專利名稱：一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從紅豆杉等植物原料中提取紅杉醇的方法，具體的是一種利用溶劑回流 提取并純化紅杉醇的方法。
技術(shù)背景紅豆杉具有極高藥用價(jià)值，但除了抗癌的作用被開發(fā)利用外，其它方面的作用的開發(fā)還 遠(yuǎn)不夠，大量的紅豆杉除了用于生產(chǎn)紫杉醇、10-DAB等紫杉烷類化合物外，其中的其它功效 成分基本上沒有被利用，造成資源浪費(fèi)。紅杉醇是從紅豆杉提取的一種治療糖尿病的有效成分，英文名Sequoyitol化學(xué)名 5-0-methyl—myoinositol (或5-氧-甲基一內(nèi)消旋肌醇)分子式C7H1406分子量194.20 其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下MeO, 丫 OH其在紅豆杉皮、枝、葉均含有，含量大約為0. 1-0. 2% 。中國專利文獻(xiàn)公開了上海百靈醫(yī)藥科技有限公司楊繼東等申請(qǐng)的"一種提取與純化紅杉 醇的方法"(CN1994995)、廣州威爾曼新藥開發(fā)中A有限公司孫明杰等申請(qǐng)的"用于糖尿病預(yù)防和 治療的紅杉醇和紅杉醇植物提取物"(CN1706369)、中國藥科大學(xué)梁敬鈺等申請(qǐng)的"一種防治糖尿病 的植物提取物及其制備方法與藥物用途"(CN1488344)。經(jīng)過臨床的生物實(shí)驗(yàn)表明，紅杉醇降血糖的效果十分明顯，其作用機(jī)理和目前上市的治 療糖尿病的藥物不一樣，它可以把糖尿病人身體內(nèi)被破壞的胰島系統(tǒng)恢復(fù)，有望被開發(fā)成治 愈糖尿病的藥物。作為一種天然產(chǎn)物，紅杉醇的提取純化存在許多問題1、紅杉醇在原料中 和普通的天然產(chǎn)物相比含量低，不同植株、不同部位的含量差異較大。2、原料中和紅杉醇結(jié) 構(gòu)相似的雜質(zhì)、異構(gòu)體較多，水溶性好，極性大，不利用常規(guī)的分離手段，分離純化難度大。3、 在分離過程中不易用薄層色譜、紫外等監(jiān)控手段控制分離純化過程，增加了分離純化難度。4、 現(xiàn)有的紅杉醇提取純化工藝成本高，純度低，得率低。隨著紅杉醇市場(chǎng)需求的不斷擴(kuò)大， 工業(yè)化規(guī)模的分離技術(shù)、新的工藝日益受到重視，提取純化工藝的經(jīng)濟(jì)性問題倍受關(guān)注。本發(fā)明的目的在于提出新的一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法。該方法可有效保證提取的紅杉醇質(zhì)量及純度，且得率高，成本低。本發(fā)明的技術(shù)方案為， 一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于，具體發(fā)明內(nèi)容:方法如下(1) 、將紅豆杉原料進(jìn)行粉碎至粒徑為至少20目；(2) 、制紅豆杉濃縮提取物用提取溶劑對(duì)原料進(jìn)行提取，提取溶劑為低級(jí)醇、丙酮、乙腈及其含水溶劑中至少一種， 含水溶劑為含水10—50%的低級(jí)醇、丙酮、乙腈溶液，料液比為原料提取溶劑=1 : 3 — 5 (w/w)，《80。