專利名稱：：雙取代-l-酒石酸二甲酯類化合物及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及有機化學、藥物化學和藥理學領域，具體而言，本發(fā)明涉及雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽以及它們的制備方法和醫(yī)藥用途，該類化合物被發(fā)現有抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的功能；同時対五株人體腫瘤細胞顯示出一定的細胞毒性。該類化合物可以預期用于制備治療相關的乙型肝炎病毒感染性疾病以及腫瘤疾病的藥物。
背景技術：
：乙型病毒型肝炎(HepatitisB)是中國多發(fā)和常見重型傳染性疾病，其病原體是乙型肝炎病毒(HBV)。全國約1.2億HBV攜帶者，每年死于原發(fā)性肝癌的15萬人中，絕大多數與乙型肝炎感染有關。目前，臨床上對HBV病患的治療方案只能達到抑制HBV復制和繼發(fā)感染，最主要藥物仍是核苷類藥物如拉米呋啶(3-TC)、恩替卡韋、阿德福韋(ADV)等，它們雖然能有效地控制病情，但一則售價昂貴，二則長期使用均可出現耐藥性，以及不同程度的反跳，三是長期使用核苷類藥物出現的較為明顯的眾所周知的不良作用。所以從民族民間長期使用的藥物中發(fā)現新的非核苷類乙肝病毒抑制劑有著很大的意義，選擇先導化合物主要的判斷指標在于該類新穎的非核苷類物質必須具有對乙肝病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)和/或乙肝表面抗原(HBsAg)的抑制活性。天然產物中的綠原酸(chlorogenicacid)是由咖啡酸(caffeicacid)與奎尼酸(雞納酸，quinkacid)組成的一取代的縮酚酸，為眾多藥材(如金銀花、茵陳、杜仲)以及中成藥(如復肝寧、雙花注射液、粉刺口服液)中抗菌解毒、消炎利膽的主要有效成分，同時是某些中藥制劑質量控制的重要指標。綠原酸是一種重要的生物活性物質，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經系統(tǒng)等作用，尤其是在病毒防治領域有重要用途[趙昱等"咖啡?？崴犷惢衔镅芯窟M展"，中國中藥雜志，2006，31(11)，869-874]。近期，科學家從菊科植物菊苣中發(fā)現了新的抗病毒咖啡酰有機酸酯類化合物L-菊苣酸(二咖啡酰酒石酸)[Robinson，W,E,Jr./"/e"A/k/.1998,15，129-137]。此先導化合物對HIV病毒整合酶(IN)具有強效抑制活性，同時無毒范圍較大，有利于發(fā)展成為抗HIV型藥物。相關的構效關系研究跟隨開展，并制備出多種L-菊苣酸衍生物，其中活性化合物抑制fflV-l整合酶活性的IC5Q值約為0.8l.liLiM[King,P丄，Robinson,W.E.Jr.等，《/臉d1999,42,497—509;Lin，Z.，Bruke,T.R,Jr.,JMW.C/^m.1999,42,1401—1414]。上述研究報道結果指出咖啡酰結構中的鄰苯二酚部分在整個分子的抑制活性中起著相當重要的作用，然而過多的酚羥基也會帶來較大的毒性。因此為了尋找高效低毒的新的先導化合物，我們的設計中將L-菊苣酸中的咖啡酰部分進行改造將其改造成為不同取代的芳基烯丙?；Y構，并用烷氧基取代的苯甲?；鰢L試。另外，上述研究報道中還指出，將酒石酸的羧基甲酯化并同時將羥基瑪行?；磻笏玫降姆肿尤匀挥锌笻IV-1整合酶的活性。因此，我們設計合成了一系列不同取代的苯丙烯酰-L-酒石酸二甲酯。在本說明書中描述的系列化合物中，化合物I~d(2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]—L-酒石酸二甲酯)雖然己有報道[Utley,JamesH.P.等，Jowma/o/1995，15,1961-1970]，但該文報道的是化合物I~d參與在電解液中進行非對映立體選擇性合成，并未披露任何關于化合物的生理活性方面的信息。由于抗HIV藥物和HBV藥物的高同源性，本發(fā)明對合成出的雙取代-L-酒石酸二甲酯類測試了其對乙肝表面抗原HBsAg的抑制活性，以期尋找更多樣的能對乙肝病毒復制產生抑制作用的L-菊苣酸類似物。為了探索本發(fā)明制備得到的雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物的其他生理活性，我們還采用了MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽]法對此類化合物針對五種人體腫瘤體外培養(yǎng)細胞株[人子宮頸癌細胞(Hela)、人慢性髓原細胞白血病細胞(K562)、人肺癌細胞(A549)、人原髓細胞白血病細胞(HL-60)、人結腸腺癌(LS174T)]進行了生長抑制活性測試，^1而完成本發(fā)明。