專(zhuān)利名稱(chēng)：：能夠結(jié)合于血清蛋白的肽的制作方法能夠結(jié)合于血清蛋白的肽相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)根據(jù)35U.S.C.§119(e)要求2006年12月5日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/872,923的利益，將其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及能夠結(jié)合于血清蛋白的氨基酸序列；包括或基本由所述氨基酸序列組成的化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體；編碼所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體的核酸；包括所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體的組合物和特別是藥物組合物；和所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體的用途。由本文中進(jìn)一步的描述，本發(fā)明的其他方面、實(shí)施方案、優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用將變得清晰。發(fā)明背景能夠結(jié)合于血清蛋白的氨基酸序列及其在化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體中為了增長(zhǎng)治療相關(guān)蛋白質(zhì)、多肽和其他化合物半衰期的用途是本領(lǐng)域中已知的。例如，WO91/01743、WO01/45746和WO02/076489描述了與血清清蛋白結(jié)合的肽部分，其能夠與治療蛋白質(zhì)和其他治療化合物和實(shí)體相融合，從而增加其半衰期。然而，這些肽部分是細(xì)菌或合成來(lái)源的，其對(duì)于用在治療中是較不優(yōu)選的。新生兒Fc受體(FcRn)，也稱(chēng)為"Brambell受體"，與延長(zhǎng)清蛋白在循環(huán)中的壽命有關(guān)(見(jiàn)Chaudhury等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(TheJournalofExperimentalMedicine),第3巻，第197號(hào)，315-322(2003))。FcRn受體是由可溶性輕鏈、跨膜區(qū)和約50個(gè)氨基酸的胞質(zhì)尾區(qū)組成的完整膜糖蛋白，所述可溶性輕鏈由P2-微球蛋白組成，與具有三個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的43kDa鏈非共價(jià)結(jié)合。所述胞質(zhì)尾區(qū)包含涉及受體內(nèi)在化的、以二核苷酸基序?yàn)榛A(chǔ)的胞吞作用信號(hào)。所述a鏈?zhǔn)堑鞍踪|(zhì)非經(jīng)典MHCI家族的成員。卩2m與a鏈的締合對(duì)FcRn的正確折疊和離開(kāi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定向到內(nèi)體和細(xì)胞表面非常關(guān)鍵。FcRn的總體結(jié)構(gòu)類(lèi)似于I類(lèi)分子的總體結(jié)構(gòu)。a-l和a-2區(qū)類(lèi)似由8個(gè)反向平行P鏈組成的平臺(tái)，所述反向平行P鏈形成加帽(topped)了2個(gè)反向平行a-螺旋的單|3-折疊，所述oc-螺旋非常類(lèi)似于MHCI分子中的肽裂(peptidecleft)。由于'a-l螺旋的全面重新定位和a-2螺旋由于存在Pro162而引起該螺旋中斷裂的C-末端部分彎曲，F(xiàn)cRii螺旋彼此相當(dāng)靠近，從而封閉肽結(jié)合。FcRn的Argl64側(cè)鏈也封閉肽N-末端與MHC袋的潛在相互作用。另外，a-l和a-2螺旋間的鹽橋和疏水性相互作用也對(duì)溝關(guān)閉作出貢獻(xiàn)。因此，F(xiàn)cRn與抗原呈遞無(wú)關(guān)，且所述肽裂是空的。FcRn結(jié)合并運(yùn)輸IgG由母體循環(huán)穿過(guò)胎盤(pán)合胞體滋養(yǎng)層到達(dá)胎兒循環(huán)，并保護(hù)成年人中的IgG免于被降解。除體內(nèi)穩(wěn)態(tài)外，F(xiàn)cRn控制組織中IgG的胞轉(zhuǎn)作用。FcRn位于上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和肝細(xì)胞中。按照Chaudhury等(見(jiàn)上)，清蛋白結(jié)合FcRn從而形成具有IgG的三-分子復(fù)合物。清蛋白和IgG非協(xié)作地結(jié)合于FcRn上的不同位點(diǎn)。人FcRn與瓊脂糖-HSA和瓊脂糖-hlgG的結(jié)合是pH依賴(lài)性的，其在pH5.0時(shí)達(dá)到最大，并在pH7.0-pH8時(shí)為零。關(guān)于FcRn以與結(jié)合IgG相同的pH依賴(lài)方式結(jié)合清蛋白的觀察提示清蛋白與FcRn相互作用并由此受到保護(hù)免于被降解的機(jī)制與IgG的相同，并通過(guò)與FcRn類(lèi)似的pH-敏感性相互作用受到介導(dǎo)。利用SPR測(cè)量各個(gè)HSA結(jié)構(gòu)域結(jié)合固定的可溶性hFcRn的能力，Chaudhury顯示FcRn和清蛋白通過(guò)清蛋白的D-III結(jié)構(gòu)域，以pH-依賴(lài)性方式，在與IgG結(jié)合位點(diǎn)不同的位點(diǎn)上相互作用(Chaudhmy,PhD論文,見(jiàn)http:〃www.andersonlab.com/biosketchCC.htm;Chaudhury等生物^f七學(xué)(Biochemistry),ASAP文章10.1021/bi052628yS0006-2960(05)02628-0(網(wǎng)頁(yè)公開(kāi)日期2006年3月22日))。埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的WO04/041865描述了能夠結(jié)合于血清蛋白(和特別是針對(duì)人血清清蛋白)的納米抗體(Nanobodies)，其能夠與其他蛋白質(zhì)(諸如一種或多種能夠結(jié)合于需要的靶標(biāo)的其它納米抗體)連接，從而增加所述蛋白質(zhì)的半衰期。已知這些納米抗體⑧比常規(guī)四鏈血清清蛋白結(jié)合抗體更有效和更穩(wěn)定，這導(dǎo)致(1)更低的劑量形式，更低的頻率劑量，從而引起較少副作用；(2)改進(jìn)的穩(wěn)定性，從而導(dǎo)致更廣泛施用途徑選擇，除靜脈內(nèi)途徑外包括口服或皮下途徑；(3)由于較低的材料成本引起的較低治療成本。盡管如此，仍然存在對(duì)能夠用于增長(zhǎng)治療相關(guān)蛋白質(zhì)、多肽和(其他)化合物半衰期的備選技術(shù)和部分的需要。例如，本領(lǐng)域中描述的一些肽部分來(lái)自合成或半-合成來(lái)源，且可能因此包含不合乎需要的可能被人免疫系統(tǒng)識(shí)別的表位，這可以引起免疫原性特性。而且，比本領(lǐng)域中所述的血清蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域抗體和納米抗體⑧(其有時(shí)可以具有比它們待融合或連接的化合物更高的分子量)小的血清蛋白結(jié)合肽可能更容易處理，從而與治療蛋白、多肽或化合物融合或連接，和/或作為重組(融合)多肽(的一部分)表達(dá)；可具有優(yōu)越的生物物理性質(zhì)(諸如溶解性、穩(wěn)定性)；且在它們連接治療蛋白、多肽或化合物的融合體或構(gòu)建體中，其可以引起減小的位阻現(xiàn)象或與融合配偶體的其他不需要的相互作用或其需要的藥理學(xué)特性。WO03/050531(埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)和AlgonomicsN.V.)描述用于識(shí)別和選擇肽，具體地結(jié)合于給定靶標(biāo)或目的耙標(biāo)的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域CDR序列的方法。顯示出尤其是CDR3在抗原結(jié)合中起關(guān)鍵作用(Kabat和Wu,1991)，且報(bào)告了許多情形，其中CDR3肽顯示出模擬母體抗體的抗原結(jié)合(參考例如Taub等，1991)。對(duì)于納米抗體，CDR3在抗原結(jié)合相互作用中的優(yōu)勢(shì)作用甚至更明顯(DeGenst等,2006)。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是為以上引用的現(xiàn)有技術(shù)中所述的血清蛋白-結(jié)合氨基酸序列提供備選的，且特別是改善備選的氨基酸序列。通常，本發(fā)明通過(guò)提供這樣的氨基酸序列實(shí)現(xiàn)該目的，所述氨基酸序列能夠結(jié)合于血清蛋白和能夠作為小肽或作為肽部分使用以與治療化合物(諸如蛋白質(zhì)或多肽)連接或融合，從而增長(zhǎng)其半衰期。這些氨基酸序列(其在本文中也稱(chēng)為"單^發(fā)剪游^"^^^U")在本文中進(jìn)一步定義。因此，按照第一方面，本發(fā)明涉及能夠結(jié)合于血清蛋白和基本由CDR序列(且特別地，單一CDR序列)組成的氨基酸序列。所述氨基酸序列優(yōu)選具有少于90個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選少于50個(gè)氨基酸殘基，諸如約40、30或20個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度；和/或優(yōu)選是這樣的，以致其不包含免疫球蛋白形式并且也不能夠形成免疫球蛋白折疊。本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選包含CDR序列(和特別地，單一CDR序列)，且特別地，這樣的CDR序列，其是這樣的以致能夠結(jié)合血清蛋白，從而允許該氨基酸序列結(jié)合于血清蛋白。CDR序列可以具體地是源自免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域能夠結(jié)合于血清蛋白的CDR序列。CDR序列可以基本由包括CDR序列的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的片段組成。更特別地，CDR序列還可以源自選自由下列各項(xiàng)組成的組中的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域VH-結(jié)構(gòu)域、V^結(jié)構(gòu)域、VHH-結(jié)構(gòu)域或免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的抗原-結(jié)合片段；和/或可以是VH-結(jié)構(gòu)域、VL-結(jié)構(gòu)域、VHH-結(jié)構(gòu)域的片段或包括CDR序列的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的抗原-結(jié)合片段。優(yōu)選地，CDR序列源自兔疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，其選自由人可變結(jié)構(gòu)域、(單)結(jié)構(gòu)域抗體、dAb、或納米抗體⑧組成的組；和/或是人可變結(jié)構(gòu)域、(單)結(jié)構(gòu)域抗體、dAb、或納米抗體的片段。源自納米抗體的CDR序列是特別優(yōu)選的。CDR序列優(yōu)選具有3-40個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選5-30個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。具體地，CDR序列可以是CDR2序列或CDR3序列。本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選地是這樣的，以致它以這樣的方式結(jié)合于血清蛋白，以致所述方式不(顯著)縮短血清蛋白分子的半衰期。本發(fā)明的氨基酸序列結(jié)合的血清蛋白可以具體地是選自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原組成的組的血清蛋白。本發(fā)明的氨基酸序列還可以結(jié)合于前述任一種的26至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，本發(fā)明的氨基酸序列結(jié)合于血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域；和具體地，結(jié)合于人血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域。當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列結(jié)合于(人)血清清蛋白時(shí)，其優(yōu)選地能夠結(jié)合于血清清蛋白上不涉及(人)血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的氨基酸殘基；和/或結(jié)合于血清清蛋白上不形成(人)血清清蛋白的結(jié)構(gòu)域III部分的氨基酸殘基。參考WO06/0122787。本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選包括CDR序列，在所述CDR序列任一側(cè)側(cè)鄰2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列。所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列優(yōu)選分別具有1-30個(gè)氨基酸殘基、優(yōu)選2-20個(gè)氨基酸殘基，諸如約5、10或15個(gè)氮基酸殘基的長(zhǎng)度，且可以具體地源自免疫球蛋白構(gòu)架序列和/或可以是免疫球蛋白構(gòu)架序列的片段。更具體地，所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列可以是免疫球蛋白構(gòu)架序列，所述免疫球蛋白構(gòu)架序列源自這樣的構(gòu)架序列，所述構(gòu)架序列在所述CDR序列來(lái)源的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域中鄰近所述CDR序列；和/或可以是這樣的構(gòu)架序列的片段，所述構(gòu)架序列在所述CDR序列來(lái)源的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域中鄰近所述CDR序列。例如，當(dāng)CDR序列是CDR2序列時(shí)，旁側(cè)序列優(yōu)選是分別源自構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的免疫球蛋白構(gòu)架序列；和/或分別地，構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的片段。當(dāng)CDR序列是CDR3序列時(shí)，旁側(cè)序列優(yōu)選是分別源自構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的免疫球蛋白構(gòu)架序列；和/或分別地，構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的片段。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列包含至少2個(gè)能夠形成二硫鍵和/或形成分子內(nèi)二硫鍵部分的半胱氨酸殘基。優(yōu)選地，所述半胱氨酸殘基位于旁側(cè)氨基酸序列中。例如，當(dāng)旁側(cè)氨基酸序列源自免疫球蛋白構(gòu)架序列和/或是免疫球蛋白構(gòu)架序列的片段時(shí)，所述半胱氨酸殘基可以是所述免疫球蛋白構(gòu)架序列中天然存在的半胱氨酸殘基和/或己被引入到所述免疫球蛋白構(gòu)架序列中的半胱氨酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)具體但非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列處于"限制"形式(即，包括至少一個(gè)連接旁側(cè)序列的二硫鍵)或是當(dāng)處于限制形式時(shí)，能夠結(jié)合(如本文中所述)于人血清清蛋白的氨基酸序列。具體地，所述氨基酸序列包括這樣的CDR序列，其是這樣的，以致當(dāng)該氨基酸序列處于限制形式時(shí)，所述CDR序列能夠結(jié)合(如本文中所述)于人血清清蛋白。在本發(fā)明的另一個(gè)具體但非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列處于"非-限制"形式(即，不包括任何連接旁側(cè)序列的二硫鍵)或是在當(dāng)處于非-限制形式時(shí)，能夠結(jié)合(如本文中所述)于人血清清蛋白的氨基酸序列。具體地，所述氨基酸序列包括這樣的CDR序列，其是這樣的，以致當(dāng)該氨基酸序列處于非-限制形式時(shí)，所述CDR序列能夠結(jié)合(如本文中所述)于人血清清蛋白。在本發(fā)明的另一個(gè)具體但非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列是在處于限制形式以及非-限制形式時(shí)都能夠結(jié)合(如本文中所述)于人血清清蛋白的氨基酸序列。所述氨基酸序列可以處于限制形式以及非-限制形式。具體地，所述氨基酸序列包括這樣的CDR序列，其是這樣的，以致當(dāng)該氨基酸序列處于限制形式或非-限制形式時(shí)，所述CDR序列均能夠結(jié)合(如本文中所述)于人血清清蛋白。本發(fā)明氨基酸序列的非-限制性實(shí)例在SEQIDNO:l中給出，其相應(yīng)的核苷酸序列在SEQIDNO:2中給出。該氨基酸序列D7^F77CA^AASYSDYDVFGGGTDFGP『G^Grgr(SEQIDNO:l)包括側(cè)鄰2個(gè)構(gòu)架序列(斜體字表示)的CDR序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)，所述2個(gè)構(gòu)架序列分別源自構(gòu)架3和4。該CDR序列在其處于SEQIDNO:l的肽形式時(shí)能夠以氨基酸序列形式結(jié)合于血清清蛋白，但也如此(即，不存在旁側(cè)FR序列)。參考以下的實(shí)施例4，其顯示該CDR序列可以以限制形式(即包含二硫鍵，見(jiàn)例如肽17D12-CDR3-C，SEQIDNO:27)以及以非-限制形式(即，沒(méi)有二硫鍵，見(jiàn)例如肽17D12-CDR3-NC，SEQIDNO:26)結(jié)合于人血清清蛋白。因此，在一個(gè)優(yōu)選但非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列是至少包括氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)或包括與氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)相差不多于9個(gè)氨基酸差別(如本文中定義)，優(yōu)選不多于6個(gè)氨基酸差別，諸如5,4,3,2或僅1個(gè)氨基酸差別的氨基酸序列的氨基酸序列。所述氨基酸序列可以在本文中進(jìn)一步描述。例如，所述本發(fā)明的氨基酸序列可以包括氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)(或與該序列相差不多于9個(gè)氨基酸差別，優(yōu)選不多于6個(gè)氨基酸差別，諸如5，4,3,2或僅1個(gè)氨基酸差別的氨基酸序列)，和可以進(jìn)一步包括1或2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列(即，分別在該序列的任一側(cè)或兩側(cè))。而且，所述本發(fā)明的氨基酸序列可以處于限制或非-限制形式。優(yōu)選地，所述本發(fā)明的氨基酸序列(或包括至少一種所述氨基酸序列的本發(fā)明的化合物，如本文中進(jìn)一步所述)是這樣的，以致它可以結(jié)合于血清清蛋白，和具體地人血清清蛋白-具有解離常數(shù)(Ko)為10久10"摩爾/升或更小，和優(yōu)選10-7-10"2摩爾/升或更小和更優(yōu)選10-8-10-12摩爾/升(即，具有結(jié)合常數(shù)(KA)為105-1012升/摩爾或更大，和優(yōu)選107-1012升/摩爾或更大和更優(yōu)選108-1012升/摩爾)；-具有締合率(karate)為1()2M-V-約lO'M—V1,優(yōu)選103M"s"-107M-V1,更優(yōu)選104M"s"-107M"s"，諸如105M-V畫(huà)1()7M-'S";和/或-具有解離率(k。ff率)為Is"(t1/2=0.69s)-l(T6s"(提供具有多日的"/2的接近不可逆的復(fù)合物)，優(yōu)選l(T2s丄10'6s"，更優(yōu)選IO-3S"-10-4S"，諸如10"S"-1(T6S";且所述氨基酸序列(和編碼所述氨基酸序列的核苷酸序列，以及包括所述氨基酸序列的本發(fā)明的化合物)形成本發(fā)明另外的方面。優(yōu)選地，所述本發(fā)明的氨基酸序列(或包括一種所述氨基酸序列的本發(fā)明的化合物，如本文中進(jìn)一步所述)是這樣的，以致它將以小于500nM,優(yōu)選小于200nM,更優(yōu)選小于10nM，諸如小于500pM的親和力結(jié)合于血清蛋白。當(dāng)所述氨基酸序列是與氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)相差不多于9個(gè)氨基酸差別(和優(yōu)選不多于6個(gè)氨基酸差別，諸如5,4,3,2或僅1個(gè)氨基酸差別)的氨基酸序列時(shí)，其優(yōu)選是這樣的，以致它(或包括至少一種所述氨基酸序列的本發(fā)明化合物，如本文中進(jìn)一步所述)可以以前段中提到的KD，KA,K。n和減K。ff結(jié)合于血清清蛋白，且特別地人血清清蛋白。所述氨基酸序列(和編碼所述氨基酸序列的核苷酸序列、以及包括所述氨基酸序列的本發(fā)明化合物，如本文中進(jìn)一步所述)形成本發(fā)明另外的方面。例如，所述氨基酸序列可以是從氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)開(kāi)始，通過(guò)親和力成熟獲得的氨基酸序列。當(dāng)所述氨基酸序列是與氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)相差不多于9個(gè)氨基酸差別(和優(yōu)選不多于6個(gè)氨基酸差別，諸如5，4,3,2或僅1個(gè)氨基酸差別)的氨基酸序列時(shí)，它可以包括總共9-27個(gè)氨基酸殘基，諸如12-24個(gè)氨基酸殘基，例如15-21個(gè)氨基酸殘基，諸如16,17，18,19或20個(gè)氨基酸殘基)。此外，所述氨基酸序列優(yōu)選是這樣的，以致它可以以前段中提到的Ko,KA，K。n和域K。ff結(jié)合于血清清蛋白，和具體地人血清清蛋白；且所述氨基酸序列(和編碼所述氨基酸序列的核苷酸序列、以及包括所述氨基酸序列的本發(fā)明化合物，如本文中進(jìn)一步所述)形成本發(fā)明另外的方面。例如，所述氨基酸序列可以是從氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)開(kāi)始，通過(guò)親和力成熟獲得的氨基酸序列。而且，優(yōu)選地，當(dāng)所述氨基酸序列是與氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)相差不多于9個(gè)氮基酸差別(和優(yōu)選不多于6個(gè)氨基酸差別，諸如5,4,3,2或僅1個(gè)氨基酸差別)的氨基酸序列時(shí)，它優(yōu)選是這樣的，以致它包括一或多(諸如1、2、3、4或5)段氨基酸殘基序列，其包括至少3個(gè)(諸如至少4,5,6,7，8，9或更多)來(lái)自序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)的連續(xù)氨基酸殘基(此外，是這樣的以致氨基酸殘基總數(shù)是9-27個(gè)氨基酸殘基，諸如12-24個(gè)氨基酸殘基，例如15-21個(gè)氨基酸殘基，諸如16,17,18,19或20氨基酸殘基)。此外，所述氨基酸序列優(yōu)選是這樣的，以致它可以以前段中提到的Kd,Ka,K。d和/或K。ff結(jié)合于血清清蛋白，和具體地人血清清蛋白；且所述氨基酸序列(和編碼所述氨基酸序列的核苷酸序列、以及包括所述氨基酸序列的本發(fā)明化合物，如本文中進(jìn)一步所述)形成本發(fā)明另外的方面。例如，所述氨基酸序列可以是從氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)開(kāi)始，通過(guò)親和力成熟獲得的氨基酸序列。在一個(gè)特殊但非-限制性方面，所述氨基酸序列是這樣的氨基酸序列，艮卩(i)與氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)相差不多于9個(gè)氨基酸差別(和優(yōu)選不多于6個(gè)氨基酸差別，諸如5，4，3，2或僅1個(gè)氨基酸差別)；(ii)從氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)開(kāi)始，通過(guò)親和力成熟獲得的；(Hi)包括總共9-27個(gè)氨基酸殘基，諸如12-24個(gè)氨基酸殘基，例如15-21個(gè)氨基酸殘基，諸如16,17,18,19或20個(gè)氨基酸殘基)，和優(yōu)選包括一或多(諸如l、2、3、4或5)段氨基酸殘基序列，其包括至少3個(gè)(諸如至少4,5,6,7,8,9或更多)來(lái)自序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQIDNO:3)的連續(xù)氨基酸殘基；和(iv)其可以以前段中提到的Kd,Ka,K。n和減K。ff結(jié)合于血清清蛋白，和具體地人血清清蛋白。此外，所有上述氨基酸序列可以在本文中進(jìn)一步描述，且可以例如包括1個(gè)或2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列(即分別在該序列的任一端或兩端)，且可以處于限制或非-限制形式。例如，所述氨基酸序列還可以是這樣的，以致它們能夠以限制形式、以非-限制形式、和優(yōu)選地以限制和非-限制兩種形式結(jié)合(如本文中所述)于血清清蛋白，和具體地人血清清蛋白。此外，包括一種或多種上述氨基酸序列的本發(fā)明化合物形成本發(fā)明另外的特殊方面，且所述本發(fā)明的化合物可以在本文中進(jìn)一步描述(且優(yōu)選地，根據(jù)本文中關(guān)于本發(fā)明化合物所述的優(yōu)選方面)。本發(fā)明還涉及包括至少一種本發(fā)明氨基酸序列和至少一種治療部分(本文中也稱(chēng)為"本發(fā)明的化合物")的化合物或構(gòu)建體。此外，所述化合物或構(gòu)建體中存在的本發(fā)明氨基酸序列優(yōu)選地包含至少2個(gè)能夠形成二硫鍵或/或形成分子內(nèi)二硫鍵部分(例如，且特別地，在CDR序列旁側(cè)的兩個(gè)旁側(cè)序列中)的半胱氨酸殘基。例如，且不限制，本發(fā)明的化合物可以包括至少一種治療部分，其與1、2、3、4或更多本發(fā)明的氨基酸序列連接。例如，當(dāng)所述治療部分是蛋白質(zhì)或多肽時(shí)，一種或多種本發(fā)明的氨基酸序列可以連接于該蛋白質(zhì)或多肽的C-端(直接地或通過(guò)合適的間隔區(qū)或接頭)；連接于該蛋白質(zhì)或多肽的N-端(也直接地或通過(guò)合適的間隔區(qū)或接頭)；或連接于C-端和N-端二者。當(dāng)本發(fā)明的化合物包括2個(gè)或更多本發(fā)明的氨基酸序列時(shí)，這些可以是相同或不同的。所述治療部分也可以連接(在其C-端、其N(xiāo)-端、或兩端，且也直接地或通過(guò)合適的間隔區(qū)或接頭)于包括至少2(諸如2、3或4)個(gè)本發(fā)明氨基酸序列(其可以相同或不同)的多聯(lián)體(concatamer)，其可以是彼此直接，或通過(guò)合適的間隔區(qū)或接頭連接的。所述(二價(jià)、三價(jià)或多價(jià))多聯(lián)體(和編碼所述多聯(lián)體的核苷酸序列、以及包括所述多聯(lián)體的本發(fā)明化合物)形成本發(fā)明另外的方面，且可以以高于本發(fā)明單體氨基酸序列的親和力結(jié)合于血清清蛋白。此外，當(dāng)本發(fā)明的化合物包括兩個(gè)或更多治療部分時(shí)，這些治療部分中的每一個(gè)(或兩個(gè))可以連接于一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明的氨基酸序列，如本文中進(jìn)一步所述。此外，所述兩個(gè)或更多治療部分可以彼此通過(guò)接頭連接，所述接頭包括或基本由一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明的氨基酸序列(和任選地另外的連接氨基酸序列)組成，且所述接頭(以及包括所述接頭的本發(fā)明化合物)形成本發(fā)明另外的方面。所述至少一種治療部分優(yōu)選包括或基本由氨基酸序列組成，且特別地可以包括或基本由免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段(例如，抗體或其抗原-結(jié)合片段)，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段(例如，Vh-結(jié)枸域、VL-結(jié)構(gòu)域、VHH-結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段)組成；或包括或由包括其的蛋白質(zhì)或多肽(例如，scFv構(gòu)建體)組成。關(guān)于所述構(gòu)建體，參考例如Holliger和Hudson的綜述，自然生物技術(shù)(NatBiotechnol.)2005年9月；23(9):1126-36和其中引用的其他現(xiàn)有技術(shù)。按照一個(gè)具體但非-限制性方面，所述治療部分包括或基本由(單)結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"、或納米抗體⑧組成。在本發(fā)明的化合物中，本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)氨基酸序列可以直接連接于所述至少一個(gè)治療部分或通過(guò)一個(gè)或多個(gè)合適的接頭或間隔區(qū)連接于所述至少一個(gè)治療部分。合適的接頭對(duì)技術(shù)人員應(yīng)該是清楚的，例如基于本文中進(jìn)一步的公開(kāi)。當(dāng)所述一個(gè)或多個(gè)治療部分是氨基酸序列時(shí)，所述接頭或間隔區(qū)優(yōu)選包括或基本由氨基酸序列組成，這樣由此生成的化合物或構(gòu)建體基本由(融合)蛋白或(融合)多肽(本文中也稱(chēng)為"本發(fā)明的多肽)組成。此外，所述本發(fā)明的多肽中存在的本發(fā)明氨基酸序列優(yōu)選包含至少2個(gè)能夠形成二硫鍵和減形成分子內(nèi)二硫鍵部分(例如，且特別地，在CDR序列旁側(cè)的2個(gè)旁側(cè)序列中)的半胱氨酸殘基。本發(fā)明還涉及編碼本發(fā)明氨基酸序列或本發(fā)明多肽的核苷酸序列或核酸(本文中也稱(chēng)為"本發(fā)明的核苷酸序列"或"本發(fā)明的核酸")。此外，所述本發(fā)明的核酸優(yōu)選地編碼包含至少2個(gè)能夠形成二硫鍵(例如，且特別地，在CDR序列旁側(cè)的2個(gè)旁側(cè)序列中)的半胱氨酸殘基的本發(fā)明氨基酸序列或本發(fā)明多肽。本發(fā)明還涉及宿主或宿主細(xì)胞，其包含本發(fā)明核苷酸序列或核酸和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))本發(fā)明氨基酸序列或本發(fā)明多肽，和具體地包含至少2個(gè)能夠形成二硫鍵(例如，且特別地，在CDR序列旁側(cè)的2個(gè)旁側(cè)序列中)的半胱氨酸殘基的本發(fā)明氨基酸序列或本發(fā)明多肽。如基于本文中的內(nèi)容技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選但非-限制性方面涉及本發(fā)明的氨基酸序列，其包含二硫鍵，具體地在CDR序列旁側(cè)的2個(gè)旁側(cè)序列(的每一個(gè)中存在的半胱氨酸殘基)之間。因此，本發(fā)明還涉及用于制備所述本發(fā)明氨基酸序列的方法，所述方法通常至少包括在包括至少2個(gè)能夠形成二硫鍵的半胱氨酸殘基的本發(fā)明氨基酸序列中形成二硫鍵的步驟，且特別地，至少包括在CDR序列旁側(cè)的2個(gè)旁側(cè)序列(的每一個(gè)中存在的半胱氨酸殘基)之間形成二硫鍵的步驟。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的多肽，其包含二硫鍵，具體地在由本發(fā)明的氨基酸序列組成的多肽的部分中。因此，本發(fā)明還涉及用于制備所述本發(fā)明多肽的方法，所述方法通常至少包括在本發(fā)明的多肽中，具體地在由本發(fā)明的氨基酸序列形成的部分中形成二硫鍵的步驟。此外，為了該目的，所述多肽中存在的本發(fā)明氨基酸序列優(yōu)選包括至少2個(gè)半胱氨酸殘基，其能夠形成二硫鍵，具體地在CDR序列旁側(cè)的2個(gè)旁側(cè)序列的每一個(gè)中。另一種用于制備本發(fā)明的氨基酸序列或多肽的方法通常包括至少下列步驟a)表達(dá)本發(fā)明的核苷酸序列或核酸；和任選地還包括b)分別分離如此表達(dá)的本發(fā)明的氨基酸序列或本發(fā)明的多肽。