專利名稱：原卟啉鈉的生產(chǎn)和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及原卟啉在制備用于治療 或預(yù)防肝損傷的藥物中的應(yīng)用以及原p卜淋的制備方法和其產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
原卟啉(英文名為Protoporphyrin)的化學(xué)名稱為7，U-二乙烯基-3,8，13,17-四曱基-21 H,23H畫葉吩畫2， 18-二丙酸(7,12國Diethenyl陽3,8,13,17-tetramethyl國21 H，23H -porphine-2， 18-dipropanoic acid )。原口卜啉是最初/人哺乳動物血液中提取分離出的 肝臟機(jī)能改善劑，其(尤其是原卟啉鈉)具有促進(jìn)細(xì)胞組織呼吸，改善蛋白質(zhì) 和糖代謝，抗補體結(jié)合等作用。動物試驗表明，原卟啉對四氯化>暖所致肝損傷 具有明顯降低氨基轉(zhuǎn)移酶等的作用(如參見，凌樹森等.中國藥理學(xué)報，4(4): 233-236)，臨床上適用于急性肝炎、各型病毒性肝炎，對肝硬化、膽嚢炎膽石癥 亦有效，可使癥狀改善、肝腫縮小、氨基轉(zhuǎn)移酶、濁度試驗、黃疸指數(shù)等指標(biāo) 改善。然而，肝損傷的成因非常復(fù)雜，除了四氯化碳或其他肝毒性藥物造成的急 性肝炎和肝炎病毒造成的病毒性肝炎之外，免疫系統(tǒng)中的淋巴細(xì)胞(尤其是細(xì) 胞毒T淋巴細(xì)胞)在對抗原的應(yīng)答中也會造成肝細(xì)胞的免疫性損傷，引起肝細(xì) 胞凋亡，甚至可以導(dǎo)致肝硬化和肝細(xì)胞性肝癌(如參見，Nelson等，J.Immunol， 158:1473-1481; Wong等，J.Immunol., 160:1479-1488)。免疫性肝損傷同肝毒性藥 物和病毒造成的肝損傷作用機(jī)理不同，目前仍未見報道原卟啉對免疫性肝損傷有治療或預(yù)防作用，也未見報道原卟啉對D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷有 治療或預(yù)防作用，因此需要進(jìn)一步研究以開拓原卟啉這一經(jīng)長期使用而證明對 人體安全的藥物的新的適應(yīng)癥范圍。另外，盡管陳文暉等(參見，中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，31 (7): 293-294)提出 了一種制備原卟啉鈉的改進(jìn)方法，但是其需要的原料是純的氯高鐵血紅素；其 他一些文獻(xiàn)報道的制備方法也使用實驗室用的純度高的血紅素，而不是直接從 動物血中提取的純度達(dá)不到實驗室制備要求但價格便宜得多的工業(yè)用血紅素 (如可參見,中國專利申請CN1300732A、 CN1306002A、 CN1450073A等)，因 此不適合工業(yè)化生產(chǎn)。為此，本發(fā)明人提出了原卟啉在制備用于治療或預(yù)防新適應(yīng)癥的藥物中的應(yīng)用以及其原料藥的適于工業(yè)化生產(chǎn)的制備方法，不但開創(chuàng)性地提出了原卟啉對免疫性肝損傷和D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷的治療和預(yù)防作用，而且 其原料藥的制備可以使用成本較低的原料，更適合工業(yè)化生產(chǎn)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供原卟啉在制備用于治療或預(yù)防免疫性肝損傷或D-氨 基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷的藥物中的應(yīng)用以及其原料藥原吟啉鈉的適合工 業(yè)化生產(chǎn)的制備方法和其制品。