專利名稱：N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺類一氧化氮供體型衍生物，制備方法及 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺衍生物，具體涉及N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺與硝酸酯類NO供體偶聯(lián)衍生物。本發(fā)明還涉及此類化合物的制備方法及其在制備抗腫瘤藥物方面的用途。

背景技術(shù)：
蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)是一類在體內(nèi)嚴格控制的具有酪氨酸激酶活性的蛋白質(zhì)，它們能催化三磷酸腺苷ATP上的γ-磷酸基轉(zhuǎn)移到許多與細胞生命活動有關(guān)的蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基上，使其發(fā)生磷酸化，從而調(diào)控細胞生長、分化、凋亡等一系列生理過程。PTKs功能的失調(diào)則引起生物體內(nèi)的一系列疾病。已有的資料表明，超過70％的原癌基因和癌基因產(chǎn)物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它們的異常表達將導(dǎo)致細胞增殖調(diào)節(jié)的紊亂，進而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。此外，PTKs的異常表達還與腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移、腫瘤新血管的生成、腫瘤的化療抗性密切相關(guān)。因此，以酪氨酸激酶為靶點進行藥物研發(fā)成為國際上抗腫瘤藥物研究的熱點。開發(fā)ATP競爭性抑制劑(ATP-competitive inhibitor)就是其中的一個重要的方向。其中嘧啶類化合物是一類ATP競爭性PTK抑制劑，雖然PTK的ATP結(jié)合域與絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的ATP結(jié)合域具有高度的同源性，但是嘧啶類作為PTK抑制劑還是具有很大的選擇性。苯胺基類化合物中，3位取代基的衍生物比2位和4位取代基的衍生物具有更強的抑制活性(周意明，孫黎光。酪氨酸蛋白激酶抑制劑的研究進展[J]。解剖科學(xué)進展2000，6(3)214-217)。其中最成功的如諾華公司以2-苯胺嘧啶為先導(dǎo)化合物開發(fā)的用于治療慢性髓細胞樣白血病CML和胃腸道基質(zhì)瘤GISTs的格列衛(wèi)(GLeevec)，，它通過競爭性抑制ATP與酪氨酸蛋白激酶Abl-Bcr的結(jié)合，特異性的阻止Abl-Bcr自身磷酸化，影響細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制腫瘤細胞的增殖。
NO(一氧化氮)是生物體內(nèi)重要的信使分子和效應(yīng)分子，參與多種生理和病理過程有關(guān)，具有廣泛的生理功能。在細胞毒性方面，NO可直接與含有鐵的酶和蛋白質(zhì)作用，從而抑制這些酶所調(diào)節(jié)的細胞活性，促進細胞凋亡和阻止DNA的修復(fù)；在免疫系統(tǒng)方面，NO介導(dǎo)巨噬細胞對腫瘤細胞和細胞病原體等發(fā)揮細胞毒作用外；NO可作用于線粒體呼吸鏈，使線粒體呼吸受阻，ATP消耗增大和產(chǎn)生過少，促進腫瘤細胞死亡。NO抑制原癌基因的表達，可能與蛋白激酶C有關(guān)；同時NO有胃腸道保護作用，可以減少抗腫瘤藥物的胃腸道毒副作用(James F.Kerwin，Jr.Nitric OxideA New Paradigm for Second Messengers[J].J.Med.Chem.1995，22(38)4342-4362.)。然而NO作為氣體信號分子，在體內(nèi)半衰期短，不穩(wěn)定，可控性差等，所以越來越多的研究集中于利用特異性的載體與NO供體偶聯(lián)，從而在機體的特定部位釋放NO，達到殺死癌細胞的作用。到目前為止，NO的靶向性釋放仍是研究的重點。
下列專利中包含與這一發(fā)明具有相似結(jié)構(gòu)的苯胺基嘧啶衍生物例子EP 0564409、WO066613、WO099187、US 0248918。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類具有雙重協(xié)同抗腫瘤機制的N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺衍生物，即N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺與硝酸酯類NO供體偶聯(lián)衍生物。
本發(fā)明是與通式(I)相關(guān)的化合物
其中，R1代表

或
R2選自碳原子數(shù)2-10的直鏈或支鏈烷烴；o，m，p-(CH2)m-Ph-(CH2)n-，其中m＝0-6，n＝1-4。
進一步優(yōu)選通式(I)化合物，R2選自碳原子數(shù)2-10的直鏈烷烴；碳原子數(shù)3-6的支鏈烷烴；o，m，p-(CH2)m-Ph-(CH2)n-，其中m＝0-2，n＝1-3。
化合物編號和結(jié)構(gòu)的具體對應(yīng)關(guān)系如下表

上述定義中的Ph代表苯基；o，m，p-Ph-CH2-分別代表鄰位、間位、對位取代的苯基；下同。