C下濃縮，得紅豆杉濃縮提取物；(3) 、紅杉醇干濃縮物紅豆杉濃縮提取物，《8(TC下，濃縮至流浸膏，在攪拌下，向紅豆杉濃縮提取物中加入 0.5_2倍(W/W)的惰性填料，充分拌勻后干燥，得紅杉醇干濃縮物；(4) 、制紅杉醇粗品紅杉醇干濃縮物每次加入3-5 (w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行回流溶解，至少回流2次， 靜置，收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，收集固形物或沉淀，干燥得紅杉醇粗品；(5) 、制紅杉醇晶體紅杉醇粗品加入3-8 (w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行回流溶解，過濾，收集回流液，濃 縮，冷卻，靜置，(一5) — (5) 'C低溫結(jié)晶，結(jié)晶完全后過濾，收集晶體；(6) 、制高純度紅杉醇紅杉醇晶體加入2-5 (w/w)倍量的水加熱至6 0 — 8 0 r攪拌至晶體溶解，加入1 一 2 (v/v)倍量低級(jí)醇、丙酮、乙腈之一，攪拌均勻，8 0 。C保溫至少1 0分鐘，靜置，冷卻至(一 5) — (5) 'C低溫結(jié)晶，過濾，收集晶體，至少重復(fù)結(jié)晶3次，紅杉醇晶體，干燥，取樣 按檢測(cè)方法進(jìn)行HPLC檢測(cè)，得含量》9 9%紅杉醇高純品；所述的紅豆杉為中國紅豆杉(Taxus chinensis)，東北紅豆杉(T. cuspidata),云南 紅豆杉(T. yunnanensis)，西藏紅豆杉(T.wallichiana),歐洲紅豆杉(T.baccata),短 葉紅豆杉(T.brevifolia)，加拿大紅豆杉(T. canadensis)，佛羅里達(dá)紅豆杉(T. floridana) 和直立雜種紅豆杉 (T. media, T. speciosa， T. fastigiata)，紅豆杉原料為紅豆杉枝、葉、 樹皮、木質(zhì)、根。所述的步驟(2)、 (6)中所采用的低級(jí)醇類為甲醇、乙醇、丙醇或異丙醇。所述的步驟 (3)中的惰性填料為硅藻土、硅膠或活性炭。所述的步驟(3)所述的干燥為晾干或低于IO(TC下烘。所述的步驟(5)和(6)制紅杉醇晶體和高純度紅杉醇的步驟合并為紅杉醇粗品加入2 -5 (w/w)倍量的水加熱至6 0 — 8 0 'C攪拌至紅杉醇粗品溶解，加入1 一 2 (v/v)倍量低級(jí) 醇、丙酮、乙腈，攪拌均勻，8 0 。C保溫1 0 — 2 0分鐘，靜置，冷卻至(一 5 ) _ ( 5 ) 'C低溫結(jié)晶，過濾，收集晶體，晶體再重復(fù)操作至少重結(jié)晶3次，干燥，取樣按檢測(cè)方法進(jìn) 行HPLC檢測(cè)，紅杉醇晶體，得含量》9 9%紅杉醇高純品本發(fā)明的特點(diǎn)是從紅豆杉原料中提取、分離和純化紅杉醇，處理時(shí)所用的浸提溶劑是用價(jià)格較 低的水、低級(jí)醇、丙酮、乙腈及其含水溶劑中至少一種浸提；除去雜質(zhì)不M用通常的層析方法， 而用多倍量甲醇回流溶解，、鵬，靜置沉淀除去雜質(zhì)；采用甲醇溶解、鄉(xiāng)、結(jié)晶；在重結(jié)晶時(shí)采用 含7]C低級(jí)醇，含水丙酮，含水乙腈。也可將結(jié)晶和重結(jié)晶兩步驟按重結(jié)晶方法的作為同一步驟進(jìn) 行。本發(fā)明加工時(shí)所采用的材料價(jià)格低廉，易得，這些措施可大幅度降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn) 品質(zhì)量及產(chǎn)量。本發(fā)明的工藝先進(jìn)，具有高重現(xiàn)性、高產(chǎn)率、高純度，且方法簡單可靠，可 操作性強(qiáng)，特別適宜于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
