專利名稱：使用共軛聚電解質(zhì)結(jié)合病理形式的蛋白質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及固定在固體載體上或者游離在溶液中的共軛聚電解質(zhì)(CPEs)用于如 下的用途用于特定分離，例如俘獲錯折疊的、病理或劣種形式的蛋白質(zhì)，即淀粉樣形式、錯 折疊形式或聚集形成，和類似地引起在其正常形式不聚集的蛋白質(zhì)的異常形式聚集的蛋白 質(zhì)?？梢栽趯τ阱e折疊蛋白質(zhì)形式的選擇性條件下，使用一種CPE或幾種CPE可選地進(jìn)行錯 折疊蛋白質(zhì)的所述俘獲。本發(fā)明還涉及俘獲和檢測錯折疊的、病理或劣種形式的蛋白質(zhì)的 一步方法，其可以在錯折疊蛋白質(zhì)的非選擇性條件下選擇性的進(jìn)行。本發(fā)明的另一方面是 CPEs作為錯折疊形式或聚集形式的蛋白質(zhì)，特別是淀粉樣形式和病理形式的蛋白質(zhì)體內(nèi)成 像工具。本發(fā)明還涉及使用官能化的共軛聚電解質(zhì)通過例如MRI對錯折疊蛋白質(zhì)的體內(nèi)成 像方法。 本發(fā)明通過使用CPE用于分離，例如俘獲、結(jié)合或干擾樣品中(回體或體內(nèi))錯折 疊蛋白質(zhì)來解決現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，俘獲和檢測所述蛋白質(zhì)、用于診斷的新型光學(xué)方法和可 能的治療劑，所有都是基于共軛聚電解質(zhì)。現(xiàn)有技術(shù)證實(shí)CPEs能可靠地檢測體外和在回體 組織樣品中的淀粉樣纖顫[W02005109005]。使用CPEs俘獲促淀粉樣結(jié)構(gòu)的物理化學(xué)原理 依賴于所述聚電解質(zhì)的重復(fù)結(jié)構(gòu)，其與提供非常高親和性的對稱重復(fù)的分子靶點(diǎn)(淀粉樣 變性分子)有關(guān)。因此，基于選擇性CPE的方法能夠俘獲與許多疾病相關(guān)的病原性和淀粉 狀蛋白。根據(jù)本發(fā)明，用于俘獲錯折疊形式或聚集形式的蛋白質(zhì)，特別是淀粉樣形式和病理 形式蛋白質(zhì)的工具和方法，以及與這些蛋白質(zhì)形式相關(guān)的疾病的治療全都基于共軛聚電解 質(zhì)。 包含錯折疊蛋白質(zhì)的樣品包括，但不限于血液、腦、外周組織、均質(zhì)化的腦、均質(zhì)化 的外周組織、體液、活組織檢查、尿、腦脊液(CSF)、淋巴液、血漿、在用于蛋白質(zhì)藥物的緩沖 液和生物技術(shù)生長培養(yǎng)基中的制劑。 本發(fā)明的一個(gè)方面是共軛聚電解質(zhì)作為錯裝配/聚集形式的蛋白質(zhì)，特別是淀粉 樣原纖維和病原性形式的蛋白質(zhì)的俘獲劑的用途。當(dāng)用作俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的試劑時(shí)，所 述共軛聚電解質(zhì)可以固定在固體載體上、任何粒徑的珠粒上、管中、透析裝置中、泵中，或者 以在溶液中的游離形式提供。所述CPE也可以具有水凝膠形式。如果所述CPE以在溶液 中的游離形式提供，在被CPE俘獲后，可以采用任何方式分離錯折疊蛋白質(zhì)的，例如通過沉 淀、離心、吸附、吸收、干燥、煮沸或蒸發(fā)來分離。可選地，可以官能化所述CPE以提供檢測、 固定、促進(jìn)俘獲、增加選擇性、增加親和性或?qū)y定有意義的其它特征的方式(means)。
有趣的是，可以使用共軛聚電解質(zhì)，如聚(噻吩)、聚(3，4-乙烯基二氧基噻吩)或 聚(吡咯)來檢測錯折疊蛋白質(zhì)[W02005109005]。由于通過采集系統(tǒng)反應(yīng)的放大，基于共 軛聚電解質(zhì)的傳感器對于非常小的干擾非常靈敏，因此，與現(xiàn)有技術(shù)的基于分子的傳感器 相比，其提供了重要的優(yōu)點(diǎn)，所述聚電解質(zhì)也提供了病原性朊病毒蛋白質(zhì)的直接檢測。根據(jù) 本發(fā)明，將CPEs的該直接檢測功能與俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的獨(dú)特能力相結(jié)合，從而提供了比 常規(guī)免疫組織學(xué)技術(shù)極大的優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)槌Ｒ?guī)免疫組織學(xué)技術(shù)的方法通常需要使用用于俘獲 的一級抗體和用于顯影錯折疊蛋白質(zhì)的二級抗體。使用共軛聚電解質(zhì)作為用于錯折疊蛋白 質(zhì)的俘獲劑的可能性要求聚合物與水相環(huán)境相容，這已經(jīng)通過制備共軛的發(fā)光聚電解質(zhì)實(shí)
6現(xiàn)了。 在本發(fā)明中，描述了一種使用CPEs俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的新方法。可以使用CPEs實(shí)
現(xiàn)樣品中錯折疊蛋白質(zhì)的分離，例如從所述樣品中去除它們，這在之前從來沒有描述過。提
供一種使用CPEs來染色和俘獲樣品溶液中錯折疊蛋白質(zhì)，接著沉淀的方法。使用CPEs的
方法具有不同于其它淀粉樣營養(yǎng)(amyloidotrophic)染料如剛果紅和ThT的其它性質(zhì)，最
重要地是CPEs提供錯折疊蛋白質(zhì)的俘獲。因此，在本發(fā)明中預(yù)期了使用CPEs俘獲錯折疊
蛋白質(zhì)的幾種方法。所述CPE可以固定在固體載體上，從而提供一種具有高選擇性和高親
和性的俘獲錯折疊蛋白質(zhì)到所述固體載體，從而從樣品中分離或去除其的方法。 在本發(fā)明的進(jìn)一步的方面，提供一種俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的方法，包括將如上定義
的共軛聚電解質(zhì)暴露于樣品，其中所述共軛聚電解質(zhì)選擇性地俘獲樣品中錯折疊蛋白質(zhì)。 —方面，本發(fā)明涉及用于俘獲固體載體上的樣品中錯折疊蛋白質(zhì)物種的方法，其
包括以下步驟-將至少一種共軛聚電解質(zhì)(CPE)固定在固體載體上
-使樣品與所述CPE接觸
-可選地，加入競爭劑-從樣品中去除所述固體載體或者從樣品中分離所述固體載體，或-洗滌所述固體載體，而不從CPE相中去除俘獲的錯折疊蛋白質(zhì)-可選地，通過優(yōu)選的方法檢測俘獲的錯折疊蛋白質(zhì)，然后，由此原始樣品溶液不
包含或包含很少錯折疊蛋白質(zhì)。 另一方面，本發(fā)明涉及用于俘獲溶液中的樣品中錯折疊蛋白質(zhì)物種的方法，其包 括以下步驟-使樣品與至少一種共軛聚電解質(zhì)(CPE)結(jié)合-可選地，加入競爭劑-從樣品中分離俘獲的錯折疊蛋白質(zhì)-可選地，通過優(yōu)選的方法檢測俘獲的錯折疊蛋白質(zhì)，然后，由此原始樣品溶液不 包含或包含很少錯折疊蛋白質(zhì)。 在本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案中，將競爭劑加入到溶液中以增加俘獲錯折疊蛋白質(zhì) 的CPE與結(jié)合例如非特異性結(jié)合天然或未折疊的蛋白質(zhì)的CPE的區(qū)別性。這樣的試劑包括， 但不限于洗滌劑、離子、鹽、螯合劑和溶劑。 如果進(jìn)行對CPE俘獲的錯折疊蛋白質(zhì)的檢測，在本發(fā)明的方法中使用的輻射具有 的波長為約100nm至約2000nm之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用在可見范圍中的輻射。使用 多個(gè)光子激發(fā)也是可能的，因此，使用2x或3x(分別為雙光子和三光子激發(fā))的輻射代替 x nm的激發(fā)輻射。 另一方面，本發(fā)明涉及實(shí)施根據(jù)本發(fā)明的方法的裝置。這樣的裝置設(shè)有固定在固 體載體上或溶液中的使CPE與樣品接觸的部件、用于可選地加入競爭劑的部件、可選地從 樣品中去除CPE或從樣品中分離CPE的部件、可選地洗滌CPE相而不會從所述CPE相中去 除俘獲的錯折疊蛋白質(zhì)的部件、可選地通過優(yōu)選的方法檢測俘獲的錯折疊蛋白質(zhì)的部件以 及可選地收集暴露于所述CPE的樣品溶液的部件。 優(yōu)選地，在本發(fā)明中使用的共軛聚電解質(zhì)包括噻吩、吡咯、苯胺、呋喃、亞苯基、亞乙烯基、芴、乙烯基二氧噻吩及其取代形式的共聚物或均聚物，所述共軛聚電解質(zhì)可以具有