具體而言，在第一方面，本發(fā)明提供了原卟啉在制備用于治療或預(yù)防免疫 性肝損傷或D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷的藥物中的應(yīng)用。在本文中，肝 損傷指的是肝臟組織或細(xì)胞出現(xiàn)的損傷或病變。肝損傷的臨床表現(xiàn)為肝細(xì)胞變 性、肝內(nèi)出現(xiàn)壞死、肝內(nèi)靜脈炎、在肝內(nèi)及門管區(qū)出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤或出現(xiàn)成纖 維細(xì)胞增生或肝臟腫大，因此可以在顯微鏡下觀察肝臟切片來判斷肝損傷程度， 以此確定藥物對肝損傷的治療或預(yù)防效果。另外，除了通過病理現(xiàn)象來評估肝 損傷以外，當(dāng)肝細(xì)胞損傷時，細(xì)胞溶解，由受損傷的肝細(xì)胞中釋放到循環(huán)血液 中的轉(zhuǎn)氨酶的量增加了，因此通過測定這些轉(zhuǎn)氨酶在血清中的活性，也能夠確 定肝臟受損傷的程度。本發(fā)明的第一方面制備的藥物可用于治療或預(yù)防免疫性肝損傷，優(yōu)選預(yù)防 免疫性肝損傷。免疫性肝損傷是由免疫原誘導(dǎo)產(chǎn)生的。其中，免疫原不是能造 成病毒性肝損傷的病毒，而是能引發(fā)免疫系統(tǒng)應(yīng)答而攻擊肝細(xì)胞的抗原物質(zhì)。 在本發(fā)明的一個具體實施方式
中，免疫性肝損傷是卡介苗和脂多糖誘導(dǎo)的免疫 性肝損傷。另外，在本發(fā)明的另一個具體實施方式
中，本發(fā)明第一方面制備的 藥物也可以用于治療或預(yù)防D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷。在本發(fā)明的第一方面中，原卟啉可以是原卟啉的水溶性鹽，例如，原卟啉 鈉、原卟啉鉀，優(yōu)選是原卟啉鈉。由于從健康動物(如，牛、豬等)血液中提 取的血紅素盡管純度達(dá)不到化學(xué)純的要求，但是其工藝成熟、成本較低，因此 本發(fā)明的原卟啉可以用這種血紅素為原料來制備得到。本發(fā)明優(yōu)選的優(yōu)選原卟 啉鈉由包括以下步驟的方法制備a. 血紅素在存在曱酸和鐵的條件下還原，然后加入醋酸銨溶液析出晶體， 得到原吟啉粗結(jié)晶體；b. 將原卟啉粗結(jié)晶體在存在酸和曱醇的條件下酯化，然后加入碳酸銨溶液析 出原吟啉二曱酯結(jié)晶體并溶于氯仿中，然后將溶液通過八1203層析柱純化，蒸餾 層析流出液，得到純化的原卟啉二曱酯；和C.純化的原P卜啉二曱酯加入酸分解，然后加入氫氧化鈉中和并析出結(jié)晶，得 到原卟啉鈉結(jié)晶體。更優(yōu)選，本發(fā)明的原卟啉鈉由包括以下步驟的方法制備a. 向溶于甲酸的血紅素加入4失粉，再依次加熱回流、冷卻、過濾，向濾液 中加入醋酸銨溶液，析出結(jié)晶體，再將結(jié)晶體溶于氨水，然后加入醋酸銨溶液 結(jié)晶，再依次洗滌、干燥，得到原卟啉^L結(jié)晶體；b. 向原卟啉粗結(jié)晶體加入鹽酸和曱醇，再依次加熱回流、冷卻，然后加入 碳酸銨溶液析出原卟啉二曱酯結(jié)晶體，洗滌后將原卟啉二曱酯結(jié)晶體溶于氯仿 中，然后將溶液通過八1203層析柱純化，蒸餾層析流出液并洗滌，得到純化的原 葉啉二曱酯；和c. 純化的原p卜啉二曱酯加入鹽酸分解，然后加入氫氧化鈉中和并析出結(jié)晶， 再依次洗滌、干燥、用吡啶重結(jié)晶，得到原卟啉鈉結(jié)晶體。因此，在第二方面，本發(fā)明提供了制備原p卜啉鈉的方法，其可以使用非化 學(xué)純級別的血紅素原料，而制備得到的原卟啉鈉根據(jù)高效液相色i普法檢測，卟 啉鐵含量290%,優(yōu)選大于295%,更優(yōu)選^98°/。