.1mg，0.125mmol)和四(三苯基膦)鈀(14.48mg，0.013mmol)的試管中加入DME。攪拌反應混合物并加入1ml碳酸氫鈉水溶液。將反應試管置于預熱至80℃的油浴中。2小時后分析顯示完全轉(zhuǎn)化成所需產(chǎn)物。將反應混合物冷卻至室溫并倒入水中，萃取入EtOAc，合并的有機萃取物用水/鹽水洗滌，之后用硫酸鎂干燥。產(chǎn)物通過柱層析純化，用3-5％MeOH的DCM溶液洗脫以得到37.5mg，0.072mmol，57.8％產(chǎn)率。
LCMS純度98％m/z 507/509[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.7(1H，s)，7.62(2H，br s)，7.44(2H，d，J＝8.7Hz)，7.29(1H，s)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.72(1H，d，J＝13.7Hz)，3.53(2H，d，J＝12.9Hz)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，1.80-1.71(2H，m)，1.68-1.33(6H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(2H，d，J＝8.8Hz)。
實施例7 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]-2-甲基芐基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例6的類似過程用中間體5b合成。
LCMS純度99％，m/z 487[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.7(1H，br s)，7.3(3H，m)，7.2(1H，d，J＝7.7Hz)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.7(1H，d，J＝13.1Hz)，3.5(1H，d，J＝13.1Hz)，3.1(1H，br s)，3.0(1H，br s)，2.3(3H，s)，1.8(2H，m)，1.6(7H，m)，1.4(2H，m)，0.9(3H，d J＝6.6Hz)，0.8(3H，d J＝6.6Hz)。
實施例8 N-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
用氮氣吹掃裝有四(三苯基膦)鈀(99mg，0.085mmol)、中間體1(22mg，0.854mmol)和中間體4a(313mg，0.939mmol)的試管并加入DME(無水，12ml)。在混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(2.5ml)并將反應混合物在90℃的油浴中加熱4小時。將混合物冷卻至室溫，倒入水(50ml)中并用EtOAc(100ml)萃取。合并的有機萃取物用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并在真空下蒸發(fā)至干。殘余物通過柱層析純化，用0-3％MeOH的DCM溶液洗脫。分離出淡黃色固體狀所需產(chǎn)物(291mg，0.573mmol，67.1％產(chǎn)率)。
LCMS純度100％m/z 473[M+H]+，472[M-H]-。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.7(1H，s)，7.62(2H，br s)，7.46(1H，s)，7.25(3H，m)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.72(1H，d，J＝13.7Hz)，3.53(2H，d，J＝12.9Hz)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，1.80-1.71(2H，m)，1.68-1.33(6H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(2H，d，J＝8.8Hz)。
實施例9-15 以下實施例按照實施例8的類似方法用中間體4b-4f中詳細描述的各種氨基酸酯來合成。



*實施例12用下述實驗過程從實施例11制備。
在實施例11(40mg，0.080mmol)的DCM(2ml)溶液中加入三氟乙酸(0.4ml)。將反應混合物室溫攪拌過夜。在真空下除去溶劑并在殘余物中加入甲醇和2滴乙酸。將溶液加載到SCX柱上并用1％氨的甲醇溶液洗脫產(chǎn)物。真空濃縮氨流分得到一種油狀物，在其中加入DCM和異己烷。通過過濾收集獲得的固體(22mg，55％產(chǎn)率)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.7(1H，brs)，7.4(1H，s)，7.4(1H，d)，7.3(2H，m)，7.1(1H，d)，6.9(2H，br s)，5.1(1H，m)，4.8(1H，br s)，3.8(1H，d)，3.6(3H，m)，3.2(1H，br s)，1.8(2H，m)，1.6-1.4(6H，m)。
實施例16N-(2-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
