專利名稱：：5-氧-取代苯烯丙?？崴峒柞セ衔锛捌溆猛镜闹谱鞣椒?br>技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及有機化學(xué)、藥物化學(xué)和藥理學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯類化合物和其關(guān)鍵中間體5-氧-[3-取代苯烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯以及它們的制備方法，該類化合物被發(fā)現(xiàn)有抑制乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)復(fù)制和降低乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的表達功能；可以預(yù)期用于制備治療相關(guān)的乙肝病毒感染性疾病的藥物用途。技術(shù)背景從認識病毒的第一天起，人類就在不斷地尋找抗擊病毒的有效武器，但是病毒性疾病的治療，目前仍缺乏專屬性強的藥物。臨床上常用的藥物有如下幾類1、抑制病毒復(fù)制的抗病毒藥；2、增強機體免疫功能的免疫調(diào)節(jié)藥；3、針對臨床癥狀的止咳、鎮(zhèn)痛、退熱和消炎等治療藥；4、防止繼發(fā)感染的抗感染藥；5、預(yù)防病毒感染的疫苗；6、阻斷病毒傳播的消毒藥。我國是病毒性肝炎的高發(fā)地區(qū)，以乙型肝炎病毒HBV感染為主。乙肝病毒攜帶者超過1.2億，現(xiàn)有約3000萬患者需要治療，每年因肝病死亡約30萬人，至少帶來直接經(jīng)濟損失500億人民幣。此外，慢性乙肝病人經(jīng)520年后約有12%可發(fā)展為肝硬化，在肝硬化病人中大約20%患者最終發(fā)展成肝功能衰竭，約5%發(fā)展為肝癌。因此，慢性病毒性肝炎的治療不僅給國家和患者家庭造成巨大的經(jīng)濟負擔(dān)，同時也引起就業(yè)、升學(xué)等嚴(yán)重社會問題。肝炎病毒利用宿主細胞的DNA、RNA及蛋白合成系統(tǒng)進行復(fù)制，并將自身的核酸信息整合到宿主細胞的DNA中，與宿主細胞同期復(fù)制并在復(fù)制過程中不斷產(chǎn)生錯誤而形成變異，上述過程是肝炎病毒重要的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，也是抗肝炎病毒藥研制難以形成突破的重要原因。目前臨床眾多用于慢性病毒性肝炎的治療藥物，包括抗病毒、保肝(抗纖維化)、免疫調(diào)控和中草藥等仍存在諸多問題。核苷類藥物及干擾素為主的藥物雖具有一定的抗病毒作用，但其對共價閉環(huán)HBVDNA的清除作用尚不確定，停藥后易反跳，況且用藥后發(fā)生不同程度的病毒變異。干擾素臨床上有效率僅有3050%，且與核苷類一樣有副作用。從我國遼闊藥用資源發(fā)掘活性天然產(chǎn)物，研制新型特色抗乙肝病毒藥物是尋找具有自主知識產(chǎn)權(quán)新藥的關(guān)鍵和突破口。綠原酸(chlorogenicacid)是由咖啡酸(caffeicacid)與奎尼酸(雞納酸，quinicacid)組成的一取代的縮酚酸，異名咖啡鞣酸，化學(xué)名5-氧-咖啡?？崴?5-O-Caffeoylquinicacid)，是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物。綠原酸為眾多藥材(如金銀花、茵陳、杜仲)以及中成藥(如復(fù)肝寧、雙花注射液、粉刺口服液)中抗菌解毒、消炎利膽的主要有效成分，同時是某些中藥制劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。綠原酸是一種重要的生物活性物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用，尤其是在病毒防治領(lǐng)域有重要用途[趙昱等"咖啡酰奎尼酸類化合物研究進展"，中國中藥雜志，2006，31(11)，869—874;李國雄等，JournalofNaturalProducts,1990，53(3)，587-595;馬雙成等，藥物分析雜志，2005，25(7)，751-755;左建平、趙維民等，"綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途"，中國發(fā)明專利，公開號CN1449753A;左建平、趙維民等，"一類苯丙烯?？鼘幩狨パ苌?、制備方法及用途"；中國發(fā)明專利，公開號CN1552690A]。作為對抗病毒藥物研究的一部分工作，我們對這類重要的天然產(chǎn)物進行了研究。目前綠原酸及其衍生物主要靠從植物中提取而得，但其在植物中含量不高，同時考慮到綠原酸對人有致敏作用，因此本發(fā)明的目的在于對此類化合物進行合成和結(jié)構(gòu)改造，合成了一系列5-氧-[3-取代苯丙烯酰]奎尼酸甲酯類化合物，并測試了其對HBVDNA禾B/或HBsAg的抑制活性，以期尋找對乙肝病毒生長顯示抑制作用的先導(dǎo)化合物。本發(fā)明的目的在于提供一類式(I)所示的5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯類化合物及其可藥用的鹽其中取代基R,，R2，R3，R4和R5可以相同或不同，分別選自氫、鹵素、硝基、胺基、含1~8個碳的垸氧基、含18個碳的酰氧基或含18個碳的烷氧烷氧基;其條件是R!，R2,R3,R4和R5不能同時為氫；當(dāng)Rt,112和R5同時為氫時，R3和R4不能為偕二甲氧基取代；當(dāng)Ri，R2和R5同時為氫時，R3和R4不能同時為
