專利名稱：豬膽膏或下腳料中鵝去氧膽酸的分離純化制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
發(fā)明涉及一種鵝去氧膽酸(3 α，7 α —二羥基一5 β 一膽甾烷酸)的分離純化制備方法，主要涉及從家禽及動物膽汁，特別是豬膽膏(汁)或下腳料(提取膽紅素或豬去氧膽 酸之后的下腳料)中提取，以及分離純化鵝去氧膽酸的制備方法。
背景技術(shù)：
鵝去氧膽酸(3α，7α—二羥基一5日一膽甾烷酸)0^110如0”(^01丨(^(^(1(簡稱 ⑶CA)，1824年首次發(fā)現(xiàn)在鵝膽汁中，1924年，wieland和windaus在不同的膽(人和鵝)中 發(fā)現(xiàn)了鵝去氧膽酸，它是一種最易溶的膽汁酸，被命名為鵝去氧膽酸。鵝去氧膽酸具有平喘化痰鎮(zhèn)咳和抗炎的作用，其利膽作用尤為顯著，它是通過減 少膽固醇的吸收，合成，使膽汁內(nèi)膽固醇下降，從而阻抑膽固醇結(jié)石形成和促其溶解，并且 能有效降低膽固醇飽和度。鵝去氧膽酸還作為制取熊去氧膽酸(3α，7β—二羥基一5β—膽甾烷酸，簡稱 UDCA)的中間體。熊去氧膽酸是名貴中藥熊膽所含的主要成分，在臨床上用于治療各種膽疾 及消化道疾病。目前，傳統(tǒng)名貴藥用動物膽汁非常緊缺，尋找有開發(fā)前景的藥用動物膽汁和 人工合成品為熱門研究項目。進(jìn)一步發(fā)掘動物膽汁的藥用價值，分析動物膽汁的藥用成分 并揭示其作用機(jī)理，使動物膽汁得到綜合開發(fā)利用。因此，制備鵝去氧膽酸對于進(jìn)一步制備 熊去氧膽酸也具有很重要的意義。鵝去氧膽酸主要有家禽的膽汁或動物膽汁中提取，由于家禽，特別是鵝的膽汁量 少而不容易收集，人們就轉(zhuǎn)向了豬膽汁，特別是提取膽紅素或豬去氧膽酸之后的下腳料中 提取。傳統(tǒng)的提取制備工藝過程復(fù)雜，收率低，特別是純度上不去，還不到98% (HPLC)，其 它物質(zhì)(豬去氧膽酸，石膽酸偏高)含量不能滿足臨床需求；并且使用大量不安全的有機(jī)溶 劑。工藝主要分以下幾類1.以中科院上海有機(jī)化學(xué)所周維善院士為代表的硅膠柱層析法?！夺t(yī)藥工業(yè)》， 1988，19(12) 529-30 ；2.以沈陽化工學(xué)院和周維善院士為代表的合成法，(中國專利CN1869043A等)3.以山東博爾德生物公司為代表的大孔樹脂法(中國專利CN1775798A)4.以常德云港生物公司為代表的鋇鹽，鈣鹽法(中國專利CN1830996A， CN1869044A 等)5.以美國專利 USP4213911. 4022806. 4163017. 4316849 等為代表的精制工藝。由于受原料產(chǎn)地，工業(yè)化生產(chǎn)條件，環(huán)境要求，特別是工藝技術(shù)的成熟度導(dǎo)致了鵝 去氧膽酸的提取，分離純化困難，工業(yè)化生產(chǎn)不能達(dá)標(biāo)上量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于大規(guī)模工業(yè)制備高純度鵝去氧膽酸的方法，回避了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷。采用安全低毒，簡單實用的方法得到含量大于等于98% (HPLC法，高效 液相檢測)，豬去氧膽酸<0.5%，石膽酸<0. 的鵝去氧膽酸(⑶CA).發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的1.皂化處理；2.氧化處理；3.澄清處理；4.豬去氧膽酸粗品的制備；5.下腳料的收取，氧化及澄清處理；6. 一次鈣鹽；7. 二次鈣鹽；8.大孔樹脂吸附；9.