特別優(yōu)選通式(I)化合物，R2選自碳原子數(shù)為2、5、10的直鏈烷烴，碳原子數(shù)為3或5的支鏈烷烴，o，m，p-Ph-CH2-。
最優(yōu)選通式(I)化合物自下列化合物 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基乙酯 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-6-硝氧基己酯 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-10-硝氧基癸酯 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基-1-甲基乙酯 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基丁酯 2-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-3-硝氧甲基苯酯 4-[(2-硝氧基乙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺 4-[(6-硝氧基己氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺 4-[(2-硝氧基丙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺 4-[[(4-硝氧基甲基)]苯氧基甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺 通式(I)化合物制備的藥學(xué)上可以接受的鹽，所說藥學(xué)上可接受的鹽是與鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸或磷酸；琥珀酸，馬來酸，酒石酸，苯磺酸所形成的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽可以本領(lǐng)域常規(guī)的成鹽方法制備。
本發(fā)明中可以用包含治療有效量的通式(I)的抗癌活性成分化合物和藥劑學(xué)上可接受的載體制成組合物。組合物可以本領(lǐng)域常規(guī)的制劑手段制備。
本發(fā)明的又一目的是提供通式(I)化合物在治療細胞凋亡疾病或誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡中的應(yīng)用。
本發(fā)明進一步的目的是提供通式(I)化合物在治療慢性髓細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、胃腸道基質(zhì)瘤、前列腺癌等疾病中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的在于提供這類化合物的制備方法。
本發(fā)明提供如下技術(shù)方案 先導(dǎo)化合物N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(A)的合成路線如下，參見[US5521184和Zoltán Szakács，Szabolcs Béni，Zoltán Varga，Lászlo _rfi，Gy_rgy Kéri，Béla Noszál.Acid-Base profiling of Imatinib(Gleevec)and its fragment[J].J.med.chem，2005，48(1)253-254.]
側(cè)鏈硝酸酯類NO供體，即硝酸酯取代的醇類，可通過相應(yīng)的二醇在乙酸、乙酸酐存在下通過硝酸硝化得到，具體參見[George N.Ziakas，Eleni A.Rekka，Antonios M.Gavalas，Phaedra T.Eleftheriou，Karyofillis C.Tsiakitzis and Panos N.Kourounakis.Nitric oxide releasingderivatives of tolfenamic acid with anti-inflammatory activity and safe gastrointestinal profile[J].Bioorgganic & Medicinal Chemistry，2005，136485-6492.] 其中n=2-10
化合物I1-17的合成硝酸酯取代的醇類或酚類化合物與鹵代乙酸在惰性溶劑中，在DCC(二環(huán)己基碳二亞胺)和催化量的DMAP(4-二甲胺基吡啶)存在下發(fā)生酯化反應(yīng)，制得相應(yīng)的鹵代硝酸酯，其中的惰性溶劑優(yōu)選為二氯甲烷；鹵代乙酸優(yōu)選為溴乙酸。然后在惰性溶劑中，堿性條件下，在季銨鹽的存在下，與N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺發(fā)生取代反應(yīng)，其中的惰性溶劑優(yōu)選為THF(四氫呋喃)；其中的堿優(yōu)選為TEA(三乙胺)；其中的季銨鹽優(yōu)選為TBAB(四丁基溴化銨)。

化合物I1-14，R代表碳原子數(shù)2-10的直鏈烷烴，碳原子數(shù)3-6的支鏈烷烴。

化合物I15-17 化合物I18-33的合成N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺經(jīng)對鹵甲基苯甲酰鹵酰化，再與硝酸酯取代的醇類或酚類化合物在相轉(zhuǎn)移催化劑存在下發(fā)生醚化反應(yīng)。其中的相轉(zhuǎn)移催化劑優(yōu)選為季銨鹽，進一步優(yōu)選為TBAB(四丁基溴化銨)；其中的對鹵代甲基苯甲酰鹵優(yōu)選為對氯甲基苯甲酰氯。