，最優(yōu)選^99°/。而且其中含水量 $2.0%,優(yōu)選^1.0%,更優(yōu)選$0.5%。具體而言，本發(fā)明的第二方面提供了制備原 p卜啉鈉的方法，其特征在于包括以下步驟a. 血紅素在存在曱酸和鐵的條件下還原，然后加入醋酸銨溶液析出晶體， 得到原卟啉粗結(jié)晶體；b. 將原卟啉粗結(jié)晶體在存在酸和曱醇的條件下酯化，然后加入碳酸銨溶液析 出原卟啉二曱酯結(jié)晶體并溶于氯仿中，然后將溶液通過八1203層析柱純化，蒸餾 層析流出液，得到純化的原卟啉二曱酯；和c. 純化的原卟啉二曱酯加入酸分解，然后加入氫氧化鈉中和并析出結(jié)晶，得 到原卟啉鈉結(jié)晶體。更優(yōu)選，本發(fā)明第二方面的方法，其特征在于包括以下步驟a. 向溶于曱酸的血紅素加入4失粉，再依次加熱回流、冷卻、過濾，向濾液 中加入醋酸銨溶液，析出結(jié)晶體，再將結(jié)晶體溶于氨水，然后加入醋酸銨溶液 結(jié)晶，再依次洗滌、干燥，得到原卟啉粗結(jié)晶體；b. 向原卟啉粗結(jié)晶體加入鹽酸和曱醇，再依次加熱回流、冷卻，然后加入 碳酸銨溶液析出原卟啉二甲酯結(jié)晶體，洗滌后將原卟啉二曱酯結(jié)晶體溶于氯仿 中，然后將溶液通過Al203層析柱純化，蒸餾層析流出液并洗滌，得到純化的原 吟啉二曱酯；和c. 純化的原叫、啉二曱酯加入鹽酸分解，然后加入氫氧化鈉中和并析出結(jié)晶，再依次洗滌、干燥、用吡啶重結(jié)晶，得到原卟啉鈉結(jié)晶體。在第三方面，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防免疫性肝損傷或D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷的制品，其包括本發(fā)明第二方面的方法制備的原卩卜啉鈉。具體而言，本發(fā)明的第三方面提供了用于治療或預(yù)防免疫性肝損傷或D-氨基半 乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷的藥物組合物，其包含本發(fā)明第二方面的方法制備的 原卟啉鈉。該藥物組合物用作本發(fā)明第 一方面的應(yīng)用中的藥物。本發(fā)明的藥物組合物還包括藥學(xué)上可接受的載體。藥學(xué)上可接受的載體指 無毒固態(tài)、半固態(tài)或液態(tài)填充劑、稀釋劑、包裹材料或其他制劑輔料。根據(jù)本 領(lǐng)域的公知技術(shù)，可以根據(jù)治療目的、給藥途徑的需要將藥物組合物制成各種 劑型，優(yōu)選該組合物為單位劑量形式，如片劑、膠嚢(包括持續(xù)釋放或延遲釋放 形式)、粉劑、乳劑、注射劑、氣霧劑或液體噴劑、或栓劑等。例如，以口服給 藥，原卟啉鈉可以與一種口服的無毒的藥物學(xué)可接受的惰性載體組合在一起， 如環(huán)糊精、等滲葡萄糖溶液、甘油、生理鹽水或其組合。該藥物組合物可通過 所屬領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的給藥方式來進(jìn)行給藥，例如口服、直腸、舌下、注 射、透皮、陰道及鼻內(nèi)給藥，優(yōu)選口服給藥。給藥劑量根據(jù)制劑形式和期望的 作用時間以及治療對象的情況而有所變化，實際治療所需的量可以由醫(yī)師根據(jù) 實際情況(如，病人的病情、體重等)而方便地確定。對于一般的成人，本發(fā) 明的藥物組合物的劑量，以原p卜啉鈉計，可以是每kg成人體重lmg-lg，優(yōu)選 10mg-100mg。另外，本發(fā)明還提供了藥劑盒，其包括a. 容器，其包含本發(fā)明第二方面的方法制備的原卟啉鈉；和b. 