一個(gè)或多個(gè)離子側(cè)鏈官能度，如氨基酸、氨基酸衍生物、神經(jīng)遞質(zhì)、單糖、核酸或其組合和化
學(xué)修飾的衍生物。所述離子官能度可以包括一個(gè)或多個(gè)陰離子和陽離子側(cè)鏈官能度。 在本發(fā)明中所用的CPE也可以具有末端官能化的基團(tuán)，其中所述官能基可以為，
但不限于DNA、 RNA、肽、氨基酸、組氨酸(histidin)、組氨酸1Q(histidir^。)、蛋白質(zhì)、肽支架
(p印tidescaffolds)、生物素、抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素、螯合劑、活性基團(tuán)、抗體、酶、
配體、受體配體、類固醇、生物分子或其它分子、納米顆粒、微粒、金納米顆粒、金微粒、磁珠、
蛋白質(zhì)涂布的珠粒、肽涂布的珠粒、超磁(supramagnetic)珠粒或顆粒、禮納米顆粒、禮離
子、摻雜鑭系元素的納米顆粒、摻雜鑭系元素的氧化釓納米顆粒、鑭系元素顆粒。 在本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案中，用DNA、 RNA、肽、氨基酸、組氨酸、組氨酸，蛋白
質(zhì)、肽支架(p印tide scaffolds)、生物素、抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素、螯合劑、活性基
團(tuán)、抗體、酶、配體、受體配體、類固醇、生物分子或其它分子、納米顆粒、微粒、金納米顆粒、
金微粒、磁珠、蛋白質(zhì)涂布的珠粒、肽涂布的珠粒、超磁珠?；蝾w粒、禮納米顆粒、禮離子、摻
雜鑭系元素的納米顆粒、摻雜鑭系元素的氧化釓納米顆粒、鑭系元素顆粒官能化的CPE可
以為實(shí)質(zhì)上共價(jià)的或非共價(jià)的。 在本發(fā)明的一方面提供一種方法，其檢測從屏障如管壁、膜、皮膚等的后面的天然 形式蛋白質(zhì)中錯裝配/聚集形式的蛋白質(zhì)，特別是淀粉樣原纖維和病原性形式的蛋白質(zhì)的 形成，該方法包括注入、流入、泵入、吸入、輸入或通過其它方式將樣品暴露于屏障之后，并 通過適當(dāng)?shù)臋z測部件(means of detection)來檢測所述屏障之后或之內(nèi)的所述錯折疊的 靶蛋白。用于檢測和給藥CPEs的部件可以變化，這取決于根據(jù)本發(fā)明的側(cè)-鏈或末端官能 化，其在說明書的其它部分舉例說明。 本發(fā)明的另一方面提供用于涉及錯裝配/聚集形式的蛋白質(zhì)，特別是淀粉樣原纖
維和病原性形式的蛋白質(zhì)形成的疾病的基于共軛聚電解質(zhì)的治療方法和治療劑，所述疾病
如阿爾茨海默氏病、克雅病(CJD)、變異的克雅病(vCJD)、繼發(fā)性淀粉樣變性、2型糖尿病、
傳染性海綿樣腦病(TSE，如CWD、羊瘙癢病、GSS和庫魯癥、牛海綿樣腦病(BSE))。 本發(fā)明的另一方面為生物測定，其依靠在天然蛋白質(zhì)的存在下，使用CPE俘獲淀
粉樣形式、錯折疊形式或病理性形式的蛋白質(zhì)的步驟期間的全面區(qū)分，和隨后通過適當(dāng)?shù)?br> 方法來檢測，如基于比色、吸光度、或熒光的方法。避免假陽性和避免假陰性結(jié)果非常重要。
天然蛋白質(zhì)的選擇性蛋白水解可以是但并不必需，獲得這點(diǎn)的一種方法。 本發(fā)明的另一方面涉及CPEs的獨(dú)特性，其不僅俘獲錯裝配形式、錯折疊形式、聚
集形式或病原性形式的蛋白質(zhì)的俘獲，而且能夠起俘獲劑的作用，同時(shí)如有必要，其可報(bào)道
所述俘獲事件，并將其轉(zhuǎn)化成光信號和可檢測信號。 可能希望鑒定的多種形式的錯折疊蛋白質(zhì)意味著，在更進(jìn)一步的方面，本發(fā)明也 可以以微陣列的形式實(shí)施，該微陣列要求將檢測系統(tǒng)固定和模式化在表面上。然后，在溶液 中或在固體載體上，使用本發(fā)明的共軛聚電解質(zhì)作為錯折疊蛋白質(zhì)的俘獲劑，并且如果期 望或需要，使用其作為用于所述俘獲事件的檢測劑。
本發(fā)明的全部范圍為附加權(quán)利要求書定義的。


圖1 :基于聚-噻吩主鏈和混合型聚_噻吩_苯主鏈的不同的CPEs的某些選擇實(shí) 例的化學(xué)結(jié)構(gòu)。可以構(gòu)建側(cè)鏈變化和定義的主鏈尺寸。這些已經(jīng)給出了如下單純的命名 P0WT、 PTAA、 P0MT、 PT1、 PT2、 tP0WT、 tPTMl、 f-PONT、 L-POMT禾卩D-POMT。
圖2 :官能化的CPEs。 Rl和R2 =末端/端官能化的。Rl和R2可以相同或不同。 Rs =側(cè)鏈。 圖3 :使用末端官能化的CPE或沒有末端官能化的CPE的任意淀粉狀蛋白聚合物 的俘獲示意圖。該圖形并不是按比例描繪的，并且不能代表CPE和淀粉狀蛋白之間的尺寸 關(guān)系。在本發(fā)明中，在錯折疊蛋白質(zhì)中淀粉狀蛋白單體的數(shù)量可以在一個(gè)至多個(gè)之間。而 且，CPEs可以固定在固體載體上，該實(shí)例顯示在后面的圖形中。官能化的或未官能化的CPE 分子的數(shù)量可以是一個(gè)至多個(gè)中的任何情形。在示意圖中，側(cè)鏈(Rs)沒有顯示。
圖4:顯示使用固定在固體載體上的CPE俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的示意圖。將樣品暴露 于固定在固體載體上的官能化的或未官能化的CPE中，由此所述CPE俘獲所述樣品中錯折 疊蛋白質(zhì)。該圖形不是按比例描繪的，并且不能代表CPE和錯折疊蛋白質(zhì)之間的尺寸關(guān)系。 官能化的或未官能化的CPE分子的數(shù)量可以是一個(gè)至多個(gè)中的任何情形。在示意圖中，側(cè) 鏈(Rs)沒有顯示。 圖5 :顯示使用CPE在合適的固體載體如載玻片、玻璃珠、過濾矩陣、分離矩陣等上 俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的示意圖。將樣品暴露于固定在固體載體上的官能化的或未官能化的 CPE中，由此所述CPE俘獲所述樣品中錯折疊蛋白質(zhì)。該圖形不是按比例描繪的，并且不能 代表CPE和錯折疊蛋白質(zhì)之間的尺寸關(guān)系。官能化的或未官能化的CPE分子的數(shù)量可以是 一個(gè)至多個(gè)中的任何情形。在示意圖中，側(cè)鏈(Rs)沒有顯示。 圖6 :使用重量沉降法檢測CPE PTAA染色的PrP-淀粉狀蛋白的原理。也給出PrP 的晶體結(jié)構(gòu)的尺寸作為微小聚集體中PrP含量的粒徑參考。 圖7 :顯示使用以CPE涂布的磁珠俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的示意圖。用官能化的CPE， 例如用生物素官能化的CPE涂布磁珠，例如用抗生物素蛋白涂布的磁珠。將樣品暴露于含 有CPE的磁珠，由此所述CPE俘獲所述樣品中錯折疊蛋白質(zhì)。該圖形不是按比例描繪的，并 且不能代表CPE和錯折疊蛋白質(zhì)之間的尺寸關(guān)系?？梢允褂么盆F作為收集/濃縮步驟。CPE 分子的數(shù)量可以是一個(gè)至多個(gè)中的任何情形。在示意圖中，側(cè)鏈(Rs)沒有顯示。在俘獲和 使用磁鐵收集/濃縮步驟之后，可以包括任選的檢測步驟。 圖8 :顯示使用生物素官能化的CPE和抗生物素蛋白涂布的表面俘獲錯折疊蛋白 質(zhì)的示意圖。所述官能化的CPE可以是原態(tài)或者在珠粒上。將樣品暴露于CPE，其中所述 CPE俘獲所述樣品中錯折疊蛋白質(zhì)?？梢允褂每股锼氐鞍淄坎嫉谋砻孀鳛槭占?濃縮步 驟。該圖形不是按比例描繪的，并且不能代表CPE和錯折疊蛋白質(zhì)之間的尺寸關(guān)系。CPE分 子的數(shù)量可以是一個(gè)至多個(gè)中的任何情形。在示意圖中，側(cè)鏈(Rs)沒有顯示。在俘獲和表 面收集/濃縮步驟之后，可以包括任選的檢測步驟。 圖9 :在通過0. 22 ii m過濾器過濾前后，在20mM pH 8的磷酸鹽緩沖液中的包含胰 島素的0. 5mg/ml Ptaa的熒光光譜。 圖10 :在通過O. 8iim過濾器過濾后，在20mM pH 8的磷酸鹽緩沖液中包含0、5、50 和100%原纖維的胰島素的0. 5mg/mlPtaa的熒光光譜。
圖11 :在通過O. 8iim過濾器的逆-過濾(back-filtration)后，在20mM pH 8的 磷酸鹽緩沖液中包含0、5、50和100%原纖維的具有胰島素的0. 5mg/ml Ptaa的熒光光譜。