發(fā)明內(nèi)容甲氧基取代；當(dāng)RhR2,R4和R5同時為氫時，R3不能是乙酰氧酰氧基。本發(fā)明優(yōu)選的化合物(I)包括I-a.5-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I-b.5-氧-[3-(2,4-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；工_^.5-氧-[3-(3，4-二硝基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I-d.5-氧-[3-(4-硝基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I-e.5-氧-[3-(4-溴苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I-f.5-氧-[3-(2-乙氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I-g.5-氧-[3-(3,4-二甲氧基甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯。I-b本發(fā)明還提供了一種如式(II)所示的制備化合物(I)的關(guān)鍵中間體5-氧-[3-取代苯烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯及其可藥用的鹽(II)其中取代基R,，R2,R3，R4和R5可以相同或不同，分別選自氫、卣素、硝基、胺基、含1~8個碳的垸氧基、含18個碳的酰氧基和含1~8個碳的垸氧垸氧基；其條件是Rl5R2,R3,R4和Rs不能同時為氫；當(dāng)Rh尺2和R5同時為氫時，R3和R4不能為偕二甲氧基取代；當(dāng)RbR2和R5同時為氫時，R3和R4不能同時為甲氧基取代；當(dāng)R^，R2,R4和R5同時為氫時，R3不能是乙酰氧酰氧基。本發(fā)明優(yōu)選的化合物(II)包括II一a.5-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯；II-b.5-氧-[3-(2，4-氯苯)烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯；I".5-氧-[3-(3，4-二硝基苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯；II~d.5-氧-[3-(4-硝基苯)烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯；11《5-氧-[3-(4-溴苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯；II-f.5-氧-[3-(2-乙氧基苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯；II-g.5-氧-[3-(3，4-二甲II-g本發(fā)明的又一目的是提供了化合物(I)和化合物(II)在制備抗乙肝病毒藥物的中的用途。實驗證實該類化合物具有抑制乙型肝炎病毒DNA復(fù)制和/或降低乙肝病毒表面抗原表達的功效。本發(fā)明所述的藥物可加入各種藥用賦形劑，添加劑及載體。所述藥物制劑形式為注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑等劑型，也可以使用目前公認的控釋或緩釋劑型或納米制劑。本發(fā)明的有益之處是本發(fā)明涉及的5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯類化合物及其關(guān)鍵中間體5-氧-[3-取代苯烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯具有抑制乙型肝炎病毒核糖核酸復(fù)制和降低乙肝病毒表面抗原表達的功能。該類化合物來源于對天然產(chǎn)物綠原酸的結(jié)構(gòu)改造，而綠原酸類化合物對于正常細胞的毒性較低，且經(jīng)過結(jié)構(gòu)改造后的化合物及其重要中間體都具有較好的抑制乙肝病毒活性，可以預(yù)期作為防治病毒性乙型肝炎藥物用途。本發(fā)明涉及的化合物合成方法簡便、反應(yīng)條件溫和產(chǎn)率較好、成本較低，因此具有較可行的市場化前景。具體實施方式本發(fā)明結(jié)合實施例作進一步的說明。實施例1本發(fā)明提供了一種從中間體式(II)化合物制備式(I)化合物的方法。式(I)化合物合成工藝路線特征是奎尼酸與丙酮在酸性條件下縮合生成丙酮叉保護的奎尼酸內(nèi)酯化合物，再將其在醇鈉條件下，內(nèi)酯環(huán)打開，生成丙酮叉保護的奎尼酸甲酯，然后再與取代的苯烯丙酸在N,N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)II一C114OCH2CH3II—eII—f8和4-二甲氨基吡啶(DMAP)存在下或在l，l'-二羰基咪唑(CDI)，1，8-二氮雜雙環(huán)[5，4，0]11垸-7-烯(DBU)存在下通過酯化反應(yīng)制備得到式(II)化合物，后者在酸性條件下水解得到式(I)化合物。具體制備過程如下所示HO々iCOOHHO厶、,、、、、'、、、、'甲醇鈉其中取代基Ri,R2，R3，R4和R5可以相同或不同，分別選自氫、鹵素、硝基、胺基、含1~8個碳的烷氧基、含1~8個碳的酰氧基和含1~8個碳的烷氧烷氧基;其條件是RhR2，R3,R4和Rs不能同時為氫；當(dāng)Rl5&和R5同時為氫時，R3和R4不能為偕二甲氧基取代；當(dāng)Ri，R2和R5同時為氫時，R3和R4不能同時為甲氧基取代；當(dāng)RbR2,R4和R5同時為氫時，R3不能是乙酰氧酰氧基。本發(fā)明的式(I)化合物及其關(guān)鍵中間體式(II)化合物對乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)及乙型肝炎表面抗原(HBsAg)有良好的抑制作用。根據(jù)本發(fā)明，該類化合物及其可藥用鹽可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié)合，制備得到具有抗病毒活性從而可以用于防治病毒引起的疾病的藥物組合物。下面通過實施例進一步說明本發(fā)明。實施例給出了代表性化合物的合成及相關(guān)結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)。必須說明，下述實施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。