專利名稱：從丹參中提取高純度丹參素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從丹參藥材中提取高純度丹參素的方法。
背景技術(shù)：
丹參Sa/Wa脂加o〃W加Bumge為唇形科鼠尾草屬多年生草本植物，是我國傳統(tǒng)的中藥， 具有活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、清心除煩之功效，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品。丹參的活性成分 主要有兩類 一類是以丹參酮為代表的脂溶性成分；另一類是以丹酚酸為代表的水溶性成 分。研究表明，丹參的水溶性成分具有抗氧化、抗凝、抗血栓、抗心腦血管缺血及調(diào)節(jié)血 脂作用，對(duì)多種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性心、肝、肺等組織損傷均有明顯的保護(hù)作用，具有抗炎、增強(qiáng) 免疫功能等多方面藥理活性。目前對(duì)丹參水溶性成分研究關(guān)注比較多的是丹酚酸B，而忽 視了另一個(gè)有效成分一一丹參素。
丹參素，又名丹參素甲，命名為D(+)p-(3,4-二羥基苯基)乳酸，屬于苯丙酸類成分。同 時(shí)丹參中還含有丹參素乙和丹參素丙等成分，丹參素乙是丹參素(丹參素甲)的三聚體， 丹參素丙是丹參素的二具體。三者的結(jié)構(gòu)如下
藥理研究表明，丹參素具有縮小心肌梗死范圍和減輕病程的作用，同時(shí)對(duì)心肌缺血/ 再灌注損傷具有保護(hù)作用；對(duì)細(xì)胞因子活化內(nèi)皮細(xì)胞有抑制作用，從而有利于保護(hù)血管內(nèi)
皮，起到抗血栓形成的作用。近年來的研究結(jié)果還表明丹參素對(duì)腦損傷也有良好的保護(hù)作 用，總之丹參素在治療冠心病、抗血栓、降血脂和防止動(dòng)脈粥樣硬化方面具有獨(dú)特的療效。 然而由于丹參素分子中含有活潑的羥基，見光或受熱易發(fā)生氧化反應(yīng)，給分離制備帶來極 大的難度，目前為止丹參素僅限于作為含有丹參的中成藥的指標(biāo)性成分的使用，還不能真
丹參素(丹參素甲)
丹參素丙
丹參素乙正走向臨床。
隨著對(duì)丹參研究的進(jìn)一步深入，丹參素的分離制備技術(shù)已逐漸引起重視，其中純度較 高的丹參素的制備方法有以下幾種方法一CN1161317C中公開了一種丹參素的提取分 離方法，將丹參以常規(guī)水提取，提取液依次通過吸附樹脂柱和離子交換樹脂柱，分別以氫 氧化鈉和氯化鈉將含丹參素的部分洗脫下來，洗脫液的pH調(diào)節(jié)到3，以乙醚進(jìn)行萃取，可 得到含量為91%的丹參素，得率為0.24% (實(shí)施例3);方法二 CN1303052C中公開的方 法是先用水或醇提取丹參藥材，再用稀堿將丹參水提液中丹參素前體轉(zhuǎn)化為丹參素，轉(zhuǎn)化 過程中需用抗氧保護(hù)劑并通入惰性氣體保護(hù)，通過超濾得到粗品丹參素，然后用正相色譜 柱分離出丹參素，純度在90%以上。方法三CN1751706A中公開了丹參藥材的提取方法， 丹參藥材以堿水提取，用酸調(diào)節(jié)pH后進(jìn)行醇沉，再經(jīng)過2次色譜柱分離，洗脫液加堿調(diào) 節(jié)pH后濃縮得粗品，重結(jié)晶后得到丹參素。以上幾種方法過程復(fù)雜，多次使用色譜柱分 離，增加了有機(jī)溶劑殘留的機(jī)會(huì)和含量，且使用萃取、超濾等方法，不利于工業(yè)化且生產(chǎn) 成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種收率高、過程穩(wěn)定可控、適合于大規(guī)模生產(chǎn)的從丹參藥材 中提取高純度丹參素的方法，該方法所得丹參素含量大于90%，具有工業(yè)應(yīng)用前景。
本發(fā)明提供的從丹參藥材中提取丹參素的方法，具體步驟如下