用氮氣吹掃裝有中間體6a(153mg，0.356mmol)、中間體1(86mg，0.324mmol)和Pd(PPh3)4(37.4mg，0.032mmol)的試管。加入DME(6ml，無水)和NaHCO3(1.0ml，飽和水溶液)并將反應物在80℃加熱3小時。將反應混合物冷卻至室溫并倒入水(50ml)中。用EtOAc(2×40ml)萃取產(chǎn)物，有機層用水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑得到被三苯基膦氧化物污染的棕色油狀固體。通過在SCX上捕獲和釋放進行純化(用MeOH洗脫)得到53mg僅70％純的橙色油狀物。產(chǎn)物通過柱層析純化，用50％EtOAc的己烷溶液洗脫以得到42mg(27％)淡橙色粉末。
LCMS純度96％m/z 487[M+H]+；485[M-H]-。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.8(2H，s)，7.44(2H，d，J＝8.7Hz)，7.29(1H，s)，7.23(2H，d，J＝8.7Hz)，6.9(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，2.6-2.79(4H，m)，1.80-1.71(3H，m)，1.68-1.33(7H，m)，1.32(1H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(2H，d，J＝8.8Hz)。
實施例17 N-(2-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]-3-氯苯基}乙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例16的類似過程用中間體6b合成。
LCMS純度98％m/z 522[M+H]+.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.8(2H，s)，7.42(1H，s)，7.29(1H，s)，7.23(2H，d，J＝8.7Hz)，6.9(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，2.6-2.79(4H，m)，1.80-1.71(3H，m)，1.68-1.33(7H，m)，1.32(1H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(2H，d，J＝8.8Hz)。
實施例18 N-(2-{3-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例16的類似過程用中間體6c合成。
LCMS純度99％，m/z 487[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.7(1H，br s)，7.3(4H，m)，7.1(1H，d，J＝7.4Hz)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.2(1H，br s)，3.0(1H，br s)，2.7(4H，m)，1.8(2H，m)，1.6(7H，m)，1.3(2H，m)，0.9(3H，d J＝6.6Hz)，0.8(3H，d J＝6.6Hz)。
以下實施例按照實施例18的類似方法用中間體6d-6f中詳細描述的各種氨基酸酯來合成。


實施例22 N-(2-{5-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?噻吩-2-基]-2-氟苯基}乙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例16的類似過程用中間體11a合成。
LCMS純度100％，m/z 505[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.6(2H，br s)，7.4(1H，m)，7.3(1H，m)，7.3(1H，m)，7.1(1H，t)，6.9(2H，br s)，5.0(1H，m)，3.1(1H，s)，2.7-2.5(4H，m)，1.9(1H，br s)，1.7(2H，m)，1.6-1.4(7H，m)，0.8(3H，d)，0.8(3H，d)。
實施例23 N-(2-{5-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]-2-甲基苯基}乙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例16的類似過程用中間體11b合成。
LCMS純度97％，m/z 499.4[M-H]-，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(2H，br s)，7.3(2H，br s)，7.2(1H，d)，7.1(1H，d)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.2(1H，m)，2.7(4H，m)，2.2(3H，s)，1.9(1H，m)，1.8(2H，m)，1.6(7H，m)，1.4(2H，m)，0.9(3H，d)，0.8(3H，d)。