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一類用于制備新的抗乙肝病毒和細胞毒類抗腫瘤藥物，具體而言，本發(fā)明提供了一類式(I)所示結構的雙取代-L-酒石酸二甲用鹽H貝CjC02CKR,~"0"5——&式(I)其中取代基Rt和R2可以相同或不同，分別選自2-呋喃環(huán)-3-烯丙?；?，2位或4位甲氧基取代的苯甲酰基，鄰位或間位或對位二甲氧基取代的苯甲酰基，或鄰位或間位或對位鹵素二取代的3-苯烯丙酰基；其條件是&和112不能同時為3-(3,4-二甲氧基苯)-烯丙酰基，也不能同時為3-(3,4-二氯苯)-烯丙?；１景l(fā)明的另一目的是提供了所述之雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽用于制備抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的藥物用途。本發(fā)明的又一目的是提供了式(I)化合物及其可藥用鹽用于制備細胞毒類抗腫瘤藥物的用途。本發(fā)明的再一個目的是提供了一種含有式(I)化合物的用于抗乙肝病毒疾病的藥物組合物和/或細胞毒類抗腫瘤藥物。根據本發(fā)明，該藥物組合物中可加入各種藥用賦形劑，添加劑及載體。本發(fā)明優(yōu)選的式(I)化合物列舉如下I-a.2，3-二-氧-(4-甲氧基苯甲酰)-L-酒石酸二甲酯；I-b.2，3-二-氧-[3-(2,4-二氯苯)-烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯；I-c.2，3-二-氧-[3-(2-呋喃基)-烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯。H3COOC,恥O,COOCH3I—aHcoc=oooc=o6本發(fā)明還提供了化合物2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯(14)的制備方法以及其用于制備抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)藥物和細胞毒贈抗腫瘤藥物的用途。oo具體實施例方式本發(fā)明的式(I)化合物以及化合物(I-d)或其可藥用鹽對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)有一定的抑制作用，其還對五種人體腫瘤體外培養(yǎng)細胞株[人子宮頸癌細胞(Hela)、人慢性髓原細胞白血病細胞(K562)、人肺癌細胞(A549)、人原髓細胞白血病細胞(HL-60)、人結腸腺癌(LS174T)]的生長有一定的抑制作用。根據本發(fā)明，該類化合物或其可藥用鹽可以與藥學上常用的輔料或載體結合，制備得到可以用于治療病毒性乙肝疾病相關的藥物組合物和/或細胞毒類抗腫瘤藥物。下面通過實施例進一步說明本發(fā)明。實施例給出了代表性化合物的合成及相關結構鑒定數據。必須說明，下述實施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據本發(fā)明的實質對本發(fā)明進行的簡單改進都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。實施例1:化合物I-a即2,3-二-氧-(4-甲氧基苯甲酰)-L-酒石酸二甲酯的制備向反應瓶中加入對甲氧基苯甲酸(43毫克，0.28毫摩爾)，二環(huán)己基碳二亞胺(58毫克，0.28毫摩爾)，無水二氯甲烷8毫升，在室溫下攪拌20分鐘，出現白色混濁后，加入L-酒石酸二甲酯(20毫克，0.11毫摩爾)，4-J甲氨基吡啶(3.6毫克，0.03毫摩爾)，整個溶液在室溫下反應過夜，抽濾除去不溶物，蒸去溶劑，脫溶得到白色固體，柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯=10:1),分離得到白色固體35毫克，產率為71%。H3COOCCOOCH3^一乂？^I~c,8s〕7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>化合物(I一a):無色油狀物；A(石油醚/乙酸乙酯-3/l):0.36;核磁共振氫譜(400MHz，氘代甲醇)33.75(6H，單峰，COOC//3)，3.91(6H,單峰，OO/s),5.94(2H,單峰，H-2，3),7.08(4H,雙峰，《/=8.8Hz,H-4'，6',4〃，6")，8.03(4H，雙峰，Hz，H-3'，7'，3"，7");電噴霧質譜ESI-MSw々463.93([M+H20〗+)。實施例2:化合物I—b即2，3-二-氧-[3-(2，4-二氯苯)烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯的制備反應瓶中加入L-酒石酸(500毫克，3.3毫摩爾)，無水硫酸鈉(1.5克，10.6毫摩爾)，IO毫升無水甲醇，攪拌數分鐘，再向反應瓶中滴加3微升濃硫酸，加熱回流10小時。冷卻到室溫，加入碳酸氫鈉調節(jié)pH約為7，抽濾除去不溶物，濾液濃縮。