說明用于治療或預(yù)防D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的免疫性肝損傷或急性肝損傷 的說明書。容器是由不與原卟啉鈉起化學(xué)反應(yīng)的惰性材料制成，如玻璃瓶、鋁 泊袋等，優(yōu)選容器是密封的。本文中所用的"說明書"指承載說明內(nèi)容的實體。它 可以是紙，其上印有相應(yīng)用途說明；也可以是容器外表面，其上可以刻有或印 有相應(yīng)用途il明。為了便于理解，以下將通過具體的附圖和實施例對本發(fā)明進(jìn)行列舉性的描 述。需要特別指出的是，這些描述僅僅是示例，并不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。 依據(jù)本說明書的論述，本發(fā)明的許多變化、改變對所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來說都是 顯而易見的。另外，本發(fā)明引用了公開文獻(xiàn)，這些文獻(xiàn)是為了更清楚地描述本 發(fā)明，它們的全文內(nèi)容均納入本文進(jìn)行參考，就好像它們的全文已經(jīng)在本文中 重復(fù)敘述過一樣。


圖1原卟啉鈉對卡介苗和脂多糖誘導(dǎo)的免疫性肝損傷模型中血清生化指標(biāo) 的影響，其中*表示所示組相對于模型組能夠顯著降低轉(zhuǎn)氨酶水平。圖2原卟啉鈉對卡介苗和脂多糖誘導(dǎo)的免疫性肝損傷模型中肝臟病變程度的評分結(jié)果，其中*表示所示組相對于模型組能夠顯著減輕肝臟的病變程度。圖3原卟啉鈉對D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷模型中血清生化指標(biāo)的 影響，其中*表示所示組相對于模型組能夠顯著降低轉(zhuǎn)氨酶水平。
具體實施方式
以下本文將通過具體的實施例來描述發(fā)明。如未特別指明之處，可根據(jù)本 領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的教科書及實驗手冊來進(jìn)行。其中，溶液中溶質(zhì)是液體的 (包括濃氨水、濃鹽酸等)，則百分比濃度為體積百分比；如果溶質(zhì)是固體的， 則百分比濃度為重量百分比。實施例1 原H、啉的生產(chǎn)方法1，粗原卟啉的制備取血紅素(購自海寧和田龍生物科技有限公司，其按照中國專利申請 CN1450073A制備)100克，加入到85%曱酸5000ml中，在攪拌、加熱回流條 件下，將鐵粉30g在25分鐘內(nèi)分五次加入，再回流20分鐘，冷卻至室溫，過 濾，濾液中加20。/o醋酸銨溶液20000ml，放置12小時，析出結(jié)晶，過濾結(jié)晶， 再用20%氨水1200ml溶解，然后加30%醋酸銨溶液2000ml,放置12小時，析 出結(jié)晶，再以2%醋酸1200ml洗滌2次，用水1800ml洗滌3次，干燥，共得原 p卜啉粗結(jié)晶體40g。2，原卟啉二曱酯制備取原卟啉粗結(jié)晶體100g,加入到2000ml含1%鹽酸的甲醇溶液中，回流15 分鐘，冷卻至室溫后加入1。/。的碳酸銨溶液2000ml ,放置析出結(jié)晶，過濾，用 水洗結(jié)晶3次，將結(jié)晶溶于4000ml氯仿溶液中，使所得溶液通過直徑為10cm的、 長度為100cm的、填料為3000g的八1203層析柱，蒸餾層析流出液，蒸餾后的 剩余物用曱醇洗滌，得純化的原卟啉二曱酯40g。經(jīng)測定其溶點為228度分解。3，原卟啉鈉純品制備取純化的原叫、啉二曱酯100g,加25%鹽酸3000ml溶解后，室溫放置6小時， 加水6000ml稀釋，用30。/。NaOH溶液中和，析出結(jié)晶，用水洗滌三次，干燥。 干燥物以吡啶重結(jié)晶，得褐色的原p卜啉鈉結(jié)晶體50g。