a. 將丹參藥材切片，采用pH為8 10的堿水溶液熱浸法提取，溫度60 80'C，得到 含丹參素的提取液。
b. 對(duì)提取液用酸調(diào)節(jié)pH至1 2，過濾除去沉淀，將上清液于60 7(TC下濃縮。濃縮 液加乙醇進(jìn)行沉淀，使醇濃度達(dá)到70 85%，靜置，除去沉淀，在60-70'C溫度下濃縮濾 液至無醇味。
c. 將上述濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先以2 3倍樹脂體積的水洗脫，棄去，繼續(xù)以3 5倍樹脂體積的水洗脫，收集洗脫液。
d. 將上述洗脫液在60-7(TC溫度下濃縮，以堿水調(diào)節(jié)pH至6 7，冷凍干燥成固體。
e. 將上述固體用乙醇加熱溶解，過濾放冷后析出的沉淀，濾液低溫(在60-7(TC溫度 下)濃縮至小體積，析出結(jié)晶，即為高純度丹參素。
步驟a的主要目的在于初步提取出丹參藥材中的丹參素，所用堿水為氫氧化鈉、氫氧 化鉀或氨水。熱浸法提取次數(shù)可以是2 3次，堿水的用量可以是丹參藥材重量的8-15倍， 每次提取時(shí)間為0.5 1小時(shí)。正如背景技術(shù)所述，丹參藥材中除了含有丹參素外，還含有 丹參素的二聚體和三聚體，其中的內(nèi)酯結(jié)構(gòu)在堿水作用下發(fā)生水解，生成丹參素，但由于丹參素結(jié)構(gòu)中含有多酚結(jié)構(gòu)，不能用太濃的堿在高溫下提取，因此采用的提取方法為以pH 8 10的堿水60 8(TC下熱浸法提取。
步驟b中，調(diào)節(jié)pH所用的酸為鹽酸、乙酸或硫酸。此時(shí)有大量沉淀析出，為雜質(zhì)成 分，過濾除去雜質(zhì)后濃縮上清液，由于丹參素結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定，采用減壓的方法在60 7(TC 下濃縮。濃縮后的醇沉過程加入乙醇使乙醇濃度達(dá)70 85%，充分?jǐn)嚢韬?，在室溫?'C 下靜置12 24小時(shí)。醇沉的目的是為了除去糖、淀粉、糅質(zhì)等成分，若醇的濃度低于70 %，醇沉效果差；但如果醇的濃度高于85%，丹參素的溶解度降低，使得收率下降，因此 醇的最佳濃度在70 85%之間。
步驟c中大孔吸附樹脂為AB-8、 D101或HP-20，優(yōu)選HP-20。先以2 3倍樹脂體積 的水洗去糖等雜質(zhì)，柱洗脫過程中薄層色譜(TLC)點(diǎn)板跟蹤，發(fā)現(xiàn)3倍以上柱體積時(shí)丹 參素開始出現(xiàn)，雜質(zhì)洗脫結(jié)束后以3 5倍體積的水洗脫富集丹參素。目前可以選用的大 孔吸附樹脂類型較多，經(jīng)過篩選得出AB-8、 D101禾卩HP—20的效果較好，其中優(yōu)選的是 HP-20。 HP-20不像其它樹脂那樣需要復(fù)雜的酸堿前處理和后處理過程，使用比較方便，且 可以多次使用而不需要像其它樹脂那樣再生處理。HP-20的另外一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，樹脂殘留量 低，尤其是二乙烯基苯這個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)比其它樹脂處理的要低很多，不會(huì)超過國家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī) 定。
步驟d先將洗脫液在低溫下濃縮至小體積，約1Kg藥材200ml，再用堿液調(diào)節(jié)pH至6 7，所用堿液為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氨水，與步驟a中提取所用堿液相同。該液體采用 冷凍干燥的方法凍干，冷凍干燥是一種成熟的工藝，能有效的去處水分，得到固體。用堿 液調(diào)過pH的液體，由于其中還含有一些低極性的成分和糖類，很難通過減壓濃縮的方法 完全去除其中的水分。因此我們采用冷凍干燥法將其制成固體，利于下一步雜質(zhì)的除去。
