專利名稱：：一種具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：斑蝥是我國民間治療腫瘤的一種中藥，臨床證明其有效成分斑蝥素(Cantharidin)對(duì)多種腫瘤具有療效，但是有比較大的毒副作用，尤其是對(duì)泌尿系統(tǒng)有明顯的刺激作用。其結(jié)構(gòu)改造衍生物去甲斑蝥素(Norcantharidin)是我國首先開發(fā)的、具有較強(qiáng)抗腫瘤活性、調(diào)節(jié)免疫作用及獨(dú)特升白作用的抗腫瘤藥物，目前已經(jīng)在臨床上廣泛應(yīng)用，與斑蝥素相比，其對(duì)泌尿系統(tǒng)的刺激性較小。最新研究表明，去甲斑蝥素是蛋白磷酸酶(ProteinPhosphatases)PP2A和PP1的強(qiáng)效抑制劑。蛋白磷酸酶能調(diào)控多種生理過程，是去甲斑蝥素抗腫瘤機(jī)制的一個(gè)新的作用靶點(diǎn)，該靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)使(去甲)斑蝥素及其衍生物重新成為抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)。2001年，McCluskey研究小組報(bào)道了一系列氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的合成及初步生物活性，其對(duì)PP1和PP2A的抑制活性均高于去甲斑蝥素，其合成方法是在密封試管中，三乙胺的存在下，甲苯溶劑中，等量的去甲斑蝥素與具有光學(xué)活性的氨基酸在20CTC下反應(yīng)24小時(shí)，得到相應(yīng)氨基酸的去甲斑蝥酰亞胺衍生物，收率約為8~40%。但是，McCluskey研究小組沒有詳細(xì)測(cè)定并報(bào)道這類化合物的光學(xué)活性及絕對(duì)構(gòu)型，并且，其合成方法的實(shí)驗(yàn)條件苛刻，氨基酸的手性原子極有可能被消旋化，使其應(yīng)用受到限制。自然界中的大量實(shí)例及現(xiàn)代科學(xué)已證實(shí)化合物的光學(xué)活性與其生物活性有密切的內(nèi)在聯(lián)系，具有光學(xué)活性的化合物各異構(gòu)體之間的生物活性存在明顯的差異。因此，合成并確定具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物是十分重要的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，提供一種操作簡(jiǎn)便、產(chǎn)率高、純度好的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物。本發(fā)明的另一目的在于提供一種上述具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)本發(fā)明提供的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物，具有下述式(I)結(jié)構(gòu)上述具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，包括下述步驟(1)將L-氨基酸與去甲斑蝥素溶于醇或醇和水的混合體系，加熱回流，得到含產(chǎn)物的反應(yīng)液；(2)將上述反應(yīng)液進(jìn)行濃縮，加熱反應(yīng)液至微沸狀態(tài)，然后加入有機(jī)溶劑進(jìn)行析晶，靜置，冷卻，得到具有光學(xué)活性的L-氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物。步驟1中，所述L-氨基酸為L-組氨酸、L-精氨酸或L-賴氨酸。步驟1中，所述醇可以是甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇或叔丁醇；優(yōu)選為乙醇。步驟1中，所述醇和水的混合體系的體積分?jǐn)?shù)為50%~100%;優(yōu)選體積分?jǐn)?shù)為95%。歩驟1中，所述L-氨基酸與去甲斑蝥素的摩爾比為1:11.5;優(yōu)選摩爾比為1:1.1。步驟2中，所述有機(jī)溶劑為丙酮、甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、正丁醇或N，N-二甲基甲酰氨；優(yōu)選有機(jī)溶劑為丙酮。反應(yīng)過程如式II所示其中，R為或—(，/V或—(CH2)4NH2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果(1)本發(fā)明提供的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物，其對(duì)一些人體癌細(xì)胞株具有良好的抑制活性。(2)本發(fā)明制備方法條件簡(jiǎn)便易行，產(chǎn)物的收率高、純度好。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1:L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將33mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-組氨酸溶于200ml95%乙醇水溶液中，加熱回流48小時(shí)，得到反應(yīng)液；然后將該反應(yīng)液濃縮，加熱反應(yīng)液至微沸狀態(tài)，然后加入適量丙酮(丙酮的用量加至使微沸的反應(yīng)液達(dá)到飽和狀態(tài))，靜置，冷卻，重結(jié)晶；結(jié)晶母液可繼續(xù)濃縮、重結(jié)晶；多次重結(jié)晶共得到8.88g白色針狀晶體，即L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為97.0%。M.p.280。C(分解溫度)。比旋光度[a]D20=-75.8(c=0.02507，H2〇)。(即2CTC以鈉光為光源，以水為溶劑，樣品的比旋光度是左旋75.8。。)