該原卟啉鈉為紫褐色結(jié)晶性粉末，溶于水和甲醇，難溶于稀酸，不溶于氯仿、乙醚和丙酮，根據(jù)高效液 相色譜法檢測叫、啉鐵含量298%。實施例2原p卜啉鈉對卡介苗和脂多糖誘導(dǎo)的免疫性肝損傷的保護(hù)作用1,實-瞼動物將Wistar大鼠(體重180g ~ 220g，購自浙江省實驗動物中心)隨機(jī)分成以 下4組，每組10只(1 )甘草酸二銨組(注射甘草酸二銨，購自江蘇正大天晴 藥業(yè)股份有限公司)；(2)原卟啉鈉組(灌胃給藥原p卜啉鈉)；(3)空白對照組； (4)模型組。2，實-瞼方法在第0天，在除了空白對照組之外的其他3組中，向大鼠尾靜脈注射0.2ml 卡介菌多糖核酸注射液(購自湖南九芝堂斯奇生物制藥有限公司，給藥量以卡 介菌多糖計為126嗎/kg體重)致敏；與此同時，空白對照組注射等體積生理鹽 水。然后，在甘草酸二銨組中，從第5天開始，每天向大鼠腹腔注射甘草酸二 銨，給藥量以甘草酸二銨計為13.5mg/kg大鼠，共進(jìn)行7天；在原卟啉鈉組中， 從第5天開始，每天向大鼠灌胃給藥原卟啉鈉，給藥量以原卟啉鈉計為10mg/kg 大鼠，共進(jìn)行7天；與此同時，在空白對照組和模型組中，注射等體積生理鹽 水。最后一次給藥后1天，在除了空白對照組之外的其他3組中，向大鼠尾靜 脈注射IO嗎脂多糖(LPS,可購自SIGMA公司)，損傷肝細(xì)胞；與此同時，空 白對照組注射等體積生理鹽水。大鼠注射脂多糖后12小時，對大鼠稱體重，然后頸推脫臼處死大鼠并采血。 分離血清后，按廠商說明，用谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒 (均購自南京建成生物工程研究所)分別測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)活性、 谷草轉(zhuǎn)氨酶(SGOT)活性。同時，取大鼠肝臟，經(jīng)10%福爾馬林溶液固定、脫水、 石蠟包埋、制片(4pm厚)、HE染色后，由病理專業(yè)人員在光學(xué)顯微鏡下檢查 有無下列病變并進(jìn)行病變評分(l)有無肝細(xì)胞變性，如脂變、水腫，嗜酸變 性；(2)有無肝細(xì)胞壞死，如點狀壞死，灶狀壞死等；(3)有無中央靜脈及肝 竇擴(kuò)張、淤血、肝內(nèi)靜脈周圍炎；(4)肝內(nèi)或門管區(qū)有無結(jié)締組織增生及炎細(xì) 胞浸潤。病變評分標(biāo)準(zhǔn)為根據(jù)每項病變由輕到重的程度分別標(biāo)記為0分(正 常)、0.5分(極輕度)、1分(輕度)、2分(中度)、3分(重度)、4分(極重 度)，出現(xiàn)灶狀壞死加倍記分。計算出每組動物病變評分的平均分，分值越高表 示病變程度越嚴(yán)重。3,實驗結(jié)果谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)活性和谷草轉(zhuǎn)氨酶(SGOT)活性的實驗結(jié)果如圖l所示，病變評分的實驗結(jié)果如圖2所示。在模型組中，大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶顯著升高，表明卡介苗和 脂多糖成功地造成了大鼠免疫性肝損傷；原卟啉鈉能顯著降低肝損傷大鼠的谷 丙轉(zhuǎn)氨酶水平，也就是說，對卡介苗和脂多糖誘導(dǎo)的大鼠免疫性肝損傷模型來 說，原卟啉鈉可以顯著降低免疫性肝損傷大鼠的谷咼轉(zhuǎn)氨酶水平。而甘草酸二 銨注射液對大鼠肝損傷不具有顯著的保護(hù)作用。病理組織學(xué)研究也表明這個實驗成功地復(fù)制了免疫性肝損傷。在才莫型組中， 肝組織病變表現(xiàn)為肝細(xì)胞點狀壞死，少數(shù)為灶狀壞死；肝臟內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)量 增多；門管區(qū)有輕度炎細(xì)胞浸潤。