實施例24 N-(2-{5-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?噻吩-2-基]-2-氯苯基}乙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例16的類似過程用中間體11c合成。
LCMS純度96％，m/z 519.5[M-H]-，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.7(1H，br s)，7.5(1H，d)，7.4(1H，d)，7.4(1H，dd)，7.3(1H，br s)，7.0(2H，br s)，5.1(1H.M)，3.2(1H，m)，2.8(3H，m)，2.6(1H，m)，2.0(1H，br s)，1.8(2H，m)，1.6(7H，m)，1.3(2H，m)，0.9(3H，d)，0.8(2H，m)，0.9(3H，d)。
實施例25 N-(3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯氧基}丙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
在中間體7a(0.2g，0.435mmol)、中間體1(0.126g，0.479mmol)和Pd(PPh3)4(0.050g，0.044mmol)的混合物中加入DME(5ml)，然后加入2ml飽和NaHCO3溶液。混合物用氮氣吹掃并置于預熱至80℃的油浴中。在此溫度攪拌3小時后通過LC-MS判斷反應完全。將混合物冷卻至室溫，用MeOH稀釋并吸附到二氧化硅上。對殘余物進行柱層析，用3-4％MeOH的DCM溶液洗脫。然后對材料進行SCX捕獲和釋放。產(chǎn)量＝0.11g，0.213mmol，48.9％產(chǎn)率。
LCMS純度100％m/z 517(M+H)+；515(M-H)-。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.91(1H，s)，7.61(1H，br s)，7.52(1H，s)，7.38(2H，d，J＝8.8Hz)，7.24(1H，br s)，6.90(3H，d，J＝8.8Hz)，5.05(1H，t，J＝5.9Hz)，3.98(2H，t，J＝6.4Hz)，3.07(1H，br s)，2.61(1H，t，J＝6.6Hz)，1.70-1.83(4H，m)，1.49-1.61(6H，m)，1.32(2H，t，J＝7.1Hz)，0.81(6H，dd，J＝12.0，6.6Hz)。
實施例26 N-(3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]-3-氯苯氧基}丙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例25的類似過程用中間體7b合成。
LCMS純度98％m/z 552(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.98(1H，s)，7.61(1H，br s)，7.49(1H，s)，7.41(1H，d，J＝8.8Hz)，7.27(1H，brs)，7.07(1H，m)，6.9(2H，m)，5.08(1H，m)，4.07(2H，m)，3.05(1H，m)，2.6(1H，m)，1.8(4H，m)，1.60-1.49(7H，m)，1.3(2H，m)，0.81(3H，d，J＝8.4Hz)，0.79(3H，d，J＝8.7Hz)。
實施例27 N-(5-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯氧基}戊基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
在中間體8a(600mg，1.231mmol)、中間體1(361mg，1.231mmol)和Pd(PPh3)4(142mg，0.123mmol)的混合物中加入DME(8ml)。加入飽和NaHCO3(3ml)溶液后用氮氣吹掃混合物并將其置于預熱至80℃的油浴。4小時后通過LCMS判斷反應完全?；旌衔镉肕eOH稀釋，吸附到二氧化硅上并進行柱層析，用3-5％MeOH的DCM溶液洗脫。蒸發(fā)后分離產(chǎn)物(0.305g，0.543mmol，44.1％產(chǎn)率)。
LCMS純度100％m/z 545(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.91(1H，s)，7.60(1H，br s)，7.52(1H，s)，7.38(2H，d，J＝8.8Hz)，7.23(1H，brs)，6.91(3H，m)，5.05(1H，t，J＝6.1Hz)，3.92(2H，t，J＝6.4Hz)，3.06(1H，m)，2.34(1H，m)，1.72-1.80(2H，m)，1.65(3H，dd，J＝10.5，6.1Hz)，1.55(3H，dd，J＝10.5，7.Hz)，1.50-1.61(3H，m)，1.38(4H，d，J＝2.9Hz)，1.30(3H，t，J＝7.3Hz)，0.81(6H，dd，J＝11.0，6.6Hz)。
實施例28N-(5-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苯氧基}戊基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例27的類似過程用中間體8b合成。