-三llllo三三o根據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)對本發(fā)明進行的簡單改進都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。實施例2:化合物5-羥基-3，4-丙酮叉奎尼酸內(nèi)酯的制備向反應(yīng)瓶中加入奎尼酸(500毫克，2.6毫摩爾)，無水硫酸鈉(2.5克，17.6毫摩爾)，15毫升丙酮，攪拌數(shù)分鐘，再向反應(yīng)瓶中滴加3微升濃硫酸，開始加熱回流5小時。冷卻到室溫，加入固體碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH約為7,抽濾除去不溶物，濾液濃縮。脫溶所得固體分散在3毫升氯仿和3毫升蒸餾水中，水層再用氯仿萃取3次(5毫升x3)，合并所有有機相，用水洗，飽和食鹽水洗滌數(shù)次，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾除去溶劑得白色固體，在乙酸乙酯中重結(jié)晶得白色粉末350毫克。產(chǎn)率為63.4%，熔點120~122°C。核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz,氖代甲醇)S1.29(3H,單峰)，1.46(3H，單峰)，2.00-2.49(4H，多重峰)，4.27(1H，雙雙峰)，4.50(1H，多重峰)，4.65(1H,雙雙峰)。實施例3:化合物5-羥基-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯的制備在15毫升的二頸瓶中加入丙酮叉保護的奎尼酸內(nèi)酯(100毫克，0.47毫摩爾)，溶解在5毫升甲醇中，在冰浴下加入鈉條(22毫克，0.96毫摩爾)，于室溫下反應(yīng)8小時。滴加冰醋酸調(diào)節(jié)pH值到中性，蒸去甲醇，用二氯甲烷萃取，二氯甲烷層用水洗，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑，氬氣保護置于干燥器中待用。產(chǎn)率為40.8%。實施例4:化合物II-a即5-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯的制備方法一向反應(yīng)瓶中加入對甲氧基苯烯丙酸(103毫克，0.58毫摩爾)，羰基二咪唑(190毫克，1.17毫摩爾)，四氫呋喃8毫升，回流反應(yīng)2小時，再向其中加入5-羥基-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯(116毫克，0.47毫摩爾)，1,8-二氮雜雙環(huán)[5,4,0]11烷-7-烯(DBU)(卯毫克，0.58毫摩爾)，整個溶液再回流反應(yīng)8小時。脫溶得到淡黃色粘稠狀固體，經(jīng)反相硅膠RP~C18柱層析(甲醇/水65/35)分離得到白色固體53毫克，產(chǎn)率為28.5%?；衔颕I-a:熔點75~77°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.75;核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz，氘代甲醇)S1.33(3H,單峰)，1.41(3H,單峰)，2.46~2.76(4H,多重峰)，3.67(3H，單峰)，3.91(3H,單峰)，4.09(1H，雙雙峰)，4.51(1H,多重峰)，4.74(1H,雙雙峰)，6.39(1H,雙峰)，6.84(2H,單峰)，7.29(2H,單峰)，7.69(1H，雙峰)。方法二-向反應(yīng)瓶中加入對甲氧基苯烯丙酸(87毫克，0.49毫摩爾)，二環(huán)己基碳二亞胺(100毫克，0.49毫摩爾)，二氯甲烷8毫升，在室溫下攪拌20分鐘，加入保護的奎尼酸甲酯(96毫克，0.39毫摩爾)，4-二甲氨基吡啶(DMAP)(IO毫克，0.049毫摩爾)，整個溶液在室溫下反應(yīng)過夜，抽濾除去不溶物，蒸去溶劑，脫溶得到白色固體，經(jīng)反相硅膠RP-ds柱層析(甲醇/水65/35)分離得到白色固體47毫克，產(chǎn)率為30.3%。根據(jù)實施例4中方法二相同的方法制備表一所示實施例5-10化合物HQs^>COOCH3XOR表一<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>實施例5:化合物I1-b:白色固體，熔點79~81°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.48;核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz，氖代甲醇)S1.39(3H，s)，1.45(3H，單峰)，2.09-2.43(4H，多重峰)，3.67(3H，單峰)，4.19(1H，雙雙峰):4.38(1H，多重峰)，5.06(1H,雙雙峰)，6.28(1H,雙峰)，7.34(1H，多重峰)，7.51(1H,雙峰)，7.58(1H，單峰)，7.91(1H,雙峰)。實施例6:化合物II-c:白色固體，熔點96~98°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.25;核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz,気代甲醇)31.38(3H,單峰)，1.50(3H,單峰)，2.182.46(4H,多重峰)，3.69(3H,單峰)，3.78(1H,雙雙峰)，4.10(1H,多重峰)，5.26(1H,雙雙峰)，6.46(1H,雙峰)，7.83(1H,雙峰)，8.20(1H,雙峰)，8.53(1H，雙峰)，9.07(1H,單峰)。實施例7:化合物II-d:白色固體，熔點S89(TC，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.31;核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz,氘代甲醇)S1.41(3H,單峰)，1.53(3H,單峰)，2.50~2.69(4H，多重峰)，3.71(3H,單峰)，3.98(1H,雙雙峰)，4.33(1H，多重峰)，5.37(1H，雙雙峰)，6.68(1H，雙峰)，7.59(2H，單峰)，7.78(1H,雙峰)，8.25(2H,單峰)。