在由此獲得的本發(fā)明氨基酸序列或本發(fā)明多肽包含至少2個(gè)能夠形成二硫鍵(例如，且特別地，在CDR序列旁側(cè)的2個(gè)旁側(cè)序列中)的半胱氨酸殘基的情況下，所述方法還可以包括另一個(gè)形成所述二硫鍵的步驟，如本文中進(jìn)一步所述。再一種用于制備本發(fā)明的氨基酸序列或多肽的方法通常包括至少下列步驟a)在這樣的條件下培養(yǎng)或維持本文中所述的宿主或宿主細(xì)胞，以使得所述宿主或宿主細(xì)胞產(chǎn)生.本發(fā)明的氨基酸序列或多肽；和任選地，還包括b)分別分離由此獲得的本發(fā)明的氨基酸序列或本發(fā)明的多肽。此外，當(dāng)由此獲得的本發(fā)明的氨基酸序列或本發(fā)明的多肽包含至少2個(gè)能夠形成二硫鍵(例如，且特別地，在CDR序列旁側(cè)的2個(gè)旁側(cè)序列中)的半胱氨酸殘基的情況下，所述方法還可以包括另一個(gè)形成所述二硫鍵的步驟，如本文中進(jìn)一步所述。本發(fā)明還涉及通過(guò)以上方法獲得的氨基酸序列、化合物、構(gòu)建體或多肽。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括至少一種如本文中所述的氨基酸序列、化合物、構(gòu)建體或多肽；和任選地至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。本發(fā)明還涉及一些用于提供能夠結(jié)合于血清蛋白和能夠在本發(fā)明中使用(即作為本發(fā)明的氨基酸序列或作為用于提供本發(fā)明氨基酸序列的起始點(diǎn))的氨基酸序列(如CDR序列)的具體方法。一種所述具體方法至少包括下列步驟a)提供氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；禾口/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白的片段；禾口/或(iii)包括CDR序列但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；b)篩選所述組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列；和C)分離能夠結(jié)合于所述血清蛋白或所述其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。在該方法的步驟b)中，優(yōu)選篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于選自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferring)、纖維蛋白原組成的組中的血清蛋白和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列；和/或以獲得能夠結(jié)合于血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。具體地，在該方法的步驟b)中，可以篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列；和更具體地，以獲得能夠結(jié)合于人血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。按照一個(gè)具體但非-限制性方面，在該方法的步驟b)中，可以篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白的不涉及(人)血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的一種或多種氨基酸序列；和/或以獲得能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白的至少一個(gè)不形成(人)血清清蛋白的結(jié)構(gòu)域ni部分的部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序所述篩選可以以任何本身己知的蛋白質(zhì)篩選方式進(jìn)行。例如，所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)可以使用技術(shù)人員已知的技術(shù)展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體上。參考例如Hoogenboom等的綜述，自然生物技術(shù)(NatBiotechnol)23:1105，2005和其中引用的其他現(xiàn)有技術(shù)。以上方法中使用的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)優(yōu)選地包括基本由側(cè)鄰2個(gè)源自免疫球蛋白構(gòu)架序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列組成的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)；和/或包括在兩側(cè)側(cè)鄰構(gòu)架序列或構(gòu)架序列片段的CDR序列的免疫球蛋白序列的片段組、集合或文庫(kù)。具體地，所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)可以包括包括或基本由側(cè)鄰2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列組成的氨基酸序列的組合，集合或文庫(kù)，所述旁側(cè)氨基酸序列源自構(gòu)架序列，所述構(gòu)架序列在所述CDR序列來(lái)源的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域中鄰近所述CDR序列。例如，氨基酸序列組、集合或文庫(kù)可以包括或基本由側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR2序列組成；或包括或基本由側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR3序列組成。為了提供包含2個(gè)用于形成二硫鍵的半胱氨酸殘基的氨基酸序列(如本文中進(jìn)一步所述)，以上方法還可以包括引入(即通過(guò)添加、插入或置換)l或2個(gè)半胱氨酸殘基，以使得由此生成的氨基酸序列中的每個(gè)構(gòu)架序列包含至少一個(gè)半胱氨酸殘基。備選地，在由此獲得氨基酸序列不包括旁側(cè)氨基酸序列的情況下，可以添加所述旁側(cè)序列(優(yōu)選地還具有半胱氨酸殘基)。以上方法的步驟a)中使用的(且隨后在步驟b)中篩選的)氨基酸組、集合或文庫(kù)可以是任何合適的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，其(i)基本由CDR序列組成；和/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白的片段；和/或(iii)包括CDR序列但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。例如，它可以是通過(guò)包括使用一種或多種本身已知的親和力成熟技術(shù)的方法獲得氨基酸序列的組、集合或文庫(kù)。然而，按照一個(gè)優(yōu)選的方面，所述組、集合或文庫(kù)可以通過(guò)至少包括下列步驟的方法獲得a)提供編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)；b)利用位點(diǎn)-特異性引物組合擴(kuò)增所述核苷酸序列，以使得擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；禾口/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白的片段；和域(iii)包括CDR序列但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；c)表達(dá)在步驟b)中獲得的擴(kuò)增片段，從而提供這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；和成(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白的片段；禾口/或(iii)包括CDR序列但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。以上方法的步驟a)中使用的編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以是任何合適的編碼免疫球蛋白序列(如本領(lǐng)域中技術(shù)人員通常理解地，例如抗體、抗體的可變結(jié)構(gòu)域、或包括可變結(jié)構(gòu)域的抗體片段)的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，但是可以具體地是免疫組、集合或文庫(kù)，和更具體地，獲自用血清蛋白適當(dāng)免疫(即，以致生成針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的哺乳動(dòng)物的免疫組、集合或文庫(kù)。該組、集合或文庫(kù)可以以任何本身已知的方式，諸如通過(guò)所有組成部分克隆生成(見(jiàn)例如WO90/05144或本文中引用的Hoogenboom的綜述)。在一個(gè)具體但非-限制性方面，所述編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以是編碼重鏈抗體或VHH序列的核苷酸序列免疫組、集合或文庫(kù)，免疫組、集合或文庫(kù)獲自用血清蛋白適當(dāng)免疫的駱駝科動(dòng)物(Camdid)(即，以致生成針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)。為此，參考例如本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)。擴(kuò)增步驟b)優(yōu)選使用位點(diǎn)-特異性引物(的組合)執(zhí)行，所述位點(diǎn)-特異性引物特異于編碼側(cè)鄰所述CDR序列的構(gòu)架序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即，在用于擴(kuò)增的條件下)。例如，所述位點(diǎn)-特異性引物(的組合)可以是這樣的，以致擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(0基本由CDR2序列組成；和/或(ii)包括包含CDR2序列的免疫球蛋白的片段；和/或(m)包括CDR2序列但所述CDR2序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；在該情形中，所述位點(diǎn)-特異性引物可以特異于分別編碼構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即，在用于擴(kuò)增的條件下)。備選地，所述位點(diǎn)-特異性引物(的組合)可以是這樣的，以致擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(0基本由CDR3序列組成；和/或(ii)包括包含CDR3序列的免疫球蛋白的片段;和/或(iii)包括CDR3序列但所述CDR3序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；在該情形中，所述位點(diǎn)-特異性引物可以特異于分別編碼構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即，在用于擴(kuò)增的條件下)。另一種用于提供能夠結(jié)合于血清蛋白和能夠在本發(fā)明中使用(即作為本發(fā)明的氨基酸序列或作為用于提供本發(fā)明氨基酸序列的起始點(diǎn))的氨基酸序列(諸如CDR序列)的具體方法可以包括下列步驟a)提供免疫球蛋白序列的組、集合或文庫(kù)；b)篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列；c)確定至少一種如步驟b)中鑒別的免疫球蛋白序列的核苷酸序列和/或氨基酸序列，所述免疫球蛋白序列能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和/或確定其CDR序列和/或其包括CDR序列的片段的核苷酸序列和/或氨基酸序列；d)利用本身己知的任何合適技術(shù)制備按照本發(fā)明的氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)基本由具有步驟c)中確定的氨基酸序列的CDR序列組成；和/或(ii)包括具有在步驟C)中確定的氨基酸序列的免疫球蛋白片段；和/或(iii)包括具有在步驟c)中確定的氨基酸序列的CDR序列，但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。此外，在該方法的步驟b)中，可以篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于選自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferring)或纖維蛋白原組成的組中的血清蛋白和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列；和/或以獲得能夠結(jié)合于血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或纖維蛋白原的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列。具體地，可以篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列，和更具體地，以獲得能夠結(jié)合于人血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域，和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列。按照一個(gè)具體但非-限制性方面，在該方法的步驟b)中，可以篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白的不涉及(人)血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的一種或多種氨基酸序列；以獲得能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白的至少一個(gè)不形成(人)血清清蛋白的結(jié)構(gòu)域m部分的部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。此外，所述篩選可以以任何本身已知的蛋白質(zhì)篩選方式進(jìn)行。例如，所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)可以使用技術(shù)人員已知的技術(shù)展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體上。參考例如Hoogenboom等的綜述，自然生物技術(shù)(NatBiotechnol)23:1105,2005和其中引用的其他現(xiàn)有技術(shù)。以上方法的步驟a)中使用的免疫球蛋白序列的組、集合或文庫(kù)可以是任何合適的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，諸如天然免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，合成或半-合成免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，或進(jìn)行了親和力成熟的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)。按照一個(gè)具體但非-限制性方面，所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)可以是免疫球蛋白序列的免疫組、集合或文庫(kù)，和具體地，是獲自用血清蛋白適當(dāng)免疫(即，以致生成針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的哺乳動(dòng)物的免疫組、集合或文庫(kù)。例如，步驟a)中使用的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)可以是重鏈抗體或Vhh序列的免疫組、集合或文庫(kù)，所述免疫組、集合或文庫(kù)獲自用血清蛋白適當(dāng)免疫的駱駝科動(dòng)物(即，以致生成針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)。關(guān)于提供所述組、集合或文庫(kù)的方法，也參考本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)。所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)優(yōu)選地是源自重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列的組、集合或文庫(kù)，和可以具體地是結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體或能夠起結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體作用的免疫球蛋白序列的組、集合或文庫(kù)。此外，在步驟c)中，優(yōu)選地，確定CDR2序列或CDR3序列的序列。另一種用于提供能夠結(jié)合于血清蛋白和能夠在本發(fā)明中使用(即作為本發(fā)明的氨基酸序列或作為用于提供本發(fā)明氨基酸序列的起始點(diǎn))的氨基酸序列(諸如CDR序列)具體方法可以包括下列步驟a)提供源自駱駝?lì)悇?dòng)物表達(dá)免疫球蛋白序列的細(xì)胞的組、集合或文庫(kù)；b)篩選所述細(xì)胞的組、集合或文庫(kù)，以獲得(i)表達(dá)能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列的細(xì)胞；和(ii)表達(dá)重鏈抗體的細(xì)胞；其中子步驟(i)和(ii)可以基本作為單一篩選步驟或作為兩個(gè)分開(kāi)的篩選步驟以任何合適的順序執(zhí)行，從而提供至少一種表達(dá)重鏈抗體的細(xì)胞，所述重鏈抗體能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；c)確定由步驟b)中提供的細(xì)胞表達(dá)的至少一種重鏈抗體的核苷酸序列和/或氨基酸序列，所述重鏈抗體能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和/或確定其CDR序列和/或其包括CDR序列的片段的核苷酸序列和/或氨基酸序列；d)利用本身已知的任何合適技術(shù)制備按照本發(fā)明的氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)基本由具有步驟c)中確定的氨基酸序列的CDR序列組成；和/或(ii)包括具有在步驟C)中確定的氨基酸序列的免疫球蛋白片段；和/或(iii)包括具有在步驟c)中確定的氨基酸序列的CDR序列，但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。在該方法中，細(xì)胞的集合或樣品優(yōu)選是B-細(xì)胞集合或樣品，且特別地，(B-)細(xì)胞集合或樣品獲自受抗原適當(dāng)免疫的駱駝科動(dòng)物，所述抗原包括需要的血清蛋白結(jié)構(gòu)域或表位，從而產(chǎn)生針對(duì)需要的結(jié)構(gòu)域或表位的免疫應(yīng)答。篩選步驟b)可以例如使用流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)諸如FACS執(zhí)行。在另一種具體的方法中，提供編碼可以結(jié)合于血清蛋白和可以用在本發(fā)明中(即，作為本發(fā)明的氨基酸序列或作為用于提供本發(fā)明氨基酸序列的起始點(diǎn))的氨基酸序列(如CDR序列)的核苷酸序列。所述方法可以包括下列步驟a)提供編碼氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；和/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白片段；和/或(iii)包括CDR序列但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；b)篩選所述編碼氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列可以結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和c)分離編碼氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列可以結(jié)合于所述血清蛋白或所述其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力。在該方法的步驟b)中，優(yōu)選篩選所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得編碼這樣氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列能夠結(jié)合于選自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或纖維蛋白原組成的組中的血清蛋白和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和/或以獲得編碼這樣氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列能夠結(jié)合于血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或纖維蛋白原的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力。具體地，在該方法的步驟b)中，可以篩選所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得編碼這樣氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列能夠結(jié)合于血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和更具體地，以獲得編碼這樣氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列能夠結(jié)合于人血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力。按照一個(gè)具體但非-限制性方面，在該方法的步驟b)中，可以篩選所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得一種或多種編碼氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列可以結(jié)合于(人)血清清蛋白中不涉及(人)血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和/或以獲得編碼氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列可以結(jié)合于(人)血清清蛋白中至少一個(gè)不形成(人)血清清蛋白的結(jié)構(gòu)域m部分的部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力。所述篩選可以任何本身已知的蛋白質(zhì)篩選方式執(zhí)行。例如，由所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)編碼的氨基酸序列可以使用技術(shù)人員己知的技術(shù)展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體上。參考例如Hoogenboom等的綜述，自然生物技術(shù)(NatBiotechnol)23:1105,2005和其中引用的其他現(xiàn)有技術(shù)。以上方法中使用的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)優(yōu)選包括編碼這樣的氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列基本由側(cè)鄰2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列組成，所述旁側(cè)氨基酸序列源自免疫球蛋白構(gòu)架序列；和/或編碼包含CDR序列的免疫球蛋白序列片段的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述CDR序列兩側(cè)側(cè)鄰構(gòu)架序列或構(gòu)架序列片段。具41體地，所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以包括編碼這樣的氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列包括或基本由側(cè)鄰2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列組成，所述旁側(cè)氨基酸序列源自構(gòu)架序列，所述構(gòu)架序列在所述CDR序列來(lái)源的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域中鄰近所述CDR序列。例如，所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以包括或基本由編碼CDR2序列的核苷酸序列組成，所述CDR2序列側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的旁側(cè)氨基酸序列，或可以包括或基本由編碼CDR3序列的核苷酸序列組成，所述CDR2序列側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的旁側(cè)氨基酸序列。為了提供編碼包含2個(gè)用于形成二硫鍵(如本文中進(jìn)一步所述)的半胱氨酸殘基的氨基酸序列的核苷酸序列，以上方法可以進(jìn)一步包括引入(即，通過(guò)添加、插入或置換一個(gè)或多個(gè)核苷酸)編碼1個(gè)或2個(gè)半胱氨酸殘基的密碼子，以使通過(guò)由此獲得的核苷酸序列編碼的氨基酸序列中的每個(gè)構(gòu)架序列包含至少一個(gè)半胱氨酸殘基。備選地，在由核苷酸序列編碼的氨基酸序列不包括旁側(cè)氨基酸序列的情況下，所述核苷酸序列可以適當(dāng)?shù)剡B接于編碼所述可以添加的旁側(cè)序列(也優(yōu)選具有半胱氨酸殘基)核苷酸序列。而且，一種或多種由此獲得的核苷酸序列可以彼此連接和/或連接于一種或多種(且至少一種)編碼包括或基本由氨基酸序列組成的治療部分的核苷酸序列(任選地通過(guò)一種或多種編碼一種或多種接頭的核苷酸序列)。.以上方法還可以包括適當(dāng)表達(dá)由此獲得的核苷酸序列的步驟，從而提供本發(fā)明的氨基酸序列或本發(fā)明的多肽。以上方法的步驟a)中使用的(和步驟b)中隨后篩選的)核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以是編碼氨基酸序列的任何合適核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；和/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白片段；和/或(m)包括CDR序列但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。例如，其可以是編碼這樣的氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列通過(guò)包括使用一種或多種本身已知的親和力成熟技術(shù)的方法獲得。然而，按照一個(gè)優(yōu)選的方面，所述組、集合或文庫(kù)可以通過(guò)至少包括下列步驟的方法獲得a)提供編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)；b)利用位點(diǎn)4寺異性引物的組合擴(kuò)增所述核苷酸序列，以使擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；和/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白片段；和/或(iii)包括CDR序列但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。編碼以上方法步驟a)中使用的免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以是編碼免疫球蛋白序列的任何合適核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，但是可以具體地是免疫組、集合或文庫(kù)，和更具體地，獲自由血清蛋白適當(dāng)免疫(即，由此提高針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的哺乳動(dòng)物的免疫組、集合或文庫(kù)。這樣的組、集合或文庫(kù)可以以任何本身已知的方式，諸如通過(guò)所有組成部分克隆產(chǎn)生(見(jiàn)例如WO90/05144或本文中引用的Hoogenboom的綜述)。在一個(gè)具體但非-限制性方面，所述編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以是編碼獲自由血清蛋白適當(dāng)免疫(即，由此產(chǎn)生針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的駱駝科動(dòng)物的重鏈抗體或VHH序列的核苷酸序列免疫組、集合或文庫(kù)。為此，參考例如本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)。擴(kuò)增步驟b)優(yōu)選利用位點(diǎn)-特異性引物(的組合)執(zhí)行，所述引物特異于編碼構(gòu)架序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即，在用于擴(kuò)增的條件下)，所述構(gòu)架序列側(cè)面是所述CDR序列。例如，所述位點(diǎn)-特異性引物(的組合)可以是這樣的，以致擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR2序列組成；和/或(ii)包括包含CDR2序列的免疫球蛋白片段；禾口/或(m)包括CDR2序列但所述CDR2序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；在該情形中，所述位點(diǎn)-特異性引物可以特異于分別編碼構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即，在用于擴(kuò)增的條件下)。備選地，所述位點(diǎn)4寺異性引物(的組合)可以是這樣的，以致擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(0基本由CDR3序列組成；和/或(ii)包括包含CDR3序列的免疫球蛋白片段；和/或(iii)包括CDR3序列但所述CDR3序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；在該情形中，所述位點(diǎn)-特異性引物可以特異于分別編碼構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(g卩，在用于擴(kuò)增的條件下)?？梢杂迷诒疚乃龇椒ㄖ械囊恍﹥?yōu)選但非-限制性引物在圖1中和在SEQIDNO，s:7-25中給出。這些引物(以及與SEQIDNO，s:7-25中至少一種引物具有至少80%,諸如至少90%,例如至少95%序列同一性的類(lèi)似引物)形成本發(fā)明的另一方面。本發(fā)明的另一方面包括選自SEQIDNO，s:7-25(或選自與SEQIDNO，s:7-25中至少一種引物具有至少80%，諸如至少90%,例如至少95%序列同一性的引物)的引物中的至少2種引物(即至少一種正向引物和至少一種反向引物)的合適組合在生成(即，通過(guò)擴(kuò)增和任選一種或多種本文中提及的另外的歩驟，諸如親和力成熟)至少一種本發(fā)明的氨基酸中的用途?？梢岳盟鲆?即通過(guò)擴(kuò)增，任選隨后進(jìn)行一種或多種本文中提及的其他步驟，諸如親和力成熟)生成的本發(fā)明氨基酸序列形成本發(fā)明的另外方面。當(dāng)SEQIDNO，s:7-25的引物(及其變體)適合于擴(kuò)增CDR3序列時(shí)，所述氨基酸序列優(yōu)選是CDR3序列。而且，當(dāng)使用SEQIDNO's:7-25的引物(或其變體)時(shí)，-擴(kuò)增后獲得的氨基酸序列通常在CDR3序列的兩端包含旁側(cè)序列(見(jiàn)以下實(shí)施例)。然而，本發(fā)明的這個(gè)方面還包括用SEQIDNO's:7-25的引物(或其變體)獲得的不具有所述旁側(cè)序列，或具有一種或多種其他旁側(cè)序列(如本文中進(jìn)一步所述)的CDR3序列。所述氨基酸序列(即，包括具有或不具有旁側(cè)序列的CDR3)可以進(jìn)一步在如本文中所述，且優(yōu)選與按照本文中所述的優(yōu)選方面相一致。例如，所述氨基酸序列可以處于限制或非-限制形式；和/或可以是這樣的以致它們能夠以限制形式、以非-限制形式，和優(yōu)選以限制和非-限制兩種形式結(jié)合(如本文中所述)于血清清蛋白，且具體地人血清清蛋白。