以下是本發(fā)明具體的實(shí)施例，以進(jìn)一步闡述本發(fā)明的內(nèi)容，這些實(shí)施例僅為說明目的， 并非是用于限制本發(fā)明的范圍。 實(shí)施例1原料為云南紅豆杉枝葉，也可用、葉、樹皮、木質(zhì)及根，水份含量<15%,原料100kg用 粉碎機(jī)粉碎為20-30目粗顆?；蛘叽址?。把粉碎后的枝葉均勻地填充到浸提容器內(nèi)，每次加 入4-5倍量的80%乙醇浸提三次，也可采用含水10—50%的乙醇浸提，以提取溶劑液面高于 粉碎料表面5-10cm為宜，溫度室溫--回流溫度，每次浸提的時(shí)間為3-8小時(shí)左右，浸提液 合并濃縮。將合并的浸提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在溫度低于80度，真空度常壓一-0.09MPa條 件下濃縮成流浸膏狀的紅豆杉濃縮提取物。稱重后，在攪拌下，向紅豆杉濃縮提取物中加入 0.5—2倍(W/W)的硅藻土、硅膠或活性炭惰性填料，充分拌勻后晾干或低于IO(TC下烘干。 干濃縮物加入3-5 (w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行至少2次回流溶解，靜置，趁熱過濾或傾 出清液，收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，收集固形物或沉淀，干燥得紅杉醇粗品。紅杉醇 粗品紅杉醇粗品加入3-8 (w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行3 — 6次回流溶解，趁熱過濾， 收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，(—5) — (5) 'C低溫結(jié)晶，結(jié)晶完全后過濾，收集晶體 得紅杉醇晶體。紅杉醇晶體加其重量2-5倍體積量的水加熱溶解，趁熱加入l-2倍體積量的 無水乙醇，加熱保溫至8(TC，靜置冷卻至室溫結(jié)晶，再放入冰箱中低溫冷凍結(jié)晶至完全，過 濾收集晶體，所得晶體按上述操作再重結(jié)晶2-4次。所得晶體分別加少量無水乙醇或丙酮洗 滌1-2次，真空減壓干燥，即得紅杉醇高純品98g，取樣進(jìn)行含量檢測(cè)含量99. 50% 。原料也可采用中國紅豆杉，東北紅豆杉，西藏紅豆杉(T.wallichiana)，歐洲紅豆杉 (T.baccata);短葉紅豆杉(T. brevifolia)，加拿大紅豆杉(T. canadensis)，佛羅里達(dá)紅 豆杉(T. floridana)和直立雜種紅豆杉 (T. media, T. speciosa, T. fastigiata)。 檢測(cè)方法如下標(biāo)準(zhǔn)樣品液的配制:精密稱取50mg紅杉醇對(duì)照品置于25ml的容量瓶中，加乙腈/水液(10:90)超聲溶解定容，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為2mg/ml左右。測(cè)試樣品液的配制精密稱取50rag紅杉醇樣品置于25ml的容量瓶中，加乙腈/水液(10:90)超聲溶解定容，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為2mg/ml左右。 檢測(cè)條件流動(dòng)相乙腈/水二10:90(V/V)經(jīng)混合，過濾,脫氣后使用；色譜柱C18柱4. 6X250. Omra流 速lml/min ，進(jìn)樣體積20nl，檢測(cè)波長196nm 紅杉醇保留時(shí)間為2-3 min左右。 實(shí)施例2:南方紅豆杉干枝葉原料100kg，原料處理同實(shí)施例l，用甲醇，可采用丙酮、異丙醇或乙 腈浸提三次，也可采用含水10—50%的甲醇、或丙酮、或異丙醇浸提，每次加入4-5倍量的 提取溶劑，以提取溶劑液面高于粉碎料表面5-10cm為宜，溫度及浸提時(shí)間同實(shí)施例l，浸提 液合并濃縮。將合并的浸提液，在溫度20—8(TC下，真空度常壓一0.09MPa條件下濃縮成 流浸膏狀得紅豆杉濃縮提取物。稱重后，在攪拌下，向紅豆杉濃縮提取物中加入0.5—2倍 (W/W)的硅藻土、硅膠或活性炭惰性填料，充分拌勻后晾干或低于IO(TC下烘干。