專利名稱：：槲皮素鉑的合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于化學(xué)合成，具體的說是關(guān)于槲皮素鉑的合成方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：槲皮素是植物中分布極廣的黃酮類化合物，廣泛存在于蔬菜、水果和中草藥中，如圓蔥、葡萄和銀杏等都含有槲皮素。槲皮素具有祛痰、止咳和平喘作用，還有降低血壓、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等作用。近年研究表明，槲皮素在癌癥防治上具有重要作用。槲皮素對腫瘤的化學(xué)預(yù)防和治療作用越來越受到人們的關(guān)注，使槲皮素及其衍生物的研究進(jìn)入一個(gè)嶄新階段。槲皮素可減少DNA的復(fù)制，導(dǎo)致細(xì)胞分裂的延遲。槲皮素通過抑制K562人類白血病細(xì)胞中c-myc的表達(dá)，從而促進(jìn)其分化凋亡，抑制其增殖。槲皮素的抗癌抗增生作用在大量的人體癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和臨床一期實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)出來。槲皮素對多種腫瘤細(xì)胞具有抗增生活性，如NK/ly腹水腫瘤細(xì)胞、人胃癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞OVCA433、乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435等。CipakL等研究發(fā)現(xiàn)，用槲皮素預(yù)處理HL-60和L1210白血病細(xì)胞，可增強(qiáng)順鉑誘導(dǎo)的凋亡作用，同時(shí)槲皮素與順鉑聯(lián)合運(yùn)用有協(xié)同效應(yīng)。王立忠等研究發(fā)現(xiàn)槲皮素和順鉑對肺腺癌移植瘤的生長和肺結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移具有協(xié)同抑制作用。高聰普等研究發(fā)現(xiàn)，小劑量槲皮素能夠增強(qiáng)順鉑對惡性黑素瘤A375增殖的抑制和凋亡作用，能夠抑制順鉑引起黑素瘤Hsp70蛋白的表達(dá)，從而增強(qiáng)順鉑對黑素瘤的凋亡誘導(dǎo)作用。由于槲皮素的水溶性極差(<7^ig/ml)，藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)導(dǎo)致了生物利用度較低(<3.6%)，所以槲皮素在臨床上的使用受到了極大的限制。故以槲皮素為先導(dǎo)化合物對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成出水溶性增強(qiáng)，藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)改善的槲皮素金屬配合物，對于槲皮素的臨床應(yīng)用具有極其重要的意義。槲皮素是金屬離子的良好螯合配位體，可與許多金屬離子形成多種穩(wěn)定的金屬配合物。所以近年來，對槲皮素金屬配合物的研究逐漸增多。研究表明，槲皮素與某些金屬形成配合物后生物活性和藥理作用明顯增強(qiáng)。槲皮素金屬配合物與槲皮素配體相比，一般具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，并對多種癌細(xì)胞的生長具有抑制作用。周晶等合成了槲皮素稀土金屬配合物，通過MTT和SRB法試驗(yàn)，結(jié)果顯示槲皮素稀土金屬配合物對癌細(xì)胞的抑制率明顯高于槲皮素。(Zh叫,Jing;Wang,Liu-Fang;Wang,Jin-Yi;etal.Synthesis,characterization,antioxidativeandantitumoractivitiesofsolidquercetinrareearth(lll)complexes[J].JournalofInorganicBiochemistry(2001)，83(1),41-48.)。Frrer，EvelinaG等合成了槲皮素釩配合物，研究表明槲皮素釩配合物可刺激I型骨生長，對磷酸酯酶有抑制作用，具有抗骨腫瘤作用。