實施例9:化合物II^:白色固體，熔點7577°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.43;核磁共振氫譜(iHNMR)(400MHz，気代甲醇)S1.33(3H，單峰)，1.40(3H，單峰)，2.062.22(4H,多重峰)，3.68(3H,單峰)，3.75(1H，雙雙峰)，4.12(1H,多重峰)，5.23(1H,雙雙峰)，6.38(1H，雙峰)，7.19(2H,單峰)，7.38(2H,單峰)，7.67(1H，雙峰)。實施例9:化合物II—f:白色固體，熔點8385°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.45;核磁共振氫譜(^HNMR)(400MHz,気代甲醇)S1.33(3H，三重峰)，1.36(3H,單峰)，1.53(3H,單峰)，2.18-2.36(4H,多重峰)，3.67(3H，單峰)，3.78(1H,雙雙峰)，3.98(2H，四重峰)，4.15(1H，多重峰)，5.23(1H,雙雙峰)，6.41(1H，雙峰)，6.74(1H，雙峰)，6.83(1H，多重峰)，7.07(1H,多重峰)，7.28(1H，雙峰)，7.91(1H，雙峰)。實施例10:化合物II—g:白色固體，熔點71~73°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.58;核磁共振氫譜^HNMR)(400MHz，気代甲醇)S1.33(3H，單峰)，1.36(3H，單峰)，2.162.36(4H,多重峰)，3.49(3H，單峰)，3.53(3H，單峰)，3.67(3H，單峰)，3.78(1H，雙雙峰)，4.10(1H，多重峰)，4.93(1H，雙雙峰)，5.18(2H,單峰)，5.26(2H，單峰)，6.37(1H,雙峰)，6.98(2H,雙雙峰)，7.21(1H,單峰)，7.65(1H,雙峰)。12實施例11:化合物I-a即5-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯的制備在二頸瓶中加入化合物5-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯II—a(50毫克，0.123毫摩爾)，加入5毫升四氫呋喃，再滴加5毫升1N鹽酸，在室溫下反應(yīng)72小時，用氯仿萃取，合并氯仿層用大量水洗，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。經(jīng)反相硅膠RP"C^柱層析(甲醇/水65/35)分離得到白色固體17毫克，產(chǎn)率為38.3%。化合物I-a:熔點88~90°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.25;核磁共振氫譜UHNMR)(400MHz,氘代甲醇)S2.46~2.76(4H，多重峰)，3.68(3H,單峰)，3.93(3H,單峰)，4.12(1H，雙雙峰)，4.56(1H，多重峰)，4.76(1H，雙雙峰)，6.49(1H，雙峰)，6.88(2H，單峰)，7.42(2H,單峰)，7.79(1H，雙峰)。根據(jù)實施例11相同的方法制備表二所示實施例12-17化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>表二<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>下面列出表二中各化合物的理化數(shù)據(jù)實施例12:化合物I-b:白色固體，熔點82~83°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.23;核磁共振氫譜("HNMR)(400MHz，氖代甲醇)52.19~2.43(4H，多重峰)，3.67(3H,單峰)，4.09(1H，雙雙峰)，4.28(1H，多重峰)，5.08(1H,雙雙峰)，6.28(1H,雙峰)，7.40(1H，多重峰)，7.57(1H,雙峰)，7.72(1H,單峰)，7.91(1H，雙峰)。實施例13:化合物I"C:白色固體，熔點103106°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.14;核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz，氖代甲醇)S2.08~2.46(4H,多重峰)，3.68(3H,單峰)，4.27(1H,雙雙峰)，4.50(1H,多重峰)，5.26(1H,雙雙峰)，6.56(1H，雙峰)，7.86(1H,雙峰)，8.24(1H,雙峰)，8.55(1H,雙峰)，9.10(1H，單峰)。實施例14:化合物I-d:白色固體，熔點99~101°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.19;核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz，氖代甲醇)S2.50~2.69(4H,多重峰)，3.71(3H,單峰)，4.10(1H,雙雙峰)，4.33(1H，多重峰)，5.37(1H,雙雙峰)，6.73(1H,雙峰)，7.63(2H,單峰)，7.80(1H,雙峰)，8.28(2H,單峰)。實施例15:化合物I^:白色固體，熔點85~87°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.23;核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz，氖代甲醇)S1.96~2.22(4H,多重峰)，3.71(3H，單峰)，4.13(1H，雙雙峰)，4.38(1H,多重峰)，5.23(1H，雙雙峰)，6.48(1H,雙峰)，7.23(2H,單峰)，7.48(2H,單峰)，7.77(1H，雙峰)。實施例16:化合物I-f:白色固體，熔點92~94°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.25;核磁共振氫譜('HNMR)(楊MHz，氖代甲醇)51.33(3H,三重峰)，2.28-2.36(4H，多重峰)，3.57(3H，單峰)，3.79(1H,雙雙峰)，3.99(2H,四重峰)，4.17(1H,多重峰)，5.29(1H，雙雙峰)，6.61(1H,雙峰)，6.78(1H,雙峰)，6.86(1H,多重峰)，7.18(1H,多重峰)，7.38(1H,雙峰)，7.93(1H，雙峰)。