精制得到高純度的鵝去氧膽酸(⑶CA)，含量大于等于98% (HPLC)，其它物質(zhì) 豬去氧膽酸 HDCA<0. 5 % (HPLC)，石膽酸 LCA<0. 1 %。詳細(xì)工藝如下(1)皂化.10% —15% NaOH，溫度 100— 120°C。時間 18 — 26 小時；(2)氧化，工業(yè) 雙氧水0. 5—2%，以達(dá)到類白色為準(zhǔn)；(3)澄清，用1+1天然澄清劑0. 5—5/萬，溫度80— IOO0C,PH9—14,0. 5—2小時，板框壓濾得澄清濾液；(4)用稀鹽酸調(diào)PH2—3，得粗膽酸，用 乙酸乙酯8倍溶解，活性碳1倍，回流2小時，將濾液濃縮到1/5結(jié)晶，得豬去氧膽酸。用乙 酸乙酯重結(jié)晶得熔點198°C以上的豬去氧膽酸(HDCA) ； (5)將二次豬去氧膽酸的乙酸乙酯 回收完畢，剩下黑褐色的膽膏狀物，加雙氧水氧化，1+1天然澄清劑澄清，得澄清濾液；(6) 一次鈣鹽；加入黑褐色的膽膏狀物1倍量工業(yè)氯化鈣(含量高效液相色譜檢測為要求?？?分子比鵝去氧膽酸氯化鈣=1 1. 1)溫度60—80°C，時間2小時，板框壓濾之后加入碳酸 鈉置換鵝去氧膽酸，加入克分子比為氯化鈣的1. 1，溫度90—100°C，時間1一3小時；(7) 二 次鈣鹽，以(6)的比列，工藝條件成鈣鹽后，用300—1000倍的去離子水洗滌，畢，調(diào)PH2. 0— 3. 5得粗品鵝去氧膽酸；⑶粗品鵝去氧膽酸溶于堿水，PH6. 0-8. 0，上弱堿性或強(qiáng)堿性大 孔樹脂吸附飽和后，水洗除去雜質(zhì)，稀堿液解析，以薄層層析來判斷接收的起始點，終止點， 調(diào)PH3真空干燥；(9)將鵝去氧膽酸溶于乙腈混合溶劑回流2小時，加入活性碳10%，熱濾， 結(jié)晶。重結(jié)晶得鵝去氧膽酸精品含量大于等于98% (HPLC)，含豬去氧膽酸<0.5% (HPLC)， 石膽酸<0. 1%，薄層層析(TLC)一個鵝去氧膽酸主斑點，一個較輕微的豬去氧膽酸斑點。本發(fā)明的優(yōu)點與效果整個工藝具有操作簡便，安全，成本低廉，易于工業(yè)化生產(chǎn)，易于得到高純度的 鵝去氧膽酸，含量大于等于98% (HPLC)，含豬去氧膽酸<0.5% (HPLC)，石膽酸<0. (HPLC)。


圖1，為提取豬去氧膽酸后下腳料的高效液相色譜圖<23.67 % >.采集日期 和時間2007-6-15 14:11 32 ；用戶名=Admin ；樣品名稱供試品；注入量20 μ 1 ；方 法文件名C:\ChromatoSolution-Light\Data\Projectl\ 無標(biāo)題.gem ；報告名C:\ ChromatoSolution-Light\Sample\模版 . gcr ； 保存路徑 :D \Data\pro ject 1 \CDCA\ 12.gcd ；使用儀器類型液相色譜；梯度方式恒流；儀器型號LC-10ATvp ；檢測器紫外；柱溫 (°C ) 40 ；波長(nm) 205 ；柱型號:C18圖2，為鵝去氧膽酸成品高效液相色譜圖<98. 80% >.采集日期和時間2007-6_27 21:30:53 ；用戶名Admin ；樣品名稱CDCA ；注入量20 μ 1 ；方法文件名C:\Chromato So Iut ion-Li ght\Data\Projectl\ 無標(biāo)題.gem ； 艮告名:C: \Chromato Solution-Light\ Sample\模板.gcr ；保存路徑D: \Data\projectl\CDCA\17. gcd ；使用儀器類型液相色譜； 梯度方式恒流；儀器型號=LC-IOATvp ；檢測器紫外；柱溫(°C ) 40 ；波長(nm) 205 ；柱型 號:C18