干濃縮物 加入3-5 (w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行至少2次回流溶解，靜置，趁熱過濾或傾出清液， 收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，收集固形物或沉淀，干燥得紅杉醇粗品。所得粗品每次加 入3-8 (w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行3 — 6次回流溶解，趁熱過濾，收集回流液，濃縮， 冷卻，靜置，(一5 ) — ( 5 ) 'C低溫結(jié)晶，結(jié)晶完全后過濾，母液收集濃縮放置，收集晶體， 或固形物，用少量甲醇洗滌1-2次，得紅杉醇晶體。晶體加其重量2-5倍體積量的水加熱溶 解，趁熱加入1-2體積量的丙酮，加熱保溫至8(TC，靜置冷卻至室溫結(jié)晶，再放入冰箱中(一 5 ) — ( 5 ) 'C低溫冷凍結(jié)晶至完全。過濾收集晶體，母液收集放置，所得晶體按上述操作 再重結(jié)晶2-4次。合并重結(jié)晶母液濃縮至干。所得晶體分別加少量無水乙醇、丙酮洗滌1-2 次，真空減壓干燥，即得紅杉醇高純品106g ，含量99.18% 。 實(shí)施例3云南紅豆杉原料樹皮800kg，原料處理同實(shí)施例l，每次加入4-5倍量的80%丙酮浸提三 次，以提取溶劑液面高于粉碎料表面5-10cm為宜，提取溫度、時(shí)間及收集浸提液與實(shí)施例1 相同。將合并的浸提液，在溫度低于80度，真空度常壓一-0.09MPa條件下濃縮至流浸膏 狀的紅豆杉濃縮提取物。稱重后，在攪拌下，向紅豆杉濃縮提取物中加入0.5—2倍(W/W) 的硅藻土、硅膠或活性炭惰性填料，充分拌勻后晾干或低于IO(TC下烘干。干濃縮物加入3-5(w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行至少2次回流溶解，靜置，趁熱過濾或傾出清液，收集回流 液，濃縮，冷卻，靜置，收集固形物或沉淀，干燥得紅杉醇粗品。所得粗品每次加入3-8(w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行3 — 6次回流溶解，趁熱過濾，收集回流液，濃縮，冷卻， 靜置，(一5) — (5) 'C低溫結(jié)晶，結(jié)晶完全后過濾，母液收集濃縮放置，收集晶體，或固 形物，用少量甲醇洗滌1-2次，得紅杉醇晶體。晶體加其重量2-5倍體積量的水加熱溶解， 趁熱加入l-2倍體積量的甲醇，加熱保溫至8(TC，靜置冷卻至室溫結(jié)晶，再放入冰箱中(一5 ) — ( 5 ) 'C低溫冷凍結(jié)晶至完全。過濾收集晶體，母液收集放置，所得晶體按上述操作再重結(jié)晶2-4次。合并重結(jié)晶母液濃縮至干。所得晶體分別加少量無水乙醇、丙酮洗滌1-2次，真空減壓干燥，即得紅杉醇高純品851g ，含量99.30% 。檢測(cè)同實(shí)施例l。實(shí)施例4100kg曼地亞紅豆杉干枝葉在提取紫杉醇后的萃取水液300kg，在溫度低于70度，真空度 常壓一 0.09MPa條件下濃縮成流浸膏，得紅杉醇浸膏。將紅杉醇浸膏，稱重后，在攪拌下， 向紅豆杉濃縮提取物中加入0.5—2倍(W/W)的硅藻土、硅膠或活性炭惰性填料，充分拌勻 后晾干或低于IOO'C下烘干。干濃縮物加入3-5 (w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行至少2次回 流溶解，靜置，趁熱過濾或傾出清液，收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，收集固形物或沉淀， 干燥得紅杉醇粗品。所得粗品每次加入3-8 (w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行3 — 6次回流 溶解，趁熱過濾，收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，(一5) — (5) 。