脫溶所得固體分散在3毫升氯仿和3毫升蒸餾水中，水層再用氯仿萃取3次(5毫升x3)，合并所有有機相，用水洗，飽和食鹽水洗滌數次，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾除去溶劑得L-酒石酸二甲酯，白色闊體，390毫克，產率66%。向反應瓶中加入2,4-二氯苯丙烯酸(61毫克，0.28毫摩爾)，二環(huán)己基碳二亞胺(58毫克，0.28毫摩爾)，無水二氯甲垸8毫升，在室溫下攪拌20分鐘，出現白色混濁后，加入L-酒石酸二甲酯(20毫克，0.11毫摩爾)，4-二甲氨基吡啶(3.6毫克，0.03毫摩爾)，整個溶液在室溫下反應過夜，抽濾除去不溶物，蒸去溶劑，脫溶得到白色固體，柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯=10:1)，分離得到白色固體49毫克，產率為77%?；衔?I-b):白色固體，熔點66~67。C(氯仿)；及y(石油醚/乙酸乙酯=3/1):0.4;核磁共振氫譜(400MHz，氘代甲醇)<53.82(6H,單峰，5.88(2H,單峰，H曙2，3)，6.54(2H，雙峰，J-16.0Hz，H-2'，2")，7.29(2H，雙峰，聲2.0Hz,H畫8',8"),7.46(2H,雙峰，>2.0Hz,H國9'，9")，7.60(2R5單峰，H-6',6"),8.14(2H，雙峰，7=16.0Hz,H-3',3");電噴霧質譜ESI-MSm/z:449.21([M+H20]+)0根據與以上實施例1-2相似的的方法，分別制備得到I"C和I~d化合物。下面列出它們的部分物化和核磁共振氫譜數據化合物(I-c):黃色油狀物，&(石油醚/乙酸乙酯=3/1):0.22;(400MH:;氘代甲醇)(53.83(6H,單峰，COOC//》，5.55(2H,單峰，H-2，3),6.36(1H,雙峰，J=16.0Hz,H-2')，6.49(1H，單峰，H-6'),6.68(1H，單峰，H-5'),7.48(1H，雙峰，J=16.0Hz，H-3'),7.51(1H，單峰，H-7')?；衔?I-d):無色油狀物，Rf(石油醚/乙酸乙酯=6/1):0.2;(400MHz,氖代甲醇)33.81(6H，單峰，CO(9a/》，5,91(2H，單峰，H-2,3)，6.58(2H，雙峰,7=16.0Hz,H-2'，2〃)，7.42(6H,多重峰，H-6'，7'，8'，6"，7"，8"),7.58(4H，多重峰,H國5',9'，5",9"),7.80(2H,雙峰，J-16.0Hz,H-3',3〃)；電噴霧質譜ESI-MSm/z:456.05([M+H20]+)。本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯(14)或其可藥用鹽具有抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的功能，可以用于治療相關的乙肝病毒感染性疾病。該藥物可以與藥學上常用的輔料或載體結合，用制藥領域中的常規(guī)技術制備得到具有抗病毒活性從而可以用于防治病毒引起的疾病的藥物組合物。上述各類藥物組合物可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑等劑型藥物，還可以利用現有公知技術制備成其控釋、緩釋劑型或納米制劑，還可以應用靶向藥物制劑技術制備成相應藥物劑型和給藥方式。本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-酒石酸二甲酯(I-d)或其可藥用鹽可以與現已上市的治療乙型病毒性肝炎藥物如拉米呋啶(lamivuding)、阿德福韋及其二匹伏酯(adevovir/adevovirdipivoxil)、恩替卡韋(entecavir)、恩曲他濱(emtricitabine)、克來福定(clevudine)、泛昔絡韋(famciclovir)、洛布卡韋(lobucavir)、干擾素(IFN)等聯合使用，制備得到具有治療乙型病毒性肝炎的藥物。上述各類藥物組合物均可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用9搽劑等劑型藥物，還可以利用現有公知技術制備成其控釋、緩釋劑型或納米制劑，還可以應用靶向藥物制劑技術制備成相應藥物劑型和給藥方式。此外，本發(fā)明所制備的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-酒石酸二甲酯(I~d)或其可藥用鹽對于五株人體腫瘤體外譜養(yǎng)細胞株[人子宮頸癌細胞(Hela)、人慢性髓原細胞白血病細胞(K562)、人肺癌細胞(A549)、人原髓細胞白血病細胞(HL-60)、人結腸腺癌(LS174T)均具有一定的生長抑制活性，可期待作為防治相關腫瘤性疾病藥物用途。本發(fā)明所制備的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-酒石酸二甲酯(I"d)或其可藥用鹽可以與藥學上常用的輔料或載體結合，制備得到具有抗腫瘤用途的藥物組合物。