實施例17:化合物I-g:白色固體，熔點8082°C，Rf(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.28;核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz，氖代甲醇)S2.16~2.36(4H,多重峰)，3.49(3H，單峰)，3.53(3H,單峰)，3.68(3H，單峰)，3.98(1H,雙雙峰)，4.30(1H,多重峰)，4.98(1H,雙雙峰)，5.18(2H，單峰)，5.28(2H,單峰),6.37(1H，雙峰)，6.98(2H，雙雙峰)，7.24(1H，單峰)，7.69(1H,雙峰)。本發(fā)明的式(I)所示之5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯類化合物，以及其關(guān)鍵中間體式(II)化合物具有抑制乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)的復(fù)制、降低乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的表達功能；可以預(yù)期用于治療相關(guān)的乙肝病毒感染性疾病的藥物。該類化合物及其可藥用鹽可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié)合，用制藥領(lǐng)域中的常規(guī)技術(shù)制備得到具有抗病毒活性從而可以用于防治病毒引起的疾病的藥物組合物。上述各類藥物組合物可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑等劑型藥物，也可以使用目前公認的控釋或緩釋劑型或納米制劑。本發(fā)明的式(I)所示之5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯類化合物或其關(guān)鍵中間體式(II)化合物及其可藥用鹽可以與現(xiàn)已上市的治療乙型病毒性肝炎藥物如拉米呋啶(lamivuding)、阿德福韋及其二匹伏酯(adevovir/adevovirdipivoxil)、恩、替卡韋(entecavir)、恩曲他濱(emtricitabine)、克來福定(clevudine)、泛昔絡(luò)韋(famciclovir)、洛布卡韋(lobucavir)、干擾素(IFN)等聯(lián)合使用，制備得到具有治療乙型病毒性肝炎的藥物組合物。上述各類藥物組合物或者保健品均可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑等劑型藥物，也包括使用目前公認的控釋或緩釋劑型或納米制劑。為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面分別用藥理實施例的形式將本發(fā)明的式(i)所示之5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯類化合物或其關(guān)鍵中間體式(n)化合物對乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和對乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)的抑制試驗的藥理實驗結(jié)果，說明其在抗病毒藥物開發(fā)領(lǐng)域中的用途。藥理實施例給出了部分化合物的代表性活性數(shù)據(jù)。同樣必須說明，本發(fā)明的藥理實施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)對本發(fā)明進行的簡單改進都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。除非另有說明，本發(fā)明中的百分?jǐn)?shù)是重量百分?jǐn)?shù)。藥理實施例1:化合物I-a對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的抑制作用試驗1.1細胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/毫升青霉素和100微克/毫升鏈霉素，100微克/毫升G418的DMEM培養(yǎng)基中，置37"C，5%二氧化碳C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.2采用MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽)法測定式(1)化合物I-a對HepG2.2.15細胞生長的抑制作用取對數(shù)生長期的HepG2.2.15細胞，用培養(yǎng)基將細胞稀釋成1X105個/毫升，接種于96孔細胞培養(yǎng)板，每孔100微升，在37。C，5X二氧化碳C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-a，濃度分別為100微克/毫升，20微克/毫升，和4微克/毫升，每孔200微升，每個濃度設(shè)三個復(fù)孔，置于37°C，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)72小時后，每孔加入5毫克/毫升MTT試劑IO微升，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，棄去培養(yǎng)基，每孔加入DMSO200微升，用振蕩器振蕩20分鐘，在570nm波長下用酶標(biāo)儀測定OD值。以只加培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔為對照孔。抑制率(％)=(對照孔OD值-實驗組OD值)/對照孔OD值X100。/。。實驗重復(fù)三次。