步驟e將步驟d所得固體用乙醇溶解，此時(shí)會(huì)析出一些小極性成分和糖類，所用乙醇 為無水乙醇或95%乙醇。濾液經(jīng)過低溫減壓濃縮后即析出結(jié)晶，為高純度的丹參素。
本發(fā)明所述的高純度丹參素的提取制備工藝具有以下特點(diǎn)
本發(fā)明工藝過程簡單、可控。用稀堿溶液提取丹參藥材，采用熱浸提取的方法，既使 得一些丹參素的前體成分向丹參素轉(zhuǎn)變，又防止了丹參素發(fā)生氧化變質(zhì)，保證了提取的效 率。得率在O. 4%以上。
本發(fā)明工藝過程污染小、成本低。在整個(gè)過程中僅采用了水、稀酸、稀堿以及工業(yè)常 用的乙醇，避免了萃取和正相色譜會(huì)大量使用的有機(jī)溶劑，減少了污染，適合于大規(guī)模生 產(chǎn)。
本發(fā)明所得的高純度丹參素以高效液相色譜法測(cè)定，結(jié)果表明，丹參素含量大于90%。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明。丹參素的提取從丹參藥材2kg到50kg的生 產(chǎn)規(guī)模，過程可操作性強(qiáng)，產(chǎn)品質(zhì)量和得率穩(wěn)定，說明該工藝已經(jīng)克服了一些工藝無法在 工業(yè)生產(chǎn)中重現(xiàn)和控制的問題，確實(shí)是可行的。 實(shí)施例l
取丹參切片5kg，粉碎后加入pH 8的氫氧化鈉溶液75L， 6(TC下熱浸提取3次，每 次提取0.5h，合并3次提取液。以稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至1，此時(shí)析出大量沉淀，過濾除去沉淀。 上清液60。C減壓濃縮成2000ml，加入乙醇充分?jǐn)嚢?，并使醇濃度達(dá)70%，室溫下靜置24 小時(shí)后，濾除沉淀，濾液減壓濃縮至無醇味。濃縮液上5kg的AB — 8大孔樹脂柱，先以2 倍體積的水沖洗，此部分為雜質(zhì)成分，另處理；再以3倍體積的水沖洗，收集該部分。在 60'C將水液減壓濃縮成約500ml，加pH 8的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為6.5,經(jīng)過冷凍干燥機(jī)凍 干成固體。冷凍干燥后的固體用95X乙醇100ml加熱溶解，放冷后析出的沉淀過濾除去， 濾液低溫濃縮至小體積，析出結(jié)晶，即為高純度丹參素，稱重31.4g，經(jīng)測(cè)定純度為92.8 %。
實(shí)施例2
取丹參切片10kg，粉碎后加入pH 10的氫氧化鉀溶液120L， 80'C下熱浸提取2次， 每次提取lh，合并2次提取液。以乙酸調(diào)節(jié)pH至2，此時(shí)析出大量沉淀，過濾除去沉淀。 上清液7(TC減壓濃縮成3000ml，加入乙醇充分?jǐn)嚢?，并使醇濃度達(dá)85%， 4'C靜置18小 時(shí)后，濾除沉淀，濾液減壓濃縮至無醇味。濃縮液上10kg的HP-20大孔樹脂柱，先以2 倍體積的水沖洗，此部分為雜質(zhì)成分，另處理；再以5倍體積的水沖洗，收集該部分。在 70。C將水液減壓濃縮成約500ml，加pH 10的氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH為7，經(jīng)過冷凍干燥機(jī)凍干 成固體。冷凍干燥后的固體用乙醇200ml加熱溶解，放冷后析出的沉淀過濾除去，濾液低 溫濃縮至小體積，析出結(jié)晶，即為高純度丹參素，稱重59.5g，經(jīng)測(cè)定純度為96.2%。 實(shí)施例3