(Ferrer,EvelinaG.;Salinas,MariaV.;Correa,Maria丄；etal.Synthesis，characterization,antitumoralandosteogenicactivitiesofquercetinvanadyl(IV)complexes[J].JBIC，JournalofBiologicalInorganicChemistry(2006)，11(6),791-801.)。古練權(quán)等研究認(rèn)為，槲皮素鉻配合物等對糖尿病具有較好的治療作用；(古練權(quán)，王玉芳，黃志書等.槲皮素類化合物及其糖苷的金屬配合物及其應(yīng)用[P].CN1817896A,申請日期2006年3月10日.)。仇佩虹等研究認(rèn)為，蘆丁或槲皮素等鄰-二羥基黃酮-硒配合物對白血病、鼻咽癌、肝癌、直腸癌、胃癌、乳腺癌、惡性淋巴瘤等細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞的活性，有可能發(fā)展成為新的抗腫瘤藥物；(仇佩虹，吳建章，周鵬等.鄰-二羥基黃酮-硒配合物制備方法及醫(yī)學(xué)用途[P].CN101148445A，申請日期2007年1月26日。)。譚君等研究認(rèn)為，槲皮素與二價(jià)的金屬離子如V0、Cr0、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Mg、Ca、Pb和三價(jià)的金屬離子如Al、Fe、La、Ce、Pr、Nd、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb、Lu等生成的金屬配合物能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制Survivin蛋白表達(dá)，激活Caspase-3的活性。所以這些槲皮素金屬配合物有望作為細(xì)胞誘導(dǎo)劑用于治療腫瘤的藥物。(譚君，王伯初，祝連彩等.具有細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)的槲皮素類及其糖苷化合物的金屬配合物[P].CN101220014A，申請日期2008年1月18日。)。槲皮素具有抗腫瘤活性，鉑類配合物具有抗癌性，槲皮素和順鉑聯(lián)合使用有協(xié)同效應(yīng)。把槲皮素和鉑化合物反應(yīng)合成槲皮素鉑，國內(nèi)外未見報(bào)道。為尋找新型、高效、低毒的抗腫瘤藥物，本發(fā)明進(jìn)行了槲皮素鉑的合成，并進(jìn)行了抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)。
發(fā)明內(nèi)容槲皮素具有較高的超離域度，完整的大n鍵共軛體系，強(qiáng)配位氧原子與合適的空間構(gòu)型，可作為金屬離子的良好螯合配體?？膳c金屬離子螯合成穩(wěn)定的五元或六元環(huán)狀化合物。鉑位于周期表第6周期，第vni族，與鐵、鈷、鎳為同一族。容易接受配位體的未共用電子對形成穩(wěn)定的配合物。在一定條件下，當(dāng)鉑離子與槲皮素相遇時(shí)，能形成穩(wěn)定的槲皮素鉑配合物。取槲皮素用醇溶解，另取鉑鹽用醇溶解。把兩者混合，用堿調(diào)PH=7.0—14.0，加熱，回餾2—8h，過濾。沉淀用醇溶解，上聚酰胺層析柱，用不同濃度醇溶液梯度洗脫，收取設(shè)定區(qū)間的洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去溶劑。所得固體用乙酸乙酯多次重提，得深棕黃色固體。合成槲皮素鉑使用的醇為甲醇、或者乙醇、或者丙醇、或者異丙醇等醇。在合成槲皮素鉑時(shí)，使用的鉑鹽是四氯化鉑、或者二氯化鉑、或者氯鉑酸、或者順鉑、或者其它可溶性鉑鹽等。在合成槲皮素鉑時(shí)，使用的堿為氫氧化鈉、或者氫氧化鉀、或者氨水、或者吡啶、或者碳酸鈉、或者碳酸氫鈉、或者碳酸鉀、或者碳酸氫鉀、或者甲醇鈉、或者乙醇鈉等堿性化合物，或者其任意兩個(gè)或兩個(gè)以上以任意比例混合后的混合物。具體實(shí)施方式槲皮素鉑配合物的合成取0.302g(l畫l)槲皮素，加入20ml甲醇，攪拌溶解。另取0.337g(l咖ol)四氯化鉑，加入20ml甲醇，攪拌使完全溶解。把兩者混合，用氨水調(diào)p^8.4，加熱，回餾4h，過濾。沉淀用甲醇溶解，上聚酰胺層析柱，用不同濃度甲醇溶液梯度洗脫，收取設(shè)定區(qū)間的洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去溶劑。所得固體用乙酸乙酯多次重提，得深棕黃色固體。