具體地，所述氨基酸序列(或包括至少一種所述氨基酸序列的本發(fā)明化合物，如本文中進(jìn)一步所述)優(yōu)選是這樣的，以致它們可以結(jié)合于血清清蛋白，且具體地，人血清清蛋白-具有解離常數(shù)(KD)為10久10—12摩爾/升或更小，和優(yōu)選10—7-10—12摩爾/升或更小和更優(yōu)選10—8-10'12摩爾/升(即，具有締合常數(shù)(KA)為105-1012升/摩爾或更大，和優(yōu)選107-1012升/摩爾或更大和更優(yōu)選108-1012升膽爾)；-具有締合率為io2M"s"-約107M-V1，優(yōu)選103M-V1-107M.V1,更優(yōu)選104NfV-107ivrV1,諸如105M-'s"-107和/或-具有解離率為ls—'(t1/2=0.69s)-l(T6s'1(提供具有多日的t1/2的接近不可逆的復(fù)合物)，優(yōu)選10'23—1-10、—1,更優(yōu)選10—3s丄10-4s",諸如10-4s"-1(T6s";包括一種或多種以上氨基酸序列的本發(fā)明化合物形成本發(fā)明另外的具體方面，且所述本發(fā)明的化合物可以如本文中進(jìn)一步所述(且優(yōu)選與本文中所述的關(guān)于本發(fā)明化合物的優(yōu)選方面相一致)。本發(fā)明的其他方面包括本發(fā)明的方法(其可以如本文中進(jìn)一步所述)，其中使用選自SEQIDNO's:7-25的引物(或選自與SEQIDNO，s:7-25的至少一個(gè)引物具有至少80%,諸如至少90%，例如至少95%序列同一性的引物)的至少2種引物的合適組合(即至少一個(gè)正向引物和至少一個(gè)反向引物)。在另一方面，本發(fā)明涉及能夠通過(guò)包括本發(fā)明中所述方法之一的步驟(且特別地，本文中所述的優(yōu)選方法之一)以及隨后的親和力成熟(的至少一個(gè)步驟)(即，用于改善關(guān)于血清蛋白，具體地血清清蛋白，和更具體地人血清清蛋白親和力)的方法獲得的(或己經(jīng)獲得的)氨基酸序列。所述親和力成熟可以以任何本身己知的蛋白質(zhì)或多肽親和力成熟方式執(zhí)行，且合適的方法和技術(shù)是技術(shù)人員基于本文中的內(nèi)容應(yīng)該清楚的。優(yōu)選地，所述本發(fā)明的親和力-成熟的氨基酸序列對(duì)相關(guān)血清蛋白(諸如血清清蛋白，和更具體地人血清清蛋白)具有親和力，所述親和力是作為親和力成熟步驟起始序列使用的序列的親和力(即，如通過(guò)本發(fā)明中所述的方法之一獲得的)的至少10倍或更高,諸如100倍或更高，或甚至1000倍或10000倍或更高。所述本發(fā)明的親和力-成熟氨基酸序列可以進(jìn)一步如本文中所述，且優(yōu)選與本文中所述的優(yōu)選方面相一致。例如，所述氨基酸序列可以處于限制或非-限制形式；和/或可以是這樣的，以致它們能夠以限制形式、以非-限制形式，和優(yōu)選以限制和非-限制兩種形式結(jié)合(如本文中所述)于血清清蛋白，且具體地，人血清清蛋白。具體地，所述氨基酸序列(或包括至少一種所述氨基酸序列的本發(fā)明化合物，如本文中進(jìn)一步所述)優(yōu)選是這樣的，以致它們可以結(jié)合于血清清蛋白，且具體地，人血清清蛋白:..-具有解離常數(shù)(KD)為10-5-10"2摩爾/升或更小，和優(yōu)選10:10"2摩爾/升或更小和更優(yōu)選10—8-10"2摩爾/升(即，具有締合常數(shù)(KA)為105-1012升/摩爾或更大，和優(yōu)選107-1012升/摩爾或更大和更優(yōu)選108-1012升/摩爾)；_具有締合率為io2ivrV'-約io7JvrV1,優(yōu)選io3mV'-io7nt's-1,更優(yōu)選104m"s"-107m.V',諸如io5mV1-107m-V;禾口/或-具有解離率為Is'1(t1/2=0.69s)-l(T6s"(提供具有多日的t1/2的接近不可逆的復(fù)合物)，優(yōu)選10—V-10—、—'，更優(yōu)選10—3S-'-10-4s",諸如10-4s人10-6s";包括一種或多種以上氨基酸序列的本發(fā)明化合物形成本發(fā)明另外的具體方面，且所述本發(fā)明的化合物可以如本文中進(jìn)一步所述(且優(yōu)選與本文中所述的關(guān)于本發(fā)明化合物的優(yōu)選方面相一致)。在另一方面，本發(fā)明涉及能夠結(jié)合于血清蛋白和包括至少一個(gè)(且優(yōu)選僅一個(gè))二硫鍵的氨基酸序列。所述氨基酸序列優(yōu)選具有少于90個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選少于50個(gè)氨基酸殘基，諸如約40、30或20個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。例如，按照優(yōu)選但非-限制性的方面，所述氨基酸序列包括或基本由能夠結(jié)合于側(cè)鄰2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列的血清蛋白的肽序列組成，其中每個(gè)旁側(cè)氨基酸序列包含形成二硫鍵部分的半胱氨酸殘基。在所述氨基酸序列中，所述肽序列可以具有3-30個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選5-25個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度，且所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列可以各具有l(wèi)-30個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選2-20個(gè)氨基酸殘基，諸如約5、10或15個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。而且，在所述氨基酸序列中，所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列優(yōu)選源自免疫球蛋白構(gòu)架序列和/或優(yōu)選地免疫球蛋白構(gòu)架序列的片段，其中形成二硫鍵部分的各個(gè)旁側(cè)氨基酸序列中的半胱氨酸殘基是所述免疫球蛋白構(gòu)架序列中(或在所述其片段中)天然存在的半胱氨酸殘基和/或是引入到所述免疫球蛋白構(gòu)架序列中(或在所述其片段中)的半胱氨酸殘基。這些氨基酸序列中存在的肽序列可以是合成的肽序列，利用親和力成熟技術(shù)產(chǎn)生的肽序列，或可以基本由CDR序列組成(即，如本文中進(jìn)一步所述)。而且，所述CDR序列可以源自能夠結(jié)合于血清蛋白的VH-，或Vhh-序列，且具體地，源自(單)結(jié)構(gòu)域抗體、dAb、或納米抗體⑧或其片段。而且，CDR2序列(在該情形中，2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列之一優(yōu)選源自構(gòu)架2序列和/或構(gòu)架2序列的片段，且另一個(gè)旁側(cè)氨基酸序列優(yōu)選源自構(gòu)架3序列和/或構(gòu)架3序列的片段)和CDR3序列(在該情形中，2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列之一優(yōu)選源自構(gòu)架3序列和/或構(gòu)架3序列的片段，且另一個(gè)旁側(cè)氨基酸序列優(yōu)選源自構(gòu)架4序列和/或構(gòu)架4序列的片段)是特別優(yōu)選的。此外，所述氨基酸序列優(yōu)選可以以不(顯著)縮短血清蛋白分子半衰期的方式結(jié)合于血清蛋白。而且，此外，所述氨基酸序列優(yōu)選可以結(jié)合于來(lái)自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原或其片段組成的組的血清蛋白；且具體地，結(jié)合于血清清蛋白或其片段；和更具體地結(jié)合于人血清清蛋白或其片段。當(dāng)氨基酸序列可以結(jié)合于(人)血清清蛋白時(shí)，其優(yōu)選能夠結(jié)合于不涉及血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的(人)血清清蛋白上的氨基酸殘基；和/或結(jié)合于(人)血清清蛋白上不形成血清清蛋白結(jié)構(gòu)域III的部分的氨基酸殘基。而且，所述至少一種治療部分優(yōu)選包括或基本由氨基酸序列，且具體地免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段(例如，抗體或其抗原-結(jié)合片段)，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段(例如，V『結(jié)構(gòu)域、Vl-結(jié)構(gòu)域、VHH-結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段)；或包括所述氨基酸序列的蛋白47質(zhì)或多肽(例如，scFv構(gòu)建體)；和更具體地(單)結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"、或納米抗體⑧組成。本發(fā)明還涉及包括至少一種所述氨基酸序列和至少一種治療部分的化合物或構(gòu)建體。此外，所述至少一種氨基酸序列可以直接連接于所述至少一種治療部分或可以通過(guò)一種或多種合適的接頭或間隔區(qū)連接于所述至少一種治療部分。當(dāng)所述至少一種治療部分優(yōu)選包括或基本由氨基酸序列組成時(shí)，接頭或間隔區(qū)也優(yōu)選包括或基本由氨基酸序列組成，這樣由此生成的化合物或構(gòu)建體包括或基本由(融合)蛋白或(融合)多肽組成(即，在本發(fā)明的各個(gè)氨基酸序列中具有一個(gè)二硫鍵)。本發(fā)明還涉及核苷酸序列或核酸，所述核苷酸序列或核酸編碼具有與本發(fā)明氨基酸序列相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列(即，具有能夠形成二硫鍵的2個(gè)半胱氨酸殘基，但不具有二硫鍵本身)或編碼具有與本發(fā)明多肽相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列(即，具有能夠形成二硫鍵的2個(gè)半胱氨酸殘基，但不具有二硫鍵本身)。本發(fā)明還涉及宿主或宿主細(xì)胞，所述宿主或宿主細(xì)胞包含所述核苷酸序列或核酸和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))具有與本發(fā)明氨基酸序列相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列(即，具有能夠形成二硫鍵的2個(gè)半胱氨酸殘基，但不具有二硫鍵本身)或具有與本發(fā)明多肽相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列(即，具有能夠形成二硫鍵的2個(gè)半胱氨酸殘基，但不具有二硫鍵本身)。本發(fā)明還涉及用于制備本發(fā)明所需氨基酸序列化合物或構(gòu)建體(即，包括至少一個(gè)如本文中所述的二硫鍵)的方法，其包括至少下列步驟a)提供具有與本發(fā)明所需氨基酸序列相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列(即，具有能夠形成二硫鍵的2個(gè)半胱氨酸殘基，但不具有二硫鍵本身)或具有與本發(fā)明所需多肽相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列(即，具有能夠形成二硫鍵的2個(gè)半胱氨酸殘基，但不具有二硫鍵本身)；和b)在所述氨基酸序列中形成二硫鍵，從而分別提供本發(fā)明所需氨基酸序列或本發(fā)明所需化合物或構(gòu)建體。具體地，當(dāng)所述所需的化合物或構(gòu)建體是本發(fā)明的多肽時(shí)，所述方法可以至少包括下列步驟-酸序列或核酸編碼具有與本發(fā)明所需氨基酸序列相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列(即，具有能夠形成二硫鍵的2個(gè)半胱氨酸殘基，但不具有二硫鍵本身)，或編碼具有與本發(fā)明所需多肽相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列(即，具有能夠形成二硫鍵的2個(gè)半胱氨酸殘基，但不具有二硫鍵本身)，從而分別提供具有與到138(to138)的本發(fā)明所需氨基酸序列相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列或具有與本發(fā)明所需多肽相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列；和任選地，還包括b)分離步驟b)中獲得的氨基酸序列；和c)在步驟a)中獲得的氨基酸序列中或，當(dāng)執(zhí)行步驟b)時(shí)，在步驟b)中獲得的氨基酸序列中分別形成二硫鍵，從而分別提供本發(fā)明的所需氨基酸序列或本發(fā)明的所需化合物或構(gòu)建體。本發(fā)明還涉及通過(guò)任意以上方法獲得的氨基酸序列、化合物或構(gòu)建體。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括至少一種如本文中所述的氨基酸序列，至少一種如本文中所述的化合物或構(gòu)建體，或至少一種如本文中所述的核苷酸序列；和任選地，至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。本發(fā)明還包括一些其他用于制備本文中所述的構(gòu)建體和化合物的方法，其通常包括使至少一種本發(fā)明的氨基酸序列，任選地通過(guò)一種或多種合適接頭或間隔區(qū)，連接于至少一種治療部分的步驟。這可以以任何本身己知的合適方式，例如根據(jù)使用的接頭(如果有)執(zhí)行，且可以例如包括本領(lǐng)域中本身已知的化學(xué)連接技術(shù)，例如通過(guò)形成一個(gè)或多個(gè)共價(jià)鍵。一種或多種本發(fā)明的氨基酸序列和一種或多種治療部分可以如本文中進(jìn)一步所述。此外，一種或多種本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選包括如本文中所述的二硫鍵。本發(fā)明還涉及通過(guò)任意以上方法獲得的化合物或構(gòu)建體；且還涉及包括至少一種所述化合物或構(gòu)建體且任選至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。發(fā)明詳述在本說(shuō)明書(shū)中，實(shí)施例和權(quán)利要求中a)除非另外指示或定義，所有使用的術(shù)語(yǔ)具有它們?cè)诒绢I(lǐng)域中的普通含義，技術(shù)人員應(yīng)該對(duì)此很清楚。參考例如標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)，諸如Sambrook等,"分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)"("MolecularCloning:ALaboratoryManual")(第2版)，巻1-3,冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)(1989);F.Ausubel等，編輯，"當(dāng)前分子生物學(xué)方案"("Currentprotocolsinmolecularbiology"),GreenPublishing禾口WileyInterscience,纟丑約(1987);Lewin,"基因II"("GenesII"),JohnWiley&Sons,紐約，N.Y.,(1985);Old等.，"基因操作原理遺傳工程入門(mén)"("PrinciplesofGeneManipulation:AnIntroductiontoGeneticEngineering"),第2版,力口禾U福尼亞大學(xué)出版社(UniversityofCaliforniaPress),伯克利,CA(1981);Roitt等.，"免疫學(xué)"("Immunology")(第6版)，Mosby/Elsevier,愛(ài)丁堡(2001);Roitt等.，Roitt基本免疫學(xué)(Roitt，sEssentialImmunology)，第10版，BlackwellPublishing,UK(2001);和Janeway等.，"免疫生物學(xué)"("Immunobiology")(第6版)，GarlandSciencePublishing/ChurchillLivingstone,紐約(2005),以及本文中引用的一般
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；b)除非另外指示，術(shù)語(yǔ)"免疫球蛋白序列"-無(wú)論其在本文中用于指重鏈抗體還是指常規(guī)4-鏈抗體-均作為包括全長(zhǎng)抗體、其各條鏈、以及其所有部分、結(jié)構(gòu)域或片段(包括但不限于，抗原-結(jié)合結(jié)構(gòu)域或片段，諸如分別地，VHH結(jié)構(gòu)域或VH/V^結(jié)構(gòu)域)的一般術(shù)語(yǔ)使用。另外，術(shù)語(yǔ)"序列"用于本文中(例如，在如"免疫球蛋白序列"、"抗體序列"、"可變結(jié)構(gòu)域序列"、"VHH序歹lJ"或"蛋白質(zhì)序列"中)時(shí)，應(yīng)該通常理解為包括相應(yīng)的氨基酸序列以及編碼所述氨基酸序列的核酸序列或核苷酸序列，除非上下文需要更有限的解釋?zhuān)籧)如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，除非另外指示，可以且已經(jīng)以本身已知的方式執(zhí)行沒(méi)有特別詳細(xì)描述的所有方法、步驟、技術(shù)和操作。還參考例如標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)和本文中提到的一般
背景技術(shù)：
，和其中引用的其它參考；以及例如以下綜述Presta,現(xiàn)代藥物遞送綜述(Adv.DrugDeliv.Rev.)2006，58(5-6):640-56;Levin和Weiss,分子生物系統(tǒng)(Mol.Biosyst.)2006,2(1):49-57;Irving等，免疫學(xué)方法雜志(J.Immunol.Methods)，2001,248(1-2),31-45;Schmitz等，胎盤(pán)(Placenta),2000,21附錄A，SI06-12,Gonzales等,腫瘤生物學(xué)(TumourBiol.),2005,26(1),31-43，其描述蛋白質(zhì)工程技術(shù)，諸如親和力成熟和其他用于改進(jìn)蛋白質(zhì)諸如免疫球蛋白特異性和其他需要的性質(zhì)的技術(shù)。d)氨基酸殘基按照標(biāo)準(zhǔn)三字母或單字母氨基酸密碼顯示，如表A-2中所提及；表A-2:單字母和三字母氨基酸密碼<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>注意:_(1)有時(shí)也認(rèn)為是極性不帶電的氨基酸。'(2)有時(shí)也認(rèn)為是非極性不帶電的氨基酸。(3)如對(duì)技術(shù)人員清楚地，該表中指出的氨基酸殘基在pH6.0-7.0時(shí)帶電或不帶電的事實(shí)不以任何方式反映所述氨基酸殘基在低于6.0的pH和/或在高于7.0的pH可能具有的電荷；如對(duì)技術(shù)人員清楚地，該表中提及的氨基酸殘基在所述更高或更低的pH時(shí)，可以是帶電的和/或不帶電。(4)如在本領(lǐng)域中已知，His殘基的電荷很大程度上依賴(lài)于pH甚至微小的變化，但是His殘基可以通常被認(rèn)為在pH約6.5時(shí)是基本不帶電的。_e)為了比較兩個(gè)或更多核苷酸序列的目的，第一核苷酸序列和第二核苷酸序列間"序列同一性"的百分比可以通過(guò)[第一核苷酸序列中與第二核苷酸序列中相應(yīng)位置處的核苷酸相同的核苷酸的數(shù)量]除以[第一核苷酸序列中核苷酸總數(shù)]并乘以[100%]來(lái)計(jì)算，其中第二核苷酸序列中的每個(gè)核苷酸缺失，插入，置換或添加-與第一核苷酸序列相比4皮認(rèn)為是在單核苷酸(位置)的差別。備選地，兩個(gè)或更多核苷酸序列間序列同一性程度可以利用已知的用于序列匹配的計(jì)算機(jī)運(yùn)算法則諸如NCBIBlastv2.0，以及利用標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置而計(jì)算。一些其他的用于確定序列同一性程度的技術(shù)，計(jì)算機(jī)運(yùn)算法則和設(shè)置例如記述在WO04/037999,EP0967284,EP1085089,WO00/55318,WO00脂72，WO98/49185和GB2357768-A中。通常，為了依照上文中所略述的計(jì)算方法確定兩個(gè)核苷酸序列間的"序列同一性"百分比的目的，將具有最大核苷酸數(shù)量的核苷酸序列取作"第一"核苷酸序列，且將另一條核苷酸序列取作"第二"核苷酸序列；f)為了比較兩個(gè)或更多氨基酸序列的目的，第一氨基酸序列和第二氨基酸序列間"序列同一性"(也稱(chēng)為"氨基酸同一性")的百分比可以通過(guò)[第一氨基酸序列中與第二氨基酸序列中相應(yīng)位置處的氨基酸殘基相同的氨基酸殘基的數(shù)量]除以[第一氨基酸序列中氨基酸殘基總數(shù)]并乘以[100%]來(lái)計(jì)算，其中第二氨基酸序列中的每個(gè)氨基酸殘基缺失，插入，置換或添加-與第一氨基酸序列相比4皮認(rèn)為是在單氨基酸殘基(位置)的差別，即作為本文所定義的"氨基酸區(qū)別"。備選地，兩個(gè)氨基酸序列間序列同一性的程度可以利用已知的計(jì)算機(jī)運(yùn)算法則，諸如以上提及的用于為核苷酸序列確定序列同一性程度的那些，以及也利用標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置而計(jì)算。通常，為了確定依照上文中所略述的計(jì)算方法的兩個(gè)氨基酸序列間的"序列同一性"百分比的目的，將具有最大氨基酸殘基數(shù)量的氨基酸序列取作"第一"氨基酸序列，且將另一條氨基酸序列取作"第二"氨基酸序而且，在確定兩個(gè)氨基酸序列間序列同一性程度中，技術(shù)人員可以考慮所謂的"保守"氨基酸置換，所述"保守"氨基酸置換可以通常被描述為這樣的氨基酸置換，其中氨基酸殘基被另一個(gè)具有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)且其對(duì)多肽的功能，活性，或其他生物特性具有很小或基本無(wú)影響的氨基酸殘基替換。所述保守氨基酸置換在本領(lǐng)域中眾所周知，例如來(lái)自WO04/037999,GB-A-2357768,WO98/49185,WO00/46383和WO01/09300;并且可以基于來(lái)自WO04/037999和W098/49185以及來(lái)自其中所引用的其他參考文獻(xiàn)的相關(guān)教導(dǎo)選擇所述置換(優(yōu)選)的類(lèi)型和/或組合。所述保守的置換優(yōu)選地是這樣的置換，其中下列組(a)-(e)中的一個(gè)氨基酸被相同組中的另一個(gè)氨基酸殘基置換(a)小脂肪族，非極性或稍微極性的殘基Ala,Ser,Thr，Pro和Gly;(b)極性，帶負(fù)電的殘基和它們(不帶電的)酰胺Asp，Asn,Glu和Gln;(c)極性，帶正電的殘基His,Arg和Lys;(d)大脂肪族，非極性殘基Met,Leu,lie,Val和Cys;和(e)芳香族殘基Phe,Tyr禾口Trp。特別優(yōu)選的保守置換如下Ala變?yōu)镚ly或變?yōu)镾er;Arg變?yōu)長(zhǎng)ys;Asn變?yōu)镚in或變?yōu)镠is;Asp變?yōu)镚lu;Cys變?yōu)镾er;Gin變?yōu)锳sn;Glu變?yōu)锳sp;Gly變?yōu)锳la或變?yōu)镻ro;His變?yōu)锳sn或變?yōu)镚in;lie變?yōu)長(zhǎng)eu或變?yōu)閂al;Leu變?yōu)閘ie或變?yōu)閂al;Lys變?yōu)锳rg,變?yōu)镚in或變?yōu)镚lu;Met變?yōu)長(zhǎng)eu，變?yōu)門(mén)yr或變?yōu)閘ie;Phe變?yōu)镸et,變?yōu)長(zhǎng)eu或變?yōu)門(mén)yr;Ser變?yōu)門(mén)hr;Thr變?yōu)镾er;Trp變?yōu)門(mén)yr;Tyr變?yōu)門(mén)rp;禾口/或Phe變?yōu)閂al,變?yōu)閘ie或變?yōu)閼?yīng)用于本文所述多肽的任何氨基酸替換還可以基于由Schulz等，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的原則(PrinciplesofProteinStructure),Springer-Verlag,1978揭示的不同物種同源蛋白質(zhì)間氨基酸變異頻率的分析，基于由Chou和Fasman,生物化學(xué)(Biochemistry)13:211,1974和酶學(xué)進(jìn)展(Adv.Enzymol.),47:45-149,1978揭示的結(jié)構(gòu)形成潛力分析，和基于由Eisenberg等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)刊(proc.Nad.AcadSci.USA)81:140-144,1984;Kyte&Doolittle;分子生物學(xué)雜志(JMolec.Biol.)157:105-132,1981,和Goldman等,生物物理學(xué)和化學(xué)年度綜述(Ann.Rev.Biophys,Chem.)15:321-353,1986揭示的蛋白質(zhì)中疏水性模式的分析進(jìn)行，將其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。在本文的敘述和以上引用的一般
背景技術(shù)：
中給出了納米抗體一級(jí)結(jié)構(gòu)，次級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的信息。而且，為了這個(gè)目的，例如由Desmyter等，自然結(jié)構(gòu)生物學(xué)(NatureStructuralBiology),巻3,9,803(1996);Spinelli等，自然結(jié)構(gòu)生物學(xué)(NaturalStructuralBiology)(1996);3，752-757;和Decanniere等，結(jié)構(gòu)(Structure),巻7,4,361(1999)給出了來(lái)自美洲鴕(llama)的VHH結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu)。進(jìn)一步關(guān)于一些在常規(guī)VH結(jié)構(gòu)域中形成Vh/V^界面的氨基酸殘基和關(guān)于駱駝化(camdize)這些位置置換的潛力的信息可以見(jiàn)于以上引用的現(xiàn)有技術(shù)中。g)如果氨基酸序列和核酸序列在其全長(zhǎng)范圍內(nèi)具有100%序列同一性(如本文定義)，則將它們稱(chēng)為"完全地相同"；h)當(dāng)比較兩個(gè)氨基酸序列時(shí)，術(shù)語(yǔ)"氨基酸區(qū)別"指與第二序列相比，第一序列位置上單個(gè)氨基酸殘基的插入，缺失或置換；可以理解兩個(gè)氨基酸序列可以含有一個(gè)，兩個(gè)或多個(gè)所述的氨基酸區(qū)別；i)當(dāng)將核苷酸序列或氨基酸序列分別記述為"包括"另一種核苷酸序列或氨基酸序列，或"基本由"另一種核苷酸序列或氨基酸序列"組成"時(shí)，其可以意味著將后者核苷酸序列或氨基酸序列分別引入了第一-提及的核苷酸序列或氨基酸序列中，但是更通常地，其通常意指第一-提及的核苷酸序列或氨基酸序列在其序列中分別具有一段分別與后者序列相同的核苷酸序列或氨基酸序列的核苷酸或氨基酸殘基序列，這與所述第一-提及的序列實(shí)際上是如何生成或獲得的(其可以例如通過(guò)本文中所述的任何合適方法)無(wú)關(guān)。通過(guò)非-限制性實(shí)例，當(dāng)將本發(fā)明的納米抗體記述為包括CDR序列時(shí)，這意味著將所述CDR序列引入到本發(fā)明的納米抗體中，但更通常地，其通常意指本發(fā)明的納米抗體在其序列中包含一段與所述CDR序列相同的氨基酸序列的氨基酸殘基序列，這與所述本發(fā)明的納米抗體是如何生成或獲得的無(wú)關(guān)。還應(yīng)該注意到當(dāng)所述后者氨基酸序列具有特定生物學(xué)或結(jié)構(gòu)功能時(shí)，其優(yōu)選具有所述第一-提及的氨基酸序列中的基本相同、相似或等價(jià)的生物學(xué)或結(jié)構(gòu)功能(換言之，所述第一-提及的氨基酸序列優(yōu)選是這樣的，即所述后者序列能夠執(zhí)行基本相同、相似或等價(jià)生物學(xué)或結(jié)構(gòu)功能)。例如，當(dāng)將本發(fā)明的納米抗體記述為分別包括CDR序列或構(gòu)架序列時(shí)，所述CDR序列和構(gòu)架優(yōu)選地能夠在所述納米抗體中分別起CDR序列或構(gòu)架序列的作用。而且，當(dāng)將核苷酸序列記述為包括另一種核苷酸序列時(shí)，第一-提及的核苷酸序列優(yōu)選是這樣的，即當(dāng)將其表達(dá)為表達(dá)產(chǎn)物(例如多肽)中時(shí)，由后者核苷酸序列編碼的氨基酸序列形成所述表達(dá)產(chǎn)物的一部分(換言之，即后者核苷酸序列與第一-提及的，較大的核苷酸序列符合相同的閱讀框)。j)認(rèn)為核酸序列或氨基酸序列是"(處于)基本分離的(形式)"-例如，與它的天然生物來(lái)源和/或獲得它的反應(yīng)培養(yǎng)基或培養(yǎng)基相比較-當(dāng)將它與至少一種通常在該來(lái)源或培養(yǎng)基中與它締合的其他成分，如另一種核酸，另一種蛋白質(zhì)/多肽，另一種生物成分或高分子或至少一種污染物，雜質(zhì)或次要成分分離時(shí)。特別地，當(dāng)將核酸序列或氨基酸序列純化至少2倍，特別地至少10倍，更特別地至少100倍，和高達(dá)1000倍或更高時(shí)，認(rèn)為它們是"基本分離的"。如利用合適的技術(shù)，如合適的層析技術(shù)，如聚丙烯酰胺凝膠電泳確定地，"處于基本分離形式的"核酸序列或氨基酸序列優(yōu)選地是基本同源的；k)術(shù)語(yǔ)"結(jié)構(gòu)域"用于本文時(shí)，通常指氨基酸序列(諸如抗體鏈，且具體地指重鏈抗體的球狀區(qū)域)的球狀區(qū)域，或指基本由所述球狀區(qū)域組成的多肽。通常，所述結(jié)構(gòu)域包括穩(wěn)定的肽環(huán)(例如，3或4個(gè)肽環(huán))，例如，作為片層或通過(guò)二硫鍵穩(wěn)定的。術(shù)語(yǔ)"結(jié)合結(jié)構(gòu)域"指直接針對(duì)抗原決定子(如本文中定義)的這樣的結(jié)構(gòu)域。1)術(shù)語(yǔ)"抗原決定子"指由抗原結(jié)合分子(諸如本發(fā)明的納米抗體或55多肽)，且更具體地由所述分子的抗原結(jié)合位點(diǎn)識(shí)別的抗原上的表位。術(shù)語(yǔ)"抗原決定子"和"表位"還可以在本文中交替使用。m)可以(特異性)結(jié)合于特定抗原決定子，表位，抗原或蛋白質(zhì)(或其至少一個(gè)部分、片段或表位)，對(duì)其具有親和力和/或?qū)ζ渚哂刑禺愋缘陌被嵝蛄?如本發(fā)明的納米抗體，抗體，多肽，或通常地抗原結(jié)合蛋白或多肽或其片段)稱(chēng)為"針對(duì)(against)"或"針對(duì)(directedagainst)"所述抗原決定子，表位，抗原或蛋白質(zhì)。n)術(shù)語(yǔ)"特異性"指特定的抗原結(jié)合分子或抗原結(jié)合蛋白(如本發(fā)明的納米抗體或多肽)分子可以結(jié)合的不同類(lèi)型抗原或抗原決定子的數(shù)量?？梢曰谟H和力(affinity)和/或抗體親抗源性(avidity)確定抗原結(jié)合蛋白的特異性。由抗原與抗原結(jié)合蛋白解離的平衡常數(shù)(kd)表示的親和力是抗原決定子和抗原結(jié)合蛋白上的抗原結(jié)合位點(diǎn)間結(jié)合強(qiáng)度的測(cè)量:kd值越小，抗原決定子和抗原結(jié)合分子間的結(jié)合強(qiáng)度越強(qiáng)(備選地，親和力還可以表達(dá)為親和力常數(shù)(Ka)，即1/KD)。如對(duì)技術(shù)人員清楚地(例如基于本文進(jìn)一步的公開(kāi)內(nèi)容)，依賴(lài)于目的的特異性抗原，可以以本身己知的方式確定親和力?？贵w親抗源性是抗原結(jié)合分子(如本發(fā)明的納米抗體或多肽)和相關(guān)抗原間結(jié)合強(qiáng)度的測(cè)量。抗體親抗源性涉及抗原決定子和其在抗原結(jié)合分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)間的親和力，以及抗原結(jié)合分子上存在的相關(guān)結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)量。典型地，抗原結(jié)合蛋白(如本發(fā)明的氨基酸序列、納米抗體和/或多肽)以10義10—12摩爾/升或更低，和優(yōu)選地10-7-10—12摩爾/升或更低，和更優(yōu)選地10義10"摩爾/升的解離常數(shù)(kd)(即，以105-1012升/摩爾或更大，和優(yōu)選107-1012升/摩爾或更大和更優(yōu)選108-1012升/摩爾的締合常數(shù)(ka))結(jié)合于其抗原。通常認(rèn)為任何高于104摩爾/升的1^值(或任何低于1(/m"升/摩爾的ka值)表示非特異性結(jié)合。優(yōu)選地，本發(fā)明的單價(jià)免疫球蛋白序列以低于500nM,優(yōu)選地低于200nM，更優(yōu)選地低于10nM，諸如低于500pM的親和力結(jié)合于所需血清蛋白?？乖Y(jié)合蛋白對(duì)抗原或抗原決定子的特異性結(jié)合可以以任何合適的本身已知方式和其在本領(lǐng)域中本身已知的不同變體確定，所述方式包括例如，斯卡查德分析(Scatchardanalysis)和/或競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定諸如放射性免疫測(cè)定(RIA)，酶免疫測(cè)定(EIA)和夾心式競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定(sandwichcompetitionassays),以及本文中提及的其他技術(shù)。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，解離常數(shù)可以是實(shí)際或表觀解離常數(shù)。