圖12 :使用Ptaa-原纖維復(fù)合物的離心來俘獲原纖維，接著進(jìn)行熒光測量。
圖13 :熒光光譜，其證實(shí)一些選擇的CPEs和Gd203納米顆粒之間的相互作用。所 述測量在重蒸餾水中進(jìn)行。
具體實(shí)施例方式
—般而言，本發(fā)明涉及一種使用共軛聚電解質(zhì)俘獲錯裝配形式、錯折疊形式或聚 集形式的蛋白質(zhì)，特別是淀粉樣原纖維和病原性形式的蛋白質(zhì)的新方法。將所述錯折疊蛋 白質(zhì)暴露于共軛聚電解質(zhì)(CPE)中，由此CPE俘獲、結(jié)合或離析所述目標(biāo)錯折疊蛋白質(zhì)。與 對于天然折疊的蛋白質(zhì)相比，對于錯折疊蛋白質(zhì)，可以進(jìn)行具有高親和性或高選擇性的俘 獲。在其中共軛聚電解質(zhì)結(jié)合錯折疊的改變的蛋白質(zhì)，如PrP"或A-l3蛋白質(zhì)的條件下，進(jìn) 行所述俘獲，優(yōu)選地，但不是必須的，其中這樣的共軛聚電解質(zhì)結(jié)合這些異常形式而不會結(jié) 合它們的非聚集正常的天然形式。期望CPE和目標(biāo)錯折疊蛋白質(zhì)之間的非共價(jià)結(jié)合以足夠 高的親和性和在所選條件下發(fā)生并且具有足夠的選擇性，以在測定中有益于從樣品中俘獲 或離析聚集的、錯折疊的改變的蛋白質(zhì)。 根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語俘獲(c即ture)、結(jié)合(binding)或離析(isolation)是一般性 術(shù)語分離(s印aration)的子集。可以使用CPEs實(shí)現(xiàn)樣品中錯折疊蛋白質(zhì)的分離，例如從 所述樣品中去除它們，這是以前從來沒有描述過的。例如，可使樣品溶液流過具有固定在固 體載體上的CPE/CPEs的所述固體載體或流入其內(nèi)部。所述CPE/CPEs的作用是從樣品中俘 獲錯折疊蛋白質(zhì)，同時(shí)也從樣品中分離錯折疊蛋白質(zhì)。 如在本申請中使用的術(shù)語"俘獲(c即ture)"指 一 種探針(probe)，其可以在
回體或體內(nèi)結(jié)合錯折疊蛋白質(zhì)，從而在非聚集正常形式的所述蛋白質(zhì)存在下，將其分離 (separate)、離析(isolate)或固定。 本發(fā)明是基于使用與所述錯折疊蛋白質(zhì)相互作用的共軛聚電解質(zhì)來非共價(jià)性俘 獲錯折疊的、異常的、錯裝配的、聚集的或病原性的蛋白質(zhì)。所述相互作用在沒有共價(jià)鍵合 下發(fā)生，其基于共軛聚電解質(zhì)和錯折疊蛋白質(zhì)之間的偶極-偶極鍵合、氫鍵鍵合、靜電-和 非極性相互作用，本文稱為非共價(jià)鍵合，其進(jìn)一步包括任何類型的天然非共價(jià)的鍵合。
本發(fā)明的某些方面可以提供共軛聚電解質(zhì)與某些實(shí)體的共價(jià)連接，所述實(shí)體如蛋 白質(zhì)、錯折疊蛋白質(zhì)、肽、生物分子、其它分子或表面。 因此，本發(fā)明的一方面是一種方法，其中在天然形式的蛋白質(zhì)的存在下，使用共軛 聚電解質(zhì)分離，例如選擇性俘獲、結(jié)合或離析錯折疊蛋白質(zhì)、聚集的異常形式或病理性形式 的蛋白質(zhì)。將樣品暴露于固定在固體載體上或任何尺寸的珠粒上的共軛聚電解質(zhì)中，所述 珠粒呈水凝膠或呈溶液提供，由此所述共軛聚電解質(zhì)俘獲、結(jié)合或離析任何錯折疊的、聚集 的、錯裝配的或病原性的蛋白質(zhì)。所述方法可以在這樣的條件下進(jìn)行其中所述高親和力 (avidity)共軛聚電解質(zhì)可以選擇性地俘獲所述錯折疊蛋白質(zhì)，其對于在包含天然形式和 正常形式的蛋白質(zhì)以及錯折疊的形式的蛋白質(zhì)的樣品中的所述錯折疊的形式具有高選擇性。
所述共軛聚電解質(zhì)可以固定在合適類型和可適用形狀的固體載體上，其中所述固 體載體的表面存在樣品的共軛聚電解質(zhì)。所述固體載體的形狀和尺寸可以是任意類型，例如圓形、扁平形或珠粒形，表面可以用共軛聚電解質(zhì)以非共價(jià)方式改性，或在所述固體載體
結(jié)構(gòu)內(nèi)共價(jià)鍵合或附著于所述固體載體的表面。根據(jù)本發(fā)明的固體載體也構(gòu)成管、透析裝
置、泵、胰島素泵、給藥蛋白質(zhì)的裝置、注射器和針。當(dāng)固定在固體載體上時(shí)，所述共軛聚電
解質(zhì)可以是任何合適的形式，例如呈水凝膠、聚合物膜、游離的CPEs、支架或?qū)訝畹摹．?dāng)用作
俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的試劑時(shí)，所述CPEs也可以以在溶液中的游離形式提供。如果所述CPE
以在溶液中的游離形式提供，可以采用任何方法去除CPE俘獲后的錯折疊蛋白質(zhì)，例如沉
降、離心、吸附、吸收、干燥、煮沸或蒸發(fā)?？蛇x地，所述CPE可以被官能化，以提供用于檢測、
固定、促進(jìn)俘獲、增加選擇性、增加親和性或?qū)τ跍y定有意義的其它事情的方法。 所描述的俘獲、結(jié)合或離析條件可以包括存在提供給樣品的競爭劑，其中與共軛
聚電解質(zhì)相比，競爭劑對于錯折疊的形式的蛋白質(zhì)具有更小的結(jié)合親和力。通常，如果使用
競爭劑，其比共軛聚電解質(zhì)具有更少的親和性或選擇性。 可選地，可以將共軛聚電解質(zhì)涂布在固體載體表面上或鍵合在其上。 在科學(xué)文獻(xiàn)中，已經(jīng)報(bào)道了淀粉樣形式的蛋白質(zhì)，或至少蛋白酶敏感形式的錯折
疊蛋白質(zhì)可能與聚陰離子相互作用。這些帶負(fù)電的聚合物可能與錯折疊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的帶正
電荷的區(qū)域相互作用，并且可能與聚集的蛋白質(zhì)存在多種相互作用。我們發(fā)現(xiàn)共軛聚電解
質(zhì)能結(jié)合錯折疊蛋白質(zhì)聚集體，或者錯折疊蛋白質(zhì)的小的結(jié)合物，所述結(jié)合物甚至可以小
至淀粉狀蛋白的兩個(gè)單體，其結(jié)構(gòu)具有比這些聚陰離子高得多的親和力，因此，其甚至可以
替換所述聚陰離子化合物。CPEs的高親和力的一個(gè)可能的機(jī)制是CPEs可以與具有帶電荷
的取代基和疏水性共軛主鏈的錯折疊蛋白質(zhì)同時(shí)形成聚離子以及疏水性相互作用。因此，
固定在表面或溶液中的共軛聚電解質(zhì)可以特別地俘獲異常蛋白質(zhì)。天然蛋白質(zhì)是非聚集
的，通常不會具有與聚陰離子的高親和性相互作用?？梢赃x擇所述測定條件，使得較低親和
性的陰離子如洗滌劑薩考西(Sarkosyl)的存在，通過與固定的CPE或在溶液中的CPE競爭
來更進(jìn)一步改善俘獲特異性。 可以偶聯(lián)使用CPE的分離，例如俘獲、結(jié)合或離析樣品中的錯折疊的、聚集異常形 式或病理形式的蛋白質(zhì)，以改變所述CPE響應(yīng)俘獲、結(jié)合或離析所述錯折疊蛋白質(zhì)的性質(zhì)。 可以通過例如光學(xué)方法，如熒光或吸收來檢測CPE的性質(zhì)變化，然后，使用其來確定何時(shí)發(fā) 生所述俘獲事件。
其它檢測方法 根據(jù)本發(fā)明的方面，可以官能化所述共軛聚電解質(zhì)，以實(shí)現(xiàn)有效或期望的用于檢 測分離的方法。通過合適的方法進(jìn)行檢測鍵合或接觸所述錯折疊蛋白質(zhì)的共軛聚電解質(zhì)的 其它方法，所述合適的方法如雙光子或多光子光譜學(xué)、磁共振成像(MRI)、PET等。在此描 述了使屏障后的CPE和錯折疊蛋白質(zhì)的相互作用成像的一個(gè)實(shí)例，但存在其它顯而易見的 方法，所述屏障如管、膜、管、皮膚等。可以使用例如雙光子或多光子光譜學(xué)或磁共振成像 (MRI)在所述屏障后以一些方式檢測共軛聚電解質(zhì)或官能化的共軛聚電解質(zhì)，然后使用其 確定何時(shí)發(fā)生了所述分離，例如俘獲或結(jié)合事件。