圖3，為鵝去氧膽酸成品高效液相色譜圖<98.50% >.采集日期和時間2007-6-27 20:22:43 ；用戶名Admin ；樣品名稱:CDCA ；注入量20 μ 1 ；方法文件名:C:\Chromato So Iut ion-Li ght\Data\Projectl\ 無標(biāo)題.gem ； 艮告名:C: \Chromato Solution-Light\ Sample\模板.gcr ；保存路徑D: \Data\projectl\CDCA\14. gcd ；使用儀器類型液相色譜； 梯度方式恒流；儀器型號=LC-IOATvp ；檢測器紫外；柱溫(°C ) 40 ；波長(nm) 205 ；柱型 號:C18
具體實施例方式1.在分離鵝去氧膽酸過程中，皂化12% NaOH，溫度110°C，時間24小時；氧化雙氧 水用量1.5%，澄清劑用量5/萬，溫度100°C，PH10，時間1小時，結(jié)晶PH3，得到粗膽酸。用 乙酸乙酯重結(jié)晶得到高熔點的豬去氧膽酸(198°C以上)。2回收乙酸乙酯后的黑褐色膏狀物，需進(jìn)一步氧化，澄清，雙氧水用量1.0% — 3.0%，澄清劑用量0. 5—5/萬。3. 一次鈣鹽氯化鈣溫度為65°C，時間2小時，加入量克分子比為1 :1. 1，以高效液 相色譜檢測計算，鵝去氧膽酸氯化鈣=1 :1. 1.加入碳酸鈉溫度95°c，時間2小時，加入量 克分子比為1 :1. 05，以加入氯化鈣計算。4. 二次鈣鹽，同一次鈣鹽工藝，成鈣鹽后用500倍量去離子水水洗，至鈣鹽水溶液 中無粗鵝去氧膽酸為止，調(diào)PH3. 0。5.鵝去氧膽酸溶解后，上弱堿性或強(qiáng)堿性大孔樹脂吸附，鵝去氧膽酸母液PH為 6. 5o6.鵝去氧膽酸中，用稀堿液解析時，用薄層層析來判斷接收的起始點，終止點。7.精制時，活性炭加入量為鵝去氧膽酸10%?；亓?小時。8.根據(jù)薄層層析的雜質(zhì)斑點情況可有選擇的選擇溶劑來結(jié)晶，以去除雜質(zhì)膽酸， 使其鵝去氧膽酸大于等于98% (HPLC)豬去氧膽酸<0.5% (HPLC)，石膽酸<0. 1%。9.在提取純化鵝去氧膽酸過程中，原料可以是禽類膽汁膽膏，可以是動物類膽汁 膽膏或是其提取膽紅素或豬去氧膽酸之后的下腳料，前提是不變質(zhì)，霉變。
權(quán)利要求
一種鵝去氧膽酸(3α，7α—二羥基—5β—膽甾烷酸，CDCA)的制備方法，其特征是，所用的原料為家禽及動物膽汁，膽膏或其提取膽紅素，豬去氧膽酸之后的下腳料，包括以下步驟(1)皂化.10％—15％NaOH，溫度100—120℃。時間18—26小時；(2)氧化，工業(yè)雙氧水0.5—2％，以達(dá)到類白色為準(zhǔn)；(3)澄清，用1+1天然澄清劑0.5—5/萬，溫度80—100℃，PH9—14，0.5—2小時，板框壓濾得澄清濾液；(4)用稀鹽酸調(diào)PH2—3，得粗膽酸，用乙酸乙酯8倍溶解，活性碳1倍，回流2小時，將濾液濃縮到1/5結(jié)晶，得豬去氧膽酸。用乙酸乙酯重結(jié)晶得熔點198℃以上的豬去氧膽酸(HDCA)；(5)將二次豬去氧膽酸的乙酸乙酯回收完畢，剩下黑褐色的膽膏狀物，加雙氧水氧化，1+1天然澄清劑澄清，得澄清濾液；(6)一次鈣鹽；加入黑褐色的膽膏狀物1倍量工業(yè)氯化鈣(含量高效液相色譜檢測為要求?？朔肿颖腮Z去氧膽酸氯化鈣＝11.1)溫度60—80℃，時間2小時，板框壓濾之后加入碳酸鈉置換鵝去氧膽酸，加入克分子比為氯化鈣的1.1溫度90—100℃，時間1—3小時；(7)二次鈣鹽，以(6)的比列，工藝條件成鈣鹽后，用300—1000倍的去離子水洗滌，畢，調(diào)PH2.0—3.5得粗品鵝去氧膽酸；(8)粗品鵝去氧膽酸溶于堿水PH6.0—8.0上弱堿性或強(qiáng)堿性大孔樹脂吸附飽和后，水洗除去雜質(zhì)，稀堿液解析，以薄層層析來判斷接收的起始點，終止點。調(diào)PH3真空干燥；(9)將鵝去氧膽酸溶于乙腈混合溶劑回流2小時，加入活性碳10％，熱濾，結(jié)晶。重結(jié)晶得鵝去氧膽酸精品含量大于等于98％(HPLC)，含豬去氧膽酸<0.5％(HPLC)，石膽酸<0.1％，薄層層析(TLC)一個鵝去氧膽酸主斑點，一個較輕微的豬去氧膽酸斑點。