用于確定解離常數(shù)的方法應(yīng)該是技術(shù)人員清楚的，并且例如，包括本文中提到的技術(shù)。在這個(gè)方面，還應(yīng)該清楚的是，可能不能測(cè)量大于10—4摩爾/升或10—3摩爾/升(例如，io-2摩爾/升)的解離常數(shù)。任選地，如技術(shù)人員也應(yīng)該清楚地，可以基于(實(shí)際或表觀)締合常數(shù)(KA)，根據(jù)失系[Kd=1/KA]，計(jì)算(實(shí)際或表觀)解離常數(shù)。親和力表示分子相互作用的強(qiáng)度或穩(wěn)定性。通常通過(guò)KD，或解離常數(shù)表示親和力，其具有單位摩爾/升(或M)。還可以將親和力表示為締合常數(shù)，KA，其等于1/KD，且具有單位(摩爾/升)—1(或M'1)。在本說(shuō)明書(shū)中，兩分子(諸如本發(fā)明的氨基酸序列、納米抗體或多肽或其預(yù)期的靶標(biāo))之間相互作用的穩(wěn)定性應(yīng)該主要以術(shù)語(yǔ)它們相互作用的Kd僮表示；這對(duì)技術(shù)人員應(yīng)該是清楚的由于通過(guò)其KD值指定分子相互作用強(qiáng)度的關(guān)系KA-1/KD也可以用于計(jì)算相應(yīng)的KA值。KD-值也在熱力學(xué)意義上表征分子相互作用強(qiáng)度，因?yàn)樗ㄟ^(guò)公知的關(guān)系DG^RT.ln(Ko)(等價(jià)地DG;RT.ln(KA))與結(jié)合自由能(DG)相關(guān)，其中R等于氣體常數(shù)，T等于絕對(duì)溫度，且ln表示自然對(duì)數(shù)。被認(rèn)為是有意義(例如特異性的)生物學(xué)相互作用的Kd典型地在l(r1GM(0.1nM)-l(r5M(10000nM)范圍內(nèi)。相互作用越強(qiáng)，其Kd越低。還可以將KD表示為復(fù)合物解離率常數(shù)(表示為k。ff)，與其締合率(表示為kon)的比(由此，K^k。ff/k。n且Kfkon/k。ff)。解離率具有單位S"(其中S是秒的SI單位符號(hào))。締合率k。n具有單位M—V1。締合率可以在102M"s"—約107M"s"之間變化，接近雙分子相互作用的擴(kuò)散-限制性締合率常數(shù)。解離率通過(guò)關(guān)系式W產(chǎn)ln(2)/koff，與給定分子相互作用的半衰期相關(guān)。解離率可以在10'6^(具有多日t^的接近不可逆復(fù)合物)一1S"(t1/2=0.69s)的范圍內(nèi)變化。兩分子之間分子相互作用的親和力可以通過(guò)不同的本身已知的技術(shù)，諸如眾所周知的表面等離子體共振(SPR)生物傳感器技術(shù)(見(jiàn)例如，Ober等，國(guó)際免疫學(xué)(Intern.Immunology),13,1551-1559,2001)測(cè)量，其中將一個(gè)分子固定在生物傳感器芯片上，并在流動(dòng)條件下使另一個(gè)分子經(jīng)過(guò)該固定的分子，從而產(chǎn)生締合率(K。n)、解離率(k^)測(cè)量值和由此的KD(或Ka)值。這可以例如使用公知的BIACORE設(shè)備執(zhí)行。技術(shù)人員還應(yīng)該清楚地，如果測(cè)量過(guò)程以某種方式影響所示分子固有的結(jié)合親和力，例如通過(guò)與在一個(gè)分子的生物傳感器上的涂層相關(guān)的人為產(chǎn)物，則測(cè)量的KD可以對(duì)應(yīng)于表觀KD。而且，如果一個(gè)分子包含多于一個(gè)關(guān)于另一個(gè)分子的識(shí)別位點(diǎn)，則可以測(cè)量表觀KD。在所述情形中，測(cè)量的親和力可能受到兩分子相互作用親和力的影響。可以用于評(píng)估親和力的另一種方法是Friguet等的2-步ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)程序(免疫學(xué)方法雜志(J.Immunol.Methods),77,305-19,1985)。該方法建立溶液相結(jié)合平衡測(cè)量法，并避免將所述分子之一吸附到支持物諸如塑料上可能涉及的人為產(chǎn)物。然而，精確測(cè)量KD可能需要大量勞動(dòng)，所以，通常確定表觀KD值來(lái)評(píng)估兩分子的結(jié)合強(qiáng)度。應(yīng)該注意到只要以一致的方式進(jìn)行所有測(cè)量(例如，保持測(cè)定條件不變)，則表觀KD測(cè)量值可以用作真實(shí)KD的近似值，且因此在本文件中，應(yīng)該認(rèn)為KD和表觀KD是同等重要或相關(guān)的。最后，應(yīng)該注意到在許多情形中，有經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)家可以判斷相對(duì)于一些參考分子來(lái)確定結(jié)合親和力是方便的。例如，為了評(píng)估分子A和B之間的結(jié)合強(qiáng)度，人們可以例如使用參考分子C，已知所述參考分子C結(jié)合于B并由熒光基團(tuán)或發(fā)色基團(tuán)或其它化學(xué)部分，諸如用于在ELISA或FACS中容易檢測(cè)(熒光激活的細(xì)胞分類(lèi))的生物素或其它形式(用于熒光檢測(cè)的熒光團(tuán)、用于光吸收檢測(cè)的發(fā)色團(tuán)、用于鏈霉抗生物素蛋白-介導(dǎo)的ELISA檢測(cè)的生物素)適當(dāng)標(biāo)記。典型地，將所述參考分子C保持為固定濃度，且A的濃度由于給定的B濃度或量而變化。作為結(jié)果，獲得對(duì)應(yīng)于A濃度的ICso值，在所述濃度時(shí)，在缺乏A的條件下，對(duì)C測(cè)量的信號(hào)減半。倘若Ko參考，參考分子的Kd，以及參考分子的總濃度c參考是己知的，則可以由下列公式KD=IC5()/(l+c參考/KD參考)獲得關(guān)于相互作用A-B的表觀K。。注意，如果c參-(Kd參考，則KD-ICso。倘若以一致的方式對(duì)進(jìn)行比較的結(jié)合物進(jìn)行ICs()測(cè)量(例如，保持c^固定)，則可以通過(guò)1。5()評(píng)估分子相互作用的強(qiáng)度或穩(wěn)定性，并且貫穿本文將該測(cè)量判定為等價(jià)于Ku或表觀KD。o)本發(fā)明氨基酸序列、化合物或多肽的半衰期通常定義為體內(nèi)，例如由于由天然機(jī)制引起的序列或化合物降解和/或序列或化合物清除或螯合，降低氨基酸序列、化合物或多肽血清濃度50%所用的時(shí)間。本發(fā)明氨基酸序列、化合物或多肽的體內(nèi)半衰期可以以任何本身己知的方式，諸如通過(guò)藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析確定。合適的技術(shù)對(duì)本領(lǐng)域中的技術(shù)人員應(yīng)該是清楚的，且可以例如通常包括下列步驟向溫血?jiǎng)游?即，向人或向其他合適的哺乳動(dòng)物，諸如小鼠、兔、大鼠、豬、狗或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，例如來(lái)自獼猴屬(Macaca)的猴(諸如，和具體地，食蟹猴(Macaca/osc/cw/a^)和/或獼猴(A/acacaww/^to))和狒狒(尸apfo適當(dāng)施用合適劑量的本發(fā)明氨基酸序列、化合物或多肽；從所述動(dòng)物收集血液樣品或其他樣品；確定本發(fā)明氨基酸序列、化合物或多肽在所述血液樣品中的水平或濃度；和從由此獲得的(一組)數(shù)據(jù)計(jì)算直到本發(fā)明的氨基酸序列、化合物或多肽的水平或濃度與給藥后初始水平相比降低了50%時(shí)的時(shí)間。參考例如以下試驗(yàn)部分，以及Dennis等，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem)277:35035-42(2002)，參考標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)，諸如Kenneth,A等藥物的化學(xué)穩(wěn)定性藥劑師手冊(cè)(ChemicalStabilityofPharmaceuticals:AHandbookforPharmacists)禾口Peters等，藥物動(dòng)力學(xué)分析實(shí)踐方案(Pharmacokineteanalysis:APracticalApproach)(1996)。還參考"藥物代謝動(dòng)力學(xué)"("Pharmacokinetics"),MGibaldi&DPerron,由MarcelDekker出版,第2修訂版(1982)。如技術(shù)人員也應(yīng)該清楚地(見(jiàn)例如WO04/003019的第6和7頁(yè)和在其中引用的其它參考文獻(xiàn))，可以利用參數(shù)諸如tl/2-a，tl/2-(3和曲線下面積(AUC)表示半衰期。在本說(shuō)明書(shū)中，"半衰期的增加"指這些參數(shù)中任一項(xiàng)，諸如這些參數(shù)中任兩項(xiàng)，或基本全部三項(xiàng)參數(shù)的增加。用于本文中時(shí)，"半衰期的增加"或"增加的半衰期"具體指在tl/2-a和域AUC或二者增加或不增加的條件下，tl/2-卩的增加。P)提供任何附圖、序列表和試驗(yàn)部分/實(shí)施例僅為了舉例說(shuō)明本發(fā)明而不要接受或詮釋為以任何方式限制本發(fā)明和/或所附權(quán)利要求的范圍，除非在本文中明確另外指出。為了一般性描述重鏈抗體及其可變結(jié)構(gòu)域，特別參考本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)，參考Muyldermans在分子生物技術(shù)綜述中的文章74(2001),277-302;以及參考下列專(zhuān)利申請(qǐng)，將其作為一般
背景技術(shù)：
提及VrijeUniversiteitBrussel的WO94/04678，WO95/04079和WO96/34103;Unilever的WO94/25591,WO99/37681，WO00/40968,WO00/43507,WO00/65057,WO01/40310,WO01/44301，EP113423l和WO02/48193;VlaamsInstituutvoorBiotechnologie(VLB)的WO97/49805，WO01/21817,WO03/035694,WO03/054016和WO03/055527;AlgonomicsN.V.和埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的WO03/050531;加拿大國(guó)家研究委員會(huì)(NationalResearchCouncilofCanada)的WO01/901卯；抗體學(xué)會(huì)(InstituteofAntibodies)的WO03/025020(=EP1433793);以及埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的WO04/041867,WO04/04〗862,WO04/041865，WO04/041863，WO04/062551，WO05/044858,WO06/40153,WO06/079372,WO06/122786,WO06/122787和WO06/122825和埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的其它公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)。還參考這些申請(qǐng)中提及的其他現(xiàn)有技術(shù)，且具體地是國(guó)際申請(qǐng)WO06/040153的第41-43頁(yè)提及的參考文獻(xiàn)列表，將該列表和參考文獻(xiàn)引入本文作為參考。按照本領(lǐng)域中使用的技術(shù)(參見(jiàn)以上參考文獻(xiàn))，在天然存在的重鏈抗體中存在的可變結(jié)構(gòu)域還應(yīng)該指'T，^V^i^'，從而將它們與常規(guī)4-鏈抗體中存在的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(在下文中稱(chēng)為"^/萄7^鍵')，和與常規(guī)4-鏈抗體中存在的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(在下文中稱(chēng)為'T,區(qū)別開(kāi)。如以上提到的現(xiàn)有技術(shù)中所提及地，VHH結(jié)構(gòu)域具有大量獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征和功能特性，其使得分離的VHH結(jié)構(gòu)域(以及基于此的納米抗體，其與天然存在的VHH結(jié)構(gòu)域共享這些結(jié)構(gòu)特征和功能特性)和包含所述Vhh結(jié)枸域的蛋白質(zhì)高度有利地用作功能抗原-結(jié)合結(jié)構(gòu)域或蛋白。本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選是哺乳動(dòng)物來(lái)源的，或源自(如本文中定義)哺乳動(dòng)物來(lái)源的氨基酸序列。例如，所述氨基酸序列可以源自產(chǎn)生重鏈抗體的哺乳動(dòng)物物種，諸如可以使用攜帶所述重鏈抗體基因座的駱駝科動(dòng)物或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(見(jiàn)例如WO02/085945,WO04/049794，WO06/008548和Janssens等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.)2006年10月10日;103(41):15130-5)。備選地，本發(fā)明的氨基酸序列可以源自如可在鯊魚(yú)的某些物種中存在的單可變結(jié)構(gòu)域(例如，所謂的"IgNAR結(jié)構(gòu)域"，見(jiàn)例如WO05/18629)。本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選包括或基本由CDR("互補(bǔ)決定區(qū)")序列(本文中也稱(chēng)為"CDR序列")組成；所述CDR序列優(yōu)選地可以結(jié)合于血清蛋白和可以源自免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列，所述免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列是已經(jīng)產(chǎn)生的和/或針對(duì)血清蛋白，具體地，針對(duì)血清清蛋白，和更具體地針對(duì)人血清清蛋白(或針對(duì)其一部分、結(jié)構(gòu)域或片段)。按照優(yōu)選但非-限制性方面，所述CDR序列源自來(lái)自免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的CDR2序列或CDR3序列。所述免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域可以是，例如人可變結(jié)構(gòu)域、(單結(jié)構(gòu)域抗體)、dAb的、納米抗體⑧或其功能性片段。本發(fā)明還提供用于識(shí)別和生成所述肽和用于制備包括至少一種所述肽的化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白和構(gòu)建體的方法。按照優(yōu)選但非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列源自免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域。所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域的優(yōu)選實(shí)例是來(lái)自駱駝科動(dòng)物(Q7me/Wae)的Vhh結(jié)枸域。按照另一個(gè)具體但非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列包括或基本由CDR序列組成，所述CDR序列具有3-40個(gè)氨基酸范圍內(nèi)，優(yōu)選5-30個(gè)氨基酸范圍內(nèi)，更優(yōu)選6-25個(gè)氨基酸范圍內(nèi)的長(zhǎng)度；本發(fā)明氨基酸序列的長(zhǎng)度可以是(但不僅限于)例如8個(gè)氨基酸、IO個(gè)氨基酸、12個(gè)氨基酸、14個(gè)氨基酸、16個(gè)氨基酸、18個(gè)氨基酸、20個(gè)氨基酸、22個(gè)氨基酸或24個(gè)氨基酸。本發(fā)明的氨基酸序列(以及包含所述氨基酸序列的化合物，如本文中定義)優(yōu)選是這樣的，以致它們以這樣的方式與人血清清蛋白結(jié)合或否則(otherwise)締合，所述方式是當(dāng)所述氨基酸序列(或化合物)與人中的人血清清蛋白結(jié)合或否則締合時(shí)，其表現(xiàn)出血清半衰期為人中人血清清蛋白天然半衰期的至少約50%(諸如約50%-70%),優(yōu)選至少60%(諸如約60%-80%),或優(yōu)選至少70°/。(諸如約70%-90%),更優(yōu)選至少80°/。(諸如約80%-90%),或優(yōu)選至少約90%。在一個(gè)非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選與來(lái)自至少一種其他哺乳動(dòng)物物種，例如來(lái)自小鼠、兔、大鼠、或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的血清清蛋白交叉-反應(yīng)。具體地，本發(fā)明的氨基酸序列可以與來(lái)自選自由下列各項(xiàng)組成的組靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的血清清蛋白交叉-反應(yīng)來(lái)自獼猴(M"Mca)屬的猴(諸如,和具體地，食蟹猴(ikfacaca/asc/cw/an》和/或獼猴(Macacflww/aWa))和狒狒CP^/owWmtf)。而且，當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列與來(lái)自所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的血清清蛋白交叉-反應(yīng)時(shí)，其優(yōu)選是這樣的，以致當(dāng)其與所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的血清清蛋白分子結(jié)合或否則締合時(shí)，其表現(xiàn)出的血清半衰期是所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中所述血清清蛋白天然半衰期的至少約50%(諸如約50%-70%)，優(yōu)選至少約60%(諸如約60%-80%),或優(yōu)選至少約70%(諸如約70%-90%):更優(yōu)選至少約80%(諸如約80%-90%),或優(yōu)選至少約90%。通常，包括至少一種本發(fā)明氨基酸序列和至少一種治療部分的本發(fā)明化合物或多肽優(yōu)選地具有的半衰期為所述治療部分本身半衰期的至少1.5倍，優(yōu)選至少2倍，諸如至少5倍，例如至少10倍或多于20倍。例如，本發(fā)明的化合物或多肽可以具有與治療部分本身相比增長(zhǎng)多于1小時(shí)，優(yōu)選多于2小時(shí)，更優(yōu)選多于6小時(shí)，諸如多于12小時(shí)，或甚至多于24,48或72小時(shí)的半衰期。在本發(fā)明的優(yōu)選但非-限制性方面，所述本發(fā)明的化合物或多肽具有與治療部分本身相比增長(zhǎng)多于1小時(shí)，優(yōu)選多于2小時(shí)，更優(yōu)選多于6小時(shí),諸如多于12小時(shí)，或甚至多于24,48或72小時(shí)的血清半衰期。在另一個(gè)優(yōu)選但非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選是這樣的，以致它們以這樣的方式與人血清清蛋白結(jié)合或否則締合，所述方式是當(dāng)所述氨基酸序列與人血清清蛋白結(jié)合或否則締合時(shí)，所述氨基酸序列在人中表現(xiàn)出血清半衰期為至少約9天(諸如約9-14天)，優(yōu)選至少約10天(諸如約10-15天),或至少約11天(諸如約11-16天)，更優(yōu)選至少約12天(諸如約12-18天或更長(zhǎng)),或多于14天(諸如約14-19天)。本發(fā)明的氨基酸序列還優(yōu)選以本文中定義的解離常數(shù)(KD)和/或結(jié)合親和力(KA)與人血清清蛋白結(jié)合。本發(fā)明還涉及化合物，即包括至少一種本發(fā)明氨基酸序列和至少一種治療部分，諸如選自由小分子、多核苷酸、多肽或肽組成的組中至少一種部分的化合物、蛋白質(zhì)、多肽或其它構(gòu)建體，所述化合物在人中具有的半衰期是本發(fā)明氨基酸序列在人中的半衰期的至少80%，更優(yōu)選至少90%,諸如95%或更高，或與其基本相同。在該說(shuō)明書(shū)中，根據(jù)上下文需要，術(shù)語(yǔ)"序列"具體指氨基酸序列和/或核苷酸/核酸序列。當(dāng)序列處于核酸序列形式時(shí)，相應(yīng)的氨基酸序列可以通過(guò)適當(dāng)表達(dá)由所述核酸序列編碼的氨基酸序列制備。"包括"或"基本由……組成"在本說(shuō)明書(shū)中具體指本發(fā)明的氨基酸序列可以包含一種或多種另外的氨基酸序列，其在CDR序列的每一端或兩端具有例如，但不僅限于l-10個(gè)氨基酸殘基,諸如1,2，3,4,5,6,7，8，9,或10個(gè)(其不源自CDR序列)的長(zhǎng)度。這些另外的氨基酸序列可以源自構(gòu)架序列，例如在全長(zhǎng)免疫球蛋白序列中與CDR序列相鄰的構(gòu)架序列；例如，如果本發(fā)明的氨基酸序列包括或基本由源自CDR3序列的CDR序列組成，則所述另外的氨基酸序列可以源自構(gòu)架3和或構(gòu)架4區(qū)域。按照非-限制性?xún)?yōu)選實(shí)施方案，所述另外的氨基酸序列可以包括至少2個(gè)半胱氨酸殘基(即在血清蛋白結(jié)合序列的每一側(cè))，其可以或可以不通過(guò)二硫鍵相連接。例如，當(dāng)所述另外的氨基酸序列源自構(gòu)架序列時(shí)，可以合成地引入半胱氨酸殘基；備選地，可以選擇包含所述(天然存在的)半胱氨酸殘基的其他另外氨基酸殘基。當(dāng)在本說(shuō)明書(shū)中，將序列(氨基酸或核酸)具體記述為"源自"另一種序列(氨基酸或核酸)時(shí)，所需的序列(氨基酸或核酸)可以通過(guò)產(chǎn)生和/或分離相關(guān)序列和隨后分離其相關(guān)部分，或通過(guò)直接產(chǎn)生和/或分離所述其他序列的相關(guān)部分；或以本身已知方式通過(guò)這兩種方法獲得。備選地，可以確定所述其他序列的序列(氨基酸或核酸)，其后可以利用確定的序列作為起始點(diǎn)，以本身己知的方式制備所需的序列。例如，所需的氨基酸序列可以通過(guò)肽合成或通過(guò)適當(dāng)表達(dá)編碼所述氨基酸序列的核酸制備。所需核苷酸序列可以通過(guò)本身已知的核酸合成技術(shù)制備。所需序列(氨基酸或核酸)的部分、片段、變體、類(lèi)似物等可以利用本身已知的技術(shù)，諸如用限制性酶消化，適當(dāng)連接一種或多種序列，位點(diǎn)-定向的誘變，利用一種或多種引入所述突變的引物的PCR，從頭合成(氨基酸或核酸)，和/或通過(guò)所述技術(shù)的任意合適組合，或以任何其他本身已知的合適技術(shù)制備。當(dāng)在該說(shuō)明書(shū)中，將序列(氨基酸或核酸)記述為"源自"哺乳動(dòng)物(物種)時(shí)，所述序列"源自"(如本文中定義)所述哺乳動(dòng)物中天然存在的序列(氨基酸或核酸)。因此，例如，當(dāng)在本說(shuō)明書(shū)中，提到是"源自免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的CDR序列"的序列(氨基酸或核酸)時(shí)，所述序列(氨基酸或核.酸)可以具體通過(guò)分離免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域CDR序列的所述其他序列(氨基酸或核酸)或其合適部分、片段、類(lèi)似物、變體獲得。備選地，其序列(氨基酸或核酸)可以通過(guò)確定免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域CDR序列的序列(氨基酸或核酸)或其部分、片段、類(lèi)似物、變體的序列和隨后利用該序列作為設(shè)計(jì)合成或半-合成的本發(fā)明氨基酸序列起始點(diǎn)獲得，所述序列可以例如是天然存在的CDR序列的部分、片段、類(lèi)似物、變體等。在CDR序列是氨基酸序列的情形中，其可以通過(guò)技術(shù)人員已知的任何合適肽合成技術(shù)獲得；備選地，在CDR序列是核酸序列的情形中，其可以通過(guò)技術(shù)人員已知的任何合適核酸合成技術(shù)制備，并隨后被表達(dá)。當(dāng)在本說(shuō)明書(shū)中，提到"針對(duì)血清蛋白產(chǎn)生的免疫球蛋白序列"或"針對(duì)血清蛋白的免疫球蛋白序列"時(shí)，這些免疫球蛋白序列是通過(guò)將(優(yōu)選異源)血清蛋白適當(dāng)引入人或動(dòng)物的血液循環(huán)中時(shí)，由人或動(dòng)物體通過(guò)激活免疫系統(tǒng)天然生成的(即，以使得例如通過(guò)用血清蛋白適當(dāng)免疫的方法，產(chǎn)生針對(duì)血清蛋白的免疫應(yīng)答)。當(dāng)在本說(shuō)明書(shū)中，提到"結(jié)合"時(shí)，所述結(jié)合優(yōu)選是特異性結(jié)合，如技術(shù)人員通常理解地。具體地，當(dāng)如本文中所述的氨基酸序列"結(jié)合于血清蛋白"時(shí)，其優(yōu)選是這樣的，以致它結(jié)合于所述血清蛋白-具有解離常數(shù)(KD)為10-5-10—12摩爾/升或更小，和優(yōu)選10-7—10-12摩爾/升或更小和更優(yōu)選10義10—12摩爾/升(即，具有結(jié)合常數(shù)(KA)為105-1012升/摩爾或更大，和優(yōu)選107-1012升/摩爾或更大和更優(yōu)選108-1012升/摩爾)；_具有締合率為io2MTV'-約107M-V'，優(yōu)選103M-V1-107M.V1,更優(yōu)選104M.V1-107M-V1,諸如105M—V'-107禾口/或-具有解離率為Is—1(t1/2=0.69s)-10—6s—1(提供具有多日的t1/2的接近不可逆的復(fù)合物)，優(yōu)選10—2s—'-10—6s-',更優(yōu)選10—3S—'-lO—4^1,諸如10—4s—M0—6s";優(yōu)選地，本發(fā)明的單價(jià)氨基酸序列(或僅包含一種本發(fā)明氨基酸序列的多肽)優(yōu)選是這樣的以致其以低于500nM，優(yōu)選地低于200nM，更優(yōu)選地低于10nM，諸如低于500pM的親和力結(jié)合于所述血清蛋白。在另一方面，本發(fā)明提供可以作為用于連接或融合于治療化合物從而增長(zhǎng)其半衰期的小肽或肽部分使用的氨基酸序列，和包括所述肽或肽部分的構(gòu)建體和融合蛋白，它們可以以這樣的方式結(jié)合于血清蛋白，以致當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列、構(gòu)建體、或融合蛋白結(jié)合于血清蛋白分子時(shí)，所述血清蛋白分子的半衰期不被(顯著)縮短(即，與當(dāng)所述氨基酸序列、構(gòu)建體、或融合蛋白不與之結(jié)合時(shí)血清蛋白分子的半衰期相比)。在本發(fā)明的這個(gè)方面，所謂"不顯著縮短"意指血清蛋白分子的半衰期(如利用本身己知的合適技術(shù)測(cè)量的)不縮短多于50%,優(yōu)選不縮短多于30%,甚至更優(yōu)選不縮短多于10%，諸如不縮短多于5。/。，或基本完全不縮短。本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選包括或基本由源自免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列組成，所述免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域是已經(jīng)產(chǎn)生的和/或針對(duì)血清蛋白，具體地針對(duì)血清清蛋白，和更具體地針對(duì)人血清清蛋白(或針對(duì)其部分、結(jié)構(gòu)域或片段)。所述氨基酸序列可以例如包括或基本由源自免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列，諸如例如CDR1、CDR2或CDR3組成。優(yōu)選地，本發(fā)明的氨基酸序列包括或基本由CDR3序列組成。按照另一個(gè)具體但非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列可以基本記述在WO03/050531，參考以上內(nèi)容并引入本文中作為參考。所述氨基酸序列可以來(lái)源的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域可以例如是(但不僅限于)免疫球蛋白重鏈或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、(單)結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"、或納米抗體。按照特別優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明的氨基酸序列包括或基本由納米抗體⑧的CDR序列組成，所述納米抗體⑧是己經(jīng)產(chǎn)生的和/或針對(duì)血清蛋白，具體地針對(duì)血清清蛋白，和更具體地針對(duì)人血清清蛋白(或針對(duì)其部分、結(jié)構(gòu)域或片段)產(chǎn)生；更優(yōu)選地，本發(fā)明的氨基酸序列包括或基本由納米抗體⑧的CDR3序列組成，所述納米抗體⑧是己經(jīng)產(chǎn)生的和/或針對(duì)血清蛋白，具體地針對(duì)血清清蛋白，和更具體地針對(duì)人血清清蛋白(或針對(duì)其部分、結(jié)構(gòu)域或片段)。此外，按照本發(fā)明的該具體方面，本發(fā)明的氨基酸序列可以基本記述在WO03/050531中。為了進(jìn)一步描述和定義納米抗體，以及在本說(shuō)明書(shū)中使用的一些其他術(shù)語(yǔ)，還參考本文中提及的埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的申請(qǐng)以及本文中引用的其他現(xiàn)有技術(shù)。在另一方面，本發(fā)明還涉及用于生成或產(chǎn)生本發(fā)明氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)的方法。例如，當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列是CDR氨基酸序列(或其合適部分、類(lèi)似物、片段、變體)時(shí)，所述方法可以包括下列步驟a)提供CDR序列組、集合或文庫(kù)；b)篩選所述CDR序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一種結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的序列；c)分離所述能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一種結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的CDR序列。該方法可以利用本領(lǐng)域中技術(shù)人員已知的技術(shù)和/或如本文中進(jìn)一步所述地，以任何本身已知的方式執(zhí)行。例如，用于提供CDR序列文庫(kù)，用于篩選所述文庫(kù)以獲得對(duì)需要的靶標(biāo)具有親和力的序列，和用于分離結(jié)合于需要的抗原的CDR序列的方法記述在WO03/050531(埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)禾卩AlgonomicsN.V.)中。在以上方法中，所述CDR序列組、集合或文庫(kù)可以例如展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體(諸如酵母)上，諸如以促進(jìn)篩選。用于展示和篩選CDR序列(組、集合或文庫(kù))的合適方法、技術(shù)和宿主生物體，例如基于下一步的公開(kāi)內(nèi)容和本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)，對(duì)本領(lǐng)域中技術(shù)人員應(yīng)該是清楚的?；赾)中獲得的序列，所述序列的部分、類(lèi)似物、片段、變體可以，例如通過(guò)位點(diǎn)-特異性誘變(使用錯(cuò)配引物)，通過(guò)從頭核酸合成，或從頭肽合成，以本身已知的方式制備。備選地，能夠結(jié)合于血清蛋白的CDR氨基酸序列或其合適的部分、類(lèi)似物、片段、變體可以通過(guò)由本發(fā)明提供的方法生成，所述方法至少包括下列步驟a)提供免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)；b)篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一種結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的序列rc)任選地，分離所述能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一種結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列；d)利用技術(shù)人員己知的技術(shù)制備源自c)中獲得的免疫球蛋白序列的CDR序列。該方法也可以利用本領(lǐng)域中技術(shù)人員已知的技術(shù)和/或如本文中進(jìn)一步所述地，以任何本身已知的方式執(zhí)行。