肝組織病變程度評分結(jié)果表明，相對于模型 組，原p卜啉鈉組的病變程度顯著性下降(P〈0.05),而甘草酸二銨注射液對大鼠 肝損傷不具有顯著的保護(hù)作用。實施例3原葉啉鈉對D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用1, 實-驗動物將Wistar大鼠(體重180g ~ 220g,購自浙江省實驗動物中心)隨機(jī)分成以 下4組，每組10只(1)甘草酸二銨組(注射甘草酸二銨，購自江蘇正大天晴 藥業(yè)股份有限公司)；(2)原卟啉鈉組(灌胃給藥原卟啉鈉)；(3)空白對照組； (4)模型組。2, 實-瞼方法在甘草酸二銨注射液組中，從第o天開始，每天向大鼠腹腔注射甘草酸二 銨13.5mg/kg大鼠，共進(jìn)行7天；在原叫、啉鈉組中，從第0天開始，每天向大鼠 灌胃給藥原卟啉鈉，給藥量以原卟啉鈉計為10mg/kg大鼠，共進(jìn)行7天；與此 同時，在空白對照組和模型組中，注射等體積生理鹽水。其中，在第5天(即 處死大鼠48小時前)，在除了空白對照組之外的其他3組中，向大鼠腹腔注射 D-氨基半乳糖胺(購自SIGMA公司)600mg/kg大鼠體重；與此同時，空白對 照組注射等體積生理鹽水。在第7天(注射D-氨基半乳糖胺后48小時)，頸推脫臼處死大鼠并采血。 分離血清后，按廠商說明，用谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒 (均購自南京建成生物工程研究所)分別測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)活性、 谷草轉(zhuǎn)氨酶(SGOT)活性。3，實驗結(jié)果實驗結(jié)果如圖3所示。在D-氨基半乳糖胺模型組中，大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、 谷草轉(zhuǎn)氨酶水平顯著升高，表明D-氨基半乳糖胺成功地造成大鼠急性肝損傷。 原卟啉鈉能顯著性降低急性實驗性肝損傷大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶水平。因此，在D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷it型中，肽A可以顯著降低 D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷。另外，甘草酸二銨注射液對該急性肝損傷 亦具有顯著的保護(hù)作用。
權(quán)利要求
1，原卟啉在制備用于治療或預(yù)防免疫性肝損傷或D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷的藥物中的應(yīng)用。
2, 權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其中原卟啉是原卟啉鈉。
3，權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其中藥物用于治療或預(yù)防免疫性肝損傷， 優(yōu)選所述免疫性肝損傷是卡介苗和脂多糖誘導(dǎo)的免疫性肝損傷。
4，權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其中藥物用于治療或預(yù)防D-氨基半乳糖胺 誘導(dǎo)的急性肝損傷。
5, 權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中原卟淋鈉由包括以下步驟的方法制備a. 血紅素在存在曱酸和鐵的條件下還原，然后加入醋酸銨溶液析出晶體， 得到原卟啉粗結(jié)晶體；b. 將原卟啉粗結(jié)晶體在存在酸和曱醇的條件下酯化，然后加入碳酸銨溶液析 出原卟啉二曱酯結(jié)晶體并溶于氯仿中，然后將溶液通過Al203層析柱純化，蒸餾 層析流出液，得到純化的原卟啉二曱酯；和c. 純化的原吟啉二曱酯加入酸分解，然后加入氫氧化鈉中和并析出結(jié)晶，得 到原卟啉鈉結(jié)晶體。