IR(KBr)v:3469(N國H)，3160，3120，3006(C=C-H)，2965，2883(-CH2-)，1781(酰亞胺，vasymC=〇)，1708(酰亞胺，vsymC=0)，1637(羧酸根，vasymC=0)，1400(羧酸根,vsymC=0)，1189(C-0-C)cm—1。FAB-MS:m/z=306，[M+H+。1HNMR(DMSO-d6，5/ppm,J/Hz):156-1.58(m'4H)，2.96(d'1H'J=7.2Hz)，3.02(d，1H，J=7.2Hz),3.09(dd，1H，J=15.0，10.4Hz)，3.22(dd，1H，J=15.0，4.8Hz)，4.58(s，1H)，4.64(dd，1H，J=10.4，4.8Hz)，4.67(s，1H)，5.52(br.)，6.74(s，1H)，7.64(s,1H)。元素分析，理論{|;:C，55.08;H，4.95;N，13.76;觀U定^(直C，54.47;H，5.06;N，13.93(分子式C14H15N305)。實(shí)施例2:L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將45mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-組氮酸溶于200ml95%乙醇水溶液中，加熱回流48小時(shí)，得到反應(yīng)溶液；然后將該反應(yīng)溶液濃縮，加熱反應(yīng)液至微沸狀態(tài)，然后加入適量四氫呋喃，靜置，冷卻，重結(jié)晶；結(jié)晶母液可繼續(xù)濃縮、重結(jié)晶；多次重結(jié)晶共得到8.24g白色針狀晶體，即L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為90.1%。實(shí)施例3:L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將40mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-組氨酸溶于200ml95%異丙醇水溶液中，加熱回流48小時(shí)，得到反應(yīng)物的溶液；然后將該反應(yīng)溶液濃縮，加熱反應(yīng)液至微沸狀態(tài)，然后加入適量丙酮，靜置，冷卻，重結(jié)晶；結(jié)晶母液可繼續(xù)濃縮、重結(jié)晶；多次重結(jié)晶共得到5.95g白色針狀晶體，即L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為65.0%。實(shí)施例4:L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將33mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-精氨酸溶于200ml無水乙醇中，加熱回流48小時(shí)，得到反應(yīng)物的溶液；然后將該反應(yīng)溶液濃縮，加熱反應(yīng)液至微沸狀態(tài)，然后加入丙酮至飽和狀態(tài)，靜置，冷卻，重結(jié)晶；結(jié)晶母液可繼續(xù)濃縮、重結(jié)晶；多次重結(jié)晶共得到9.43g白色針狀晶體，即L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為97.0%。分解點(diǎn)260°C。FAB國MS:m/z=325，[M+H]+。1HNMR(DMSO-d6，5/ppm,J/Hz):1.04，(t,3H，J=6.8Hz),1.19-1.21'(m,2H),1.58-1.61,(m，4H),1.80-1.90，(m,1H)，2.15-2.30，(m，1H)'2.88-2.93,(m，2H)'3.01畫3.10,(m,2H),3.39-3.45,(q，2H),4.06-4.10,(dd，1H),4.38，(s，1H),4.65，(s，2H),7,49'(s，1H),7.75,(s,2H)，9.13，(s，1H)。IR(KBr)v:3367(N國H)，3176，(C=C-H)，2964，2879(-CH2-)，1770，(酰亞胺，vasymC=0)，1697(酰亞胺，vsymC=0)，1452(羧酸根,vsymC=0)，"33(C-0-C)cm-1。HRFAB-MS，理論值325.1506，[M+H]+;測(cè)定值325.1503，[M+H]+(分子式。141"12。1\1405)。實(shí)施例5:L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將45mmo1的去甲斑蝥素與30mmol的L-精氨酸于200ml甲醇中，加熱回流48小時(shí)，得到反應(yīng)物的溶液；然后將該反應(yīng)溶液濃縮，加熱反應(yīng)液至微沸狀態(tài)，然后加入適量四氫呋喃，靜置，冷卻，重結(jié)晶；結(jié)晶母液可繼續(xù)濃縮、重結(jié)晶；多次重結(jié)晶共得到8.46g白色針狀晶體，即L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為87.0%。實(shí)施例6:L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將40mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-精氨酸于250ml80%異丙醇水溶液中，加熱回流48小時(shí)，得到反應(yīng)物的溶液；然后將該反應(yīng)溶液濃縮，加熱反應(yīng)液至微沸狀態(tài)，然后加入適量丙酮，靜置，冷卻，重結(jié)晶；結(jié)晶母液可繼續(xù)濃縮、重結(jié)晶；多次重結(jié)晶共得到6.12g白色針狀晶體，即L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為63.0%。測(cè)試?yán)?:MTT法評(píng)價(jià)L-氨基酸去甲斑蝥酰亞胺的抗腫瘤活性取對(duì)數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，接種于96孔板中，37°C、5。/。C02孵箱中培養(yǎng)12h后，加入不同濃度的樣品。