1.3測定化合物I-a對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用取對數(shù)生長期的HepG2.2.15細胞，用培養(yǎng)基將細胞稀釋成1X105個/毫升，接種于96孔細胞培養(yǎng)板，每孔100微升，在37。C，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-a，濃度分別為100微克/毫升，20微克/毫升和4微克/毫升，每孔200微升，每個濃度設(shè)三個復(fù)孔，置于37t:，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每4天換含相同濃度樣品的培養(yǎng)基，將同一樣品同一濃度的換出的培養(yǎng)基等體積混勻，作為待測樣品。用ELISA試劑盒測定培養(yǎng)基中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)濃度，以P/N表示；以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。1.4實驗結(jié)果實驗結(jié)果如表三所示，化合物I-a有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的作用。其對HepG2.2.15細胞生長的無明顯抑制作用，但對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎表面抗原HBsAg在高、中、低劑量下抑制活性都高于拉米呋啶。表三.化合物I-a對HepG2.2.15分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>1.5結(jié)果說明乙型肝炎表面抗原(HBsAg)指標(biāo)是判斷乙型肝炎病毒感染重要標(biāo)志，抑制HBsAg并使HBsAg轉(zhuǎn)陰反應(yīng)是治療乙型肝炎中的直接目的之一。該實施例結(jié)果說明化合物I-a在第八天對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)具有顯著的抑制作用，說明此類5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯類化合物可預(yù)期發(fā)展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的藥物。藥理實施例2:化合物II~c對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的抑制作用試驗2.1細胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/毫升青霉素和100微克/毫升鏈霉素，100微克/毫升G418的DMEM培養(yǎng)基中，置37'C，5%二氧化碳C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2.2采用MTT法測定化合物II-c對HepG2.2.15細胞生長的抑制作用測試方法同藥理實施例l;以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。2.3實驗結(jié)果實驗結(jié)果如表四所示，化合物II-c有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的作用。其對HepG2.2.15細胞生長的無明顯抑制作用，但對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎表面抗原HBsAg在高、中、低劑量下抑制活性都高于拉米呋啶。表四.化合物II-c對HepG2.2.15分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>該實施例結(jié)果顯示化合物II~c在第八天對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)具有顯著的抑制作用，說明此類5-氧-[3-取代苯烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯類中間體化合物可預(yù)期發(fā)展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的藥物。藥理實施例3:化合物I-f對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)的抑制作用試驗材料與方法-3.1儀器與試劑PE7700自動熒光PCR儀，美國PerkinElmer公司生產(chǎn)；HBVDNA熒光定量檢測試劑盒由中山醫(yī)科大學(xué)達安基因診斷中心提供，胎牛血清、DMEM、G418、胰蛋白酶均購自Gibco公司。3.2細胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細胞接種于DMEM培養(yǎng)液(含10%胎牛血清，380微克/毫升G418)，置5XC0237'C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，具體方法同藥理實施例1。3.3采用MTT法測定化合物I-f對HepG2.2.15細胞生長的抑制作用方法同藥理實施例1。3.4測定化合物I-f對乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)復(fù)制的抑制作用取對數(shù)生長期的HepG2.2.15細胞，用培養(yǎng)基將細胞稀釋成1X105/毫升，接種于96孔細胞培養(yǎng)板，每孔100微升，在37'C，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-f，濃度分別為100微克/毫升，20微克/毫升和4微克/毫升，每孔200微升，每個濃度設(shè)三個復(fù)孔，置于37"C，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每4天換含相同濃度樣品的培養(yǎng)基，將同一樣品同一濃度的換出的培養(yǎng)基等體積混勻，作為待測樣品。