6, 權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中原卟啉鈉由包括以下步驟的方法制備a. 向溶于曱酸的血紅素加入4失4分，再依次回流、冷卻、過濾，向濾液中加 入醋酸銨溶液，析出結(jié)晶體，再將結(jié)晶體溶于氨水，然后加入醋S臾銨溶液結(jié)晶， 再依次洗滌、干燥，得到原卟啉粗結(jié)晶體；b. 向原卟啉粗結(jié)晶體加入鹽酸和曱醇，再依次回流、冷卻，然后加入石友酸 銨溶液析出原卟啉二曱酯結(jié)晶體，洗滌后將原p卜啉二甲酯結(jié)晶體溶于氯仿中， 然后將溶液通過Al203層析柱純化，蒸餾層析流出液并洗滌，得到純化的原卟啉 二曱酯；和c. 純化的原卟啉二甲酯加入鹽酸分解，然后加入氬氧化鈉中和并析出結(jié)晶， 再依次洗滌、干燥、用吡啶重結(jié)晶，用得到原卟啉鈉結(jié)晶體。
7, 制備原葉啉鈉的方法，其特征在于包括以下步驟a. 血紅素在存在曱酸和鐵的條件下還原，然后加入醋酸銨溶液析出晶體， 得到原卟啉粗結(jié)晶體；b. 將原卟啉粗結(jié)晶體在存在酸和曱醇的條件下酯化，然后加入碳酸銨溶液析出原卟啉二甲酯結(jié)晶體并溶于氯仿中，然后將溶液通過Al203層析柱純化，蒸餾層析流出液，得到純化的原卟啉二曱酯；和c. 純化的原吟啉二曱酯加入酸分解，然后加入氫氧化鈉中和并析出結(jié)晶，得 到原H、啉鈉結(jié)晶體。
8. 權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于包括以下步驟a. 向溶于曱酸的血紅素加入鐵粉，再依次回流、冷卻、過濾，向濾液中力口 入醋酸銨溶液，析出結(jié)晶體，再將結(jié)晶體溶于氨水，然后加入醋酸銨溶液結(jié)晶， 再依次洗滌、干燥，得到原卟啉粗結(jié)晶體；b. 向原p卜啉粗結(jié)晶體加入鹽酸和曱醇，再依次回流、冷卻，然后加入石友酸 銨溶液析出原叫、啉二曱酯結(jié)晶體，洗滌后將原口卜啉二曱酯結(jié)晶體溶于氯仿中， 然后將溶液通過Ab03層析柱純化，蒸餾層析流出液并洗滌，得到純化的原卟啉 二曱酯；和c. 純化的原p卜啉二曱酯加入鹽酸分解，然后加入氬氧化鈉中和并析出結(jié)晶， 再依次洗滌、干燥、用吡啶重結(jié)晶，得到原卟啉鈉結(jié)晶體。
9. 用于治療或預(yù)防免疫性肝損傷或D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷的藥 物組合物，其包含權(quán)利要求7或8所述的方法制備的原卟啉鈉。
10. 藥劑盒，其包括a. 容器，其包含權(quán)利要求7或8所述的方法制備的原卟啉鈉；和b. 說明用于治療或預(yù)防D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的免疫性肝損傷或急性肝損傷 的說明書。
全文摘要
本發(fā)明涉及原卟啉在制備用于治療或預(yù)防免疫性肝損傷或D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷的藥物中的應(yīng)用。另外，本發(fā)明還涉及原卟啉的制備方法及其制品。
文檔編號C07D487/00GK101259127SQ20081006121
公開日2008年9月10日 申請日期2008年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月18日
發(fā)明者朱成鋼, 王利忠 申請人:王利忠