LCMS純度98％m/z 580(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.97(1H，s)，7.69(1h，br s)，7.45(1H，s)，7.4(1H，d，J＝13Hz)，7.23(1H，br s)，7.05(1H，d，J＝8.5Hz)，6.9(3H，m)，5.1(1H，m)，4.0(2H，m)，3.05(1H，m)，2.3(1H，m)，1.75(2H，m)，1.69-1.45(9H，m)，1.44-1.22(6H，m)，0.81(3H，d，J＝8.4Hz)，0.79(3H，d，J＝8.7Hz)。
實施例29 N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例27的類似過程用中間體9a合成。
在N-(叔丁氧基羰基)-N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?噻吩-2-基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸環(huán)戊酯(中間體9a)(39mg，0.065mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中加入三氟乙酸(0.5ml)。將反應混合物室溫攪拌2小時。真空除去溶劑以建立反應混合物。殘余物用甲醇稀釋并通過SCX層析捕獲，產(chǎn)物用氨的甲醇溶液洗脫。將氨流分真空濃縮以得到油狀殘余物。將該物質(zhì)溶于二氯甲烷并加入異己烷。真空除去溶劑后獲得淡橙色固體(24.3mg，0.049mmol，75％)。
LCMS純度100％，m/z 499.0[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.6(1H，br s)，7.4(2H，d，J＝8.3Hz)，7.3(2H，d，J＝8.8Hz)，7.2(1H，br s)，6.9(2H，br s)，6.4(1H，d，J＝15.7Hz)，6.2(1H，m)，5.0(1H，m)，3.3(1H，H)，3.2(2H，m)，1.8-1.7(2H，m)，1.6-1.5(7H，m)，1.3(2H，m)，0.8(6H，m)。
實施例30-40 以下實施例按照實施例29的類似方法用各種市售的單取代和二取代的4-溴-碘苯如中間體9a的詳細描述在方案7中合成。

實施例41-48 以下實施例按照實施例27的類似方法用中間體9b-9h中詳細描述的各種氨基酸酯在方案8中合成。



實施例49 N-[(2E)-3-{3-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸環(huán)戊酯
通過實施例16的類似過程用中間體10合成。
LCMS純度98％，m/z 499.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.6(1H，br s)，7.5(1H，s)，7.3(3H，m)，7.2(1H，m)，6.9(2H，br s)，6.5(1H，d)，6.3(1H，m)，5.0(1H，m)，3.3(1H，m)，3.2(1H，m)，2.1(1H，br s)，1.8(2H，bm)，1.7-1.5(7H，m)，1.4(2H，m)，0.8(6H，m)。
NMR數(shù)據(jù) 實施例50 (2S)-({4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}氨基)(苯基)乙酸
LC/MS純度96％，m/z 425[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，br s)，7.7(1H，s)，7.6(1H，br s)，7.5(2H，m)，7.4-7.3(8H，m)，6.9(2H，m)，4.2(1H，s)，3.7(2H，q，J＝13.9and 6.6Hz)。
在(2S)-({4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}氨基)(苯基)乙酸環(huán)戊酯(實施例1)(50mg，102μmol)的四氫呋喃(1ml)溶液中加入1.0M LiOH水溶液(0.508ml，508μmol)。在40℃的油浴中攪拌反應物。4小時后LCMS指示90％反應完。除去油浴并將反應物在室溫攪拌過夜。在真空下除去溶劑并將殘余物加入水(2ml)。在溶液中加入5滴乙酸，有固體沉淀。該固體通過過濾收集并依次用水、乙醇和二乙醚洗滌，之后減壓干燥(26mg，60％)。
以下實施例按照實施例50的類似方法制備。如果有必要，化合物可通過制備型HPLC純化以獲得良好純度。
實施例51 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}-L-亮氨酸
從實施例2制備。LC/MS純度99％，m/z 405[M+H]+。
實施例52 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}-L-苯丙氨酸
從實施例3制備。LC/MS純度98％，m/z 439[M+H]+。
實施例53 (2R)-({4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]芐基}氨基)(苯基)乙酸