取丹參切片2kg，粉碎后加入pH 9的氨水溶液20L， 75'C下熱浸提取3次，每次提 取lh，合并3次提取液。以稀硫酸調(diào)節(jié)pH至1.5，此時(shí)析出大量沉淀，過濾除去沉淀。上 清液65。C減壓濃縮成1000ml，加入乙醇充分?jǐn)嚢?，并使醇濃度達(dá)75%， 4'C靜置12小時(shí) 后，濾除沉淀，濾液減壓濃縮至無醇味。濃縮液上2kg的D101大孔樹脂柱，先以3倍體 積的水沖洗，此部分為雜質(zhì)成分，另處理；再以4倍體積的水沖洗，收集該部分。在60'C 將水液減壓濃縮成約500ml，加pH 9的氨水溶液調(diào)節(jié)pH為6，經(jīng)過冷凍干燥機(jī)凍干成固 體。冷凍干燥后的固體用95%的乙醇50ml加熱溶解，放冷后析出的沉淀過濾除去，濾液低溫濃縮至小體積，析出結(jié)晶，即為高純度丹參素，稱重13.8g，經(jīng)測(cè)定純度為92.4%。 實(shí)施例4
取丹參切片20kg，粉碎后加入pH 10的氫氧化鈉溶液160L， 8(TC下熱浸提取2次， 每次提取lh，合并2次提取液。以稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2，此時(shí)析出大量沉淀，過濾除去沉 淀。上清液6(TC減壓濃縮成8L，加入乙醇充分?jǐn)嚢?，并使醇濃度達(dá)80%， 4'C靜置24小 時(shí)后，濾除沉淀，濾液減壓濃縮至無醇味。濃縮液上20kg的HP—20大孔樹脂柱，先以3 倍體積的水沖洗，此部分為雜質(zhì)成分，另處理；再以5倍體積的水沖洗，收集該部分。在 70'C將水液減壓濃縮成約2L，加pH 10的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為7，經(jīng)過冷凍干燥機(jī)凍 干成固體。冷凍干燥后的固體用無水乙醇500ml加熱溶解，放冷后析出的沉淀過濾除去， 濾液低溫濃縮至小體積，析出結(jié)晶，即為高純度丹參素，稱重130g，經(jīng)測(cè)定純度為95.3 %。
實(shí)施例5
取丹參切片50kg，粉碎后加入pH 8.5的氫氧化鉀溶液600L， 7(TC下熱浸提取3次， 每次提取0.5h，合并3次提取液。以稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至L5，此時(shí)析出大量沉淀，過濾除去 沉淀。上清液6(TC減壓濃縮成15 L，加入乙醇充分?jǐn)嚢?，并使醇濃度達(dá)70%，室溫靜置 24小時(shí)后，濾除沉淀，濾液減壓濃縮至無醇味。濃縮液上25kg的HP_20大孔樹脂柱， 先以2倍體積的水沖洗，此部分為雜質(zhì)成分，另處理；再以4倍體積的水沖洗，收集該部 分。在62。C將水液減壓濃縮成約5L，加pH9的氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH為6.2，經(jīng)過冷凍干 燥機(jī)凍干成固體。冷凍干燥后的固體用無水乙醇1200ml加熱溶解，放冷后析出的沉淀過 濾除去，濾液低溫濃縮至小體積，析出結(jié)晶，即為高純度丹參素，稱重295g，經(jīng)測(cè)定純度 為94.9%。 實(shí)施例6
取丹參切片200kg，粉碎后加入pH10的氫氧化鈉溶液2000L， 80'C下熱浸提取3次， 每次lh,合并3次提取液，以乙酸調(diào)節(jié)pH至2，此時(shí)析出大量沉淀，過濾除去沉淀。上 清液60。C減壓濃縮成60L，加入乙醇充分?jǐn)嚢?，并使醇濃度達(dá)70%， 4t:靜置18小時(shí)后， 濾除沉淀，濾液減壓濃縮至無醇味。濃縮液上100kg的D101大孔樹脂柱，先以3倍體積 的水沖洗，此部分為雜質(zhì)成分，另處理；再以5倍體積的水沖洗，收集該部分。在65'C將 水液減壓濃縮成約15 L，加pH 10的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為6.0，經(jīng)過冷凍干燥機(jī)凍干成 固體。冷凍干燥后的固體用95X乙醇4L加熱溶解，放冷后析出的沉淀過濾除去，濾液低 溫濃縮至小體積，析出結(jié)晶，即為高純度丹參素，稱重1075g，經(jīng)測(cè)定純度為93.8%。實(shí)施例7