上述藥物組合物可以采用注射劑、片劑、膠囊、貼片、皮下植埋劑等劑型，或其他采用公知理論和抜術制備的控釋、緩釋劑型以及納米制劑。本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-酒石酸二甲酯(I~d)或其可藥用鹽可以與現己上市的抗腫瘤藥物如鉑類藥物順鉑(DDP)、喜樹堿類藥物伊立替康(Irinatecan，CPT-ll)、長春花堿類藥物失碳長春花堿(Vinorebine，NVB諾維本)、脫氧胞昔類藥物吉西他濱(Gemcitabine,Gemzar，健擇)、足葉乙式(Etoposide)、紫杉醇(Paclitaxel)等聯合使用，制備得到具有腫瘤生長抑制活性的細胞毒性的藥物組合物，可用于制備治療多種腫瘤疾病的藥物。為了更好地理解本發(fā)明的實質，下面分別用藥理實施例的形式簡述式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯(I-d)或其可藥用鹽對乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)抑制試驗以及它們對五株人體體外培養(yǎng)腫瘤細胞株的生長抑制之藥理實驗結果，說明其在抗病毒藥物和/或抗腫瘤藥物開發(fā)領域中的用途。藥理實施例給出了式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯(I~d)或其可藥用鹽的部分活性數據。同樣必須說明，本發(fā)明的藥理實施例仍是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據本發(fā)明的實質對本發(fā)明進行的簡單改進都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。藥理實施例1:化合物I-a對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原的抑制作用1.1細胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/毫升青霉素和100微克/毫升鏈霉素，100微克/毫升G418的DMEM培養(yǎng)基中，置37。C，5%二氧化碳C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.2采用MTT法測定化合物I-a對HepG2.2.15細胞生長的抑制作用取對數生長期的HepG2.2.15細胞，用培養(yǎng)基將細胞稀釋成1乂105個/毫升，接種于96孔細胞培養(yǎng)板，每孔100微升，在37-C，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-a，濃度分別為100微克/毫升，20微克/毫升，和4微克/毫升，每孔200微升，每個濃度設三個復孔，置于37i:，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)72小時后，每孔加入5毫克/毫升MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽]試劑10微升，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，棄去培養(yǎng)基，每孔加入二甲基亞砜DMSO200微升，用振蕩器振蕩20分鐘，在570nm波長下用酶標儀測定OD值。以只加培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔為對照孔。實驗重復三次。抑制率(%)=(對照孔OD值-實驗組OD值)/對照孔OD值X1000/。。1.3測定化合物I-a對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用取對數生長期的HepG2.2.15細胞，用培養(yǎng)基將細胞稀釋成1乂105個/毫升，接種于96孔細胞培養(yǎng)板，每孔100微升，在100%相對濕度的5。％C02培養(yǎng)箱中37"C培養(yǎng)24小時后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-a，濃度分別為100微克/毫升，20微克/毫升和4微克/毫升，每孔200微升，每個濃度設三個復孔，置于37'C，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每4天換含相閫濃度樣品的培養(yǎng)基，將同一樣品同一濃度的換出的培養(yǎng)基等體積混勻，作為待測樣品。用酶聯反應ELISA試劑盒測定培養(yǎng)基中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)濃度，以P/N表示；以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。