步驟d)可以例如通過(guò)使用合適的位點(diǎn)特異性引物，諸如(但不僅限于)由FW3('構(gòu)架3')-特異性和FW4('構(gòu)架4')-特異性引物組成的引物組合和隨后表達(dá)獲得的(擴(kuò)增的)核酸序列執(zhí)行?；赾)或d)中獲得的序列，部分、類(lèi)似物、片段、變體可以，例如通過(guò)位點(diǎn)-特異性誘變(使用錯(cuò)配引物)，通過(guò)從頭核酸合成，或從頭肽合成，以本身己知的方式制備。在該方法中，所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)可以是天然的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)；合成的或半-合成的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)；和/或進(jìn)行了親和力成熟的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)。此外，在該方法中，所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)可以是重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的組、集合或文庫(kù)。例如，所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)可以是結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體組、集合或文庫(kù)，或是能夠起結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體作用的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)。在本方法的優(yōu)選方面，所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)可以是免疫球蛋白序列的免疫組、集合或文庫(kù)，例如源自用抗原適當(dāng)免疫的哺乳動(dòng)物，所述抗原包括需要的細(xì)胞外部分、區(qū)域、結(jié)構(gòu)域、環(huán)或其他細(xì)胞外表位，從而產(chǎn)生針對(duì)需要的細(xì)胞外部分、區(qū)域、結(jié)構(gòu)域、環(huán)或其他細(xì)胞外表位的免疫應(yīng)答。在一個(gè)具體但非-限制性方面，所述免疫球蛋白序列的免疫組、集合或文庫(kù)可以源自駱駝科動(dòng)物。所述免疫球蛋白序列的免疫組、集合或文庫(kù)可以例如是重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的組、集合或文庫(kù)。在一個(gè)具體方面，所述免疫球蛋白序列組、集合或文庠是Vhh序列的組、集合或文庫(kù)。在以上方法中，所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)可以展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體(諸如酵母)上，諸如以促進(jìn)篩選。用于展示和篩選免疫球蛋白序列(組、集合或文庫(kù))的合適方法、技術(shù)和宿主生物體，例如基于下一步的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域中技術(shù)人員應(yīng)該是清楚的。還參考Hoogenboom在自然生物技術(shù)(NatureBiotechnology),23,9,1105-1116(2005)的綜述和本文中引用的其他現(xiàn)有技術(shù)。在另一方面，用于生成結(jié)合于血清蛋白的CDR氨基酸序列或其合適部分、類(lèi)似物、片段、變體的方法至少包括下列步驟a)提供表達(dá)免疫球蛋白序列的細(xì)胞的集合或樣品；b)篩選所述細(xì)胞的集合或樣品，以獲得表達(dá)能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一種結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列的細(xì)胞；c)(i)從所述細(xì)胞中分離所需的CDR序列(任選地在首先從所述細(xì)胞中分離所述免疫球蛋白序列后)；或(ii)從所述細(xì)胞中分離編碼來(lái)自所述免疫球蛋白序列的所需CDR序列的核酸序列；隨后表達(dá)來(lái)自所述免疫球蛋白序列的所需CDR序列。在按照該方面的方法中，所述細(xì)胞的集合或樣品可以例如是B-細(xì)胞集合或樣品。此外，在該方法中，所述細(xì)胞樣品可以源自用抗原適當(dāng)免疫的哺乳動(dòng)物，所述抗原包括需要的細(xì)胞外部分、區(qū)域、結(jié)構(gòu)域、環(huán)或其他胞外表位，從而產(chǎn)生針對(duì)需要的細(xì)胞外部分、區(qū)域、結(jié)構(gòu)域、環(huán)或其他細(xì)胞外表位的免疫應(yīng)答。例如，所述細(xì)胞集合或樣品可以源自適當(dāng)免疫的駱駝科動(dòng)物。如對(duì)技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，以上方法可以以任何合適的方式執(zhí)行。參考例如EP0542810,WO05/19824，WO04/051268和WO04/106377。步驟b)的篩選優(yōu)選利用流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)諸如FACS執(zhí)行。為此，參考例如Lieby等，血液(Blood),巻97,No.12，3820。如上提及地，在優(yōu)選但非-限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選源自重鏈抗體，和更優(yōu)選包括或基本由源自重鏈抗體(或其部分、片段、類(lèi)似物或變體)的CDR序列(諸如CDR3序列)組成。在該方面，用于從重鏈抗體中分離CDR序列的優(yōu)選方法至少包括下列步驟a)提供表達(dá)免疫球蛋白序列的細(xì)胞的集合或樣品；b)篩選所述細(xì)胞的集合或樣品，以獲得(i)表達(dá)能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一種結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列的細(xì)胞；禾n(ii)表達(dá)重鏈抗體的細(xì)胞，其中子步驟(0和(ii)可以基本作為單一篩選步驟或作為兩個(gè)分開(kāi)的篩選步驟以任何合適的順序執(zhí)行，從而提供至少一種表達(dá)重鏈抗體的細(xì)胞，所述重鏈抗體能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；c)(0從所述細(xì)胞中分離所需的CDR序列(任選地在首先從所述細(xì)胞中分離所述免疫球蛋白序列后)；或(ii)從所述細(xì)胞中分離編碼所需CDR序列的核酸序列；隨后表達(dá)所述CDR序列。該方法也可以利用本領(lǐng)域中技術(shù)人員已知的技術(shù)和/或如本文中進(jìn)一步所述地，以任何本身已知的方式執(zhí)行。例如，選擇、篩選和分離B-細(xì)胞或免疫球蛋白序列可以利用所謂的"納米克隆TM"("NanodoneTM")技術(shù)執(zhí)行，關(guān)于其參考埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的國(guó)際申請(qǐng)WO06/079372。在另一方面，用于生成結(jié)合于血清蛋白的CDR核酸序列的方法包括至少下列步驟a)提供編碼CDR序列的核酸序列組、集合或文庫(kù)；和b)篩選所述核酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得編碼能夠結(jié)合于血清蛋白至少一種結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的CDR序列的核酸序列；和c)分離所述核酸序列。該方法也可以以任何本身已知的方式執(zhí)行，關(guān)于其例如參考W003/050531(埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)和AlgonomicsN.V.)?；赾)中獲得的序列，部分、類(lèi)似物、片段、變體可以，例如通過(guò)位點(diǎn)-特異性誘變(使用錯(cuò)配引物)，通過(guò)從頭核酸合成，或從頭肽合成，以本身己知的方式制備。備選地，編碼本發(fā)明氨基酸序列的核酸序列(且具體地，CDR或其合適的部分、類(lèi)似物、片段、變體)可以通過(guò)由本發(fā)明提供的方法生成，所69述方法至少包括下列步驟a)提供編碼免疫球蛋白序列的核酸序列組、集合或文庫(kù)；和b)篩選所述核酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得編碼分別能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一種結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列的核酸序列；和c)分離所述核酸序列。該方法也可以以任何本身己知的方式執(zhí)行，關(guān)于其例如參考本文中提及的技術(shù)，以及參考WO03/050531。也可以表達(dá)步驟c)中獲得的核苷酸序列，從而提供本發(fā)明的氨基酸序列，或可以轉(zhuǎn)化步驟c)中獲得的核苷酸序列(例如，例如本文中引用的技術(shù)之一)，從而提供編碼本發(fā)明氨基酸序列的部分、片段、類(lèi)似物或變體的核酸序列(然后可以對(duì)其進(jìn)行表達(dá)，從而提供作為氨基酸序列的所述部分、片段、變體或類(lèi)似物)。備選地，所述核酸序列或轉(zhuǎn)化的核酸序列可以(通過(guò)合適的間隔區(qū)或接頭)連接于任何所需的核酸并隨后表達(dá)(即作為蛋白質(zhì)融合)；獲得的核酸序列可以例如(但不僅限于)連接于編碼治療部分的核酸，如本文中所述，且隨后作為多肽或蛋白構(gòu)建體或融合蛋白表達(dá)。在以上方法中，所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)可以例如展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體(諸如酵母)上，諸如以促進(jìn)篩選。用于展示和篩選免疫球蛋白序列或CDR序列的(組、集合或文庫(kù))的合適方法、技術(shù)和宿主生物體，例如基于本文進(jìn)一步的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域中技術(shù)人員應(yīng)該是清楚的。在該方法中，編碼免疫球蛋白序列或CDR序列的核酸序列組、集合或文庫(kù)可以是編碼天然免疫球蛋白序列或CDR序列組、集合或文庫(kù)的核酸序列組、集合或文庫(kù)；編碼合成或半-合成的免疫球蛋白序列或CDR序列組、集合或文庫(kù)的核酸序列組、集合或文庫(kù)；和/或編碼進(jìn)行了親和力成熟的免疫球蛋白序列或CDR序列組、集合或文庫(kù)的核酸序列組、集合或文庫(kù)。而且，在該方法中，所述核酸序列組、集合或文庫(kù)可以編碼重鏈可變結(jié)構(gòu)域(來(lái)源的CDR序列)或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(來(lái)源的CDR序列)的組、集合或文庫(kù)。例如，核酸序列組、集合或文庫(kù)可以編碼結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體(來(lái)源的CDR序列)的組、集合或文庫(kù)，或能夠起結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體功能的免疫球蛋白序列(來(lái)源的CDR序列)的組、集合或文庫(kù)。在該方法的優(yōu)選方面，核酸序列組、集合或文庫(kù)可以編碼例如源自用抗原適當(dāng)免疫的哺乳動(dòng)物的免疫球蛋白序列(來(lái)源的CDR序列)的免疫組、集合或文庫(kù)，所述抗原包括需要的細(xì)胞外部分、區(qū)域、結(jié)構(gòu)域、環(huán)或其他細(xì)胞外表位，從而產(chǎn)生針對(duì)需要的細(xì)胞外部分、區(qū)域、結(jié)構(gòu)域、環(huán)或其他細(xì)胞外表位的免疫應(yīng)答。在一個(gè)具體但非-限制性方面，所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以源自駱駝科動(dòng)物。所述核酸序列組、集合或文庫(kù)可以編碼例如重鏈可變結(jié)構(gòu)域(來(lái)源的CDR序列)或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(來(lái)源的CDR序列)的免疫組、集合或文庫(kù)。在一個(gè)具體方面，所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以編碼VHH序列(來(lái)源的CDR序列)的組、集合或文庫(kù)。在以上方法中，所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)可以展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體(諸如酵母)上，諸如以促進(jìn)篩選。用于展示和篩選編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列(組、集合或文庫(kù))的合適方法、技術(shù)和宿主生物體，例如基于進(jìn)一步的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域中技術(shù)人員應(yīng)該是清楚的。還參考Hoogenboom在自然生物技術(shù)(NatureBiotechnology),23,9，1105-1116(2005)的綜述。本發(fā)明還涉及由以上方法獲得的本發(fā)明氨基酸序列或核酸序列。本文中公開(kāi)的氨基酸序列可以以作為融合配偶體的優(yōu)勢(shì)使用，從而增加治療部分諸如蛋白質(zhì)、化合物(包括，不限于，小分子)或其他治療實(shí)體的半衰期。因此，在另一方面，本發(fā)明提供包括或基本由本文中公開(kāi)的氨基酸序列組成的多肽或蛋白構(gòu)建體。具體地，本發(fā)明提供多肽或蛋白構(gòu)建體，其包括或基本由與至少一種治療部分，任選通過(guò)一種或多種合適接頭或間隔區(qū)連接的至少一種本發(fā)明氨基酸序列組成。所述多肽或蛋白構(gòu)建體可以例如(不限于)是融合蛋白，如本文中進(jìn)一步所述。本發(fā)明還涉及多肽或蛋白構(gòu)建體或融合蛋白的治療用途和包括所述多肽或蛋白構(gòu)建體或融合蛋白的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由治療蛋白、多肽、化合物、因子或其他實(shí)體組成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療部分針對(duì)需要的抗原或靶標(biāo)，能夠結(jié)合于需要的抗原(且具體地，能夠特異性結(jié)合于需要的抗原)，和/或能夠與需要的靶標(biāo)相互作用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由治療蛋白或多肽組成。在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由免疫球蛋白或免疫球蛋白序列(包括但不限于免疫球蛋白片段)，諸如抗體或抗體片段(包括但不限于ScFv片段)組成。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由抗體可變結(jié)構(gòu)域，諸如重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域組成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，至少一種治療部分包括或基本由至少一種結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"或納米抗體⑧組成。按照該實(shí)施方案的優(yōu)選方面，本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選包括或基本由源自結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"或納米抗體⑧的CDR(諸如CDR3環(huán))組成，所以，由此產(chǎn)生的多肽或蛋白構(gòu)建體或融合蛋白是包括或基本由至少一種結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"或納米抗體⑧(或其組合)組成的多價(jià)構(gòu)建體和優(yōu)選多特異性構(gòu)建體，所述結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"或納米抗體⑧(或其組合)連接于(任選通過(guò)一種或多種合適接頭)至少一種源自結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"或納米抗體⑧的CDR(諸如CDR3環(huán))，所述多肽或蛋白構(gòu)建體或融合蛋白結(jié)合于血清蛋白。所謂"多價(jià)"化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體，在本說(shuō)明書(shū)中具體意指包括至少2個(gè)結(jié)合單位(即結(jié)合于相同或不同表位)的化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體，這2個(gè)結(jié)合單位均可以結(jié)合于相同生物學(xué)分子。所謂"二價(jià)"化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體在本說(shuō)明書(shū)中意指包括2個(gè)結(jié)合單位的化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體，所述結(jié)合單位可以結(jié)合于相同生物學(xué)分子。所謂"單價(jià)"化合物、蛋白質(zhì)或多肽在本說(shuō)明書(shū)中，意指基本由1個(gè)結(jié)合單位組成的化合物、蛋白質(zhì)或多肽，所述結(jié)合單位可以結(jié)合于生物學(xué)分子。所謂"結(jié)合單位"在本說(shuō)明書(shū)中，具體意指如本文中所述能夠結(jié)合生物學(xué)分子的任何氨基酸序列、肽、蛋白質(zhì)、多肽、構(gòu)建體、融合蛋白、化合物、因子或其他實(shí)體，諸如本發(fā)明的氨基酸序列或治療部分(均如本文中所述)。當(dāng)化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)^體包括2或更多結(jié)合單位時(shí)，所述結(jié)合單位可以任選地通過(guò)一種或多種合適的接頭彼此相連接。所謂"多特異性"化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體在本說(shuō)明書(shū)中，具體意指包括至少2個(gè)結(jié)合單位的化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體，其中至少第一結(jié)合單位可以結(jié)合于第一生物學(xué)功能分子和其中至少第二結(jié)合單位可以結(jié)合于第二生物學(xué)功能分子。所謂"雙特異性"化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體在本說(shuō)明書(shū)中，具體意指包括2個(gè)結(jié)合單位的化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體，其中第一結(jié)合單位可以結(jié)合于第一生物學(xué)功能分子和其中第二結(jié)合單位可以結(jié)合于第二生物學(xué)功能分子。在具體的實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由至少一種單價(jià)納米抗體⑧或二價(jià)、多價(jià)、雙特異性或多特異性納米抗體⑧構(gòu)建體組成。按照該實(shí)施方案，與所述治療部分相連接的本發(fā)明氨基酸序列優(yōu)選包括或基本由源自結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體或"dAb"的至少一種CDR(諸如CDR3環(huán))組成，和更優(yōu)選地包括或基本由源自納米抗體⑧的CDR(諸如CDR3環(huán))組成，所以，由此產(chǎn)生的構(gòu)建體或融合蛋白是多價(jià)構(gòu)建體或融合蛋白(如本文中定義)和優(yōu)選是多特異性構(gòu)建體或融合蛋白(如本文中定義)，其包括至少一種納米抗體⑧和源自結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體或"dAb"的至少一種CDR和更優(yōu)選地源自納米抗體⑧的至少一種CDR，所述構(gòu)建體或融合蛋白結(jié)合于血清蛋白。當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體意欲用于制藥或診斷用途時(shí)，它們優(yōu)選結(jié)合于人血清蛋白。按照一個(gè)優(yōu)選但非-限制性實(shí)施方案，本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體對(duì)人血清蛋白表現(xiàn)出比對(duì)小鼠的血清蛋白親和力更高的親和力。本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體可以與之結(jié)合的血清蛋白的非限制性實(shí)例是血清清蛋白、血清免疫球蛋白、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原；優(yōu)選地，本發(fā)明的氨基酸序列、肽、蛋白質(zhì)、多肽、構(gòu)建體、融合蛋白結(jié)合于血清清蛋白，和更優(yōu)選地人血清清蛋白。通常，本發(fā)明的蛋白或多肽構(gòu)建體或融合蛋白優(yōu)選具有是相應(yīng)治療部分本身半衰期的至少1.3倍,優(yōu)選至少2倍，諸如至少5倍，例如至少10倍或多于20倍的半衰期，所述本發(fā)明的蛋白或多肽構(gòu)建體或融合蛋白包括或基本由與至少一種治療部分(任選通過(guò)一種或多種合適的接頭或間隔區(qū))相連接的至少一種本發(fā)明氨基酸序列組成。而且，優(yōu)選地，任何所述蛋白或多肽構(gòu)建體或融合蛋白具有與相應(yīng)治療部分本身半衰期相比增長(zhǎng)多于1小時(shí)，優(yōu)選多于2小時(shí)，更優(yōu)選多于6小時(shí)，諸如多于12小時(shí)的半衰期。而且，優(yōu)選地，任何所述蛋白或多肽構(gòu)建體或融合蛋白具有多于1小時(shí)，優(yōu)選多于2小時(shí)，更優(yōu)選多于6小時(shí)，諸如多于12小時(shí)，和例如約1天、2天、l周、2周或3周，和優(yōu)選地不多于2個(gè)月的半衰期，盡管后者可能不太關(guān)鍵。而且，如上所提及地，當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列包括或基本由源自結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAbs"或優(yōu)選源自納米抗體⑧的CDR3序列組成時(shí)，可以使用它增加其它免疫球蛋白序列，諸如結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAbs"或優(yōu)選地納米抗體⑧的半衰期。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及這樣的蛋白或多肽構(gòu)建體或融合蛋白，其包括或基本由至少一種本發(fā)明的氨基酸序列和至少一種免疫球蛋白序列，諸如結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAbs"或納米抗體組成。所述免疫球蛋白序列優(yōu)選地針對(duì)需要的耙標(biāo)(其優(yōu)選地是治療革巴標(biāo))，和/或有效于或適合于治療、預(yù)防和/或診斷目的其它免疫球蛋白序列。因此，在另一方面，本發(fā)明涉及多特異性(和具體地，雙特異性)構(gòu)建體，其包括或基本由至少一種CDR序列(諸如CDR3序列)和至少一種納米抗體⑧組成，其中所述至少一種納米抗體⑧優(yōu)選地針對(duì)需要的靶標(biāo)(其優(yōu)選地是治療靶標(biāo))，和/或有效于或適合于治療、預(yù)防和/或診斷目的的其它納米抗體⑧。本發(fā)明還涉及編碼本文中所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的核苷酸序列或核酸。本發(fā)明還包括遺傳構(gòu)建體，其包括上述核苷酸序列或核酸，和一種或多種關(guān)于遺傳構(gòu)建體的本身己知的元件。所述遺傳構(gòu)建體可以處于質(zhì)?；蜉d體的形式。所述和其他遺傳構(gòu)建體是本領(lǐng)域中那些技術(shù)人員已知的。本發(fā)明還涉—及包含所述核苷酸序列或核酸，和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))本文中所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的宿主或宿主細(xì)胞。而且，所述宿主或宿主細(xì)胞是本領(lǐng)域中那些技術(shù)人員己知的。本發(fā)明通常還涉及用于制備本文中所述的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的方法，所述方法包括在這樣的條件下培養(yǎng)或維持本文中所述的宿主細(xì)胞，在所述條件下，所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生或表達(dá)如本文中所述的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體，且任選地，還包括分離由此產(chǎn)生的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體。而且，通?？梢匀绫疚闹兴龅陌２╈`克斯股份有限公司(AblynxN.V)的共同待審專(zhuān)利申請(qǐng)，諸如WO04/041862或WO06/122825中所述地執(zhí)行所述方法。本發(fā)明還包括包含該本發(fā)明氨基酸序列、化合物或多價(jià)和多特異性化合物的醫(yī)學(xué)用途和治療方法，其中所述醫(yī)學(xué)用途或方法的特征在于所述藥物適合于以人血清清蛋白天然半衰期的至少約50%的間隔施用。本發(fā)明還涉及用于延長(zhǎng)或增長(zhǎng)治療劑(即治療部分、化合物、蛋白質(zhì)或其他治療實(shí)體)的血清半衰期的方法。所述方法包括使所述治療劑與任意前述氨基酸序列相接觸，以使所述治療劑與本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或否則締合。在一些實(shí)施方案中，所述治療劑是生物學(xué)治療劑，優(yōu)選地是肽或多肽，在該情形中，接觸所述治療劑的步驟可以包括通過(guò)使所述肽或多肽與本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體相連接，而制備融合蛋白。這些方法可以進(jìn)一步包括在治療劑與本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或締合后，向受試者施用所述治療劑。在該方法中，所述治療劑的血清半衰期是治療劑本身半衰期的至少1.5倍，或與治療劑本身的半衰期相比增加至少l小時(shí)。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療劑的血清半衰期是相應(yīng)治療部分本身半衰期的至少2倍、至少5倍、至少10倍或超過(guò)20倍。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療劑的血清半衰期與相應(yīng)治療部分本身的半衰期相比，增加超過(guò)2小時(shí)，超過(guò)6小時(shí)或超過(guò)12小日寸。在另一方面，本發(fā)明涉及用于改進(jìn)治療劑的方法，所述方法使所述治療劑的需要的治療水平，在適當(dāng)施用所述治療劑以獲得所述需要的治療水平后，維持一段延長(zhǎng)的時(shí)期。所述方法包括使所述治療劑與任意前述的氨基酸序列相接觸，從而使所述治療劑與本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或以其他方式締合。在一些實(shí)施方案中，所述治療劑是生物學(xué)治療劑，優(yōu)選地是肽或多肽，在該情形中，接觸所述治療劑的步驟可以包括通過(guò)使所述肽或多肽與本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體相連接，而制備融合蛋白。這些方法可以進(jìn)一步包括在治療劑與本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或以其他方式締合后，向受試者施用該治療劑，從而在所述施用后獲得需要的治療水平。在該方法中，所述治療劑在所述施用后維持需要的治療水平的時(shí)間是治療劑本身半衰期的至少1.5倍，或與治療劑本身的半衰期相比增加至少l小時(shí)。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療劑在所述施用后維持需要的治療水平的時(shí)間是相應(yīng)治療部分本身半衰期的至少2倍、至少5倍、至少10倍或超過(guò)20倍。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療劑在所述施用后維持需要的治療水平的時(shí)間與相應(yīng)治療部分本身的半衰期相比，增加超過(guò)2小時(shí)，超過(guò)6小時(shí)或超過(guò)12小時(shí)。優(yōu)選地，增加所述治療劑在所述施用后維持需要的治療水平的時(shí)間，這樣可以以本文中關(guān)于本發(fā)明化合物定義的頻率施用所述治療劑。在另一方面中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物(如本文中定義)制備藥物的用途，所述藥物增加和/或擴(kuò)大患者血清中所述化合物或構(gòu)建體中治療水平，以致能夠以與單獨(dú)治療劑相比更低的劑量施用所述化合物或構(gòu)建體中的所述治療劑(即，以基本相同的施用頻率)。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括至少一種如本文中所述的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體，和任選地，至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。所述制劑、載體、賦形劑和稀釋劑通?？梢匀绨２╈`克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審專(zhuān)利申請(qǐng)，諸如WO04/041862或WO06/122825中所述。然而，由于本文中所述的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體具有增加的半衰期，所以?xún)?yōu)選地將它們施用到循環(huán)中。同樣地，可以以任何容許所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體進(jìn)入循環(huán)的合適方式，諸如靜脈內(nèi)、通過(guò)注射或輸注，或以任何其它合適方式(包括口服施用、經(jīng)由皮膚施藥、鼻內(nèi)施用、通過(guò)肺的施用等)施用它們。而且，還例如由WO04/041862或WO06/122825的教導(dǎo)，技術(shù)人員應(yīng)該清楚合適的施用方法和途徑。因此，在另一方面，本發(fā)明涉及用于預(yù)防和/或治療至少一種能夠通過(guò)使用如本文中所述的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體預(yù)防或治療的疾病或病癥的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用藥物有效量的本發(fā)明氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體，和/或藥物有效量的包括所述本發(fā)明氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的藥物組合物。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，能夠通過(guò)使用如本文中所述的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體預(yù)防或治療的疾病和病癥通常與能夠通過(guò)使用本發(fā)明氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體中存在的治療部分預(yù)防或治療的疾病和病癥相同。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"預(yù)防和/或治療"不僅包括預(yù)防和/或治療疾病，通常還包括預(yù)防疾病的發(fā)作，減緩或逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)程，預(yù)防或減緩一種或多種與疾病相關(guān)癥狀的發(fā)作，減輕和/或緩解一種或多種與疾病相關(guān)的癥狀，減少疾病和/或其任意相關(guān)癥狀的嚴(yán)重性和/或持續(xù)時(shí)間，和/或預(yù)防疾病和/或其任意相關(guān)癥狀嚴(yán)重性的進(jìn)一步增加，預(yù)防、降低或逆轉(zhuǎn)由疾病導(dǎo)致的任何生理學(xué)損傷，和通常任何有益于待治療患者的藥理學(xué)作用。