從實施例4制備。LC/MS純度95％，m/z 425[M+H]+。
實施例54 (2S)-({4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]芐基}氨基)(2-萘基)乙酸
從實施例5制備。LC/MS純度98％，m/z 475[M+H]+。
實施例55 N-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯芐基}-L-亮氨酸
從實施例6制備。LC/MS純度98％，m/z 508[M+H]+。
實施例56 N-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]-2-甲基芐基}-L-亮氨酸
從實施例7制備。LCMS純度92％，m/z 417[M-H]+。
實施例57 N-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}-L-亮氨酸
從實施例8制備。LC/MS純度98％，m/z 405[M+H]+。
以下實施例按照實施例50的類似方法制備。如果有必要，化合物可通過制備型HPLC純化以獲得良好純度。


實施例63 N-(2-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸
從實施例16制備。LC/MS純度96％，m/z 487[M+H]+。
實施例64 N-(2-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]-3-氯苯基}乙基)-L-亮氨酸
從實施例17制備。LC/MS純度98％，m/z 522[M+H]+。
實施例65 N-(3-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯氧基}丙基)-L-亮氨酸
從實施例25制備。LC/MS純度100％，m/z 517[M+H]+。
實施例66 N-(3-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]-3-氯苯氧基}丙基)-L-亮氨酸
從實施例26制備。LC/MS純度100％，m/z 552[M+H]+。
實施例67 N-(5-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯氧基}戊基)-L-亮氨酸
從實施例27制備。LC/MS純度100％，m/z 545[M+H]+。
實施例68 N-(5-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苯氧基}戊基)-L-亮氨酸
從實施例28制備。LC/MS純度98％，m/z 580[M+H]+。
實施例69 N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸
從實施例29制備。LCMS純度100％，m/z 431.0[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.6(1H，br s)，7.5(2H，d，J＝8.3Hz)，7.4(2H，d，J＝8.3Hz)，7.3(1H，br s)，7.0(2H，br s)，6.6(1H，d，J＝16.1Hz)，6.2(1H，m)，3.5(1H，m)，3.3(2H，m)，1.8(1H，m)，1.4(2H，m)，0.8(6H，m)。
以下實施例按照實施例50的類似方法制備。如果有必要，化合物可通過制備型HPLC純化以獲得良好純度。

以下實施例按照實施例50的類似方法制備。如果有必要，化合物可通過制備型HPLC純化以獲得良好純度。



實施例87 N-(2-{3-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸
從實施例18制備。LCMS純度98％，m/z 417[M-H]+。
以下實施例用實施例87的類似方式合成。


實施例90 N-(2-{5-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?噻吩-2-基]-2-氟苯基}乙基)-L-亮氨酸
從實施例22制備。LCMS純度97％，m/z 435[M-H]+。
實施例91 N-(2-{5-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?噻吩-2-基]-2-甲基苯基}乙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
從實施例23制備。LCMS純度98％，m/z 431[M-H]+。
實施例92 N-(2-{5-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?噻吩-2-基]-2-氯苯基}乙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯
從實施例24制備。LCMS純度97％，m/z 451[M-H]+。
實施例93 N-[(2E)-3-{3-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸
從實施例49制備。LC/MS純度90％，m/z 431[M+H]+。