1.4實驗結果實驗結果如表一所示，化合物I-a有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的作用。其對H印G2.2.15細胞的生長無明顯抑制作用，但對11卬02.2.15細胞分泌的乙型肝炎表面抗原13八§在高、中、低劑量下抑制活性都高于拉米呋啶。1.5結果說明乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制率是判斷乙型肝炎病毒感染重要標志，有效抑制HBsAg分泌并使HBsAg反應轉陰是治療乙型肝炎的目標之一?；衔?-3在第八天對11叩02.2.15細胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)具有顯著的抑制作用，說明此類雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物可預期發(fā)展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的藥物。表一化合物I-a對HepG2.2.15分泌的乙型肝炎表面抗原抑制率(％)樣品編號濃度(微克/毫升)4天8天I一a10025.6142.332012.7621.5945.5513.373-TC(拉米呋啶)10012.1211.3720rr4/a/a表示無抑制活性。藥理實施例2:化合物I-b對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原的抑制作用2.1細胞培養(yǎng)同藥理實施例l。2.2采用MTT法測定化合物I-b對HepG2.2.15細胞生長的抑制作用取對數生長期的HepG2.2.15細胞，方法同藥理實施例1。2.3測定化合物I-b對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。具體方法同藥理實施例l。2.4實驗結果實驗結果如表二所示，化合物I-b有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的作用。其對11印02.2.15細胞的生長無明顯抑制作用，但對12HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎表面抗原HBsAg在高、中、低劑量下抑制活性都高于拉米呋啶。表二化合物I-b對HepG2,2.15分泌的乙型肝炎表面抗原抑制率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>a表示無抑制活性。2.5結果說明乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制率是判斷乙型肝炎病毒感染重要標志，有效抑制HBsAg分泌并使HBsAg反應轉陰是治療乙型肝炎的目標之一?；衔颕-b在第八天對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)具有顯著的抑制作用，說明該類雙取代-L-酒石酸酯類化合物可預期發(fā)展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的藥物。藥理實施例3:化合物對人子宮頸癌細胞的細胞毒活性3.1細胞培養(yǎng)人子宮頸癌(Hela)細胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%小牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升鏈霉素。細胞以每孔1乂104個密度接種到96孔板中，在37-C,5%(:02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。3.2細胞存活率的測定方法用改良MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽]法。細胞經24小時的孵育后，分別將新配的化合物的二甲亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物的最終濃度分別為100微克/毫升、50微克/毫升、25微克/毫升、5微克/毫升。72小時后，加入10微升MTT(5毫克/毫升)的生理鹽水溶液，再繼續(xù)在37-C，5%0)2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3小時，每孔中加入150微升二甲亞砜，振蕩溶解生成的MTT晶體甲臜(formazan)，所形成的甲臜用酶標儀在570nrn波長下比色，細胞存活率由樣品OD值對于對照Od值的比值計算。其中化合物對Hda細胞的半數抑制濃度(IC5())由劑量效應曲線得到。實驗結果顯示各測試化合物的ICs()如表三所示。本試驗以抗腫瘤一線用藥順鉑(DDP)作為陽性對照，陽性對照藥物順鉑對Hela細胞的IC50為19.6^M。