C低溫結(jié)晶，結(jié)晶完全 后過濾，母液收集濃縮放置，收集晶體，或固形物，用少量甲醇洗滌l-2次，得紅杉醇晶體。 晶體加其重量2-5倍體積量的水加熱溶解，趁熱加入等體積量的乙腈，加熱保溫至8(TC，靜 置冷卻至室溫結(jié)晶，再放入冰箱中(_5) — (5) 'C低溫冷凍結(jié)晶至完全。過濾收集晶體， 母液收集放置，所得晶體按上述操作再重結(jié)晶2-4次。合并重結(jié)晶母液濃縮至干。所得晶體 分別加少量無水乙醇、丙酮洗滌l-2次，真空減壓干燥，高純品126.31g,含量99.45% 。檢 測(cè)同實(shí)施例1。 實(shí)施例5云南紅豆杉原料樹皮800kg，原料處理同實(shí)施例l，每次加入4-5倍量的80%丙酮浸提三 次，以提取溶劑液面高于粉碎料表面5-10cm為宜，提取溫度、時(shí)間及收集浸提液與實(shí)施例1 相同。將合并的浸提液，在溫度低于80度，真空度常壓一-0.09MPa條件下濃縮至流浸膏 狀，得紅豆杉濃縮提取物。稱重后，在攪拌下，向紅豆杉濃縮提取物中加入0.5—2倍(W/W) 的硅藻土、硅膠或活性炭惰性填料，充分拌勻后晾干或低于IO(TC下烘干。干濃縮物加入3-5 (w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行至少2次回流溶解，靜置，趁熱過濾或傾出清液，收集回流 液，濃縮，冷卻，靜置，收集固形物或沉淀，干燥得紅杉醇粗品。粗品加其重量2-5倍體積 量的水加熱溶解，趁熱加入l-2倍體積量的甲醇或低級(jí)醇、丙酮、乙腈，加熱保溫至80'C， 靜置冷卻至室溫結(jié)晶，再放入冰箱中(一5) — (5) D低溫冷凍結(jié)晶至完全。過濾收集晶 體，母液收集放置，所得晶體按上述操作再重結(jié)晶2-4次。合并重結(jié)晶母液濃縮至干。所得 晶體分別加少量無水乙醇、丙酮洗漆1-2次，真空減壓干燥，即得紅杉醇高純品781g ,含 量99.25% 。 檢測(cè)同實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1、一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于，具體方法如下(1)、將紅豆杉原料進(jìn)行粉碎至粒徑為至少20目；(2)、制紅豆杉濃縮提取物用提取溶劑對(duì)原料進(jìn)行提取，提取溶劑為低級(jí)醇、丙酮、乙腈及其含水溶劑中至少一種，含水溶劑為含水10-50％的低級(jí)醇、丙酮、乙腈溶液，料液比為原料∶提取溶劑＝1∶3-5(w/w)，≤80℃下濃縮，得紅豆杉濃縮提取物；(3)、紅杉醇干濃縮物紅豆杉濃縮提取物，≤80℃下，濃縮至流浸膏，在攪拌下，向紅豆杉濃縮提取物中加入0.5-2倍(W/W)的惰性填料，充分拌勻后干燥，得紅杉醇干濃縮物；(4)、制紅杉醇粗品紅杉醇干濃縮物每次加入3-5(w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行回流溶解，至少回流2次，靜置，收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，收集固形物或沉淀，干燥得紅杉醇粗品；(5)、制紅杉醇晶體紅杉醇粗品加入3-8(w/w)倍量的甲醇作溶解劑進(jìn)行回流溶解，過濾，收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，(-5)-(5)℃低溫結(jié)晶，結(jié)晶完全后過濾，收集晶體；(6)、制高純度紅杉醇紅杉醇晶體加入2-5(w/w)倍量的水加熱至60-80℃攪拌至晶體溶解，加入1-2(v/v)倍量低級(jí)醇、丙酮、乙腈之一，攪拌均勻，80℃保溫至少10分鐘，靜置，冷卻至(-5)-(5)℃低溫結(jié)晶，過濾，收集晶體，至少重復(fù)結(jié)晶3次，紅杉醇晶體，干燥，取樣按檢測(cè)方法進(jìn)行HPLC檢測(cè)，得含量≥99％紅杉醇高純品。