待治療的受試者可以是任何溫血?jiǎng)游?，但是具體地是哺乳動(dòng)物，和更具體是人。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，待治療的受試者應(yīng)該具體地是患有本文中提及的疾病和病癥或處于本文中提及的疾病和病癥危險(xiǎn)的人。更具體地，本發(fā)明涉及治療方法，其中施用本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的頻率是所述哺乳動(dòng)物(即在人、人血清清蛋白)中血清清蛋白天然半衰期的至少5—0V。，優(yōu)選地至少60%,優(yōu)選地至少70%,更優(yōu)選地至少80%和最優(yōu)選地至少卯％。屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的對(duì)哺乳動(dòng)物具體施用頻率是在如上定義的所述哺乳動(dòng)物中血清清蛋白天然半衰期的至少50%，55%,60%,65%,70%，75%,80%，85%,90%,95%或至少100%。換言之，屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的具體施用頻率是每4,5,6,7,8,9,10，11,12,13,14,15,16,17，18,或19天。不限制地，上文提到的施用頻率特別適合于維持利用所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體治療的受試者血清中的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的需要的水平，任選地，在施用意欲建立所述需要的血清水平的一次或多次(起始)劑量后。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，所述需要的血清水平可以特別依賴(lài)于使用的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體和/或待治療的疾病。臨床醫(yī)生或醫(yī)師應(yīng)該能夠選擇需要的血清水平，和選擇向待治療受試者施用的劑量和/或量，從而在以本文中提到的頻率施用本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體時(shí)，在所述受試者中獲得和/或維持需要的血清水平。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于免疫治療，和具體地用于被動(dòng)免疫治療的方法，所述方法包括向患有本文中提及疾病和病癥或處于本文中提及疾病和病癥危險(xiǎn)的受試者施用藥物有效量的本發(fā)明融合蛋白或構(gòu)建體，和/或藥物有效量的包括所述本發(fā)明融合蛋白或構(gòu)建體的藥物組合物。按照適合于預(yù)防和/或治療待預(yù)防或治療的疾病或病癥的治療方案，施用所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體和/或包括所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的組合物。臨床醫(yī)生通常應(yīng)該能夠根據(jù)因素，諸如待預(yù)防或治療的疾病或病癥，待治療疾病的嚴(yán)重性和/或其癥狀的嚴(yán)重性，待使用的具體本發(fā)明氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體，具體施用途徑和待使用的藥物制劑或組合物，患者的年齡、性別、體重、飲食、一般狀態(tài)，和臨床醫(yī)生熟知的類(lèi)似因素，確定合適的治療方案。通常，所述治療一方案應(yīng)該包括以一種或多種藥物有效量或劑量，施用一種或多種本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體，或一種或多種包括所述本發(fā)明氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的組合物。臨床醫(yī)生也可以根據(jù)以上引用的因素確定具體的待施用量或劑量。通常，為了預(yù)防和/或治療預(yù)期的疾病和病癥(即，通常通過(guò)使用所述治療實(shí)體本身治療或預(yù)防的那些疾病和病癥)，并根據(jù)待治療的具體疾病或病癥，待使用的特定氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的功效和/或半衰期，使用的具體施用途徑和具體藥物劑型或組合物，通常應(yīng)該以這樣的量，在一天中連續(xù)地(例如通過(guò)輸注)作為單次每日劑量或作為多次分開(kāi)的劑量施用本發(fā)明氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體，所述量是1克-0.01微克/kg體重/天，優(yōu)選地O.l克-0.1微克/kg體重/天，諸如約1,10,100，1000或2000微克/kg體重/天。臨床醫(yī)生通常能夠根據(jù)本文中提到的因素確定合適的每日劑量。還應(yīng)該清楚地是，在具體情形中，臨床醫(yī)生可以選擇偏離這些量，例如，基于以上引用的因素和他的專(zhuān)業(yè)判斷。通常，可以由對(duì)類(lèi)似常規(guī)抗體或抗體片段通常施用的量獲得一些關(guān)于待施用量的指導(dǎo)，所述類(lèi)似常規(guī)抗體或抗體片段針對(duì)基本通過(guò)相同途徑施用的相同耙標(biāo)，然而考慮親和性/親和力、功效、生物分布、半衰期和技術(shù)人員熟知的類(lèi)似因素中的差別。通常，在以上方法中，使用本發(fā)明的單一氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體。然而，組合使用兩種或更多本發(fā)明氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體屬于本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體還可以與一種或多種其他藥物活性化合物或成分組合使用，即作為組合的治療方案，其可以引起或可以不引起協(xié)同功效。而且，臨床醫(yī)生能夠基于以上引用的因素和他的專(zhuān)業(yè)判斷，選擇所述其他化合物或成分，以及合適的組合治療方案。具體地，本發(fā)明的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、—或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體可以與其他藥物活性化合物或成分組合使用，所述藥物活性化合物或成分用于或能夠用于預(yù)防和/或治療能夠用本發(fā)明氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白、或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體預(yù)防或治療的疾病和病癥，且作為其結(jié)果，可以獲得或可以不獲得協(xié)同功效。臨床醫(yī)生應(yīng)該清楚地，可以以關(guān)于有關(guān)疾病或病癥本身已知的任何方式，確定和/或關(guān)注按照本發(fā)明使用的治療方案的效力。臨床醫(yī)生還能夠，在適當(dāng)和或個(gè)案基礎(chǔ)上，改變或更改具體的治療方案，從而獲得理想的治療效果，以避免、限制或減少不希望的副作用，和/或在一方面獲得理想治療效果和另一方面避免、限制或減少不希望副作用之間獲得適當(dāng)?shù)钠胶?。通常，?yīng)該遵從所述治療方案，直到獲得理想的治療效果和/或?yàn)榱司S持理想治療效果。而且，這可以由臨床醫(yī)生確定。待治療的受試者可以是任何溫血?jiǎng)游铮蔷唧w地是哺乳動(dòng)物，和更具體是人。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，待治療的受試者應(yīng)該具體地是患有本文中提及的疾病和病癥或處于本文中提及的疾病和病癥危險(xiǎn)的人。附圖簡(jiǎn)述通過(guò)下列非限制性實(shí)驗(yàn)部分和附圖的方式，進(jìn)一步描述本發(fā)明。所述非限制性附圖顯示一圖1:用于構(gòu)建限制和非-限制CDR3文庫(kù)的寡核苷酸序列。使用IUPAC密碼子。顯示的寡核苷酸引物是Forl胡(SEQIDNO:7);For2鄰(SEQIDNO:8);For3S刀(SEQIDNO:9);For4S力(SEQIDNO:10);For5胡(SEQIDNO:ll);For6胡(SEQIDNO:12);For7鄰(SEQIDNO:13);Backl淑(SEQIDNO:14);Back2脂(SEQIDNO:15);Back3胸(SEQIDNO:16);Back4淑(SEQIDNO:17);Back5淑(SEQIDNO:18);BacklcysRJVW(SEQIDNO:19);BacklcysW淑(SEQIDNO:20);Back2cysW淑(SEQIDNO:21);Back3cysW淑(SEQIDNO:22);Back3cysRMf(SEQIDNO:23);Back4cysWM/(SEQIDNO:24);80Back5cysW淑(SEQIDNO:25)。一圖2:美洲駝117和美洲駝118針對(duì)下列各項(xiàng)的免疫應(yīng)答a)人血清清蛋白(圖2A)，b)小鼠血清清蛋白X圖2B)，c)食蟹猴血清清蛋白(圖2C)和d)狒狒血清清蛋白(圖2D)。一圖3:對(duì)HSA兩輪選擇后篩選單克隆噬菌體的Odyssey示值讀數(shù)。奇數(shù)和偶數(shù)欄分別由HSA和卵清蛋白包被。2個(gè)框表示結(jié)合于HSA但不結(jié)合于卵清蛋白的2種不同的單克隆噬菌體，盡管信號(hào)/背景比非常低。測(cè)序揭示這2個(gè)CDR3環(huán)相同dtov>yc"aaasysdydvfgggtdfgpw^rg^v(SEQIDNO:l;旁側(cè)FR序列顯示為斜體字)。該肽稱(chēng)為17D12。一圖4:具有或不具有在M13噬菌體的pill上表達(dá)的旁側(cè)FR的17D12的CDR3環(huán)的氨基酸序列。側(cè)面是17D12的CDR3(SEQIDNO:l)的FR殘基，如從對(duì)HSA兩輪選擇后的初級(jí)篩選中選擇地，顯示為斜體字。為了構(gòu)建非-限制(NC，'SEQIDNO:26)和限制(C;SEQIDNO:27)截短的肽向17D12的CDR3添加的殘基顯示為粗體。一圖5:具有或不具有在M13噬菌體的pIII上表達(dá)的旁側(cè)FR的17D12的CDR3環(huán)與HSA的結(jié)合。全長(zhǎng)17D12(■)，以及處于非-限制和限制形式的不具有旁側(cè)FR殘基的CDR3環(huán)，即分別地，17D12-CDR3-NCO)或17D12-CDR3-C(*)，劑量-依賴(lài)性地結(jié)合于HSA(實(shí)線)，但不結(jié)合于陰性對(duì)照肽，卵清蛋白(虛線)。一圖6:具有或不具有在M13噬菌體的pill上表達(dá)的旁側(cè)FR的17D12的CDR3環(huán)的交叉-反應(yīng)性和特異性。全長(zhǎng)17D12，以及處于非-限制和限制形式的不具有旁側(cè)FR殘基的CDR3環(huán)，即分別地，17D12-CDR3-NC或17D12-CDR3-C，劑量-依賴(lài)性地結(jié)合于HSA和CSA。存在17D12-CDR3-C與不相關(guān)蛋白卵清蛋白和TNF的一些非-特異性結(jié)合。-:非-包被的。一圖7:人血清清蛋白與合成肽PEO-100和PEO-101.5的結(jié)合的表面等離子體共振分析。版a:PEO-105(Ala-17D12-CDR3);版b:PEO-101.5(Cys-Ala-17D12-CDR3)。一圖8:在M13噬菌體的pIII上表達(dá)的VHH-17D12融合體的氨基酸序列。17D12的FR殘基顯示為斜體字。FR3中的Cys殘基替換為Ser。VHH-17D12(S),SEQIDNO:31;V朋-GlySer-17D12(S)，SEQIDNO:32。一圖9:在M13噬菌體的pill上表達(dá)的VHH-17D12融合體與HSA的結(jié)合。全長(zhǎng)17D12y，一以及—與對(duì)iffiR2具有特異性的VHH2D3的C-端融合，具有或不具有Gly4Ser-Gly3Ser接頭的17D12肽，即分別地，2D3-GlySer-17D12(S)O)和2D3-17D12(S)(▲)，劑量-依賴(lài)性地結(jié)合于HSA(實(shí)線)，但不結(jié)合于陰性對(duì)照肽，卵清蛋白(虛線)。一圖10:人血清清蛋白(HSA)上納米抗體⑧(2D3)和納米抗體⑧融合肽(2D3-17D12)的結(jié)合的表面等離子體共振分析。包被芯片(CM5)是通過(guò)利用用于活化的NHS/EDC和用于失活的乙醇胺的氨基偶聯(lián)執(zhí)行的(Biacore胺偶聯(lián)試劑盒)。由7000RU入血清清蛋白(西格瑪(Sigma)，99%純)和2500RU不相關(guān)蛋白抗原包被芯片(hip)。以增加的濃度(1.25pM,2.5|iM和5pM)，將2D3和2D3-17D12連續(xù)注射到芯片上。HBS-EP以10(^1min-l的速度，作為流動(dòng)緩沖液使用。注射20^il樣品20s。一圖11:2D3-17D12融合蛋白與HER2抗原和人血清清蛋白(HSA)的同時(shí)結(jié)合的表面等離子體共振分析。用1和5pMHSA預(yù)-溫育或不預(yù)-溫育2D3-17D12融合蛋白，隨后流過(guò)固定的2D3靶抗原，rhErbB2-Fc。虛線表示在25|iMHSA存在下2D3的結(jié)合特征。實(shí)驗(yàn)部分實(shí)施例1-免疫U免疫在獸醫(yī)系道德委員會(huì)(EthicalCommitteeoftheFacultyofVeterinaryMedicine)(根特大學(xué)(UniversityGhent),比利時(shí))批準(zhǔn)后，按照標(biāo)準(zhǔn)方案，以每周一次的時(shí)間間隔，用6次肌肉內(nèi)注射下列抗原的混合物，免疫美洲駝一美洲駝006:處于小鼠TNF和IFNY的混合物中的人血清清蛋白(HSA)一美洲駝021:處于由食蟹猴清蛋白、人血清清蛋白加強(qiáng)的PDK-1,抗-CD4，hTNFa,膠原蛋白III+型的混合物中的小鼠血清清蛋白(MSA)一美洲駝022:處于PDK-1、hIFNy、hTNFa膠原蛋白III型的混合物中的MSA一一美lfl'l駝039:HSA，MSA，MSA,猴SA,猴SA,HSA—美洲駝117:用HSA和狒狒SA、食蟹猴SA&MSA的混合物交替免疫一美洲駝118:用HSA和狒狒SA、食蟹猴SA&MSA的混合物交替免疫1.2評(píng)估在美洲駝中誘導(dǎo)的應(yīng)答在第0、28天和PBL收集時(shí)，從美洲駝117和118收集血清，從而通過(guò)ELISA評(píng)估在該動(dòng)物中針對(duì)清蛋白誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。簡(jiǎn)言之，將2pg/ml的HSA，MSA,食蟹猴SA(cynoSA)或狒狒SA在4°C過(guò)夜固定在96孔Maxisorp板上(Nunc)。用酪蛋白溶液(PBS中1%)封閉孔。添加血清稀釋物后，利用山羊抗-美洲駝辣根過(guò)氧化物酶綴合物檢測(cè)特異性結(jié)合的免疫球蛋白(Bethyl實(shí)驗(yàn)室公司(BethylLab.Inc.))，顯示對(duì)于這兩種動(dòng)物，誘導(dǎo)了針對(duì)人(圖2A)、小鼠(圖2B)、食蟹猴(圖2C)和狒狒(圖2D)清蛋白的顯著抗體依賴(lài)性免疫應(yīng)答。來(lái)自美洲駝118的預(yù)免疫血清顯示出結(jié)合于至多1:10.000稀釋的各種清蛋白，但是明顯優(yōu)于用清蛋白3次免疫后獲得的血清。沒(méi)有檢測(cè)到美洲駝117的預(yù)-免疫血清與不同物種來(lái)源的清蛋白的結(jié)合。實(shí)施例2-文庫(kù)構(gòu)建為了從起始VHH模板背景中識(shí)別出能夠結(jié)合清蛋白的CDR3序列，遵從2種方法。在第一種方法中，CDR3環(huán)群錨定在限制該環(huán)基礎(chǔ)(base)的微支架(microscaffold)上。在VHH、和VH中，CDR3環(huán)錨定在FR3和FR4上。由于這些區(qū)域是反向平行p折疊組構(gòu)中包含的延長(zhǎng)結(jié)構(gòu)，所以在該支架中包括FR3和FR4末端的最后部分，以某種方式對(duì)于本領(lǐng)域中技術(shù)人員是顯然的。為了進(jìn)一步限制CDR3環(huán)的基礎(chǔ)，改造FR3中位置93(Kabat編號(hào))，保守的Cys殘基和位置104(Kabat編號(hào))，保守的Gly殘基之間的非-天然二硫鍵。將從免疫的美洲駝的淋巴結(jié)(LN)或外周血淋巴細(xì)胞(PBL)分離的VHH的互補(bǔ)決定區(qū)3(CDR3)作為與具有旁側(cè)構(gòu)架(FR)殘基的基因III蛋白的N-端融合體，表達(dá)在M13噬菌體的表面上。更具體地，文庫(kù)構(gòu)建體包含pIII分泌信號(hào)肽、側(cè)面是9個(gè)FR3和7個(gè)FR4殘基的CDR3文庫(kù)，隨后分別是His6和c-myc標(biāo)記物，短Gly-Ala-Ala接頭和Ml3pill基因。在該非-限制文庫(kù)之后，由于FR3中的保守Cys，通過(guò)將FR4中的第一個(gè)殘基(Trp或Arg)替換為Cys，設(shè)計(jì)限制文庫(kù)構(gòu)建體。如下構(gòu)建2種所述的CDR3文庫(kù)。從免疫的美洲駝的淋巴結(jié)和域外周血淋巴細(xì)胞中分離RNA，隨后利用隨機(jī)六聚體和SuperscriptIII，按照制造商的指示進(jìn)行cDNA合成(Invitrogen)。在第一次PCR中，利用正向引物混合物[分別地，4:1比例的ABL051(5，-ggctgagctgggtggtcctgg-3，，SEQIDNO:4)和ABL052(5，-ggctgagtttggtggtcctgg-3，，SEQIDNO:5)]和反向引物ABL003(5，-ggtacgtgctgttgaactgttcc-3，，SEQIDNO:6)擴(kuò)增VHH和VH。分離VHH片段后，進(jìn)行2個(gè)分別嵌套式的PCR，從而擴(kuò)增處于非-限制或限制形式的具有旁側(cè)FR序列的CDR3。在這2個(gè)嵌套式PCR中，使用7種簡(jiǎn)并的正向引物(即對(duì)FR3退火)的混合物(分別地，SEQIDNO，s:7-13)，將其與5種(SEQIDNO，s:14-18)或7種(SEQIDNO，s:19-25)反向引物(即對(duì)FR4退火)的混合物組合，以分別獲得非-限制和限制形式(見(jiàn)圖1，使用IUPAC密碼子)。嵌套式PCR-片段通過(guò)在內(nèi)部構(gòu)建的、pUC19-來(lái)源的pAX50載體中的syn和wofi限制性位點(diǎn)，克隆在pin基因的上游。由各種免疫的動(dòng)物，獲得2個(gè)5xl(f的文庫(kù)。實(shí)施例3-選擇和篩選選擇是針對(duì)人血清清蛋白(HSA:A5763,西格瑪(Sigma))執(zhí)行的。利用10jug/mLHSA包被和利用SuperBlockT20PBS封閉緩沖液(Pierce)封閉Maxisorp微量滴定板(Nunc)的孔，以防止非-特異性結(jié)合。在將噬菌體加入到包被的孔中之前，將它們?cè)?:1(v:v)Superblock170PBS封閉緩沖液:PBS+0.05。/。吐溫-20中預(yù)-溫育。用100mM三乙胺稀釋噬菌體并用1MTrispH7.5進(jìn)行中和。兩輪選擇后，針對(duì)對(duì)比陰性對(duì)照抗原，卵清蛋白(A5378,西格瑪(Sigma))對(duì)HSA的結(jié)合篩選單克隆噬菌體。利用10pg/mLHSA或卵清蛋白包被和利用SuperBlock170PBS封閉緩沖液(Pierce)封閉Maxisorp微量滴定板(Nimc)的孔，以防止非-特異性結(jié)合。將在9&孔板中生成的噬菌體以1/10稀釋在1:1(v:v)SuperblockT20PBS封閉緩沖液:PBS+0.05Q/。吐溫-20中，并在HSA和卵清蛋白上溫育。利用抗-M13(GE健康保健(GEHealthcare))和山羊抗-小鼠IRDye700(Rockland)檢測(cè)結(jié)合的噬菌體，并在Odyssey(LI-COR生物科學(xué)(LI-CORBiosciences))上讀出信號(hào)。圖3顯示篩選示值讀數(shù)的實(shí)例，其中識(shí)別2個(gè)HSA-結(jié)合CDR3環(huán)。2個(gè)"擊中"(hits)均選自相同文庫(kù)，即源自處于非-限制形式的美洲駝117。測(cè)序揭示這2個(gè)識(shí)別的CDR3環(huán)是相同的Aayxyc加aasysdydvfgggtdfgpwg収Wv(旁側(cè)FR序歹U，顯示為斜體字)。該肽稱(chēng)為17D12。其完整氨基酸序列在SEQIDNO:l中給出，且其編碼核苷酸序列在SEQIDNO:2中給出。CDR3環(huán)的氨基酸序列在SEQIDNO:3中給出。實(shí)施例4-具有或不具有在M13噬菌體的pIII上表達(dá)的旁側(cè)FR的17D12的CDR3環(huán)與HSA的結(jié)合。利用不同的噬菌體濃度評(píng)估如選自初步篩選的17D12與HSA和陰性對(duì)照肽，卵清蛋白的結(jié)合。另外，分析了17D12的2種截短形式的結(jié)合。這2種截短的肽，艮卩17D12-CDR3-NC(SEQIDNO:26)和17D12-CDR3-C(SEQIDNO:27)，缺乏旁側(cè)FR殘基，且前者是非-限制環(huán)，而后者是限制的(圖4)?；救鐚?shí)施例3中所述地執(zhí)行噬菌體結(jié)合測(cè)定。將在10mL培養(yǎng)體積中生成的噬菌體，以由7.5xl0"個(gè)噬菌體/mL開(kāi)始的K稀釋系列，溫育在HSA和卵清蛋白上。圖4顯示全長(zhǎng)17D12肽以及缺乏FR殘基的截短的肽對(duì)HSA的劑量-依賴(lài)性結(jié)合。與卵清蛋白的非-特異性結(jié)合比對(duì)限制的截短的肽略高。實(shí)施例5-具有或不具有在M13噬菌體的pIII上表達(dá)的旁側(cè)FR的17D12的CDR3環(huán)的交叉-反應(yīng)性和特異性利用不同的噬菌體濃度評(píng)估如選自關(guān)于HSA的兩輪選擇后的初步篩選的17D12與不同物種的血清清蛋白[小鼠血清清蛋白(MSA,A3559,西格瑪(Sigma)),食蟹猴血清清蛋白(CSA,內(nèi)部生成)，牛血清清蛋白(BSA,A6003,西格瑪(Sigma))和HSA]和對(duì)陰性對(duì)照抗原[卵清蛋白、人腫瘤壞死因子a(TNF，內(nèi)部生成)]的結(jié)合。另外，對(duì)17D12的2種截短的變體進(jìn)行相似的結(jié)合研究。這2種肽，即17D12-CDR3-NC(SEQIDNO:26)和17D12-CDR3-C(SEQIDNO;27)，缺乏17D12的旁側(cè)FR殘基，且前者是非-限制環(huán)，而后者是限制的(圖4)?；救鐚?shí)施例4中所述地執(zhí)行噬菌體結(jié)合測(cè)定。全長(zhǎng)17D12肽以及截短的肽，17D12-CDR3-NC和17D12-CDR3-C，劑量-依賴(lài)性結(jié)合于HSA和CSA，而對(duì)MSA和BSA的反應(yīng)性在進(jìn)行的測(cè)定中不明顯(圖6)。不存在17D12和17D12-CDR3-NC對(duì)測(cè)試的不相關(guān)蛋白(卵清蛋白和TNF)的顯著非-特異性結(jié)合。相反，存在與限制的截短肽細(xì)微程度的非-特異性結(jié)合。實(shí)施例6-合成肽與HSA的結(jié)合通過(guò)PepscanPresto(Lelystad,荷蘭)合成和純化表1中所示的肽，如下。利用多肽合成器，通過(guò)基于樹(shù)脂的Fmoc(9-芴基甲氧基羰基)化學(xué)原理來(lái)合成所述肽。使用生物素NovaTag樹(shù)脂(Novabiochem)，并按照固相肽合成(SPPS)的概念裝配肽序列。通過(guò)電噴射質(zhì)譜法驅(qū)動(dòng)的制備RP-HPLC純化所述肽，并通過(guò)分析RP-UPLC和電噴射質(zhì)譜法檢查純度和質(zhì)量，并確定為94.07%(乙?；?AAASYSDYDVFGGGTDFGP-c2接頭-生物素，SEQIDNO:28),和82.59%(乙?；?CAAASYSDYDVFGGGTDFGP-c2接頭-生物素，SEQIDNO:29)。Ala-17D12國(guó)CDR3乙?；?AAASYSDYDVFGGGTDFGP-c2接頭、生物素Cys-Ala-17D12-CDR3乙?；?CAAASYSDYDVFGGGTDFGP-c2接頭-生物素表1包含由Ala或Cys-Ala處理的17D12的CDR3序列的合成、生物素化肽。由表面等離子體共振評(píng)估2種合成肽Ala-17D12-CDR3和Cys-Ala-17D12-CDR3對(duì)HSA—的結(jié)合。分別在鏈霉抗生物素蛋白-包被的傳感器芯片SAT071122上捕獲生物素化肽。以多種濃度評(píng)估HSA結(jié)合。將樣品以流速10ul/min注射到活化的和參考表面上4分鐘，從而容許與芯片-結(jié)合的抗原結(jié)合。其次，將不具有HSA的結(jié)合緩沖液以相同的流速送到芯片上，從而容許結(jié)合的HSA的解離。IO分鐘后，通過(guò)注射再生溶液(50mMNaOH)去除剩余的結(jié)合分析物。如在圖7A和7B中所述，關(guān)于這2種肽的結(jié)合動(dòng)力學(xué)相當(dāng)。雖然解離曲線是不均一的，但是可以計(jì)算2E-2和2E-3之間的解離速率1/s。觀察到針對(duì)高于15pM的HSA濃度的結(jié)合反應(yīng)的增加，但是結(jié)合反應(yīng)顯示在48pMHSA時(shí)達(dá)到飽和水平。通過(guò)擬合1:1結(jié)合模式，締合率常數(shù)是濃度依賴(lài)性的，且在1E2-E4范圍內(nèi)。這些數(shù)據(jù)顯示關(guān)于本文中所述合成肽的結(jié)合親和力是至少為多于1MM。實(shí)施例7-構(gòu)建納米抗體-17D12融合蛋白和在M13噬菌體的pIII上表達(dá)時(shí)分析與HSA的結(jié)合。在存在或不存在Gly4Ser-Gly3Ser接頭的情況下，HSA-結(jié)合肽17D12遺傳融合于VHH，叫做2D3的C-端，并表達(dá)在M13噬菌體的pIII上(圖8)，所述VHH特異性結(jié)合于HER2并記述在埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)在2007年11月27日提交的名稱(chēng)為"針對(duì)HER2的氨基酸序列和包括所述氨基酸序列的多肽用于治療癌癥和/或腫瘤(AminoacidsequencesdirectedagainstHER2andpolypeptidescomprisingthesameforthetreatmentofcancersand/ortumors)"的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)中(見(jiàn)SEQIDNO:2060)。FR3中的Cys殘基替換為Ser?；救鐚?shí)施例4中所述地執(zhí)行對(duì)HSA和卵清蛋白的噬菌體結(jié)合測(cè)定。將在lOmL培養(yǎng)體積中生成的噬菌體，以由1()U個(gè)噬菌體/mL開(kāi)始的K稀釋系列，溫育在HSA和卵清蛋白上。當(dāng)在存在或缺乏GlySer接頭的條件下在非-清蛋白結(jié)合完整V朋的C-端融合肽17D12時(shí)，保持與HSA的劑量-依賴(lài)性結(jié)合(圖9)。實(shí)施例8-2D3-17D12融合蛋白與HSA的結(jié)合2D3-1—7D12—融合蛋白VFGGGTDFGPWGQGTQVGGGS(SEQIDNO:30)表達(dá)在大腸桿菌(￡.co")TGl細(xì)胞中。該融合蛋白通過(guò)IMAC/SEC純化，并且在BIAcoreTM3000中評(píng)估與HSA的結(jié)合。因此，將2D3-17D12融合蛋白和2D3納米抗體的稀釋系列注射到由高密度HSA(7000RU)包被的CM5芯片上。圖10顯示2D3-17D12與HSA的劑量-依賴(lài)性結(jié)合，而如所預(yù)期地，2D3在相同的測(cè)試濃度時(shí)不結(jié)合。計(jì)算的2D3-17D12關(guān)于HSA的親和力是1(VM。作為對(duì)照，將2.52D3-17D12注射到由高密度不相關(guān)蛋白(2400RU)包被的CM5芯片上，但是沒(méi)有檢測(cè)到特異性結(jié)合。實(shí)施例9-2D3-17D12融合蛋白與HER2和HSA的同時(shí)結(jié)合。為了檢査2D3納米抗體和17D12CDR3是否能夠同時(shí)結(jié)合它們各自的靶抗原(對(duì)于2D3納米抗體是Her-2抗原，對(duì)于17D12CDR3是清蛋白)，執(zhí)行下列實(shí)驗(yàn)。用增加濃度的HSA預(yù)-溫育或不預(yù)-溫育2D3-17D12融合蛋白，并然后將其注射到由rhErbB2-Fc抗原(R&D系統(tǒng)(R&DSystems))以密度3000RU包被的CM5芯片上。如圖11中所示，與HSA預(yù)混合的2D3-17D12的注射顯示出與單獨(dú)2D3-17D12相比相似的締合率，其與對(duì)照注射相比略高但具有相當(dāng)?shù)慕怆x率。向2D3添加HSA顯示出與單獨(dú)的2D3-17D12相比稍微不同的動(dòng)力學(xué)，但是解離率在相似的范圍內(nèi)。實(shí)施例10-通常融合于具有針對(duì)清蛋白結(jié)合特異性的CDR3環(huán)的納米抗體的藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析。通過(guò)非限制性實(shí)例，本發(fā)明的化合物(諸如SEQIDNO:30的2D3-17D12融合蛋白)的半衰期通過(guò)在嚙齒類(lèi)動(dòng)物或非-人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物模型中進(jìn)行的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究確定，如下。向動(dòng)物組(11=2-10)給藥?kù)o脈內(nèi)快速濃注(bolusinjection)1mg/kg或10mg/kg2D3-17D12融合蛋白。血漿樣品在給藥后的不同時(shí)間點(diǎn)(例如，給藥后1,2,4,6,8,l2,24,48,144，192，240，288和336小時(shí))，通過(guò)靜脈獲得，并通過(guò)ELISA分析2D3-17D12融合蛋白的存在。將血漿濃度對(duì)比時(shí)間擬合為二-區(qū)室消除模型。清除、VI、穩(wěn)定狀態(tài)體積(Vss)、T1/2、AUC、和針對(duì)實(shí)際施用劑量校正的AUC(AUC/劑量)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)針對(duì)各個(gè)治療組進(jìn)行平均。組之間的區(qū)別通過(guò)分析變量確定。還參考本說(shuō)明書(shū)以及Dennis等，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem)277:35035-42(2002)中引用的參考文獻(xiàn)。實(shí)施例中提及的序列列在下表2中表2:實(shí)驗(yàn)部分中使用的序列17D]2;SEQIDNO:1dtavyycnaaasysdydvfgggtdfgpwgqgtqv17D12;SEQIDNO:2gacacggccgttot加gtaatgcagccgcctcctatagcgactatgacgtctttgggggaggaactgactttggtccctggggccaagggaccc鄉(xiāng)tc17D2CDR序列；SEQ!DNO:3:aasysdydvfgggtdfgp引物ABL05!;SEQIDNO:4ggctgagctgggtggtcctgg引物ABL0052;SEQ1DN0:5ggctgagtttggtggtcclgg引物ABL003;SEQE)NO:6ggtacgtgctgttgaactgttcc引物ForlSfi;SEQIDNO:7Gtcctcgcaactgcggcccagccggcca〖ggcggacacggccgbctattactg引物For2Sfi;SEQIDNO:8Gtcctcgcaactgcggcccagccggccatggcggacacggccgtttatwactg引物For3Sfi;SEQIDNO:9Gtcctcgcaactgcggcccagccggccatggcggacacggccgtgtattaytg引物For4Sfi;SEQIDNO:10Gtcctcgcaactgcggcccagccggccatggcggacacggccgtctattwitg引物For5Sfi;SEQIDNO:〗]Gtcctcgcaactgcggcccagccggccatggcggacacggccgwttattattg引物Foi'6Sfi;SEQIDNO:12"Gtcctcgcaactgcggcccagccggccatggcggacacggccatytattwctg引物For7Sfi;SEQBDNO:13Gtcctcgcaactgcggcccagccggccatggcggacacgggactytattactg引物BacklNot;SEQIDNO:]4gagtcattctcg3cttgcggccgctgaaccgcctccgacctgrgtbccctggcccc弓I物Back2Not;SEQID船:15gagtcattctcgacttgcggccgclgaaccgcctccgacctkggtcccttkgcccc引物Back3Not;SEQIDNO:16gagtcattclcgacUgcggccgctgaaccgcctccgacctgggtccccggsccyc引物Back4Not;SEQIDNO:.7,gagtcattctcgacttgcggccgct.gaaccgcctccgacctgggtcccctghcccc引物Back5Not;SEQlDNO:18gagtcattctcgacttgcggccgctgaaccgcctccgacctgggtcccctggccgt引物BacklcysRNot;SEQIDNO:19gagtcattctcgacttgcggccgctgaaccggctccgacctgrgtbccctggcacct引物BacklcysWNol;SEQE)NO:20gagtcattctcgacttgcggccgctgaaccggctccgaccigrgtbccctggcacca引物Back2cysWNot;SEQIDNO:2]gagtcattctcgacttgcggccgctgaaccggctccgacctkggtcccttkgcacca引物Back3cysWNot.;SEQIDNO:22gagtcattctcgacUgcggccgctgaaccggctccgacctgggtccccgggcacca引物Back3cysRNot;SEQIDNO:23gagtcattctcgacttgcggccgctgaaccggctccgacctgggtccccgggcatct引物Badc4cysWNot;SEQJDNO:24gagtc組ctcgacugcggccgctgaaccggctccgijcctgggtcccctggcacca引物Back5cysWNot;SEQ!DNO:25gag[ca[tclcgacttgcggccgctgaaccggctccgacctgggtcccctggcagla7D12畫(huà)CDR3-NC;SEQIDNO:26aaasysdydvfgggtdfgpa17D12-CDR3-C;SEQIDNO:27caaasys^ydvfgggtdfgpac乙?