化合物I18-33，R代表碳原子數(shù)2-10的直鏈烷烴，碳原子數(shù)3-6的支鏈烷烴，或相應(yīng)的酚類。

具體實施例方式 以下通過具體實施例和試驗例進一步闡述本發(fā)明，不以任何形式構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
試驗例1抗癌活性試驗 試驗材料癌細胞株及培養(yǎng)基HL-60(promyelocytic leukemia)，K562(promyelocyticleukemia)，PC-3(prostate)，HT-29(colon)，DU 145(colon)用RPMI1640培養(yǎng)液(Gibco-BRL)配成懸液，加入10％經(jīng)加熱滅活的胎牛血清(FCS，Gibco)，100IU/ml青霉素100IU/ml鏈霉素；癌細胞株均購買于美國組織培養(yǎng)中心(ATCC，Rocksville，Maryland，USA). 試劑MTT(3-[4，5-dimethylthiazol-2-yl]-2，5-diphenyltetrazolium bromide；Sigma) 儀器96孔平板(CONING)，自動化分光光度平板讀數(shù)計(Dynatech MR5000)。
藥物按照實施例1～5方法制備的I1～I5，Gleevec 實驗方法 向96孔平板的每孔內(nèi)加入0.1mL含有1000個細胞的由RPMI1640培養(yǎng)液配成的懸浮液，然后于37℃，CO2(5％)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，加入含有不同受試化合物的培養(yǎng)基，于37℃，CO2(5％)，培養(yǎng)2天，每孔加入50μl MTT溶液(2mg/ml)，37℃下培養(yǎng)4小時，吸出上清液，每孔加入150μl DMSO，振搖15分鐘，平板通過自動化分光光度平板讀數(shù)計，于540nm波長處測量每個孔的光密度(OD)。以孔中細胞未加受試化合物測得的光密度作為對照品，以下式分別計算每個化合物的細胞存活率，細胞生存能力與藥物濃度作曲線，細胞存活率為50％即為IC50值。(其中加藥細胞孔OD值是孔中加入細胞、藥物時測得的OD值，空白藥物孔OD值是孔中加入藥物，未加細胞時測得的OD值，對照細胞OD值是孔中加入細胞，未加藥物時測得的OD值)。

實驗結(jié)果 采用MTT法，研究了8個目標化合物體外對六種人體瘤細胞株的生長抑制作用，其中包括兩種直腸癌細胞株(DU-145，HT-29，)，前列腺癌細胞株(PC-3)，髓性細胞白血病細胞株(HL-60，K562)，結(jié)果見表1。
表1受試化合物在各癌細胞株中的IC50(μg/ml) 結(jié)論 從抗癌活性試驗結(jié)果可以看出，受試化合物對六種人體瘤細胞株的生長均具有一定的抑制作用。其中對白血病細胞株的抑制作用明顯高于其他幾種細胞株，說明該類化合物主要的潛在用途是做為抗白血病藥物使用，化合物I6，I15，I32對髓性細胞白血病細胞株(HL-60，K562)的抑制作用最顯著，具有深入研究的價值；幾種受試化合物表現(xiàn)出對前列腺癌要強于其他兩種直腸癌細胞系的抑制作用，顯示可作為抗前列腺癌的藥物使用。
實施例1 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基乙酯(I1) 2-硝氧基乙醇 冰浴、氮氣保護下，將乙二醇(2.48g，40mmol)溶于100ml乙酸乙酯中，依次加入濃硝酸(4.36g，45mmol)，冰醋酸12ml，醋酸酐10ml。室溫攪拌過夜。10％碳酸氫鈉水溶液調(diào)pH至中性，分出有機層，飽和食鹽水洗，無水碳酸鉀干燥，濃縮得黃色油狀粗品。柱層析(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)得1.78g。
2-硝氧乙基溴乙酸酯 2-硝氧基乙醇(1.42g，13.27mmol)溶于40ml無水二氯甲烷中，冰浴下加入溴乙酸(1.83g，13.27mmol)，攪拌溶解，分批加入DCC(2.74g，13.30mmol)和催化量的DMAP。澄清溶液變?yōu)榘咨闋钜海覝財嚢?.5小時。過濾，濃縮。殘留物溶于二氯甲烷中，飽和碳酸氫鈉洗，無水硫酸鈉干燥。柱層析(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)得淺黃色油狀物1.69g， N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(1.25g，4.51mmol)和三乙胺(690μL，4.96ml)加入到50ml四氫呋喃中攪拌20分鐘，加入2-硝氧乙基溴乙酸酯(1.34g，5.88mmol)和催化量的TBAB回流5小時，過濾，飽和碳酸氫鈉洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，乙酸乙酯∶石油醚＝4∶1柱層析得淡黃色固體1.12g，收率58.64％，mp101.3-105.6℃。