作為治療劑的CPE 本發(fā)明還涉及共軛聚電解質(zhì)作為新的治療劑的用途，其中一種作用方式為干擾體 內(nèi)淀粉狀蛋白的形成。當(dāng)注射進(jìn)入生物體時(shí)，所述CPE可以改變淀粉狀蛋白的病理過程， 即，通過起治療的藥效團(tuán)作用影響疾病的發(fā)病。因此，當(dāng)臨死前診斷和治療對于公共衛(wèi)生具有巨大的影響和極大的利益時(shí)，在本發(fā)明中預(yù)期了該治療劑，所述治療劑為用于蛋白質(zhì)錯 折疊疾病，特別是阿爾茨海默氏病和朊病毒病的基于CPE的治療劑。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種方法，其中共軛聚電解質(zhì)直接俘獲所述錯折 疊蛋白質(zhì)。在這種情況下，所述俘獲在沒有共價(jià)鍵合下發(fā)生，其是基于共軛聚電解質(zhì)和生物 分子之間偶極_偶極鍵合、氫鍵鍵合、靜電_和非極性的相互作用，本文稱為非共價(jià)鍵合，其 進(jìn)一步包括任何類型的天然非共價(jià)的鍵合。 如在本申請中使用的術(shù)語"直接俘獲"指一種探針(probe)，其可以通過直接鍵合 所述錯折疊蛋白質(zhì)的來直接俘獲錯折疊蛋白質(zhì)，從而將其從樣品離析或固定在樣品中，而 不需要其它高分子化合物。 如本文中使用的術(shù)語"親和力(avidity)"應(yīng)當(dāng)采取其通常的含義，指分子與多價(jià) 結(jié)合劑的許多結(jié)合位點(diǎn)的整體結(jié)合強(qiáng)度。這應(yīng)當(dāng)與"親和性(affinity)"形成對比，其為各 單獨(dú)結(jié)合位點(diǎn)和分子及粘合劑的結(jié)合強(qiáng)度。 例如通過將所述共軛聚電解質(zhì)固定在基質(zhì)上，有可能適當(dāng)?shù)貙⒐倌芑蛭垂倌芑?的共軛聚電解質(zhì)作為俘獲裝置的活性組分實(shí)施。所述俘獲裝置包括用于所述基質(zhì)的合適的 容器，并且共軛聚電解質(zhì)和錯折疊蛋白質(zhì)的復(fù)合物在該基質(zhì)上形成?？蛇x地，所述CPE用于 檢測當(dāng)其出現(xiàn)時(shí)的俘獲事件。 然而，其它構(gòu)造方式是可能的，例如所述共軛聚電解質(zhì)可以以溶液提供，并且穿過 流動池，同時(shí)將蛋白質(zhì)溶液與復(fù)合物溶液流體混合?？梢酝ㄟ^各種分析技術(shù)監(jiān)測俘獲。
特別地，本發(fā)明使得用與錯折疊蛋白質(zhì)相互作用的共軛聚電解質(zhì)俘獲與疾病相關(guān) 的錯折疊蛋白質(zhì)。在研究用于診斷涉及錯折疊蛋白質(zhì)的疾病的方法中，錯折疊蛋白質(zhì)的俘 獲是從樣品中去除錯折疊蛋白質(zhì)、檢測在屏障后在樣品中錯折疊蛋白質(zhì)的分離以及基于共 軛聚電解質(zhì)的各種治療技術(shù)所必需的。 顯示出上述討論的特征的共軛聚電解質(zhì)的實(shí)例為聚(3-[(S)-5-氨基-5-羧 基-3-噁戊基]-2，5-硫代亞苯基鹽酸鹽)(P0WT)、聚噻吩乙酸(PTAA)、聚(3-[(S)-5-氨 基-5-甲氧基羧基-3-噁戊基]-2，5-硫代亞苯基鹽酸鹽)(P0MT)、聚((3，3 〃 -二 [(S)-5-氨基-5-羰基-3-噁戊基]-[2，2' ;5' ，2〃 ])_5，5〃 _叔硫代亞苯基鹽酸鹽) (tP0WT)、聚((1，4-二 (3-[(S)-5氨基-5-羰基-3-噁戊基]-噻吩-2-基)-苯)鹽酸 鹽)(f-PONT)、聚(3- [ (R) -5-氨基-5-甲氧基羧基-3-噁戊基]-2， 5-硫代亞苯基鹽酸鹽) (D-POMT)、聚(3- [ (S) -5-氨基-5-甲氧基羧基-3-噁戊基]-2 ， 5-硫代亞苯基鹽酸鹽) (L-POMT)及其它物質(zhì)，參見圖1。在本發(fā)明中，可以為包括這些及其它類型的共軛聚電解質(zhì) 如吡咯、乙烯基二氧噻吩、芴等的變體，包括L和D對映異構(gòu)體。CPE的長度可以是固定的、 可變的、單分散的或多分散的。 加入到側(cè)鏈(Rs)或末端(Rl和R2)的官能基顯示在圖2中。這些可以是，但不限 于荷電陰離子的、陽離子的或兩性離子的，具有在不同pH的pKa，這使得這些聚噻吩衍生物 適于與帶負(fù)電荷的或帶正電荷的低聚物和聚合物形成聚電解質(zhì)復(fù)合物。另外，所述離子基 團(tuán)與不同的分子建立了多種氫鍵鍵合模式。對于CPEs俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的獨(dú)特的能力，提 出的理由之一是親和力，但本發(fā)明不應(yīng)當(dāng)受此提議的束縛。觀察錯折疊蛋白質(zhì)的一個(gè)方法 可以是將其看作是具有沿著分子軸的可替代的或重復(fù)的電荷分布的聚離子分子。本發(fā)明的 特制的CPEs可以與錯折疊蛋白質(zhì)形成非常強(qiáng)的非共價(jià)相互作用，從而俘獲它們，參見圖3中示意圖說明?？梢蕴峁┢渲泄倌芑鶠橄率龅哪┒斯倌芑墓曹椌垭娊赓|(zhì)用于表面固定、 繼發(fā)俘獲或用于根據(jù)本發(fā)明的屏障后的檢測部件所述官能基可以為，但不限于DNA、 RNA、 肽、氨基酸、組氨酸、組氨酸『蛋白質(zhì)、肽支架、生物素、抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素、螯合 齊U、活性基團(tuán)、抗體、親和性肽支架、scFV、FAB、酶、配體、受體配體、類固醇、生物分子或其它 分子、納米顆粒、微粒、金納米顆粒、金微粒、磁珠、蛋白質(zhì)涂布的珠粒、肽涂布的珠粒、超磁 珠?；蝾w粒、禮納米顆粒、氧化釓顆粒、禮離子、摻雜鑭系元素的納米顆粒、摻雜鑭系元素的 氧化釓納米顆粒、鑭系元素顆粒。 可以選擇CPE以使其具有如下能力在非選擇性條件下，具有同時(shí)俘獲錯折疊的、 聚集改變的或劣種形式的蛋白質(zhì)以及非聚集的正常形式的蛋白質(zhì)的能力，和在選擇性條件 下，選擇性俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的能力。如有必要，可以在非選擇性條件下和改變其光學(xué)性質(zhì) 的選擇性條件下，將CPE固定在固體載體上或溶液中，如此，則有可能區(qū)別所述CPE是俘獲 錯折疊蛋白質(zhì)或是天然蛋白質(zhì)?？梢酝ㄟ^調(diào)節(jié)樣品、根據(jù)PH的反應(yīng)液或洗滌液、離子強(qiáng)度、 緩沖液的選擇，或者通過加入鹽、離子、金屬離子、洗滌劑、聚電解質(zhì)、蛋白質(zhì)、顆?；蝌蟿?來獲得合適的非選擇性條件或選擇性條件分析條件。 而且，向樣品、反應(yīng)液或洗滌液中加入一種或多種試劑是可能的，所述試劑能夠增 加結(jié)合錯折疊蛋白質(zhì)的CPE和與正常蛋白質(zhì)相互作用的CPE的區(qū)別，按這種方式，增加了 俘獲給定樣品中錯折疊蛋白質(zhì)的選擇性。在這種情況下，CPE可以以固定在固體載體上或 溶液中提供。這樣的試劑包括洗滌劑如Triton-X、皂苷、SDS、薩考西、正-十二烷基肌氨 酸(laurosylsarcosine)、脂肪酸肌氨酸、CHAPS、 Bri j、辛基-b-糖苷、吐溫20、乙基苯基聚 乙二醇(Nonidet)P-40或其它變體，離子和鹽如金屬離子、分子離子和有機(jī)離子，螯合劑如 EDTA、EGTA、2，2' _二吡啶基、二巰基丙醇、離子載體(lonophores)、氨三乙酸、鄰-菲咯啉、 水楊酸和三乙醇胺，溶劑如水、醇、有機(jī)溶劑、氯化溶劑、胺化溶劑和磺化溶劑及其它試劑， 如聚合材料、聚電解質(zhì)(兩性離子的、陰離子的或陽離子的)、糖類(包括多糖)、具有超過 一個(gè)配位基團(tuán)的有機(jī)酸、脂質(zhì)類固醇、氨基酸和相關(guān)化合物、肽、磷酸鹽、核苷酸、四吡咯、鐵 草胺、離子載體，如短桿菌肽、莫能菌素和纈氨霉素酚醛塑料。其它試劑包括蛋白質(zhì)，如胰蛋 白酶、蛋白酶K、抗體、血清白蛋白等。 可以將所述共軛聚電解質(zhì)作為裝置的活性部分合適地施用，所述裝置俘獲、分離、 結(jié)合或去除樣品中錯折疊蛋白質(zhì)。這可以通過，例如將所述共軛聚電解質(zhì)固定在基質(zhì)上， 然后通過合適方式暴露于樣品來實(shí)現(xiàn)(參見用于兩個(gè)實(shí)施例的圖4和5)。合適地，所述 裝置包括用于所述基質(zhì)的合適的容器，并且共軛聚電解質(zhì)和錯折疊蛋白質(zhì)的相互作用在該 基質(zhì)上形成，由此其俘獲、分離、結(jié)合或去除樣品中錯折疊蛋白質(zhì)。所述共軛聚電解質(zhì)可以 是使用那些識別或鑒定錯折疊蛋白質(zhì)(例如Prpse、 Prpr:淀粉狀蛋白-|3 、原纖維形式的 AP (1-40)、 A13 (1-42)或AP (l-43)、淀粉狀蛋白-13 (AP)肽、在透析_相關(guān)淀粉樣變性 (DRA)中的P-2-微球蛋白分子、IAPP、在帕金森氏癥中的a-突觸核蛋白或在亨廷頓氏病 中的亨廷頓蛋白)的抗體的系統(tǒng)的一部分，所述錯折疊蛋白質(zhì)已經(jīng)或?qū)⒁籆PE俘獲?？?選地，可以使用共軛聚電解質(zhì)作為報(bào)道錯折疊蛋白質(zhì)的俘獲的光學(xué)探針(參見用于兩個(gè)實(shí) 施例的圖4和5)。然而，其它方式是可能的，例如所述共軛聚電解質(zhì)可以在溶液中提供，用 于俘獲、同時(shí)在樣品中或體內(nèi)進(jìn)行染色錯折疊蛋白質(zhì)。繼而可以用在溶液中或固體載體上 的抗體來鑒定或識別錯折疊蛋白質(zhì)。