測量生物學活性 IKK-β酶試驗 有英國佩斯利的因維曲根公司(Invitrogen，Paisley，UK)進行試驗測量化合物抑制IKKβ激酶活性的能力。Z′-LYTETM生化試驗采用基于熒光的偶聯(lián)酶模式并基于磷酸化肽和非磷酸化肽對蛋白水解切割的不同敏感性。肽底物用構成FRET對的兩種熒光團標記(每個末端一種熒光團)。在初步反應中，激酶將ATP的γ磷酸轉(zhuǎn)移到合成FRET-肽的單個絲氨酸或蘇氨酸殘基上。在二次反應中，位點特應性蛋白酶識別并切割非磷酸化的FRET-肽。FRET-肽的磷酸化能抑制被擴展劑(Development Reagent)切割。切割打斷了FRET-肽上供體熒光團(即香豆素)和受體櫻桃(即熒光素)之間的FRET，從而未被切割的磷酸化FRET-肽得以保留FRET。采用放射測量法來量化反應進程，該方法計算400nm激發(fā)供體熒光團之后供體發(fā)射與受體發(fā)射的比值(發(fā)射比)。
最終的10μL激酶反應物包括0.9-8.0ng IKBKB(IKKβ)、2μM Ser/Thr 05肽和ATP，用50mM HEPES pH 7.5、0.01％BRIJ-35、10mM MgCl2、1mM EGTA配制。試驗在ATP濃度為或接近Km時進行。激酶反應物室溫孵育60分鐘后加入5μL 1∶128稀釋的擴展劑。試驗平板再室溫孵育60分鐘，并用熒光平板閱讀器讀讀數(shù)。
從DMSO配制的檢測化合物原液的1/3log連續(xù)稀釋液獲得一式兩份數(shù)據(jù)點。從最高濃度10μM開始進行9次稀釋，包括‘無化合物’空白。收集數(shù)據(jù)并采用IDBS的XLfit軟件進行分析。劑量反應曲線是205號模型(S形劑量反應模型)的擬合曲線。從生成的曲線可確定并匯報50％抑制濃度。
THP-1細胞的LPS-刺激 以4×104細胞/孔的密度將100μl THP-1細胞接種于V形底96孔組織培養(yǎng)處理平板并在5％CO2下于37℃孵育16小時。加入用100μl組織培養(yǎng)基配制的抑制劑2小時后用最終濃度為1μg/ml的LPS(大腸桿菌菌株005:B5，西格瑪公司(Sigma))刺激細胞并在5％CO2下于37℃孵育6小時。通過夾心ELISA(R&D系統(tǒng)公司，#QTA00B)測量無細胞上清液的TNF-α水平。
人全血的LPS-刺激 用肝素化真空采血器(vacutainer)(BD公司(Becton Dickinson))通過靜脈穿刺采集全血并用等體積RPMI1640組織培養(yǎng)基(西格瑪公司)稀釋。取100μl接種于V形底96孔組織培養(yǎng)處理平板。加入用100μl RPMI1640培養(yǎng)基配制的抑制劑2小時后用最終濃度為100ng/ml的LPS(大腸桿菌菌株005:B5，西格瑪公司(Sigma))刺激所述血液并在5％CO2下于37℃孵育6小時。通過夾心ELISA(R&D系統(tǒng)公司，#QTA00B)測量無細胞上清液的TNF-α水平。
IC50值被歸入3個范圍之一，如下 范圍AIC50＜1000nM 范圍B1000nM＜IC50＜5000nM 范圍CIC50＞5000nM NT＝未檢測 結果表格 破碎細胞羧酸酯酶試驗 可對任何給定的本發(fā)明的化合物(其中R1是酯基)通過以下試驗進行檢測以確定它是否能夠滿足被胞內(nèi)酯酶水解的要求。
制備細胞提取物 U937或Hut116腫瘤細胞(約109)，用4倍體積的Dulbeccos PBS(約1升)洗滌并在4℃以525g離心10分鐘使其沉淀。重復兩次，然后將最終的細胞沉淀物重懸于35ml冷的勻漿緩沖液(Trizma 10mM、NaCl 130mM、CaCl2 0.5mMPH 7.0，25℃)。通過氮氣氣蝕制備勻漿(700psi，50分鐘，4℃)。將勻漿保持在冰上并用抑制劑混合物補足以得到以下最終濃度 亮肽素1μM 抑肽酶0.1μM E64 8μM 胃酶抑素1.5μM 苯丁抑制素162μM 胰凝乳蛋白酶抑制劑33μM 將細胞勻漿在525g離心10分鐘以使其澄清，所得上清液被用作酯酶活性來源并可儲存于-80℃直至使用。
測量酯的切除 用如上制備的這種細胞提取物測量酯變?yōu)橄鄳聂人岬乃庾饔?。為達到這種效果，將細胞提取物(約30ug/0.5ml總測試體積)在Tris-HCl 25mM、125mMNaCl、緩沖液(25℃時PH為7.5)中于37℃孵育。在0時刻加入最終濃度為2.5μM的相應的酯(底物)并將樣品在37℃孵育適當時間(通常為0或80分鐘)。加入3倍體積的乙腈終止反應。對于0時刻樣品，在加入酯化合物之前加入乙腈。12,000g離心5分鐘后，在室溫下通過LCMS(SciexAPI 3000，HP1100二元泵，CTC PAL)分析樣品中的酯及其相應的羧酸。采用的色譜條件基于AcCN(75×2.1mm)柱和流動相，流動相為5-95％乙腈水溶液/0.1％甲酸。
表1列出了數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)顯示了若干通過一些不同連接基化學部分與各種胞內(nèi)酶抑制劑偶聯(lián)的氨基酸酯基序都被胞內(nèi)羧酸酯酶水解成相應的酸。

表權利要求
1.式(IA)或(IB)所示化合物或其鹽、N-氧化物，水合物或溶劑合物
其中
R7是H或任選取代的(C1-C6)烷基；和
環(huán)A是任選取代的5-13個環(huán)原子的芳基或雜芳基環(huán)；