ESI-MS m/z426[M+1]+，448[M+Na]+； IR(KBr，v(cm-1))3407(N-H)，3038(C-H，Ar)，1724(C＝O)，1579(C＝C)，1453(N-H)，1118(C-O-C)，1007(N-H) 1H-NMRδ(ppm)9.3(d，1H，J＝1.81，NH)，8.7(m，2H)，8.4(m，2H，)，7.5(dd，1H ，J 1＝4.76，J2＝7.94)，7.4(d，1H，J＝5.13)，6.9(d，1H，J＝8.20)，6.8(d，1H，J＝2.07)，6.3(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.9(s，1H)，4.7(dd，2H，J1＝3.24，J2＝5.40)，4.4(dd，2H，J1＝3.15，J2＝5.47)，3.9(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H) 實施例2 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-6-硝氧基己酯(I5) 參照實例1制備方法，由1，6-己二醇為起始原料制備N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-6-硝氧基己酯，收率58.64％，mp123.07-124.8℃。
ESI-MS m/z481，504[M+Na]+； IR(KBr，v(cm-1))3407(N-H)，3038(C-H，Ar)，1724(C＝O)，1579(C＝C)，1453(N-H)，1118(C-O-C)，1007(N-H) 1H-NMRδ(ppm)9.3(d，1H，J＝1.81.NH)，8.7(m，2H)，8.4(m，2H，)，7.5(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.4(d，1H，J＝5.13)，6.9(d，1H，J＝8.20)，6.8(d，1H，J＝2.07)，6.3(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.87(s，1H)，4.76(dd，2H，J1＝3.24，J2＝5.40)，4.43(m，8H)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H)，1.89(m，2H) 實施例3 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-10-硝氧基癸酯(I9) 參照實例1制備方法，由1，10-癸二醇為起始原料制備，N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-10-硝氧基癸酯，收率53.43％，mp145.3-146.7℃。
ESI-MS m/z524[M+1]+，546[M+Na]+； 實施例4 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基-1-甲基乙酯(I11)1-羥基-2-硝氧基丙烷 冰浴、氮氣保護下，將1，2-丙二醇(3.04g，40mmol)溶于100ml乙酸乙酯中，依次加入濃硝酸(873g，80mmol)，冰醋酸20ml，醋酸酐20ml室溫攪拌過夜。10％碳酸氫鈉水溶液沖洗接近中性，飽和食鹽水洗，無水碳酸鉀干燥，濃縮得黃色油狀粗品。柱層析(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)得258g.收率53.31％ 溴乙酸-2-硝氧基丙酯 1-羥基-2-硝氧基丙烷(1.21g，10.0mmol)溶于40ml無水二氯甲烷中，冰浴下再加入溴乙酸(1.67g，12.01mmol)，攪拌溶解，分批加入DCC(2.06g，10mmol)和催化量的DMAP。澄清溶液變?yōu)榘咨闋钜?，室溫攪?.5小時。過濾，濃縮。殘留物溶于二氯甲烷中，飽和碳酸氫鈉沖洗，無水硫酸鈉干燥。柱層析(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)得淺黃色油狀物2.12g，收率88.43％。
N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(1.25g，4.51mmol)和三乙胺(690μL，4.96ml)加入到50ml四氫呋喃中，攪拌20分鐘，加入溴乙酸-2-硝氧基丙酯(1.42g，5.88mmol)和催化量的TBAB回流6小時，過濾，飽和碳酸氫鈉洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，乙酸乙酯∶石油醚＝4∶1柱層析的淡黃色固體1.02g，收率51.51％mp124.6-125.7℃。
ESI-MS m/z439； IR(KBr，v(cm-1))3385(N-H)，3040(C-H，Ar)，1732(C＝O)，1586(C＝C)，1457(N-H)，1200(C-O-C)，1107(N-H)， 1H-NMRδ(ppm)9.25(d，1H，J＝1.81，NH)，8.67(m，2H)8.4(m，2H，)，7.5(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.4(d，1H，J＝5.13)，6.9(d，1H，J＝820)，6.8(d，1H，J＝2.07)，6.3(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.87(s，1H)，5.14(dd，2H，J1＝4.24，J2＝7.40)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H)，1.86(m，3H) 實施例5 N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基丁酯(I12)參照實例5，由1，2-丁二醇為起始原料制備得，收率45.56％，mp131.2-134.5℃。