下述的發(fā)明的詳細(xì)說明將分別涉及共軛聚電解質(zhì)、錯折疊的、異常的、聚集的、劣
種的或病原性的蛋白質(zhì)、涉及所述錯折疊蛋白質(zhì)的疾病、從樣品溶液中俘獲所述錯折疊蛋
白質(zhì)的方法、共軛聚電解質(zhì)在固體載體上的固定和陣列。最后，本發(fā)明采用多個(gè)實(shí)驗(yàn)舉例證
實(shí)其實(shí)用性。 I鐘lg申扁 本發(fā)明涉及多種共軛聚電解質(zhì)，其具有最少三個(gè)單元，所述單元衍生自下述單體 噻吩、吡咯、苯胺、呋喃、亞苯基、亞乙烯基、芴、乙烯基二氧噻吩或其取代的形式、形成的其 均聚物及共聚物。所述共軛聚電解質(zhì)可以是單分散的，由具有定義明確的鏈長的聚電解質(zhì) 鏈組成，或者是多分散的，由具有不同鏈長的聚電解質(zhì)鏈組成。而且，具有陰離子的、陽離子 的或兩性離子的側(cè)鏈官能度的單體包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。所述側(cè)鏈官能度來源于，但不 限于氨基酸、氨基酸衍生物、神經(jīng)遞質(zhì)、單糖、核酸，或其組合和其化學(xué)改性的L和D對映異 構(gòu)體，或其衍生物。本發(fā)明的共軛聚電解質(zhì)可以包含單個(gè)側(cè)鏈官能基，或者可以包括兩個(gè)或 多個(gè)不同的側(cè)鏈官能基。在不同PH下，帶陰離子或陽離子電荷的共軛聚電解質(zhì)的官能基使 得這些聚電解質(zhì)衍生物適于與帶負(fù)電荷或帶正電荷的低聚物和聚合物形成強(qiáng)的聚電解質(zhì) 復(fù)合物。另外，所述離子基團(tuán)與不同的分子建立了多種氫鍵鍵合模式。 本發(fā)明的某些方面可以提供共軛聚電解質(zhì)與某些實(shí)體的共價(jià)連接，所述實(shí)體如蛋 白質(zhì)、錯折疊蛋白質(zhì)、肽、生物分子或其它分子。 在圖1或圖2中，加入到側(cè)鏈(Rs)或末端(Rl和R2)上的官能基可以是，但不限
于具有在不同pH的pKa的帶電荷的陰離子、陽離子、或兩性離子官能基，這使得這些聚噻吩
衍生物適于與帶帶負(fù)電荷的或帶正電荷的低聚物和聚合物形成聚電解質(zhì)復(fù)合物。另外，所
述離子基團(tuán)與不同的分子建立了多種氫鍵鍵合模式。對于CPEs俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的獨(dú)特
的能力，提出的原因之一是親和力，但本發(fā)明不應(yīng)當(dāng)受此提議的束縛。觀察錯折疊蛋白質(zhì)的
一個(gè)方法可以是將其看作是具有沿著分子軸的可替代的或重復(fù)的電荷分布的聚離子分子。
本發(fā)明的特制的CPEs可以與錯折疊蛋白質(zhì)形成非常強(qiáng)的非共價(jià)相互作用，從而俘獲它們，
參見圖3中示意圖說明。可以提供其中官能基為下述的末端官能化的共軛聚電解質(zhì)用于
表面固定、繼發(fā)俘獲或用于根據(jù)本發(fā)明的屏障后的檢測部件所述官能基可以為，但不限于
DNA、RNA、肽、氨基酸、組氨酸、組氨酸『蛋白質(zhì)、肽支架、生物素、抗生物素蛋白、鏈霉抗生物
素、螯合齊U、活性基團(tuán)、抗體、親和性肽支架、scFV、 FAB、酶、配體、受體配體、類固醇、生物分
子或其它分子、納米顆粒、微粒、金納米顆粒、金微粒、磁珠、蛋白質(zhì)涂布的珠粒、肽涂布的珠
粒、超磁珠?；蝾w粒、禮納米顆粒、氧化釓顆粒、禮離子、摻雜鑭系元素的納米顆粒、摻雜鑭
系元素的氧化釓納米顆粒、鑭系元素顆粒。 11錯折》蛋白質(zhì) 本發(fā)明的共軛聚電解質(zhì)俘獲目標(biāo)錯折疊蛋白質(zhì)。在本發(fā)明中，術(shù)語錯折疊蛋白質(zhì) 應(yīng)當(dāng)以其廣義理解，包括錯裝配的蛋白質(zhì)、病理形式或劣種形式的蛋白質(zhì)，即淀粉樣形式、 錯折疊形式或聚集形式的蛋白質(zhì)，如噬斑，優(yōu)選地，所述錯折疊蛋白質(zhì)可以是享有特異性結(jié) 構(gòu)特征的不溶性纖維狀蛋白聚集的淀粉狀蛋白。 所述俘獲在沒有共價(jià)鍵合下出現(xiàn)，其基于共軛聚電解質(zhì)和錯折疊蛋白質(zhì)之間的偶 極_偶極鍵合、氫鍵鍵合、靜電_和非極性相互作用。所述共軛聚電解質(zhì)可以與正常天然蛋 白質(zhì)和錯折疊蛋白質(zhì)相互作用。所述共軛聚電解質(zhì)也可以俘獲在體外制備的淀粉狀蛋白或
14錯折疊蛋白質(zhì)。不受理論的束縛，目前假設(shè)在合適的測定條件下，共軛聚電解質(zhì)可以特異性 地和具有高親和性地俘獲錯折疊蛋白質(zhì)?？梢曰瘜W(xué)修飾所述錯折疊蛋白質(zhì)，以便其被選擇 的共軛聚電解質(zhì)俘獲。衍生化不同范圍的蛋白質(zhì)的方法是熟知的。例如，可以容易地改性 氨基酸側(cè)鏈以使其包含極性和非極性基團(tuán)或具有氫鍵鍵合能力的基團(tuán)。所述錯折疊蛋白質(zhì) 可以在溶液中、在固相上、在體內(nèi)、在體外或在組織樣品中，錯折疊蛋白質(zhì)的俘獲可以在水 溶液中、有機(jī)溶劑中、體液中、固相上或組織樣品中進(jìn)行。 可以包含錯折疊蛋白質(zhì)的體內(nèi)或體外的目標(biāo)樣品包括，但不限于血液、腦、外周組 織、均質(zhì)化的腦、均質(zhì)化的外周組織、體液、活組織檢查、尿、腦脊液(CSF)、淋巴液及其它合 適的樣品?；阱e折疊蛋白質(zhì)俘獲的測定具有極大的商業(yè)利益、巨大的診斷價(jià)值，可作為治 療劑以及用于俘獲血液(篩選血液制品)或其它復(fù)合物介質(zhì)中錯折疊蛋白質(zhì)的選擇性測定 和來自腦、肌肉、脂肪、粘液、神經(jīng)、血管或其它組織的組織切片的染色。
111與錯析#蛋白質(zhì)相關(guān)的疾病 特征為淀粉狀蛋白的疾病是用于說明與錯折疊蛋白質(zhì)相關(guān)的疾病的相應(yīng)實(shí)施例， 其中淀粉樣變被稱為一種可以遺傳的或獲得的疾病。注意默認(rèn)的淀粉樣變通常指AA淀粉 樣變，但是其中存在淀粉狀蛋白沉降的與淀粉狀蛋白相關(guān)的任何疾病都是淀粉樣變。例如 CJD、vCJD、阿爾茨海默和糖尿病幾乎都不被稱為淀粉樣變。 在該段中，指出了至今相關(guān)的淀粉樣變的一些實(shí)例。原發(fā)性淀粉樣變包括溶菌酶、 運(yùn)甲狀腺素蛋白、載脂蛋白B、纖維蛋白原中的突變和AL淀粉樣變(免疫球蛋白輕鏈，如在 多發(fā)性骨髓瘤中看到的)。繼發(fā)性淀粉樣變性包括AA淀粉樣變(血清淀粉樣A蛋白質(zhì)，一 種由于慢性炎引起的急性期蛋白質(zhì))和凝溶膠蛋白淀粉樣變(血漿凝溶膠蛋白片段)。家 族性淀粉樣變或遺傳性淀粉樣變最常見的是由運(yùn)甲狀腺素蛋白的突變引起，但是在很少情 況下，也可以由載脂蛋白Al、凝溶膠蛋白、纖維蛋白原和溶菌酶突變引起，其主要是由遺傳 引起，被認(rèn)為是常染色體顯性的、傳代至后代的高概率的、阿巴拉契亞(Appalachian)類型 的淀粉樣變和在沙皮狗(Shar Peis)中的淀粉樣變的沙皮狗熱病(Shar Pei fever)。器 官特異性淀粉樣變的實(shí)例為2型糖尿病(糊精，也稱為IAPP)、神經(jīng)病學(xué)、阿爾茨海默氏病 (AP 39-42)、帕金森氏癥(a -突觸核蛋白)、亨廷頓氏病(亨廷頓蛋白)、傳染性海綿樣腦 病(朊病毒蛋白質(zhì)，PrP)，某些實(shí)例為克雅病(在大腦中的PrP)、庫魯癥(在腦中沉積的彌 漫性的PrP)、致命性家族性失眠癥(在丘腦中的PrP)和牛海綿樣腦病(在母牛大腦中的 PrP)、嗜剛果紅樣血管病(Congophilic angiopathy)(淀粉狀蛋白P )。心臟淀粉樣變包括 充血性心力衰竭；某些實(shí)例(在心臟中的PrP或運(yùn)甲狀腺素蛋白)。包涵體肌炎。另一種 重要的實(shí)例是醫(yī)原性的病癥，如胰島素淀粉樣變，其被認(rèn)為是由于注射給藥胰島素引起。