Z是式R1R2CHNH-Y-L1-X1-(CH2)z-所示基團，其中
R1是羧酸基(-COOH)，或者可被一種或多種胞內(nèi)酯酶水解成羧酸基的酯基；
R2是天然或非天然α氨基酸的側鏈；
Y是鍵、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)-NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氫或任選取代的C1-C6烷基；
L1是式-(Alk1)m(Q)n(Alk2)p-所示二價基團，其中
m、n和p獨立為0或1，
Q是(i)具有5-13個環(huán)成員的任選取代的二價單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)基團，或(ii)當p是0時，是式-Q1-X2-所示二價基團，其中X2是-O-、-S-或NRA-，其中RA是氫或任選取代的C1-C3烷基，Q1是具有5-13個環(huán)成員的任選取代的二價單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)基團，
Alk1和Alk2獨立代表任選取代的二價C3-C7環(huán)烷基，或任選取代的直鏈或支鏈的C1-C6亞烷基、C2-C6亞烯基(alkenylene)或C2-C6亞炔基(alkynylene)，所述基團可任選含有或終止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)連接，其中RA是氫或任選取代的C1-C3烷基；
X1是鍵、-C(＝O)、或-S(＝O)2-、-NR4C(＝O)-、-C(＝O)NR4-、-NR4C(＝O)NR5-、-NR4S(＝O)2-或-S(＝O)2NR4-，其中R4和R5獨立為氫或任選取代的C1-C6烷基；和
z是0或1；
2.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，R7是氫。
3.如權利要求1或2所述的化合物，其特征在于，環(huán)A是任選取代的1，4-亞苯基或1，3-亞苯基。
4.如上述權利要求中任一項所述的化合物，其特征在于，環(huán)A中的任選取代基選自氟、氯、甲基或三氟甲基。
5.如上述權利要求中任一項所述的化合物，其特征在于，R1是式-(C＝O)OR14所示酯基，其中R14是R8R9R10C-，其中
(i)R8是氫或任選取代的(C1-C3)烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-或(C2-C3)烯基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b獨立為0或1，Z1是-O-、-S-或-NR11-，其中R11是氫或(C1-C3)烷基；且R9和R10獨立為氫或(C1-C3)烷基-；
(ii)R8是氫或任選取代的R12R13N-(C1-C3)烷基-，其中R12是氫或(C1-C3)烷基和R13是氫或(C1-C3)烷基；或R12和R13與它們所結合的氮一起形成任選取代的5-或6-個環(huán)原子的單環(huán)雜環(huán)或8-10個環(huán)原子的二環(huán)雜環(huán)系統(tǒng)，且R9和R10獨立為氫或(C1-C3)烷基-；或
(iii)R8和R9與它們所結合的碳一起形成任選取代的3-7個環(huán)原子的單環(huán)碳環(huán)或8-10個環(huán)原子的二環(huán)碳環(huán)系統(tǒng)，且R10是氫。
6.如權利要求1-4中任一項所述的化合物，其特征在于，R1是甲基，乙基，正丙基或異丙基，正丁基、仲丁基或叔丁基，環(huán)己基，烯丙基，苯基，芐基，2-、3-或4-吡啶基甲基，N-甲基哌啶-4-基，四氫呋喃-3-基、甲氧基乙基、茚滿基、降冰片基、二甲基氨基乙基或嗎啉代乙基酯基團。
7.如權利要求1-4中任一項所述的化合物，其特征在于，R1是環(huán)戊基或叔丁基酯基團。
8.如上述權利要求中任一項所述的化合物，其特征在于，R2是環(huán)己基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、仲丁基、叔丁基、1-芐硫基-1-甲基乙基、1-甲硫基-1-甲基乙基或1-巰基-1-甲基乙基。
9.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其特征在于，R2是苯基、芐基、苯乙基、環(huán)己基、叔丁氧基甲基或異丁基。
10.如上述權利要求中任一項所述的化合物，其特征在于，基團R1R2CHNH-Y-L1X1-(CH2)z-選自R1R2CHNH-(CH2)a-、R1R2CHNH-(CH2)aO-或R1R2CHNH-CH2CH＝CHCH2-，其中a是1、2、3、4或5。
11.如權利要求1所述的化合物，其選自下組
N-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
N-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
N-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]-3-氯芐基}-L-亮氨酸環(huán)戊酯