第8天時用HBVDNA定量PCR儀測定培養(yǎng)基中HBVDNA濃度。按試劑說明書操作，50微升反應(yīng)體積中含30微升反應(yīng)緩沖液，5微升氯化鎂，5微升引物和探針，7微升樣品處理上清液和3微升Taq酶。各反應(yīng)管放入PCR儀中，按下列條件擴增92°C2分鐘預(yù)變性，然后按93°C45秒-55"C120秒，共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，由電腦自動分析計算出結(jié)果。以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。實驗結(jié)果舉例說明如表五所示，化合物I-f均具有強效的抑制乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)復(fù)制的作用。18表五.化合物I-f第八、十二天對HepG2.2.15脫氧核糖核酸(HBVDNA)的百分抑制率樣品編號濃度(微克/毫升)8天(％)12天(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>3.5試驗結(jié)果:第八天和第十二天化合物I-f對HBVDNA均顯示出一定的抑制活性，但是比陽性對照藥品拉米呋啶對HBVDNA的抑制活性要弱，屬于有較強活性的HBVDNA抑制劑。3.6結(jié)果說明HBVDNA復(fù)制得到有效抑制是乙肝病毒得到控制的最直截了當(dāng)?shù)呐袛鄻?biāo)準(zhǔn)，是治療病毒性乙型肝炎的重要生理指標(biāo)之一。化合物I-f能顯著抑制HBVDNA的復(fù)制，說明此類5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯化合物可以預(yù)期發(fā)展成為治療病毒性乙型肝炎疾病的藥物。藥理實施例4:化合物II-g對HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)的抑制作用試驗材料與方法4.1儀器與試劑PE7700自動熒光PCR儀，美國PerkinElmer公司生產(chǎn)；HBVDNA熒光定量檢測試劑盒由中山醫(yī)科大學(xué)達安基因診斷中心提供，胎牛血清、DMEM、G418、胰蛋白酶均購自Gibco公司。4.2細胞培養(yǎng)將HepG2,2.15細胞接種于DMEM培養(yǎng)液(含10%胎牛血清，380微克/毫升G418)，置5XC0237。C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，具體方法同藥理實施例1。4.3采用MTT法測定化合物II-g對HepG2.2.15細胞生長的抑制作用方法同藥理實施例l。4.4測定化合物II-g乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)復(fù)制的抑制作用取對數(shù)生長期的HepG2.2.15細胞，用培養(yǎng)基將細胞稀釋成1X105廣升，接種于96孔細胞培養(yǎng)板，每孔100微升，在37。C，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物II-g，濃度分別為100微克/毫升，20微克/毫升和4微克/毫升，每孔200微升，每個濃度設(shè)三個復(fù)孔，置于37。C，5%C02，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每4天換含相同濃度樣品的培養(yǎng)基，將同一樣品同一濃度的換出的培養(yǎng)基等體積混勻，作為待測樣品。第8天時用HBVDNA定量PCR儀測定培養(yǎng)基中HBVDNA濃度。按試劑說明書操作，50微升反應(yīng)體積中含30微升反應(yīng)緩沖液，5微升氯化鎂，5微升引物和探針，7微升樣品處理上清液和3微升Taq酶。各反應(yīng)管放入PCR儀中，按下列條件擴增92°C2分鐘預(yù)變性，然后按93'C45秒-55°C120秒，共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，由電腦自動分析計算出結(jié)果。以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。實驗結(jié)果舉例說明如表六所示，化合物II-g具有顯效的抑制乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)復(fù)制的作用。表六.化合物II一g第八、十二天對HepG2.2.15脫氧核糖核酸(HBVDNA)的百分抑制率以及第12天對細胞生長的百分抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>4.5試驗結(jié)果第八天和第十二天化合物II-g對HBVDNA均顯示出一定的抑制活性，但是比陽性對照藥品拉米呋啶對HBVDNA的抑制活性要弱，屬于有較強活性的HBVDNA抑制劑。4.6結(jié)果說明HBVDNA得到抑制是乙肝病毒得到控制的最直截了當(dāng)?shù)呐袛鄻?biāo)準(zhǔn)，是治療病毒性乙型肝炎的重要生理指標(biāo)之一?；衔颕I-g能顯著抑制HBVDNA的復(fù)制，說明此類5-氧-[3-取代苯烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯可以預(yù)期發(fā)展成為治療病毒性乙型肝炎疾病的藥物。在上述說明書闡述本發(fā)明時，同時提供了實施例的目的是舉例說明本發(fā)明的實際操作過程和本發(fā)明的意義。在進入本發(fā)明權(quán)利要求和其等同物范圍內(nèi)時，本發(fā)明的實際應(yīng)用包括所有一般變化、配合，或改進。權(quán)利要求1.一類5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯類化合物及其可藥用的鹽，其特征是具有以下結(jié)構(gòu)通式其中取代基R1，R2，R3，R4和R5相同或不同，選自氫、鹵素、硝基、胺基、含1～8個碳的烷氧基、含1～8個碳的酰氧基或含1～8個碳的烷氧烷氧基；其條件是R1，R2，R3，R4和R5不能同時為氫；當(dāng)R1，R2和R5同時為氫時，R3和R4不能為偕二甲氧基取代；當(dāng)R1，R2和R5同時為氫時，R3和R4不能同時為甲氧基取代；當(dāng)R1，R2，R4和R5同時為氫時，R3不能是乙酰氧酰氧基。