2.根據(jù)權(quán)利要求1敘述的制備方法，其特征是，在分離鵝去氧膽酸過程中，皂化12% NaOH，溫度110°C，時間24小時；氧化雙氧水用量1. 5 %，澄清劑用量5/萬，溫度100°C， PH10，時間1小時，結(jié)晶PH3，得到粗膽酸。用乙酸乙酯重結(jié)晶得到高熔點的豬去氧膽酸 (198°C 以上)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1敘述的制備方法，其特征是，在提取分離鵝去氧膽酸過程中，回收 乙酸乙酯后的黑褐色膏狀物，需進(jìn)一步氧化，澄清，雙氧水用量1.0%—3.0%，澄清劑用量 0. 5—5/萬。
4.根據(jù)權(quán)利要求1敘述的制備方法，其特征是，在提取分離鵝去氧膽酸過程中，一次鈣 鹽氯化鈣溫度為65°C，時間2小時，加入量克分子比為1 :1. 1，以高效液相色譜檢測計算，鵝 去氧膽酸氯化鈣=1 :1. 1.加入碳酸鈉溫度95°C，時間2小時，加入量克分子比為1 :1. 05， 以加入氯化鈣計算。
5.根據(jù)權(quán)利要求1敘述的制備方法，其特征是，二次鈣鹽，同一次鈣鹽工藝，成鈣鹽后 用500倍量去離子水水洗，至鈣鹽水溶液中無粗鵝去氧膽酸為止，調(diào)PH3. 0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1敘述的制備方法，其特征是，鵝去氧膽酸溶解后，上弱堿性或強(qiáng)堿性 大孔樹脂吸附，鵝去氧膽酸母液PH為6. 5。
7.根據(jù)權(quán)利要求1敘述的制備方法，其特征是，鵝去氧膽酸中，用稀堿液解析時，用薄 層層析來判斷接收的起始點，終止點。
8.根據(jù)權(quán)利要求1敘述的制備方法，其特征是，精制時，活性炭加入量為鵝去氧膽酸 10%?；亓?小時。
9.根據(jù)權(quán)利要求1敘述的制備方法，其特征是，根據(jù)薄層層析的雜質(zhì)斑點情況可有選 擇的選擇溶劑來結(jié)晶，以去除雜質(zhì)膽酸，使其鵝去氧膽酸大于等于98% (HPLC)豬去氧膽酸 <0. 5 % (HPLC)，石膽酸 <0.1%。
10.根據(jù)權(quán)利要求1敘述的制備方法，其特征是，在提取純化鵝去氧膽酸過程中，原料 可以是禽類膽汁膽膏，可以是動物類膽汁膽膏或是其提取膽紅素或豬去氧膽酸之后的下腳 料，前提是不變質(zhì)，霉變。
全文摘要
一種豬膽膏或下腳料中鵝去氧膽酸的分離純化制備方法，涉及從家禽及動物膽汁或提取膽紅素豬去氧膽酸的廢棄下腳料中提取純化鵝去氧膽酸的工業(yè)制備方法。其過程是皂化，氧化脫色，澄清處理，制備一次鈣鹽，二次鈣鹽，大孔吸附樹脂吸附，解析結(jié)晶，精制等生產(chǎn)工藝。整個工藝具有環(huán)境友好，安全無毒，成本低廉，易于工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)鵝去氧膽酸。含量大于等于98％，高效液相色譜檢測。其它物質(zhì)豬去氧膽酸含量<0.5％，石膽酸<0.1％。薄層層析一個鵝去氧膽酸主斑點，一個較輕微的豬去氧膽酸斑點。
文檔編號C07J9/00GK101830956SQ20081017680
公開日2010年9月15日 申請日期2008年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月19日
發(fā)明者于露, 付常清, 付煥全, 吳紫夢, 吳茂芝, 曹雪松, 畢小升, 畢思賓 申請人:畢小升;畢思賓