取丹參切片500kg，粉碎后加入pH8的氨水溶液4000L， 70。C下熱浸提取2次，每次 lh，合并2次提取液，以稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至l，此時(shí)析出大量沉淀，過濾除去沉淀。上清液 6(TC減壓濃縮成120L，加入乙醇充分?jǐn)嚢?，并使醇濃度達(dá)85%， 4'C靜置24小時(shí)后，濾 除沉淀，濾液減壓濃縮至無醇味。濃縮液上300kg的HP-20大孔樹脂柱，先以2倍體積的 水沖洗，此部分為雜質(zhì)成分，另處理；再以4倍體積的水沖洗，收集該部分。在70'C將水 液減壓濃縮成約36L，加pH8的氨水溶液調(diào)節(jié)pH為7.0，經(jīng)過冷凍干燥機(jī)凍干成固體。 冷凍干燥后的固體用無水乙醇10L加熱溶解，放冷后析出的沉淀過濾除去，濾液低溫濃縮 至小體積，析出結(jié)晶，即為高純度丹參素，稱重2487g，經(jīng)測(cè)定純度為92.9%。
權(quán)利要求
1、從丹參中提取高純度丹參素的方法，其特征在于具體步驟如下a、將丹參藥材切片，采用pH為8～10的堿水溶液熱浸法提取，溫度60～80℃，得到含丹參素的提取液；b、對(duì)提取液用酸調(diào)節(jié)pH至1～2，過濾除去沉淀；將上清液于60～70℃下濃縮；濃縮液加乙醇進(jìn)行沉淀，使醇濃度達(dá)到70～85％，靜置，除去沉淀，60-70℃溫度下濃縮濾液至無醇味；c、將上述濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先以2～3倍樹脂體積的水洗脫，棄去，繼續(xù)以3～5倍樹脂體積的水洗脫，收集洗脫液；d、將上述洗脫液60-70℃溫度下濃縮，以堿水調(diào)節(jié)pH至6～7，冷凍干燥成固體；e、將上述固體用乙醇加熱溶解，過濾放冷后析出的沉淀，濾液低溫濃縮至小體積，析出結(jié)晶，即為高純度丹參素，含量達(dá)90％以上。
2、 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，步驟a提取所用的堿水為氫氧化鈉、氫氧 化鉀或氨水，步驟d所用堿水與步驟a中相同。
3、 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，步驟a中熱浸法提取次數(shù)為2 3次，堿 水的用量為丹參藥材重量的8 15倍，每次提取時(shí)間為0. 5 1小時(shí)。
4、 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，步驟b所用酸為鹽酸、乙酸或硫酸。
5、 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，步驟c所用大孔吸附樹脂為AB-8、 D101 或HP—20。
6、 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，步驟e所用乙醇為無水乙醇或95X乙醇。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種從丹參中提取高純度丹參素的方法。該方法包括用熱浸法從丹參藥材中提取含有丹參素的提取液；用酸調(diào)節(jié)提取液的pH值，去除雜質(zhì)，減壓濃縮；然后用大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，富集丹參素；再低溫濃縮，冷凍干燥成固體；最后用乙醇加熱溶解，過濾沉淀后對(duì)濾液低溫濃縮，析出結(jié)晶，即得純度為90％以上的丹參素。本發(fā)明方法工藝簡單、可控，提取效率高，而且污染少，成本低，適合于大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07C59/00GK101289385SQ20081003885
公開日2008年10月22日 申請(qǐng)日期2008年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月12日
發(fā)明者寧 張, 川 張, 豪 鄒 申請(qǐng)人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)