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的5-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸甲酯類化合物及其可藥用的鹽，其特征是Ri,R2，R3，R4和R5選自單取代或雙取代的鹵素、單取代或雙取代的硝基或胺基、含1~3個碳的單個垸氧基、含1~3個碳的單個酰氧基、含1~3個碳的鄰位垸氧烷氧基、含13個碳的單個酰氧基或含13個碳的鄰位垸氧烷氧基；其條件是當(dāng)R,，R2和R5同時為氫時，R3和R4不能同時為甲氧基取代。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一所述的化合物，其特征是所述化合物I選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>I-a.5-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I-b.5-氧-[3-(2,4-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I~c.5-氧-[3-(3，4-二硝基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I~d.5-氧-[3-(4-硝基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I~e.5-氧-[3-(4-溴苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I-f.5-氧-[3-(2-乙氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯；I—g.5-氧-[3-(3，4-二甲氧基甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸甲酯。4.一種用于制備權(quán)利要求1-3任一所述化合物的關(guān)鍵中間體5-氧-[3-取代苯烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯及其可藥用的鹽，其特征是具有以下結(jié)構(gòu)通式其中取代基R,，R2,R3,R4和R5的定義與權(quán)利要求1中的相同。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的5-氧-[3-取代苯烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯及其可藥用的鹽，其特征是其中取代基RhR2,R3,R4和R5的定義與權(quán)利要求2中的相同。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5任一所述的化合物，其特征是所述化合物II選自II-a.5-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯；n_b.5-氧-[3-(2,4-氯苯)烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯；II~c.5-氧-[3-(3,4-二硝基苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯；n_d.5-氧-[3-(4-硝基苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯；II-e.5-氧-[3-(4-溴苯)烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯；II一f.5-氧-[3-(2-乙氧基苯)烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯；II-g.5-氧-[3-(3,4-二甲氧基甲氧基苯)烯丙酰]-3,4-丙酮叉奎尼酸甲酯。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物I在制備治療乙型病毒性肝炎的藥物中的應(yīng)用。8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物II在制備治療乙型病毒性肝炎的藥物中的應(yīng)用。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述化合物的應(yīng)用，其特征是所述藥物加入制劑允許的藥用賦形劑、添加劑或載體，所述藥物制劑形式為注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、控釋劑、緩釋劑或納米制劑。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述化合物的應(yīng)用，其特征是所述藥物加入制劑允許的藥用賦形劑、添加劑或載體，所述藥物制劑形式為注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、控釋劑、緩釋劑或納米制劑。全文摘要本發(fā)明提供一類5-氧-取代苯烯丙?？崴峒柞セ衔锛捌淇伤幱玫柠}(I)，以及提供制備化合物(I)的重要中間體5-氧-[3-取代苯烯丙酰]-3，4-丙酮叉奎尼酸甲酯化合物及其可藥用的鹽(II)。本發(fā)明提供的化合物(I)和化合物(II)均具有抑制乙型肝炎病毒DNA復(fù)制和降低乙肝病毒表面抗原的表達功能，可以在制備治療相關(guān)的乙肝病毒感染性疾病的藥物種運用。本發(fā)明化合物(I)和化合物(II)的結(jié)構(gòu)通式如上所示。文檔編號C07C69/00GK101328123SQ20081006326公開日2008年12月24日申請日期2008年7月29日優(yōu)先權(quán)日2008年7月29日發(fā)明者雷敖,楊雷香,蔣翔銳,昱趙,郝小江,陽應(yīng)華,陶巧鳳申請人:浙江大學(xué)