培養(yǎng)72h，離心棄上清，加入MTT溶液(5mg/mL)，放置37°C、5%。02孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)。4h后離心棄上清，每孔加入100^iLDMSO，振蕩。溶解15min后，用酶標(biāo)儀490nm測(cè)定OD值，并用SPSS法計(jì)算IC5。值，結(jié)果見表1。表l:對(duì)人體癌細(xì)胞株的生長抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>aA549(人肺腺癌細(xì)胞)，CNE-1(高分化人鼻咽癌細(xì)胞)，CNE-2(低分化人鼻咽癌細(xì)胞)，MGC-803(人胃癌細(xì)胞)，H印G-2(人肝癌細(xì)胞)，KB-3-1(人表皮癌細(xì)胞)，HL-60(白血病細(xì)胞)。bIC5C)，半數(shù)抑制濃度，藥物作用72小時(shí)后由MTT法測(cè)得。如表1所示，本發(fā)明的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物在生長抑制活性試驗(yàn)中對(duì)一些人體癌細(xì)胞株顯示了良好的抑制活性。測(cè)試?yán)?對(duì)照實(shí)驗(yàn)在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，即加熱L-組氨酸的95%EtOH/H2〇溶液，回流48小時(shí)；然后將加熱回流的溶液濃縮，并加熱至微沸狀態(tài)，然后加入丙酮至飽和狀態(tài)，靜置，冷卻，重結(jié)晶。比旋光度數(shù)據(jù)如下原料L-組氨酸[a]D2Q=-37.4°(文獻(xiàn)值-39.4°)。對(duì)照實(shí)驗(yàn)L-組氨酸晶體[a]D2Q=-38.4°?？梢?，對(duì)照實(shí)驗(yàn)前后的氨基酸旋光度為一常數(shù)，即實(shí)驗(yàn)條件并未改變氨基酸的光學(xué)活性，即本發(fā)明制備的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物會(huì)保持相應(yīng)的氨基酸光學(xué)活性。權(quán)利要求1、一種具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物，具有下述結(jié)構(gòu)式id="icf0001"file="S2008100277714C00011.gif"wi="53"he="34"top="50"left="75"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，R為id="icf0002"file="S2008100277714C00012.gif"wi="27"he="17"top="93"left="66"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>或id="icf0003"file="S2008100277714C00013.gif"wi="34"he="18"top="89"left="102"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>或-(CH2)4NH22、一種權(quán)利要求1所述的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于包括下述步驟(1)將L-氨基酸與去甲斑蝥素溶于醇或醇和水的混合體系，加熱回流，得到含產(chǎn)物的反應(yīng)液；(2)將上述反應(yīng)液進(jìn)行濃縮，加熱反應(yīng)液至微沸狀態(tài)，然后加入有機(jī)溶劑進(jìn)行析晶，靜置，冷卻，得到具有光學(xué)活性的L-氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟1中，所述L-氨基酸為L-組氨酸、L-精氨酸或L-賴氨酸。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟1中，所述醇是甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇或叔丁醇。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟1中，所述醇和水的混合體系的體積分?jǐn)?shù)為50%~100%。6、根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟1中，所述L-氨基酸與去甲斑蝥素的摩爾比為1:11.5。7、根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟2中，所述有機(jī)溶劑為丙酮、甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、正丁醇或N，N-二甲基甲酰氨。全文摘要本發(fā)明公開了一種具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物及其制備方法，將L-氨基酸與去甲斑蝥素溶于醇或醇/水體系，加熱回流，得到反應(yīng)液，然后濃縮上述反應(yīng)液進(jìn)行，并加入有機(jī)溶劑析晶，靜置冷卻，得到具有光學(xué)活性的L-氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物。本發(fā)明提供的具有光學(xué)活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物，對(duì)人體癌細(xì)胞株具有良好的抑制活性；該制備方法簡(jiǎn)便易行，產(chǎn)物的收率高、純度好。文檔編號(hào)C07D491/18GK101270122SQ20081002777公開日2008年9月24日申請(qǐng)日期2008年4月29日優(yōu)先權(quán)日2008年4月29日發(fā)明者冼勵(lì)堅(jiān),吳明瑋,李永強(qiáng),永鄒,陳大峰申請(qǐng)人:中國科學(xué)院廣州化學(xué)研究所