表三各測試化合物對Hela細胞的與一數抑制濃度(IC5())(微克/毫升)化合物I-aI一bI~d抑制活性IC5o/111.8213.0/表示半數抑制濃度(IC5。)值>100微克/毫升。3.3結果說明化合物I-b和I~d對Hda細胞的生長具有一定的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細胞毒類治療人子宮頸癌的藥物。藥理實施例4:化合物對人慢性髓原細胞白血病細胞的細胞毒活性4.1細胞培養(yǎng)人慢性髓原細胞白血病(K562)細胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%小牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升鏈霉素。細胞以每孔1XW個密度接種到96孔板中，在37-C，5^C(V潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。4.2細胞存活率的測定方法用改良MTT法細胞經24小時的孵育后，分別將新配的化合物的二甲亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物的最終濃度分別為100微克/毫升、50微克/毫升、25微克/毫升、5微克/毫升。72小時后，加入10微升MTT(5毫克/毫升)的生理鹽水溶液，再繼續(xù)在37"C,5%0)2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3小時，每孔中加入150微升二甲亞砜，振蕩溶解生成的MTT晶體甲臜(formazan)，所形成的甲臜用酶標儀在570nm波長下比色，細胞存活率由樣品OD值對于對照OD值的比值計算。其中化合物對K562細胞的半數抑制濃度(IC5())由劑量效應曲線得到。實驗結果顯示各測試化合物的IC50如表四所本試驗以抗腫瘤一線用藥順鉑(DDP)作為陽性對照，陽性對照藥物順鉑對K562細胞的IC5G為12.9|iM。表四各測試化合物對K562細胞的半數抑制濃度(IC5o)(微克/毫升)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>/表示半數抑制濃度(IC5Q)值>100微克/毫升。4.3結果說明化合物I-a和I-b對K562細胞的生長具有較為明確的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細胞毒類治療人慢性髓原細胞白血病的藥物。藥理實施例5:化合物對人肺癌細胞的細胞毒活性5.1細胞培養(yǎng)人肺癌(A549)細胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細胞以每孔5乂103的濃度加入到96孔板中，在37"C含5%(:02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。5.2細胞存活率的測定用改良MTT法，具體方法如藥理實施例3。其中化合物對A549細胞的半數抑制濃度(IC50)由劑量效應曲線得到。實驗結果顯示各測試化合物的IC50如表五所示。而陽性對照藥物順鉑對A549細胞的IC5o為17.8nM。表五各測試化合物對A549細胞的半數抑制濃度(IC5Q)(微克/毫升)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>/表示半數抑制濃度(IC5。)值>100微克/毫升。5.3結果說明化合物I-a和14對A549細胞的生長具有一定的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細胞毒類治療人肺癌的藥物。藥理實施例6.-化合物對HL-60的細胞毒活性6.1細胞培養(yǎng)人原髓細胞白血病(HL-60)細胞用RPM1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細胞以每孔5X103的濃度加入到96孔板中，在37t:含5%(:02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。6.2細胞存活率的測定用改良MTT法，具體方法如藥理實施例3。其中化合物對HL-60細胞的半數抑制濃度(IC50)由劑量效應曲線得到。實驗結果顯示各測試化合物的IC50如表六所示。陽性對照藥物DDP對HL-60細胞的半抑制濃度IC5Q為7.6^M。表六各測試化合物對HL-60細胞的半數抑制濃度(IC5())(微克/毫升)化合物I-aI一bI-d抑制活性IC5。34.852.6//表示無抑制活性或半數抑制濃度(IC5Q)值>100微克/毫升。6.3結果說明化合物I-a和I-b對HL-60細胞的生長具有明確的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細胞毒類治療人原髓細胞白血病的藥物。