；鶁厶/^5￥30￥0￥:00071^0-02接頭-i物素;SEQIDNO:28AAASYSDYDVFGGGTDTOP乙?；籆AAASYSDYDVFGGGTDFGP-c2接頭-生物素，SEQIDNO:29;CAAASYSDYDVFGGGTDFGP2D3-17D12融合蛋白;SEQIDNO:30EVQLVESGGSLVQPGGSLRLSCAASGFTFDDYAMSWVRQVPGKGLEWVSSINWSGTHTDYADSVKGRFTISRNNANNTLYLGMNSLKSEDTAVYYCAKNWRDAGTTWFEKSGSAGQGTQVTVSSDTAVYYCNAAASYSDYDVFGGGTDFGPWGQGTQVGGGS本領(lǐng)域中的那些技術(shù)人員利用不超過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)該承認(rèn)或能夠確定許多本文中所述發(fā)明的具體實(shí)施方案的等價(jià)物。確定所述等價(jià)物屬于以下權(quán)利要求。將本文中公開(kāi)的所有參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入，作為參考。權(quán)利要求1.能夠結(jié)合于血清蛋白和基本由CDR序列組成的氨基酸序列。2.能夠結(jié)合于血清蛋白和包括CDR序列(且特別地，單一CDR序列)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列不包括免疫球蛋白折疊和/或不能形成免疫球蛋白折疊。3.按照權(quán)利要求1-2的氨基酸序列，其中所述CDR序列能夠結(jié)合于血清蛋白。4.按照權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述CDR序列源自能夠結(jié)合于血清蛋白的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域；和/或其中所述氨基酸序列基本由包括CDR序列的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域片段組成。5.按照權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述CDR序列源自免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，所述免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域選自由VH-結(jié)構(gòu)域、VL-結(jié)構(gòu)域、VHH-結(jié)構(gòu)域或免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的抗原-結(jié)合片段組成的組；和減是VH-結(jié)構(gòu)域、V^結(jié)構(gòu)域、VHH-結(jié)構(gòu)域的片段或包括CDR序列的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的抗原-結(jié)合片段。6.按照權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述CDR序列源自免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，所述免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域選自由人可變結(jié)構(gòu)域、(單)結(jié)構(gòu)域抗體、dAb、或納米抗體⑧組成的組；和/或是人可變結(jié)構(gòu)域、(單)結(jié)構(gòu)域抗體、dAb、或納米抗體⑧的片段。7.按照權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述CDR序列是CDR2序列。8.按照權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述CDR序列是CDR3序列。9.按照權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述CDR序列具有3-40個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選5-30個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。10.按照權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列以這樣的方式結(jié)合于血清蛋白，以致不(顯著)縮短血清蛋白分子的半衰期。11.按照權(quán)利要求l-10中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列結(jié)合于選自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原組成的組的血清蛋白；或結(jié)合于前述任一項(xiàng)的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域。12.按照權(quán)利要求l-ll中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列結(jié)合于血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域。13.按照權(quán)利要求l-12中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列結(jié)合于人血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域。14.按照權(quán)利要求12或13的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于血清清蛋白上不涉及(人)血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的氨基酸殘基。15.按照權(quán)利要求12-14中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于血清清蛋白上不形成(人)血清清蛋白的結(jié)構(gòu)域III部分的氨基酸殘基。16.按照權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述CDR序列在CDR序列的每一側(cè)側(cè)鄰2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列。17.按照權(quán)利要求16的氨基酸序列，其中所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列各具有l(wèi)-30個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選2-20個(gè)氨基酸殘基，諸如約5，10或15個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。18.按照權(quán)利要求16或17的氨基酸序列，其中所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列源自兔疫球蛋白構(gòu)架序列；和/或是免疫球蛋白構(gòu)架序列的片段。19.按照權(quán)利要求18的氨基酸序列，其中所述CDR序列源自來(lái)自免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列，且其中所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列是免疫球蛋白構(gòu)架序列，所述免疫球蛋白構(gòu)架序列源自這樣的構(gòu)架序列，所述構(gòu)架序列在所述CDR序列來(lái)源的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域中鄰近所述CDR序列；和/或是所述構(gòu)架序列的片段，所述構(gòu)架序列在所述CDR序列來(lái)源的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域中鄰近所述CDR序列。20.按照權(quán)利要求19的氨基酸序列，其中所述CDR序列是CDR2序列，且其中所述旁側(cè)序列是分別源自構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的免疫球蛋白構(gòu)架序列；和/或分別地，是構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的片段。21.按照權(quán)利要求19的氨基酸序列，其中所述CDR序列是CDR3序列，且其中所述旁側(cè)序列是分別源自構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的免疫球蛋白構(gòu)架序列；和/或分別地，是構(gòu)架3序列和構(gòu)架3序列的片段。22.按照權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其包含至少2個(gè)能夠形成二硫鍵的半胱氨酸殘基。23.按照權(quán)利要求22的氨基酸序列，其中所述CDR序列在CDR序列的每一側(cè)側(cè)鄰2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列，且其中每個(gè)旁側(cè)氨基酸序列包含至少一個(gè)能夠形成二硫鍵的半胱氨酸殘基。24.按照權(quán)利要求22或23的氨基酸序列，其中所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列源自免疫球蛋白構(gòu)架序列，且其中所述至少2個(gè)能夠形成二硫鍵的半胱氨酸殘基是所述免疫球蛋白構(gòu)架序列中天然存在的半胱氨酸殘基和/或己被引入到所述免疫球蛋白構(gòu)架序列中的半胱氨酸殘基。25.按照權(quán)利要求l-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其包括至少一個(gè)二硫鍵。26.包含至少一種按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列和至少一種治療部分的化合物或構(gòu)建體。27.包含至少一種按照權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列和至少一種治療部分的化合物或構(gòu)建體。28.包含至少一種按照權(quán)利要求25的氨基酸序列和至少一種治療部分的化合物或構(gòu)建體。29.按照權(quán)利要求27或28的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一種按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)或權(quán)利要求25的氨基酸序列分別直接連接于所述至少一種治療部分或通過(guò)一種或多種適當(dāng)?shù)慕宇^或間隔區(qū)連接于所述至少一種治療部分。30.按照權(quán)利要求26-29中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一種治療部分包括氨基酸序列或基本由氨基酸序列組成。31.按照權(quán)利要求26-30中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一種治療部分包括免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段；包含免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段的蛋白質(zhì)或多肽或基本由免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段；包含免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段的蛋白質(zhì)或多肽組成。32.按照權(quán)利要求31的化合物或構(gòu)建體，其中所述治療部分包括(單)結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"、或納米抗體⑧或基本由(單)結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"、或納米抗體⑧組成。33.按照權(quán)利要求29-32中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一種按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)或權(quán)利要求25的氨基酸序列分別直接連接于所述至少一種治療部分或通過(guò)一種或多種適當(dāng)?shù)慕宇^或間隔區(qū)連接于所述至少一種治療部分，其中所述至少接頭或間隔區(qū)包括氨基酸序列或基本由氨基酸序列組成。34.按照權(quán)利要求29-33中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體，其包括(融合)蛋白或(融合)多肽或基本由(融合)蛋白或(融合)多肽組成，所述(融合)蛋白或(融合)多肽包括至少一種按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列和至少一種治療部分。35.按照權(quán)利要求35的化合物或構(gòu)建體，其包括(融合)蛋白或(融合)多肽或基本由(融合)蛋白或(融合)多肽組成，所述(融合)蛋白或(融合)多肽包括至少一種按照權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列和至少一種治療部分。36.按照權(quán)利要求29-33中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體，其包括(融合)蛋白或(融合)多肽或基本由(融合)蛋白或(融合)多肽組成，所述(融合)蛋白或(融合)多肽包括至少一種按照權(quán)利要求25的氨基酸序列和至少一種治療部分。37.編碼按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求34或35的化合物或構(gòu)建體的核苷酸序列或核酸。38.編碼按照權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求35的化合物或構(gòu)建體的核苷酸序列或核酸。39.包含按照權(quán)利要求37或38的核苷酸序列或核酸，和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求34或35的化合物或構(gòu)建體的宿主或宿主細(xì)胞。40.包含按照權(quán)利要求38的核苷酸序列或核酸，和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))按照權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求35的化合物或構(gòu)建體的宿主或宿主細(xì)胞。41.制備按照權(quán)利要求25的氨基酸序列的方法，所述方法至少包括在按照權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列中形成二硫鍵的步驟。42.制備按照權(quán)利要求28的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括在按照權(quán)利要求27的化合物或構(gòu)建體中，在所述化合物或構(gòu)建體與按照權(quán)利要求22-24的氨基酸序列相對(duì)應(yīng)的部分中形成二硫鍵的步驟。43.制備按照權(quán)利要求36的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括在按照權(quán)利要求35的化合物或構(gòu)建體中，在所述化合物或構(gòu)建體與按照權(quán)利要求22-24的氨基酸序列相對(duì)應(yīng)的部分中形成二硫鍵的步驟。44.制備按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求34或35的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括下列步驟a)表達(dá)按照權(quán)利要求37或38的核苷酸序列或核酸；和任選地還包括b)分別分離如此表達(dá)的按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求34或35的化合物或構(gòu)建體。45.制備按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求34或35的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括a)在這樣的條件下培養(yǎng)或維持按照權(quán)利要求39或40的宿主或宿主細(xì)胞，以使得所述宿主或宿主細(xì)胞產(chǎn)生按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求27的化合物或構(gòu)建體；和任選地，還包括b)分別分離在步驟a)中獲得的按照權(quán)利要求1-24的氨基酸序列或按照權(quán)利要求34或35的化合物或構(gòu)建體。46.制備按照權(quán)利要求25的氨基酸序列或按照權(quán)利要求36的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括下列步驟a)表達(dá)按照權(quán)利要求38的核苷酸序列，和b)任選地還包括分別分離如此表達(dá)的按照權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求35的化合物或構(gòu)建體；和c)在按照權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求35的化合物或構(gòu)建體中在所述化合物或構(gòu)建體對(duì)應(yīng)于根據(jù)權(quán)利要求22-24的氨基酸序列的部分中形成二硫鍵。47.制備按照權(quán)利要求25的氨基酸序列或按照權(quán)利要求36的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括下列步驟a)在這樣的條件下培養(yǎng)或維持按照權(quán)利要求40的宿主或宿主細(xì)胞，以使得所述宿主或宿主細(xì)胞分別產(chǎn)生按照權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求35的化合物或構(gòu)建體，和b)任選地還包括分別分離如此生成的按照權(quán)利要求22-24的氨基酸序列或按照權(quán)利要求35的化合物或構(gòu)建體;.和c)在按照權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求35的化合物或構(gòu)建體中，在所述化合物或構(gòu)建體與按照權(quán)利要求22-24的氨基酸序列相對(duì)應(yīng)的部分中形成二硫鍵。48.通過(guò)權(quán)利要求41-47中任一項(xiàng)的方法獲得的氨基酸序列、化合物或構(gòu)建體。49.藥物組合物，其包括至少一種按照權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)或權(quán)利要求48的氨基酸序列，至少一種按照權(quán)利要求26-36中任一項(xiàng)或48的化合物或構(gòu)建體，和/或按照權(quán)利要求37或38的核苷酸序列；和任選地，至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。50.生成按照權(quán)利要求l-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列的方法，所述方法至少包括下列步驟a)提供氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；禾口/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白的片段；禾口/或(iii)包括CDR序列，但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；b)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列；和c)分離能夠結(jié)合于所述血清蛋白或所述其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。51.按照權(quán)利要求50的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于選自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或纖維蛋白原組成的組中的血清蛋白和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列；和/或以獲得能夠結(jié)合于血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。52.按照權(quán)利要求51的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。53.按照權(quán)利要求52的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于人血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。54.按照權(quán)利要求53的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白中不涉及(人)血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的一種或多種氨基酸序列。55.按照權(quán)利要求53或54的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白中不形成(人)血清清蛋白的結(jié)構(gòu)域III部分的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。56.按照權(quán)利要求50-55中任一項(xiàng)的方法，其中，在步驟b)過(guò)程中，所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體上。57.按照權(quán)利要求50-56中任一項(xiàng)的方法，其中步驟a)中使用的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)包括這樣的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，所述這樣的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)基本由側(cè)鄰2個(gè)源自免疫球蛋白構(gòu)架序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列組成；和/或由包括兩側(cè)側(cè)鄰構(gòu)架序列或構(gòu)架序列片段的CDR序列的免疫球蛋白序列片段組成。58.按照權(quán)利要求57的方法，其中步驟a)中使用的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)包括這樣的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，所述這樣的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)包括側(cè)鄰2個(gè)源自構(gòu)架序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列或基本由側(cè)鄰2個(gè)源自構(gòu)架序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列組成，所述構(gòu)架序列在所述CDR序列來(lái)源的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域中鄰近所述CDR序列。59.按照權(quán)利要求58的方法，其中步驟a)中使用的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)包括這樣的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，所述這樣的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)包括側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR2序列或基本由側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR2序列組成。60.按照權(quán)利要求58的方法，其中步驟a)中使用的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)包括這樣的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，所述這樣的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)包括側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR3序列或基本由側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR3序列組成。61.按照權(quán)利要求57-60中任一項(xiàng)的方法，其任選地還包括引入(即通過(guò)添加、插入或置換)l個(gè)或2個(gè)半胱氨酸殘基，以使得由此生成的氨基酸序列中的每個(gè)構(gòu)架序列包含至少1個(gè)半胱氨酸殘基。62.按照權(quán)利要求50-61中任一項(xiàng)的方法，其中步驟a)中使用的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)是通過(guò)至少包括下列步驟的方法獲得的a)提供編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)；b)利用位點(diǎn)-特異性引物的組合擴(kuò)增所述核苷酸序列，以使得擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；和/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白的片段；禾口/或(iii)包括CDR序列，但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；c)表達(dá)在步驟b)中獲得的擴(kuò)增片段，從而提供這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；和/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白的片段；和/或(iii)包括CDR序列，但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。63.按照權(quán)利要求62的方法，其中步驟a)中使用的編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)是免疫組、集合或文庫(kù)。64.按照權(quán)利要求63的方法，其中步驟a)中使用的編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)是免疫組、集合或文庫(kù)，所述免疫組、集合或文庫(kù)是從受血清蛋白適當(dāng)免疫(即由此產(chǎn)生針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的哺乳動(dòng)物中獲得的。65.按照權(quán)利要求64的方法，其中步驟a)中使用的編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)是這樣的核苷酸序列的免疫組、集合或文庫(kù)，所述核苷酸序列編碼獲自受血清蛋白適當(dāng)免疫(即由此產(chǎn)生針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的駱駝科動(dòng)物的重鏈抗體或VHH序列。66.按照權(quán)利要求62-65中任一項(xiàng)的方法，其中所述位點(diǎn)-特異性引物特異于編碼側(cè)鄰所述CDR序列的構(gòu)架序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即在用于擴(kuò)增的條件下)。67.按照權(quán)利要求62-66中任一項(xiàng)的方法，其中，在步驟b)中，利用位點(diǎn)-特異性引物的組合擴(kuò)增所述核苷酸序列，以使得擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR2序列組成；禾口/或(ii)包括包含CDR2序列的免疫球蛋白的片段；禾口/或(iii)包括CDR2序列但所述CDR2序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。68.按照權(quán)利要求66或67的方法，其中所述位點(diǎn)-特異性引物特異于分別編碼構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即在用于擴(kuò)增的條件下)。69.按照權(quán)利要求62-68中任一項(xiàng)的方法，其中，在步驟b)中，利用位點(diǎn)-特異性引物的組合擴(kuò)增所述核苷酸序列，以使得擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR3序列組成；禾口/或(ii)包括包含CDR3序列的免疫球蛋白的片段；和/或(iii)包括CDR3序列但所述CDR3序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。70.按照權(quán)利要求68或69的方法，其中所述位點(diǎn)-特異性引物特異于分別編碼構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即在用于擴(kuò)增的條件下)。71.按照權(quán)利要求50-61中任一項(xiàng)的方法，其中步驟a)中使用的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)是通過(guò)至少包括親和力成熟步驟的方法獲得的。72.生成按照權(quán)利要求l-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列的方法，所述方法至少包括下列步驟a)提供免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)；b)篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列；c)確定至少一種如步驟b)中鑒別的免疫球蛋白序列的核苷酸序列和/或氨基酸序列，所述免疫球蛋白序列能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和域確定其CDR序列和/或其包括CDR序列的片段的核苷酸序列和/或氨基酸序列；d)利用本身已知的任何合適技術(shù)制備按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)基本由具有步驟c)中確定的氨基酸序列的CDR序列組成；和/或(ii)包括具有在步驟c)中確定的氨基酸序列的免疫球蛋白片段；和/或(iii)包括具有在步驟c)中確定的氨基酸序列的CDR序列，但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。73.按照權(quán)利要求62的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于選自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或纖維蛋白原組成的組中的血清蛋白和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列；和/或以獲得能夠結(jié)合于血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或纖維蛋白原的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列。74.