ESI-MS m/z453； IR(KBr，v(cm-1))3415，3389(N-H)，3035(C-H，Ar)，1765(C＝O)，1606(C＝C)，1447(N-H)，1215(C-O-C)，1089(N-H)， 1H-NMRδ(ppm)9.25(d，1H，J＝1.81，NH)，8.66(m，2H)8.4(m，2H，)，7.46(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.44(d，1H，J＝5.13)，6.89(d，1H，J＝8.20)，6.82(d，1H，J＝2.07)，6.33(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.87(s，1H)，5.26(dd，2H，J1＝4.24，J2＝7.40)，4.67(m，2H)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H)，1.86(m，3H) 實施例6 2-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-3-硝氧甲基苯酯(I16) 2-溴乙酸-3-硝氧甲基苯酯 3-硝氧甲基苯酚(0.70g，4.14mmol)溶于無水二氯甲烷中，攪拌溶解后加入DCC(0.84g，4.08mmol)和催化量的DMAP，冰浴下加入溴乙酸(0.86g，6.18mmol)，室溫攪拌3小時，過濾，濃縮后加入50ml乙酸乙酯，飽和碳酸鈉水溶液沖洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮得油狀物0.92g，收率76.67％。
N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(1.25g，4.51mmol)和吡啶(546μL，6.77ml)加入到50ml四氫呋喃中，攪拌溶解，將2-溴乙酸-3-硝氧甲基苯酯(1.96g，3.46mmol)和催化量的TBAB加入其中，加熱回流12小時，過濾，柱層析得1.42g，收率64.84％，mp156.7-158.6℃ ESI-MS m/z485；508[M+23]+ IR(KBr，v(cm-1))3408(N-H)，，3038(C-H，Ar)，1778(C＝O)，1596(C＝C)，1427(N-H)，1169(C-O-C)，1159(N-H)， 1H-NMR(ppm)9.23(d，1H，J＝1.81，NH)，8.66(m，2H)8.4(m，2H，)，7.89(m，4H)7.46(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.44(d，1H，J＝5.13)，6.89(d，1H，J＝8.20)，6.82(d，1H，J＝2.07)，6.33(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.87(s，1H)，5.29(dd，2H，J1＝3.24，J2＝8.76)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H) 實施例7 4-[(2-硝氧基乙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(I18)4-氯甲基-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺 N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(0.83g，3.00mmol)和三乙胺(500μL，3.60ml)加入到50ml四氫呋喃中攪拌30分鐘，加入4-氯甲基苯甲酰氯(0.73g，3.86mmol)，回流4小時，過濾，乙醇重結(jié)晶得淺黃色固體0.82g，收率63.56％。
4-氯甲基-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(0.86g，2mmol)，催化量的TBAB和2-硝氧基乙醇(0.32g，2.99mmol)加入到甲苯中，60-70℃攪拌1小時。攪拌下1小時內(nèi)滴加20％NaOH水溶液10ml，此溫度下繼續(xù)攪拌2小時，分出有機層，水層用甲苯萃取，合并有機層，依次用稀鹽酸，飽和碳酸氫鈉和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除甲苯，乙酸乙酯重結(jié)晶得0.53g，收率53.0％，mp145.6-148.3℃。
ESI-MS m/z501，523[M+23]+ IR(KBr，v(cm-1))3368(N-H)，，3028(C-H，Ar)，1753(C＝O)，1604(C＝C)，1454(N-H)，1216(C-O-C)，1143(N-H)， 1H-NMRδ(ppm)9.23(d，1H，J＝1.81，NH)，8.66(m，2H)8.4(m，2H，)，7.69(m，4H)7.46(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.44(d，1H，J＝5.13)，6.89(d，1H，J＝8.20)，6.82(d，1H，J＝2.07)，6.33(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.98(s，1H)，5.45(dd，2H，J1＝2.24，J2＝7.76)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，3.32(m，2H)，2.1(s，3H) 實施例8 4-[(6-硝氧基己氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(I22)參照實施例7，以6-硝氧基己醇為起始原料，得白色固體，收率45.5％。