藥理實施例7:化合物對人結腸腺癌細胞的細胞毒活性7.1細胞培養(yǎng)人結腸腺癌(LS174T)細胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細胞以每孔5X103的濃度加入到96孔板中，在37"C含5%(302潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。7.2細胞存活率的測定用改良MTT法,具體方法如藥理實施例3。其中化合物對LS174T細胞半16抑制濃度(IC5())由劑量效應曲線得到。實驗結果顯示各測試化合物的IC:如表七所示。陽性對照藥物順鉑對LS174T細胞的IC5。為4.43^iM。表七各測試化合物對LS174T細胞的半數抑制濃度(IC5o)(微克/毫升)化合物I—aI-bI~d抑制活性IC5o/151.4//表示半數抑制濃度(IC5Q)值〉100微克/毫升。7.3結果說明化合物I-b對LS174T細胞的生長具有一定的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細胞毒類治療人結腸腺癌的藥物。在上述說明書闡述本發(fā)明時，同時提供了實施例和藥理實施例的目的是舉例說明本發(fā)明的實際操作過程和本發(fā)明的意義。在進入本發(fā)明權利要求和其等同物范圍內時，本發(fā)明的實際應用包括所有一般變化、配合，或改進。權利要求1.一種具有式(I)所示結構的雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽式(I)其中取代基R1和R2可以相同或不同，分別選自2-呋喃環(huán)-3-烯丙?；?，2位或4位甲氧基取代的苯甲?；?，鄰位或間位或對位二甲氧基取代的苯甲?；?，或鄰位或間位或對位鹵素二取代的3-苯烯丙酰基；其條件是R1和R2不能同時為3-(3，4-二甲氧基苯)-烯丙酰基，也不能同時為3-(3，4-二氯苯)-烯丙?；?.根據權利要求l，式(I)化合物選自I-a.2，3-二-氧-(4-甲氧基苯甲酰)-L-酒石酸二甲酯；I-b.2,3-二-氧-[3-(2,4-二氯苯)-烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯；I-c.2，3-二-氧-[3-(2-呋喃基)-烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯。3.根據權利要求1~2任一所述之雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽用于制備抑制乙型肝炎病毒表面抗原藥物的用途。4.根據權利要求1~2任一所述之雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽用于制備細胞毒類抗腫瘤藥物的用途。5.2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯及其可藥用鹽用于制備抑制乙型肝炎病毒表面抗原藥物的用途。6.2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯及其可藥用鹽用于制備細胞毒類抗腫瘤藥物的用途。7.—種用于抑制乙型肝炎表面抗原的藥物組合物，其含有治療有效量的作為活性成分的根據權利要求1、2之一的化合物、2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯、或它們的混合物以及它們的可藥用鹽和可藥用輔料。8.—種用于治療腫瘤疾病的細胞毒類藥物組合物，其含有治療有效量的作為活性成分的根據權利要求l、2之一的化合物、2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯、或它們的混合物以及它們的可藥用鹽和可藥用輔料。9.根據權利要求38任一所述的藥物或藥物組合物，其劑型是注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑，或控釋或緩釋劑型或納米制劑。全文摘要本發(fā)明涉及一類雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明還涉及這些化合物的制備方法和含有該類化合物的藥物組合物。本發(fā)明涉及的雙取代酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽具有抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的功能；其還對五株人體腫瘤細胞顯示出一定的細胞毒性。該類化合物可以預期用于制備治療乙肝病毒感染性疾病以及腫瘤性疾病的藥物。文檔編號C07C69/00GK101492374SQ200810062549公開日2009年7月29日申請日期2008年6月24日優(yōu)先權日2008年6月24日發(fā)明者馮治國,巫秀美,張麗娟,李校堃,佳瞿,胡利紅,昱趙,鄭群雄,郝小江,黃可新申請人:溫州醫(yī)學院