某些非疾病淀粉狀蛋白為在生物體中的天然淀粉狀蛋白、巻曲大腸桿菌(Curli E.coli)蛋白質(zhì)(curlin)、酵母菌朊病毒[Sup35]、鵝柄孢殼菌(Podospora Anserina)朊 病毒Het-s、瘧疾的外殼蛋白、蜘蛛絲、哺乳動物黑素體(pMel)、組織型纖溶酶原激活物 (tPA)、血液動力學(xué)因子、降鈣素和蛋白質(zhì)及設(shè)計(jì)制造淀粉狀蛋白的肽。 所述朊病毒疾病[例如牛海綿樣腦病(BSE)和克雅病(CJD)]與正常細(xì)胞的朊 病毒蛋白質(zhì)(PrP)的構(gòu)型轉(zhuǎn)化至表示為PrpSe的傳染病-相關(guān)的同工型相關(guān)。所述錯折 疊的感染形式的蛋白質(zhì)PrpSe是一組罕見的、致命性腦病的原因，所述致命性腦病被稱為 朊病毒疾病，其影響人類和哺乳動物。所述朊病毒疾病也稱為傳染性海綿樣腦病(TSE)，它們包括牛中的牛海綿樣腦病(BSE，或"瘋母牛"病)；綿羊中的羊瘙癢??；在鹿和麇鹿中的慢性消耗性疾??；和人類中的疾病[克雅病(CJD)、杰茨曼-斯脫司勒-史茵克(Gerstmann-Str汪USsler-Scheinker)疾病(GSS)、庫魯癥]。本發(fā)明的共軛聚電解質(zhì)意
味著用于俘獲與這些疾病相關(guān)的病原性朊病毒的方法。
IV柃測方法 如已經(jīng)指出的，本發(fā)明是基于使用共軛聚電解質(zhì)、官能化的共軛聚電解質(zhì)或其組合來從樣品中俘獲、結(jié)合、分離或去除錯折疊蛋白質(zhì)?？梢酝ㄟ^非限定性的如下方法觀察所
述俘獲事件熒光、福斯特(F6rster)共振能量轉(zhuǎn)移(fret)、淬滅發(fā)射光、吸收、雙光子或
多光子光譜學(xué)、磁共振成像(MRI)、動態(tài)光散射(DLS)、電或磁反應(yīng)、電化學(xué)、電流分析法、庫侖法、重量分析法、偏振或各向異性、熒光相關(guān)光譜學(xué)(FCS)、石英晶體微量天平、具有耗散的石英晶體微量天平或其它技術(shù)和物理性質(zhì)?？梢酝ㄟ^熒光計(jì)記錄發(fā)射強(qiáng)度，增強(qiáng)流入檢測器中的光子可以增加敏感性。這可以使用燈或激光作為激發(fā)光源來獲得。也可以通過使用熒光顯微鏡或共焦顯微鏡檢測熒光的變化。可以使用激發(fā)或發(fā)射濾光片的組合，并且可以通過CCD-照相機(jī)、攝像機(jī)、普通照相機(jī)或偏振照相機(jī)記錄圖像。然后，可以通過在計(jì)算機(jī)中的圖像處理軟件、圖像相關(guān)光譜學(xué)(ICS)或其它方式分析圖像。
V鐘觸扁禾口舶薩醇 在本發(fā)明中使用的共軛聚電解質(zhì)、生物分子、錯折疊蛋白質(zhì)、抗體、蛋白質(zhì)、肽、錯折疊蛋白質(zhì)或其它分子可以固定在多種固體載體上，所述固體載體包括，但不限于硅晶片、玻璃(例如載玻片、玻璃珠)、玻璃碳、硅橡膠、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、特富龍(聚四氟乙烯)、硅膠小球、金、氧化銦錫、濾紙(例如尼龍、纖維素和硝基纖維素)、標(biāo)準(zhǔn)復(fù)印紙或變體和隔離介質(zhì)、其它層析介質(zhì)、磁珠或顆粒、超磁珠?；蝾w粒、禮、氧化釓顆粒或本發(fā)明中有用的其它固體載體?？梢酝ㄟ^使用例如，但不限于浸涂、旋涂、接觸印刷、絲網(wǎng)印刷、噴墨技術(shù)、噴霧、分散和通過使用軟的平版印刷術(shù)或BIACORETM(Biacore， Uppsala， Sweden)系統(tǒng)的微流體印刷(microfluidic printing)來獲得共軛聚電解質(zhì)至固體載體的轉(zhuǎn)移。
共軛聚電解質(zhì)的固定可以通過物理粘附或共價(jià)結(jié)合至固體載體獲得，并且其可以在高溫下進(jìn)行，或者通過包埋在水凝膠基質(zhì)中進(jìn)行。期望本發(fā)明共軛聚電解質(zhì)的固定可以改善它們的使用容易性、裝配進(jìn)入裝置(例如陣列)、穩(wěn)定性、堅(jiān)固性、熒光反應(yīng)以符合使用微量滴定板的高通量篩選(HTS)的過程及其它期望的方式。在固定至固體載體期間，用于本發(fā)明的共軛聚電解質(zhì)和朊病毒蛋白質(zhì)的溶劑可以是，但不限于水、緩沖的水溶液、甲醇、乙醇及其組合。在該步驟中，也可以加入其它類型的載體聚合物。生物分子、錯折疊蛋白質(zhì)、抗體、蛋白質(zhì)、肽、錯折疊蛋白質(zhì)或其它分子也可以固定在固體載體上或微量滴定孔(microtiter wells)中。具有選擇性能力的識別、鑒定或俘獲抗體或其它生物分子也可以以其自身、與共軛聚電解質(zhì)一起(即，與聚電解質(zhì)溶液混合)固定，或者隨后識別已俘獲錯折疊蛋白質(zhì)的CPE。當(dāng)生物分子、錯折疊蛋白質(zhì)、抗體、蛋白質(zhì)或肽與本發(fā)明的共軛聚電解質(zhì)
固定在固體載體上時(shí)，它們通過非共價(jià)相互作用與所述聚電解質(zhì)形成復(fù)合物。該復(fù)合物是在沒有共價(jià)化學(xué)下形成的，并且其是基于共軛聚電解質(zhì)和朊病毒蛋白之間的氫鍵鍵合、靜電-和非極性相互作用。
VI陣列和線 根據(jù)本發(fā)明，在各個(gè)點(diǎn)或線中產(chǎn)生的相同或不同共軛聚電解質(zhì)的大的陣列可以克服單個(gè)傳感器或基于溶液的方法的缺陷。所述陣列或平行線方法開發(fā)了以簡單的方法用一種或不同的共軛聚電解質(zhì)對一個(gè)或不同的樣品的平行分析，所述樣品可以包含錯折疊蛋白質(zhì)，其中該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的至少一個(gè)步驟使用CPE來俘獲錯折疊蛋白質(zhì)。使用陣列的主要目的是增加在其他性質(zhì)和特征中的使用容易性、可攜帶性、定量、選擇性。使用該方法，我們可以探究測量多組分樣品和使用部分選擇性的傳感器點(diǎn)的能力。這給予了同時(shí)分析兩種以上目標(biāo)樣品和進(jìn)行芯片內(nèi)測定的機(jī)會。通過將共軛聚電解質(zhì)和/或生物分子、錯折疊蛋白質(zhì)、朊病毒蛋白質(zhì)、抗體、蛋白質(zhì)或肽固定在任意尺寸和任意選擇的模式(如陣列、線、點(diǎn)、柱)的固體載體上，可以構(gòu)建小的、可攜帶的、容易閱讀的和可說明的裝置。 多種陣列的使用要求可以同時(shí)對或多或少的大量樣品進(jìn)行檢測。這通常以微點(diǎn)陣的形式進(jìn)行，其中將許多獨(dú)立的檢測元件(或探針)整合在小的表面積上，以用于大規(guī)模并行檢測。我們已經(jīng)證實(shí)可以通過使用高彈體壓印器的微接觸印刷來印刷共軛聚電解質(zhì)和共軛聚電解質(zhì)/蛋白質(zhì)復(fù)合物。也可以通過點(diǎn)樣共軛聚電解質(zhì)溶液，或者通過噴墨聚電解質(zhì)溶液，或者通過上述的其它方法進(jìn)行在微點(diǎn)陣表面上的傳輸。這些步驟是制備多像素微點(diǎn)陣所必需的。
實(shí)施例 實(shí)施例l.使用共軛聚電解質(zhì)俘獲和檢測l溶液中的PrP-淀粉狀蛋白。利用熒光Hf條白條面翻 試管中包含PrP和PrP-淀粉狀蛋白樣品，后者為PrP"-或PrP^-樣蛋白。通過對水透析溶于3M胍鹽鹽酸鹽中的lmg/mlrecHuPrP90-231制備PrP-淀粉狀蛋白。另一個(gè)試驗(yàn)規(guī)程是通過在高鹽濃度條件下于試管中振搖而制備PrP-淀粉狀蛋白。向包含PrP和PrP-淀粉狀蛋白的該溶液中加入共軛聚電解質(zhì)PTAA(IO ii g/ml)，，使PTAA俘獲、結(jié)合并染色PrP-淀粉狀蛋白。然后，靜置該P(yáng)TAA/PrP-淀粉狀蛋白形成物至沉降至試管的底部，然后，可以容易地將其從樣品中分離，如有必要時(shí)，進(jìn)行檢測。收集PTAA/PrP-淀粉狀蛋白的其它方法為，但不限于過濾、離心、在疏水性表面上俘獲、在具有共價(jià)結(jié)合的PTAA的表面上俘獲、使用官能化的顆粒、鹽沉淀和免疫沉淀。用于檢測或觀測PTAA/PrP-淀粉狀蛋白的方法包括，但不限于，熒光顯微鏡、在平板讀數(shù)器或分光熒光計(jì)中的熒光檢測、在平板讀數(shù)器或分光計(jì)中的吸收檢測、陣列熒光讀數(shù)器、光電二極管、熒光偏振或各向異性、圓二色性等。該方法也提供一種在溶液中從給定樣品中俘獲、清除、去除或過濾PrP-淀粉狀蛋白、PrPSE、PrPres的方法。在該特別的實(shí)例中，將PTAA/PrP-淀粉狀蛋白形成物收集在玻璃基板上，并使用熒光顯微鏡觀測，參見圖6。使用該儀器，其分辨率能夠鑒定小于1 y mX 1 i！ mX 1 i！ m的獨(dú)立的PrP-淀粉狀蛋白顆粒，其相當(dāng)于少于2pg的PrP。