ESI-MS m/z556，[M+23]+ 實施例9 4-[(2-硝氧基丙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(I26)參照實施例7，以2-硝氧基丙醇為起始原料，收率54.5％。
ESI-MS m/z515[M+1]+ 實施例10 4-[[(4-硝氧基甲基)]苯氧基甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(I32)參照實施例7，以3-硝氧基苯酚為起始原料，收率56.6％。
ESI-MS m/z562，585[M+23]+
權(quán)利要求
1.通式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽
R1為
或
R2選自碳原子數(shù)2-10的直鏈或支鏈烷烴，o，m，p-(CH2)m-Ph-(CH2)n-，其中m＝0-6，n＝1-4。
2.權(quán)利要求1所述通式(I)化合物，R2選自碳原子數(shù)2-10的直鏈烷烴；碳原子數(shù)3-6的支鏈烷烴；o，m，p-(CH2)m-Ph-(CH2)n-，其中m＝0-2，n＝1-3。
3.權(quán)利要求2所述通式(I)化合物，R2選自碳原子數(shù)2、5、10的直鏈烷烴，碳原子數(shù)3、5的支鏈烷烴，o，m，p-Ph-CH2-。
4.權(quán)利要求1所述通式(I)化合物，其選自
N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基乙酯，
N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-6-硝氧基己酯，
N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-10-硝氧基癸酯，
N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基-1-甲基乙酯，
N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基丁酯，
2-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-3-硝氧甲基苯酯，
4-[(2-硝氧基乙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺，
4-[(6-硝氧基己氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺，
4-[(2-硝氧基丙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺，
4-[[(4-硝氧基甲基)]苯氧基甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺。
5.權(quán)利要求1-4任一項所述通式(I)化合物的制備方法，包括以下步驟
1)R1為
時的通式(I)化合物
(1)硝酸酯取代的醇類化合物與鹵代乙酸在二環(huán)己基碳二亞胺存在下發(fā)生酯化反應(yīng)，
(2)與N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺發(fā)生在季銨鹽存在下取代反應(yīng)；
2)R1為
時的通式(I)化合物
(1)N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺經(jīng)對鹵代甲基苯甲酰鹵?；?，
(2)與硝酸酯取代的醇類化合物在相轉(zhuǎn)移催化劑存在下發(fā)生醚化反應(yīng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4項中任一項的通式(I)化合物和加入藥劑學(xué)上可接受的載體制成的組合物。
7.權(quán)利要求1-4項中任一項的通式(I)化合物在制備治療細胞凋亡疾病或誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1-4項中任一項的通式(I)化合物在制備治療慢性髓細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、胃腸道基質(zhì)瘤、前列腺癌疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺衍生物，具體涉及N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺與硝酸酯類NO(一氧化氮)供體通過酯鍵或酰胺鍵連接所得到的化合物。此類化合物由N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺與相應(yīng)的硝酸酯類NO供體通過不同的連接基團偶聯(lián)，發(fā)生取代反應(yīng)制得。通過雙重協(xié)同抗腫瘤機制，展現(xiàn)了良好的抑制細胞凋亡或誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的作用。
文檔編號C07D401/04GK101245061SQ20081000011
公開日2008年8月20日 申請日期2008年1月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月13日
發(fā)明者董偉兵, 微 周, 張廣明 申請人:天津天士力集團有限公司