N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸環(huán)戊酯
(2S)-{[(2E)-3-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]氨基}(苯基)乙酸環(huán)戊酯
(2S)-({3-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]芐基}氨基)(苯基)乙酸環(huán)戊酯
N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲?；?5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]-3-甲基苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸環(huán)戊酯
(2S)-[(2-{3-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}乙基)氨基](苯基)乙酸環(huán)戊酯
N-{3-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?噻吩-2-基]芐基}-L-蘇氨酸環(huán)戊酯
(2S)-({3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}氨基)(環(huán)己基)乙酸環(huán)戊酯
N-[(2E)-3-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸環(huán)戊酯
N-{3-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]芐基}-L-亮氨酸叔丁酯，和
N-(2-{3-[4-氨甲?；?5-(氨甲?；被?-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸環(huán)戊酯，
以及其鹽、N-氧化物、水合物或溶劑合物。
12.一種包含上述權利要求中任一項所述化合物以及一種或多種藥學上可接受的載體和/或賦形劑的藥物組合物。
13.如權利要求1-11中任一項所述的化合物在制備用于抑制IKK酶活性的組合物中的應用。
14.如權利要求13所述的應用，用于離體或體內(nèi)抑制IKKβ活性。
15.如權利要求1-11中任一項所述的化合物在制備用于治療腫瘤性/增生性疾病、自身免疫性疾病或炎性疾病的組合物中的應用。
16.一種抑制IKK酶活性的方法，所述方法包括使所述酶接觸IKK酶活性抑制有效量的如權利要求1-11中任一項所述的化合物。
17.如權利要求16所述的方法，用于離體或體內(nèi)抑制IKKβ活性。
18.一種治療腫瘤性/增生性疾病、自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，該方法包括給患有這種疾病的對象施用有效量的如權利要求1-11中任一項所述的化合物。
19.如權利要求13所述的應用或如權利要求18所述的方法，其特征在于，用于治療癌細胞增殖。
20.如權利要求13所述的應用或如權利要求18所述的方法，其特征在于，用于治療肝細胞癌或黑色素瘤。
21.如權利要求13所述的應用或如權利要求18所述的方法，其特征在于，用于治療腸癌、卵巢癌、頭頸癌和宮頸鱗狀細胞癌、胃癌或肺癌、間變性少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性成膠質(zhì)細胞瘤或髓母細胞瘤。
22.如權利要求13所述的應用或如權利要求18所述的方法，其特征在于，用于治療類風濕性關節(jié)炎、硬皮病、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、慢性阻塞性肺病、哮喘、多發(fā)性硬化、糖尿病、特應性皮炎、移植物抗宿主病、或系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
全文摘要
式(IA)或(IB)的化合物是IkB激酶(IKK)活性抑制劑，可用于治療自身免疫性疾病和炎性疾病，式(IA)或(IB)中，R7是H或任選取代的(C1-C6)烷基；環(huán)A是任選取代的5-13個環(huán)原子的芳基或雜芳基環(huán)或環(huán)系統(tǒng)；Z是式R1R2CHNH-Y-L1-X1-(CH2)z-的基團，其中z是0或1；R1是羧酸基(-COOH)，或可被一種或多種胞內(nèi)羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基；R2是天然或非天然α氨基酸的側鏈；Y是鍵、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氫或任選取代的C1-C6烷基；L1是式-(Alk1)m(Q)n(Alk2)p-的二價基團，其中m、n、p、Q、Alk1和Alk2如權利要求中所定義。
文檔編號C07D333/00GK101541779SQ200780040236
公開日2009年9月23日 申請日期2007年10月29日 優(yōu)先權日2006年11月1日
發(fā)明者D·F·C·莫法特, S·J·戴維斯, M·H·查爾頓, S·C·赫斯特, S·T·奧尼恩斯, J·G·威廉姆斯 申請人:色品療法有限公司