實(shí)施例2 :過濾，俘獲 為了分離天然的和原纖維胰島素，從而純化該原纖維胰島素，進(jìn)行聚合物-胰島素樣品的過濾。測定的樣品為天然胰島素和原纖維胰島素，其含有或不含有Ptaa。最初，Ptaa的濃度為0. 5mg/ml，胰島素的濃度為2mg/ml，樣品在lml的20mM pH 8的磷酸鹽緩沖液中包含10 yl Ptaa+25iU胰島素。對于所有的樣品，在過濾前后均進(jìn)行熒光測量，和打開濾光器，觀測檢查。使用的過濾器為0. 22iim Millex-gu，并將lml的每種樣品過濾穿過過濾器。 在過濾穿過0. 22 ii m的過濾器前后，ptaa-天然胰島素(ptaa-ins)和ptaa-原纖維胰島素(ptaa-fib)的熒光光譜顯示在圖9中。在過濾之前，光譜看上去如預(yù)期的。在過濾后，很明顯含有Ptaa和原纖維胰島素的樣品保留在過濾器(看到熒光減少)，而含有天然胰島素的樣品不會影響聚合物的通過。因此，可以使用過濾去除結(jié)合至Ptaa的天然胰島素。在過濾后對過濾器的觀測檢查顯示，在過濾器上存在Ptaa-原纖維胰島素的聚集物(看到紅色聚集物)，而含有Ptaa-天然胰島素的過濾器沒有顯示出聚集物或顏色的變化。
也進(jìn)行了檢測所述過濾器中俘獲的ptaa-原纖維胰島素復(fù)合物存在的測量。如上所述制備僅含有Ptaa的樣品和含有天然胰島素的樣品，所述天然胰島素包含0、5、50和100%的原纖維胰島素。隨著原纖維胰島素含量的增加，天然胰島素的含量降低，引起所有的樣品中的胰島素總量相同。將樣品過濾穿過0. 8 ii m Millex-aa過濾器，并測量濾液的熒光。然后，通過擠壓lml的緩沖液反向穿過過濾器而逆-過濾所述過濾物。之后，測量逆-過濾的濾液的熒光。 第一次濾液的熒光光譜顯示在圖10中。增加原纖維含量會引起更多的Ptaa-原纖維胰島素復(fù)合物保留在過濾器中，而Ptaa與天然胰島素可以自由地穿過。逆_過濾的樣品顯示在圖11中。雖然大多數(shù)復(fù)合物仍然被捕獲在過濾器中，但是很明顯在逆-過濾后，增加原纖維的量引起更多的Ptaa-原纖維胰島素復(fù)合物溶于溶液中。因此，Ptaa可用于俘獲原纖維胰島素。 使用過濾來俘獲Ptaa-原纖維復(fù)合物不限于上述的過濾器和實(shí)例?？梢允褂萌魏纹渌愋偷倪^濾器、基質(zhì)、緩沖液、濃縮物和添加劑，并且可以通過熒光測量、吸光度測量、觀測檢查、顯微鏡法、熒光偏振或各向異性、圓二色性等獲得分析和檢測。
實(shí)施例3 : 使用共$厄聚電解質(zhì)俘獲和柃測|溶液中的胰島素-淀粉狀g白。利用熒光測l量的溶液檢測 在試管中，將含有天然胰島素的樣品與Ptaa(O. 05mg/ml， 10 iU)禾P965iU的20mM磷酸鹽緩沖液pH 7.0混合，所述天然胰島素包含0、1、5、50和100%的原纖維(2mg/ml，25iU)。通過在65攝氏溫度下，在pH 2溫育天然胰島素8小時(shí)產(chǎn)生原纖維胰島素。將樣品以10000rpm離心5分鐘，除去上清液，加入新的緩沖液，并重復(fù)該過程一次。所述Ptaa結(jié)合原纖維胰島素，并在離心下沉降到試管的底部。然后，使用熒光微量培養(yǎng)板讀數(shù)器測量樣品。又測量了沒有離心的Ptaa-天然胰島素和Ptaa-原纖維胰島素的參照樣品。將結(jié)果顯示在圖12中。 所述PTAA-原纖維聚集物沉降到試管的底部，并且其可以通過離心后除去上清液而容易地被收集以用于檢測。通過溶解所述沉淀物，之后可以通過熒光測量來檢測Ptaa-原纖維復(fù)合物。用于檢測或觀測PTAA/PrP-淀粉狀蛋白的方法包括，但不限于熒光顯微鏡、在平板讀數(shù)器或分光熒光計(jì)中的熒光檢測、在平板讀數(shù)器或分光計(jì)中的吸收檢測、陣列熒光讀數(shù)器、光電二極管、熒光偏振或各向異性、圓二色性等。該方法也提供一種在溶液中從給定樣品中俘獲、清除、去除或過濾淀粉狀蛋白和原纖維的的方式。正如該實(shí)施例所示，增加原纖維的量得到更多的Ptaa-原纖維復(fù)合物。從1%原纖維至100%原纖維，熒光強(qiáng)度增加，顯示出Ptaa和原纖維之間的結(jié)合，因?yàn)樵陔x心后，根本不存在Ptaa和天然胰島素。 實(shí)施例4 :在固體載體上CPEs的固定
該實(shí)施例描述了在涂有APTES的玻璃表面上固定PTAA。所述硅烷APTES是為了具 有用于化學(xué)耦合的胺基。EDC(或EDAC)是用于耦合羧基至伯胺的零-長度交聯(lián)劑。該交聯(lián) 劑可以用于多種應(yīng)用，如在肽合成中形成酰胺鍵，將半抗原結(jié)合至載體蛋白以形成免疫原， 用5'磷酸基標(biāo)記核酸和建立生物分子的胺_反應(yīng)性NHS-酯。 首先，可以活化具有羧基、-C00H的CPEs(如PTAA、 POWT、 tPTAA或tPOWT)，然后 將其耦合至任何種類，如官能化的磁珠的胺表面?？梢詫⒉话魏昔然哂邪坊?CPEs (如POMT、 tPOMT和PTT)耦合至活化的羧基表面。如果有具有羧基的磁珠，只要將其 放入EDC/NHS溶液中即可。
試驗(yàn)規(guī)稈，PTAA的固定 使用TL1洗滌物(5份1120、1份25%的朋3、1份28%的11202，加熱至85°攝氏度5 分鐘，用水洗滌)和TL2洗滌物(6份H20、 1份37%的HC1、 1份28%的H202，加熱至85°攝 氏度5分鐘，用水洗滌)清潔玻載玻片，以去除有機(jī)物和無機(jī)物，并使其具有親水性。用^ 干燥。 參將載玻片置于汽化室中。將200iU的APTES置于所述室中，在60。攝氏度蒸發(fā) 10分鐘，在150°攝氏度烘焙60分鐘。在二甲苯中洗滌，并貯存在二甲苯中。對于不同的 汽化室，APTES的量可能不同。 參制備在H20中的2mM的EDC和lmM的NHS的混合物。
參將1份EDC/NHS與1份的PTAA混合。 參將100 ii 1的PTAA-EDC/NHS施用到載玻片上，在暗處溫育30分鐘。
參用20mM的磷酸鹽緩沖液pH 8洗滌表面3次。用N2干燥。 將PTAA共價(jià)結(jié)合至薄層的表面，其可用于結(jié)合目標(biāo)分子?？梢允褂脤υ囼?yàn)規(guī)程的 某些改良，如濃度、pH、緩沖液、培養(yǎng)時(shí)間和使用的材料。已經(jīng)選擇EDC/NHS的濃度來活化 PTAA中的一小部分羧基，以增加結(jié)合至表面的PTAA的量，并保持PTAA的結(jié)合性質(zhì)。優(yōu)選 地，應(yīng)當(dāng)僅僅活化所述聚合物的一個(gè)側(cè)鏈。沒有評價(jià)該報(bào)道的濃度是否為最佳。可以改變 pH和用于洗滌的緩沖液組合物。在用于Nunc的Covalink微量滴定板的試驗(yàn)規(guī)程中，所述 洗滌緩沖液為116. 9g的NaCl、10g MgS04*7H20、0. 5ml吐溫20、1升PBS?？梢愿淖兣囵B(yǎng)時(shí) 間以改善結(jié)果。可以使用硫代-NHS代替NHS，因?yàn)槠鋾晕⒏€(wěn)定。
試驗(yàn)規(guī)程，POMT的固定 由于POMT不包含羧酸側(cè)基，用于固定的方法與PTAA的方法相反。應(yīng)當(dāng)使用包含 羧基的表面如PEG基質(zhì)來代替APTES表面。用BrCH2COOH和NaOH處理所述PEG基質(zhì)以引入 COOH基團(tuán)，之后，在加入POMT之前將EDC/NHS應(yīng)用于所述表面以活化所述羧基。也可以使 用其它表面。沒有評價(jià)該方法。參見文獻(xiàn)"Photografted Poly (ethylene glycol)Matrix for Affinitylnteraction Studies，，， Biomacromolecules，第8巻，第1期，第287-295頁， 2007中的方法說明。
試驗(yàn)規(guī)程，POWT和PTT的固定 由于POWT和PTT都同時(shí)包含羧基和胺基，使用EDC/NHS可以引起聚合物鏈之間的 交聯(lián)，而不是聚合物和表面之間的交聯(lián)，這不是期望的。然而，通過調(diào)整EDC/NHS和聚合物 的濃度，有可能產(chǎn)生共價(jià)結(jié)合至表面上的更厚的交聯(lián)聚合物層，甚至獲得更好的結(jié)果?？梢?使用APTES表面或包含羧基的表面。沒有評價(jià)該方法。
在上述實(shí)施例中，已經(jīng)使用載玻片來固定。也可以使用其它表面，如硅晶片、玻璃 珠、微量滴定板(Nunc的Covalink是用APTES表面預(yù)涂布的)，或具有合適性質(zhì)的任何其它 表面。