按照權(quán)利要求63的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列。75.按照權(quán)利要求74的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于人血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列。76.按照權(quán)利要求75的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)，以獲得能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白的不涉及(人)血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的一種或多種免疫球蛋白序列。77.按照權(quán)利要求75或76的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)；以獲得能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白的不形成(人)血清清蛋白的結(jié)構(gòu)域III部分的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列。78.按照權(quán)利要求72-77中任一項(xiàng)的方法，其中，在步驟b)過(guò)程中，所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體上。79.按照權(quán)利要求72-78中任一項(xiàng)的方法，其中所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)是天然免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)。80.按照權(quán)利要求72-78中任一項(xiàng)的方法，其中所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)是合成或半-合成的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)。81.按照權(quán)利要求72-78中任一項(xiàng)的方法，其中所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)是進(jìn)行了親和力成熟的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)。82.按照權(quán)利要求72-78中任一項(xiàng)的方法，其中所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)是免疫球蛋白序列的免疫組、集合或文庫(kù)。83.按照權(quán)利要求82的方法，其中步驟a)中使用的編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)是免疫組、集合或文庫(kù)，所述免疫組、集合或文庫(kù)是獲自受血清蛋白適當(dāng)免疫(即由此產(chǎn)生針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的哺乳動(dòng)物的。84.按照權(quán)利要求83的方法，其中步驟a)中使用的免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)是重鏈抗體或VHH序列的免疫組、集合或文庫(kù)，所述免疫組、集合或文庫(kù)獲自受血清蛋白適當(dāng)免疫(即由此產(chǎn)生針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的駱駝科動(dòng)物。85.按照權(quán)利要求72-83中任一項(xiàng)的方法，其中所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)是源自重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列的組、集合或文庫(kù)。86.按照權(quán)利要求85的方法，其中所述免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)是結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體或能夠起結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體作用的免疫球蛋白序列的組、集合或文庫(kù)。87.按照權(quán)利要求72-86中任一項(xiàng)的方法，其中所述CDR序列是CDR2序列。88.按照權(quán)利要求72-86中任一項(xiàng)的方法，其中所述CDR序列是CDR3序列。89.生成按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列的方法，所述方法至少包括下列步驟a)提供源自駱駝科動(dòng)物的表達(dá)免疫球蛋白序列的細(xì)胞的組、集合或文庫(kù)；b)篩選所述細(xì)胞的組、集合或文庫(kù)，以獲得(i)表達(dá)能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的免疫球蛋白序列的細(xì)胞；和(ii)表達(dá)重鏈抗體的細(xì)胞；其中子步驟(i)和(ii)可以基本作為單一篩選步驟或作為兩個(gè)分開(kāi)的篩選步驟以任何合適的順序執(zhí)行，從而提供至少一種表達(dá)重鏈抗體的細(xì)胞，所述重鏈抗體能夠結(jié)合于血清蛋白的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域或表位和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；c)確定由步驟b)中提供的細(xì)胞表達(dá)的至少一種重鏈抗體的核苷酸序列和/或氨基酸序列，所述重鏈抗體能夠結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和/或確定其CDR序列和/或其包括CDR序列的片段的核苷酸序列和/或氨基酸序列；d)利用本身已知的任何合適技術(shù)制備按照權(quán)利要求1-24任一項(xiàng)的氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)基本由具有步驟c)中確定的氨基酸序列的CDR序列組成；和/或(ii)包括具有在步驟c)中確定的氨基酸序列的免疫球蛋白片段；和/或(iii)包括具有在步驟c)中確定的氨基酸序列的CDR序列，但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。90.按照權(quán)利要求89的方法，其中所述細(xì)胞的集合或樣品是B-細(xì)胞的集合或樣品。91.按照權(quán)利要求89或90的方法，其中所述細(xì)胞集合或樣品獲自受抗原適當(dāng)免疫的駱駝科動(dòng)物，所述抗原包括血清蛋白需要的結(jié)構(gòu)域或表位，從而產(chǎn)生針對(duì)需要的結(jié)構(gòu)域或表位的免疫應(yīng)答。92.按照權(quán)利要求89-91中任一項(xiàng)的方法，其中步驟b)的篩選是利用流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)諸如FACS執(zhí)行的。93.生成編碼按照權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的氨基酸序列的核苷酸序列的方法，所述方法至少包括下列步驟a)提供編碼這樣的氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；和/或(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白片段；和/或(m)包括CDR序列但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊；b)篩選所述編碼氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列可以結(jié)合于血清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和c)分離編碼氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列可以結(jié)合于所述血清蛋白或所述其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)λ鲅宓鞍谆蛩銎渲辽僖粋€(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域具有親和力。94.按照權(quán)利要求93的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得編碼這樣氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列能夠結(jié)合于選自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或纖維蛋白原組成的組中的血清蛋白和/或?qū)ζ渚哂杏H和力；和/或以獲得能夠結(jié)合于血清清蛋白、血清免疫球蛋白諸如IgG、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或纖維蛋白原的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力的氨基酸序列。95.按照權(quán)利要求94的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得編碼這樣氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列能夠結(jié)合于血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力。96.按照權(quán)利要求95的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得編碼這樣氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列能夠結(jié)合于人血清清蛋白或其至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力。97.按照權(quán)利要求96的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得一種或多種編碼氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列可以結(jié)合于(人)血清清蛋白中不涉及(人)血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力。98.按照權(quán)利要求96或97的方法，其中，在步驟b)中，篩選所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得編碼氨基酸序列的核苷酸序列，所述氨基酸序列可以結(jié)合于(人)血清清蛋白中不形成(人)血清清蛋白的結(jié)構(gòu)域III部分的至少一個(gè)部分、片段、表位或結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ渚哂杏H和力。99.按照權(quán)利要求93-98中任一項(xiàng)的方法，其中，在步驟b)過(guò)程中，所述核苷酸序列組、集合或文庫(kù)作為氨基酸序列展示在噬菌體、噬菌粒、核糖體或合適的微-生物體上。100.按照權(quán)利要求93-99中任一項(xiàng)的方法，其中步驟a)中使用的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)包括編碼這樣的氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列基本由側(cè)鄰2個(gè)源自免疫球蛋白構(gòu)架序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列組成；和/或由包括兩側(cè)側(cè)鄰構(gòu)架序列或構(gòu)架序列片段的CDR序列的免疫球蛋白序列片段組成。101.按照權(quán)利要求100的方法，其中步驟a)中使用的核苷酸序列的組、集合或文庫(kù)包括編碼這樣的氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列包括側(cè)鄰2個(gè)源自構(gòu)架序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列或基本由側(cè)鄰2個(gè)源自構(gòu)架序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR序列組成，所述構(gòu)架序列在所述CDR序列來(lái)源的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域中鄰近所述CDR序列。102.按照權(quán)利要求101的方法，其中步驟a)中使用的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)包括編碼這樣的氨基酸序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)，所述氨基酸序列包括側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR2序列或基本由側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR2序列組成。103.按照權(quán)利要求102的方法，其中步驟a)中使用的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)包括編碼這樣的氨基酸序列的核苷酸序列的組、集合或文庫(kù)，所述這樣的氨基酸序列包括側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR3序列或基本由側(cè)鄰2個(gè)分別源自構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的旁側(cè)氨基酸序列的CDR3序列組成。104.按照權(quán)利要求100-103中任一項(xiàng)的方法，其任選地還包括引入(即通過(guò)添加、插入或置換1個(gè)或多個(gè)核苷酸)編碼1個(gè)或2個(gè)半胱氨酸殘基的密碼子，以使得由此獲得的核苷酸序列編碼的氨基酸序列中的每個(gè)構(gòu)架序列包含至少1個(gè)半胱氨酸殘基。105.按照權(quán)利要求93-104中任一項(xiàng)的方法，其中步驟a)使用的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)通過(guò)至少包括以下步驟的方法獲得a)提供編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)；b)利用位點(diǎn)-特異性引物的組合擴(kuò)增所述核苷酸序列，以使擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR序列組成；和域(ii)包括包含CDR序列的免疫球蛋白片段；和/或(iii)包括CDR序列但所述CDR序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。106.按照權(quán)利要求105的方法，其中步驟a)中使用的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)是免疫組、集合或文庫(kù)。107.按照權(quán)利要求105的方法，其中步驟a)中使用的編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)是免疫組、集合或文庫(kù)，所述免疫組、集合或文庫(kù)是獲自受血清蛋白適當(dāng)免疫(即由此產(chǎn)生針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的哺乳動(dòng)物的。108.按照權(quán)利要求107的方法，其中步驟a)中使用的編碼免疫球蛋白序列的核苷酸序列組、集合或文庫(kù)是核苷酸序列的免疫組、集合或文庫(kù)，所述核苷酸序列編碼獲自受血清蛋白適當(dāng)免疫(即由此產(chǎn)生針對(duì)所述血清蛋白的免疫應(yīng)答)的駱駝科動(dòng)物的重鏈抗體或VHH序列。109.按照權(quán)利要求105-108中任一項(xiàng)的方法，其中所述位點(diǎn)-特異性引物特異于編碼側(cè)鄰所述CDR序列的構(gòu)架序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即在用于擴(kuò)增的條件下)。110.按照權(quán)利要求105-108中任一項(xiàng)的方法，其中，在步驟b)中，利用位點(diǎn)-特異性引物的組合擴(kuò)增所述核苷酸序列，以使得擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR2序列組成；和/或(ii)包括包含CDR2序列的免疫球蛋白的片段；和/或(iii)包括CDR2序列但所述CDR2序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。111.按照權(quán)利要求109或110的方法，其中所述位點(diǎn)-特異性引物特異于分別編碼構(gòu)架2序列和構(gòu)架3序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即在用于擴(kuò)增的條件下)。112.按照權(quán)利要求105^108中任一項(xiàng)的方法，其中，在步驟b)中，利用位點(diǎn)-特異性引物的組合擴(kuò)增所述核苷酸序列，以使得擴(kuò)增的片段編碼這樣的氨基酸序列的組、文庫(kù)或集合，所述氨基酸序列(i)基本由CDR3序列組成；和/或(ii)包括包含CDR3序列的免疫球蛋白的片段；和/或(iii)包括CDR3序列但所述CDR3序列不包括免疫球蛋白折疊且也不能形成免疫球蛋白折疊。113.按照權(quán)利要求111或112的方法，其中所述位點(diǎn)-特異性引物特異于分別編碼構(gòu)架3序列和構(gòu)架4序列的核苷酸序列和/或能夠與其雜交(即在用于擴(kuò)增的條件下)。114.按照權(quán)利要求50-61中任一項(xiàng)的方法，其中步驟a)中使用的核苷酸序列的組、集合或文庫(kù)編碼通過(guò)至少包括親和力成熟步驟的方法獲得的氨基酸序列。115.按照權(quán)利要求93-114中任一項(xiàng)的方法，其還包括表達(dá)由此獲得的核苷酸序列的步驟。116.按照權(quán)利要求93-114中任一項(xiàng)的方法，其還包括下列步驟任選通過(guò)一種或多種編碼一種或多種接頭的核苷酸序列，使一種或多種由此獲得的核苷酸序列彼此連接和/或使其連接于一種或多種編碼包括氨基酸序列或基本由氨基酸序列組成的治療部分的核苷酸序列連接，從而提供按照權(quán)利要求38或39的核苷酸序列。117.能夠結(jié)合于血清蛋白和包括至少一個(gè)二硫鍵的氨基酸序列。118.按照權(quán)利要求117的氨基酸序列，其具有少于90個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選少于50個(gè)氨基酸殘基，諸如約40,30或20個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。119.按照權(quán)利要求117或118的氨基酸序列，其包括肽序列或基本由肽序列組成，所述肽序列能夠結(jié)合于側(cè)鄰2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列的血清蛋白，其中每個(gè)旁側(cè)氨基酸序列包含形成二硫鍵部分的半胱氨酸殘基。120.按照權(quán)利要求119的氨基酸序列，其中所述肽序列具有3-30個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選5-25個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。121.按照權(quán)利要求119或120的氨基酸序列，其中所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列各具有1-30個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選2-20個(gè)氨基酸殘基，諸如約5,10或15個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。122.按照權(quán)利要求119-121中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列源自免疫球蛋白構(gòu)架序列和/或免疫球蛋白構(gòu)架序列的片段。123.按照權(quán)利要求122的氨基酸序列，其中所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列源自免疫球蛋白構(gòu)架序列，且其中形成二硫鍵部分的各個(gè)旁側(cè)氨基酸序列中的半胱氨酸殘基是所述免疫球蛋白構(gòu)架序列(或所述其片段中)中天然存在的半胱氨酸殘基和/或已被弓I入到所述免疫球蛋白構(gòu)架序列中(或所述其片段中)的半胱氨酸殘基。124.按照權(quán)利要求119-123中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述肽序列是合成肽序列。125.按照權(quán)利要求119-124中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述肽序列是利用親和力成熟技術(shù)生成的序列。126.按照權(quán)利要求119-123中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述肽序列基本由CDR序列組成。127.按照權(quán)利要求126的氨基酸序列，其中所述肽序列基本由源自VH-,Vl-或Vhh-序列的CDR序列組成，所述VH-，Vl-或Vmr序列能夠結(jié)合于血清蛋白。128.按照權(quán)利要求126或127的氨基酸序列，其中所述肽序列基本由源自(單)結(jié)構(gòu)域抗體、dAb、或納米抗體⑧或其片段的CDR序列組成。129.按照權(quán)利要求126-128中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述肽序列基本由CDR2序列組成。130.按照權(quán)利要求129的氨基酸序列，其中分別地，所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列之一源自構(gòu)架2序列和/或構(gòu)架2序列的片段，且其中另一個(gè)旁側(cè)氨基酸序列源自構(gòu)架3序列和/或是構(gòu)架3序列的片段。131.按照權(quán)利要求126-128中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述肽序列基本由CDR3序列組成。132.按照權(quán)利要求130的氨基酸序列，其中分別地，所述2個(gè)旁側(cè)氨基酸序列之一源自構(gòu)架3序列和/或構(gòu)架3序列的片段，且其中另一個(gè)旁側(cè)氨基酸序列源自構(gòu)架4序列和/或是構(gòu)架4序列的片段。133.按照權(quán)利要求117-132中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其能夠以這樣的方式結(jié)合于血清蛋白，以致不(顯著)縮短血清蛋白分子的半衰期。134.按照權(quán)利要求117-133中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于選自由血清清蛋白、血清免疫球蛋白、甲狀腺素-結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原或其片段組成的組的血清蛋白。135.按照權(quán)利要求117-134中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于血清清蛋白或其片段。136.按照權(quán)利要求135的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于人血清清蛋白或其片段。137.按照權(quán)利要求136的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白上不涉及血清清蛋白和FcRn的結(jié)合的氨基酸殘基。138.按照權(quán)利要求134-137中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于(人)血清清蛋白上不形成血清清蛋白的結(jié)構(gòu)域III部分的氨基酸殘基。139.包含至少一種按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列和至少一種治療部分的化合物或構(gòu)建體。140.按照權(quán)利要求139的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一種按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列分別直接連接于所述至少一種治療部分或通過(guò)一種或多種合適的接頭或間隔區(qū)連接于所述至少一種治療部分。141.按照權(quán)利要求139或140的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一種治療部分包括氨基酸序列或基本由氨基酸序列組成。142.按照權(quán)利要求139-141中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一種治療部分包括免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段；包括所述免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段的蛋白質(zhì)或多肽或基本由免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段；包括免疫球蛋白序列或其抗原-結(jié)合片段，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原-結(jié)合片段的蛋白質(zhì)或多肽組成。143.按照權(quán)利要求142的化合物或構(gòu)建體，其中所述治療部分包括或基本由(單)結(jié)構(gòu)域抗體、"dAb"、或納米抗體⑧組成。144.按照權(quán)利要求141-143中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一種按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列直接連接于所述至少一種治療部分或通過(guò)一種或多種合適的接頭或間隔區(qū)連接于所述至少一種治療部分，其中所述至少接頭或間隔區(qū)包括氨基酸序列或基本由氨基酸序列組成。145.按照權(quán)利要求139-145中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體，其包括(融合)蛋白或(融合)多肽或基本由(融合)蛋白或(融合)多肽組成，所述(融合)蛋白或(融合)多肽包括至少一種按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列和至少一種治療部分。146.按照權(quán)利要求145的化合物或構(gòu)建體，其包括(融合)蛋白或(融合)多肽或基本由(融合)蛋白或(融合)多肽組成，所述(融合)蛋白或(融合)多肽包括至少一種按照權(quán)利要求119-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列和至少一種治療部分。147.核苷酸序列或核酸，所述核苷酸序列或核酸編碼具有與按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列或編碼具有與按照權(quán)利要求145或146的化合物或構(gòu)建體相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列。148.宿主或宿主細(xì)胞，所述宿主或宿主細(xì)胞包含按照權(quán)利要求147的核苷酸序列或核酸和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))這樣的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有與按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列相同的一級(jí)氨基酸序列，或具有與按照權(quán)利要求145或146的化合物或構(gòu)建體相同的一級(jí)氨基酸序列。149.制備按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求145或146的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括下列步驟a)分別提供具有與按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列或與按照權(quán)利要求145或146的化合物或構(gòu)建體相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列；b)在所述氨基酸序列中形成二硫鍵，從而分別提供按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求145或146的化合物或構(gòu)建體。150.制備按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求145或146的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括下列步驟a)表達(dá)按照權(quán)利要求147的核苷酸序列或核酸，從而分別提供具有與按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列或具有與按照權(quán)利要求145或146的氨基酸序列相同的一級(jí)氨基酸序列的氨基酸序列；和任選還包括b)分離步驟b)中獲得的氨基酸序列；和c)在步驟a)中獲得的氨基酸序列中或，當(dāng)執(zhí)行步驟b)時(shí)，在步驟b)中獲得的氨基酸序列中分別形成二硫鍵，從而分別提供按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列或按照權(quán)利要求145或146的化合物或構(gòu)建體。151.通過(guò)權(quán)利要求41-47中任一項(xiàng)的方法獲得的氨基酸序列、化合物或構(gòu)建體。152.藥物組合物，其包括至少一種按照權(quán)利要求117-138或151中任一項(xiàng)的氨基酸序列，至少一種按照權(quán)利要求139-146或151中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體，和/或至少一種按照權(quán)利要求147的核苷酸序列；和任選地，至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。153.制備按照權(quán)利要求26-36中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括使至少一種按照權(quán)利要求1-25或48中任一項(xiàng)的氨基酸序列，任選地通過(guò)一種或多種合適的接頭或間隔區(qū)，連接于至少一種治療部分的步驟。154.制備按照權(quán)利要求26-36中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括使按照權(quán)利要求25的氨基酸序列，任選地通過(guò)一種或多種合適的接頭或間隔區(qū)，連接于至少一種治療部分的步驟。155.制備按照權(quán)利要求139-146或151中任一項(xiàng)的化合物或構(gòu)建體的方法，所述方法至少包括使至少一種按照權(quán)利要求117-138中任一項(xiàng)的氨基酸序列，任選地通過(guò)一種或多種合適的接頭或間隔區(qū)，連接于至少一種治療部分的步驟。156.通過(guò)權(quán)利要求153-155中任一項(xiàng)的方法獲得的化合物或構(gòu)建體。157.藥物組合物，其包括至少一種按照權(quán)利要求156的氨基酸序列；和任選地至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。全文摘要本發(fā)明涉及能夠結(jié)合于血清蛋白的氨基酸序列；涉及包括或基本由所述氨基酸序列組成的化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體；涉及編碼所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體的核酸；涉及包括所述氨基酸、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體的組合物，且具體地藥物組合物；和涉及所述氨基酸、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體的用途。文檔編號(hào)C07K14/435GK101611056SQ200780050956公開(kāi)日2009年12月23日申請(qǐng)日期2007年12月5日優(yōu)先權(quán)日2006年12月5日發(fā)明者亨德里克斯·雷內(nèi)瑞斯·雅各布斯·馬托伊斯·霍根博姆,希爾德·阿迪·皮埃雷特·勒韋茲,彼得·維爾希森,斯特凡妮·斯塔埃朗,約斯特·亞歷山大·科爾克曼申請(qǐng)人:埃博靈克斯股份有限公司