槲皮素鉑配合物對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用取對數(shù)生長期人肝癌H印G2、宮頸癌Hela和喉癌H印2細(xì)胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基稀釋為2xl0Vml，接種于96孔板中，每個(gè)樣品接種10孔，每孔10(^1，之后依次加入待測藥物、陰性對照組、陽性對照組，并保留僅加培養(yǎng)基的空白組。隨后在37t:，5%0)2培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，然后每孔加入lO[il5mg.ml—1的MTT溶液，連續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。吸去上清，每孔加入100plDMSO，在570nm波長處用酶標(biāo)儀測OD值。用下面的公式計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，并利用公式T/C%=100xOD/OD船做回歸計(jì)算藥物的半數(shù)抑制濃度IC50。抑制率二OD空白—OD樣品xlOOX表1.MTT法觀察槲皮素鉑配合物和槲皮素對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*與陰性組比較,p<0.05,**與陰性組比較,p<0.01從上表可見，槲皮素鉑配合物各濃度對人肝癌HepG2、宮頸癌Hda和喉癌Hep2細(xì)胞的增殖均有抑制作用，且呈良好的量效關(guān)系，用公式T/C。/。-100xOD陰性/OD船。做回歸計(jì)算可知槲皮素鉑配合物對人肝癌HepG2、宮頸癌Hela和喉癌Hep2細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度1(:50分別為25.65±0.82^111101.1;1、68.26土0.89nmol.i;1、53.76土1.06pmol七"。槲皮素鉑同陰性對照組的腫瘤抑制率比較有極顯著差異(P<0.01)。而槲皮素鉑配合物與槲皮素的腫瘤抑制作用相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？紤]到槲皮素鉑的溶解度遠(yuǎn)大于槲皮素，這很有可能帶來生物利用度的大幅度提升，具有進(jìn)一步開發(fā)的意義。權(quán)利要求1.一種槲皮素鉑的合成方法，其特征在于取槲皮素用醇溶解，另取鉑鹽用醇溶解；把兩者混合，用堿調(diào)pH＝7.0-14.0，加熱，回餾2-8h，過濾；沉淀用醇溶解，上聚酰胺層析柱，用不同濃度醇溶液梯度洗脫，收取設(shè)定區(qū)間的洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去溶劑；用乙酸乙酯多次重提，得深棕黃色固體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述，合成槲皮素鉑使用的醇為甲醇、或者乙醇、或者丙醇、或者異丙醇等醇。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述，合成槲皮素鉑使用的鉑鹽是四氯化鉑、或者二氯化鉑、或者氯鉑酸、或者順鉑、或者其它可溶性鉑鹽等。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述，合成槲皮素鉑使用的堿為氫氧化鈉、或者氫氧化鉀、或者氨水、或者吡啶、或者碳酸鈉、或者碳酸氫鈉、或者碳酸鉀、或者碳酸氫鉀、或者甲醇鈉、或者乙醇鈉等堿性化合物，或者其任意兩個(gè)或兩個(gè)以上以任意比例混合后的混合物。全文摘要槲皮素具有多方面的生理活性，有祛痰、平喘、降血脂等作用，對多種腫瘤細(xì)胞具有抗增生活性。鉑類配合物有明顯的抗癌作用。槲皮素與順鉑聯(lián)合運(yùn)用有協(xié)同效應(yīng)。本發(fā)明把槲皮素和鉑化合物在一定條件下反應(yīng)，經(jīng)回餾、蒸餾、層析、分離，得到槲皮素鉑配合物。經(jīng)過MTT法實(shí)驗(yàn)知道，槲皮素鉑對肝癌HepG2、宮頸癌Hela和喉癌Hep2等腫瘤細(xì)胞增殖均有顯著的抑制作用。文檔編號C07D311/30GK101353339SQ200810141369公開日2009年1月28日申請日期2008年9月16日優(yōu)先權(quán)日2008年9月16日發(fā)明者濤王,鵬王,翟廣玉,闞全程申請人:鄭州大學(xué)