也可以使用其它的固定技術(shù)。對于共價(jià)結(jié)合，可以使用具有生物素或其它端基的 官能化的聚合物。對于非共價(jià)結(jié)合，可以使用蛋白質(zhì)層在表面上的物理吸附。聚合物可以 是例如，涂布在用葡聚糖硫酸鹽涂布的N皿c Maxisorp微量滴定板上的。也可以使用任何
其它能夠?qū)⒕酆衔锿坎贾帘砻娴募夹g(shù)。
鵬口口口力瞎表面 可以以不同的方式，將待評價(jià)或俘獲的樣品加入到聚合物涂布的表面?？珊唵蔚?將一定體積的樣品加入到表面，溫育合適的時(shí)間并洗滌?？梢允褂昧鲃訉?dǎo)管(Flow canal) 引導(dǎo)合適量的樣品到表面上，其得到更加可重復(fù)的系統(tǒng)。如果使用珠粒，可以將其加入到樣 品溶液中，溫育，并使用離心、磁性分離或任何其它分離技術(shù)將其從溶液中分離。
輔你l 5 :ffl鐘lg申扁驗(yàn),係亓扁艦來立 該實(shí)施例顯示了 CPE和鑭系元素納米顆粒如Eu203、Gd203或Nd203之間的特異性相 互作用是可能的。這些顆?？梢允橇綇膸准{米至幾百納米的任何顆粒，其依次可用于體 內(nèi)成像錯折疊蛋白質(zhì)和根據(jù)本發(fā)明的與錯折疊蛋白質(zhì)相關(guān)的疾病。鑭系元素顆粒的修飾是 可能的，如摻雜多種金屬，如Fe3+、 Eu3+、 Tb3+等。在涂布或結(jié)合CPEs之前，有可能通過例如 生物分子、二甘醇、烷烴、羧基、檸檬酸、胺基等預(yù)涂布所述鑭系元素顆粒，之后進(jìn)一步加入 其它分子。 為了證實(shí)一些選擇的CPEs和Gd203納米顆粒之間的相互作用，記錄了 CPEs的熒 光，參見圖13。激發(fā)波長設(shè)定為400nm， CPE的測量濃度設(shè)定為2. 5 y g/mL，并且將氧化釓顆 粒用購自Sigma-Aldrich的儲備溶液稀釋200倍。在重蒸水中進(jìn)行本文中出現(xiàn)的測量，但 是其也可以在許多類型的緩沖溶液或復(fù)合物介質(zhì)中進(jìn)行。
權(quán)利要求
一種用于從包括非聚集正常形式的蛋白質(zhì)的環(huán)境中分離聚集性錯折疊蛋白質(zhì)的方法，其包括用共軛聚電解質(zhì)(CPE)接觸所述錯折疊蛋白質(zhì)和正常蛋白質(zhì)兩者，并從樣品的其它組分中分離CPE/蛋白質(zhì)復(fù)合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述聚電解質(zhì)包括噻吩、吡咯、苯胺、呋喃、亞苯 基、亞乙烯基、芴、乙烯基二氧基噻吩，或這些的取代形式的共聚物或均聚物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述共軛聚電解質(zhì)具有一個(gè)或多個(gè)離子側(cè)鏈 和/或末端官能度。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述離子官能度包括一個(gè)或多個(gè)兩性離子的、陰 離子的和陽離子的側(cè)鏈官能度。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述離子側(cè)鏈和/或末端官能度選自由以下組 成的組氨基酸、氨基酸衍生物、神經(jīng)遞質(zhì)、單糖、核酸、DNA、 RNA、肽、組氨酸、組氨酸10、蛋 白質(zhì)、肽支架、生物素、抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素、螯合劑、活性基團(tuán)、抗體、酶、配體、受 體配體、類固醇、生物分子或其它分子、納米顆粒、微粒、金納米顆粒、金微粒、磁珠、蛋白質(zhì) 涂布的珠粒、肽涂布的珠粒、超磁珠?；蝾w粒、禮納米顆粒、禮離子、摻雜鑭系元素的納米顆 粒、摻雜鑭系元素的氧化釓納米顆粒、鑭系元素顆粒，或其組合及化學(xué)修飾的衍生物。
6. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法是在體外進(jìn)行的。
7. 根據(jù)權(quán)利要求中l(wèi)-6任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法是在體內(nèi)進(jìn)行的。
8. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中所述CPE結(jié)合至固體載體。
9. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括檢測所述CPE/蛋白質(zhì)復(fù)合物。
10. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中CPE和錯折疊蛋白質(zhì)之間的結(jié)合與 CPE/蛋白質(zhì)復(fù)合物的檢測同時(shí)進(jìn)行。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的方法，其中所述CPE/蛋白質(zhì)復(fù)合物和用于進(jìn)行檢測的 部件在屏障如管壁、膜或皮膚的不同側(cè)上。
12. —種用于治療由錯折疊蛋白質(zhì)的聚集引起的疾病的方法，其包括根據(jù)前述權(quán)利要 求任一項(xiàng)所述的方法將患者的體液進(jìn)行聚集性錯折疊蛋白質(zhì)的分離。
13. —種用于治療由錯折疊蛋白質(zhì)的聚集引起的疾病的方法，其包括給藥患有所述疾 病的患者有效量的CPE以抑制錯折疊蛋白質(zhì)的進(jìn)一步聚集或結(jié)合中間體形式的錯折疊蛋 白質(zhì)，并在進(jìn)一步反應(yīng)中去除這些物質(zhì)。
14. 一種藥用或診斷制劑，其包括任選的官能化的CPE和任選的可藥用載體。
15. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述共軛聚電解質(zhì)具有一個(gè)或多個(gè)離子側(cè)鏈和 /或末端官能度，其中所述離子側(cè)鏈和/或末端官能度選自由以下組成的組氨基酸、氨基 酸衍生物、神經(jīng)遞質(zhì)、單糖、核酸、DNA、 RNA、肽、組氨酸、組氨酸10、蛋白質(zhì)、肽支架、生物素、 抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素、螯合劑、活性基團(tuán)、抗體、酶、配體、受體配體、類固醇、生物分 子或其它分子、納米顆粒、微粒、金納米顆粒、金微粒、磁珠、蛋白質(zhì)涂布的珠粒、肽涂布的珠 粒、超磁珠粒或顆粒、禮納米顆粒、禮離子、摻雜鑭系元素的納米顆粒、摻雜鑭系元素的氧化 釓納米顆粒、鑭系元素顆粒，或其組合和化學(xué)修飾的衍生物。
16. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的制劑，其中所述共軛聚電解質(zhì)具有一個(gè)或多個(gè)離子側(cè)鏈和 /或末端官能度，其中所述離子側(cè)鏈和/或末端官能度選自由以下組成的組氨基酸、氨基 酸衍生物、神經(jīng)遞質(zhì)、單糖、核酸、DNA、 RNA、肽、組氨酸、組氨酸10、蛋白質(zhì)、肽支架、生物素、抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素、螯合劑、活性基團(tuán)、抗體、酶、配體、受體配體、類固醇、生物分 子或其它分子、納米顆粒、微粒、金納米顆粒、金微粒、磁珠、蛋白質(zhì)涂布的珠粒、肽涂布的珠 粒、超磁珠?；蝾w粒、禮納米顆粒、禮離子、摻雜鑭系元素的納米顆粒、摻雜鑭系元素的氧化 釓納米顆粒、鑭系元素顆粒，或其組合和化學(xué)修飾的衍生物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于從包括非聚集正常形式的蛋白質(zhì)的環(huán)境中分離聚集性錯折疊蛋白質(zhì)的方法，其包括用共軛聚電解質(zhì)(CPE)接觸所述錯折疊蛋白質(zhì)和正常蛋白質(zhì)，并從樣品的其它組分中分離CPE/蛋白質(zhì)復(fù)合物。
文檔編號C07K1/22GK101784559SQ200780053410
公開日2010年7月21日 申請日期2007年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月18日
發(fā)明者F·安格斯, O·英格納斯, P·哈馬斯特姆, P·奧斯伯格, P·尼爾森 申請人:比奧克羅密克斯有限公司