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于所述的紅 豆杉為中國紅豆杉(Taxus chinensis)，東北紅豆杉(T. cuspidata)，云南紅豆杉(T. yunnanensis)，西藏紅豆杉(T. wallichiana),歐洲紅豆杉(T. baccata)，短葉紅豆 杉(T.brevifolia),加拿大紅豆杉(T. canadensis)，佛羅里達(dá)紅豆杉(T. floridana)和直立 雜種紅豆杉 (T. media, T. speciosa， T. fastigiata)，紅豆杉原料為紅豆杉枝、葉、樹皮、 木質(zhì)、根o
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于步驟(2)、 (6)中所采用的低級(jí)醇類為甲醇、乙醇、丙醇或異丙醇。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于所述的步 驟(3)中的惰性填料為硅藻土、硅膠或活性炭。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于步驟(3) 所述的干燥為晾干或低于100'C下烘。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于步驟(5) 和(6)制紅杉醇晶體和高純度紅杉醇的步驟合并為紅杉醇粗品加入2-5 (w/w)倍量的水 加熱至6 0 — 8 0 'C攪拌至紅杉醇粗品溶解，加入1 一 2 (v/v)倍量低級(jí)醇、丙酮、乙腈，攪 拌均勻，8 0 'C保溫10 — 20分鐘，靜置，冷卻至(一 5 ) — ( 5 ) 。C低溫結(jié)晶，過濾， 收集晶體，晶體再重復(fù)操作至少重結(jié)晶3次，干燥，取樣按檢測(cè)方法進(jìn)行HPLC檢測(cè)，紅杉醇 晶體，得含量>9 9%紅杉醇高純品。
全文摘要
一種利用溶劑回流提取并純化紅杉醇的方法紅豆杉原料粉碎；提取，濃縮，得紅豆杉濃縮提取物；紅豆杉濃縮提取物濃縮至流浸膏，攪拌，加入惰性填料，拌勻后干燥，得紅杉醇干濃縮物；紅杉醇干濃縮物回流溶解至少2次，靜置，收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，收集固形物或沉淀物，干燥得紅杉醇粗品，加入溶解劑回流溶解，過濾，收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，低溫結(jié)晶，過濾，收集晶體；紅杉醇晶體加入水加熱攪拌至晶體溶解，加入低級(jí)醇、丙酮、乙腈之一，攪拌均勻，保溫，靜置，冷卻，低溫結(jié)晶，過濾，收集晶體，至少重復(fù)結(jié)晶3次，紅杉醇晶體干燥，取樣檢測(cè)，得含量≥99％紅杉醇高純品。本發(fā)明的特點(diǎn)是利用溶劑回流從紅豆杉原料中提取、分離和純化紅杉醇。本發(fā)明的工藝先進(jìn)，具有高重現(xiàn)性、高產(chǎn)率、高純度，且方法簡單可靠，可操作性強(qiáng)，生產(chǎn)成本低，特別適宜于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07C41/34GK101244987SQ20081005820
公開日2008年8月20日 申請(qǐng)日期2008年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月21日
發(fā)明者張坤平 申請(qǐng)人:昆明自主擇業(yè)集源生物科技有限公司